JPH02501753A - 磁気応答ポリマー粒子の製造法およびその応用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 磁気応答ポリマー粒子の製造法およびその応用木主班葛立国 本発明は、磁気応答ポリマー粒子の製造法と、それらのイムノアッセイ、生医学 および産業用途における使用に関する。

生光旦至！量 イムノアッセイ、アフイニテイ精製等の多数の生物学的技術は結合分画の遊離分 画からの分離を必要とする。磁性粒子が所望の分離を容易にするために使用され ている。

磁性粒子は種々のプロセスを用いて種々の特性を有する種々の粒状および磁性物 質から形成されている。例えば、池田らの米国特許第４，５８２，６２２号はゼ ラチン、水溶性ポリサンカライド、リン酸ナトリウムおよび強磁性物質からなる 磁性粒子を開示し、米国特許第４，６２８，０３７号および第４，５５４，０８ ８号は高分子シランのコートによって囲まれた磁性金属酸化物よりなる磁性粒子 を開示し、米国特許第４．４５２，７７３号は水溶性ポリサッカライドもしくは 官能基を有するその誘導体によって被覆された強磁性酸化鉄（Ｆｅｚｅｓ）のコ アを有する別々のコロイドサイズの粒子を開示し、そしてマンスフイールドの米 国特許第４，２９７．３３７号は磁性ガラスもしくは結晶含有材料を粒子状担体 として開示する。

オ虞Ｍ 本発明は、形状および組成に関係なく、眞径約１ないし１００ミクロンの平均サ イズを有する、以後磁性粒子と呼ぶ磁気応答ポリマー粒子の新規製造法を提供す る。

本発明の磁性粒子は、約　ミクロン以下の平均サイズを持った、以下金属酸化物 と呼ぶ磁気応答金属酸化物を最初製造し、次に高分子コア粒子を金属酸化物を含 んでいるポリマーの層で被覆することによって製造することができる。これら磁 性粒子の表面は所望の表面特性を与えるためポリマーもしくは官能化したポリマ ーの他の層でさらに被覆することができる。

本発明によって製造される磁性粒子ばあらい表面をもってサイズ・が単分散され 、そして約５％ないし５０％、好ましくは１０％ないし２５％の磁性金属酸化物 含量を有する。これら特性を持っている粒子はイムノアッセイおよび多種類の生 医学用途に有用であることがわかった。これら磁性粒子は抗原、抗体、酵素また はＤＮＡ／ＲＮＡのような生物学的材料の受動的もしくは共有結合カップリング のために使用し、そして種々のタイプのイムノアッセイ、ＤＮＡ／ＲＮＡハイブ リッド化アッセイ、アフィニティー精製、細胞分離および他の生物学的材料のた めの固相として使用することができる。

この磁性粒子はまた、産業廃棄物の処理のような産業用途にも使用することがで きる。

月１騰ムはε延益 本発明の目的は、 磁気応答ポリマー粒子を容易に入手し得るポリマー粒子から容易に製造する方法 を開発すること、 緩和な沈降と速い磁気分離を有する磁気応答ポリマー粒子を製造する方法を開発 すること、 種々の表面電荷、および生物学的材料の受動的吸着もしくは共有結合のための官 能基を有する、磁気応答ポリマー粒子の製造法を開発すること、 これら磁気応答ポリマー粒子を使用する医学的、生物学的、診断および産業用途 を開発することである。

本発明の利益は、 約１ないし１００ミクロンのサイズを有する多種類のポリマーコアを磁気応答粒 子へ変換できること、 金属酸化物を用途に応じて変えることができること、表面を共有結合のための多 種類の官能基へ誘導体化できること、多種類のモノマーを生成するポリマーの異 なった表面特性を得るように最終コーティングに使用できること、架橋および架 橋しない磁気応答粒子を製造できること、単分散磁気応答ポリマー粒子を製造で きることである。

Ｈの−　なＵ 本発明の磁性粒子は、約１ミクロン以下の平均サイズを持った金属酸化物を最初 に製造することによって製造することができる。金属酸化物は２価および３価の 金属塩の混合物、好ましくは硫酸もしくは塩化第一鉄もしくは第二鉄の混合物を 水酸化ナトリウムと加熱しそして沈澱させることによって製造される。３価金属 塩に対する２価金属塩のモル比は、金属酸化物の所望のサイズおよび磁気特性を 得るため、０．５から２．０．好ましくは０．５から１．０まで変化させること ができる。３価金属塩に対する２価金属塩のモル比は金属酸化物のサイズに影響 し、３価の金属塩に対する２価の金属塩のモル比が小さいほど金属酸化物のサイ ズが小さくなる。３価金属塩に対する２価金属塩のモ゛ル比は得られる磁性粒子 の色相にも影響を及ぼし、このモル比が小さいほど得られる磁性粒子の褐色が明 るくなる。

好ましくは金属酸化物は超常磁性または常磁性であるが、磁気分離でなく遠心を クリーンアップの間使用する限り強磁性金属酸化物も使用できる。

マンガン、マグネシウム、コバルト、ニッケル、亜鉛および銅のような他の２価 遷移金属塩を２価鉄塩に代えてもよい。

金属酸化物が沈澱した後、上滑がｐＨ中性になるまで２５０Ｘｇにおいて遠心し て数回洗浄する。金属酸化物は脱イオン水中に再懸濁し、そして金属酸化物結晶 の塊を破砕するため高速度で機械的にかきまぜる。小さい寸法の金属酸化物結晶 を含んでいる上滑を集め、そしてペレットを脱イオン水中に再懸濁する。このプ ロセスは少な（とも３回、または金属酸化物の大部分が２５０Ｘｇでペレット化 しなくなるまで繰返す。大きな結晶を除去するための１１００Ｘにおける低迷度 遠心はサイズを０．８ミクロン以下に減らすであろう。

１．０ミクロン以下の平均サイズを有する金属酸化物はモノマーと混合し、開始 剤の存在下ｌないし１００ミクロンのサイズのポリマーコア粒子、好ましくはポ リスチレン粒子上に被覆される。少量の乳化剤の添加は粒子の凝集防止を助ける であろう、磁性粒子は次に金属酸化物の落下を防止するためポリマー、好ましく はポリスチレンの保護層で被覆される。もし官能化した磁性粒子を望むならば、 磁性粒子は生物学的材料の共有結合のためのカルボキシル、アミノまたはヒドロ キシのような官能基を与える官能化したポリマーの他の層でさらに被覆すること ができる。

本発明によって製造される磁性粒子は第１図に図示することができ、咳図におい てＡはコア粒子を表し、Ｂは金属酸化物／ポリマーコーティングを表し、Ｃは保 護ポリマーコーティングを表し、そしてＤは官能化ポリマーコーティングを表す 。第２図は本発明によって製造された磁性粒子の０．０８ないし０．１ミクロン スライスの透過型電子顕微鏡写真を示す。第３図は本発明によって製造された６ 、８ミクロン磁性粒子の走査型電子顕微鏡写真を示す。第３ａ図は１０００倍で あり、第３ｂ図は５０００倍である。

本発明において有用なポリマーコア粒子は、小粒子の分散液として得ることがで き、そしてモノマーを吸収しそれによって金属酸化物および七ツマー混合物をコ ア粒子の表面に被覆することができる任意のポリマーのものでよい。コア粒子は 任意の寸法および形状、好ましくは寸法が１ないし１００ミクロンで形状が球形 のものがよい。単分散コア粒子を使用するときは、生成する磁性粒子も寸法が単 分散であろう。コア粒子は、ジビニルベンゼン等のような架橋剤の存在または不 存在下、乳化重合、懸濁重合または他の重合手段によって得ることができる。コ ア粒子を製造するために使用できるモノマーの中にはスチレン、メタクリル酸メ チル、ビニルトルエン等がある。モノマーの混合物も使用できる。磁性金属酸化 物被覆または保護被覆のために使用するモノマーはコア粒子と同じタイプでも同 じタイプでなくてもよい。コア粒子に対する金属酸化物被覆に使用するモノマー の重量比は、所望する金属酸化物／ポリマー層の厚みに応じ、０．１ないし１２ ．好ましくは０．２ないし６でよい。第一鉄塩および第二鉄塩の混合物から製造 した金属酸化物を被覆に使用する時は、コア粒子に対する七ツマー重量比約０． １ないし０．５を使用するのが好ましい。しかしながらマンガン（ＩＩ）および 第二鉄塩の混合物から製造した金属酸化物を被覆に使用するときは、コア粒子に 対するモノマーの重量比は０．１ないし１２でよい。通常の有機溶媒に不活性な 架橋したｉｔ粒子が望ましい結果、架橋剤２ないし１０重量％、好ましくは８な いし１０重量％を含み、コア粒子に対するモノマー重量比３ないし１２．好まし くは４ないし６のモノマーをもってマンガン（Ｉｔ）および第二鉄塩の混合物か らつくった金属酸化物を使用するのが好ましい。金属酸化物／ポリマー被覆の間 低い（すなわち０．１ないし０．５）モノマー対コア粒子重量比を使用する時は 、磁性粒子の表面へ金属酸化物をさらに付着するため生成する磁性粒子をポリマ ー被覆の保護層でさらに被覆することが好ましい、しかしながら高いモノマー対 コア粒子比（すなわち３ないし１２）を使用する時は、保護ポリマーコーティン グは不必要である。

重合温度は５０°Ｃないし９０℃、好ましくは５５°Ｃないし６５°Ｃでよい。

重合開始剤は過硫酸カリウム等のような水溶性でも、過酸化ベンゾイル等のよう な水不溶性のどちらでもよい。放射線、イオン化等のような他の重合開始手段も 使用し得る。予想外にも、この磁性粒子はマンガン（ｎ）および第二鉄塩混合物 からつくった金属酸化物を被覆に使用する時は乳化剤を少しも使用することなく 製造できることがわかった。しかしながら第一および第二鉄塩混合物からつくっ た金属酸化物を被覆のために使用する時は、ドデシル硫酸ナトリウム、Ａｅｒｏ ｓｏｌ　２２．　Ｔｗｅｅｎ　２０またはＮｏｎ１ｃｌｅｔ　Ｐ−４０（ＮＰ　 ４０）のような乳化剤の少量は金属酸化物／ポリマーコーティングの間粒子の広 汎な凝集を防止するのに有用であることが判明した。同じ能力を有する他の乳化 剤も使用し得る。磁性金属酸化物含量は、金属酸化物／ポリマーコーティングの 間金属酸化物の異なる量を使用するこイ、細胞分離、酵素固定化およびアフィニ ティ精製のような種々のとにより、５％から５０％、好ましくは１０％から２５ ％まで変えることができる。金属酸化物含量を増すため多層金属酸化物／ポリマ ー被覆を採用することもできる。重合に通常使用される他の成分も所望の特性を 持った磁性粒子を得ることができる限り添加してもよい、金属酸化物／ポリマー コーティングのための成分は、金属酸化物／ポリマーコーティングプロセスの始 めに全部一時に加えることも、または段階的に加えることもできる。第一および 第二鉄塩混合物からつくった金属酸化物を使用するときは、成分を段階的に加え るのが好ましい、成分は真空もしくはアルゴンのような不活性ガスのもとに機械 的かきまぜ、転倒または他のかきまぜ手段によって混合することができる。官能 基は、金属酸化物／ポリマーコーティングの間モノマーと官能化モノマーの混合 物を使用するか、または終わりに磁性粒子を官能化上ツマ−の薄い層でオーバー コートすることにより、磁性粒子の表面へ取込むことができる。使用する官能化 モノマーは、メタクリル酸２−ヒドロキシエチル、メタクリル酸２−アミノエチ ル、トリメチルアンモニウムメチルメタクリレートメトサルフェート、ジメチル アミノエチルメタクリレート、メタクリル酸、ウンデシレン酸、メチルプロペン スルホン酸、ランデシレニルアルコール、オレイルアミン、グリシジルメタクリ レート、アクロレイン、グルタルアルデヒド等の１種または混合物から選ぶこと ができる。磁性粒子は金属酸化物／ポリマーコーティングまたは保護コーティン グに使用したものと異なるポリマーの層でオーバーコーテイングし、該ポリマー の表面特性を取入れることができる。

螢光イムノアッセイ、ラジオイムノアッセイ、酵素イムノアッセイに対するいく つかのモノクロナール抗体の混合物で処理される。

応用のための固相としての磁性粒子の種々の用途は、以下の論文によって例示さ れる文献に解説されている。旧ｒｓｃｈｂｅｉｎ　ｅｔ　ａＬＣｈｅｎｉｃａｌ 　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、　Ｍａｒｃｈ　１９８２＋　１７２−１７９（１９８ ２）；　Ｈａｉｌｉｎｇ　ａｎｄＤｕｎｎｉｌｌ＋　Ｅｎｚｙｍｅ　Ｍｉｃｒｏ ｂｅ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ＋　２：２−１０（１９８０）；　Ｍｏ５ｂａｃｈ ａｎｄ　Ａｎｄｅｒｓｏｎ＋　Ｎａｔｕｒｅ、　２７０：　２５９−２６Ｈ１９ ７７）；　Ｇｕｅｄｓｏｎ　ｅｔ　ａｔ、　Ｊ。

Ａｌｌｅｒｇｙ　Ｃ１１ｎｉｃａｌ　Ｉ＋ｍｍｕｎｏｌｏｇｙ＋　６０１）＋　 ２３−２７（１９７Ｂ）、いくつかの応用についても、酵素固定化について米国 特許第４，１５２，２１０号および第４，３４３，９０１号、細胞分離について 米国特許第３゜９７０．５１８号、第４，２３０．６８５号、第４，２６７．２ ３４号、イムノアッセイについて米国特許第４，５５４，０８８号、第４，６２ ８，０３７号および第３．９３３，９９７号に開示されている。

ある磁性粒子は一つの用途に有用であっても、他の用途においてはそうでないこ とがある。例えば、高分子シランの被覆によって一般に取囲まれた超常磁性金属 酸化物コアを含む、米国特許第４．５５４．０８８号および第４，６２８，０３ ７号に開示されている磁性粒子は、大きい表面積と遅い沈陳速度のためイムノア ッセイおよびアフィニティ精製において有用かも知れないが、しかし骨髄追放の ような細胞分離用途においては適当でない。これら二つの特許に開示されている 磁性粒子の小寸法のため、細胞懸濁液から磁性粒子のすべてを効果的に除去する ことは非常に困難である。さらに、正常細胞への小さい磁性粒子の非特異的結合 が高くなるであろう。骨髄追放のための磁性粒子の使用においては、磁性粒子は ヒツジ抗マウスＩｇＧのような抗体で被覆され、そして骨髄はがん細胞表面抗磁 性粒子はがん細胞のみに結合し、それらを強い磁場を通過させることにより正常 細胞から分離させるであろう。浄化された細胞は次に患者へ戻される。

本発明方法を使用することにより、磁性粒子は多種の生医学的応用のために寸法 、表面積、金属酸化物含量および表面特性について最適化されることができる。

本発明によって製造された磁性粒子は酵素イムノアッセイ、螢光イムノアッセイ 、ラジオイムノアッセイ、ＤＮＡ／ＲＮＡハイブリダイゼーションアッセイ、お よび他の診断用途に対する固相として使用することができる。イムノアッセイは 、当業者には自明なサンドイッチアッセイおよび競合的結合アッセイのような種 々の形態を使用して実行することができる。ＤＮＡ／ＲＮＡハイブリダイゼーシ ョンも固相ハイブリダイゼーションまたは液相ハイブリダイゼーションのような 種々の形態を使用して実行することができる。固相ハイブリダイゼーション形態 においては、ＤＮＡもしくはＲＮＡプローブ（キャッチャ−プローブ）が最初に 磁性粒子上に固定化される。次に固定化したキャッチャ−プローブはサンプル（ サンプルＤＮＡ）からのＤＮＡの相補的鎮とハイブリダイズするために使用され る。最後に螢光、放射性もしくは酵素トレーサーで標識され、サンプルＤＮＡの 他の部分とハイブリダイズすることができる他のプローブ（信号プローブ）が信 号発生のために使用される。液相ハイブリダイゼーション形態においては、キャ ッチャ−プローブおよび信号プローブが最初液相でサンプルＤＮＡとハイブリダ イズすることが許容され、次いで磁性粒子へ固定化される。

その代わりに、信号プローブも１個もしくは数個のビオチン基で標識することが でき、そして信号はアッセイの怒度を増強するため該ビオチン基をアビジン標【 した螢光、放射性もしくは酵素トレーサーと結合することに声って検出される。

イムノアッセイおよびＤＮＡ／ＲＮＡハイブリダイゼーションアッセイは、生物 学的サンプル中の薬物、ホルモン、抗体、ベプタイド、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ヌクレ オチット、ビールス抗原および炭水化物のような多種類の化合物を測定するため に使用することができる。

本発明によって製造された磁性粒子はアフィニティ精製、細胞分離、酵素固定化 および他の生医学的用途にも使用することができる。

細胞分離においては、磁性粒子は免疫学的反応または非免疫学的反応によって望 まない細胞を除去するため（ネガティブセレクション）、または望む細胞をエン リッチするため（ポジティブセレクション）に使用される。この原理は骨髄から がん細胞を除去するため（骨髄追放）、組織培養のためポジティブもしくはネガ ティブセレクションにより細胞集団を精製するため、および種々の細胞イムノア ッセイ等を実施するために使用することができる。アフィニティ精製においては 、磁性粒子は抗体、抗原、酵素、阻害剤、共因子、単一鎖ＤＮＡ、結合タンパク 、ハプテンおよび炭水化物等のような多種類の生物学的材料を精製するため、ポ リアクリルアミドゲル、セファロースゲルもしくは他のセルロースビーズのよう な慣用の固相の代わりに使用される。アフィニティ精製に似た他の応用において は、磁性粒子は抗血清または臨床サンプルから望まないタンパク成分を交差吸着 し、そして除去するために使用することができる。酵素固定においては、酵素は 酵素活性を保存しそして固定化酵素の再使用を許容するような種々の結合方法に よって磁性粒子上へ固定化される。酵素を固定化した磁性粒子は、炭水化物、ア ミノ酸、およびタンパク等のような多種類の物質を製造するため固定化酵素系に 普通に用いられるガラスピーズ、制御されたボアガラス、シリカゲルおよびセル ロースビーズ等のような他の固相に代えるために使用することができる。

本発明によって製造される磁性粒子は有害薬品、すなわち工業材料から有機また は無機溶剤を除去するため産業廃棄物処理のような工業的用途に使用することが できる。

これら応用は磁性粒子の大部分に共通な分離容易性、速い反応速度および大きい 表面積によってすべて容易化される。以下の実施例は本発明の多様性および利益 をさらに例証するために従供され、それらの細部は、本発明の精神および範囲を 逸脱することなく種々の均等物、変更および修飾を加え得ることが自明であり、 かつそのような均等具体例はその中に含まれることが意図されると理解されるか ら、限定と解すべきでない。

−のり著のための−・１ 実施例１ 機械的攪拌機、コンデンサー、温度計、滴下漏斗、および加熱マントルを備えた 二頭フラスコへ、脱イオン水４００ｄ中硫酸第−鉄０．３６１モルおよび硫酸第 二鉄０．３６９モル（Ｆ　ｅ”／Ｆ　ｅ””比−１）を含んでいる混合物を入れ た。混合物をかきまぜながら８５ないし９０°Ｃへ加熱し、６Ｎ水酸化ナトリウ ム８５０ｄを９０分にわたって滴下した。混合物をさらに１時間８５ないし９０ °Ｃにおいてかきまぜ、室温へ冷却した。金属酸化物沈澱を２５０Ｘｇにおいて １０分間遠心した。透明な上滑を傾しゃし、ペレットを脱イオン水９００Ｊｄ中 に機械的攪拌機を使用して再懸濁した。この清浄化プロセスを６回、もしくは上 清のｐＨが殆ど中性になるまでくり返した。上滑を傾しゃし、脱イオン水２００ １ｄに再懸濁した。２５０Ｘｇにおけるそれ以上の遠心は金属酸化物沈澱のすべ てをペレット化しないであろう。小寸法の金属酸化物を含んでいる上滑を集め、 ペレットを脱イオン水２００ｄ中に再？Ａ濁した。このプロセスを少なくとも３ 回、または金属酸化物の大部分が２５０Ｘｇにおいてもはやペレット化しなくな るまでくり返した。この方法で得られる金属酸化物は通常２．０ミクロン以下の 寸法を存する。合併した金属酸化物懸濁液を１１００Ｘにおいて１０分間遠心し た。上滑を集め、０゜８ミクロン以下の寸法を育する８、６％ｗ　／　ｖ磁性金 属酸化物懸濁液８００Ｊｄを与えた。

実施例２ 脱イオン水４００ｄ中硫酸第−鉄０．２３５モル、硫酸第二鉄０．２９７モル（ Ｆ　ｅ”／Ｆ　ｅ”−’比＝０．７９）と、そして６Ｎ水酸化ナトリウム４ＢＯ ｄを使用し、磁性金属酸化物の２．８６％ｗ／ｖ懸濁液２０００ｍを得たことを 除き、実施例１に記載したのと同じ操作をくり返した。

実施例３ 脱イオン水４００ｄ中硫酸第−鉄０．１７８モル、硫酸第二鉄０．２９８　モル （Ｆ　ｅ　”／　Ｆ　ｅ　””比＝０．５９）および６Ｎ水酸化ナトリウム５２ ０ｄを使用し、磁性金属酸化物の２．９８％Ｗ　／　Ｖ　ｐＡ湧液液１５００ｍ 得たことを除き、実施例１に記載した同じ操作をくり返した。

実施例４ 脱イオン水４０〇−中硫酸第一鉄０．１５モル、硫酸第二鉄０．２７６モル（Ｆ ｅ”−／Ｆｅ””比−０，５４）および６Ｎ水酸化ナトリウム５２０Ｍ１を使用 し、磁性金属酸化物の６．８８％ｗ／ｖ懸濁液７００ｄを得たことを除き、実施 例１に記載した同じ操作をくり返した。

実施例５ 脱イオン水２２５−中硫酸第一鉄０．１１６モル、硫酸第二鉄０−１４６モル（ Ｆ　ｅ　”／　Ｆ　ｅ　”’比＝　０．７９　）および６Ｎ水酸化ナトリウム２ ４０ｄを用い、磁性金属酸化物の１．８％ｗ　／　ｖ懸濁液１７００ｄを得たこ とを除き、実施例１に記載の同じ操作をくり返した。

預五Ｊ日シ（社）１追 実施例６ 脱イオン水６００ｄ、スチレン６Ｍ１．および実施例１で製造した８、６％ｗ　 ／　ｖ磁性金属酸化物８０ｍの混合物をシールしたびんへ入れた。びんを脱気し 、５５°Ｃのオーブン中１時間約６０ｒｐｍで回転した。この混合物へ過６Ａ酸 カリウム１２ｇと５％ｗ　／　ｖ　４．Ｏミクロンポリメチ１２粒子８５０ｍを 加えた。びんを再シールし、脱気し、そして１時間回転し、２％ドデシル硫酸ナ トリウム５０ｄを加えた。さらに５時間後スチレン６ｄと過硫酸カリウムｌｏｇ を混合物へ加えた。混合物をさらに１５時間回転し、チーズ布二層で口過し、磁 気分離し、そして上滑が透明になるまで脱イオン水で数回洗った。得られる磁性 粒子を脱イオン水で１．６　ｐ！に再懸濁し、磁性金属酸化物含量的１１％およ び平均寸法４．３ミクロンを持った２、５％Ｗ／ｖ！！！濁液を得た。

実施例７ 実施例６に記載したように製造した２、５％ｗ　／　ｖ　磁性粒子１．６１を、 ドデシル硫酸ナトリウムＩｇ、過硫酸カリウム１０ｇ、およびメタノール４ｄ中 ウンデシレンａｏ、９８ｄおよびジビニルベンゼン０．０２ｍを含有する溶液を 加えることにより、カルボキシル化した。

混合物をシールしたびんへ入れ、脱気し、５５℃オーブン中約５時間回転した。

生成したカルボキシル磁性粒子を磁気分離し、上滑が透明になるまで脱イオン水 で数回洗った。カルボキシル磁気粒子を脱イオン水で６８０１１ｉ！へ再懸濁し 、磁性金属酸化物含量的１１％とそして平均寸法４．３ミクロンを持った５、８ ％ｗ　／　ｖ懸濁液を得た。

実施例８ 脱イオン水６００ｄ、スチレン６−および実施例１記戦のように製造した８、６ ％ｗ　／　ｖ　ｆ、性金属酸化物８０ｄ！をシールしたびんへ入れた。びんを脱 気し、５５°Ｃオーブン中で１時間回転した。混合物へ過硫酸カリウム１２ｇと ４．７８％ｗ　／　ｖ　５．１ミクロンポリスチレン粒子を加えた。びんを再シ ールし、脱気し、５時間回転し、そしてスチレン６ｄと過硫酸カリウム１０ｇを 加えた。混合物をさらに１５時間回転し、チーブ布２層で口過し、磁気分離し、 上滑が透明になるまで脱イオン水で数回洗った。得られた磁性粒子を股イオン水 で１．５２へ再懸濁し、ドデシル硫酸ナトリウム１ｇ、過硫酸カリウム１０ｇ、 メタノール４ｄ中ウンデシレンｆｉ０．９８Ｍ！およびジビニルベンゼン０．０ ２−を含有する溶液を加えることによりカルボキシル化した。混合物をシールし たびんへ入れ、脱気し、５５℃オーブン中で５時間回転した。得られたカルボキ シル磁性粒子を磁気分離し、上滑が透明になるまで脱イオン水で数回洗った。カ ルボキシル磁性粒子を脱イオン水でＢｏｏｍへ再懸濁し、磁性金属酸化物含量的 １１．６％とそして平均寸法６．８ミクロンを有する４、３％ｗ／ｖ懸濁液を得 た。

実施例９ 脱イオン水６０（ｌｄ、スチレン６ｄ、および実施例１記社のように製造した８ 、６％ｗ／ｖ磁性金属酸化物を含有する混合物を二頭丸底フラスコへ入れ、６７ ゛Ｃでアルゴン中１時間かきまぜた。混合物へ過硫酸ナトリウム１２ｇおよび５ ％ｗ　／　ｖ　’１．７１．７ミフロンポリスチ１フ７０ｍＲを加えた。混合物 を６７°Ｃで１時間かきまぜ、そしてドデシルｇ酸ナトリウム２％溶液３０ｊｄ を加えた。アルゴン中６７°Ｃでさらに５時間かきまぜた後、スチレン６ｄおよ び過硫酸カリウム６ｇを混合物へ加えた。混合物をアルゴン中６７°Ｃでさらに １５時間かきまぜ、チーズ布２層で口過し、磁気分離し、そして上滑が透明にな るまで脱イオン水で数回洗った。得られた磁性粒子を脱イオン水で９００ｄへ再 懸濁し、そしてドデシル硫酸ナトリウム０．６ｇ、過硫酸カリウム１０ｇ５およ びメタノール２．４ｉ中ウンデシレ７酸０．５９８ｒｄおよびジビニルベンゼン ０．０１２ｄを含有する溶液を加えることによりカルボキシル化した。混合物を シールしたびんへ入れ、脱気し、５５°Ｃオーブン中で５時間約５Ｑｒｐｍで回 転した。得られたカルボキシル磁性粒子を磁気分離し、上滑が透明になるまで脱 イオン水で数回洗った。カルボキシル磁性粒子を５００ｄへ再懸濁し、磁性金属 酸化物含量的１４％と平均寸法４．０ミクロンを存する６、５％ｗ　／　ｖ懸濁 液を得た。

実施例１０ 脱イオン水６００ａＲ，スチレン６ｍｌ、および実施例１記載のように製造した ８、６％ｗ／ｖ［性金属酸化物６０−を含有する混合物をシールしたびんへ入れ た。びんを脱気し、５５℃オーブン中で１時間約５Ｑｒｐｍで回転した。混合物 へ過硫酸カリウム１２ｇおよび５％Ｗ／Ｖ２．７ミクロンポリスチレン粒子４７ ０ｄを加えた。びんを再シールし、脱気し、そして１時間回転し、２％ドデシル 硫酸ナトリウム３０ｄを加えた。さらに５時間後、スチレン６Ｉｄと過硫酸カワ ウ４１０ｇを混合物へ加えた。混合物をさらに１５時間回転し、チーズ布２層で 口過し、磁気分離し、そして上滑が透明になるまで脱イオン水で数回洗った。得 られた磁性粒子は脱イオン水で５００ｉへ再懸濁し、磁性金属酸化物含量的１４ ％と平均寸法４．０ミクロンを存する６、８％ｗ　／　ｖ懸濁液を得た。

実施例１１ 脱イオン水１８０ｍ、スチレン２ｄ、および実施例１記載のように製造した８、 ６％ｗ　／　ｖ磁性金属酸化物２０１ｄを含有する混合物をシールしたびんへ入 れた。びんを脱気し、５５℃オーブン中で１時間約６Ｏｒｐｍで回転した。混合 物へ過硫酸カリウム４ｇと実施例１０で製造した６、８％ｗ　／　ｖ磁性粒子１ ６０ｄ（３，０ミクロン、金属酸化物含量１４％）を加えた。びんを再シールし 、脱気し、１時間回転し、２％ドデシル硫酸ナトリウム１０Ｍ１を加えた。さら に５時間後、スチレン２ＩＩｌおよび過硫酸カリウム２ｇを混合物へ加えた。

混合物をさらに１５時間回転し、チーズ布２層で口過し、磁気分離し、上滑が透 明になるまで脱イオン水で数回洗った。得られた磁性粒子は脱イオン水で１６０ −へ再懸濁し、磁性金属酸化物含量的１９％と平均寸法４，２ミクロンを有する ７、７８％ｗ　／　ｖ懸濁液を得た。

実施例１２ ａイ、ｔ７水９０ｄ、スチレン１戚、および実施例１記戦のように製造した８、 ６％ｗ　／　ｖ磁性金属酸化物１０−を含有する混合物をシールしたびんへ入れ た。びんを脱気し、５５°Ｃオーブン中で１時間約６Ｏｒｐｍで回転した。混合 物へ過硫酸カリウムＩｇおよび実施例１１で製造した７、７８％ｗ　／　ｖ磁性 粒子８０ｄ（３，２ミクロン。

金属酸化物台ｊｕ１９％）を加えた。びんを再シールし、脱気し、４時間回転し 、２％ドデシル硫酸ナトリウム５ｄを加えた。さらに５時間後、スチレン１ｄと 過硫酸カリウムＩｇを混合物へ加えた。混合物をさらに１５時間回転し、チーズ 布２層で口過し、磁気分離し、そして上滑が透明になるまで脱イオン水で数回洗 った。得られた磁性粒子は脱イオン水で１６０−へ再懸／コし、金属酸化物含量 約２３％と平均寸法４．５ミクロンを有する４、５％ｗ／ｖ懸濁液を得た。

実施例１３ 脱イオン水４０（ｌｄ、スチレン１．９２ＩＩｔＩ！、ジビニルベンゼン０．Ｏ ａｙ、　過ｇａカリウム４ｇ、２００〜４００メツシュ４％ジビニルベンゼン架 橋ポリスチレンビーズ２０ｇ、および実施例１記載のように製造した８、６％ｗ ／ｖ［性金属酸化物１ＯＩＩ！１を含有する混合物をシールしたびんへ入れた。

びんを脱気し、５５°Ｃオーブン中で１５時間約６Ｏｒｐｍで回転した。混合物 を沈降させ、上滑を傾しゃした。得られた磁性ビーズを脱イオン水２００ｄ中に 再懸濁し、再び沈降させた。このプロセスを上滑が透明になるまで数回（り返し た。得られた磁性ビーズを脱イオン水２００ｄ中に再懸濁し、ドデシル硫酸ナト リウム０．１ｇ、過硫酸カリウム２．０ｇ、スチレン０．４８ｄ、　ジビニルベ ンゼン０．０２　ｍを加えた。びんを再シールし、脱気し、５５°Ｃオーブン中 で１時間約５Ｑｒｐｍで回転し、そしてメタノール０．４ｄ中ウンデシレン酸０ ．０９８ｄおよびジビニルベンゼン０．００２ａｆを含有する溶液を加えた。混 合物をさらに４時間回転し、以前記載したように重力沈降によって清浄化した。

水を口過によって除去し、カルボキシルビーズを乾燥し、２００〜４００メソシ ユカルボキシル磁性ビーズ２０ｇを得た。

実施例１４ 脱イオン水１００ｄ、スチレン０．５Ｊｄ、過硫酸カリウム２ｇ、５％ｗ　／　 ｖ　４．０ミクロンポリスチレン粒子７５Ｉｉ、および実施例４記載のように製 造した６、８８％ｗ　／　ｖ　［性金属酸化物１０ｄを含有する混合物をシール したびんへ入れた。びんを脱気し、そして５５°Ｃオーブン中で１５時間約５Ｑ ｒｐｍで回転した。混合物をチーズ布２層で口通し、磁気分離し、脱イオン水で 上滑が透明になるまで数回洗った。得られた磁性粒子を脱イオン水で１５０Ｉｒ ｄｌへ再懸濁し、金属酸化物含量的１４％と平均４．３ミクロンを有する２、５ ％、ｗ　／　ｖ懸濁液を得た。

実施例１５ 実施例４記載のように製造した６、８８％ｗ　／　ｖ　磁性金属酸化物２０ｄを 使用し、金属酸化物含量的１８％と平均寸法４．３ミクロンを有する２、５％ｗ 　／　ｖ懸濁液１６０ｍを得たことを除き、実施例１４に記載した同じ操作をく り返した。

実施例１６ 脱イオン水２０００ｍ、スチレン１３ｄ、および実施例３記載のように製造した ′２．．９８％ｗ　／　ｖ　磁性金属酸化物５５０ｄを含有する混合物をシール したびんへ入れた。びんを脱気し、５５°Ｃオーブン中で１時間約５Ｑｒｐｍで 回転した。混合物へ過硫酸カリウム２０ｇおよび１０％ｗ　／　ｖ　３．０ミク ロンポリスチレン粒子９５０戚を加えた。びんを再シールし、脱気し、１時間回 転し、そして２％ドデシル硫酸ナトリウム６０−を加えた。さらに５時間後、ス チレン８ｄと過硫酸カリウム１０ｇを混合物へ加えた。混合物をさらに１５時間 回転し、チーズ布２層で口過し、磁気分離し、そして上清が透明になるまで脱イ オン水で数回洗った。得られた磁性粒子は脱イオン水で３０００ｍへ再懸濁し、 磁性金属酸化物含量的１２％と平均寸法３．２ミクロンを有する３、３８％ｗ　 ／　ｖ懸濁液を得た。

実施例１７ 実施例１６記載のように製造した磁性粒子１５０ａｄ（３，２ミクロン、金属酸 化物台Ｍ１２％を有する３、３８％ｗ／ｖ）、１％ＮＰ４０２−．メチルメタク リレートまたはスチレン２ｄ、過硫酸カリウム１ｇ、および官能化モノマー、ト リメチルアンモニウムエチルメタクリレートメトサルフェート（４０％水溶液） ２ＲＲを含有する混合物をシールしたびんへ入れた。びんを５５°Ｃオーブン中 ４時間約６Ｑｒｐｍで回転した。混合物をチーズ布２層で口過し、磁気分離し、 そして上滑が透明になるまで脱イオン水で数回洗った。得られた磁性粒子は脱イ オン水で２００ｄへ再懸濁し、表面にトリメチルアンモニウム官能基を有する磁 性粒子の２．５％ｗ　／　ｖ懸濁液を得た。

実施例１８ 官能化モノマー、２−アミノエチルメタクリレート１　ｍｆｌを使用し、表面に アミノ基を有する磁性粒子の２．５％ｗ　／　ｖ懸濁液２００戚を得たことを除 いて、実施例１７に記載した同じ操作をくり返した。

実施例１９ 官能化モノマー、２−ヒドロキシエチルメタクリレート１ｄを使用し、表面にと ドロキシル基を有する磁性粒子の２．５％ｗ　／　ｖ懸濁液２００ｍを得たこと を除いて、実施例１７に記載した同じ操作をくり返した。

実施例２０ −Ｅ／マー、１−ビニル−２−ピロリドン１ｍを使用し、表面にポリビニルピロ リドンを有する磁性粒子の２．５％ｗ　／　ｖ懸濁液を得たことを除いて、実施 例１７に記載した同じ操作をくり返した。

実施例２１ 官能化モノマー、メチルプロペンスルホン酸１ｇを使用し、表面にスルホン酸基 を有する磁性粒子の２．５％ｗ　／　Ｖ懸濁液２００−を得たことを除いて、実 施例１７に記載した同じ操作をくり返した。

実施例２２ 官能化モノマー、ジメチルアミノエチルメタクリレート１雌を使用し、表面にジ メチルアミノ基を有する磁性粒子の２．５％Ｗ　／　ｙ　９濁液２００Ｊ１！ｉ ！を得たことを除いて、実施例１７に記載した同し操作をくり返した。

実施例２３ ７．０％ｗ／ｖ２．１１ミクロンポリスチレン粒子２０戚、実施例５に記載した ように製造した１、８％ｗ　／　ｖ金属酸化物１００ｄ、脱イオン水５０戚、お よびスチレン７．５城中過酸化ベンゾイル０．１５　ｇを含有する溶液を含有す る混合物をシールしたびんへ入れた。びんを脱気し、そして５５°Ｃオーブン中 で１５時間約６０ｒｐｍで回転した。混合物をチーズ布２層で口過し、磁気分離 し、そして上清が透明になるまで脱イオン水で数回洗った。得られた磁性粒子を 脱イオン水で２００ｊｄへ再懸濁し、金属酸化物含量的１６．８％と平均寸法３ ．６ミクロンを有する５、　０％ｗ　／　ｖ懸濁液を得た。

実施例２４ ７．０％ｗ／ｖ２．１１ミクロンポリスチレン粒子２０−９実施例５記載のよう に製造した１、８％ｗ／ｖ金属酸化物１ｏａｄ、脱イオン水５０ｄ、およびスチ レン６、７５　ｄ中退酸化ベンゾイル０．１５　ｇおよびジビニルベンゼン０． ７５−を含有する溶液を含有する混合物をシールしたびんへ入れた。びんを脱気 し、５５°Ｃオーブン中で１５時間約６’Ｏｒｐｍで回転した。混合物をチーズ 布２層で口過し、磁気分離し、上滑が透明になるまで脱イオン水で数回洗った。

得られた架橋磁気粒子を脱イオン水で２００ｍへ再懸濁し、金属酸化物含量的１ ６．８％と平均寸法３６６ミクロンを有るす５．０％ｗ　／　ｖ懸濁液を得た。

このようにして製造した架橋磁性粒子は寸法が均一であり、そしてアセトン、ア セトニトリルおよびジメチルホルムアミドのような普通の有機溶媒に対して不活 性であることがわかった。

実施例２５ ７．０％ｗ／ｖ２．１１ミクロンポリスチレン粒子２Ｑｙｎｌ、実施例５に記載 したように製造した１、８％ｗ　／　ｖ金属酸化物１５０ｍ、およびスチレン６ ．７５ｍｅ中過酸化ベンゾイル０．１５　ｇとジビニルベンゼン０．７５　ｄを 含む溶液を含有する混合物をシールしたびんへ入れた。

びんを脱気し、そして５５°Ｃオーブン中で１５時間約６Ｏｒｐｍで回転した。

混合物をチーズ布２層で口過し、磁気分離し、そして上滑が透明になるまで脱イ オン水で数回洗った。得られた架橋磁性粒子を脱イオン水で２００ｄへ再？Ａ濁 し、金属酸化物含量的２３％と平均寸法４．０ミクロンを有する５、４％ｗ　／ 　ｖ懸濁液を得た。このようにして製造した架橋磁性粒子は寸法が均一であり、 そしてアセトン、アセトニトリルおよびジメチルホルムアミドのような普通の有 機溶媒に対して不活性であることがわかった。、実施例２６ ９．１６％ｗ　／　ｖ　３．２ミクロンポリスチレン粒子１５雌、実施例５記載 のように製造した１、８％ｗ　／　ｖ金属酸化物１００Ｊｄ、脱イオン水５５ｄ 、およびスチレン６．７５−中退酸化ベンゾイル０．１５　ｇおよびジビニルベ ンゼン０．７５　ｄを含む溶液を含有する混合物をシールしたびんへ入れた。び んを脱気し、そして５５°Ｃオーブン中で１５時間約６　Ｏｒ　ｐｍで回転した 。混合物をチー１５２層で口過し、磁気分離し、上清が透明になるまで脱イオン 水で数回洗った。得られた架橋磁性粒子を脱イオン水で２００ｄへ再懸濁し、金 属酸化物含量的１６．８％と平均寸法５．５ミクロンを有する４、７％ｗ　／　 ｖ懸濁液を得た。このようにして製造した架橋磁性粒子は寸法が均一であり、そ してアセトン、アセトニトリルおよびジメチルホルムアミドのような普通の有機 溶媒に対して不活性であることがわかった。

実施例２７ ４．５％ｗ／ｖ４．１ミクロンポリスチレン粒子３０戚、実施例５記載のように 製造した１、　８％ｗ　／　ｖ金属酸化物］、ＯＯｄ、脱イオン水４０Ｊｄ、お よびスチレン６、７５　ｍ中退酸化ベンゾイル０．１５　ｇおよびジビニルベン ゼン０．７５　ｄを含む溶液を含有する混合物をシールしたびんへ入れた。びん を脱気し、５５°Ｃオーブン中で１５時間約６０ｒｐｍで回転した。混合物をチ ー１５２層で口過し、磁気分離し、上滑が透明になるまで脱イオン水で数回洗っ た。得られた架橋磁性粒子を脱イオン水で２００ｄへ再懸濁し、金属酸化物含量 的１６．９％および平均寸法６．７ミクロンを有する４、５％Ｗ／　ｖ２．濁液 を得た。このようにして製造した架橋磁性粒子は寸法が均一であり、そしてアセ トン、アセトニトリルおよびジメチルホルムアミドのような普通の有機溶媒に対 して不活性であることがわかった。

実施例２８ ７．０％ｗ／ｖ２．１１ミクロンポリスチレン粒子２０ｄ、実施例５記載のよう に製造した１、８％ｗ　／　ｖ金属酸化物１００ｄ、脱イオン水５０！ｄ、およ びスチレンＧＩｄ中過酸化ベンゾイル０．１５ｇ、ランデシレニルアルコール０ ．７５　ｍおよびジビニルベンゼン０．７５−を含む溶液を含有する混合物をシ ールしたびんへ入れた。びんを脱気し、そして５５°Ｃオーブン中で１５時間約 ６Ｏｒｐｍで回転した。

混合物をチー１５２層で口過し、磁気分離し、上滑が透明になるまで脱イオン水 で数回洗った。得られた架橋したヒドロキシ磁性粒子を口過し、乾燥し、金属酸 化物含量的１６．８％と平均３．９ミクロン寸法を有する粉末９ｇを得た。この ようにして製造した架橋ヒドロキシ磁性粒子は寸法が均一であり、そしてアセト ン、アセトニトリルおよびジメチルホルムアミドのような普通の有機溶媒に対し て不活性であることがわかった。

１　へ　掌・　を　４ 実施例２９ ８０ｍびんへ、実施例７記載のように製造した４、３ミクロン、５゜０％ｗ　／ 　ｖカルボキシル磁性粒子３０ｄを入れた６粒子を磁気分離し、そしてリン酸緩 衝液５０Ｍ１（０，１Ｍ、ｐＨ５，５）中へ再懸濁した。この粒子懸濁液へウシ 血清アルブミン２０■と、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）− カルボジイミド（ＥＤＣ）１００■を加えた。混合物を室温で２時間上下に回転 し、そして磁気分離した。粒子をリン酸緩衝液で１回洗い、リン酸塩緩衝食塩水 （０，１Ｍ、ｐ　Ｈ’７．０　）で７５ｄへ再懸濁し、２．０％Ｗ／　ｙ　懸濁 液を得た。

受動的吸着によりウシ血清アルブミンを磁性粒子へ結合するため、ＥＤＣを使用 することなく同じ操作をくり返した。

実施例３０ ４−バイアルへ、実施例７記載のように製造した４、３ミクロン。

５．０％ｗ／ｖカルボキシル磁性粒子１−を入れた。粒子を磁気分離し、リン酸 緩衝液２ｄ　（０，１Ｍ、ｐＨ５，５）で１回洗い、同じ緩衝液で２１ｄへ再懸 濁した。この粒子懸濁液へヤギ（Ｇｔ）抗マウス（Ｍｓ）ＩｇＧ１．４ｍｇ／ｄ の１４０−とそして１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジ イミド１０■を加えた。ノイイアルを室温で２時間上下に回転した。粒子を磁気 分離し、リン酸緩衝液２．ｄで１回洗い、リンＭ緩衝食塩水（０，１Ｍ、ｐＨ７ ，０）で２−へ再懸濁し、２．５％ｗ　／　ｖ　Ｇ　を抗Ｍｓ　ＩｇＧ被覆磁性 粒子を得た。モノクロナールまたはポリクロナールであれ他の種類の抗体も同じ 操作を使用してカルボキシル磁性粒子へ結合することができた。

Ｇｔ抗Ｍｓ　ＩｇＧまたは他の種類の抗体を受動的吸着によって磁性粒子へ結合 するためＥＤＣを使用することなく同じ操作を（り返した。

実施例３１ ４ｄバイアルへ、実施例２９記載のように製造したウシ血清アルブミン被覆磁性 粒子（４，３ミクロン、２％ｗ／ｖ）　２．５ｍを入れた。

粒子を磁気分離し、リン酸緩衝液（０，１Ｍ、ｐＨ５，５）で２ｄへ再懸濁した 。混合物へＭｓ抗Ｂ赤血球表面抗原（２０■／ｄ）ｌＱμ！と、そして１−エチ ル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド１■を加えた。粒子を 磁気分離し、リン酸緩衝液で１回洗い、リン酸緩衝食塩水（０，１Ｍ、ｐＨ７， ０）２ｄ中に再懸濁し、２．５％ｗ　／　ｖ懸濁液を得た。

実施例３２ Ｍ５抗Ａ赤血球表面抗原（５■／ｍｌり４０μ２を使用し、２．．５％ｗ　／　 ｖ懸濁液２ｉを得ることを除いて、実施例３１に記載した同じ操作をくり返した 。

・　を　−る　゛　飛・・ 実施例３３ Ａと標識した５ｓＸ６５ｍｍ試験管中へ、実施例３２記載のように製造した２、 ５％ｗ　／　ｖ　Ｍ　ｓ抗Ａ被覆磁性粒子２５μ！を入れた。Ｂと標識した他の 試験管中へ、実施例３１に記載のように製造した４５％ｗ　／　ｖ　Ｍ　ｓ抗Ｂ 被Ｎ磁性粒子２５μ！を入れた０両方の試験管へ等張緩衝化食塩水のパックした 赤血球の１対１００倍希釈によって調製した１％バック赤血球５０μｌを加えた 。試験管を指でつまんで数回振り、そして磁石の頂部へ置いた。結果は以下のよ うに要約された。

血液型 ここで＋は陽性反応を表し、試験管中の上清が磁気分離後透明である結果、赤血 球が対応する抗体被覆磁性粒子によって凝集したことを意味する。他方、陰性反 応の上清は赤血球と抗体被覆磁性粒子の間の凝集反応の不存在のため濁ったまま であろう。

磁　・　を　いるイムノアッセイ 実施例３４ ２μミクロン遠心チュー：中へ、６％ｗ　／　ｖ　３ミクロンカルボキシル磁性 粒子ＩＩ！１１を入れた。粒子を１１０００Ｏｒｐにおいて３分間遠心した。上 清を吸引し、そして粒子を酢酸緩衝液中５ないし１００μｇ／ｌａｎ換えＨＢｃ Ａｇ　１−と混合することによって再懸濁した。チューブを室温において２時間 回転し、前記したように遠心した。上滑を吸引し、粒子を酢酸緩衝液および正常 動物血清２ないし１０％を含むオーバーコート溶液ＩＩｄ！中に再懸濁した。チ ューブを室温で２ないし１６時間回転し、前記したように遠心した。上清を吸引 し、粒子を遠心および再懸濁によって等張緩面食塩水（ＩＢＳ）ｌｄで３回洗っ た。最後に粒子をｌＢ５１ｍで再懸濁し、２ないし８°Ｃで貯蔵した。

実施例３５ ９６ウエルマイクロタイタープレートの最初の２カラムへ実施例３４に記載した よに調製した０、２５％ｗ　／　ｖ　Ｂ肝炎コア抗原（ＨＢｃＡｇ）被覆磁性粒 子２０μｌを入れた。サンプル調製物は陰性血漿中ＨＢｃＡｇ陽性血清の種々の 希釈液を標本希釈緩衝液（ＳＤＢ）中へ各サンプルを１：１００＠釈したものよ りなっていた。ＳＤＳはリン酸緩衝液、タンパク安定剤、界面活性剤および抗微 生物剤を含んでいた。粒子を含んでいるウェルへ、めいめいの最終サンプル希釈 液５０μｌを加えた。３７℃で３０分間インキュベートした後、粒子を磁気分離 機上で２分間分離し、そして塩類と洗剤を含んでいる洗浄緩衝液２００μｌで３ 回洗った。粒子を含んでいる各ウェルへ、塩類、タンパク安定剤、グリセロール 、洗剤および抗微生物剤を含んでいる希釈液中ヤギ抗ヒ）ＩｇＧ−β−Ｄガラク トシダーゼ複合体（０，５μｇ／ｄ）５０μｌを加えた。３７°Ｃにおいて１５ 分間インキュベート後、粒子を分がし、前記のように３回洗い、ｌＢ５３０μ！ 中に再懸濁した。粒子を黒色マイクロタイタープレート（Ｄｙｎａｔｅｃｈ）の 最初の２カラムへ移した。粒子を含んでいる各ウェルへ４−メチルウンベリフェ リル−β−ガラクトピラノシド（ＭＵＧ、Ｓｉｇｍａ）を含んでいる溶液１００ μＥを加えた。

プレートを３７°Ｃでインキュベートし、螢光強度を３６５ｎｍ励起および４５ ０ｎｍ発光フィルターを備えた螢光濃度アナライザー（ＦＣＡ、Ｐｅｎｄｅｘ） を使用して５分間およびＩＯＸゲインセツティングで測定したや５分間の螢光強 度の増加を任意螢光単位（ＡＦＵ）で記録し、表１に示した。

１　：　１００　２２６８７ １：１０００　５９３３ １　：５０００　１５１６ １　：　８０００　８３５ １　：　１００００　６３９ １　：１５０００　４９５ １　：　２００００　４２７ １　：２５０００　３０７ 実施例３６ カルボキシル磁性粒子へのマウス抗ＨＢｓＡｇの結合は実施例３０と同様に行っ た。

黒色９６ウエルマイクロタイタープレート（Ｄｙｎａｔｅｃｈ）のウェルへ、０ ．２５％ｗ／ｖ、３．２ミクロン、マウス抗ＨＢ　ｓＡｇ被覆カルボキシル磁性 粒子２０μβを２系列で加えた。磁性粒子を含んでいるウェルへ種々の量のＨＢ 　ｓＡｇを含んでいる住の血漿またはＨＢｓＡｇ陰性血漿１００μｌを加えた。

３７°Ｃにおいて３０分間インキュベート後、粒子を磁気分離機上で２分間分離 し、塩類および洗剤を含んでいる洗浄緩衝液１００μ！で１回洗った。粒子を含 んでいる各ウェルへ、塩類、タンパク安定剤、グリセロール、洗剤および抗微生 物剤を含んでいる希釈液中のマウス抗ＨＢｓＡｇ−β−ガラクトシダーゼ複合体 ２０μｌを加えた。３７°Ｃにおいて１５分間インキュベート後、粒子を分離し 前記のように５回洗った。

粒子を含んでいる各ウェルへ、４−メチルウンベリフェリル−β−Ｄ−ガラクト ピラノシド（ＭｔＪＧ、Ｓｉｇｍａ）を含んでいる溶液５０μｌを加え′た。プ レートを３７°Ｃでインキュベートし、そして螢光強度３６５ｎｍｒ；ｊＪ起お よび４５０ｎｍ発光フィルターを備えた螢光濃度アナライザー（ＦＣＡ、Ｐａｎ ｄｅｘ）を使用して５分間および１０×ゲインセツテイングにおいて測定した。

５分間における螢光強度の増加を任意螢光単位（ＡＦＵ）で記録し、表ｎに示し た。

（以下余白） 表　■ 実施例３７ ＨＴＬＶ−１１１８／Ｈ−９細胞（Ｇａｌｌｏ株）からのＨＩＶ−抗原を実施例 ３４に記載したのと同様な操作を使用して３．６ミクロンカルボキシル磁性粒子 へ結合した。

９６ウエルマイクロタイタープレートのウェルへ、ｏ、２５％Ｗ／ｖＨＩＶ被覆 磁、性粒子の２０ｔｔ１を２系列で加えた。粒子を含んでいるウェルへ、リン酸 緩衝液、タンパク安定剤、洗剤および抗微生物剤を含んでいる標本希釈緩衝液（ ＳＤＳ）中に１　：　１００に希釈した陽性、ボーダーラインおよび陰性標本５ ０μｌを加えた。３７°Ｃにおいて３０分インキュベート後、粒子を磁気分離機 上で２分間分離し、塩類および洗剤を含有する洗浄緩衝液１００μｌで３回洗っ た。粒子を含んでいる各ウェルへ、塩類、タンパク安定剤、グリセロール、洗剤 および抗微生物剤を含んでいる希釈液中のヤギ抗ヒト−β−ガラクトシダーゼ（ 約０．５μｇ／ｄ）複合体５０μ！を加えた。３７°Ｃで１５分間インキュベー ト後、粒子を前記のように４回洗った。粒子を黒色マイクロタイタープレートへ 移した。粒子を含んでいる各ウェルへ、４−メチルウンベリフェリル−β−Ｄ− ガラクトピラノシド（ＭＵＧ、Ｓ　ｉ　ｇｍａ）を含んでいるン容ｆｉ、ｌｏ。

μｒを加えた。プレートを３７℃でインキュベートし、そして３６５ｎｍ励起お よび４５０ｎｍ発光フィルターを伺えた螢光濃度アナライザー（ＦＣＡ、Ｐａｎ ｄｅｘ）を使用して５分間および２５×ゲインセツテイングにおいて測定した。

５分間における螢光強度の増加を任意螢光単位（ＡＦＵ）で記録し、表１に示し た。

表　■ 抗ＨＩＶ標本　ＡＦＵ　（５分）２ウエルの平均陽性対照　９４６２ ボ一ダーライン標本　５２７ 陰性対照　８６ ｔ　を　する　＼ 実施例３日 実施例７に記載したように製造した４、３ミクロンカルボキシル位性粒子を洗浄 し、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ、ｐＨ１，１）中で超音波処理し、７０％エタノ ール中１０分間滅菌し、ＰＢＳで３回洗い、そしてアフィニティー精製したヒツ ジ抗マウスイムノグロブリン抗体（ＳＡＭ）と０．５■／−においてそして抗体 ３．３■／粒子１００■の比で４°Ｃで４８時間インキュベートした。使用前抗 体被覆磁性粒子はＰＢＳ中で洗い、そしてＰＢＳ中に所望濃度に再懸濁した。

ヒト組織培養ＣＡＬＬａ−陽性ＮＡＬＭ−１６白血病細胞をＰＢＳ中で洗い、懸 濁した。一方の分画は抗体で処理しなかった（−Ｍｏ　Ａ　ｂ　）　、他方の分 画は４°Ｃで２種の抗ＣＤｌ０および１種の抗ＣＰ９モノクロナール抗体（＋Ｍ ｏＡｂ）で３０分間処理し、ＰＢＳ中で洗い、そしてＰＢＳ中３．５Ｘ１０ｂ細 胞／ｄへ調節した。一方は抗体処理細胞（＋ＭｏＡｂ）、他方は未処理細胞（− ＭｏＡｂ）を含んでいる２本のチューブへ、ＳＡＭ被覆磁性粒子を粒子対出発細 胞比４５で加えた。チューブを４°Ｃで３０分間回転した。粒子を磁気分離機で 分離した。上清を集め、残りの細胞を集めるために遠心した。ペレットをトリバ ンブルー１００μ！中に再懸濁し、総細胞カウントを行った。結果を表■に示す 。

０　＋　７．６２Ｘ１０’　Ｏ（対り ４５　÷　２．８９Ｘ１０’　９６．２４５　７．３３Ｘ１０’　４．６ ＦＩＧ、ＩＩＩａ ＦＩＧ、［［ｂ 国際調査報告 ２Ｃτ、′ロ５６８１０３６６６ ５　２８０　ｐａｙｚｅｎｔ　ａｐｐｒｏｖｅｄ　ｂｙ　Ｓ＊ｓａｒ＋　Ｂ、Ｆ ｅｒ＋＝ｒｅｓｓ　ａｎ　２７Ｊａｎｕａｒｙ　１９８９　ｆｏｒ　ａｄｄｉｔ ｉｏｎａｌ　Ｇｒｏｕｐｓ　Ｈａｒ＋＋ｉ　ＨＩ＋　ｃｈａｒｇｅ　ｔ。

Ｄｅｐｏｓｉｔ　Ａｃｃｏｕｎｔ　Ｎｏ、ｕ２−１４４０＋Ｃｏｕｎｓｅｌ　ａ ｄｖｉｓｅｄ　ｗｈａｔ　ｓｈｅ　ｈａｓ　ｎｏ　ｒｉｇｈｔ　ｔｏ　ｐｒｏｅ ｅｓｔ　ｆｏｒａｎｙ　ｇｒｏｕｐ　ｎｏｔ　ｐａｉｄ　ｆｏｒ　ａｎｄ　ｔｈ ａｔ　ａｎｙ　ｐｒｏｔａｓ＝　＋！Ｉｕ＊ｔ　ｂｅｆｉｌｅｄ　ｎｏ　１ａｔ ｅｒ　ｔｈａｎ　１５　ｄａｙｓ　ｆｒｏ＋ｍ　ｔｈｅ　ｄａｔａ　ｏｆ　ｍａ ｉｌｉｎｇ　ｏｆｔｈ＠５ｅａｒｃｈ　ｒｅｐｏｒｔ、　（Ｆｏｒｍ　２１０） Ｒｅａｓｏｎｓ　ｆｏｒ　ｈｏ１４ｉｎａ　１ａｃｋ　ｏｆ　Ｕｎｉｔ　ｏｆ　 ！ｎｖｅｎｅｉｏｎ＋丁ｈｅ　１ｎｖｅｎｔｉｏｎ　ａｓ　ｄｅｆｉｎｅｄ　ｉ ｎ　Ｇｒｏｕｐ　Ｉ　（ｃｌａｉｍｓ　Ｌ−４９１１ｄｒａｗｎ　ｔｏ　＋ａａ ｇｎｅｔｉｃ　ｐａｒ＋：ｉｅＬ＊ｓ、　ｍｅｔｈｏｄ　ｍａｋｉｎｇ　ｓａｗ 、　ａｎｄｍｅｔｈｏｄ　ｏｆ　ｕｓｉｎｇ　ｓａｍｅ　ｔｏ　ａｓｓａｙ　ｔ ｈｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｎａｎａＬｙｔｅ　ａｓ　ｐｅｒ 　ｉｍｕｎｏａｓｓａｙ　ｗｈｉｃｈ　Ｌｍ　ｃｌａｓｓｉｆｉｅ！　ｉｎ　ｃ ｌａｓｓ４３６、　５ｕｂｃＬａｓｓ　５２６１　ｉｓ　ａ　ｍａｔｅｒｉａｌ ｌｙ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｐｒｏｃｅｓｓ　ｏｔｕｓｉｎｇ　５ａｉｄ　ｍａ ｇｎｅｔｉｃ　ｐａｒｔｉｃｌｅｓ　ｔｈａｎセｈｅ　ｉｒ＋ｖａｎｔｉｏｎ　 ｏｆＧｒｏｕｐ　ＸＩ　（ｃｌａｉ＋ｃｓ　５ｏ−ｊ３）　ｄｒａｗｎ　ｔｏ　 ａ　ｎｕｃｌｅｉｃ　ａｃｉｄ　ｈｙｂｒｉｄｉ−ｚａｔｉｏｎ　ａｓｓａｙ　 ｒ！Ｉｅセｈｏｄｃｌａｓｓｉｆｉｅｄ　ｉｎ　ｃｌａｓｓ　４３Ｓ＋　５ｕｂ ｃｌａｓｓ　６１０ｒセｈｅ　ｉｎｖ＠ｎｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｇｒｏｕｐ　ＺＩ！ 　（ｃｌａｉｍｓ　５３−６１）　ｄｒａｗｎセロｍ＠ｔｈｏｄｓ　ｏｆ　ｉｓ ｏｌａｔｉｎｇ　ｏｒ　ｐｕｒｉｆｙｉｎｇ　ａ薯ｕｂｓｔａｎｃ＊　ｆｒｏｍ 　ａｌｉｑｕｉｄｃｌａｓｓｉｆｉｅｄ　ｉｎ　ｃｌａｓｓ　２１０．５ｕｂｃ ｌａｓｓ　６９５゜τｉｍｅ　Ｌｉｍ１ｔ　Ｆｏｒ　Ｆｉｌｉｎ　Ａ　Ｐｒｏｔ ｅｓｔ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．内部コアポリマー粒子と、前記内部コア粒子を均一に被覆している磁気的に 応答する金属酸化物／ポリマーコーティングとよりなる磁性粒子。 ２．前記コア粒子はポリスチレンまたは架橋ポリスチレンよりなる第１項の粒子 。 ３．前記コア粒子は約１ないし１００ミクロンの範囲である第１項の粒子。 ４．前記磁気的に応答する金属酸化物は約１ミクロン以下である第１項の粒子。 ５．前記磁気的に応答する金属酸化物／ポリマーコーティングは超常磁性，常磁 性または強磁性金属酸化物からつくられる第１項の粒子。 ６．前記磁気的に応答する金属酸化物／ポリマーコーティングはポリスチレン、 架橋ポリスチレン、官能化ポリスチレンまたは他のオレフィン性モノマーからつ くられる第１項の粒子。 前記金属酸化物は遷移金属塩からつくられる第１項の粒子。 前記第１の金属酸化物／ポリマーコーティングを均一に被覆する追加の金属酸化 物／ポリマーコーティングを持っている第１項の粒子。 ９．内部コアポリマー粒子と、前記内部コア粒子を均一に被覆している磁気的に 応答する金属酸化物／ポリマーコーティングと、前記磁気的に応答する金属酸化 物／ポリマーコーティングを被覆している外側ポリマーコーティングよりなる磁 性粒子。 １０．前記コア粒子はポリスチレンまたは架橋ポリスチレンよりなる第９項の粒 子。 １１．前記コア粒子は約１ないし１００ミクロンの範囲である第９項の粒子。 １２．前記磁気的に応答する金属酸化物粒子は約１ミクロン以下である第９項の 粒子。 １３．前記磁気的に応答する金属酸化物／ポリマーコーティングは超常磁性、常 磁性または強磁性金属酸化物からつくられる第９項の粒子。 １４．前記磁気的に応答する金属酸化物／ポリマーコーティングはポリスチレン 、架橋ポリスチレン、官能化ポリスチレンまたは他のオレフィン性モノマーから つくられる第９項の粒子。 １５．前記金属酸化物は遷移金属塩からつくられる第９項の粒子。 １６．前記第１の金属酸化物／ポリマーコーティングを均一に被覆する追加の金 属酸化物／ポリマーコーティングを持っている第９項の粒子。 １７．前記外側ポリマーコーティングはポリスチレン、架橋ポリスチレン、官能 化ポリスチレンまたは他のオレフィン性モノマーからつくられる第９項の粒子。 １８．内部コアポリマー粒子と、前記内部コア粒子を均一に被覆している磁気的 に応答する金属酸化物／ポリマーコーティングと、前記磁気的に応答する金属酸 化物／ポリマーコーティングを被覆している外側ポリマーコーティングと、前記 外側ポリマーコーティングを被覆している官能化ポリマー層とよりなる磁性粒子 。 １９．前記コア粒子はポリスチレンまたは架橋ポリスチレンよりなる第１８項の 粒子。 ２０．前記コア粒子は約１ないし１００ミクロンの範囲である第１８項の粒子。 ２１．前記磁気的に応答する金属酸化物粒子は約１ミクロン以下である第１８項 の粒子。 ２２．前記磁気的に応答する金属酸化物／ポリマーコーティングは超常磁性、常 磁性または強磁性金属酸化物からつくられる第１８項の粒子。 ２３．前記官能化ポリマーは生物学的材料へ結合のためのカルボキシル、アミノ またはヒドロキシ官能基を提供する化合物の群から選ばれる第１８項の磁性粒子 。 ２４．前記官能化ポリマーは生物学的材料へ結合される第１８項の磁性粒子。 ２５．前記磁気的に応答する金属酸化物／ポリマーコーティングはポリスチレン 、架橋ポリスチレンまたは官能化ポリスチレンからつくられる第１８項の粒子。 ２６．前記第１の金属酸化物／ポリマーコーティングを均一に被覆する追加の金 属酸化物／ポリマーコーティングを持っている第１８項の粒子。 ２７．前記金属酸化物は遷移金属塩からつくられる第１８項の粒子。 ２８．内部コアポリマー粒子と、前記内部コアポリマー粒子を均一に被覆してい る磁気的に応答する金属酸化物／ポリマーコーティングと、前記金属酸化物／ポ リマーコーティングを被覆している官能化ポリマー層とよりなる磁性粒子。 ２９．前記内部コア粒子はポリスチレン、架橋ポリスチレンまたは他のポリマー からつくられる第２８項の粒子。 ３０．前記コア粒子は約１ないし１００ミクロンの範囲である第２８項の粒子。 ３１．前記磁気的に応答する金属酸化物粒子は約１ミクロン以下である第２８項 の粒子。 ３２．前記磁気的に応答する金属酸化物／ポリマーコーティングは超常磁性、常 磁性または強磁性金属酸化物からつくられる第２８項の粒子。 ３３．前記官能化ポリマーは生物学的材料へ結合される第２８項の粒子。 ３４．前記磁気的に応答する金属酸化物／ポリマーコーティングはポリスチレン 、架橋ポリスチレンまたは官能化ポリマーからつくられる第２８項の粒子。 ３５．前記金属酸化物は遷移金属塩からつくられる第２８項の粒子。 ３６．前記第１の金属酸化物／ポリマーコーティングを均一に被覆している追加 の金属酸化物／ポリマーコーティングを持っている第２８項の粒子。 ３７．約１ミクロン以下の金属酸化物粒子を集めること、前記金属酸化物粒子を 金属酸化物／ポリマーコーティングを形成するモノマーと混合すること、 開始剤の存在下ポリマーコア粒子を前記金属酸化物／ポリマー粒子で被覆するこ と、 を含む金属酸化物／ポリマーコーティングによって均一に被覆されたポリマーコ ア粒子を有する磁気的に応答するポリマー粒子の製造法。 ３８．前記金属酸化物／ポリマー粒子は、（ａ）前記金属酸化物／ポリマー粒子 を二価および三価遷移金属塩と水酸化ナトリウムとの混合物で加熱しそして沈澱 し、（ｂ）前記沈澱金属酸化物／ポリマー粒子を中性ｐＨになるまで洗浄し、 （ｃ）前記金属酸化物／ポリマー粒子を脱イオン水に再懸濁し、（ｄ）前記金属 酸化物／ポリマー粒子の凝集物を破砕するため前記金属酸化物／ポリマー粒子を かきまぜ、 （ｅ）前記金属酸化物／ポリマー粒子の粒度分布をせばめるため低速遠心するこ とによって製造される第３７項の方法。 ３９．前記金属酸化物／ポリマー粒子は金属酸化物／ポリマーコーティングを形 成するモノマーと混合され、前記モノマーはスチレン、ジビニルベンゼン、メチ ルメタクリレート、グリシジルメタクリレートおよび他のオレフィン性モノマー からなる群から選ばれる第３７項の方法。 ４０．前記ポリマーコア粒子は１ないし１００ミクロンである第３７項の方法。 ４１．約１ミクロン以下の金属酸化物粒子を集めること、前記金属酸化物粒子を 金属酸化物／ポリマーコーティングを形成するモノマーと混合すること、 開始剤の存在下ポリマーコア粒子を前記金属酸化物／ポリマー粒子で被覆するこ と、 を含む金属酸化物／ポリマーコーティングによって均一に被覆されたポリマーコ ア粒子を有する磁気的に応答する金属酸化物生物学的材料保持ポリマー粒子の製 造法。 ４２．前記金属酸化物／ポリマー粒子は、（ａ）前記金属酸化物／ポリマー粒子 を二価および三価遷移金属塩と水酸化ナトリウムとの混合物で加熱しそして沈澱 し、（ｂ）前記沈澱金属酸化物／ポリマー粒子を中性ｐＨになるまで洗浄し、 （ｃ）前記金属酸化物／ポリマー粒子の凝集物を破砕するため前記金属酸化物を 脱イオン水に再懸濁し、 （ｄ）前記金属酸化物／ポリマー粒子の粒度分布をせばめるための低速遠心する ことによって製造される第４１項の方法。 ４３．前記金属酸化物／ポリマー粒子は金属酸化物／ポリマーコーティングを形 放するモノマーと混合され、前記モノマーはスチレン、ジビニルベンゼン、メチ ルメタクリレートおよび他のオレフィン性モノマーからなる群から選ばれる第４ １項の方法。 ４４．前記ポリマーコア粒子は１ないし１００ミクロンである第４１項の方法。 ４５．官能化ポリマーへ結合した検体に対して特異性のリガンドを有する第１６ 項または第２８項の磁性粒子を懸濁液を形成するように流体標本と接触させるこ と、 前記懸濁液を十分な検体が前記特異性リガンドと反応するまでインキュベートす ること、 前記磁性粒子を前記懸濁液から分離すること、前記分離した磁性粒子へ前記検体 に対して特異性の第２の標識したリガンドを加えること、 前記懸濁液を十分な検体が前記検体に対して特異性の第２の標識したリガンドと 反応するまでインキュベートすること、前記磁性粒子を前記懸濁液から分離する こと、前記磁性粒子へ結合した標識したリガンドの量を測定すること、測定した 標識したリガンドの量を対照サンプルについて測定した検体の量と相関させるこ と、 を含む検体の存在もしくは濃度を決定する方法。 ４６．前記第２のリガンドはβ−Ｄ−ガラクトシダーゼで標識され、そして前記 磁性粒子へ結合した標識したリガンドの量は基質４−メチルベリフェリル−β− ガラクトピラノシドと螢光アナライザーを使用して測定される第４５項の方法。 ４７．前記螢光アナライザーは約３６５ｎｍ励起および約４５０ｎｍ発光フィル ターを有する第４５項の方法。 ４８．前記検体は酵素、ホルモン、ペプタイド、ビタミン、核酸、オリゴヌクレ オテツド、生物学的細胞、抗原、抗体およびハプテンからなる群から選ばれる第 ４５項の方法。 ４９．ウシ血清アルブミンが前記官能化ポリマーへ結合される第４５項の方法。 ５０．核酸標的分子中の特異性核酸シーケンスの存在または濃度を決定する方法 であって、 官能化ポリマーへ結合した、前記標的分子の前記核酸シーケンスに対して相補的 な核酸シーケンスを有する第１８項または第２８項の磁性粒子を懸濁液を形成す るように流体標本と接触させること、 前記懸濁液をハイブリダイゼーション条件下ハイブリダイゼーションを許容する に十分な時間インキュベートすること、前記磁性粒子を前記懸濁液から分離する こと、前記標的分子の前記核酸シーケンスに対して相補的な第２の標識した核酸 シーケンスを加えること、 前記懸濁液をハイブリダイゼーション条件下ハイブリダイゼーションを許容する のに十分な時間インキュベートすること、前記磁性粒子を前記懸濁液から分離す ること、前記標識によって前記磁性粒子上のデュプレックス生成を検出すること 、 を含む前記方法。 ５１．前記第２のリガンドはβ−Ｄ−ガラクトシダーゼで標識され、そして前記 磁性粒子へ付着した標識したリガンドの量は基質４−メチルウンベリフェリル− β−ガラクトピラノシドおよび螢光アナライザーを用いて測定される第５０項の 方法。 ５２．前記螢光アナライザーは約３６５ｎｍおよび約４５０ｎｍ発光フィルター を持っている第５０項の方法。 ５３．前記標的分子の前記核酸シーケンスに対して相補的な前記標識した核酸シ ーケンスはビオチンで標識され、そして前記標識は標識したアビジンにより増幅 される第５０項の方法。 ５４．生物質に対し特異性なリガンドを有する第１８項または第２８項の磁性粒 子を接触させること、 前記懸濁液を十分な生物質が前記リガンドと反応するまでインキュベートするこ と、 前記磁性粒子を前記懸濁液から分離すること、前記磁性粒子を前記生物質から分 離すること、実質上純粋な生物質を得ること、 を含む生物質の単離方法。 ５５．前記生物質は生物学的細胞である第５４項の方法。 ５６．前記生物質はタンパクである第５４項の方法。 ５７．前記生物質は骨髄細胞である第５４項の方法。 ５８．望まない生物質に対して特異性のリガンドを有する第１８項または第２８ 項の磁性粒子を接触させること、前記懸濁液を十分な生物質が前記リガンドと反 応するまでインキュベートすること、 前記磁性粒子を前記懸濁液から分離すること、望まない生物質を含まない懸濁液 を得ること、を含む望まない生物質の除去方法。 ５９．前記生物質は生物学的細胞である第５８項の方法。 ６０．前記生物質はタンパクである第５８項の方法。 ６１．第１８項または第２８項の磁性粒子を使用して産業廃棄物から望まない物 質を除去することよりなる産業廃棄物精製方法。