JPH0234957B2 - Konzurangohaitotai*sonoseizohohooyobisorekaranarukoshuyozai - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はガガイモ科植物コンズランゴ
（Marsdeniacundurango Reichenbach fil）より
得られ、下記式（） で示される新規コンズランゴ配糖体E₀₂、その製
造方法及びその化合物を有効成分とする抗腫瘍剤
に関する。 コンズランゴは南米西北部の山間地に自生する
ガガイモ科のややつる性の低木で、その樹皮は一
般に流エキスの形で消化不良、食欲不振時の芳香
性苦味健胃剤として用いられている（第９改正日
本薬局方解説書）。 また米国薬局方注解（United State
Dispensatary）第25版、1644頁（1955年）には
「民間では癌や梅毒の治療に用いられているが効
果については実証されていない」との記載があ
る。 コンズランゴ樹皮の成分としてはコンズランゴ
ゲニン（condurangogenin）―Ａ、コンズランゴ
ゲニン（condurangogenin）―Ｃ、その他多数の
プレグナン型化合物、それ等のエステル及び配糖
体が含まれ、その抽出、単離、構造等に関する報
告が近年、例えば下記の様な文献にみられるが、
その詳細については依然不明な点が多い。 R.Tschesche等著：Tetrahedron21，1777頁
（1965年）；21，1797頁（1965年）；23，1461頁
（1967年）；24，4359頁（1968年） M.Pailer等著：Monatshefte fiir Chemie
106，37頁（1975年） 三橋 博 等著：Chem.Pharm.Bull16，2522
頁（1986年） 又、その制癌活性についての信頼性ある報告は
見られない。 本発明者等は研究の結果、コンズランゴより式
（）で表わされ、制癌活性を有する新規コンズ
ランゴ配糖体を見出し、本発明を完成した。 以下に本発明を詳細に説明する。 本発明の化合物を抽出する原料であるコンズラ
ンゴはその樹皮を用いるのが好ましい。この樹皮
は市販のものを用いうるが採取後充分乾燥し、細
切したものを用いるのが好ましい。 なお、溶媒抽出工程において、溶媒の選択や使
用順位は絶対的なものでなく、適宜変更できる
が、抽出効率、経済性から好ましい製造法は以下
の通りである。 （第１操作） 細切したコンズランゴ例えばその樹皮を有機溶
媒及びこれ等の混合物で抽出して得られた抽出液
を減圧下濃縮乾固する。有機溶媒としてはメタノ
ール・エタノール・イソプロパノール等の低級ア
ルコールが用いられるが、メタノールが好まし
い。 なお、抽出を行う前に前処理として、ペンタ
ン、ヘキサン、ヘプタン、リグロイン、石油エー
テル等の脂肪族炭化水素で脱脂してもよい。この
場合、コンズランゴ樹皮に対して４〜７倍量
（Ｖ／Ｗ）のヘキサンを用いて行うのが好ましい。 抽出操作の一具体例を示すと、まず室温下数時
間〜数十時間静置にて抽出する。次いで過して
液を得る。残渣を同様な抽出過操作に繰返し
付し、得られた全ての液を合わせ、減圧下濃縮
乾固して抽出物を得る。 冷浸抽出で行うのが一般的であるが、抽出時間
を短縮する為、加温抽出を行つてもよい。加温抽
出は還流冷却器を付し、水浴上で４〜６時間、水
浴温度35〜55℃で行うのが好ましい。バーコレー
シヨン法によつてもよい。 溶媒使用量はコンズランゴ樹皮の２〜３倍量
（Ｖ／Ｗ）である。抽出残渣は最初の溶媒使用量
の0.7〜0.8倍量（Ｖ／Ｖ）ずつで３回以上繰返し
抽出するのが好ましい。 分離は紙過、遠心分離等で行つてもよい
が、市販の過助剤、例えばラジオライト（昭和
化学工業（株）社製）、セライト（和光純薬工業
（株）社製）、フアイブラセル（ジヨンス・マンビ
ル社製）等を使用して吸引過を行うと更に良い
結果が得られる。 減圧は通常の方法、例えばアスピレーター、真
空ポンプ等を用いて行う。 抽出容器は内面をグラスライニングしたもの、
ホーロー引きしたもの又はステンレス製のものを
用いる。 （第２操作） 第１操作で得られた抽出物にクロロホルム・ジ
クロロメタン等の四塩化炭素以外の塩素化炭化水
素を加え、激しく振盪して不溶部を除去して抽出
液を得る。除去した不溶部は同様な操作に繰返し
付し、得られた全ての抽出液を合わせる。使用溶
媒量は第１操作で得られた抽出物に対して２〜６
倍量（Ｖ／Ｗ）である。各残渣は最初の使用溶媒
量の0.2〜0.4倍量（Ｖ／Ｖ）ずつで４〜５回繰返
し操作するのが好ましい。 （第３操作） 第２操作で得られた抽出液をオーブンカラムに
付す操作である。カラム充填剤としはシリカゲ
ル、セルロース、フロリジル等を用いる。溶出条
件は適宜決められているが、以下の操作が好まし
い。 抽出液の0.2〜0.4倍量（Ｗ／Ｖ）のシリカゲル
を乾式法で充填したカラムに抽出液を注ぎ、まず
第２操作で用いたのと同一の溶媒で緑褐色バンド
を溶出除去させる。ついで、第１操作と第２操作
で用いたのと同一の溶媒の混液で溶出して得られ
る溶出液を減圧下濃縮乾固後粉砕して褐色粉末状
の抽出物を得る。 溶出はクロロホルムで緑褐色バンドを除いた後
に抽出液の1.5〜2.5倍量（Ｖ／Ｖ）のメタノー
ル・クロロホルム混液（容量比＝10：90〜30：
70）を用いて行うのが好ましい。 又、オーブンカラム法に代え、以下の溶媒抽出
操作を行つてもよい。即ち、第２操作で得られた
抽出物を完全に溶解する最小量のクロロホルム・
ジクロロメタン等の四塩化炭素以外の塩素化炭化
水素に溶解し、その生成溶液に２〜４倍量（Ｖ／
Ｖ）のペンタン、ｎ―ヘキサン、ヘプタン等の脂
肪族炭化水素又は抽出物に直接１〜３倍量（Ｖ／
Ｗ）の四塩化炭素又はトルエン、ベンゼン等の芳
香族炭化水素を加えて充分撹拌し、数時間〜数十
時間静置後に不溶部を分取する。 この不溶部を更に同様な操作に繰り返し付す。
最初の溶媒使用量の0.4〜0.6倍量（Ｖ／Ｖ）ずつ
で２〜３回繰り返し抽出するのが好ましい。かく
して得られた不溶部を減圧下で充分乾燥後に粉砕
して褐色粉末状の抽出物を得る。 この場合の不溶部の分取はデカンテーシヨン
法、吸引過、遠心分離で行うとよい。 なお、本発明の製造方法全体のコストを下げ、
或は操作を容易にするために、コンズランゴをま
ずアセトン・メチルエチルケトン等の脂肪族ケト
ン、酢酸メチル・酢酸エチル・酢酸ブチル等の低
級脂肪族エステル、ジエチルエーテル・テトラヒ
ドロフラン・ジオキサン等のエーテルで抽出し、
その抽出液を上記第３操作に付してもよい。この
場合の抽出は上記第１操作と同様になし得る。 （第４操作） 第３操作で得られた抽出物を高速液体クロマト
グラフ法（以後HPLCとする）に付し、本発明の
化合物を分画、単離する。まず第３操作で得られ
た抽出物を完全に溶解する最少量のクロロホルム
で溶解し、これにｎ―ヘキサンを液が白濁しない
程度まで加え、得られた試料溶液を順相系の
HPLCを用いｎ―ヘキサン・クロロホルム・メタ
ノール混液（容量比＝６：１：１）を溶離液とし
て溶出する。検出後で溶出ピークを確認しなが
ら、あらかじめ予備試験で得られたチヤート（添
付図面の第１図）のFr―１画分に該当するピー
クを指導として選択した画分を分取し、濃縮乾固
して抽出物を得る。 次いで得られた抽出物を逆相系のHPCLに付
す。検出器で溶出ピークを確認しながら、あらか
じめ予備試験で得られたチヤート（添付図面の第
２図）のFr―２画分に該当するピークを指標と
して選択した画分を分取後濃縮乾固し、白色粉末
状の本発明のコンズランゴ配糖体を得る。なお所
望に応じて再度逆相系HPLCで精製してもよい。 かくして得られる本発明の化合物のコンズラン
ゴ配糖体の物理、化学的性質は下記の通りであ
る。 (1) 性 状：白色非結晶性固体 (2) 分子量：1163（フイールド デソプーシヨン
マススペクトルによる） (3) 元素分析値：Ｃ；59.24、Ｈ；7.52 (4) 融 点：160〜167℃ (5) 比旋光度：〔α〕²⁰ _D−25.4゜（メタノール中Ｃ＝
0.35） (6) IR^KBr _naxom^-1：3450（ブロード）、1745、1705、
1700（シヨルダー）、1630、1250、1160、
1070（ブロード）、865（第４図参照） (7) UV^CH3OH _naxnm（log ε）：217（4.03）、223（3.9
9）、
280（4.25）（第５図参照） (8) 呈色反応 ケラー・キリアニ（Keller―Kiliani）反
応 陽性（緑褐色） リーベルマン・バーチヤード
（Liebermann―Burchard）反応
陽性（青緑色） (9) 酸性、中性、塩基性の区別：中性 (10) 溶解性 可溶：水、メタノール、エタノール、イソプロ
パノール、クロロホルム、ジクロロメタン 不溶：ペンタン、ｎ―ヘキサン、ヘプタン、四
塩化炭素、トルエン、ベンゼン (11) ¹H―NMRスペクトル（CDCl₃）（ppm） δ：1.21（3H、ｄ、Ｊ＝6H_z）、1.24（3H、ｓ、
18Me）、1.27（3H、ｄ、Ｊ＝6H_z）、1.31
（3H、ｓ、19Me）、1.34（3H、ｄ、Ｊ＝
6H_z）、1.91（3H、ｓ、Ac）、2.17（3H、ｓ、
21Me）、3.37、3.44、3.59（各々3H、ｓ）、
5.01（1H、ｄ、Ｊ＝10H_z）、5.41（1H、ｍ）、
5.84（1H、ｔ、Ｊ＝10H_z）、6.47（1H、ｄ、
Ｊ＝16H_z）、7.77（1H、ｄ、Ｊ＝16H_z）¹³ C―NMRスペクトル（ピリジン―d₃）（ppm） ゲニン部：79.2（３位の炭素）、85.5（14位の炭
素、118.0（６位の炭素）、139.5（５位の炭
素） アセチル基：169.9（カルボニル炭素） シンナモイル基：118.7、128.7（２本の重複）、
129.6（２本の重複）、130.9、134.6、146.4、
169.9（カルボニル炭素） 糖部：96.4、101.7（２本の重複）、106.5（各糖の
１位の炭素） 本発明の化合物の抗腫瘍作用は下記のスクリー
ニング試験により確認した。 抗腫瘍性の測定にはエーリツヒ・カルシノーマ
（Ehrlich carcinoma）癌種を用い、皮下結節型
腫瘍とした。 本発明の化合物投与群では一群７匹、対照群で
は一群10匹のマウスを用いた。 試験法 実験動物は６週令のddY系雄マウス（体重28〜
30ｇ）を用いた。 癌種をマウスの腹腔内に移植し、充分増殖した
７日目にこの細胞を採取し、2.0×10⁶個を実験マ
ウスのそけい部皮下に移殖し固型腫瘍とした。移
殖後24時間目より本発明の化合物を生理食塩水に
溶解し、腹腔内に投与した。 投与量は一匹当り１回0.2mlに調整し、１日１
回10日間連続投与を行つた。対照群には生理食塩
水のみを投与した。 移植後30日目に腫瘍を摘出し、本発明の化合物
投与群の平均腫瘍重量（Ｔ）、及び対照群の平均
腫瘍重量(C)を測定し、Ｔ／Ｃ（％）を算出した。
その結果８mg／Kg×10日、16mg／Kg×10日、32
mg／Kg×10日の投与でそのＴ／Ｃ（％）は各々
45.2、41.5、40.8であつた。 次に、本発明の化合物の急性毒性は下記の通り
である。本発明の化合物を５週令のddY系雄マウ
ス（体重21〜25ｇ）に腹腔内投与を行い、投与後
５日間にわたり一般症状、死亡例及び体重推移に
ついて観察し、LD₅₀値を算出した結果、103mg／
Kgであつた。 経口投与の際、固形製剤として用いる場合は錠
剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤等にすることがで
き、製剤上一般に使用される糖類、セルロース調
合物のような賦形剤、でんぷんペースト、メチル
セルロースのような結合剤、増量剤、崩壊剤等の
添加物を包含してもよい。また経口用液体製剤と
して用いる場合は、内用水剤、懸濁液剤、乳剤、
シロツプ剤等の形態であつても良く、また使用す
る前に再溶解させる乾燥生成物の形態であつても
よい。 本発明の化合物を成人に経口投与する場合１日
0.54〜8.10mg／Kgの範囲で用いることができる。
この際、用量は症状、年令、剤型等により適宜増
減される。 注射の場合は水溶液、懸濁剤、油性又は水溶性
乳剤の形態であつてもよいが、通常滅菌水又は生
理食塩液など水性液体媒体に溶解又は懸濁するこ
とにより調製される。必要に応じて一般に使用さ
れる溶解剤、安定化剤、保存剤、等張化剤など加
えても良い。 このようにして得られた注射液剤は静脈注射、
筋肉注射、皮下注射等適当な方法で投与される。
成人に非経口投与する場合は１日0.18〜2.70mg／
Kgの範囲で用いることができる。この際の用量
は、症状、年令、剤型、投与方式等により適宜増
減される。 以上述べたように、本発明のコンズランゴ配糖
体は従来知られていなかつた全く新しい化合物で
あり、又、その製造方法の発明によれば容易に入
取し得る原料生薬を用い低級アルコールによる抽
出、四塩化炭素以外の塩素化炭化水素による抽
出、オーブンカラム法若しくは四塩化炭素、芳香
族炭化水素、脂肪族炭化水素可溶部の除去、及び
高速液体クロマトグラフ法により順次抽出単離す
ることにより比較的簡単に且つ大量に製造するこ
とができる。更に、コンズランゴ配糖体は著しい
腫瘍増殖阻止効果を示し、医薬として優れた臨床
的効果を期待することができる。 以下、実施例により更に具体的に説明する。 実施例 細切したコンズランゴ樹皮10Kgにメタノール20
を加え、室温下一夜静置して冷浸抽出を行つ
た。静置後これを過し、残渣はメタノール15
ずつで同様に３回抽出過した。全液を合わ
せ、減圧下45℃で濃縮乾固して抽出物1.4Kgを得
た。 これを分液ロートに移し、クロロホルム３を
加えて激しく振盪した。静置後クロロホルム抽出
液を得、残渣はクロロホルム１ずつで同様に３
回抽出した。全抽出液を集め、カラムクロマト用
シリカゲル〔ワコーゲルＣ―200 和光純薬工業
(株)社製〕２Kgを乾式法で充填したカラム（内径×
長さ＝17cm×65cm）に吸着した後クロロホルム10
次いでメタノール・クロロホルム混液（容量比
＝20：80）14で順次溶出した。メタノール・ク
ロロホルム混液溶出部を減圧下45℃で濃縮乾固後
粉砕して褐色粉末状の抽出物323ｇを得た。 上記オーブンカラムにより分取した抽出物６ｇ
をクロロホルム50mlに溶解し、これにｎ―ヘキサ
ンを液が白濁しない最大量を加え、生成溶液を大
量分取用のHPLC〔ウオーターズ社製システム
500、充填剤：プレバツク500―シリカ（ウオータ
ーズ社製）、カラム：内径×長さ＝57mm×300mm、
溶離液：ｎ―ヘキサン・クロロホルム・メタノー
ル混液（容量比＝６：１：１）、流速：200ml／
分、検出：RI〕を用いて溶出した。検出器で溶
出ピークを確認しながら、添付図面第１図のFr
―１画分に該当するピークを指標として選択した
15分間の範囲の溶出液を分取後、減圧下45℃で濃
縮乾固して白色粉末状の抽出物1.1ｇを得た。 得られた抽出物を20mlの50％（Ｖ／Ｖ）アセト
ニトリル水溶液に溶解し、その１mlずつをセミ分
取用のHPLC〔充填剤：リコロソープ
（Lichrosorb）RP―18（メルク社製）、カラム：内
径×長さ＝21mm×300mm、溶離液：50％（Ｖ／Ｖ）
アセトニトリル水溶液、流速、６ml／分、圧力：
60Kg／cm²、検出：RI〕を用いて溶出した。検出
器で溶出ピークを確認しながら、添布図面第２図
のFr―２画分に該当するピークを指標として選
択した４分間の範囲の溶出液を分取後集めて、減
圧下40℃で濃縮乾固して白色粉末状の抽出物105
mgを得た。 次いで得られた抽出物を0.5mgずつとり、0.5ml
の50％（Ｖ／Ｖ）アセトニトリル水溶液に溶解
し、分析用のHPLC〔充填剤：リコロソープ
（Lichrosorb）RP―18（メルク社製）、カラム：内
径×長さ＝４mm×250mm、溶離液：50％（Ｖ／Ｖ）
アセトニトリル水溶液、流速：0.8ml／分、圧
力：150Kg／cm²、検出：UV280nm〕を用いて溶
出した。検出器で溶出ピークを確認しながら、添
布図面第３図の１ピークに該当する３分間の範囲
の溶出液を分取後集めて、減圧下40℃で濃縮乾固
して、白色粉末状の本発明のコンズランゴ配糖体
72mgを得た。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明の第３操作で得られた抽出物を
大量分取用の高速液体クロマトグラフ法にかけた
場合に得られるチヤートを示す。第２図は第１図
に示されるFr―１画分をセミ分取用の高速液体
クロマトグラフ法にかけた場合に得られるチヤー
トを示す。第３図は第２図で示されるFr―２画
分を分析用の高速液体クロマトグラフ法にかけた
場合に得られるチヤートを示す。第４図は本発明
のコンズランゴ配糖体の赤外吸収スペクトル
（KBr）を示す。第５図は本発明のコンズランゴ
配糖体の紫外吸収スペクトル（メタノール中）を
示す。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 下記式（） で示されるコンズランゴ配糖体。 ２ 下記式（） で示されるコンズランゴ配糖体の製造方法におい
   て、コンズランゴの低級アルコール及び四塩化炭
   素以外の塩素化炭化水素に可溶性の部分を得、次
   いでオープンカラムに付して四塩化炭素以外の塩
   素化炭化水素で溶出後、低級アルコール及び四塩
   化炭素以外の塩素化炭化水素との混液で溶出する
   部分を高速液体クロマトグラフ法で単離すること
   からなる方法。 ３ 下記式（） で示されるコンズランゴ配糖体からなる抗腫瘍
   剤。