JPH03137188A

JPH03137188A - 新規ルシフェリン誘導体

Info

Publication number: JPH03137188A
Application number: JP2071584A
Authority: JP
Inventors: Kaoru Okamoto; 馨岡本; Toshio Goto; 俊夫後藤
Original assignee: Nippon Zoki Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Nippon Zoki Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1989-03-22
Filing date: 1990-03-20
Publication date: 1991-06-11
Anticipated expiration: 2015-02-21
Also published as: JP3012274B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】（産業上の利用分野）本発明は発光分析用試薬として有用なルシフェリン誘導
体に関する。

（従来の技術）一近年、生体成分の微量分析手段として化学発光を利用
する方法が盛んに行われており、ルミノール誘導体やシ
ュウ酸エステル類など多くの化学発光物質が開発、使用
されている。生物発光物質として知られていたルシフェ
リン類の中に化学発光する化合物が見いだされ、活性酸
素等で特異的に化学発光する誘導体が種々合成されてき
た。しかし、例えば生体成分混在下で活性酸素を定量す
る際、可視領域に吸収あるいは蛍光を持つ成分により妨
害され定量困難な場合が多いため、より長波長で発光す
る化学発光物質が望まれている。

（発明が解決しようとする問題点）本発明の目的は、発光分析用試薬として有用な新規ルシ
フェリン誘導体を提供することにある。

（問題点を解決するための手段）本発明ルシフェリン誘導体は、下記一般式（１）で表さ
れる化合物である。

〔式中、Ｘは水素、アミノ基の保護基、　Ｒ−１Ｒ−Ｃ
Ｏ−１Ｒ−３Ｏ，−１Ｒ−ＮＨＣＯ−又はＲ−ＮＨＣＳ
−を表し、Ｒは蛍光剤を表し、ｎは工乃至４の整数を表
す、］上記一般式（１）中のＸにおけるアミノ基の保護基とし
ては、ペプチド合成化学等の分野で通常使用される保護
基が利用でき、例えば、ベンジルオキシカルボニル、ｐ
−メトキシベンジルオキシカルボニル、ｐ−クロロベン
ジルオキシカルボニル、ｐ−ニトロベンジルオキシカル
ボニル、ｐ−フェニルアゾベンジルオキシカルボニル、
ｐ−メトキシフェニルアゾベンジルオキシカルボニル、
第三ブトキシカルボニル、第三アミロキシカルボニル、
ｐ−ビフェニルイソプロピルオキシカルボニル、ジイソ
プロピルメチロキシカポニル、ホルミル等の基が挙げら
れる。

又、Ｒの蛍光剤としては、３．７−シヒドロー６−（４
−メトキシフェニル）−２−メチルイミダゾ（１，２−
ａ）ピラジン−３−オンの発光波長と同じ励起波長を有
する蛍光剤を用いることができ、好ましくは、励起波長
が４００乃至５３０ｎｍ、さらに好ましくは励起波長が
４７０乃至５１０ｎｍの蛍光剤、例えばフルオレセイン
、４−ジメチルアミノフェニルアゾベンゼン、４−ニト
ロベンズ−２−オキサ−１，３−ジアゾール等を挙げる
ことができる。

本発明ルシフェリン誘導体は、前記の一般式（１）で表
される化合物の薬学的に許容される塩を包含し、例えば
ナトリウム、カリウム、リチウム等のアルカリ金属、マ
グネシウム、カルシウム、バリウム等のアルカリ土類金
属、その他アルミニウム等との金属塩、又は、例えば塩
酸、硫酸、硝酸、リン酸、ギ酸、酢酸、クエン酸、乳酸
、臭化水素酸、トリフルオロ酢酸等の酸との付加塩、或
いはアンモニア、存機アミン等の有機塩基との塩が挙げ
られる。

これらの塩は公知の方法により遊離の本発明ルシフェリ
ン誘導体より製造でき、或いは相互に変換することがで
きる。

次に、本発明化合物の製造方法の一例を述べる。

例えば、下記一般式（■）：［式中、Ｘ′はアミノ基の保護基を表し、ｎはｌ乃至４
の整数を表す、］で表される化合物と２−アミノアセトアミジンを水酸化
カリウム水溶液中で縮合し、上記グリオキサール化合物
をピラジン誘導体とした後、メチルグリオキサール水溶
液をメタノール中で作用させることによって、前記一般
式（１）中のＸがアミン基の保護基である本発明化合物
３．７−ジヒドロ（１，２−ａ）ピラジン−３−オン誘
導体を得ることができる。

この３．７−ジヒドロ（１，２−ａ〕ピラジン−３−オ
ン誘導体よりアミノ基の保ｆｉ基を脱離することによっ
て、一般弐Ｎ）中のＸが水素である本発明化合物が得ら
れる０例えば、アミノ基の保護基としてベンジルオキシ
カルボニルを用いた場合、接触還元又は臭化水素−酢酸
処理等の通常の方法により脱保護を行うことができる。

脱保護した本発明化合物は、アミノ基の部位に種々の置
換基を導入することができ、ルシフェリン骨格に蛍光剤
を導入する際の原料物質さして有用性が高い。

次いで、アミンと結合可能な官能基を有する螢光剤と一
般式（１）中のＸが水素である上記本発明化合物を縮合
させることによって、一般式（ｒ）のＸがＲ−１Ｒ−Ｃ
Ｏ−１Ｒ−ＳＯ□−１Ｒ−ＮＨＣＯ〜又はＲ−ＮＨＣＳ
−（Ｒは蛍光剤を表す）である本発明化学発光物質を得
ることができる。アミンとの結合方法として、ハロゲン
等の脱Ｈ基に対する置換反応、酸ハロゲン化物及びペプ
チド合成で繁用されている活性エステルとの縮合反応並
びにイソシアネート、イソチオシアネート等との反応な
どが挙げられる。結合様式により異なるが、縮合反応は
ペプチド合成或いはアミン標識蛍光化の分野において通
常用いられている反応条件に従って行うことができる。

アミンと結合可能な官能基を存する螢光剤として、例え
ば、５−又は６−カルボキシフルオレセインスクシンイ
ミジルエステル、５−又は６−カルボキシフルオレセイ
ンアミドカプリン酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエス
テル、フルオレセイン−５−イソシアネート、フルオレ
セイン−５−イソチオシアネート、５−（４，６−シク
ロロトリアジンー２−イル）−アミノフルオレセイン二
塩酸塩、４−ジメチルアミノアゾベンゼン−４゛−スル
ホニルクロリド、４−ジメチルアミノアゾベンゼン−４
″−イソチオシアネート、４−クロロ−７−二トロベン
ズー２−オキサ−１，３−ジアゾール、４−フルオロ−
７−ニドロベンズー２−オキサ−１，３−ジアゾール等
のアミン標識蛍光＃に薬などを利用できる。

得られた本発明化合物は、蒸留、クロマトグラフィー、
再結晶等の通常の手段により精製し、融点、元素分析、
ＩＲ，ＮＭＲ，ＵＶ、マススペクトル等により同定を行
った。

（実施例）実施例１゜（１）氷冷した２−アミノエタノール（２，１ｍｏｌ）
を５０％エタノール溶液８００−に溶かし氷冷した後、
１（１０−のベンジルオキシカルボニルクロリドを徐々
に添加した。同温度で２時間撹拌した後、反応混合物を
約半分の量に濃縮した。ＩＮ硫酸で残留物をＰＨ２に調
整した後、クロロホルムで３回抽出した。水洗後、無水
硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を溜去した。得られた油
状物をエタノールより結晶化して、１１５ｇの２−（Ｎ
−ベンジルオキシカルボニルアミノ）エタノールを針状
白色結晶として得た。

融点：　５５−５７°ＣＩ　Ｒ（ＫＢｒ）　　：　　３３３０．１６９２．　＋
５４０．１２７５．１２１０１１４３、　ＬＯ３２，９
９３，７４２，６９５ｃ預１Ｍａｓｓ（Ｅｌ　２０ｅＶ
）　：　ｍＨｚ　１９５　（Ｍ’）Ｎ　Ｍ　Ｒ（ＣＤＣ
Ｉｓ）　　：δ−２，４３（１１１，ｂｒ、ｓＬ　３．
２５−３．３５（２Ｈ，＋ｎ）、　３．６６（２Ｈ，Ｌ
、Ｊ＝４．６ｔｌｚ）、　５．０８（２１（、ｓ）。

５．４２（１）１．ｂｒ）、　７．２５−７．４０（５
Ｌ＋ｏ）（２）２８ｇの上記生成物を２００−のピリジ
ンに溶かし、２５ｇの塩化ｐ−）ルエンスルホニルを加
えた０反応混合液をＯ′Ｃで１時間撹拌した後、水氷中
に注ぎ込んだ、６Ｎ塩酸で酸性にした後、酢酸エチルで
抽出し、水及び飽和食塩水で洗った。無水硫酸ナトリウ
ムで乾燥後、溶媒を溜去し、４３ｇの２−（Ｎ−ベンジ
ルオキシカルボニルアミノ）エチルｐ−＋−ルエンスル
ホネートを油状物として得た。

Ｉ　ＲＱｉｅａｔ）　：　　３３５０．　１７３０．　
１４９Ｂ、　　１４５５．　１２１５１１６０．１１２
１，１０８０．１０３５，１０２］８１６、　７３８．
　６８５　ｃｍＮＭＲ（ＣＤＣＩｆｆ）　　：　　δ−２，４３（３ｔ
ｌ、ｓ）、　　３．４４（２■、ｄｔＪ−５，０，５，
３１１ｚ）、　　４．０８（２Ｈ，ｔ、Ｊ＝５．０ＩＩ
ｚ）、　　５．０５（２Ｂ、ｓ）、　５．１７（ＬＨ，
ｂｒ、ｔ）、　７．２５−７．４５（５１１，ｍ）７．
３２（２Ｂ、ｄ、Ｊ−９，０Ｈｚ）、７．７７（２８，
ｄ、Ｊ＝９．０Ｈｚ）（３）３５ｇの２−（Ｎ−ベンジ
ルオキシカルボニルアミノ）エチルｐ４ルエンスルホネ
ート、１３ｇの４”−ヒドロキシアセトフェノン及び５
５ｇの無水炭酸カリウムを４５０艷の乾燥アセトン中、
アルゴン雰囲気下で２４時間撹拌しつつ還流した。冷却
後、不溶物を濾過して除き濾液を濃縮した。残渣を酢酸
エチルに溶かし、水、１％水酸化ナトリウム溶液、飽和
食塩水で洗った後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。減
圧上濃縮し、残渣をヘキサン／ベンゼンの混合溶媒より
再結晶して、２６．５ｇの４’−（２−（Ｎ−ベンジル
オキシカルボニルアミノ）エトキシ）アセトフェノンを
針状結晶として得た。

融点：　８０−８１　’ＣＩ　Ｒ（ＫＢｒ）　　：　　３３１０．１６９０．１６
６６、１６００．１５６０゜１．３５６．１２７３．１
２５７．１１６５、ｌ１１２１０５５、８３７．８２６
．７５０．６９８　ｃｔａＭａｓｓ（Ｅｌ、２０ｅＶ）
　：　ｍＨｚ　３１３　　（Ｍ’）ＮＭ　Ｒ（ＣＤＣＩ
り　　；　　δ−２，５５（３）１．ｓ）、　　３．６
３（２Ｈ，ｄｔＪ＝５．０．　５．３Ｈｚ）、　　４．
１０（２Ｈ，ｔ、Ｊ＝５．０Ｈｚ）、　　５．１１（２
１＋、ｓ）、　　　５．２７（ＩＨ，ｂｒ、　　む）、
　　　６．９０（２）１．ｄ、Ｊ−８，７）１ｚ）。

７．２７−７．４２（５）１．ａ＋）、　　７．９２（
２Ｈ，ｄ、Ｊ＝８．７Ｈｚ）（４）２１ｇの上記生成物
、７．４４　ｇの二酸化セレン、１．３５−の水及び３
４献のジオキサンの混合物を２０時間還流した。析出し
た金属セレンを除去後、溶媒を溜去して粘性のある油状
物を得た。これに３００−の水を加え１００℃で３時間
撹拌した後濃縮し、２３ｇの４−（２（Ｎ−ベンジルオ
キシカルボニルアミノ）エトキシ）フェニルグリオキサ
ール水和物を油状物として得た。

本化合物はさらに精製することなく次の反応に用いた。

（５］１６ｇの４−（２−（Ｎ−ベンジルオキシカルボ
ニルアミノ）エトキシ）フェニルグリオキサール水和物
を６０−のメタノール及び６０献の１，４−ジオキサン
の混合溶媒に溶かし、これにｌ１ｇの２−アミノアセト
アミジンニ臭化水素酸塩を水に溶かして−１５°Ｃにて
加えた。３２−の２０％水酸化カリウム溶液を加え、反
応混合物を一１５°Ｃで１時間、次いで室温で１時間撹
拌した。溶媒を減圧下溜去し残渣を乾固した後、２−プ
ロパツールを加えて得られた結晶を濾取した。これを冷
２−プロパツールで洗い乾燥して、５，９ｇの２−アミ
ノ−５−（４−（２−（Ｎ−ベンジルオキシカルボニル
アミノ）エトキシ）フェニル）ピラジンを淡黄色結晶と
して得た。

融点：　１２８−１３０°ＣＩ　Ｒ（ＫＢｒ）　　：　３３８０．３１７５．１６８
６．１６０１　１５２２１５０４、１４７８．１４５８
．１２５９．１２５０１１９３、１１４０．１０１０．
８２０　６９６　ｃｍＭａｓｓ（Ｅｌ、２０ｅＶ）　：
　ｍＨｚ　３６４　（Ｍ”）ＮＭＲ（ＣＤＣ１３）　　
：δ−３，６３（２Ｈ，ｄｔ、Ｊ＝５．０．５．２１１
ｚ）。

４．０８（２８，Ｌ、Ｊ＝５．０Ｈｚ）、　４．６１（
２Ｈ，ｂｒ、ｓ）、　５．１３（２Ｈ，ｓ）、　５．３
５（ＩＩ、ｂｒ、ｔ）、　６．９４（２Ｈ，ｄ、Ｊ＝８
．７１１ｚ）７．２６−７．４２（５Ｈ，ｍ）、　７．
７８（２８，ｄ、Ｊ＝８．７Ｈｚ）。

８−０２（ＩＨｌｄ、Ｊ＝１．４Ｈｚ）＋　８．３６（
ＩＨ，ｄ、Ｊ＝１．４ｔｌｚ）（６）５．５５ｍｍｏｌ
のメチルグリオキサール及び１．０ｇの上記生成物を２
３−のメタノールに熔解し、０．５５−の濃塩酸をアル
ゴン気下室温で加え、７０’Ｃで４時間撹拌した後濃縮
した。得られた粗粉末を水で懸濁して析出した固形物を
濾取し、水及びエーテルで洗った後乾燥して１．２ｇの
６−　（４−（２−（Ｎ−ベンジルオキシカルボニルア
ミノ）エトキシ）フェニル）−３，７−シヒドロー２−
メチルイミダゾ（１，２−ａ）ピラジン−３−オン塩酸
塩を黄色結晶として得た。

融点：　１５２−１５５　”ＣＩ　Ｒ（ＫＢｒ）　　：　　３３５０．３１０（１−２
０００，１７００，＋６５２゜１５９８．　１５００．
　１２４１．　８３０　ｃｓ−’Ｍａｓｓ（ＳＩＭＳ）
　　：　ｍ／ｚ　４１９　（門＋Ｈ）Ｎ　Ｍ　Ｒ（ＣＤ
ＣＩ：＋）　　：δ・２．５６（３Ｈ，ｓ）、　３．５
４（２１１，ｔ。

Ｊ−５，６）Ｉｚ）、　　４．１１（２ｔｌ、ｔ、Ｊ＝
５．６Ｈｚ）、　５．０９（２）１．ｓ）７．０８（２
Ｈ，ｄ、Ｊ＝８．６Ｈｚ）、　７．２２−７．４０（５
１１，ｌ１１）。

７．８９（２Ｈ，ｄ、Ｊ＝８．６１１ｚ）、　８．５３
（１）１．ｄ、Ｊ＝１．１Ｈｚ）。

９．０４（ＩＨ，ｄ、Ｊ＝１．１Ｈｚ）（７）　５００
＋ｎｇの上記生成物と１．２−の３０％臭化水素酢酸溶
液を室温で１０分間撹拌した後、エーテルを加えて析出
した固形物を濾取した。エーテル及びクロロホルムで洗
った後乾燥して、４９０ｍｇの６−（４−（２−アミノ
エトキシ）フェニル）−３，７−シヒドロー２−メチル
イミダゾ（１，２−ａ）ピラジン−３−オンニ臭化水素
酸塩を吸湿性粉末として得た。

Ｍａｓｓ（ＳＩＭＳ）　　：ｍ／ｚ　２８５　（Ｍ＋Ｈ
）Ｎ　Ｍ　Ｒ（ＣＤ３０Ｄ）　　：δ・２．５８（３１
１，ｓ）、　３．４４（２＋１．ｔ。

Ｊ＝４．９Ｈｚ）、　４．３６（２Ｈ，ｔ、Ｊ＝４．９
Ｈｚ）、　７．２１（２１１，ｄＪ＝８．７Ｈｚ）、　
８．０１（２１１，ｄ、Ｊ＝８．７Ｈｚ）、　８．６５
（ＩＩ（ｂｒ、ｓ）、　９．１６（１！（、ｂｒ、５）
（８）上記（７）の生成物５２５ｍｇをｌ０Ｉｄの水に
熔かし、これに５％炭酸水素ナトリウム水溶液をｐＨ９
になるまで加えた。４６０■のフルオレセインイソチオ
シアネートのアセトン溶液を加え、反応混合物を２時間
撹拌した。酢酸を加えｐＨ４，５として反応を停止させ
、析出した固形物を濾取し、水、アセトン、メタノール
、エーテルで洗い４５０■の３．７−シヒドロー６−　
（４−（２（Ｎ’　−（５−フルオレセイニル）チオウ
レイド）エトキン）フェニル）−２−メチルイミダゾ（
１，２−ａ〕ピラジン−３−オン（化合物１）を黄色結
晶として得た。

融　点：　　２２６−２２８°Ｃ（分解）Ｉ　Ｒ（ＫＢ
ｒ）　　：　　３７００−２０００．　１６０２．　１
５Ｂ０．　１５０５゜１４６１　１２４５．１１？５，
１１０６，８３５　■−Ｍａｓｓ（ＳＩＭＳ）　　：Ｉ
Ｉｌ／ｚ　６７４　（旧Ｈ）Ｕ■：　λ、、、＝２８４
．　３５５．　４５２　ｎｍ　　（ｉｎ　ＭｅＯＨ）λ
、−１ｌ＝２５３．　２６５．　４４０　　ｒ＋ｍ　　
（ｉｎ　　ＭｅＯＩＩ−１１ＣＩ）λ−ａｘ−２４０．
　２６５．　４９５　ｎｍ　　（ｉｎ　ＭｅＯＩＩ−Ｎ
ａＯＩＩ）ＮＭ　Ｒ（ＣＤＣｈ／ＣＤｘＯＤ＝１／１）
　　’　　δ＝２．５０（３ｆｌ、　ｓ）４．１４（２
Ｈ，ｔ、Ｊ＝５．６１１ｚ）、　　４．３２（２Ｈｔ、
Ｊ＝５．６Ｈｚ）。

６．５５（２Ｈ，ｄｄ、Ｊ−２，４，８，６）１ｚ）、
　　６．７０＜２Ｈ，ｄ。

Ｊ−２，５Ｈｚ）、　　６．７２（２Ｎ、ｄ、Ｊ＝８．
６Ｈｚ）、　　７．１０（２）ｔ、ｄ。

Ｊ−１０，９１１ｚ）、　　７．１５（ＩＨ，ｄ、Ｊ＝
８．３１１ｚ）、　　７．５８（２１１ｄ、Ｊ−１０，
９１（ｚ）、　　７．５９（１ｔＬｂｒ、ｓ）　　７．
７３（Ｉｆｆｂｒ、ｓ）、　７．８７（ＩＩＩ、ｄｄ、
Ｊ＝２．１．８．３Ｈｚ）　　８．１１１Ｂ、ｄ、Ｊ−
２，１Ｈｚ＞実施例２゜１．８０ｇの化合物１をメタノールに懸濁し、２２５ｍ
ｇの炭酸水素ナトリウムを９（ｌｄの水に溶かした溶液
を室温で加えた。室温下３０分間かき混ぜた後、溶液が
透明になるまで湯浴上で温め、減圧下濃縮乾固した。

残渣に２０ｄのメタノールとＩ　ＯＯｄのエーテルを加
え、析出するナトリウム塩を濾取しエーテルで洗い乾燥
して、１．７１　ｇの３，７−シヒドロー６−（４−（
２−（ＩＩ’−（５−フルオレセイニル）チオウレイド
）エトキシ）フェニル）＝２−メチルイミダゾ（１，２
−ａ）ピラジン−３−オンのナトリウム塩を得た。

融　点：　　２２８−２３２°Ｃ（分解）Ｉ　Ｒ（ＫＢ
ｒ＞　　：　　３７００−２０００．１６３０．１５８
２．１５１０１４７０、１３８２．１３２０．１２５０
．１２１０１１．０Ｂ、　　８５０　ｃｖａＭａｓｓ（ＳＩＭＳ）　　　：ａａ／ｚ　　６７４　　
（Ｍ＋８）、　　６９７（Ｍ＋ｔｌａ＋１）７１９（Ｍ
＋２Ｎａ）Ｕ■：λ、ａｘ−４５５，４８５ｎｍ　（ｉｎ　ｗａｔ
ｅｒ）λｓｅｘ”４９２　ｎｗ　（ｔｎ　ｗａｔｅｒ−
ＨＣＩ）λｍｍｇ−４４３ｎｍ　（ｉｎ　ｔ４ａｔｅｒ
−ＮａＯＨ）Ｎ　Ｍ　Ｒ（ＣＤＣＩｉ／ＣＤ：＋０Ｄ＝
１／１）　　：δ＝２．５０　（３Ｈ、ｓ）　。

４．１３（２８，ｔ、Ｊ−５，２Ｈｚ）、　４．１３（
２Ｎ、ｔ、Ｊ＝５．２１１ｚ）４．３３（２Ｈ，ｔ、Ｊ
−５，２Ｈｚ）、　６．７８（２１−１，ｄｄ、Ｊ＝２
．２゜８．９１１ｚ）、　６．９３（２Ｈ，ｄ、Ｊ−２
，２Ｈｚ）、　７．０１（２Ｈ，ｄＪ＝８．９Ｈｚ）、
　７．１２（２Ｂ、ｄ、Ｊ＝８．８ｌ−１ｚ）、　７．
２０（＋８．ｄＪ＝８．３１（ｚ）、　７．６３（２Ｈ
，ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ）、　７．７０（ｌｔｌ。

ｂｒ、ｓ）、　７．９２（ＩＩＩ、ｂｒ、Ｓ）、　８．
００（１）１．ｄｄ、Ｊ＝２．０８．３Ｈｚ）、　８．
３４（１）１．’ｄ、Ｊ＝２．０Ｉ（ｚ）（作用）スペ　　ルの。

３ｄの０．０１Ｍ臭化セチルトリメチルアンモニウム１
０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐｉｆ７．０３を石英セルに入
れ、これに約１０μｇの本発明化合物１を加えて熔解し
、直ちに蛍光光度計で測定した。

測定結果を第１図に示す。

（発明の効果）第１図の蛍光スペクトルから明らかなように、本発明化
合物１は化学発光させることにより５３２ｎｍで蛍光の
極大が測定された。現在、化学発光分析用試薬として使
用されている２−メチル−６−フェニル−３，７−シヒ
ドロイミダゾ（１，２−ａ）ピラジン−３−オンノ発光
波長が３８０ｎｍであるのに比べて、本発明化合物１の
発光波長は約１５０ｎｍ長波長であり、本発明化合物を
用いれば可視領域に吸収あるいは蛍光を持つ生体内等の
成分の影響をほとんど受けることなく測定することがで
き非常に有利である。

本発明化合物は、ルシフェリン誘導体に蛍光剤を共有結
合し、発光エネルギーを蛍光剤の励起エネルギーとして
効率的に利用することにより、長波長域における発光に
よる検出を可能にした新規化合物であり、従来の化学発
光物質に比べて長波長の発光波長を有するので、例えば
多くの妨害物質を含む生体試料中の活性酸素定量や、こ
れらを生成する系又は生成に関与する酵素系との組合せ
により、多種の生体成分の発光分析用試薬としして非常
に有用性が高い。

【図面の簡単な説明】

第１図は、本発明化合物ｌを化学発光させて得られた蛍
光スペクトルである。００波長（ｎ、ｍ）

Claims

【特許請求の範囲】

（１）一般式（Ｉ）： ▲数式、化学式、表等があります▼　（Ｉ）〔式中、Ｘは水素、アミノ基の保護基、Ｒ−、Ｒ−ＣＯ
−、Ｒ−ＳＯ＿２−、Ｒ−ＮＨＣＯ−又はＲ−ＮＨＣＳ
−を表し、Ｒは蛍光剤を表し、ｎは１乃至４の整数を表
す。〕で表される化合物及びその塩。