JPH02503199A - 安定化ヘパリン溶液 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 安定化ヘパリン溶液 技術分野 ロックの米国特許第４，３５９，４６３号には、カルシウムキレート化抗凝固剤 （例えばＣＰＤまたはＡＣＤ）中に採血した血液中に普通存在する当初の第■因 子活性は、カルシウムを実質上正常な生理学的レベルへ回復するのに十分な量の カルシウム／ヘパリン溶液を新たに採血した血液または血漿と混合することによ って維持し得る方法が記載されている。典型的には、使用される溶液は塩化カル シウムとヘパリンを含有する。

潰れるプラスチック容器中に貯蔵のためのヘパリン含有溶液は、典型的にはリン 酸塩、例えばリン酸モノナトリウムで緩衝化される。

このため安定なカルシウム／ヘパリン溶液を得る試みでそのようなヘパリン溶液 へカルシウムイオンを添加するとき困難に遭遇する。

リン酸カルシウムがそのような状況においては溶液から容易に沈澱し得る。

しかしながらヘパリンは溶液中で安定化するために緩衝化されなで熱滅菌および パスツールｖＩｉ薗サイクルに耐えるように緩衝化されなければならない、その ことは勿論採血した血液または血漿へ安全に投与し得る無菌ヘパリン溶液を提供 する前工程として必要である。

血液または血漿中の第■因子活性に対するヘパリンおよびカルシウムの影響を論 じた他の参照は、Ｍｏｒｇｅｎｔｈａｌｅｒ　ｅｔ　ａｌ、　”Ｉｎｆｌｕｅｎ ｃｅｏｆ　Ｈｅｐａｒｉｎ　ａｎｄ　Ｃａ１ｃｉｕｓ＋　Ｃｈｌｏｒｉｄｅ　ｏ ｎ　Ａｓ５ａｙ、　　５ｔａｂｉｌｉｔｙ　ａｎｄＲｅｃｖｅｒｙ　ｏｆ　Ｆａ ｃｔｏｒ■、　”　違■」μｍ、　４８．８−１７　（１９８５）　　と、”５ ｔａｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ■：　Ｃｉｎ　ｐｌａｓｍａ：　Ｔｈｅ　Ｄｅｐｅｎｄ ｅｎｃｅ　ｏｎ　ＰｒｏｔｅａｓｅＡｃｔｉｖｉｔｙ　　ａｎｄ　　　Ｃａｌｃ ｉｕｍ、”　　Ｔｈｒｏ＋＊ｂｏｓｉｓ　　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　　２９＋　　５ ２１−５３５　@（１９Ｂ３） と題するＲｏｃｋ　ｅｔ　ａｌの論文である。

本発明の説明 本発明により、血液からの第■因子の採取の収率および他のプロセスパラメータ の改善のために使用するための熱滅菌し得る安定なカルシウムおよびヘパリンの 水溶液が提供し得る。該溶液は典型的には存在する溶液−当りヘパリン、好まし くはヘパリンナトリウムの５ないし１００ＯＵｓＰ単位と、そして溶液！あたり 乳酸カルシウム１０ないし１００ミリモルを含んでいる。これらの溶質は好まし くは溶液中に完全に溶け、血液または血漿へ添加した時凝血を阻止するのに十分 なヘパリンが存在する。

存在する乳酸カルシウムは驚くべきことに二重の機能を発揮することが判明した 。第１にそれはヘパリンに対する改良された安定剤であり、そのためそのような 溶液は慣用の滅菌サイクルのもとで熱滅菌することができ、そしてヘパリン活性 のより少ない損失をもつすることができる。該溶液は非毒性であり、そして血液 から治療用投与形に第■因子を単離するための既知慣用プロセスにおいて改良さ れた収率および他の改良を提供するために宵月である。そのような治療用投与形 の製造は今日では商業的活動であり、良く知られたプロセスである。

典型的には、本発明の溶液はｌあたり乳酸カルシウム約１５ないン約５０ないし ２００ＵＳＰ単位を含有する０本発明によるヘパリン濃度は、ＵＳＰ公定書第２ １巻４８１−４８２頁に一般に記載されているヘパリンナトリウムのためのＵＳ Ｐアンセイに従ってアッセイすることができる。このアッセイ方法は、凝血の程 度を目視で測定する代わりに、より大きい精度のため利用し得る凝血タイミング 装置において凝血時間を測定することによって修飾される。ここでのデータはそ のような修飾方法によって集められた。

本発明の溶液の使用のため、新たに採血した血液、または例えばバクスター、イ ンターナシラナル、インコーホレイテッドのフェンウオール部門によって販売さ れているオートフェレーシスＣユニットを使用する血漿搬出分離によって新たに 分離した血Ｆｒ（任意の慣用手段によって分離した）へ該溶液を添加することが できる。血液または血漿の１単位あたり本発明の溶液２０ないし５０ｍを添加す ることができる。血漿の１単位は体積的６００ｄである。典型的には、添加ステ ップは血漿を別々の単位へ分離した直後に行うことができ、血漿は最初の採血プ ロセスからＡＣＤまたはＣＰＤのような抗凝固剤を含有している。血漿の実質量 が別々の血漿容器へ入った量の凝血を開始し得る本発明の溶液の過剰濃度を感知 するのを防止する。

血漿が溶液の所望量（例えば血漿１単位あたり溶液４０ｄ）と混合した後、得ら れる血漿／溶液混合物は米国特許第３．６５２．５３０号まスにより、Ｒｏｃｋ の米国特許第４．２０３．８９１号に記載されているように処理し得る０本発明 の溶液は溶液中のヘパリンの安定化に有意義な利益を発揮するばかりでなく、そ れは治療用の抗血友病因子の単離のための多くの慣用プロセスにおいて臨床的に 使用し得る抗血友病因子（第■因子）の改良された収率を提供する。

乳酸イオンはある種の０Ｍ透析液および静脈内液（例えば乳酸添加リンゲル溶液 ）に使用されており、そして乳酸カルシウムはある種のプロスタグランジン組成 物のための安定剤として知られているが（英国特許第１，５８２．１６２号）、 乳酸カルシウムは溶液中のヘパリンの安定剤として決して使用されていない、先 行技術のヘパリン溶液は、本出願の溶液よりも耐熱性および／または貯蔵寿命に おいて安定でなく、そのため本発明の利用は以前には容易に得ることはできなか つた。

本発明を例証するため、以下の実施例が開示される。

実施例１ 水５ｊ！ヘヘパリンナトリウム′２．０７ｇ（３（ｌｄあたり１８４１ＵＳＰ単 位）と塩化ナトリウム４５ｇを加えた。この溶液を後の処理のため１ｊ！宛に３ 分した。１番目のＩ！溶液（溶液１）へは塩化カルシウムイオン２．９４ｇと、 ｐＨを８．５へＵ４節するのに必要量の水酸化ナトリウム溶液を加えた。２番目 の１１溶液（溶液２）へはグルコン酸カルシウム−水塩＆９７ｇを加えた。３番 目の１！溶液（溶液３）へは乳酸カルシウム五水酸６．１７　ｇを加えた。この ように溶液工ないし３は各自実質上２０ｍＭ／ｊ！のカルシウムを含有した。

溶液工ないし３の供給源から、−次採血バッグ（バクスター、インターナシ習ナ ル、インコーホレイテッドのフェンウオール部門）が溶液の１種の３０ｄ宛で充 填され、多数のそのようなバッグを調製した。バッグの一部は慣用の滅菌サイク ル（１１５〜１２０℃で５０〜７５分間）で滅菌された。バッグは次に貯蔵のた めアルミ箔バッグ中に包装され、そして前述したアッセイ方法に従ってヘパリン を定量する前に９６℃において１７０分間パスツール′Ｉ！＆菌した。

最初のバルク５１ヘパリン溶液は、滅菌前ヘパリン６１．４ＵＳＰ単位／ｄを示 した。

溶液１に関しては、非滅菌溶液はｐ　Ｈ６，４０を持っていたが、滅菌溶液はｐ Ｈ４，４４を持ち、そしてヘパリン約５８．６ＵＳＰ単位／ｄと定量された。

溶液２に関しては、非滅菌溶液はｐＨ６，４２を持っていたが、滅菌溶液はｐＨ ４，４４を持ち、そしてヘパリン約５１．５ＵＳＰ単位／ｉと定量された。

乳酸カルシウムを含んでいる溶液３に関しては、非滅菌溶液はｐＨ６，８を持っ ていたが、ｍ菌溶液はｐＨ５，６１を育し、そしてヘパリン約６０．４０　Ｓ　 Ｐ単位／ｄと定量された。

このように、溶液３のヘパリン含量およびｐＨは、存在する活性ヘパリンおよび ｐＨの著しい減少を防止するのに失敗した溶液１および２に比較する時、滅菌プ ロセスを通じて保持された。

分離した血漿１単位が滅菌した溶液３を収容したドナーバッグの一つへ入れられ る時、生成する混合物は、治療用途に通した単離し°た第■因子のより容易性お よび高収率をもって処理することができる。好ましくは、処理すべき血漿ｄ当り ヘパリン０．２ないし４０ＵＳＰ単位を提供する量の溶液３が添加される。

実施例２ （Ａ）実施例１に記載した溶液３のサンプルが前記したタイプのシールした箔で 包んだ血液バッグ中で室温において６ケ月貯蔵された。当初、滅菌した溶液はヘ パリン約６０．４　Ｕ　Ｓ　Ｐ単位／ｄと定量され、そしてＰＨ５，６１を有し ていた。６ケ月の終わりにおいて、溶液はヘパリン約５８．６　Ｕ　Ｓ　Ｐ単位 ／、ｄと定量され、そしてＰＨＦｓ。

４６を有していた。

（Ｂ）上の実施例１で調製した溶液３の他の容器は４５℃で３ケ月貯蔵された。

当初、これら容器はヘパリン約６０．４υＳＰ単位／ｄと定量され、そしてｐＨ ５，６１を持っていた。３ケ月後貯蔵後、これら容器はヘパリン約６λ４ＵＳＰ 単位／ｉと定量され（この増加は明らかにアッセイ操作の実験誤差のためである ）、そしてＰＨ５，３５を示した。

上昇温度においてさえも、貯蔵中ヘパリンまたはｐＨの低下は全（または少しし か起こらないことが見られる。

（Ｃ）上の実施例１で調製した溶液３の他の滅菌したサンプルは、実施９１２　 （Ａ）で述べたヘパリンアッセイおよびｐＨを当初育していた。４５℃において １ケ月貯蔵後、ヘパリンアッセイは約６１．９ＵＳＰ単位／ｄであり、そして溶 液はｐ　Ｈ５，４９を育し、ヘパリン含量およびＰＨの低下のどちらもないこと を示した０反対に、溶液１を同様に処理し、バッグ充填したサンプルはヘパリン アッセイ約６０、４　Ｕ　Ｓ　Ｐ単位／ｄを示した。

滅菌後、溶液はヘパリンアッセイ約６０．４υＳＰ単位／ｄを示した。４５℃に おいて１ケ月貯蔵後、溶液はヘパリンアッセイ約５６゜４ＵＳＰ単位／ｄを示し た。このように溶液１の貯蔵寿命は、溶液３の貯蔵寿命よりかなり短いことか見 られる。

二のように、本発明によって溶液の熱滅菌と、そして約５重量％以下のヘパリン 損失をもって６ケ月（またはそれ以上）の室温貯蔵を許容する安定なヘパリン水 溶液が提供される。

上記は例証目的のみで提供され、請求の範囲に規定する本発明の範囲を制限する ことを意図しない。

国際調査報告

Claims (15)

【特許請求の範囲】
1. １．血液または血漿へ添加した時凝血を阻止するのに有効な量のヘパリンと、溶 液ｌ当り１０ないし１００ミリモルの乳酸カルシウムを含有することを特徴とす る熱滅菌し得る安定なヘパリン水溶液。
2. ２．ｐＨが実質上４ないし７である第１項の溶液。
3. ３．溶液ｌ当り乳酸カルシウム約１５ないし５０ミリモルを含有する第１項の溶 液。
4. ４．溶液ｍｌ当りヘパリン約５ないし１０００ＵＳＰ単位が存在する第１項の溶 液。
5. ５．ヘパリンはそのナトリウム塩である第１項の溶液。
6. ６．溶液ｍｌ当りヘパリン５ないし１０００ＵＳＰ単位と、溶液ｌ当り乳酸カル シウム１０ないし１００ミリモルを含有し、ｐＨが実質上４ないし７であること を特徴とする熱滅菌し得るヘパリン水溶液。
7. ７．ヘパリンはそのナトリウム塩である第６項の溶液。
8. ８．溶液４当り乳酸カルシウム約１５ないし５０ミリモルを含有する第７項の溶 液。
9. ９．溶液ｍｌ当りヘパリン５０ないし２００ＵＳＰ単位が存在する第７項の溶液 。
10. １０．採取した血液または血漿へ、血液または血漿へ添加した時凝血を阻止する のに有効な量のヘパリンと、溶液ｌ当り１０ないし１００ミリモルの乳酸カルシ ウムを含有する無菌の安定な水溶液を２０ないし５０ｍｌ添加し、それによって それから第ＶＩＩ因子の抽出に改良が得られることを特徴とする方法。
11. １１．前記溶液のｐＨが実質上４ないし７である第１０項の方法。
12. １２．前記溶液は新たに分離された血漿へ添加される第１１項の方法。
13. １３．溶液ｍｌ当りヘパリン約５ないし１０００ＵＳＰ単位が存在する第１２項 の方法。
14. １４．溶液ｌ当り乳酸カルシウム約１５ないし５０ミリモルが存在する第１２項 の方法。
15. １５．前記ヘパリンはそのナトリウム塩である第１２項の方法。