JPH0291547A - 水分含量測定法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は、物質に保有される水分含量の新規な測定法に
関し、更に詳しくは乾燥減量法、カールフィッシャー法
のような従来使用されている水分測定法が適用出来ない
化合物、例えばペプチド、蛋白質、核酸、酵素のような
通常の方法では除去困難な水分を保有する高分子化合物
の水分含量を測定する方法に関する。

［従来の技術］ 物質に保有される水、即ち結晶水、吸着水。

結合水等の量の測定には、従来乾燥減量法やカールフィ
ッシャー法がよく使用され、ごく特殊な場合、近赤外ス
ペクトル法によって測定されていた。

［発明が解決しようとする問題点コ 然し乍ら、上記従来法は夫々に問題点を有している。即
ち、乾燥減量法は加熱によって測定試料物質に吸着、付
着或いは結晶水のような形で結合している水を脱離させ
て、その量を測定する方法であるため、試料に対して水
が分離する前に物質が分解しない程度の安定性が要求さ
れるが、有機化合物は一般に熱安定性が悪く、シかもペ
プタイ阻蛋白質、核酸等の有機高分子化合物は、熱安定
性が悪いばかりでなくそれに吸着された水を容易には脱
離させない性質が強い。

カールフィッシャー法は、試料中の水が沃素及び二酸化
硫黄と反応して、ピリジンやイミダゾールの様な塩基と
塩を形成することを利用するものであるが、還元性物質
や塩基性物質には適用することが出来ない。

また、近赤外スペクトル法では、測定波長として水の基
準吸収の倍音を利用するものであり、この領域のスペク
トルは夫々固有の吸収帯の幅が広いため、他の固有吸収
帯と重なり定量値の精度が悪い。

そこで、試料を損傷すること無く、試料化合物の種類に
あまり限定無く物質中の水分含量を測定する方法の開発
が望まれでいた。

［問題点を解決するための手段］ 近年バイオテクノロジーの発達に伴い生理活性な生体高
分子化合物またはその拮抗化合物、或いはそれらの類似
化合物が医薬、農薬等の分野において重要な位置を占め
てきていることに鑑み１本発明者らは、例えば蛋白質、
ベブタイド、核酸、酵素等に含まれる水分含量を、それ
らを根本的に破損すること無く。

容易に且つ精度良く測定する方法に関し、鋭意研究を重
ねた結果、物質中の水分を有機溶媒中に移行させ、これ
を赤外吸収スペクトル測定に付すことによって、上記目
的が達成されることを見出して本発明を完成した。

即ち本発明は、出来るだけ乾燥した雰囲気下で水分の除
去が困難な高分子化合物を水と親和性を有し該高分子化
合物が分散阻害を起こさないような水親和性の乾燥有機
溶媒に分散せしめて赤外吸収スペクトルを測定すること
を特徴とする水分の除去が困難な高分子化合物の水分含
量測定法である。

本発明の方法を適用するに当って、対象となる、水分の
除去が困難な高分子化合物の例としては、その様な性質
を有する化合物であれば特に限定はなく、蛋白質、ペプ
タイド、或いはそれらから構成されている酵素、核酸等
が挙げられる。

また、それらの試料物質を分散させるための溶媒として
は、試料物質が凝集、変性等の分散阻害を起こすような
ことのない無水の水親和性の有機溶媒であれば使用する
ことが出来るが、無水状態で吸湿性の強い溶媒が好まし
い０例えば、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、エ
チレングリコール、ジメチルスルホキシド、ジメチルホ
ルムアミド、ジメチルアセトアミド等の溶媒が挙げられ
る。

上記の溶媒中に試料化合物を分散させる場合には、出来
るだけ試料を微細な状態で均一に分散させるのが好まし
く、そのような状態を形成するための手段としては常法
で差し支えないが、乳鉢やホモジナイザーによる微粉化
、超音波による分散、それらの併用等が通常使用される
。

その様にして調製された測定試料は１通常の方法で赤外
吸収スペクトル測定に付される。

例えば、測定用セル中に試料物質中の水分の移行した溶
媒をいれ、例えばフーリエ変換型赤外分光光度計やレシ
オ型赤外分光光度計等で測定し、水の吸収帯３７００ｃ
ｍ”−”付近における吸光度を測定すれば良い。

［実施例］ 次に実施例及び参考例を挙げて本発明を一層具体的に説
明するが、本発明はこれによって限定されるものではな
い。

実施例１　ミオグロビン中の水分の測定グラブトドライ
ボックス内に乾燥窒素ガスを流して相対湿度１０％以下
とする。以後の実験操作は全てその雰囲気を保持するよ
うにし。

溶媒類は常法で脱水乾燥されたものを使用した。予め秤
量した２本のサンプル瓶を用意し、一方にミオグロビン
（シグマ社製、Ｔｙｐｅ　Ｉ）粉末５．１０ｍｇを秤量
した。２本のサンプル瓶に等しく乾燥アセトニトリル１
ｍｌを封入し、同じように室温で１０分間超音波分散（
ブランソン社製　Ｂ−２２０Ｈ型、１８５ワツト）を行
った。

試料物質を含む系、対照としての溶媒のみの系を、共に
同一の条件下同一規格のガラスフイルターで測定用透過
型セル（厚さｌ　ｍｍ）に直接にろ過して赤外吸収スペ
クトル測定用にコレ−社製、５Ｘ−６０Ｂフ一リエ変換
赤外分光光度計）の試量とした。

３６３３ｃ＋ｓ’″１〜３８６６ｃ＋ａ−１の吸光度の
積分値から水分含量は６．３％であった。

同様にして、次の試料について水分含量の測定を行った
。

パパイン（シグマ社製、Ｔｙｐｅ　ＩＩ）　２．４％。

リゾチーム（シグマ社製、Ｇｒａｄｅ　Ｉ）　］、、９
９％ヒトカルシトニン（特開昭６２−２９９９７号）１
１．８％。

参考例　アセトニトリル中の水分含量の検量線の作成 実施例１と同様に、乾燥窒素ガス処理したグラブトドラ
イボックスを使用して、水分含量が特定されたアセトニ
トリルを調製する。

検定済みの２５ｍ１容量のメスフラスコ６個を用意し、
夫々実施例１と同様に処理された乾燥アセトニトリル１
５＋ａｌをいれ、これに、夫々１μｍ、２μｌ、　３μ
ｌ、　４μｌ、　５μｍ及び２５μｍの水分を分注した
。次にアセトニトリルを加えて、全てを同じように２５
耐にした。この試料液を実施例１と同様の赤外スペクト
ル吸収測定用のセルにいれ、実施例１と全く同様にして
吸光度を測定して水分の検量線を作成した。これを第１
図に示した。

【図面の簡単な説明】

第１図は、水分を含有したアセトニトリルの水分含量に
対する検量線を示し、縦軸は吸光度であり、横軸は水分
含ｆｆ１（％）を示す。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、出来るだけ乾燥した雰囲気下で水分の除去が困難な
   高分子化合物を水と親和性を有し該高分子化合物が分散
   阻害を起こさないような水親和性の乾燥有機溶媒中に分
   散せしめて赤外吸収スペクトルを測定することを特徴と
   する水分の除去が困難な高分子化合物の水分含量測定法
   。 ２、高分子化合物の溶媒中への分散方法が超音波分散法
   である請求項１記載の方法。