JPH03120296A - 放射性元素標識化抗凝固ペプチド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は放射性元素標識化可能な所規な抗凝固ペプチド
に関し、そして診断キットとして、体内で又は体の適当
な試料内でトロンビンを検出するための、貴重な試薬に
関する。

抗凝固剤は、薬理学的処１里、例えは急性の深部静脈血
栓、肺塞栓症、急性の四肢の動脈塞栓、心筋梗塞、及び
１云染性静脈内凝固の治療に有用である。抗凝固剤の予
防的な投与は、リウマチ性又は動脈硬１ヒ性の心臓病を
有する患者の寒栓症の再発の防止及び手術によるある種
の血栓塞捏合併症の防止をすると信じられている。抗凝
固剤の投与は又冠状動脈及び脳血管病の治療に有用であ
ることが示されている。静脈血栓、特に心臓筋肉及び脳
に供給している動脈中のものは死亡の主要な原因である
。

Ｃｉｆ来の技術及び発明が解決しようとする課題〕ヒル
ディン（ｌｔｒｕｄｉｎ）は、蛭の唾液腺から単離され
た６５残基のポリペプチドである。それはト口ンビンに
特異的な阻害剤であるから抗凝固剤として使用できる。

これは非常に強力であるが蛭抽出物から単離されたヒル
ディンの臨床的な使用は、限られた量、高価であること
、及びこの寸法のあらゆる外来の蛋白質の投与に続いて
一般的におきるアレルギー反応のために出来そうもない
ことである。

最初に本発明者は、抗凝固活性に対し少なくとも部分的
に寄与しているヒルディンの特異的な領域を発見した。

この領域（ヒルディンのアミノ酸残基５．５〜６５）は
化学的に合成され、トロンビンの！Ａ！讃場所に結合す
るように見えるが、その認識場所は酵素開裂場所とは空
間的に分離されている。

この合成ペプチドの結合は、フィブリンの生産及び凝血
形成に必要であるトロンビンを認識する場所に、ブイ１
リノーゲンが結合することを競走的に防止するので、抗
凝固剤として医薬としての価値を有Ｔる可能性がある。

（ｆｆｉｌｌを解決する手段〕 本発明者は、このペプチドの在る種のヨードチロシン及
び放射性同位元素で標識されたチロシン誘導体を製造し
た０本発明は結合場所の活性を存在させながらヒルディ
ンペプチドを標識する方法を提供する０本発明のヨート
チａシンペ１チド及び放射性同位元素誘導体はまた、抗
凝固剤としてのそれらの非経口的な性質を保持し、ｉ差
って科学的に興味があり、治療上有意義な補助物を提供
する。特定していえば、水素及びヨウ素の放射性の同１
ａ元素をペプチド中にいれることが出来、そしてペプチ
ドの生物活性を保持できる能力は抗凝固剤の製薬試験及
び用途に於ける新規で有用な試薬を提供する。そのよう
な試薬は、動物及び生１ヒ学実験に於いてｍ便であると
予測される。即ち、ラジオイミュノアッセイ、薬物アゴ
ニスト及びアンタゴニ′スト（拮抗剤）のスクリーニン
グ、薬理学的速度論及び生物分布試験及び診断イメージ
化に！ｌ要であることが予測される。更にそのヨードチ
ロシン又はその放射性同位元素の存在は、薬物のｆｆｆ
Ｍ及び抗トロンビン剤の試験の為にＶＩＪ値があるもの
となりうるものであり、そのような誘導体はそれら自体
強められた効力及びより長い作用期間を有する。

抗凝固剤として、式 ％式％ Ｃ式中 Ｘは水素、ｌ−１σ個の炭素原子のｌ又は２１［ｉｌの
アルキル基、２〜＋０１１１の炭素原子の１又は２１１
ａｌのアシル基、カルボベンジロキシ又はｔ・ブトキシ
カルボニルであり、 Ａ１は、ヒルディンの配列、又はその天然の変更物若し
くはその一部、結合、又は任意のアミノ酸の１〜１１の
残基を含有しているペプチドであり、Ａ２は、１〜Ｔｙ
ｒ、［’１ｌｌ−Ｔｙｒ、　［＋２’Ｉ］−Ｔｙｒ、［
１３Ｈ］−Ｔｙ＋・の、又はＡ、が放射性元素［識化ア
ミノ酸を含有するときはし一芳香躾アミノ酸の、０〜５
個の残基てあり。

Ａ３は、Ｇｌｕ、　Ａｓｐ又はＡｌａであり、Ａ４は、
任意のアミノ酸であり、 Ａｌ＞は、　ｌｌｅ、　ｖａｔ、Ｌｅｕ、Ｎｌｅ、　Ａ
ｌａ、　Ｄ−Ｌｅｕ又はＰｈｅであり、 八〇は、Ｐｒｏ、　）ｌｙｐ、　Ａｚｔ、Ｐｉｐ、　ｒ
ｌｈＰｒｏ、チアゾリジン−４−カルホキシレー）　、
Ｓａｒ％ＮＭｅＰｇｌ、又はＤ−Ａｌａであり。

Ａ７は、任意のアミノ酸であり、 Ａ、は、任意のアミノ酸であり、 Ａ９は、Ｔｙｒ、１Ｔｙｒ、［１３Ｈ］−Ｔｙｒ、　　
［１２５ｌ］−Ｔｙｒ、［３Ｈ］−Ｔｙｒ、Ｎｅｔ％Ｔ
ｒｐ、　Ｐｈｅ、　Ｌｅｕ、　Ｎｌｅ、　ｌｌｅ、　Ｖ
ａｌ、Ｃｈａ、旧ｓ、　Ａｌａ及びＰｒｏから選ばれる
親油性アミノ酸であるか、又はこれらのアミノ酸又は任
意の親油性アミノの少なくとも一つを含有しているジペ
プチドであり、 ＡＩＯは、ヒルディンの配列又（ｆその天然の変更物若
しくはその一部、結合、又は任意のアミノ酸の１〜目の
残基を含有しているペプチドであり、ＹはＯＨ，（Ｃ＋
〜Ｃ１，）アルコキシ、アミノ、モノ又はジ（ＣＳ−Ｃ
４）アルキル置換アミノ酸である〕のペプチド誘導体は
、診断イメージ化、診断検出、及び定量に、キットの形
で、抗凝固剤として有用であり、そして少なくとも一つ
の置換基が一放射性同位元素を含有している。

次の一般的な（１）アミノ酸及びそれらの３文字コード
、（２）　！１ｇ飾された及び晋過てないアミノ酸、（
３）末端アミノ酸及びカルボキシ置換基がこの明！４書
を通じて使用される。

（１）アミノ酸と３文字コード Ｌ−アミノ酸　　　　　［）−アミノ酸Ａｌａ−アラニ
ン　　　　Ｄ−Ａｌａ−Ｄ−アラニンＡｒｇ−フルギニ
ン　　　トＡｒｇ−Ｄ−フルギニンＡｓローアスパラギ
ン　　１ｌ−Ａｓｎ−１１〜アスパラギンＡ　ｓ　ｐ−
アスパラギン酸　ＩＩ−、Ａｓｐ　−Ｄ−アスパラギン
酸Ｃき・Ｓ−システィン　　　［１〜Ｃｙｓ−Ｄ−シス
ティンＧ　ｌ　ｙ−グリシン Ｇｌｕ−グルタミン酸　　Ｄ−Ｇｌｕ−Ｄ−グルタミン
酸＼’ａｌ−バリン　　　　　［）−＼’ａｔ−Ｄ−バ
リンＧ１ｎ−グルタミン　　　Ｄ−Ｇｌｎ−Ｄ−グルタ
ミンＩｔ　ｉ　ｓ−ヒスチジン　　　ローＨｉｓ−Ｄ−
ヒスチジンｅ−イソロイシン　　Ｄ−１１ｅ−Ｄ−イソ
ロイシンＬｅｕ−ロイシン　　　　Ｄ−Ｌｅｕ−Ｄ−ロ
イシン］、ｙｓ−リジン　　　　　Ｄ−Ｌｙｓ−ローリ
ジンＰＩ＋ｅ−フェニルアラ　　Ｄ−Ｐｈｅ−Ｄ−フェ
ニルニン　　　　　　　　　アラニン Ｎｅｔ−メチオニン　　　Ｄ−Ｎｅｔ−Ｄ−メチオニン
１】「ｏ−プロリン　　　　ＩＩ−Ｐｒｏ−Ｄ−プロリ
ン５ｅｒ−セリン　　　　　Ｄ−５ｅｒ−Ｄ−セリンＴ
ｈｒ−スレオニン　　　［１〜Ｔｔ＋ｒ−Ｄ−スレオニ
ンＴｒｐ　−ｌ・リブトファン　ｒ；づｒｐ−Ｄ−トリ
プトファンＴｙｒ−チロシン　　　　Ｄ−Ｔｙｒ　−Ｄ
−チロシン（２）　ＩｌＮ飾された及び普通でないアミ
ノ酸へｂａ　　　−（ｔ−アミノ−１１〜醋酸、１１　
ｆ’、’　Ｉ　Ｆ’　ｌ＋　ｐ−パラクロロフェニルア
ラニン、Ｃｈ　ａ　　　−シクロへキシルアラニン、Ｃ
ｈｇ　　　−シクロへキシルクリジン、ｕｙｐ−ヒドロ
キシプロリン −Ｔｙｒ　−３−ヨードチロシン（３−１〜Ｔｙｒ）、
５−ヨードチロシン（５−ｌ−Ｔｙｒ）、３．５−ショ
ートチロシン（３，５−ジーＴｙｒ）、 ［３Ｈ］−Ｔｙｒ　−［３−３ｔ１］−チロシン（［３
−’ｔｌｌ−Ｔｙｒ）、［５−’Ｉ＋ＩＩチロジン（［
５−３Ｈコづｙｒ）、［３，５−ジ３Ｈ］−チロシン（
［３゜５−ジ３）１コゴｙｒ） ［１２＋）ｌ］−７ｙｒ　　［５−１２５１］ヨードチ
ロシン（［５−＋２５１］−Ｔｙｒ）、［３−１２５１
コヨードチロシン（（３−＋２６１コーＴｙｒ）、［：
３．５−シ１２ｖＳ１］−ショー　Ｆ　チｔ：ｌ　’、
ｉ　ン（［３，５−’／’　１２Ｊ］−Ｔｙ１゛）・ ［＋３Ｈ］−Ｔｙｒ・［５ｙ１３Ｈ］ヨードチロシン（
［５・１３ＨコーＴｙｒ）、［３−１３Ｈ］ヨードチロ
シン（［３−１３ＨコーＴｙｒ）、［：３．５・ジ１３
Ｈ］−ショートチロシン（［３，５−ジ１３ＨコーＴシ
′ｒ）・ ３．５−ジ１〜Ｔｙｒ−３，５−ショートチロシン、？
・ＭｅＧＩｕ−Ｄ−グルり、ミン酸γメチルエステル、
ＮＭｅＰｌ＋ｅ　−Ｎ−メチルフェニルアラニン、ＮＭ
ｅＰ２　ｌ　−Ｎ−メチルフェニルグリシン、Ｎｐａ−
β−（ナフチル）アラニン、 ＩＩ　Ｎ　０２　Ｐ　ｈ　ｅ−バラニトロフェニルアラ
ニン、ｐｃｌ’ｂｅ−パラクロロフェニルアラニン、Ｎ
１ｅ−ノルロイシン ０ｒｎ−オルニチン Ｐｉｐ−ビベコレート Ｐｂａ−ｒｌ−７ミノフエニル醋酸、 ｐｓｕｂＰｌ＋ｅ−バラａ　ＩＡフェニルアラニンｌ１
８１〜フェニルグリシン ５ａｒ−サルコシン（Ｎ−メチルグリシン）Ｓ　ｕ　ｂ
　Ｐ　ｈ　ｅ−オルソ、メタ、又はバラ、モノ−又はジ
ー置換フェニルアラニン、 Ｔｌｔａ−β−（２−チエニル）−アラニン、Ｔｌｑ−
テトラヒドロイソキノリン　３−カルボキシレート、 （３）アミノ酸カルボキシ末端酸置換基Ａｃ　　　　７
εチＩＬ Ａｚｔ　　−ア乞・・チジ°ンー２−カル広”ｖンし−
１〜（ｉ　ｎ　　−シナモイル Ｑ１１Ｃｉ＋ｌ　　　　３ｔ４４−グしｐロンｆモイｌ
しＧｌｔ−グルタリル Ｍａｌ−マレイル ５ｕｃ−サクシニル ０ａｃ−８−アミノオクタン酸、 ０ｃｔ−ｎ−オクチル、 ５ｕｃ−サクシニル、 Ｇｌｔ−グルタリル、 Ｔｆａ　−トリフルオロアセチル、 ＃　−Ｃ末端アミド。

次のものは既知のヒルディンの天然のアミノ酸配列変化
形の配列である。

ヒルディンのアミノ酸配列変化 ５ Ａｓｎ　　Ｌｅｕ　　Ｃｙｓ　　Ｌｅｕ　　Ｃｙｓ　　
Ｇｌｕ０ Ｇｌｙ　　Ｓｅｒ　　Ａｓｎ　　Ｖａｔ　　Ｃｙｓ（Ａ
ｌａ”　　Ｔｙｒ”　　１．ｅｕ／Ａｓｐ”　Ｇｌｕ”
）発明の定義ニ グリシンを例外として天然のアミノ酸は不斉炭素原子を
含有する。　ｌｉｔ！に特定的に示されていない限り、
本明細書で述べられる光学活性アミノ酸はＬ−立体配置
である。例えば、Ａ１又はＡ１０基の任意のアミノ酸は
〇−又はＬ−立体配置であり得る。慣例にしたがって本
明細書で記載されるペプチドの構造はアミノ末端が鎖の
左側、カルボキシ末端が鎖の右側であるように記載され
る。

アルキル基及びアルコキシ基のアルキル部分は直鎖、分
枝鎖、又は環状のアルキル基を含むものとし、例えば、
メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イ
ソブチル、第三ブチル、ペンチル、イソペンチル、第二
ペンチル、シクロペンチル、ヘキシル、イソヘキシル、
シクロヘキシル及びシクロペンチルメチル、ヘプチル、
オクチル（Ｏｃｔ）、訃アミノオクタン酸（１）ａｃ）
である。２〜ｌＯ個の炭素原子のアシル基は、直鎖、分
枝鎖、環状、飽和及び不飽和の、＆当たり１〜２個のカ
ルボニル基を有するアシル基を含むものとし、例えば、
アセチル（Ａｃ）、アゼチジン−２−カルボニル基−）
　（Ａｚｔ）、ベンゾイル、サクシニル、シナモイル（
Ｃｉｎ）、ＤｂＣｉｎ、マレイル（Ｈａ　Ｉ　）、及び
グルタリル（Ｇｌｔ）である、アルキル及びアシル置換
基の両方ともハロゲン置換基を含有するものを含むもの
とし、ハロゲン基はフルオロ、クロロ、１０モ又はヨー
ド基、例えばトリフルオロアセチル（Ｔｆａ）である。

「任意のアミノ酸ノという用語は本明細書ではアミノ置
換基を有する任意のカルボン酸を含むものとは意図せず
、ポリペプチド誘導体の技術の当業者に一般的に使用さ
れるものとして使用され、天然のアミノ酸並びにＩＩ！
！の「非蛋白」α−アミノ酸であって、天然のペプチド
の合成り似体を製造するときにペプチド化・学技術で一
般的に使用されるものである。天然のアミノ酸はＬ−ア
ミノ酸のグリシン、７ラニン、バリン、ロイシン、イソ
ロイシン、セリン、メチオニン、スレオニン、フェニル
アラニン、チロシン、トリプトファン、システィン、プ
ロリン、ヒスチジン、アスパラギン酸、７スバラギン、
グルタミン酸、グルタミン、アルギニン、オルニチン、
及びリジンである。また０・アミノ酸（［１〜ｆ性１４
．）のＤ−アラニン、口・バリン、Ｄ−ロイシン、Ｄ−
イソロイシン、Ｄ・セリン、Ｕ・メチオニン、トスレオ
ニン、０−フェニルアラニン、Ｄ−チロシン、ロートリ
プトファン、Ｏ・システィン、Ｄ−プロリン、ローヒス
チヅン、ローアスパラギン酸、Ｄ−７スバラギン、ロー
グルタミン酸、Ｏ−グルタミン、Ｄ−アルギニンも゛″
任意アミノ酸″に含まれろ、又含まれろ「非蛋白」α−
アミノ酸の１列は、ノルロイシン、ノルバリン、７ａイ
ソロイシン、ホモアルギニン、チアプロリン、ジヒドロ
プロリン、ヒドロキシプロリン（ｌｌｙｐ）、ホモセリ
ン、シクロへキシルグリシン（Ｃｂ、ｇ）　、ａ−アミ
ノ−１１〜酪Ｍ（Ａｂａ）、シ・クロヘキシル７ラニン
（Ｃｈａ）、アミノフェニル醋酸（Ｐｂａ）、オルソ、
メタ、又はパラに置でモノ又はジ置換されているフェニ
ルアラニン、例えばパラ置換フェニルアラニン（ｐｓｕ
ｌ＋ＰＩ＋ｅ）及びパラクロロフェニルアラニン及びパ
ラニトロフェニルアラニン（ｐＮＰｈｅ）又は次の：　
（Ｃ１〜Ｃ，）フルキル、（Ｃ，、−Ｃ，Ｉ）アルコキ
シ、ハロゲン、又はニトロ基：の−又は二個でフェニル
の置換場所が置換されているもの；又はメチレンジオキ
シ基で置換されたもの；β−２−及び３−チエニルアラ
ニン、β−２−及び３−フラニルアラニン、β−２−、
３−、及び４−ピリジル７ラニン、β−（ベンゾチエニ
ル−２−及びトイル）アラニン、β−（１〜及び２−ナ
フチル）−アラニン（Ｎ　ｐａ）；セリン、スレオニン
、又はチロシンの０−アルキル化誘導体、グルタミン酸
とアスパラギン酸のメチルエステル、Ｓ−アルキル比シ
スティン、チロシンの〔１〜サルフェートエステル、３
−ヨードチロシン、５・ヨードチロシン、３，５−ショ
ートチロシン等のハロゲン化チロシンである。

数羽性向１Ω元素標識アミノ酸という表ＴＩｌには、３
−［３Ｈ］−チロシン、５−［３Ｈ］−チロシン、３−
［＋２５１１ヨードチロシン、５−［１２５１］ヨード
チロシン、３．５−［＋２１＞１］−ショートチロシン
、３−［１３Ｈ３ヨードチロソン、ｊ、［＋３Ｈ］ヨー
ドチロシン、及び３．５−［＋３Ｈ］−ショートチロシ
ンが含まれる。ヒルディンの配列又はその天然の変１ヒ
形とうい表現は、天然にヒルディンにおいて見出さ、れ
るアミノ酸配列が適用されることを１ｉ図している。

その一部という用語はヒルディン及びその変化形に対し
て使用されるときは、ヒルディン又はおその変化形の配
列からの少なくとも４個のアミノ酸の連続領域を含むこ
とを意味する。

「親油性の７ミノ酸」という用語には、Ｔｙｒ、四）ｅ
、　　Ｌｅｕ、Ｎｅｔ、　　Ｎｌｅ、１１ｅ１　〜’ａ
！、１１１Ｓ及びＰｒｏが含まれる。１．−芳香族アミ
ノ酸という用語はチロシン及びフェニルアラニン、及び
芳香環を含有するアミノ酸を含むことが意図される。

任意のアミノ酸の１〜１１個の残基を含有するペプチド
という表現は、アミノ酸又はコアアミノ酸（Ａ、＝−Ａ
、）のカルボギシ末端の何れかへ、アミノ酸を付加する
ことが、その固有の活性を有するコア構造を包含するこ
とを意味°４°ろ。

づｙｌ・、　［’１ｌｌ−Ｔｙｒ、　［ｌ　３Ｈ　］　
−７ｙ　＋’、　［１２５ｌコーＴｙｒのＯ〜５ｆｌＡ
Ｉの残基は、ｌ　−Ｔ　ｙｒ、［′ＪｌｌコーＴ　ｙ　
ｒ、［１〜５１］−Ｔｙｒ、又は［＋３Ｈ］、Ｔｙｒを
単独、複数又はｔＥ意の曲のアミノ酸との組合せで含有
している任意のアミノ酸の１〜５ｆｌＡＩの残基を含有
している配列を含むことを書味する。１〜Ｔｙｒ、　［
’ｌｌ］−Ｔｙｒ、［１２６ｌ　］　−７ｙ　＋、及び
［１３’Ｉ］−Ｔｙｒこの定義に含まれるのは、対応す
る１α置ＩＦｉ似体、例えば３−ヨードチロシン、５−
ヨードチロシン、３．５−ショートチロシン、：）・［
’　Ｈ］−チロシン、５−［３ｄコーチロジン、３−［
１２５ｌ］ヨードチロシン、５−［＋２Ｊコヨ−トチロ
シン、［３，５−ジＩ　２５１　］−ショートチロシン
、［３１３Ｈ］チロシン、［５−１３Ｈコチロシン、及
び［３，５・ジ１３Ｊ］−チロシンである。１〜Ｔｙｒ
、　［３Ｈ１〜Ｔｙｒ、　［Ｉ２６１］−Ｔｙｒ、又は
［＋３Ｈ］−Ｔｙｒを、単独、複数又は任意の他のアミ
ノ酸との組合せで含有するＩＩ−意のアミノ酸の１〜５
個の残基を含有する配列の例として、Ｓｕｃ　１〜Ｔｙ
ｒ　１〜Ｔｙｒ　Ｇｌｕ　Ｉ’ｒｏ　ｌｌｅ　Ｐｒｏ　
Ｇｕ　ＧＩＵ　Ａｌａ　Ｃｈａ　　γＭｅＧｌｕ、（実
施１９ｂ１３）、又はＩ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒジペプチド配
列の前、間又は後にアミノ酸ｆ：＋小人したもの、又は
ｔＥ　、ｔのごれらの鞘合せである。

る。

本発明にｉ足って、ヒルディンに結合されつる放射性同
位元素標識分子の曲の例は、ラジオハロゲン１ヒ分子が
含まれろ。診断イメージングに対し、有用なラジオハロ
ゲン類には、限定されろものではないが１２５ｌ及び１
２３１が、γカメラで患者を走査することによってイメ
ージ化する為に、そして、１１３Ｆ、？Ｊ、又は７６Ｂ
「がポジトロントモグラフィツク（ｐｏｓ己ｒｏｎ　Ｌ
ｏｍｏｇｒａｐｌ＋ｉｃ）イメージ化に含まれる。

式１のポリペプチドは任意の無毒性の有機又は無轢酸と
製薬上受は入れられる塩を形成できる。

適当な塩を形成する無ＪＡ酸の例には、塩酸、臭１ヒ水
素酸、硫酸、燐酸、及び酸金属塩、例えばオルト燐酸−
水素ナトリウム及び硫酸水素カリウムが含まれる。適当
な塩を形成する有機酸の例にはモノ、ジ及びトリカルボ
ン酸が含まれろ。そのような酸のＰｉｌｌには、例えば
酢酸、グリコール酸、乳酸、ピルビン酸、マロン酸、コ
ハク酸、グルタル酸、フマール酸、リン：ｒ酸、酒石酸
、クエン酸、アスコルビン酸、マレイン酸、ヒドロキシ
マレイン酸、安息香酸、ヒドロキシ安息香酸、フェニル
酢酸、桂皮酸、サリチル酸、２−フエノキソ安息杏酸及
びスルホン酸、例えばメタンスルホン酸及び２−ヒドロ
キシェタンスルホン酸が含まれる。カルボキシ末端アミ
ノ酸の塩には任意の適当な無代又は有機塩基と形成され
る無毒のカルボン酸塩が含まれる。

例示すればこれらの塩にはアルカリ金属、例えばナトリ
ウム及びカリウムとのもの、アルカリ土類金属、例えば
カルシウム、及びマグネシウムとのもの、１１１　Ａ族
のアルミニウムを含めた軽金属とのもの、及び有機第一
級、第二級及び第三級アミン、例えばトリエチルアミン
を含めたトリアルキルアミン、プロ力イン、ジベンジル
アミン、ｌ−エタナミン、Ｎ、Ｎ’−ジベンジルエチレ
ンジアミン、ジヒドロアビエチルアミン、Ｎ・（１氏級
）フルキルピペリジン、及び任意の池の適当なアミンが
含まれろ。

１ヒ合物の任意の一般基がそうであるようにある基が好
ましい０本発明者は式１のペプチド誘導体であって Ｘが水素、７セチル、又は→ｔサクシニルあるものが好
ましいと考える。また。

Ａ、がヒルディンの配列又はその天然の変更形で１〜５
４個のアミノ酸を含むもの、又はその部分領域、又は結
合であり、 Ａ２がｌ　−Ｔｙｒ、　［３Ｈ１Ｔｙｒ、［１２Ｊ］−
Ｔｙｒ、［１３Ｈ］−７ｙ。

の０〜５Ｎの残基、又はＴｒｐ、　Ｇｌｕ、　１ｌｉｓ
、　Ｌｅｕ、　Ｐｈｅ。

Ｄ−Ｐｌ＋ｅ、　５ｕｂＰｈｅ、　ＮＭｅＰｈｅ、　Ｔ
ｂａ、　３．４−ＤｈＣｉｎ、　Ｃｉｎ。

Ｎａｐ、β−（２−及び３−チエニル〉アラニン、β・
（２−及び３−フラニル〉アラニン、β−（２・、３−
１及び４・ピリジル）７ラニン、β−（ベンゾチエニル
−２−及び３−イル）アラニン、β−（ｌ−及び２・ナ
フチル）−アラニンであり、 Ａ３がＧ　Ｉ　ｕ、Ａｌａであり、 Ａ４がＧ１１１％Ａｓｐ、　Ｐｒｏ又はＡｌａ％Ａｚｔ
又はＰｉｐであり、Ａｓがｌｌｅ、　Ｉ、ｅｕであり、 ＡｓがＰｒｏ、　Ｓａｒ％Ｄ−Ａｌａ、　１ｌｙｐ又は
ＮＭｅＰｇｌてあり、Ａ７がＧ　ｌ　ｕ　、Ｇ　Ｉ　１
１　、　Ａ　Ｓ　１１又はＡｌａであり、Ａ、がＧ　Ｉ
　ＩＩ、Ａｓｐ又はＡｌａ″ＱＡす、Ａ、が、１〜Ｔｙ
ｒ、［３Ｈ］−Ｔｙｒ、［１２Ｊ］−Ｔｙｒ、、［１３
Ｈ１〜Ｔｙ「、又はＴｙｒ、　Ａｌａ、　ｌ’ｒｏ、　
Ｃｈａ、又はジペプチドＡ１ａ−Ｔｙｒ、　Ｔｙｒ−Ｌ
ｅｕ、　Ａｌａ−Ｐｈｅ、　Ｔｙｒ−Ｔｙｒ、　Ａｌａ
−Ｌｅｕ、Ｔｙｒ−Ａｌａ、　　ローＴｙｒ−１：ｅｕ
、　Ｌｅｕ−１’ｌ＋ｅ、　　５ａｒ−Ｃｈａ、　　Ｐ
ｒｏ−Ｃｂａ１Ｃｈａ−Ｌｅｕ％Ａｌａ−Ｃｈａ、　Ｔ
ｙｒ−Ｃｈａであり、／’ｉｔｏが結合、又はｒＮｅＧ
ｌｕ、　Ｇｌｕ、　（＋−Ｇｌｕ、　Ａｓｎ５　Ｄ−Ａ
ｓｎ、　Ｐｒｏ、　Ｇｌｎ、　Ａｌａ、　Ｌｙｓ、Ｄ−
Ｌｙｓ、Ａｓｐ、Ｏｒｎ、　Ａｓ１）、Ａｌａであり、 Ｙが、０■、（Ｃｔ〜ＣＯ）アルコキシ、７ミノ、モノ
又はジ（（シ、〜Ｃ４）アルキル置換アミノである。

ものが好まし、い。

特に好ましいのは、式ｌのペプチド誘導体であって Ｘがサクシニル、 Ａ１がｔ古今、 Ａ２が１〜Ｔｙｒ、［３Ｈ１〜Ｔｙｒ、［１２１５１］
−Ｔｙｒ、　［：１３’ｌ］−Ｔｙｒ、Ａ３がＧ　Ｉ　
ｕ。

Ｉ＼、がＧ　ｌ　ＩＩ又（、ｔｒｒｏ、ＡｓがＩｌｅ、 ＡｓがＰｒｏ、 八７がＧ　Ｉ　ｕ、 Ａ８が＋；　Ｉ　１１又はＡｓｐ、 Ａ９がＡｌａ−Ｃｈａｌ ＡｌｏがｒＮｅＧｌｕ ＹがＯＨ であるものである。

念」（上 本発明のペプチドは当業者に容易に知られ併る種々の手
順で製造できる。そのような手順には固相連続及びブロ
ック合成、遺伝子クローニング及びこれらの技術の絹み
合わせが含まれる。同相連続手順は自動化されたペプチ
ド合成機の使用によるなと確立された自動方法を用いて
実施できろ。

この手順に於いてペプチドは最後から二番目のＣ−末端
保護アミノ酸から始め樹脂上で構築される。

使用される樹脂支持体は、慣用的にこの技術でポリペプ
チドの同相合成に用いられる任意の適当な樹脂であり得
、好ましくは０．５〜約３％のジビニルベンゼンで架橋
されているポリスチレンて、クロａメナル化又はヒドロ
キシメチル化のいずれかがされていて、最初に導入され
るαアミノ閉設アミノ酸とエステル形成の場所が与えら
れているものである。連続の結合が完了した後に［ｌｏ
ｃ保護基がその場所に残されるか又は除去され、モして
Ｎ−末端アミノ基がアシル化される。樹脂から保護フラ
グメントを置き換えることは適当なアミノアルコールを
用いて達成できた。

ヒドロキシメチル樹脂の例はボダンスキー等、ＣｈｅＩ
Ｉｌ、　　Ｉｎｄ、（Ｌｏｎｄｏｎ）３８．　１５９７
−９８　　（Ｈ］６６）（こ記載されている、クロロメ
チル化樹脂はバイオ　ラドラボラトリ−、カリフォルニ
ア州、リツチモンドから市販されており、そのような樹
脂の製造はスチュワート等、「固相ペプチド合成」　（
フリーマン　ン′ンド　カンパニー、サンフランシスコ
　１９６９）１章、１〜６頁に記載されている。保護さ
れたアミノ酸はギシン、　Ｈｅ１ｖ、　Ｃｂｅｍ、　Ａ
ｃｔ、ａ、　５Ｊ　１４７０　（１９７３）の手順によ
って樹脂に結合できろ、多くの樹脂結合保護アミノ酸が
市販されている０例としてカルボキシ末端がＴ　ｈ　ｒ
残基である本発明のポリペプチドを製造するには、第三
級ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）　［！ｊ　鏝Ｔｈ
ｒであって、ベンジル化されたヒドロキシメチル化され
たフェニルアセタミドメチル（ＰＡＭ）樹脂に結合され
たものを使用出来、これは市販されている。

α−アミノ保護アミノ酸を樹脂支持体に結合した後に保
護基を任意の適当な手順９例えば塩化メチレン中のトリ
フルオロ酢酸、トリフルオロ酢酸のみ、又はジオキサン
中のＨＣＩを使用することによって除去される。説１ｖ
謹はＯｃから室温の間の温度で実施されろ、特定のα−
アミノＩＭｙＪ基の除去のための他の標準の開裂試薬及
び条件を使用できる。α−７ミノ保護基の除去の後、他
の７ミノ保■アミノ酸を所望の順序で段階的に結合する
。

別の方１ノよとじて複数のアミノ酸基を樹脂支持アミノ
酸配列と結合する前に溶液方法で結合することが出来る
。

ポリペプチド配列に導入されろ各アミノ酸とともに使用
するアミノ保、謹基は、任意のこの技術でり１１１５れ
た保護基であり得ろ。α−７ミノ（シ；護基の頚の内、
考慮に入れられているものは（１）アシル型ｅｌ！護基
、例えばホルミル、トリフルオロアセチル、フタリル、
トルエンスルホニル（Ｌｏｓｙｌ）、ベンゼンスルホニ
ル、ニトロフェニルスルフェニル、トリチルスルフェニ
ル、０・ニトロフェノキシアセチル及びα−クロロブチ
リル、（２）芳香族ウレタン型保護基、例えばベンジロ
キシカルボニル及び置換ベンジロキシカルボニル、例え
ばｐ−クロロベンジルオキシカルボニル、ｐ−ニトロベ
ンジル−カルボニル、ｐ・ブロモベンジルオキシカルボ
ニル、ｐ−メトキシベンジルオキシカルボニル、１〜（
ｐ−ビフェニリル）−トメチルエトキシカルボニル、α
、α−ジメチルー３，５・ジメトキシベンジロキシカル
ボニル及びベンズヒドロキシカルボニル、（３）脂肪ｈ
（ウレタン保護基１例えば第三ブチルオキシカルボニル
（Ｂｏｃ）、ジイソプロピルメトキシカルボニル、イソ
プロビルオキシカルボニル、エトキシカルボニル及びア
リロキシカルボニル、（４）ジクロフルキルウレタン型
保護基、例えばシクロベンチロキシカルボニル、アダマ
ンチロキシカルボニル及びシフａへキロキシカルボニル
、（５）チオウレタン型作護基、例えばフェニルチオカ
ルボニル、（６）アルキル復保護基、１５すえばトリフ
ェニルメチルくトリチル）及びベンジル、及び（７）ト
リアルキルシラン基、例えばトリメチルシランである。

好ましい（Ｃ−アミノ保護基は第三ブトキシカルボニル
である。

固相ペプチド合成の技術で知られているように、アミノ
酸の多くは鎖製造の間に保護を必要とする官能基を有し
ている。）ｉ！当な（Ｙ護基の使用及び選択は、当業者
の能力の範囲内であり、保護されるべきアミノ酸及びペ
プチド上の他の深謹されたアミノ酸残基の存在に依存す
る。そのような側鎖保護基の選〃シは、α−７ミノ部分
のｉ！Ｉｔ七基の開裂の間に、開裂によって除去されな
いものでなければならないという点で臨界的である。例
えば、リジンに対する適した側鎖保護基はベンジロキシ
カルボニル及びＫｔ　Ｉｌ！！ベンジロキシカルボニル
であり、この置換基はハロ（例えばクロロ、ブロモ、フ
ルオロ）及びニトロ、（例えば２−クロロベンジロキシ
カルボニル、ｐ−ニトロベンジロキシカルボニル、３．
４−ジクロロペンジロギシ力ルボニル）、トシル、Ｌ・
アミロキシカルボニル、ｔ−ブチロキシカルボニル及び
ジイソプロピルメトキシカルボニルである。

スレオニンとセリンのアルコール性ヒドロキシル基は、
アセチル、ベンソイル、第三ブチル、トリチル、ベンジ
ル、２．６−ジクロロベンジル、又はベンジロキシカル
ボニル基で保護できる。好ましい保護基はベンジルであ
る。

適当な結合剤の選択は、当業者の行い１簿ろ範囲内のも
のである。特に適した結合剤であって加えられるべきア
ミノ酸がＧｌｎ、　Ａｓｎ又はＡｒｇであるものはＮ、
Ｎ’−シイツブａピルカルボジイミド及び１〜ヒドロキ
シベンゾトリ７ゾールである。これらの試薬の使用はニ
トリル及びラクタムの形成を防止する。他の結合剤は（
１）カルボジイミド類（例えば、ＬＮ’−ジシクロへキ
シルカルボジイミド及びＮ−エチル−Ｎ′−（γ−ジメ
チルアミノブロビル力ルボジイミｌ）’、（２）シアナ
ミド類（例えば、Ｎ、Ｎ−ジベンジルシアナミド）、（
３）ケテンイミン類、（４）イソキサゾリウム塩（例え
ば、Ｎ−エチル−５−フェニル−イソキサツリウム−３
′−スルフオ参−１・）、（５）　１〜４個の窒素原子
を環中に含む芳香族性の単環式窒素含有複素環アミド、
例えばイミダゾリド類、ビラソリド類、及び１．２．４
−　）リアゾリド煩である。有用な特定の複素環アミド
類にはＮ、Ｎ’・カルボニルジイミダゾール及びＮ、Ｎ
−カルボニル−ジー１．２．４−トリアゾール、（６）
アルコキシ化アセチレン（例えば、エトキシアセチレン
）、（７）アミノ酸のカルボニル部分と混合無水物を形
成する試薬（例えは、エチルクロロホルメート及びイソ
ブチルクロロホルメート）又は結合されろべきアミノ酸
の対称的な無水物（例えば、Ｂｏｃ−Ａｌａ−１）−Ａ
ｌａ−ロｏｃ）及び（８）　一つの環窒素上にと１・Ｏ
キシル基を有する窒素含有複素環化合物（例えば、Ｎ−
ヒドロキシフタルイミド、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミ
ド及び１〜ヒドロキシベンゾトリアゾール）である、他
の活性化試薬及びペプチド結合に於けるそれらの用途は
、カブール、　Ｊ、　Ｐｈａｒｍ。

Ｓｃｉ、、　５９．　ｌ−２７頁（＋９７０）により記
載されている。

本発明者等は結合試薬として対称無水物を使用するのが
Ａｒｇ、　Ａｓｎ及び１；１ｎ以外の全てのアミノ酸に
対し好ましいと考えている。

各々の保護されたアミン酸又はアミノ酸配列は、約４１
８の過剰で固相反応器に導入されカップリングをジメチ
ルホルムアミ１ζ対塩化メチレン（１：ｌ）の媒体中又
はジメチルホルムアミド単独の中、又は好ましくは塩化
メチレン単独の中で実施する。

不完全なカップリングが生じた場合には、カップリング
手順を同相反応器中の次のアミノ酸のカップリングの前
にα−アミノ保護基の除去前に縁り返す０合成の各段Ｐ
ｈに於けるカップリング反応の成功はイー、カイザー等
、　Ａｎａｌｙｔ、　８ｉｏｃｈｅｍ、　３４゜！’ｉ
９５　（＋９７０）により記載されるニンヒドリン反応
によってモニターする。

α−７ミノｌ’＋！　Ｌｌ）アミノ酸の樹脂支持体への
カップリングにつづいて、塩化メチレン中でトリフルオ
ロ酢酸単独、又はジオキサン中のＨＣＩを用いるなどに
よって、適当な任意の手前を用いて保護基が除去されろ
、脱保護はＯ′Ｃから室温の間の温度で実施される。他
の標準の開裂試薬及び特定のα−７ミノ保護基の除去に
ついての条１′トを使用できる。α−７ミノ保護基の除
去の後、他の７ミノ１呆護アミノ酸が段階的に所望のＩ
ｌｌ　Ｉデで結合される。

別の方法として、複数のアミノ酸基が樹脂支持アミノ酸
ｒＩｄ列とカップリングする前に溶液法によって結合さ
れ得る。

所望のアミノ酸配列が得られた後にペプチドを樹脂から
除去ずろ。これは加水分解、例えば梅脂結合ポリペプチ
ドをスカベンジャー（例えばアニソール）の存在下で無
水液体ＨＦで処理することによって成し得る。典型的に
は、保護基除去はペプチド鎖合成が完了してからなされ
るが、保護基は任意の他の適当な時期に除去できる。

放飼標識ペプチド 本発明の放射性標識ペプチドは、研究及び治Ｉかに於け
るトロンビンとトロンビン複合体の試験官内及び生体内
測定に有用であるか、又はＩ・ロンビン及びトロンビン
複合体の検定又は診断キットに豹いて有用であり、放射
性標識トロンビン結合剤の製造にも有用である０本発明
の一つの具体例は、複合体を安定化するのに役立ち得る
トロンビンのトロンボリティック活性を減少又は除去も
する１・ａンビン結合へブチドの放射性標識１ヒである
。この例は、凝血中に入れられたトロンビンの放飼能に
よるイメージ化である。トロンビンに標識化ヒルディン
ペプチドを結合させることは、ラジオイメージ化技術に
よってトロンビンの場所及び分イσを測定することを可
能とする。

ペプチドの放射性ヨウ素化は、一般にクロマチンＴ方法
を用いてなされる。ペプチドラベルに刻するクロマチン
Ｔに代る方法には（１）ヨウ素モノクロライド法、（２
）別の化学酸化法、（３）電解ヨウ素化、及び、（４）
酵素的ヨウ素化法が含まれる。別の方法として、（５）
＊白質とポリペプチドのヨウ素化の為の共没探識化法が
この技術の当業者に良く知られ、Ｎ−コハクサンイミジ
ル３・（４・ヒドロキシ　５−［ｔＰ６１］ヨードフェ
ニル）プロピオネート（ポルトン−ハンター試薬）、又
はＩＩＩ！の適当なラベル化法を用いている６例えばメ
チル１）−ヒトミキシベンズイミデート塩酸塩がヨウ素
化試薬として使用されてきたが、ジアゾ化アニリンを放
射性ヨウ素化している。ヨウ素化ペプチドのトリチウム
含有ペプチドへの転換が酸化パラジウム及びトリチウム
ガスでの接触還元を用いて達成できろ。

治療用途 本発明のアルコールペプチド誘導体の抗凝固投与量は、
治療されるべき患者血栓症状のひどさ、及び選ばれるペ
プチド誘導体に依存し、−日当たり患者体ｍキログラム
当たり０．２Ｂ〜２５０＋ａｇである。

特定の患者に対する適当な投与量は容易に決定され得ろ
、好ましくは１〜４回の毎日の投与がなされ典型的には
投与量たり５ｍｇ＝　１００ｍｇの活性化合物が投与さ
れる０本発明のペプチドアルコールの体外媒体、例えば
保存された全血中に於ける血液凝固を防止するか又は抑
制するのに要する量は、容易に当業者により決定され得
る。

抗凝固療法は種々の血ｔ仝症状、特に冠状動脈及び脳血
管病の処置及び予防に示唆されている。この分野で経験
を積んだ者は、抗凝固療法を要求するような状況に容易
に気がつく０本明細書で使用する「患者」という用語は
、哺乳類、例えは人を含めた霊長類、羊、馬、牛、豚、
犬、猫、ラット及びマウスを意味するものとする。血液
凝固の抑制は、血栓症状を有する個人の抗凝固療法に有
用であるのみらなす血液凝固の抑制が望ましい場合、例
えば保存された全血の凝固の防止及び試験又は貯蔵のた
めの他の生物学的試料に於ける凝固の防止などに於いて
なとあらゆる場合に有用である。

ペプチド誘導体の幾つかは経口投与の後腸を通過しても
生延び得るが、本発明者は非経口投与、例えば皮下、静
脈内、筋肉内又は腹腔内投与、デボ−注射による投与、
移植製剤による投与又は粘膜への適用、例えば鼻、喉及
び気管支に対する適用、例えば本発明のペプチド誘導体
をスプレー又は乾燥粉末形で含有しているエロゾルの缶
に於ける投与が好ましいと考えている。

化合物の非経口投与は、表面活性剤及び他の製薬上受は
入れられる助剤の添加有り又は無しで、水又は油の様な
滅ｒＪｉ液体であり得る製薬担体と共に生理学的に受は
入れＩ３れる希釈剤中の化合物の溶１α又は懸濁液の注
射可能な投与物として投与され得る。これらの製剤中で
使用できる油の例は石油、動物、植物、又は合成起源の
もの１例えばピーナツ油、大豆油、及び鉱油である。一
般に、水、塩水、デキストロース水溶液及び関連糖溶液
、エタノール及びグリコール類、例えばプロピレングリ
コール又はポリエチレングリコールが好ましい液体ｍ体
で、特に注射溶液に良い。

化合物は、デポ−注射又は移植製剤の形態で投与するこ
とが出来、これらは活性成分の持続放出を可能とするよ
うな方法で処方され得る。活性成分は、ベレット又は小
シリンダー形に圧縮され皮下又は筋肉内にデポ−注射又
はｆｊ植片として移植される。移植片は生物分解可能な
重合体又は合成シリコン、例えばシラスチック、即ちダ
ウ−コーニング　コーポレーションにより製造されたシ
リコンゴムなどの不活性物質を使用することが出来る。

〔実施例〕

本発明は、次の非限定実施例により説明される。

実施例Ｉ　　　Ｓｕｅ　３，５−ジＩ−Ｔｙｒ　Ｇｌｕ
　Ｐｒｏ　ｌｉｅ　Ｐｒ。

ＧＩＵ　Ｇｌｕ　Ａｌａ　Ｃｈａ　Ｄ−Ｇｌｕの合成へ
〇ｌ　４３ＯＡペプチドシンセサイザーを用いて、固相
法によってＳｕｅ　３．５−ジＩ−Ｔｙｒ　Ｇｌｕ　Ｐ
ｒｏ　Ｉｌｅ　Ｐｒ。

Ｇｌｕ　Ｇｌｕ　Ａｌａ　Ｃｈａ　［＋−Ｇｌｕを合成
した。実施した対称性のＮα−［１ｏｃ深護アミノ酸の
無水物を、順次Ｏｏｃ−ｇ＋ｔ＋（Ｉｌｚｌ）マリフィ
ールド樹脂（０，３４ｍｅｑ／ｇ）に、ＡＢＩによって
供給されたダブルカップリングブロトコルを用いて加え
た０次の９！ｌＩ鎖保護を使用した。３，５−ジ１〜Ｔ
ｙｒ（３−Ｂｒ−Ｂｚｌ）　；　Ｇ１１１（８２１）、
樹脂結合ペプチドのＮ−末端のサクシニル化を、無水コ
ハク酸で達成した。

無水ＨＦ、０″Ｃ１３０分、アニソール存在下で、樹脂
からペプチドを開裂した。ペプチドを５　′ＬＩｆ　０
．４１７、Ｉｔ２＋ｆ、３０＄　１：ｌｌ３ｃＮで抽出
し、凍結乾燥した。凍結乾燥物を逆相旧ｑ、ｃによって
ペツクマンウルトラプレフ゛（（ｌｅｃｋｍａｎυＩ　
ｔｒａｐｒｅｌ））ｌ’、’−１８カラム（５０，１（
ｘ　１５０Ｉｌｆｆｌ）を用いでＨｏｔｅｌ／分で、３
（１〜４０％のイ；１１．ｃＮ／水性ＴＩＩＡの勾配を
用いて精製した。

ヒルディンペプチドのｉｔＩ　１．Ｑのヨウ素化を、Ｎ
ａ（＋２５Ｉ］で実施した。−船釣に０．５Ｍ燐酸ナト
リウム（ｐＨ７，５）中の５ｃＮｇのヒルディンペプチ
ド（２ｍｇｅｍ　Ｉ　）をＩＯμｌのクロロアミン−Ｔ
　（０，５Ｍ燐酸緩衝液中の１．２５Ｂ／ｍｌ）の添加
によってヨウ素化した。

この反応を２４℃で３０秒間進行させた０反応を次に２
５μｍのメタ亜＠酸ナトリウムの添加によって停止さｆ
ｔ　タ（０，５Ｈ燐ＰＩｉｇ４’４１　ｔ（ｉ　中＋７
）　１．２５ｍｇ／ｍｌ）　、　ａ　ウ素化反応をＯ，
１Ｍホウ酸ナトリウム＆４街液、ｐＨ８，５て平衡にし
たＢｉｏ−／Ｇｅｌ　Ｐ−２カラム（２，０ｘ５０ｃｍ
）に即座に適用した。几そカラムクロマトグラフィの測
定によると８５２の［１’６１］分子が蛋白質に移った
。

標識されたヒルディンペプチドを次に１ｚ牛血清アル１
ミン（０，１Ｍホウ酸ナトリウム＆！衝１αｌ］）に加
え、そして−２０′Ｃで趨つかの小瓶中に貯蔵した。

標識されたヒルディンの析たに融解した試料を次に各実
験に対して使用した。貯蔵の後、標識ヒルディンペプチ
ドのＴにＳ−３０００１１Ｐ１．（カラム上ての再クロ
マトグラフィによって、標識されていないヒルディンペ
プチドの溶離プロフィールと一致する放射能活性の単一
ピークを生した。

ヒルディンのペプチドを接触還元によってトリチウム化
した。ペプチド１５ｍｇを２１のＨ２Ｏと：４０１１の
トリエチルアミン中に懸濁した。この溶Ｉαに３０１１
８のプラチナアルミニウムオキサイドを加えた。

室温で１ｉｆｅ閏、大気圧下の還元を実施した。最初に
反応物をフィルター上で８．？０で洗浄し、取込まれな
い標識を除去し、生じる粗製の物質を再単ｇｆｆしたく
デュポン−ＮＥＮリサーチカタログ２２頁、Ｃａｔ。

ｄ８２５９、酸化プラチナでの接触還元）。

精製した標識ペプチドの分析は、ＦＡＢ−ＭＳによると
、所望の分子イオンピークを４え、所望ペプチドと一致
するアミノ酸分析を有していた。この方法で次のペプチ
ドは述べられた以下に特定される物理的性質を有してい
る。

トロンビンで誘発したブイプリンの凝血の抑制検定で試
料を検定した。検定の全ての溶液を０．！２ト１塩化す
トリウム、Ｏ、ＯＩ　Ｍ燐酸ナトリウム、０．０１％ナ
トリウムアジド、及び０．１％牛血清アルブミン、ｐ　
Ｉｆ　７　、４を含有する挟定緩ｉｊｉ　漬で造った。

牛のトロンビンをマイクロ滴定リーダー（バイオチック
（Ｂｏ−Ｔｅｋ）　ＥＬ　３０９＞によって４０５　ｎ
　ｍて６０分以内にフィブリンクロット形成がモニター
できろように、適当な濃度に滴定した。このトロンビン
溶液（５０７Ｊｌ、０．２ｐモル）を５０７１１の試験
される合成ペプチド°の溶液を含有しているミクロ滴定
プレートのウェルに加えた。１分撹拌し更に１０分間２
４℃で培養した後、０．１％Ｅ　Ｄ　Ｔ　Ａ中のｂ１０
７７１の希釈血漿（ｌ］０）を加え、２０秒間渦巻かせ
た。溶液の濁度を５分間隔てオートリーダーによってモ
ニターした０本吉果からＩＣＩ）。を計算し、阻害剤を
含有していない対照と比較した５０％の濁度が観測され
るように導かれるペプチドの濃度として定義した。これ
はフィブリン凝血形成時ｔｇ１の２１８の増加に等しい
。人又は牛の１・【コンピンを用いる検定の為シこは、
トロンビンは３０分の期間にわたって同じ速度でフィブ
リン凝血を与える濃度に滴定された。このように、次の
ペプチドは、以下に特定した実ｂｔ！ｉｈＱで得られた
生物的性質を有している。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、式 Ｘ−Ａ＿１−Ａ＿２−Ａ＿３−Ａ＿４−Ａ＿５−Ａ＿６
   −Ａ＿７−Ａ＿８−Ａ＿９−Ａ＿１＿０−Ｙ〔式中 Ｘは水素、１〜１０個の炭素原子の１又は２個のアルキ
   ル基、２〜１０個の炭素原子の１又は２個のアシル基、
   カルボベンジロキシ又はｔ−ブチロキシカルボニルから
   選ばれるアミノ末端残基であり、Ａ＿１は、ヒルディン
   の配列、又はその天然の変更物若しくはその一部、結合
   、又は任意のアミノ酸の１〜１１個の残基を含有してい
   るペプチドであり、 Ａ＿２は、ｌ−Ｔｙｒ、［＾３Ｈ］−Ｔｙｒ、［＾１＾
   ２＾６ｌ］−Ｔｙｒ、［＾１＾３＾１ｌ］−Ｔｙｒの０
   〜５個の残基、又はＡ＿９が放射性元素標識化アミノ酸
   を含有するときはＬ−芳香族アミノ酸であり、 Ａ＿３は、Ｇｌｕ、Ａｓｐ又はＡｌａであり、Ａ＿４は
   、任意のアミノ酸であり、 Ａ＿５は、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｎｌｅ、Ａｌａ、
   Ｄ−Ｌｅｕ又はＰｈｅであり、 Ａ＿６は、Ｐｒｏ、Ｈｙｐ、Ａｚｔ、Ｐｉｐ、ＤｈＰｒ
   ｏ、チアゾリジン−４−カルボキシレート、Ｓａｒ、Ｎ
   ＭｅＰｇｌ、又はＤ−Ａｌａであり、 Ａ＿７は、任意のアミノ酸であり、 Ａ＿８は、任意のアミノ酸であり、 Ａ＿９は、Ｔｙｒ、ｌ−Ｔｙｒ、［＾１＾２＾５ｌ］−
   Ｔｙｒ、［＾１＾３＾１ｌ］−Ｔｙｒ、［＾３Ｈ］−Ｔ
   ｙｒ、Ｍｅｔ、Ｔｒｐ、Ｐｈｅ、Ｌｅｕ、Ｎｌｅ、Ｉｌ
   ｅ、Ｖａｌ、Ｃｈａ、Ｈｉｓ、Ａｌａ及びＰｒｏから選
   ばれる親油性アミノ酸であるか、又はこれらのアミノ酸
   又は任意の親油性アミノの少なくとも一つを含有してい
   るジペプチドであり、Ａ＿１＿０は、ヒルディンの配列
   又はその天然の変更物若しくはその一部、結合、又は任
   意のアミノ酸の１〜１１個の残基を含有しているペプチ
   ドであり、ＹはＯＨ、（Ｃ＿１〜Ｃ＿８）アルコキシ、
   アミノ、モノ又はジ（Ｃ＿１〜Ｃ＿４）アルキル置換ア
   ミノ酸から選ばれるカルボキシ末端残基、又はアルコー
   ル末端残基である〕 の放射性元素標識化ペプチド誘導体。 ２、Ａ＿２が、ｌ−Ｔｙｒ、［＾３Ｈ］−Ｔｙｒ、［＾
   １＾３＾１ｌ］−Ｔｙｒ、［＾１＾２＾５ｌ］−Ｔｙｒ
   である請求項１記載のペプチド誘導体。 ３、Ａ＿３がＧｌｕである請求項１に記載のペプチド誘
   導体。 ４、Ａ＿４がＰｒｏである請求項１に記載のペプチド誘
   導体。 ５、Ａ＿５がＩｌｅである請求項１に記載のペプチド誘
   導体。 ６、Ａ＿６がＰｒｏである請求項１に記載のペプチド誘
   導体。 ７、Ａ＿７がＧｌｕである請求項１に記載のペプチド誘
   導体。 ８、Ａ＿８がＧｌｕである請求項１に記載のペプチド誘
   導体。 ９、Ａ＿９がＡｌａ−Ｃｈａである請求項１に記載のペ
   プチド誘導体。 １０、Ａ＿１＿０がＤ−Ｇｌｕである請求項１に記載の
   ペプチド誘導体。 １１、ＸがＨである請求項１記載のペプチド誘導体。 １２、Ａ＿９がｌ−Ｔｙｒ、［＾３Ｈ］−Ｔｙｒ、［＾
   １＾２＾５ｌ］−Ｔｙｒ、［＾１＾３＾１ｌ］−Ｔｙｒ
   である請求項１に記載のペプチド誘導体。 １３、請求項１〜１２のうちの一つのペプチド誘導体の
   抗凝固有効量及び製薬上受け入れられる担体を投与する
   ことからなる、必要とする患者の血液凝固を減少させる
   方法。 １４、請求項１〜１２の一つのペプチドの血液凝固有効
   量と媒体とを接触させることからなる媒体中の血液凝固
   を減少させる方法。 １５、請求項１〜１２の一つの標識ヒルディンペプチド
   の生物中分布のパターンを診断用にイメージ化及び検出
   する、生体内でトロンビンを検出する方法。 １６、請求項１〜１２の一つの標識ヒルディンペプチド
   を使用して、血液、組織、又は試料中の利用可能なトロ
   ンビン水準を検出する、インビトロでトロンビンを検出
   するキットによる検定又は診断法。 １７、ａ）適当に結合したＡ＿１＿０群からのＣ−末端
   保護アミノ酸を有する樹脂を準備し、 ｂ）Ａ＿９からＡ＿１までの他のα−アミノ保護アミノ
   酸を順々に結合して、請求項１に対応する保護されたア
   ミノ酸配列を造り上げ、 ｃ）該保護基を除去し、所望のペプチドを精製し、そし
   て ｄ）該ペプチドを放射性−ハロゲンで標識化し、そして
   標識化ペプチドを精製する、 以上の段階からなる、請求項１〜１２の任意の一に記載
   のペプチド誘導体の製造方法。 １８、製薬活性物質として使用する為の、請求項１〜１
   ２の任意の一に記載のペプチド誘導体又は製薬上受入れ
   られるその塩。 １９、抗凝固剤として処置する為の、請求項１〜１２の
   任意の一に記載のペプチド誘導体又は製薬上受入れられ
   るその塩。