JPH0261925B2 - - Google Patents
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- JPH0261925B2 JPH0261925B2 JP57203990A JP20399082A JPH0261925B2 JP H0261925 B2 JPH0261925 B2 JP H0261925B2 JP 57203990 A JP57203990 A JP 57203990A JP 20399082 A JP20399082 A JP 20399082A JP H0261925 B2 JPH0261925 B2 JP H0261925B2
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Description
本発明は、ヒトペプシンおよび／またはヒト白
血球ペプシン様酵素を有効成分とする食細胞機能
調節作用を有する医薬組成物に関する。 生体が恒常性維持のため営む機能の１つに免疫
能がある。外界から侵入した異物や、体内で異物
化した物質は生体にとつて害を及ぼす場合があ
り、感染症、アレルギー、腫瘍あるいは自己免疫
疾患などの疾患はその発症および進展に免疫能が
影響を与えることが知られている。その為、近
年、免疫能を調節することによりこれらの疾患を
治療する試みがなされ、腫瘍の治療に免疫調節剤
が用いられている。しかし、従来の免疫調節剤
は、主に体液性免疫や細胞性免疫のエフエクター
として働くリンパ球の機能を調節する薬剤であ
り、食細胞の機能を直接調節する薬剤の研究は少
ない。 食細胞は微生物などの生体内に侵入した異物や
腫瘍などの生体内で生じた異物を貧食、消化する
ばかりでなく、その異物の情報をリンパ球に伝え
ることにより免疫応答を調節する重要な役割を担
つている。また、痛風や動脈硬化症は体内で生じ
た尿酸あるいはコレステロール沈着物により発症
するものと考えられ、これらの沈着物の処理にも
食細胞が関与していることが推察されている。従
つて、食細胞機能調節作用を有する薬剤は、従来
リンパ球機能調節剤が使用されてきた疾患だけで
なく、感染症、痛風あるいは動脈硬化症などの疾
患の治療を可能にすると考えられる。 これらの観点から、本発明者らは食細胞機能調
節作用を有する医薬を開発すべく、長年にわたり
研究を重ねた結果、ヒトペプシンおよび／または
ヒト白血球ペプシン様酵素が食細胞を介する免疫
調節作用を示し、感染症、痛風および動脈硬化症
を改善することを見いだし、本発明を完成した。 本発明の有効成分であるヒトペプシンは公知の
酵素であり〔エテリントンら（Etherington）、ビ
オキミカ・エト・ビオフイジカ・アクタ
（Biochim.Biophi.Acta）236巻、92頁、1971年〕、
蛋白質を精製する場合に用いる一般的方法、例え
ば塩析法、無機吸着体による吸着クロマトグラフ
イー、イオン交換樹脂によるイオン交換クロマト
グラフイー、分子ふるい効果を有するゲルクロマ
トグラフイーなどを適宜組み合わせることによ
り、ヒト胃細胞、ヒト胃液、ヒト尿などから採取
することができる。また、ヒト胃細胞などのペプ
シン産生細胞と癌細胞を融合させた細胞の培養、
あるいは遺伝子工学的手法、例えばヒトペプシン
のメツセンジヤーRNAを鋳型として、逆転写酵
素によりコンプリメンタリーDNAを調製し、こ
のDNAを大腸菌などに組み込むことによつて、
大量に得ることができる。 例えば、ヒト尿をセイフアーら（Seijffers）の
方法（アメリカン・ジヤーナル・オブ・フイジオ
ロジー（Amer.J.Physiol.）206巻、1106頁、1964
年〕に準じ、0.1M酢酸緩衝液（PH5.3）にて平衡
化したDEAE−セルロースカラムを通過させるこ
とにより、ヒトペプシンを吸着させた後、0.3M
の塩化ナトリウムを含む同緩衝液にて溶出する。
溶出液を濃縮後、0.9％の生理食塩水に膨潤せし
めたセフアデツクスＧ−100によるゲルクロマト
グラフイーにてさらに精製し、本発明のヒトペプ
シンを得ることができる。このヒトペプシンは、
セフアデツクスＧ−100によるゲルクロマトグラ
フイーによる分析の結果、分子量32000−38000で
あり、アンフオライン等電点電気泳動法による等
電点は１−３であり、極大吸収274nm、ニンヒド
リン反応陽性、水に易溶、エーテル、クロロホル
ムに不溶である。 また、ヒト白血球ペプシン様酵素は既に出願し
た酵素であり（特願PCT−JP82−00213（国際公
開W083／04260））、蛋白質を精製する場合に用い
る一般的方法、例えば塩析法、無機吸着体による
吸着クロマトグラフイー、イオン交換樹脂による
イオン交換クロマトグラフイー、分子ふるい効果
を有するゲルクロマトグラフイーなどを適宜組み
合わせることによりヒト白血球、アクチノマイシ
ンＤで処理した前骨髄性白血病細胞HL−60株な
どから採取することができる。また、ヒト白血球
などのペプシン様酵素産生細胞と癌細胞を融合さ
せた細胞の培養、あるいは遺伝子工学的手法、例
えばヒト白血球ペプシン様酵素のメツセンジヤー
RNAを鋳型として、逆転写酵素により、コンプ
リメンタリーDNAを調製し、このDNAを大腸菌
などに組み込むことによつて、大量に得ることが
できる。 例えば、上記培養細胞をホモジユネートした上
清液を0.1M酢酸緩衝液（PH5.3）にて平衡化した
DEAE−セルロースカラムを通過させることによ
り、ヒト白血球ペプシン様酵素を吸着させたの
ち、0.5Mの塩化ナトリウムを含む同緩衝液にて
溶出する。溶出液を濃縮後、0.9％の生理食塩水
に膨潤せしめたセフアデツクスＧ−100によるゲ
ルクロマトグラフイーにてさらに精製することに
より、ヒト白血球ペプシン様酵素を得ることがで
きる。このヒト白血球ペプシン様酵素は、セフア
デツクスＧ−100ゲルクロマトグラフイーによる
分析の結果、分子量35000−41000、アンホライン
等電点電気泳動法による等電点は2.5−3.5であ
り、極大吸収278nm、ニンヒドリン反応陽性、水
に易溶、エーテル、クロロホルムに不溶である。
また、ヒト白血球ペプシン様酵素は、PH7.0以下
の酸性領域にて、ヘモグロビンに対して高い水解
活性を示し、その至適PHは2.0−3.5である。 以下、このヒトペプシンおよびヒト白血球ペプ
シン様酵素の有効性、毒性、用法および用量につ
いて説明する。 実験例１ ヒト単球の異物貧食能におよぼす影響 ヒト末梢血単球106個にヒトペプシンもしくは
ヒト白血球ペプシン様酵素を含む10V／Ｖ％牛胎
仔血清添加イーグル培地５mlを加えて37℃で培養
した。20時間後、培地をヒトペプシンもしくはヒ
ト白血球ペプシン様酵素および加熱処理したパン
酵母2X106個を含む10％牛胎仔血清添加イーグル
培地に替え、さらに２時間培養した。培養後、単
球を観察し、貧食率を次式により、計算した。 貧食率（％）＝赤血球貧食単球／全単球 結果を第１表に示した。
血球ペプシン様酵素を有効成分とする食細胞機能
調節作用を有する医薬組成物に関する。 生体が恒常性維持のため営む機能の１つに免疫
能がある。外界から侵入した異物や、体内で異物
化した物質は生体にとつて害を及ぼす場合があ
り、感染症、アレルギー、腫瘍あるいは自己免疫
疾患などの疾患はその発症および進展に免疫能が
影響を与えることが知られている。その為、近
年、免疫能を調節することによりこれらの疾患を
治療する試みがなされ、腫瘍の治療に免疫調節剤
が用いられている。しかし、従来の免疫調節剤
は、主に体液性免疫や細胞性免疫のエフエクター
として働くリンパ球の機能を調節する薬剤であ
り、食細胞の機能を直接調節する薬剤の研究は少
ない。 食細胞は微生物などの生体内に侵入した異物や
腫瘍などの生体内で生じた異物を貧食、消化する
ばかりでなく、その異物の情報をリンパ球に伝え
ることにより免疫応答を調節する重要な役割を担
つている。また、痛風や動脈硬化症は体内で生じ
た尿酸あるいはコレステロール沈着物により発症
するものと考えられ、これらの沈着物の処理にも
食細胞が関与していることが推察されている。従
つて、食細胞機能調節作用を有する薬剤は、従来
リンパ球機能調節剤が使用されてきた疾患だけで
なく、感染症、痛風あるいは動脈硬化症などの疾
患の治療を可能にすると考えられる。 これらの観点から、本発明者らは食細胞機能調
節作用を有する医薬を開発すべく、長年にわたり
研究を重ねた結果、ヒトペプシンおよび／または
ヒト白血球ペプシン様酵素が食細胞を介する免疫
調節作用を示し、感染症、痛風および動脈硬化症
を改善することを見いだし、本発明を完成した。 本発明の有効成分であるヒトペプシンは公知の
酵素であり〔エテリントンら（Etherington）、ビ
オキミカ・エト・ビオフイジカ・アクタ
（Biochim.Biophi.Acta）236巻、92頁、1971年〕、
蛋白質を精製する場合に用いる一般的方法、例え
ば塩析法、無機吸着体による吸着クロマトグラフ
イー、イオン交換樹脂によるイオン交換クロマト
グラフイー、分子ふるい効果を有するゲルクロマ
トグラフイーなどを適宜組み合わせることによ
り、ヒト胃細胞、ヒト胃液、ヒト尿などから採取
することができる。また、ヒト胃細胞などのペプ
シン産生細胞と癌細胞を融合させた細胞の培養、
あるいは遺伝子工学的手法、例えばヒトペプシン
のメツセンジヤーRNAを鋳型として、逆転写酵
素によりコンプリメンタリーDNAを調製し、こ
のDNAを大腸菌などに組み込むことによつて、
大量に得ることができる。 例えば、ヒト尿をセイフアーら（Seijffers）の
方法（アメリカン・ジヤーナル・オブ・フイジオ
ロジー（Amer.J.Physiol.）206巻、1106頁、1964
年〕に準じ、0.1M酢酸緩衝液（PH5.3）にて平衡
化したDEAE−セルロースカラムを通過させるこ
とにより、ヒトペプシンを吸着させた後、0.3M
の塩化ナトリウムを含む同緩衝液にて溶出する。
溶出液を濃縮後、0.9％の生理食塩水に膨潤せし
めたセフアデツクスＧ−100によるゲルクロマト
グラフイーにてさらに精製し、本発明のヒトペプ
シンを得ることができる。このヒトペプシンは、
セフアデツクスＧ−100によるゲルクロマトグラ
フイーによる分析の結果、分子量32000−38000で
あり、アンフオライン等電点電気泳動法による等
電点は１−３であり、極大吸収274nm、ニンヒド
リン反応陽性、水に易溶、エーテル、クロロホル
ムに不溶である。 また、ヒト白血球ペプシン様酵素は既に出願し
た酵素であり（特願PCT−JP82−00213（国際公
開W083／04260））、蛋白質を精製する場合に用い
る一般的方法、例えば塩析法、無機吸着体による
吸着クロマトグラフイー、イオン交換樹脂による
イオン交換クロマトグラフイー、分子ふるい効果
を有するゲルクロマトグラフイーなどを適宜組み
合わせることによりヒト白血球、アクチノマイシ
ンＤで処理した前骨髄性白血病細胞HL−60株な
どから採取することができる。また、ヒト白血球
などのペプシン様酵素産生細胞と癌細胞を融合さ
せた細胞の培養、あるいは遺伝子工学的手法、例
えばヒト白血球ペプシン様酵素のメツセンジヤー
RNAを鋳型として、逆転写酵素により、コンプ
リメンタリーDNAを調製し、このDNAを大腸菌
などに組み込むことによつて、大量に得ることが
できる。 例えば、上記培養細胞をホモジユネートした上
清液を0.1M酢酸緩衝液（PH5.3）にて平衡化した
DEAE−セルロースカラムを通過させることによ
り、ヒト白血球ペプシン様酵素を吸着させたの
ち、0.5Mの塩化ナトリウムを含む同緩衝液にて
溶出する。溶出液を濃縮後、0.9％の生理食塩水
に膨潤せしめたセフアデツクスＧ−100によるゲ
ルクロマトグラフイーにてさらに精製することに
より、ヒト白血球ペプシン様酵素を得ることがで
きる。このヒト白血球ペプシン様酵素は、セフア
デツクスＧ−100ゲルクロマトグラフイーによる
分析の結果、分子量35000−41000、アンホライン
等電点電気泳動法による等電点は2.5−3.5であ
り、極大吸収278nm、ニンヒドリン反応陽性、水
に易溶、エーテル、クロロホルムに不溶である。
また、ヒト白血球ペプシン様酵素は、PH7.0以下
の酸性領域にて、ヘモグロビンに対して高い水解
活性を示し、その至適PHは2.0−3.5である。 以下、このヒトペプシンおよびヒト白血球ペプ
シン様酵素の有効性、毒性、用法および用量につ
いて説明する。 実験例１ ヒト単球の異物貧食能におよぼす影響 ヒト末梢血単球106個にヒトペプシンもしくは
ヒト白血球ペプシン様酵素を含む10V／Ｖ％牛胎
仔血清添加イーグル培地５mlを加えて37℃で培養
した。20時間後、培地をヒトペプシンもしくはヒ
ト白血球ペプシン様酵素および加熱処理したパン
酵母2X106個を含む10％牛胎仔血清添加イーグル
培地に替え、さらに２時間培養した。培養後、単
球を観察し、貧食率を次式により、計算した。 貧食率（％）＝赤血球貧食単球／全単球 結果を第１表に示した。
【表】
酵素
Claims (1)
- １ ヒトペプシンおよび／またはヒト白血球ペプ
シン様酵素を有効成分とする食細胞機能調節作用
を有する医薬組成物。
Priority Applications (11)
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|---|---|---|---|
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