JPH029383A - ニトログリセリンの生物変換によるグリセリルモノニトレートの合成方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はニトログリセリンの生物変換によるグリセリル
モノニトレートの合成方法に関する。

更に詳細には、本発明はニトログリセリン（グリセリル
１，２．３−）リニトレートまたはＧＴＮと称される）
からグリセリルモノニトレートまたはグリセリルモノニ
トレートの混合物への生物変換方法に関する。

グリセリルモノニトレートには二つの異なるグリセリル
モノニトレート、即ち式（１）のグリセリル１−モノニ
トレート（ＧＭＮ−１と称される）及び式（２）のグリ
セリル２−モノニトレート（ＧＭＮ−２と称される）が
ある。

ＣＨｚ　　Ｏｌｌ ＣＩ（ｔ　−ＯＨ これらの２つのグリセリルモノニトレートは、特に舌下
サブロー錠剤の形態で狭心症及び肺高血圧病の治療に於
ける薬剤として、特に独国特許第３．５１４，８８８号
及び同第３，３０５．６９０号に示唆されている。

しかしながら、本願発明者らが知る限り、これらの製品
の開発は２−モノニトレートが良好な収率で調製されず
ジニトレートの合成から少量で得られるだけであるとい
う事実によって制限されていた。

１−モノニトレートに関する限り、多くの化学合成経路
が示唆されていた（特にルート（Ｒｏｏｄ）著’Ｃｈｅ
＋ｗｉｓＬｒｙ　ｏｆ　Ｃａｒｂｏｎ　Ｃｏｍｐｏｕｎ
ｄｓ’第２編、１７頁参照のこと）としても、それらの
いずれも満足なものではない。

ニトログリセリンの生体内分解の薬物速度論的な研究に
於いて、痕跡量のモノニトレートの生成が成る著者ら、
特にＰ、ニードルマン（Ｎｅｅｄ　ｌｅｍａｎ）及びＦ
、　　Ｅ、フンター（Ｈｕｎｔｅｒ）により言及されて
いる（Ｍｏ１．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、　　１巻、７７〜
８Ｇ頁、　（１９６５年）を参照のこと）。

更に、Ｔ、　Ｍ、　ウェノト（Ｗｅｎｄｔ）　、Ｊ、　
　Ｈ，コーネル（Ｃｏｒｎｅｌ　Ｉ）及びＡ、　Ｍ、カ
ブラン（Ｋａｐｌａｎ）は、”Ａｐｐｌｉｅｄ　ａｎｄ
　Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏ
ｇｙ３６巻、５号、６９３〜６９９頁（１９７８年）に
於いて、バクテリア発酵によるニトログリセリンからグ
リセロールへの変換の際のジー及びモノ−ニトレートの
一時的な生成について記載している。

上記の研究は、モノニトレートが良好な収率で得ること
ができなかったこと、そして生成物が痕跡量で得られた
か、あるいは最終発酵生成物がグリセロールであったの
で他の化合物に対してモノニトレートの一つを選択的に
得ることはなおさら不可能であったことを明らかに示す
。

本件出願人は、或種の微生物がｖＡ＠のカチオンまたは
アニオンを含まない反応媒体中で複雑な精製処理を用い
ない単一の工程に於いてニトログリセリンから出発して
モノニトレートを得、更にモノニトレートの１つをその
他の化合物に対して選択的に、増大された収率及び高め
られた純度で得ることを予想外にも可能にすることを見
い出した。

本発明の方法は酵母、菌類及び原生動物からなる群から
選ばれた微生物によるニトログリセリンから１種以上の
グリセリルモノニトレートへの生物変換工程、好ましく
は菌類による生物変換工程を含むことを特徴とするグリ
セリルモノニトレートまたはグリセリルモノニトレート
の混合物の製造方法である。

本発明の方法に於いて、グリセリルｌ−モノニトレート
（ＧＭＮ−１と称する）またはグリセリル２−モノニト
レート（ＧＭＮ−２と称する）を選択的に生成する微生
物あるいはＧＭＮ−１及びＧＭＮ−２の混合物を得るこ
とが可能な微生物が使用し得る。

本発明の範囲内で使用し得る多くの微生物の中で、特に
ゴ及すべきｔｌＴはカニングハメラ属、ゲオトリクム属
、スポロトリクム属、ファネロキーテ（Ｐｈａｎｅｒｏ
ｃｈａｅｔｃ）　麿、ハクキョウサン病菌（Ｒｅａｕν
ｅｒｉａ）　属、及びケカビ属の中から選ばれる菌類で
ある。カニングハメラエレガンス（Ｃｕｎｎｉｎｇ−ｈ
ａｍｅｌｌａ　ｅｌｅｇａｎｓ）種、ゲオトリクムカン
ジダム（ｃａｎｄｉｄｕｍ）種、スポロトリクムパラネ
ンス（ｐａｒａ−ｎｅｎｓｅ）種、ゲオトリクムエキシ
レ（ｅｘｉｌｅ）種、ファネロキーテクリソスポリウム
（ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ）種、ハクキョウサン病
菌属テネラ（Ｌｅｎｅｌｌａ）種、ハクキョウサン病菌
属バシアナ（ｂａｓｓｉａｎａ）種及びケカビ属ブロム
ボイス（ρＩｏｍｂｅｕｓ）種が使用されることが好ま
しい。

原生動物の中から、テトラヒメナ属の代表、例えばテト
ラヒメナセルモフィラ（ｔｈｅｒｎ＋ｏｐｈｉｌａ）が
良好な結果を与える。

酵母の中から、興味のある代表例はロドトルラ属及びハ
ンセニューラ属の酵母、特にロドトルラグルチニス（ｇ
ｌｕｔｉｎｉｓ）及びハンセニューラアノマラ（ａｎｏ
ｍａｌａ）が良好な結果を与える。

これらの微生物の適用に於いて、従来技術に報告されて
いることに反して、ニトログリセリンの生物変換工程中
に、ニトログリセリンが完全に消失すること、グリセリ
ルジニトレートが出現しついで消失すること、及びＧＭ
Ｎ−１及び／またはＧＭＮ−２が出現しついで一定濃度
に保たれることがわかった。

微生物は遊離の形態、吸着により支持体に結合される形
態、または天然もしくは合成の重合体（例えば公知の技
術に従ってアルギネートまたはカラゲネート（ｃａｒｒ
ａｇｈｅｎａ　Ｌｅ）　）に封入された形態で適用し得
る。成る場合には、非細胞抽出物が使用し得る。

ニトログリセリンから一種以上のグリセリルモノニトレ
ートへの生物変換は、微生物及びニトログリセリンを含
む無機または有機の溶液中、または好ましくはニトログ
リセリンが好ましくは相成長の後に添加される微生物の
培地中のいずれかで行なわれる。

使用される微生物に応じて多くの培地が考え得るが、酵
母抽出物、モルト抽出物、及びグルコースの如き砂糖を
含む培地が特に好適である。

かくして、液体媒体中に、酵母抽出物４〜２゜ｒ：　／
’　ｅ、モルト抽出１！７１５〜１５　ｇ／　ｅ、グル
コース２〜５０　ｇ　／　ｌを含む組成物が使用し得る
。

酵母抽出物としてジフコ・カンバニイ（Ｄｉｆｃ。

Ｃｏｍｐａｎｙ）から市販されるジフコ・イースト・エ
クストラクト（Ｄｉｆｃｏ　Ｙｅａｓｔ　Ｅｘｔｒａｃ
ｔ、商標）を含むｌ５地を使用することにより良好な結
果が得られる。

本発明の方法の有利な態様に従って、ニトログリセリン
は２〜５ミリモル／Ｉ！、好ましくは３〜４ミリモル／
ｉの割合で培地中に一度に全部添加される。

またニトログリセリンは、バッチ中の培地に添加されて
もよい、この場合に於いて、ＧＴＨの適用量は１２ミリ
モル／２（これは約２．１ｇ／ｌのニトログリセリンで
ある）程度に多くてもよい。

培養条件は、各々の微生物に適したものでなければなら
ない。

生物変換に最も有利な温度範囲は２０〜５０℃である。

しかしながら、“好熱性”と称される或種の菌類が一層
高温で有効であり得る。この場合に於いて、生物変換の
期間は相当減少され、これは経済的な観点から興味があ
る。

使用し得るｐｌ＋範囲は一般には全く広い（３〜８）が
、成る場合には更に特別に生物変換を行なうのに使用さ
れる菌株に応じてｐＨを調節することが有用であり必須
でさえある。

撹拌条件及び酸素化条件は使用される菌株に依存し当業
者に知られている。

既に上記した如く、本性はモノニトレート混合物または
主として１つのモノニトレートが得られることを可能に
する。

−ＧＭＮ−１はカニングハメラエレガンスヲ用いて得ら
れる（選択率８４％）。

−Ｃ；ＭＮ−１はゲオトリクムカンジダムを用いて得ら
れる（選択率６５％）。

−ＧＭＮ−２はスポロトリクムパネランスを用いて得ら
れる（選択率１００％）。

−ＧＭＮ−２はファネロキーテクリソスポリウムを用い
て得られる（選択率１００％）。

−ＧＭＮ−１はハクキョウサン病菌属テネラまたはハク
キョウサン属バシアナを用いて得られる（選択率６０％
）。

−ＧＭＮ−２及びＧＭＮ−１はケカビ属ブロムボイスを
用いて、またはゲオトリクムエキシレを用いて等比率で
得られる。

本発明の方法のその他の特徴及び利点は、下記の実施例
により、及びゲオトリクムカンジダムＣＢ５２３−３７
６によるニトログリセリンの生物変換を時間の関数とし
て表わす１つの図面により説明される。

１　４−蕉蘭斗蒸 一培地の組成ニ ジフコ・イースト・エクスト ラクト（商標）　−−−−−・−−−−−−一−−・・
−・−・−・・−・−・・・・−・４ｇ７２モルト・エ
クストラクト　（商標）・・・１０ｇ／ｊ！Ｄ−グルコ
ース・−・・−・・・・・−・−−一−−・・・−・−
・−・−・４ｇ／２蒸留水−・−・−−一−−−・・・
−・・〜・・・−・−・−・・−・−・・・−・・−ｉ
ｚにする量ｐＨ６，８にセットする ジフコ・イースト・エクストラクト（商標）及びモルト
・エクストラクト（商標）はザ・ジフコ・カンパニ４　
（ｔｈｅ　Ｄｉｆｃｏ　Ｃｏｍｐａｎｙ）から市販され
る酵母抽出物及びモルト抽出物である。

１ｌ５℃で２０分間殺菌 一トウィーン８０（商標）の名称で知られるスルホネー
トの如き界面活性剤が添加される殺菌水に懸濁された、
ファネロキーテクリソスポリウム＾ＴＣＣ３４５４１を
平均濃度５Ｘ１０’胞子／Ｉｉ１で含む接種溶液の調製
。

２５０ｄの円錐形フラスコ中の培地５０ｍ１の接種溶液
１ｄによる接種。

かくして得られる培養菌は２４°Ｃで保温され、回転振
とう器で振とうされる。

２−９生匂薫−填 接種３日後に、下記のものが無菌条件下で添加される。

エタノール性のニトログリセリン溶液３％強度（１ｌ０
マイクロモル）１／ｄの添加。

第１の添加の７日後に、上記のニトログリセリン溶液ｌ
ｌ１ｌの添加。

第２の添加の１０日後に、上記のニトログリセリン溶Ｗ
！ｉ、１ＩＩｌｌの添加。

ニトログリセリンの生物変換が、３ａ！上澄液のアリコ
ツト部分を高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣと称
される）（ＣＩ８カラム、溶出液としてｌＯ％強度メタ
ノール）により経時的に追跡される。

３−１牛、城、物−の、抽、出、及、び、巣、瑚トリニ
トログリセリンの最後の添加の１２日後に、培養液の遠
心分離。

酢酸エチルを用いて上澄液の５回の連続抽出。

硫酸ナトリウムによる有機相の乾燥、続いて減圧下の蒸
発。

シリカを用いるクロマトグラフィーによる精製。

４−精、平 μモルで表わされる結果が、トリニトログリセリン及び
その加水分解誘導体を含む標準溶液と比較して得られる
。

その量の評価は培地の蒸発を考慮に入れない。

その蒸発は培地が培養相及び生物変換相中で撹拌される
場合にはごくわずかではない。得られた結果が表１に示
される。

（：、ＤＮ−１，３はグリセリル１．３−ジニトレート
を表わす。

ＧＤＮ−１，２はグリセリル１．２−ジニトレートを表
わす。

表」−ファネロキーテクリソスポリウムＡＴＣＣ３４５
４１によるトリニトログリセリンの生物変換計算（Ｉ！
！（％）　　　実測値（％）Ｃ２６，３２Ｇ、２２ Ｈ５，１５，３７ Ｎ　　　　　　１０．２　　　　　　　１０．３０ｃｏ
ｃｐ、中の？８液中で得られるプロトンＮＭＲスペクト
ルは、この化合物がグリセリル２−モノニトレートに相
当することを示す（０２０の添加は２つのピークを生じ
、このピークは消失すべきヒドロキシル１及び３の水素
にＳＮされる）。

生成物の収率　　：９７％ 中離生成物の収率：４０％ ＧＭＮ−２選択率＝１００％ ＨＰＬＣにより純粋な形態で得られる主生成物は、下記
の元素分析に従ってＣｚｌｌＪＯｓに相当する。

喚 ｌ−穐尺閑、失處 培地の組成は実施例１の培地の組成と同じである。

１ｌ５°Ｃで２０分間の培地の殺菌。

寒天管中の予備培養菌から採取されたゲオトリクムカン
ジダムＣＢ５２３−３７６の２．５Ｘ１０’個の胞子に
よる２１の円錐形フラスコ中の培地２５０ｄの接種。

回転振とう器で２４゛Ｃで３日間のこの溶液の振とう。

２−牛葡薫、凍 エタノール中の４％強度のトリニトログリセリン溶液３
．７５ｄ　（６６０μモル）の添加。

７日後、第１の添加と同じ添加。

ニトログリセリンの生物変換が実施例１と同様にして経
時的に追跡される。

３−失城、物、９．１巾、串、及、び、巣、屡トリニト
ログリセリンの第二の添加の６日後に培荏液の遠心骨Ａ
Ｉ。

酢酸エチル５×１００１ｌ１ｌを用いて上澄液からグリ
セリル１−モノニトレート及びグリセリル２−モノニト
レートの抽出。

有機相の乾燥及び蒸発により、残渣が得られる６残渣を
そのままシリカゲルに１多す。

Ｃｌ１ｔＣｆｆ　２　／ＣＩ＋３０８混合物（９５１５
）を用いる溶出によるグリセリルモノニトレ−１−の分
離。

４−４精湯 実施例１に記載される条件下で、結果がμモルで表わさ
れ、表２に示される。

ｍ　　ゲオトリクムカンジダムＣＢ５２３−３７６によ
るトリニトログリセリンの生物変換 生成モノニトレート（ＧＭＮ−１及び ＧＭＮ−２の混合物）の収率　　　　　：９５％単離モ
ノニトレート（ＧＭＮ−１及び ＧＭＮ−２の混合物）の収率　　　　　：９０％ＧＭＮ
−１選択率　　　　　　　　：６５％プロトンＮＭＲは
、得られる混合物中にＧＭＮ−２の２倍多いＧＭＮ−１
があることを示す。

時間の関数としてゲオトリクムカンジダムＣＢ５２３−
２７６によるニトログリセリンの生物変換が第１図に示
される。

図中、−・−・−はニトログリセリン濃度を表わす。

・・−・Ｘ−・・Ｘ−・・・−はグリセリル１．３−ジ
ニトレート濃度を表わす。

−・・・・・０−・０−・・−はグリセリル１．２−ジ
ニトレート濃度を表わす。

ム□はＧＭＮ−１及びＧＭＮ−２のン昆合物の濃度を表
わす。

培地の組成は実施例１の培地の組成と同じである。

実施例１に記載された操作に従って培地の殺菌。

界面活性剤（０，１％の濃度のトウィーン８０（商標）
）を含む栄養寒天の管中の予備培養から誘導されるカニ
ングハメラエレガンヌ、へ丁ＣＣ９２４５の胞子！Ｑ濁
液１　ｍｌによる２１円錐形フラスコ中の培地２５０ｍ
ｆｆ１の接種。

かくして得られた培養菌は２４°Ｃに保温され、回転振
とう器中で振とうされる。

２−８牛、物薫、ｉ袋 接種の３日後に、ニトログリセリンの４％強度のエタノ
ール性溶液５ｄ（７２４μモル）の添加。

ニトログリセリンの経時的な生物変換が）Ｉ　Ｐ　１．
Ｃを用いて追跡される。

３−、ｊ！＋、＃５゜ 前記の実施例と同じ操作に従う。

４−１結盟 実施例１に記載された条件下で、結果がμモルで表わさ
れ表３に示される。

ＪＬ３−　　カニングハメラエレガンスＡＴＣＣ９２４
５によるトリニトログリセリンの生物変換 生成モノニトレー）　（ＧＭＮ−１及びＧＭＮ−２の混
合物）の収率 生成ＧＭＮ−１の収率 ＧＭＮ−１選択率 ＝５８％ ８４９％ 二８４％ １−１鹿蚕、菌、の、傷戊 一培地の組成は実施例１の培地の組成と同じである。

一実施例１に記載された操作による培地の殺菌。

−界面活性剤（０，１％の濃度のトウィーン８０（商標
））を含む水１〜５１ｌｄｌ中で無菌条件下で採取され
た傾斜栄養寒天の管から得られるハタキゴウサン病菌届
バシアナＡＴＣＣ７１５９胞子による２５０／ｄの円錐
形フラスコ中の培地５０ｄの接種。

一連続的に振とうしなから２４゛Ｃで培養。

２−失獅薫、ｉ袋 接種の３日後に、ニトログリセリンの３％強度のエタノ
ール性溶液１＋Ｊ（１ｌ０μモル）の添加。

時間の関数としてニトログリセリンの生物変換が、培養
上澄液のアリコツト部分の＋１　Ｐ　Ｌ　Ｃ分析を用い
て追跡される。

３−抽、出 上記の実施例と同（、；燥作に従う。

４−結果 結果が実施例１に記載された条件下でμモルで表わされ
、表４に示される。

ｌ↓　ハクキョウサン病菌属バシアナＡＴＣＣ７１５９
によるニトログリセリンの生物変換 一生成モノニトレート（ＧＭＮ−１及びＧＭＮ−２の混
合物）の収率 −ＧＭＮ−１選択率 二８２％ 二６０％ １−、鹿ｉ、面袈床 一培地の組成は実施例１の培地の組成と同じである。

一実施例１に記載された操作による培地の殺菌。

スポロトリクムバラネンス（Ｍｕｓｅｕｍ　ｄ’ｈｉｓ
ｔｏｉｒｅｎａｔｕｒｅ１ｌ−Ｐａｒｉｓ）の２Ｘ１０
’の胞子による２５０ｔｔｉｌｌの円錐形フラスコ中の
５０−の培地の接種。

この培養菌は２４°Ｃで連続的に撹拌される。

２−牛、’４′！！！諌、熾 一接種の３０後に、ニトログリセリンの４％エタノール
性溶液１ａｙｆｆｉ（１４５μモル）の添加。

３−生１人、物、の、抽、出、及−ｑ、巣、謂ニトログ
リセリンの添加の２１日後に上澄液の遠心分離。

一塩化ナトリウムによる飽和。

一酢酸エチルを用いる抽出。

一存機相の乾燥及び蒸発。

−得られた残渣のシリカゲルプレートによる精製。

４−８紡、黒 結果が実施例１に記載された条件下でμモルで表わされ
、表５に示される。

ｎ　　スポロトリクムバネランス１９９５　（パリ博物
館（Ｍｕｓｅｕｓ　　ｄ’ｈｉｓｔｏｉｒｅ　　ｎａｔ
ｕｒｅｌｌｅ−Ｐａｒｉｓ））によるニトログリセリン
の生物変換 ンの４％強度のエタノール性溶液１ｌＩ！１が培地に添
加される。１０日後、等比率のＧＭＮ−１＆びＧＭＮ−
２を含むＧＭＮ−１及びＧＭＮ−２の混合物の５０％収
率が得られる。

一生成ＧＭＮ−２の収率 −ＧＭＮ−２選択率 一単烈ＧＭＮ−２の収率 ニア３％ ：　１００％ ７４０％ 実施例１に記載されたのと同じ条件下で、培養菌が傾斜
栄養寒天の管中の予備培養から誘導されるケカビ属ブロ
ムボイスＣＢ５２４６５８胞子により培地５０ｒｔｒｌ
を接種することにより株化される。

２４′Ｃで振とうして３日後に、ニトログリセリニー椙
煮、液蔵、城 一培地の組成 バクトペブトン Ｄ−グルコース 酵母抽出物 ＭｇＳＯ４・６１ｌア０− ＫＩＩｔＰＯ。

ＥＤＴＡ第二銖 １ｌ５°Ｃで２０分間殺凹。

一テトラヒメナセルモフィラＢ４−１８６８の水性懸４
ＷＬ１〜２　ｒｔｒｌによる２５０−の円錐形フラスコ
中の２０ｇ／ε ５ｇ／２ Ｉ　　ｇ／Ｉ！ ０．２５　ｇ　／β ０．５ｇ／ｅ ３０ｍｇ／ｌ 培地５０ｄの接種。

生成培養液は２８°Ｃで保温され、適度で直線的な振と
う（１００回／分程度）でもって保持される。

細胞は顕微鏡で数えられる。

２−１生、？１．良懲 一培養物が培地５０ＩＩＩｉ当り３５　Ｘ　１０’個の
細胞の密度に達した時にエタノール中４％強度のニトロ
グリセリン３３μモルの溶液の添加。

−培養液と同じ条件下で振とう及び温度が保たれる。

時間の関数として生物変換の進展が上澄液のアリコツト
部分のＦＩＰＬＣにより監視される。

３−０搏−出 前記の実施例と同じ操作に従う。

４−５精、畢 結果は実施例１に記載された条件下で８モルで示され表
６に示される。

ｆＬｆｉ　　テトラヒメナセルモフィラ１ｌ４−１８６
８によるニトログリセリンの生物変換 テトラヒメナセルモフィラ８４−１８６８によるニトロ
グリセリンの加水分解は速く効率が良い、それはグリセ
リルモノニトレートのおおよそ等モルの混合物へと導（
、シかしながら、基質及び得られた生成物は、原生動物
の生存を維持するために強度に希釈される。ニトログリ
セリン（４％強度のエタノール性溶液中）の７０μモル
の供与量が５０戚当りに適用される、即ち１．４ミリモ
ルが適用される場合には、細胞はニトログリセリンを完
全に加水分解するものの第１日中に死滅する。

ノＬ晦ｔ８−　　　口　トルーグルチニスＡＴＣＣ１５
１２５１−相、誓薫進、へ 一培地の組成は実施例１の培地の組成と同じである。

１ｌ５°Ｃで２０分間の培地の殺菌。

−少量のロドトルラグルチニス＾ＴＣＣ１５１２５ｍ胞
による２５０ｄの円錐形フラスコ中の培地５０１ｄの接
種。

生成培養液は２４゛ｃに保温され、連続的な振とう（回
転振とう器、１８０回転／分）でもって保たれる。

２−失戊薫、億 一接種の３日後に、エタノール中の３％強度のニトログ
リセリン溶液１ｄ（１０７μモル）の添加。

−接種は培養液と同じ条件下で行なう。

生物変換の経時的な進展は予めシリカで処理されたアリ
コツト部分のＩＩＰＬｃを用いて追跡される。

３−０油、出 上記の操作に従う。

４−１精６來。

結果は実施例１に記載された条件と同じ条件下で８モル
で表わされ、表７に示される。

１エ　ロドトルラグルチニスＡＴＣＣｌ５１２５による
ニトログリセリンの生物変換 詩論：酵母はニトログリセリンをグリセリルモノニトレ
ートに加水分解し得る。しかしながら、この特別な場合
には、反応は遅い。

【図面の簡単な説明】

第１図は、実施例２で行なわれた生物変換を示す図であ
る。 図中、−・−・−はニトログリセリン濃度を表わす。 Ｘ・−ｘ−・はグリセリル１．３−ジニトレート濃度を
表わす。 ・・・−〇・−・ｏ−・・はグリセリル１，２−ダニ１
−レート濃度を表わす。 ム　　　はＧＭＮ−１及びＧＭＮ−２の混合物の濃度を
表わす。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、酵母、菌類及び原生動物からなる群から選ばれた微
   生物によるニトログリセリンから１種以上のグリセリル
   モノニトレートへの生物変換工程、好ましくは菌類によ
   る生物変換工程を含むことを特徴とする、グリセリルモ
   ノニトレート、またはグリセリルモノニトレートの混合
   物の製造方法。 ２、菌類がカニングハメラ属、ゲオトリクム属、スポロ
   トリクム属、ファネロキーテ属、ハクキョウサン病菌属
   、及びケカビ属の中から選ばれ、好ましくはカニングハ
   メラエレガンス種、ゲオトリクムカンジダム種、スポト
   リクムパラネンス種、ゲオトリクムエキシレ種、ファネ
   ロキーテクリソスポリウム種、ハクキョウサン病菌属テ
   ネラ種、ハクキョウサン病菌属バシアナ種及びケカビ属
   ブロムボイス種の中から選ばれることを特徴とする請求
   項１記載の方法。 ３、原生動物がテトラヒメナ属に属し、酵母がロドトル
   ラ属に属することを特徴とする請求項１記載の方法。 ４、微生物が遊離形態、または結合形態または例えば天
   然もしくは合成の重合体中に封入された形態で適用され
   ることを特徴とする請求項１〜３のいずれかに記載の方
   法。 ５、生物変換がニトログリセリンを含む微生物の培地中
   で行なわれることを特徴とする請求項１〜４のいずれか
   に記載の方法。 ６、ニトログリセリンが培地１ｌ当り２〜５ミリモル、
   好ましくは３〜４ミリモルの比で培地中に一度に全部添
   加されることを特徴とする請求項５記載の方法。 ７、生物変換が行なわれる培地が、 −酵母抽出物…………４〜２０ｇ／ｌ −モルト抽出物………５〜１５ｇ／ｌ −殺菌グルコース……２〜５０ｇ／ｌ を含むことを特徴とする請求項５及び６のいずれかに記
   載の方法。 ８、生物変換が２０℃〜５０℃の温度で起こり、培地の
   ｐＨが３〜８であることを特徴とする請求項５〜７のい
   ずれかに記載の方法。 ９、主としてグリセリル２−モノニトレートがスポトリ
   クムパラネンスまたはファネロキーテクリソスポリウム
   を使用することにより製造されることを特徴とする請求
   項１、２、４、５、６、７または８のいずれかに記載の
   方法。 １０、主としてグリセリル１−モノニトレートがカニン
   グハメラエレガンスまたはハクキョウサン病菌属テネラ
   またはゲオトリクムカンジダムを使用することにより製
   造されることを特徴とする請求項１、２、４、５、６、
   ７または８のいずれかに記載の方法。