JPH03195427A - 組織培養技法による人工ジャガイモ種子の急速大量生産方法およびその利用方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〈産業上の利用分野〉 本発明は植物組織培養技術を用いてウィルスフリー（ｖ
ｉｒｕｓ　ｆｒｅｅ）の無病株ジャガイモ植物の茎頂（
ｓｈｏｏｔ　）を大量に培養し、これから人工種子ジャ
ガイモ器内小塊茎（ｍｉｃｒｏｔｕｂｅｒ　％以下人工
種子ジャガイモと略する）を急速大量に生産し、生産さ
れた人工ジャガイモ種子をそのまま慣行の天然ジャガイ
モ種子として代替使用するか、または慣行の天然ジャガ
イモ種子を生産するための直前段階のジャガイモ種子と
して使用することができる最も新しく画期的に進歩した
人工ジャガイモ種子の急速大量生産する方法およびその
利用法に関するものである。

〈従来の技術〉 ジャガイモは茄子（ナス）科に属する植物の一種で塊茎
により栄養繁殖を営む植物である。

ところが大部分の栄養繁殖作物の共通的な問題点である
が、ウィルス感染による収量減少が大きな問題点として
指摘されている。

特にナス科作物の中でもジャガイモの場合にはその被害
が極端である。（その点は以下を参照Ｍａｎｚｅｒ、Ｆ
、Ｅ、、Ｄ、Ｃ，Ｍｅｒｒｉａｍ　ａｎｄ　Ｐ、Ｒ，Ｈ
ｅｐｌｅｒ、１９７８゜Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｐｏｔ
ａｔｏ　ｖｉｒｕｓ　Ｓ　ａｎｄ　ｔｗｏ　５ｔｒａｉ
ｎｓｏｆ　ｐｏｔａｔｏ　ｖｉｒｕｓ　Ｘ　ｏｎ　ｙｉ
ｅｌｄｓ　ｏｆ　Ｒｕ５ｓｅｔＢｕｒｂａｎｋ、　Ｋｅ
ｎｎｅｂｅｃ　ａｎｄ　Ｋａｔａｈｄｉｎ　ｃｕｌｔｉ
ｖａｒｓ　ｉｎＭａｉｎｅ、Ａｍ、Ｐｏｔａｔｏ　Ｊｏ
ｕｒ、　　５５：６０１−６０９．　　Ｋｏｒｅａ　５
ｓｅｅｄ　ｐｏｔａｔｏ　ｐｒｏｇｒａｓ＋：ｏｒｇａ
ｎｉｚａｔｉｏｎ、　ｉｍｐａｃｔ　ａｎｄｉｓｓｕｅ
ｓ、１９Ｂ７　Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｐｏｔａ
ｔｏ　Ｃｅｎｔｅｒ、　ｐｐ１９−２４　） 従って毎年ウィルスフリーの無病優良種薯を確保するこ
とはジャガイモ農事の勝敗の原因となっていた。

そこでこれらの問題を解決する重要な方法の一つとして
従来にはウィルスを媒介釘る油虫の繁殖率が低い高領地
、土間地方で種薯を生産供給してきた。

一方、最近では組織培養技術を利用し生産点培養技術と
ともに高温（４５℃）の熱処理技術を並用して、ウィル
スフリーの無病株ジャガイモ植物を器内で大量増殖する
方法も開発されている。

ところが、上記のような方法を用いて器内で茎頂を大量
に生産した場合にも実際に必要な種薯を生産するために
は茎頂を土壌に移植しなければならない。

しかし、器内で育った植物を土壌に移植することは大変
困難なことであり、その過程中には多（の植物が枯死し
て、土壌に完全に活着し成功する比率は非常に低い欠点
がある。

本発明では以上のような問題点を解決する方案の一つと
して人口ジャガイモ種子を生産し、これを直接ジャガイ
モ種子とし播種する方法を提案するものである。

本発明で利用する人口ジャガイモ種子というのはジャガ
イモの幹を人口培地で培養しながら適当な培養環境条件
を与え人工的に形成したものである。

これは、実際のジャガイモの塊茎（ｔｕｂｅｒ　）と形
態、機能などが同一で、塊茎の大きさは豆の程度の寸法
のものである。（直径０．５〜１．ｏｃｍ、重さは約２
００〜５０ＯＮ程度） ところでジャガイモの幹を組織培養する場合器内率塊茎
が形成できる現象に関しては以前から多くの報告がある
。

（Ｇａｒｃｉａづｏｒｒｅｓ、Ｌ、ａｎｄＣ，Ｇｏｍｅ
ｚ−Ｃａｍｐｏ、　１９７３．　Ｉｎｖｉｔｒｏ　ｔｕ
ｂｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｏｔａｔｏ　５ｐｒｏ
ｕｔｓ　ａｓａｆｆｅｃｔｅｄ　ｂｙ　ｅｔｈｒｅｌ　
ａｎｄ　ｇｉｂｂｅｒｅｌｌｉｃ　ａｃｉｄ。

Ｐｏｔａｔｏ　Ｒｅｓ、１６：７３−７９．　Ａｂｂｏ
ｔｔ、Ａ１．ａｎｄ　Ａ、Ｒ，Ｂｅ１ｃｈｅｒ、　　１
９８６．　　Ｐｏｔａｔｏ　ｔｕｂｅｒ　ｆｏｒｍａｔ
ｉｏｎ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ。

Ｉｎ　Ｐｌａｎｔ　Ｔｉ５ｓｕｅ　Ｃｕ１ｔｕｒｅ　ａ
ｎｄ　ｉｔｓ　ＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａＩ　　ａｐｐｌ
ｉｃａｔｉｏｎｓ、　　Ｂｕｔｔｅｒｗｐｒｔｈｓ、ｐ
ｐ、１１３−１２２を参照〉 さらに以上の方法を利用し、ジャガイモの無病優良種薯
を大量に生産するための多（の試みがあった。

（Ｗａｎｇ　Ｐ、Ｊ、ａｎｄ　Ｃ，Ｙ、ｔｌｕ、１９８
２．　Ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｍａｓｓ　ｔｕｂｅｒｉｚａ
ｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｖｉｒｕｓ−ｆｒｅｅ　５ｅｅｄ　
ｐｏｔａｔｏ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｉｎＴａｉｗａ
ｎ、　Ａｍｅｒ、Ｐｏｔａｔｏ　Ｊｏｕｒ、５９：３３
−３９を参照） しかしジャガイモの場合、毎年美大な量の種子が必要で
ある。

もし人口ジャガイモ種子が種子として使用できるとして
も狭い面積で急速大量に生産し、安い値段で農家へ供給
できる方法を開発しなければその実用的な意味はないと
考えられる。

〈本発明の目的〉 本発明ではジャガイモの種子としてそのまま利用できる
人口ジャガイモ種子を従来の方法より最少３０倍以上効
率的に急速大量生産し、天然のジャガイモ種子より安い
値段で農家に供給できる方法を開発したもので、その人
工ジャガイモ種子により実際的に利用できることを証明
したものである。

〈本発明の説明〉 以下本発明の詳細な説明する。

次の実施例は本発明の内容を詳細に例証したものである
が、本発明の範囲はこれに限定されない。

〈実施例１〉 ウィルスフリー（ｖｉｒｕｓ−ｆｒｅｅ　）のジャガイ
モの茎頂培養（ｓｈｏｏｔ　ｔｉｐ　ｃｕｌｔｕｒｅ）
法の確立と、人工ジャガイモ種子形成用茎頂の誘導およ
び急速大量増殖方法。

韓国農林水産省　農村振興庁　園芸試験場がら得た無菌
のスベリオル（Ｓｕｐｅｒｉｏｒ）塊茎を用いた。これ
ら塊茎を水洗し、７０％エチルアルコールで３分間沈漬
した後、２０％クロルラクス（商業用〉で１０分間表面
消毒した。

そして予め滅菌した床上（Ｖｅｒｍｉｃｕｌｉｔｅ：ｐ
ｅｒｌｉｔｅ＝１：１）を充填した四角形のポット（ｐ
ｏｔ）に播種した。

ポットは培養機（明１６時間２５℃：暗８時間２５℃）
に入れ培養した。

培養後１週目から塊茎の発芽が始まり、２週目前後芽の
長さが平均５〜１０ｃ＋＋＋程度の際、茎頂先端部位（
長さ１〜２　ｃｍ　）を切断し、茎頂培養の基本材料と
した。

こうして切断した茎頂先端部位を滅菌蒸留水で３回洗っ
た後、７０％エチルアルコールに３０秒間沈潰し、１０
％クロルラクスで１０分間最終表面消毒後、特殊組成の
人形成用液体培地または固体培地（表１、表２参照）に
直上した。

培養室の環境条件は前述した塊茎発芽時と同一の条件と
した。

置土後、約１週日から小枝（ａｘｉｌｌａｒｙ　５ｈｏ
ｏｔ　）が発生し始め３〜４週目からは継代培養をしな
ければならないほど旺盛な生長を示した。

この際、小枝（ａｘｉｌｌａｒｙ　５ｈｏｏｔ　）の発
生を最大に促進させるために器内取り木（Ｉｎ　ｖｉｔ
ｒｏ　ｌａｙｅｒｉｎｇ）方法を用いたがフラスコまた
は試験管で培養する場合には器内取り木作業が難しく、
また時間がかかる欠点がある。

そのため、本発明では平たい形状のペトリ皿（直径１０
ｃｍ、高さ１．５ｃ＋＊）で茎頂（ｓｈｏｏｔ　）を培
養し、自動的に器内取り木（Ｉｎ　ｖｉｔｏｒｏ　ｌａ
ｙｅｒｉｎｇ）ができるように調節した。

その結果小枝の（ａｘｉｌｌａｒｙ　５ｈｏｏｔ　）発
生を大幅的に増加させることができた。（表３参照）茎
頂を培養する際に一般的には液体培養が固体培養に比べ
生長繁殖速度は早（なる。

しかし液体培養を長時間続けると水分の過多、吸収によ
り茎頂の退化ないしは非正常化現象（ｓｈｏｏｔ　ｖｉ
ｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ）がたびたび起こり、正常的な増
殖培養ができなくなることがある。

従って本発明では培養初期には液体培地を用い、その後
には主に固体培地で培養した。

ここで特記することは培養液上で増殖した茎頂が、次の
段階の人工ジャガイモ種子形成条件に移った持金てのも
のが人工ジャガイモ種子を形成するものになるのではな
く、特別な形態、すなわち茎葉が正常的に展開し、また
小枝（ａｘｉｌｌａｒｙ　５ｈｏｏｔ　）および根の発
達が旺盛な茎頂く第１図）だけが人工ジャガイモ種子を
多量に生産することである。（表４参照） 従って、本発明では以上で述べたような特異な形態と能
力を持つ茎頂を“人工ジャガイモ種子形成用茎頂（Ｍｉ
ｃｒｏ　ｔｕｂｅｒｇｅｎｉｃ　５ｈｏｏｔ）”と命名
し、“スベリオル（５ｕｐｅｒ　ｉｏｒ　、特許細胞株
　受託番号、　ＫＣＴＣ８４４５ｐ）”品種の人工ジャ
ガイモ種子形成用茎頂を誘起し、Ｋｏｒｅａｎ　Ｔｙｐ
ｅ　Ｃｕ１ｔｕｒｅ　Ｃｏ１１ｅａｔ　ｉｏｎに特許細
胞株として登録寄託した。

このような人工ジャガイモ種子形成茎頂は特殊組成の人
工ジャガイモ種子形成用茎頂は発生培地（表１、表２参
照）で効率よく発生した。

また−屑発生した人工ジャガイモ種子形成用茎頂は、少
な（とも２４回（１年）継代培養してもその特性をその
まま維持した。

〈実施例２〉 人工ジャガイモ種子の急速大量形成方法。

実施例１の茎頂の急速増殖段階、すなわちペトリ皿から
旺盛に増殖した人形成用茎頂をまず３０℃の高温培養機
（その他の培養条件は上記の人工ジャガイモ種子形成用
茎頂増殖培地と同一）に移して一週間増殖した後、これ
らを暗黒１０℃、低温培養機でもう一度一週間低温前処
理した。

低温前処理が終わった人工ジャガイモ種子形成用茎頂を
採取し、人工ジャガイモ種子促進用培地（表２、表５参
照）に直上した後、三重のパラフィンフィルムで密封し
、明６時間５００ルックス２０℃、暗１８時間１２℃の
培養機に約１０個ずつペトリ皿を重ねて培養した。

大部分の場合、上記の人工ジャガイモ種子形成条件に移
って約１０日日から人工ジャガイモ種子を形成し始め平
均た。

そして４０〜５０日目（こ日日と、ジャガイモ種子とし
て使用できる豆のような小さな人工ジャガイモ種子が、
ペトリ皿１個当たり、平均１０個以上形成した。（第２
図参照） 人工ジャガイモ種子形成促進用培地の組成中ｃｈ１ｏｒ
ｏ　ｃｈｏｌｉｎｅ　ｃｈｌｏｒｉｄｅ（ｃｃｃ）の代
わりにそれと類似した生理化学的効能を持つＰｈｏｓｐ
ｈｏｎ　Ｄ、Ａｍｏ−１６１８、Ｂ−９０５（Ｎ−ｄｉ
ｍｅｔｈｙｌ−ａｍｉｎｏ　Ｓｕｃｃｉｎａｍｉｃ　ａ
ｃｉｄ）等の生長抑制剤をｃｃｃと同じ濃度で（１００
ｐｐｍ）培養液に添加したが、その時にも人工ジャガイ
モ種子形成にはＣＣＣと同じ程度の優れた効果があった
。

“スベリオル（５ｕｐｅｒ　ｉｏｒ　）”品種において
人工ジャガイモ種子形成用茎頂ではない普通の茎頂を使
用して慣行の液体培養法で人工ジャガイモ種子を生産し
た時の効率と、本発明で新しく開発した固体培地を使用
したペトリ皿培養法（人工ジャガイモ種子の形成率を高
めるために使用した全ての処理を含む）で人工ジャガイ
モ種子を生産した時、単位培養面積当たり生産効率を比
較した結果は表６および表７の通りである。

〈実施例３〉 人工ジャガイモ種子の長期貯蔵方法と貯蔵中の発芽抑制
および貯蔵後の発芽促進方法。

培養機で大量に生産した“スベリオル（５ｕｐｅｒ　１
ｏｒ）″品種の人工ジャガイモ種子を無菌状態で収穫す
る。そしてまず滅菌蒸留水に浸して３〜４回程度充分に
洗浄し、種子の表面についている培養液を洗う。

その後人工ジャガイモ種子は滅菌した空ペトリ皿に入れ
、均一にひろげてタリンベンチの中で表面の水分が完全
に乾（まで乾燥した後、蓋を閉めて三重にパラフィンフ
ィルムで密封し４℃の低温冷蔵庫に重ねて保管した。（
第３図参照）以上のように低温冷蔵庫に保管した人工ジ
ャガイモ種子は約２ケ月後からは休眠が打破され、必要
がある時には室温で２週間程度放置すると容易に発芽し
た。（表８参照） 一方発芽を抑制しながら長時間保管する場合には、収穫
後滅菌水で洗浄した後、５　ｍｇ　／　ｅのアブシジン
酸（Ａｂｓｃｉｓｉｃ　　ａｃｉｄ）溶液に３時間ぐら
い沈漬する。その後、表面の水分を充分に乾燥し後、０
〜４℃の低温冷蔵庫に保管する。

このような方法によれば、人工ジャガイモ種子は１年以
上健全に保管することができ、少なくとも発芽力が喪失
されないことを確認した。（表９参照） 一方、収穫後早期に発芽する必要がある場合には、ジベ
レリン処理をしたり、ジベレリン処理前に３８℃温浴処
理を並行すれば休眠打破が促進され早期に発芽した。（
表８参照） また休眠が打破された人工ジャガイモ種子の場合は、発
芽にかがる期間を大幅に短縮することができる。（表１
０参照） 〈実施例４〉 人工ジャガイモ種子の播種栽培による収穫量検定 実施例３のように、低温貯蔵した“スベリオル（Ｓｕｐ
ｅｒ　ｉｏｒ　）″品種の人工ジャガイモ種子を二週間
室温処理し、ペトリ皿内で芽を２〜３ＩＩＩＩ１１程度
発芽させた後直ちに圃場に直播して、従来の天然ジャガ
イモ種子と収穫量比較検定を行った。

生育初期には、人工ジャガイモ種子の生育が天然ジャガ
イモ種子の生育に比べて不良であった。

しかし、生育中期以後がらは旺盛な生育を見せ、播種後
３ケ月目の収穫時では人工ジャガイモ種子の地上部生育
が天然ジャガイモ種子の生育の約２／３程度に達した。

また最終収穫量も地上部生育程度と正比例した傾向が見
られ、人工ジャガイモ種子は株当たり約５０７、　ｇ　
％天然ジャガイモ種子は株当たり約８１２ｇの収穫量を
示した。（表１１および第４、第５図参照） 従って人工ジャガイモ種子を天然ジャガイモ種子の栽植
方法と同一の方法で播種した場合、天然種子ジャガイモ
に比べて約６０〜７０％の収穫量が認められることがわ
かった。

しかし、人工ジャガイモ種子の場合、あまりにもジャガ
イモ種子自体の大きさが小さく、これらから発生する植
物体自体の大きさも非常に小さい。

そのため、天然のジャガイモ種子を植える栽植密度に比
較して２倍ないし、３倍までの密植ができることになる
。

したがってこのような栽培方法を採択する場合には単位
面積当たり収穫量は従来の天然ジャガイモ種子を植えた
時よりもむしろ増加することが予想される。

次に、本文中に引用した表１から、表１１までを記載す
る。

（以下余白） 表１　“スベリオル（Ｓｕｐｅｒｉｏｒ）　”品種にお
イテ、人工ジャガイモ種子形成用茎頂の発生 および大量急速増殖用培地の組成 表２　ジャガイモ“スベリオル（Ｓｕｐｅｒｉｏｒ　）
”品種において、人工ジャガイモ種子形成用茎頂の急速
大量増殖用培地に添加したスタバビタミン（Ｓｔａｂａ
　Ｖｉｔａｍｉｎｓ）複合体の組成 を使用した器内取り木方法がこえだ（Ａｘｉｌｌａｒｙ
　５ｈｏｏｔ）　発生の促進に与える影響 ＊１．３゜ｍの長さの茎頂−個を面上、４週培養後、発
生した小枝数＊託各処理は２０個の培養器を使用した結
果の平均値である。

Ｍｅｄｉｕｍ　ｐＨ＝５．７ 表４　ジャガイモ“スベリオル（Ｓｕｐｅｒ　ｉｏｒ　
）”品種において、人工ジャガイモ種子形成用茎頂と普
通茎頂の培養環境条件による人工ジャガイモ種子の生産
能力の比較 表５　“ペリオル（Ｓｕｐｅｒｉｏｒ）　”種の人工ジ
ャガイモ種子形成用培地の組成 ＊ｌ：昼夜間培養温度が２５℃、昼の長さが１６時間、
夜の長さが８特出である。用いた培地は人工ジャガイモ
種子形成用茎頂の増殖に使用した培地と同一（表１参照
） ＊２：培地は人工ジャガイモ種子形成促進用培地（表４
参照）を用Ｇ′だ。茎頂は高温（３０℃）及び暗黒低温
（１０℃）条件で前処理し夜（１２℃）、昼（２０℃）
の培養温度で変温処理した。夜の長さが１８時間、昼の
長さが６時間で昼の間の光度は５００ルツクスと同定し
た。

Ｍｅｄｉａｍ　ｐＨ＝５．７ 表６　培養法による単位培養空間当り“スベリオル”品
種の人工ジャガイモ種子の生産力の比較 表７　表６で示した培養法による、“スベリオル”品種
の人工ジャガイモ種子の生産効率に対する細部分析比較
＊１：横１２０ｃｎ＋、縦７０ｃｍ、高さ３０ｃ＋ａの
培養棚を使った。

＊２：直径５噴以上、重さ１００ｍｇ以上のジャガイモ
種子として利用できる人工ジャガイモ種子を意味する。

＊３　：　２５０ｍ１！容量の三角フラスコを使用した
。

＊４　三回反復実験結果の平均値である。

＊５：直径１０ｃｍ、高さ１．５ｃｍのペトリ皿を使用
した。

＊１：本発明で開発したペトリ皿培養法が、従来のフラ
スコ培養法より約３０倍程度の高い生産効率があること
を表わす。

表８　低温貯蔵期間中ジャガイモ“スベリオル”品種人
工ジャガイモ種子の休眠打破およびジベレリン処理°Ｉ
が休眠短縮に及ぼす影響。

表１Ｏ温浴処理（３８℃、１時間）およびジベレリン酸
処理（５ｐｐｍ、室温、１時間）が、休眠が打破した状
態の“スベリオル”（Ｓｕｐｅｒｉｏｒ）品種人工ジャ
ガイモ種子の発芽促進に及ぼす影響。

＊ｌ：室温５ｐｐｍ濃度で１時間処理した。

＊２：低温貯蔵庫から室温で出しだ後２週日に発芽率を
調査した。

表９　“スベリオル”品種の人工ジャガイモ種子の収穫
後アブシジン酸（Ａｂｓｃｉｓｉｃ　ａｃｉｄ）処理１
が貯蔵中発芽抑制に及ぼす影響。

＊ｌ：４℃低温貯蔵庫で２力月以上放置、休眠が完全に
打破された人工ジャガイモ種子を実験材料に使用した。

＊２二発芽の長さが１ｍ以上になり、肉眼で発芽状態を
確認できる状態。

表１１　　“スベリオル“品種の人工ジャガイモ種子と
天然ジャガイモ種子の一株当りの収［ｆｆｉの比較°１
＊　１　：　１０ｐｐｍ濃度、室温で３時間浸漬した。

＊ｌ：人工または天然ジャガイモ種子各３０個体から収
穫したジャガイモ植物体の平均値。栽培法は一般慣行の
ジャガイモ栽培法と同様に４月初めに採取し、７月初め
に収穫した。

【図面の簡単な説明】

第１図から５図は、生物の形態を表している写真である
。 第１図はペトリ皿内の人工培養液上で急速に増殖してい
る”スベリオル（Ｓｕｐｅｒｉｏｒ　）″品種の人工ジ
ャガイモ種子形成用茎頂（Ｍｉｃｒｏｔｕｂｅｒｇｅｎ
ｉｃ　５ｈｏｏｔ）の写真 第２図はへトリ皿内の人工培養液の上で急速大量に形成
した″スベリオル（Ｓｕｐｅｒｉｏｒ　）　−品種の人
工ジャガイモ種子の写真 第３図は収穫後ペトリ皿の中で無菌状態に保管し長期間
低温貯蔵している″スペリオル（Ｓｕｐｅｒｉｏｒ）“
品種の人工ジャガイモ種子の写真第４図は°スベリオル
（Ｓｕｐｅｒｉｏｒ　）　−品種の人工ジャガイモ種子
を植え、栽培した後収穫直前のジャガイモの写真 第５図は゛スベリオル（５ｕｐｅｒ　ｉｏｒ　）″品種
の人工ジャガイモ種子−粒を植え、これから生産された
ジャガイモ（平均サイズ）の写真 第；３図 ３面の浄書で内容（こ変更含し） 第４ 第５図

Claims (12)

【特許請求の範囲】
1. （１）組織培養技術を用い、ウィルスフリー（ｖｉｒｕ
   ｓ　ｆｒｅｅ）のスペリオル（Ｓｕｐｅｒｉｏｒ）品種
   の無病株ジャガイモ植物から人工ジャガイモ種子形成用
   茎頂（ｓｈｏｏｔ）を誘導し、人工ジャガイモ種子の生
   産に適合な持株組成の培養液を用いたペトリ皿培養法に
   よる人工ジャガイモ種子急速、大量生産方法
2. （２）第１項において人工ジャガイモ種子形成用茎頂（
   Ｍｉｃｒｏｔｕｂｅｒｇｅｎｉｃ　ｓｈｏｏｔ）の誘導
   および急速大量増殖用培地の組成
3. （３）第２項において誘導された人工ジャガイモ種子形
   成用茎頂（ＫＣＴＣ　８４４５Ｐ）を使用し、人工ジャ
   ガイモ種子を大量に生産する方法
4. （４）第１項においてこえた（Ａｘｉｌｌａｒｙ　ｓｈ
   ｏｏｔ）の発生を最大に誘導するため、ペトリ皿と類似
   した高さ３ｃｍ以下の平たい形状の培養器を使って、器
   内取り木（ｉｎ　ｖｉｔｒｏｌａｙｅｒｉｎｇ）する方
   法（表３参照）
5. （５）第１項において人工ジャガイモ種子形成促進のた
   め用いた培地の組成
6. （６）第５項においてＣ．Ｃ．Ｃ．（Ｃｈｌｏｒｏ　Ｃ
   ｈｏｌｉｎｅ　Ｃｈｌｏｒｉｄｅ）の外、これと類似し
   た生理化学的効能を持つｐｈｏｓｐｈｏｎ　Ｄ（２，４
   −Ｄｉｃｈｌｏｒｏｂｎｚｙｌｔｒｉｂｕｔｙｌ　ｐｈ
   ｏｓｐｈｏｎｉｕｍ　ｃｈｌｏｒｉｄｅ），Ａｍｏ−１
   ６１８（Ａｍｍｏｎｉｕｍ（５−ｈｙｄｒｏｘｙ　ｃａ
   ｒｖａｃｒｙｌ）ｔｒｉｍｅｔｈｙｌ　ｃｈｌｏｒｉｄ
   ｅ　ｐｉｐｅｒｉｄｉｎｅ　ｃａｒｂｏｘｙｌａｔｅ）
   ，Ｂ−９０５（Ｎ−ｄｉｍｅｔｈｙｌ−ａｍｉｎｏ　ｓ
   ｕｃｃｉｎａｍｉｃ　ａｃｉｄ）などの生長抑制剤を１
   ００ｐｐｍ以下の濃度で人工ジャガイモ種子形成促進用
   培地に添加する方法
7. （７）第１項または第８項において、人工ジャガイモ種
   子の形成を促進するため、用いた茎頂を高温（３０℃）
   および暗黒低温（１０℃）条件で前処理した後、昼夜間
   培養温度（昼間２０℃、夜間１２℃）で変温処理する方
   法
8. （８）第１項の方法により収穫した人工ジャガイモ種子
   を無菌状態で長期貯蔵する方法においてアブシジン酸（
   Ａｂｓｃｉｓｉｃ　ａｃｉｄ）処理によって長期貯蔵お
   よび発芽を抑制する方法
9. （９）第１項、第３項、第４項において、培養面積およ
   び空間を最大に活用するため、高さ３ｃｍ以下のペトリ
   皿とそれに似た平たい形状の全ての培養器およびこれら
   を積み重ねて培養する方法
10. （１０）第１項により生産された人工ジャガイモ種子を
    ４℃低温に貯蔵し、休眠を打破する方法と、５ｐｐｍ濃
    度以上のジベレリン（Ｇｉｂｂｅｒｅｌｌｉｃ　ａｃｉ
    ｄ）および温浴処理（３８℃温湯処理）により発芽を促
    進する方法
11. （１１）第１項により生産された人工ジャガイモ種子を
    、従来の天然ジャガイモ種子の生産のために必要な前段
    階のジャガイモ種子として使用する方法
12. （１２）第１項によって、塊茎形成を特徴とするナス科
    、ジャガイモ属に属する全てのジャガイモ植物において
    、第１項から第１１項まで記載された方法を用い、人工
    ジャガイモ種子を培養器内で急速大量生産し、これを慣
    行の天然ジャガイモ種子の代わりに代替して使用する方
    法