JPH03135998A - ムラミルジペプチド誘導体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ この発明は、式（＋） ［式中、アステリスク＊を付した炭素原子（以後、簡略
的に「Ｃ＊」と称ず）は、ＲまたはＳ立体配置を有する
Ｊ また本発明化合物は、Ｌ−トレオニル−ＭＤＰ−ＧＤＰ
およびＬ−アロトレオニル−ＭＤＰ−ＧＤＰとも呼ばれ
得る。

さらに、この発明は、式（■） ［式中、Ｃ＊は前記の意味であり、Ｒ１−Ｒ４は、独立
してヒドロキシ−保護基である］ の対応する化合物の脱保護を含む、式（１）で示される
化合物の製造方法を含む。

この発明の方法は、ヒドロキシ保護基脱離に関する常法
により行なわれ得る。出発物質は、α−またはβ−グリ
コシＹアノマーまたはその混合物であり得る。脱保護は
１つまたは幾つかの反応段階により行なわれ得る。式（
１）で示される化合物で示される３−０−［Ｎ−アセチ
ルムラミル−Ｄ−イソグルタミニル］−１，２−ジー０
−バルミトイル−５ｎ−グリセリン誘導体の形態に関す
るムのである。以後、この誘導体を簡略的に「本発明化
合物」と称す。

［従来の技術および発明の構成］ Ｃ＊がＲ立体配置を有する場合、対応するアミノ酸残基
はＬ−）レオニルである。Ｓ立体配置を有する場合、そ
れはＬ−アロトレオニルである。

本発明化合物は、Ｃ＊がＲ立体配置を有する場合が好ま
しい。上式から明らかなように、この化合物は２種のア
ノマー形態を有する。

似た構造および関連活性を有する化合物は、例えばＡＮ
ＶＡＲＥＰ１６５１２３により公知である。その中の４
頁に記載された式は、本発明化合物を包含している。し
かしながら、本発明化合物については、上記文献におい
て具体的な開示も示唆も為されていない。本発明化合物
は、上記文献に記載された化合物よりも非常に有益な特
性を有する。

は、通常間アノマー形態の混合物として得られる。

所望ならば、これらは慣用的方法により分離され得る。

この方法は、例えば溶媒として酢酸を用いて、例えば、
好ましくはパラジウム炭素触媒中水素により還元的に行
なわれ得る。水素化を被りやすい任意の慣用的ヒドロキ
シ保護基、例えばベンジルオキシカルボニルまたはベン
ジルが使用され得る。Ｒ１およびＲ２はまた、−緒にな
って共通の保護基、例えばベンジリデンを形成し得る。

脱保護はまた、例えば酸性条件下で行なわれ得る。酸性
条件下での脱保護に好ましい保護基は、ｔ−ブトキシカ
ルボニル（ＢＯＣ）である。

出発物質はまた、慣用的方法、例えば下記反応式に従い
製造され得る。

式（ＩＩ）の化合物 上式中、Ｃ＊およびＲ８−Ｒ４は、前記の意味であり、 Ｒｏは、アミノ保護基であり、 Ｘは、活性化カルボン酸形態であり、 ＢＯＰは、ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス
−（ジメチルアミノ）ホスホニウム・ヘキサフルオロホ
スフェート基であり、 ＢＯＣは、ｔ−ブトキシカルボニルである。

Ｒｏの脱離は、好ましくは酸性条件下で行なわれる。Ｒ
ｏは、好ましくはベンジルオキシカルボニルである。Ｘ
は、好ましくは−ｏｃ（＝ｏ）−。

アルキル、例えば−〇〇（−０）ＯＣＨ＊ＣＨ（ＣＨｓ
）＊である。

以下、実施例によりこの発明を説明する。温度は全て摂
氏である。使用されている省略形は次の意味を有する。

ＢＯＣ＝ｔ−ブトキシカルボニル。

Ｂｚｌ＝ベンジル。

アロＴｈｒ＝Ｌ−アロトレオニル。

Ｔｈｒ＝Ｌ−）レオニル。

Ｚ　−Ｄ　−ｉＧ　１ｎ＝カルボベンズオキシ−Ｄ−イ
ソグルタミン。

Ｐｄ／Ｃ＝パラジウム炭素。

ｔＢＤＭＳ’＝ｔ−ブチルジメチルシリル。

［実施例］ 実施例！ ３−０−［Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−）レオニル−〇
−イソグルタミニル］−１．２−ジー〇−バルミトイル
−５ｎ−グリセリン。

（Ｃ＊はＲ立体配置を有する） １２０ｘｙの３−０−［菫−α−Ｏ−ベンジル−４，６
−０−ベンジリデン−Ｎ−アセチルムラミル−〇−ベン
ジルーし一トレオニルーＤ−イソグルタミニル］−１，
２−ジー０−バルミトイル−Ｓローグリセリンを、２０
１１１２の１００％酢酸に溶かし、あらかじめ水素化し
た触媒［；００％酢酸２０ｘｊ中、９０１９１０％Ｐｄ
／Ｃ，１５ｔｙ塩化パラジウム（ＰｄＣＬ）、水素によ
り４５分間水素化］と反応させる。混合物を水素気流下
で２時間位はんし、触媒をろ過し、溶液を濃縮し、トル
エンにより３回前発乾固する。溶離剤としてジクロロメ
タン／メタノール／ジイソプロピルエーテル（４：１：
１）を用いて、残留物をシリカゲル・クロマトグラフィ
ーにかける。生成物を、溶離剤としてジクロロメタン／
メタノール（１：１）を用いたセファデックスＬＨ−２
０によるクロマトグラフィーにかける。

溶液を濃縮乾固し、酢酸から凍結乾燥させる。標記化合
物（両アノマーの混合物）が得られる。

’Ｈ−ＮＭＲ：０．９０（ｔ、Ｊ＝７．６ｌ−１）、１
．２２（ｄ、Ｊ＝７，３Ｈ）、１．２５（ｓ、４８Ｈ）
、１゜４１（ｄ、Ｊ＝７，３Ｈ）、１．６４（ａ＋、４
Ｈ）、２．００（−１３Ｈ）、２．２２（ｍ、ＩＨ）、
２゜３４（ｓ、４Ｈ）、　２．４８（ｍ、２Ｈ）、　３
．４０−３．９８（ｓ、６Ｈ）、４．１２−４．６０（
ｍ、８Ｈ）、５．２０（ｄ、Ｊ＝３．ＩＨ）、５．２　
６（濡、ＩＨ）。

出発物質は、次の要領で得られる。

ａ）７４０＊ｙのＺ　−Ｄ　−ｉＧ　Ｉｎを乾燥ジメチ
ルホルムアミド／テトラヒドロフラン（１：ｌ）から成
る混合物６ｍＱに溶かし、暗所で１．４６９のペンゾト
リアゾール−１−イルオキシトリス−（ジメチルアミノ
）ホスホニウム・ヘキサフルオロホスフェートおよび３
６５μａのＮ−メチルモルホリンと反応させる。３０分
後、１．１４９の１．２−ジパルミトイル−５ｎ−グリ
セリンおよび２７０Ｒ９のイミダゾールを加え、反応混
合物をさらに暗所で４日間撹はんする。溶媒混合物を濃
縮後、残留物を、溶離剤としてジクロロメタン／メタノ
ール（２０１）を用いたシリカゲル・クロマトグラフィ
ーにかける。３−０−［ベンジルオキシカルボニル−Ｄ
−イソグルタミニル］−１，２−ジー０−バルミトイル
−５ｎ−グリセリンが得られろ。

’Ｈ−ＮＭＲ：０．８９（ｔ、Ｊ＝７，６Ｈ）、１．２
８（ｓ、４８Ｈ）、１．６２（ｍ、４　Ｈ）、１．９５
（ｍ。

ＩＨ）、２．１５（＋、ｌｌ−１）、２．３４（ｍ、４
Ｈ）、２．４６（ｍ、２Ｈ）、４．２５（ｍ、５Ｈ）、
５．１２（ｓ、２Ｈ）、５．２７（ａ、ＩＨ）、７．３
５（ｓ、５１（）。

ｂ）上記ａ）項で得られた化合物４００ｗｇを２（ｌｙ
１２の１００％酢酸に溶かし、４０ａ＋ｇＰｄ／ＣＩ　
０％と反応させる。水素雰囲気下で撹はんを２時間続行
し、触媒をろ過し、残留物をトルエンで３回濃縮乾固す
る。６０μＱのＮ−メチルモルポリン（＝溶液Ａ）を加
えながら残留物をＢｙ（ｌのジクロロメタンに溶かす。

１６ＯＮｇのＢ　ＯＣ−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）　−０１−Ｉ
を、２３３μｅのＮ−メチルモルホリンおよび７３μＱ
のクロロ蟻酸イソブチルエステルと一緒に８ｊＩＩ２の
ジクロロメタンに溶かし、混合物を室温で４５分間撹は
んする（＝溶液Ｂ）。

溶液Ｂを＋４＠に冷却し、溶液へをそこに加える。混合
物を室温で１８時間撹はんし、溶媒を濃縮し、溶離剤と
してジクロロメタン／メタノール（１００：ｌ−１００
：３）を用いたシリカゲル・クロマトグラフィーにより
精製する。３−０−［Ｌブトキシカルボニル−Ｏ−ベン
ジル−１７−トレオニルー〇−イソグルタミニル］−１
，２−ジーＯ−バルミトイルー５ｎ−グリセリンが得ら
れる。

’Ｈ−ＮＭＲ：０．８８（ｔ、Ｊ＝７，６Ｈ）、１．２
６（ｓ、４８Ｈ）、１．４７（ｓ、９Ｈ）、１．６０（
ＩＩｌ。

４Ｈ）、１．９４（ｍ、ＩＨ）、２．１４−２゜５８（
ｍ、７Ｈ）、４．１０−４．３４（ｍ、６Ｈ）、４．４
５（ａ＋、２Ｈ）、４．６０（ｄ、２Ｈ）、　　５．１
５（ｍ、ＩＨ）、　　５．２　３（ｍ、　　ｌ　　Ｈ）
、５．４０（ｍ、ＩＨ）、６．３５（ＩＩｌ、　Ｉ　Ｈ
）、７゜１３（（目Ｉ）、７　、３０　（ｍ、　５　Ｌ
ｌ）。

Ｃ）上記ｂ）項で得られた化合物５８０３＋９を」−４
゜で２０ｍＱのトリフルオロ酢酸と反応させ、混合物を
３０分間撹はんする。溶液を濃縮し、トルエンにより２
回蒸発乾固する。残留物を１Ｏｙ１２のジクロロメタン
および６５μＱのＮ−メチルモルホリンと反応させる（
−溶液Ａ）。

２７８１９のα−０−ベンジル−４，６−ベンジリデン
−Ｎ−アセチルムラミン酸を、２５９μＱのＮ−メチル
モルホリンおよび８１μａのクロロ蟻酸イソブチルエス
テルと一緒にＩＯ＊（！のジクロロメタンに溶かし、混
合物を室温で３５分間撹はんする（＝溶液Ｂ）。

溶液Ａを＋４°で溶液Ｂに滴下し、混合物を室温で２日
間放置する。溶媒濃縮後、溶離剤としてジクロロメタン
／メタノール（１００：１−１０：ｌ）を用いて、残留
物をシリカゲル・クロマトグラフィーにかける。３−０
−［１−α−０−ベンジル−４，６−０−ベンジリデン
−Ｎ−アセチルムラミル−〇−ベンジルーＬ−トレオニ
ルーＤ−イソグルタミニル］−１，２−ジー０−バルミ
トイル−５ｎ−グリセリンが得られる。

’Ｈ−ＮＭＲ：０．８８（ｔ、Ｊ＝７．６８）、１．２
２（ｄ、Ｊ＝７，３Ｉ−１）、１．３７（ｄ、、Ｉ＝７
，３１１）、　１　．６　０（ｍ、４　　Ｈ）、　　１
．９８（ｓ、３ｔｌ）、２．０　２（ｍ、　　Ｉ　　Ｈ
）、　　２．３　０（ｍ、４　　Ｈ）、　　２　。

４４（ｍ、４　　夏（）、　３．６６−３．９４（ｍ、
４Ｈ）、４．０６−４．４６（ａ、１０Ｈ）、４゜９０
（ｄ、Ｊ＝４．ｌＨ）、５．２５（＋ｎ、ＩＨ）、５．
６０（ｓ、　Ｉ　Ｈ）、６．７８（ｄ、ＩＨ）、７゜１
０（ｄ、ＩＨ）、７．４０（ａ、ｌ０Ｈ）、７゜６０（
ｄ、ＩＨ）。

実施例２ ３−０−［Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−アロトレオニル
ー〇−イソグルタミニル］−１，２−ジ−Ｏ−バルミト
イル−５ｎ−グリセリン。

（ＣｏはＳ立体配置を有する） 標記化合物は、対応するし一アロトレオニル化合物から
出発して実施例ｉと似た方法で得られる。

’Ｈ−ＮＭＲ：０．８８（ｔ、Ｊニア、６Ｈ）、１．２
５（ｓ、４８Ｈ）、１．４０（ｄ、Ｊ＝７，３Ｈ）、！
。

６４（ｍ、４Ｈ）、２．００（ｍ、３Ｈ）、２．２４（
＋ｅ、ＩＨ）、２．３５（ｍ、４Ｈ）、２゜４８（ｍ、
　２　Ｈ）、３．４０−３．９８（Ｉｌ、６ｌ−１）、
４．１０−４．６０（層、８Ｈ）、５．２３（ｄ。

Ｊ＝３．ＩＨ）、５．２６（ｍ、ＩＨ）。

出発物質として使用されるし一アロトレオニル化合物は
、次の要領で得られる。

ａ）３−０−［ベンジルオキシカルボニル−Ｄ−イソグ
ルタミニル］−１，２−ジー０−バルミトイル−５ｎ−
グリセリンは、実施例１ａ）段階記載の方法と同様にし
て製造される。

ｂ）３−０−［ベンジルオキシカルボニル−〇−１−ブ
ヂルジメヂルシリルーし一アロトレオニルー〇−イソグ
ルタミニル］−１，２−ジー０−バルミトイル−５ｎ−
グリセリンは、ＢＯＣ−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）−ＯＨの代わ
りにＢｚｌ−アｏＴｈｒ（ｔＢＤＭＳ）−ＯＨを用いる
ことにより、実施例１ｂ）段階記載の方法と同様にして
製造される。

’Ｈ−ＮＭＲ：０．０２（ｓ、３Ｈ）、０，０４（ｓ、
３）［）、　　０．９３（ｓ、１　５Ｈ）、　　１．１
６（ｄ、Ｊ＝７．３Ｈ）、１．２５（ａ＋、４８Ｈ）、
１．６７（＋＋＋、４Ｈ）、１．９０（ｍ、ＩＨ）、２
．０７（ｍ。

ＩＨ）、２．２８（＋ｅ、４Ｈ）、２．４２（ｍ、２Ｈ
）、４．０３−４．４０（ｓ、７Ｈ）、５．０８（ｓ、
２Ｈ）、　５．１３（諷、Ｉ　Ｈ）、　７．３０（ｍ、
５Ｈ）、７．４６（ｄ、ＩＨ）。

ｃ）３−０−［１−ａ−０−ベンジル−４，６，＝０−
ベンジリデン−Ｎ−アセチルムラミル−〇−ｔ−ブチル
ジメチルシリル−し一アロトレオニルー〇−イソグルタ
ミニル］−１，２−ジー０−バルミトイル−５ｎ−グリ
セリンは、実施例１ｃ）段階と同様にして製造される。

’Ｈ−ＮＭＲ：０．０　８（ｓ、３Ｈ）、　　０．１０
（ｓ、３　　夏り、　　０．８８（ｓ、１５Ｈ）、　　
１．１７（ｄ、Ｊ＝７．３Ｈ）、１．２５（ｍ、４８Ｈ
）、１．３７（ｄ、Ｊ＝、３Ｈ）、１．６４（ｓ、４Ｈ
）、１゜９５（ｓ、ＩＨ）、１．９７（ｓ、３１（）、
２．１３　　（ｍ、　　Ｉ　　Ｈ）、　　２．３４（ｓ
、４Ｈ）、　　２．４６（ｓ＋、　２　Ｈ）、３．６５
（ｌ４Ｈ）、３．９８−４．４０（ｍ、ｌ０Ｈ）、４．
６６（ｄｄ、Ｊ＝１３．４０．ＩＨ）、５．１５（ｄ、
Ｊ＝３．ＩＨ）、５．２５（ｍ、ＩＨ）、５．６０（ｓ
、　ｌ　ｌ−１）、７．２５−７．５３（鵬、１０）１
）、　８．２３（ｄ、　ｌ　Ｉ−１）。

本発明化合物は、優れた薬理活性を有する。従って、医
薬としての使用に適している。

特に、それは、明白な免疫調節活性を有することが見出
された。この活性は、下記でさらに詳しく説明されてい
る様々な試験方法を用いて立証され得る。

使用されている略語は、次の意味を有する。

物質Ａ：実施例１の化合物形態。

物質Ｂ：実施例２の化合物形態。

ＡＢＣ：ハブテン−特異抗体−構築細胞。

ＢＰＯ−ＢＳＡ：ベンジルベニシロイル−牛血清アルブ
ミン。

ＢＰＯ−ＫＬＨ：ベンジルベニシロイル−キーホール・
リンペット・ヘモシアニン。

ＢＳＡ：牛血清アルブミン。

ＣＭＩ：細胞性免疫。

ＣｏｎＡ：コンカナバリンへ〇 Ｃ８Ｆ：コロニー刺激因子。

ＣＹ：　シクロホスファミド。

ＤＴＨ：　ｊｌ延型過敏症。

ＥＬＩＳ八：固相酵素免疫測定法。

ＦＩＡ：フロインド不完全アジュバント。

Ｈ［：　体液免疫。

ＪＰＮ−７：ガンマ・インターフェロン。

ＩＬ−１（ＩＬ−１β）：インターロイキンー１（イン
ターロイキン−１β）。

ＬＡＰ：　リンパ球活性化因子。

ＬＰＳ：　リポ多糖類。

ＭＤＰ：ムラミルジペプチド。

ＭＤＰ−ＧＤＰ：３−０−［Ｎ−アセチルムラミルーＬ
−アラニルーＤ−イソグルタミニル］−！。

２−ジー０−バルミトイル−５ｎ−グリセリン（ＡＮＶ
ＡＲＥＰ１６５１２３における実施例１の化合物）。

ＮＢＴ：ニトロ・ブルー・テトラゾリウム。

ＰＢＬ：末梢血白血球。

ＰＥＣ：腹膜しん出（ｅｘｃｓｕｄａｔｅ）細胞。

ＰＨＡ：フィトヘマグルチニン。

ＰＭＡ：ホルボール・ミリステート・アセテート。

ＰＭＮ：多核細胞。

ＴＮＰ：腫よう壊死因子。

Ａ）本発明化合物は、類似構造の化合物、例えばＭＤＰ
−ＧＤｒ’と比べて副作用がかなり少ないという特徴を
有することが見出された。従って、それは耐容性が優れ
ている。この特に有益な特性は、例えば下記の検定にお
いて証明され得る。

ｌ）うさぎにおける発熱性。

この試験方法は、文献、例えばアメリカ合衆国薬局方に
記載されているものである。得られた結果は次の通りで
ある（第１表）。

第１表 うさぎにおける発熱性 最高非発熱用量　　　最低発熱用量 ｖＩＬ（９ｋａ［ｒ’）　　　（ｖ／＆５ｆＨｉｄ”Ｉ
Ａ　　　　　１０００　　　　　　５０００Ｂ　　　　
　　　２０　　　　　　　　５０ＭＤＰ−ＧＤＰ　　　
　１０　　　　　　　　２０２）ＬＰＳとの毒性相乗作
用。

この検定では、スイス・マウスに、ＬＰＳおよびＭＤＰ
−ＧＤＰまたは物質Ａを下記に示す用量で静脈内投与す
る（第１表−２）。

第１表−２ ＬＰＳとの毒性相乗作用の欠如 対照　　　　　　　＋ＬＰ８２５μ９ １１ＤＰ−ＧＤＰ（３００μ９）　　　＋　ＬＰ８２５
μ２Ａ　　　　（３００μｆ）　　　＋　ＬＰ８２５μ
９全マウスに、２５μ９のニス・ ７１８ １７／１８ ３／１８ エンテリディス（Ｓ 、ｅｎｔｅｒｉｄｉａ）Ｌ　Ｐ　Ｓ　（静脈内）を単独
またはＭＤＰ−ＧＤＰまたは物質Ａと一緒に与えた。結
果は、６マウス／群を用いた３回の同一検定で得られた
ものである。

上記２検定において得られた結果（発熱性および毒性相
乗作用、第１表および第１表−２）は、ＭＤＰ−ＧＤＰ
との比較におけろ副作用の著しい改善を示す。

さらに別の試験方法は、例えば次の要領で行なわれる。

ａ）マウス骨髄培養、ウサギＰ　１３　Ｌ　（目−Ｎ−
γによる前活性化は行わＣ）およびヒトｐ　ｓ　Ｉ、に
おけるＴＮＦ−誘導。

この検定は、セイヤーズ等、「ジャーナル・オブ・イミ
ュノロジーＪ（Ｊ、　ｌｓｍｕｎｏｌ、）１３６（１９
８６）２９３５−２９４０において詳述されている。Ｌ
９２９細胞に対する溶菌活性からＴＮＦ活性を測定する
。結果を第２表に要約する。これらの結果は、本発明化
合物のＡおよびＢ両形態が、ＴＮＰの非常に弱い誘発剤
であるため、基準化合物よりも著しく低い内奏性潜在能
力を有することを示す。これらの結果はまた、フィニル
により分離された末梢ヒトまたはウサギ単核血液細胞を
用いることにより物質Ａに関して得られた結果と一致す
る（第３および４表）。

第２表 ネズミ骨髄ＴＮＦおよびマクロファー ジ培養におけるＴＮＦ誘導 性霞　　　　濃度　　ＴＮＦ（国際単位ＩＵ）（μ９／
酎）　　ＩＮＦ−γ無　ＩＮＦ−γ（１００１０）Ａ　
　　　　ｌ　　　　＜５ １Ｏ＜５ Ｂ　　　　　ｌ　　　　＜５ １０〈５ ＭＤＰ−ＧＤＰ　　　１　　　　＜　５ＩＯ＜５ ＬＰＳ　　　　　Ｏ，０１３７７ く５ ５ ９ ０ ０５ ７６ ２．２４５ ａｂｏｒｔ、ｅｑｕｉ）　０．００１ ７ ！ ９ 溶媒単独　　−＜５〈５ 第３表 ウサギ末梢単核血液細胞におけるＴＮＦ誘導（Ｉ　ＮＦ
−γによる前活性化は行わず）ＭＤＰ−ＧＤＰ ＬＰＳ ＭＤＰ−ＧＤＰ ＬＰＳ 溶媒単独　　−０００ 成長培地単独−０００ 溶媒単独　　−＜８　　＜８　　１４　２０培地単独　
　−＜８　　＜８　　２７　２６第４表 末梢ひと単核血液細胞におけるＴＮＦ’誘導’ｌ’　Ｎ
　Ｆ　（ｐｙ／　１１り） 物質　　　濃度　　第１実験　　第２実験ｂ）ＩＬ−１
の誘導： ゲリー等、「ジャーナル・オブ・エクスペリメンタル・
メディシンＪＣＪ、　Ｅｘｐ、　Ｍｅｄ、）、１３６（
ｆ９７２）１２８−１４２頁およびオッペンハイム等、
［セルラー・イミュノロジーＪ（Ｃｅｌｌｕｌａｒ　Ｉ
ｍｍｕｎｏｌ、）５０（１９８０）７１−８１頁の方法
に従い、ＩＬ−１βまたはＬＡＦの活性を検定した。結
果（第５表）は、溶媒単独と比べた場合、５０ｔｔ９／
ＩｔＱの最高濃度でのみ増殖が顕著に増加していること
を示す。

物質 ＭＤＩ’−ＧＤＰ ＬＰＳ 第５表 ネズミ誘導腹膜マクロファージにおけ るＬＡＦ活性（ＩＬ−１β）の誘発 濃度　　　　　　　活性（ＣＰＳ） （μ９／酎）希釈率ｌ：４　　　希釈率１：８１　　　
　４４６　　　　　３６１ １０　　　１０１４　　　　１２６７ ５０　　　２３３８　　　　２７０１ １　　　　６９１　　　　　３９１ １０　　　１２２０　　　　　３８０ ５０　　　４．１９１　　　　１１０６１０　　　５８
０９　　　　３０９６ エキ　　　　１ 成長培地単独− 上清単独 溶媒単独　　１０％ ３２９　　　　　　３２６ ２７ ３７４　　　　　　５１３ １５４６　　　　　１６４５ Ｃ）腫よう細１１１（Ｐ　Ｑ　ｌ　ｆ）にλ・１するマ
クロファージ毒性（マウスＰ！毫Ｃ）の誘導： マウスに対し、１５ｍ＋２の２．９％チオグリコレート
・ブイヨン（メルクーダルムスタブト、西ドイツ）の腹
腔的投与により何処理を行う。４日後、マクロファージ
を腹腔内へしん出させ、洗浄により採取する。これらの
誘導され、付着したマウス・マクロファージを腫よう細
胞、ＬＰＳまたは免疫刺激物質と共培養すると、それら
はマクロファージを活性化し得、腫よう細胞の溶菌また
は成長阻害が行なわれる。さらに、ＩＦＮ−γを加える
と、この活性化は促進され得る。培捉の２４時間後に生
存している細胞の数を、［３Ｈ］−チミジン取り込みの
測定により測定する。陰性対照およびＬＰＳ陽性対照と
比較すると、所定濃度の試験物質に対する溶菌または細
胞毒性活性の尺度が％で得られる（第６表）。

第６表 腫よう細胞に対するマクロファージ細 胞毒性の誘導。

Ａ　　　　　　　１ ０ ＭＤＰ−ＧＤＰ　　　１ ０ ＬＰＳ　　　　　　Ｏ，０１ ｄ）２４時間インキュベージジン後のマウスＰＥＣにお
けるＬＡＦ活性の誘導（胸腺細胞検定、ＰＨＡＩ：５０
による共刺激）： この検定（「ジャーナル・オブ・エクスペリメンタル・
メディシン（Ｊ、　Ｅｘｔ）、　Ｍｅｄ、）　１３６　
ｒ　１９７２１１２８−１５５）では、物質ＡおよびＢ
は、ＭＤＰ−ＧＤＰの場合と似た活性プロフィールを呈
する。

ｅ）シクロホスファミドまたはＸ線照射により前処理さ
れたネズミを用いて、本発明化合物が有することが見出
された腫よう治療における非常に重要なさらに別の活性
は、骨髄におけろ成熟リンパ球への骨髄芽球の増殖およ
び分化の用量依存刺激性である。

ｆ）シクロホスファミドにより処理されたマウスからの
骨髄細胞の増殖性応答： ＭＤＰ−ＧＤＰまたは物質Ａによる処理の１日後、マウ
スに５ｍｙのシクロホスファミドを腹腔内投与した。シ
クロホスファミド処理の４１−１１１に細胞を採取し、
Ｃ５Ｆ−１を含むｉ、９２９細胞（ｒｌ、Ｊ）［スタン
レーおよびギルバート、「ジャーナル・オブ、イミュノ
ロジカル・メソッズＪ（ｊ、　ｌａ＋ｍｕｎｏｌ。

Ｍｅｔｈｏｄｓ）４２（１９８１）２５３］、またはシ
エリダンおよびメットカーフにより［ジャーナル・オブ
・セル・フィジオロジーＪ（Ｊ、　Ｃｅ１ｌ　Ｐｈｙｓ
ｉｏｌｏｇｙ）８１（＋　９７３）Ｉ　１貫に記載され
たＬＰＳ　　処理マウスの肺（「肺ＪＧＭ−ＣＳＩ”）
から得られた様々な希釈率の条件培地の存在下でインキ
エベーシジンした。対照と比較した３Ｈ−チミジン取り
込みによりＣＳＦまたはＧＭ−ＣＳＦに対する細胞の応
答を測定する。結果は、ＭＤＰ−ＧＤＰとは反対に、物
質ＡはＣ８Ｆ処理に対する細胞の増殖性応答を回復させ
得ることを示す（図面参照）。

（図面の説明） θ８目にＣＹおよび一１日目にＭＤＰ−ＧＤｒ’（３０
０Ｈｇ）または物質Ａ（３００Ｈｇ）により処理したマ
ウスから得られた骨髄細胞の増殖性応答。

（：対照十〇ＳＦ含有し細胞、または対照＋肺ＧＭ−Ｃ
ＳＦ１ ◆：ＭＤ、Ｐ−ＧＤＰ＋ＣＳＦ含有し細胞、またはＭＤ
Ｐ−ＧＤＰ十肺ＧＭ−ＣＳＦ。

・：物質Ａ＋ＣＳＦ含有り細胞または、物質Ａ十肺ＧＭ
−Ｃ８Ｆ）。

ｇ）感染に対するマウスの非特異的抵抗力の増強マウス
の細菌感染モデルにおいて、感染に対するマウスの抵抗
力を増強する物質Ａの能力を評価した。スイス・マウス
をＭＤＰ−ＧＤＰまたは物質Ａにより静脈内処理する。

２４時間後、それらにクレブシェラ・ニューモニアエ（
Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ　ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の致死
的攻撃（８ｘ１０’微生物）を与える（第７表）。

第７表 マウスにおけるクレブシェラ感染に対 する防御力 無し　　　　　　　　　　　　　　　ｌ／３２ＭＤＰ−
ＧＤＰ　　　　３０　　　　　　　　　１４／２４（ｐ
＜０．０１）１００　　　　　　　　　１９／２４（ｐ
＜０．０１）Ａ　　　　　　　３０　　　　　　　　　
１０／２４（ｐ＜０．０１）１００　　　　　　　　　
１４／２４（ｐ＜０．０１）第一１８目、スイス・マウ
スに化合物を静脈内経路により投与する。８Ｘ１０’細
菌により同じ経路でそれらに攻撃を行う。攻撃後３週間
死亡を記録する。

第７表から明らかな通り、未処理対照と比較すると、Ｍ
ＤＰ−ＣＤＩ）および物質Ａは、感染に対するマウスの
非特異的抵抗性を劇的に増加させる。

ｈ）アジュバント活性： 抗原に対する細胞性および体液特異的応答を誘導および
増強する物質Ａの能力を評価した。対照および実験用ハ
ートレイ雄モルモット（体重３００ｇ）に対し、後足に
油中水エマルジョン０　、２　ｘＱ中１１９の卵アルブ
ミン（フロインド不完全アジュバント、ＦＩＡ）の合計
用量を投与した。実験群については、アジュバントを０
　、　ｌ　ｚｇの用量でエマルジョンに加えた。

それらの細胞性免疫（ＣＭＩ）を評価するために、２１
日自社動物に対し、食塩水中０　、　Ｉ　Ｏの卵アルブ
ミンの皮内注射による皮膚試験を行った。６．２４およ
び４８時間後皮膚反応をチエツクし、結果を４８時間後
における硬化の直径として表した。

それらの体液免疫（）（Ｉ）を評価するために、２４日
自社動物から心臓穿刺により採血した。標準条件下、Ｅ
Ｌ　ｒＳＡにより抗弁アルブミン抗体力価を測定した。

個々の力価および平均が与えられる。

第８表では、物質Ａは、ＭＤＰ−ＧＤＰよりもＣＭｌお
よびＨ！の両持異的応答を刺激することが示されている
。

第８表 体液および細胞性免疫応答に対するア ジュバント活性 対照　　　０　　　　　８０ＯＱ−２１ＱＧＯ−２１５
００−（６）　　　　　　３７０００−６５０００−９
５０００−（４１２５０） ＭＤＰ−ＧＤＰ　　　８−１４−１５−１７　　２４７
０００−２９５０００−６４１０００−（１３，５）　
　　　　３２５０００（３７７０００）Ａ　　　　　　
１５−１５−１８−２０−１０００００−１７２０００
−７１３００００−２０−２５　　　　　８５００００
−４７２０００−３３００００−（１８，５）　　　　
　（４５００００）１）結果は、４８時間後における硬
化の直径として表されている。個々の測定値および相加
平均値（括弧内）が与えられている。

２）標準条件下、ＥＬＩＳＡにより抗弁アルブミン抗体
力価を測定した。個々の力価および平均が与えられてい
る。

ｉ）ミトゲンに対するウサギ末梢血液リンパ球の応答に
対する影Ｉｌｌ： 物質Ａを１００μ９の用量でウサギに静脈内注射した。

この投与の前および３時間後に血液試料を集めた。Ｃｏ
ｎＡまたはＰＨＡとインキュベーションした単核細胞を
用いて、リンパ芽球変換検定を行った。３Ｈ−チミジン
取り込みの増加によりミトゲンの作用を測定し、１分当
たりのカウント数（ｃｐｓ）として表す。結果を第９表
に示す。

第９表から明らかな通り、未処理ウサギの細胞と比較し
て、物質Ａによるインビボ処理は、最適下限用量のミト
ゲンに対するリンパ球のインビトロ応答能力を著しく増
加させる。

ｊ）インビトロまたはインビボ処理後の血液多核細胞（
ＰＭＮ）の応答： 酸化応答およびカンジダ殺菌効力を古典的方法に従い評
価した。ヒトまたはモルモット血液から得られた精製Ｐ
ＭＮを、１時間以内におけるＰＭＡまたはカンジダ・ア
ルビカンス（Ｃ、ａｌｂｉｃａｒｕｉ）細胞に応じた酸
化バーストまたは１８時間のカンジダ・アルビカンス（
Ｃ、ａｌｂｉｃａｎｓ）の成長の測定前に物質Ａの存在
下で培養した。結果（第１０表）は、供給源（ヒトまた
はモルモット）とは無関係である、これらの却１胞に対
４°ろ物質への刺激作用を示す。

ａ月時間ブレインキュベーション。

ｂ）ＰＭＡまたはカンジダ・アルビカンス細胞を加えた
１時間後におけるＮ　１３　’Ｌ’縮小細胞のパーセン
テージとして表現。

Ｃ）酵母細胞における３Ｈ−グルコース取り込みの減少
により測定されたカンジダ・アルビカンス成長の阻害パ
ーセント。

ｋ）心臓穿刺による血液採取の３または１８時間前に皮
下経路（５００μｙ／＆ｙ）により物質Ａを与えられた
モルモットにおいてエクスビボ（生体外）検定を行った
。ＰＭＡまたは−カンジダ・アルビカンス細胞を加えた
後、精製血液ＰＭＮの応答をインビトロで直接測定した
。第１１表に示されている通り、１８時間前にモルモッ
トを前処理した場合、続いてＰＭＡまたはカンジダ・ア
ルビカンス細胞に暴露すると、ＰＭＮのさらに強い応答
が誘発されるが、細胞を集める３時１ｍ前に動物を前処
理した場合、効果は無かった。

第１１表 モルモットＰＭＨの応答性に対する物質Ａ（５００μｖ
／ｋｗ）による前処理の影響食塩水　　　５５．８　　
３３．３　　　１？、２　　２５．６物質Ａ　　　　６
１．１　　３５．２　　　１５　　　１７．２（３時間
前） 物質Ａ　　　　８４゜９　　６２．７　　　６０．１　
　８２．１（１８時間前） ａ）３０　：　１　（ＰＭＮ：酵母細胞）の割合でＰＭ
Ａまたはカンジダ・アルビカンス細胞を加えた１時間後
におけるビック等、「ジャーナル・オブ・レティキエロ
エンドシーリアル・ソサエティーＪ（Ｊ、　Ｒｅｔｉｃ
ｕｌｏｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　Ｓｏｃ、）３０　［１
９８１］５８１によるＮＢＴ縮小細胞のパーセンテージ
として表現。

ｂ）酵母細胞における３Ｈ−グルコース取り込みの減少
により測定されたカンジダ・アルビカンス成長の阻害パ
ーセント。

すなわち、上記Ａ）項記載の試験結果に基づくと、本発
明化合物は全て、構造が類似した化合物、例えばＭＤＰ
−ＧＤＰよりも非常に有益な薬理活性を有するという結
論に達し得る。

本発明化合物は、免疫応答および非特異的免疫の全身的
増強を特徴とする特異的抗微生物抵抗の調節剤としての
使用に適している。

すなわち、本発明化合物は、例えば免疫応答が低下した
状態、特に細胞性および体液免疫応答が低下した状態お
よび遅延型の過剰刺激反応性が低下した状態の治療的処
置または支持療法（すなわち、さらに別の特異的または
支持形態の療法と一緒に行う）、並びに一般的に免疫応
答の調節が望まれる状態の処置において適応性を示す。

本発明化合物は、特に、特発性免疫不全、または老人病
患者または重症の火傷らしくは全身性化した感染症の患
者において見出されるタイプの免疫不全に関連した病的
状懇の治療または支持的処置における使用に適応性を示
す。

さらに本発明化合物は、ウィルス感染、例えば散在性ヘ
ルペスおよび散在性水痘感染症およびホジキン病および
さらｊこ別のＡ！Ｉｋ性旺ようの治療的または支持的処
置における使用に適応性を示す。

上記適応症の場合、使用される用量は、勿論処置される
病気の性質および重症度、投与方法および使用される化
合物形感により異なる。大型対象の場合、適当な非経口
用量は約０　、１１９〜約７０Ｊ＋９であり、例えば支
持療法においてアジュバント効果の達成用に１回または
毎日投与される。反復投与は、好都合には１日２〜４回
または持効性形態で実施され得る。指示単位用量形部は
、反復投与の状況では約０．０２５ｍ９〜約３５ｉｙお
よびアジュバント処置用に１回投与が望まれる場合には
約７０Ｒ９以下の本発明化合物を含む。

Ｂ）さらに本発明化合物は、免疫調節活性を有すること
から、ワクチン中のアジュバントとしての使用に適して
いる。この使用方法の場合、支持１口用量として、約０
．１１９〜約５０ｚｇ、好ましくは約０　、５　ｘｇ〜
約１０１９、特に約７ｍｇの用量を接種当日に投与する
。好都合には、同用量での２次投与をその２〜４週間後
に行う。

Ｃ）さらに、本発明化合物は、マウスにおけるハプテン
特異的免疫グロブリン・アイソタイプ応答を調節ずろご
とが見出された。この活性は、ハプテン特異的抗体形成
細胞（ＡＢＣ）の量を測定する検定により立証される。

免疫化の概要は、次の通りである。Ｂａ１ｂ／ｃマウス
に対し、０．２１および４２日目に０　、２　ｍ（ｌの
水酸化アルミニウム・ゲル中１０μｙＢＰｏ−ＫＬ、Ｈ
の腹腔内注射を行う。次いで、マウスを２群に分ける。

第１群には、４４および４５日目に１０μｇ／マウスの
本発明化合物（物質Ａ）を経口投与し、第２（対照）群
には食塩水を与える。４６．６１および７０日目に動物
を殺し、それらのバイエル・プラーク、腸間膜リンパ節
およびひ臓からリンパ球を抽出する。６マウスから得ら
れた細胞をプールし、ＢＰＯ−ＢＳＡにより層をなした
プラークを用いたエリスポット検定においてエクスビボ
ＡＢＣの数を測定する。

得られた結果を第１２表に示す。

ＰＰ＝バイエル・プラーク、ＭＬ＝腸間膜リンパ節、Ｓ
Ｐ＝ひ臓、Ｃｏ＝対照（生理食塩水）。

上記結果は、指示された方法によるマウスの免疫後、全
ての種類の１ｇアイソタイプのＡｔ（Ｃが腸間膜リンパ
節およびひ臓から見出され得るごとを示す。ＩｇＭ−お
上びｒｇＧ−形成細胞の数は、腸間膜リンパ節よりムひ
臓細胞の方が明らかに多かったが、ＩｇＡおよびＩｇＥ
ＡＢＣについては、両器官とも概ね似た数が見出された
。上記概要に従った本発明化合物（物質Ａ）による処理
の結果、両器官ではＩｇＧ　ＡＢＣ含ａｍは増加したが
、ＩｇＧ−形成ＡＢＣの数は減少していた。この効果は
一時的なものであると思われる。

４６日目には、ｆｇＥ−形成ＡＢＣは２つの器官からは
一切見出され得ず、５１日目には含ａｒａはまだ非常に
低かった。７０日目には、対照との差異は測定され得な
かった。

これは、アレルギー疾患における本発明化合物の調節機
能の指標である。

４４日目に試験物質を投与し、４５．４６．５８および
７０日目に動物を殺すことにより、上記検定を上記と同
じ要領で反復ずろと、次の結果が得られる（第１３表）
。

マウス牌臓におけるＩｇＥ形成ＡＢＣの減少上記活性を
考慮すると、さらに本発明化合物は、Ｉ型アレルギーお
よびアトピー性皮膚炎の処置を目的とするＩｇＧ形成抑
制剤としての使用に適応性を示４゛。

これらの適応症の場合、指示−８非経口用量は約３μｙ
／に９〜約２０μ９／に９であり、好都合には、−日２
〜４回または好ましくは２日もしくはそれ以上の間隔で
持効性形態として投与される。単位用量形態は、約２１
９〜約１５ｘｇを含有する。総−日用量は、約４Ｈ〜約
６０Ｒ９である。

Ｄ）さらに、物質ＡおよびＬ　Ｉ）　Ｓの同時投与によ
るマウスにおけるＣ５Ｆ−誘発検定では、ＭＤＩ’−Ｇ
ｒ）ｒ’とは対照的に、本発明化合物は、Ｉ、　Ｉ）Ｓ
とのある程度の相乗的活性を発揮することが見出された
。

上記適応症には、実施例１の化合物形態、すなわち物質
Ａ１すなわち式（１）（ただし、Ｃ＊はＲ立体配置を有
する）で示される化合物、すなわち３−０−　［Ｎ−ア
セチルムラミル−し−トレオニルーＤ−イソグルタミニ
ル］−１，２−ジー０−バルミトイル−５ｎ−グリセリ
ンか好ましい。

少なくとも１種の医薬的に許容し得る担体または希釈剤
と一緒に本発明化合物を含有する医薬組成物もまた、こ
の発明の一部である。それらは、慣用的方法、例えば前
述の本発明化合物、すなわち式（り（ただし、Ｃ＊はＲ
またはＳ立体配置を有する）で示されろ化合物を医薬的
に許容し得ろ担体または希釈剤と混合することを含む方
法に従って製造され得る。

適応性を示すさらに別の医薬組成物は、リポソームおよ
び例えばリソホスファチジルコリン、ｎ−オクチルグル
コースまたはデオキシコーレートとの混合ミセル形態の
ものである。それらの組成物は、慣用的方法で製造され
得、例えば注射可能溶液形態であり得る。それらもまた
この発明の一部である。

さらにこの発明は、処置を必要とする対象に本発明化合
物の治療有効量を投与することを含む、上記状態の治療
的または支持的処置方法を包含する。

さらにこの発明は、上記適応症において使用される、特
に免疫調節剤、抗ウィルス剤および抗アレルギー剤とし
て使用される本発明化合物を包含する。

【図面の簡単な説明】

第１図および第２図は、それぞれ、ｒＬＪ細胞条件培地
またはＬＰＳ処理マウスの「肺」条件培地の存在下にお
ける、ＣＹおよびＭＤｒ’−ＧＤＰまたは物質Ａ処理マ
ウス骨髄細胞の増殖性応答を示すグラフである。

Claims (10)

【特許請求の範囲】
1. （１）式（ I ） ［式中、アステリスク＊を付した炭素原子は、Ｒまたは
   Ｓ立体配置を有する］ で示される化合物の種々の形態。
2. （２）アステリスク＊を付した炭素原子がＲ立体配置を
   有するものである、請求項１記載の化合物。
3. （３）アステリスク＊を付した炭素原子がＳ立体配置を
   有するものである、請求項１記載の化合物。
4. （４）式（II） ▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中、アステリスク＊を付した炭素原子は請求項１記
   載の意味であり、Ｒ＿１〜Ｒ＿４は、独立してヒドロキ
   シ−保護基である］ の対応する化合物を脱保護することを含む、請求項１記
   載の化合物の製造方法。
5. （５）水素化による脱保護を含む、請求項４記載の方法
   。
6. （６）式（II）において、Ｒ＿１およびＲ＿２が一緒に
   なってベンジリデンを形成し、Ｒ＿３がベンジルであり
   、Ｒ＿４がベンジルまたはｔ−ブチルジメチルシリルで
   ある、請求項４記載の方法。
7. （７）少なくとも１種の医薬的に許容し得る担体または
   希釈剤と一緒に請求項１〜３のいずれか１項記載の化合
   物を含有する医薬組成物。
8. （８）リボソーム形態である、請求項７記載の医薬組成
   物。
9. （９）混合ミセル形態である、請求項７記載の医薬組成
   物。
10. （１０）請求項１記載の化合物がワクチン中アジュバン
    ト形態である、請求項７記載の医薬組成物。