JPH0892118A - 狼毒に含まれる抗癌および抗ウィルス性成分の採取法および使用法 - Google Patents
狼毒に含まれる抗癌および抗ウィルス性成分の採取法および使用法Info
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- JPH0892118A JPH0892118A JP6256052A JP25605294A JPH0892118A JP H0892118 A JPH0892118 A JP H0892118A JP 6256052 A JP6256052 A JP 6256052A JP 25605294 A JP25605294 A JP 25605294A JP H0892118 A JPH0892118 A JP H0892118A
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Abstract
(57)【要約】
【構成】 漢方生薬狼毒の地上部または地下部の低級ア
ルコール抽出エキスをシリカゲルを用い、ヘキサン−酢
酸エチル混合溶媒及びメタノール水での溶離を組合せて
効率よくグニデイマクリン、ステレラマクリン、オイデ
スミン、２８０±３ｎｍ、２９２±３ｎｍ、及び３２５
±３ｎｍに夫々吸収極大を有する成分及びＣ15Ｈ22Ｏ3
を分離する。 【効果】 得られた成分は従来の抗ウィルス性成分に比
し著しく強い活性を示し、特にエイズウィルスに対し、
ＡＺＴに比し著しく活性が強い。
ルコール抽出エキスをシリカゲルを用い、ヘキサン−酢
酸エチル混合溶媒及びメタノール水での溶離を組合せて
効率よくグニデイマクリン、ステレラマクリン、オイデ
スミン、２８０±３ｎｍ、２９２±３ｎｍ、及び３２５
±３ｎｍに夫々吸収極大を有する成分及びＣ15Ｈ22Ｏ3
を分離する。 【効果】 得られた成分は従来の抗ウィルス性成分に比
し著しく強い活性を示し、特にエイズウィルスに対し、
ＡＺＴに比し著しく活性が強い。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は漢方生薬狼毒の地上部お
よび／または地下部より抗癌および抗ウィルス、特に抗
エイズウィルス、作用を有する成分の改良された採取法
およびその使用法に関するものである。
よび／または地下部より抗癌および抗ウィルス、特に抗
エイズウィルス、作用を有する成分の改良された採取法
およびその使用法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】漢方生薬狼毒中に存在するグニデイマイ
シン及びステレラマイシンに強い抗癌作用のあることが
発見され、その採取法及び化学構造が出願されている。
（特願平２−５８１２６号及び特願平３−２８５３９６
号）。然しながら、その採取法は複雑で、収率が低い。
シン及びステレラマイシンに強い抗癌作用のあることが
発見され、その採取法及び化学構造が出願されている。
（特願平２−５８１２６号及び特願平３−２８５３９６
号）。然しながら、その採取法は複雑で、収率が低い。
【０００３】一方、抗ウィルス剤、抗癌剤は数多く開発
されているが、エイズウィルスなどレトロウィルスに有
効な薬剤は開発されていない。特に抗エイズ剤について
は広く研究されているが、エイズウィルスそのものに有
効なものが数少なく、それに有効な新しい薬剤の開発が
生命科学に携わる世界の研究者の急務である。抗エイズ
剤としてＡＺＴなど核酸誘導体が臨床に使用されている
が、必ずしも有効性が十分ではない。我々は漢方生薬に
ついて広く抗癌剤及び抗ウィルス作用の有無についてス
クリーニングを行って狼毒の地上部およびまたは地下部
に強力な抗ウィルス成分、特に抗エイズウィルス成分が
存在することを認めた。
されているが、エイズウィルスなどレトロウィルスに有
効な薬剤は開発されていない。特に抗エイズ剤について
は広く研究されているが、エイズウィルスそのものに有
効なものが数少なく、それに有効な新しい薬剤の開発が
生命科学に携わる世界の研究者の急務である。抗エイズ
剤としてＡＺＴなど核酸誘導体が臨床に使用されている
が、必ずしも有効性が十分ではない。我々は漢方生薬に
ついて広く抗癌剤及び抗ウィルス作用の有無についてス
クリーニングを行って狼毒の地上部およびまたは地下部
に強力な抗ウィルス成分、特に抗エイズウィルス成分が
存在することを認めた。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】本発明は抗癌作用を示
し、エイズウィルスなどレトロウィルスに有効な成分を
狼毒から提供するものである。また先に狼毒より初めて
分離したグニディマクリン及びステレラマクリン（特願
平３−２８５３９０号）に強い抗ウィルス作用があるこ
とを認めた。さらに狼毒からグニディマクリン及びステ
レラマクリンの採取法を改良することにより、それら以
外に強い抗ウィルス作用を有する成分があることを認
め、その採取方法及び使用法を提供するものである。
し、エイズウィルスなどレトロウィルスに有効な成分を
狼毒から提供するものである。また先に狼毒より初めて
分離したグニディマクリン及びステレラマクリン（特願
平３−２８５３９０号）に強い抗ウィルス作用があるこ
とを認めた。さらに狼毒からグニディマクリン及びステ
レラマクリンの採取法を改良することにより、それら以
外に強い抗ウィルス作用を有する成分があることを認
め、その採取方法及び使用法を提供するものである。
【０００５】
【課題を解決するための手段】従来、狼毒よりの抗癌性
成分グニディマクリン及びステレラマクリンの採取は、
狼毒の低級アルコールまたは酸性低級アルコール抽出エ
キスを水または希アルカリ水溶液に溶解し、水に混和し
ない有機溶媒で振盪した後有機溶媒層を採出し、有機溶
媒を留去して活性物質区分を採取、これをクロマトなど
の常法により精製することが行われて来た（特願平２−
５８１２６号）。然しながらこの採取法は工程が長く、
従って収率も低い。本発明者は狼毒よりのそれら成分の
簡単で効率のよい採取法を種々検討した結果、狼毒の低
級アルコール抽出エキスをヘキサン−酢酸エチル混合溶
剤、メタノール水を組合せて使用する逆相シリカゲルク
ロマトを採用することにより、簡単に、純度よく高収率
で目的とするグニディマクリン及びステレラマクリンが
得られることに加え、更にオイデスミン（Ａｕｓｔ．
Ｊ．Ｃｈｅｍ．２３ １３３（１９７０），Ｊ．Ｃｈｅ
ｍ．Ｓｏｃ．１９６７，２２２８）、及びＣ15Ｈ22Ｏ3
なる成分、新規ビスフラボン並びに２８０±３ｎｍに吸
収極大を有する成分、３２５±３ｎｍに吸収極大を持つ
成分及び２９２±３ｎｍに吸収極大を持つ成分を分離採
取できることを認めた。
成分グニディマクリン及びステレラマクリンの採取は、
狼毒の低級アルコールまたは酸性低級アルコール抽出エ
キスを水または希アルカリ水溶液に溶解し、水に混和し
ない有機溶媒で振盪した後有機溶媒層を採出し、有機溶
媒を留去して活性物質区分を採取、これをクロマトなど
の常法により精製することが行われて来た（特願平２−
５８１２６号）。然しながらこの採取法は工程が長く、
従って収率も低い。本発明者は狼毒よりのそれら成分の
簡単で効率のよい採取法を種々検討した結果、狼毒の低
級アルコール抽出エキスをヘキサン−酢酸エチル混合溶
剤、メタノール水を組合せて使用する逆相シリカゲルク
ロマトを採用することにより、簡単に、純度よく高収率
で目的とするグニディマクリン及びステレラマクリンが
得られることに加え、更にオイデスミン（Ａｕｓｔ．
Ｊ．Ｃｈｅｍ．２３ １３３（１９７０），Ｊ．Ｃｈｅ
ｍ．Ｓｏｃ．１９６７，２２２８）、及びＣ15Ｈ22Ｏ3
なる成分、新規ビスフラボン並びに２８０±３ｎｍに吸
収極大を有する成分、３２５±３ｎｍに吸収極大を持つ
成分及び２９２±３ｎｍに吸収極大を持つ成分を分離採
取できることを認めた。
【０００６】一方、グニディマクリン、ステレラマクリ
ンを含めこれら採取された成分はいずれも強い抗ウィル
ス作用、特に抗エイズ作用があることが認められ、それ
らの効果は、従来存在する抗ウィルス剤特にＡＺＴに、
比し著しく強く、抗エイズ剤としての使用が期待できる
ものであることを知った。なお、本発明の漢方生薬は狼
毒（Ｓｔｅｌｌｅｒａ ｃｈａｍａｅｊａｓｍｅ
Ｌ．， Ｅｕｐｈｏｒｂｉａ ｆｉｓｃｈｅｒｉａｎａ
Ｓｔｅｕｄ．， Ｅ． ｅｂｉａｃｔｅｏｌａＨａｙ
ａｔａ）の地上部または地下部を用いるものであり、そ
れから得られた物質の制癌活性はマウス白血病細胞Ｌ−
１２１０を用いてＭＴＴ法を行い、強い制癌活性が確認
された。また、抗エイズ活性は、エイズウィルスを用い
た試験法（Ｊ．Ｎａｔｉｏｎａｌ． Ｃａｎｃｅｒ Ｉ
ｎｓｔｉｔｕｔｅ，８１ 巻（Ｎｏ．８）５７７〜５８
６，１９８９年）によって行い、有効性が確認された。
ンを含めこれら採取された成分はいずれも強い抗ウィル
ス作用、特に抗エイズ作用があることが認められ、それ
らの効果は、従来存在する抗ウィルス剤特にＡＺＴに、
比し著しく強く、抗エイズ剤としての使用が期待できる
ものであることを知った。なお、本発明の漢方生薬は狼
毒（Ｓｔｅｌｌｅｒａ ｃｈａｍａｅｊａｓｍｅ
Ｌ．， Ｅｕｐｈｏｒｂｉａ ｆｉｓｃｈｅｒｉａｎａ
Ｓｔｅｕｄ．， Ｅ． ｅｂｉａｃｔｅｏｌａＨａｙ
ａｔａ）の地上部または地下部を用いるものであり、そ
れから得られた物質の制癌活性はマウス白血病細胞Ｌ−
１２１０を用いてＭＴＴ法を行い、強い制癌活性が確認
された。また、抗エイズ活性は、エイズウィルスを用い
た試験法（Ｊ．Ｎａｔｉｏｎａｌ． Ｃａｎｃｅｒ Ｉ
ｎｓｔｉｔｕｔｅ，８１ 巻（Ｎｏ．８）５７７〜５８
６，１９８９年）によって行い、有効性が確認された。
【０００７】狼毒の低級アルコール抽出物について、水
とヘキサン−酢酸エルチ（１：４）の分配によって抽出
を行い、有機溶媒抽出物を分離すると、活性物質の抽出
効率が従来法と比べて約４倍以上に上がる。しかしなが
ら、この方法により、活性物質の収率上昇のみならず、
フラボノイドなど一連のより極性の低い物質の収率もそ
れ以上に上昇した。つまりグニディマクリンの抽出物全
体に対する割合は約５％から約０．２％に減少した。そ
のため薄層クロマトや高速液体クロマトなどだけでは、
両化合物を完全に分離することが困難であり、以下のよ
うに改良した。
とヘキサン−酢酸エルチ（１：４）の分配によって抽出
を行い、有機溶媒抽出物を分離すると、活性物質の抽出
効率が従来法と比べて約４倍以上に上がる。しかしなが
ら、この方法により、活性物質の収率上昇のみならず、
フラボノイドなど一連のより極性の低い物質の収率もそ
れ以上に上昇した。つまりグニディマクリンの抽出物全
体に対する割合は約５％から約０．２％に減少した。そ
のため薄層クロマトや高速液体クロマトなどだけでは、
両化合物を完全に分離することが困難であり、以下のよ
うに改良した。
【０００８】前述のヘキサン−酢酸エチル（１：４）で
分配抽出した活性物質をメタノールに溶解し、逆層充填
剤Ｃ１８（例えば、ウォーターズ社製 Ｎｏ．２０５９
４）に混ぜ、４０％メタノール水で平衡化したＣ１８の
カラムに上層した。上層したカラムを５５％、７０％の
メタノール水で順次溶出した。最後にメタノール対水
（１０：１）で溶出することにより、フラボノイド系化
合物が除去され、グニディマクリン及びステレラマクリ
ンを効率良く得ることができた。
分配抽出した活性物質をメタノールに溶解し、逆層充填
剤Ｃ１８（例えば、ウォーターズ社製 Ｎｏ．２０５９
４）に混ぜ、４０％メタノール水で平衡化したＣ１８の
カラムに上層した。上層したカラムを５５％、７０％の
メタノール水で順次溶出した。最後にメタノール対水
（１０：１）で溶出することにより、フラボノイド系化
合物が除去され、グニディマクリン及びステレラマクリ
ンを効率良く得ることができた。
【０００９】この粗活性分画ではグニディマクリンは約
５０％に濃縮されて、その全体に対する割合は従来法
（特開平３−２６１７２３号）より凡そ１０倍まで上昇
した。この分画をさらに分取カラム（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ
ＯＤＳ，２２×２５０ｎｍ）を用いたＨＰＬＣにかけ
ることにより９０％以上純粋なグニディマクリン及びス
テレラマクリンを得ることが可能になった。
５０％に濃縮されて、その全体に対する割合は従来法
（特開平３−２６１７２３号）より凡そ１０倍まで上昇
した。この分画をさらに分取カラム（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ
ＯＤＳ，２２×２５０ｎｍ）を用いたＨＰＬＣにかけ
ることにより９０％以上純粋なグニディマクリン及びス
テレラマクリンを得ることが可能になった。
【００１０】この改良の結果、より短時間で、より少な
いステップで分離精製が可能になっただけでなく、より
多量の物質を同時に抽出することも可能にした。しか
も、グニディマクリンの損失が少ないため高い収率でグ
ニディマクリン及びステレラマクリンが得られるように
なった。さらにこの方法の最大の利点は、すべての抽出
の過程がガラス器具およびカラムのなかで処置されるた
め抽出の過程で生ずる強い炎症を引き起こす揮発性の化
合物などに暴露されることもなく取り扱い易さおよび安
全性が増した事である。
いステップで分離精製が可能になっただけでなく、より
多量の物質を同時に抽出することも可能にした。しか
も、グニディマクリンの損失が少ないため高い収率でグ
ニディマクリン及びステレラマクリンが得られるように
なった。さらにこの方法の最大の利点は、すべての抽出
の過程がガラス器具およびカラムのなかで処置されるた
め抽出の過程で生ずる強い炎症を引き起こす揮発性の化
合物などに暴露されることもなく取り扱い易さおよび安
全性が増した事である。
【００１１】一方狼毒の低級アルコール又は酸性低級ア
ルコール抽出エキスを水とヘキサン−酢酸エチル（１：
２）の分配によって抽出し、有機溶媒抽出部をシリカゲ
ルＣ−１８逆相カラムで処理し、５５％メタノール水で
溶出させるとオイデスミン及び分子量２５０、ＦＡＢ−
ＭＳによりＣ15Ｈ22Ｏ3 を主として含むフラクション
を、７０％メタノール水で溶出させると２８０±３ｎｍ
に吸収極大を有する成分を含むフラクションを、更に９
０％メタノール水で溶出させると２９２±３ｎｍ及び３
２５±３ｎｍに夫々吸収極大を有する成分を含むフラク
ションが得られる。これらの成分は、グニディマクリ
ン、ステレラマクリンと共にいずれも強い抗ウィルス、
特に抗エイズウィルス活性を有し抗エイズ剤としての使
用が可能である。
ルコール抽出エキスを水とヘキサン−酢酸エチル（１：
２）の分配によって抽出し、有機溶媒抽出部をシリカゲ
ルＣ−１８逆相カラムで処理し、５５％メタノール水で
溶出させるとオイデスミン及び分子量２５０、ＦＡＢ−
ＭＳによりＣ15Ｈ22Ｏ3 を主として含むフラクション
を、７０％メタノール水で溶出させると２８０±３ｎｍ
に吸収極大を有する成分を含むフラクションを、更に９
０％メタノール水で溶出させると２９２±３ｎｍ及び３
２５±３ｎｍに夫々吸収極大を有する成分を含むフラク
ションが得られる。これらの成分は、グニディマクリ
ン、ステレラマクリンと共にいずれも強い抗ウィルス、
特に抗エイズウィルス活性を有し抗エイズ剤としての使
用が可能である。
【００１２】本発明による成分を含む薬剤の投与形態と
しては、特に限定がなく、必要に応じて適宜選択するこ
とが可能である。例えば、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、
細粒剤、散剤等の経口剤としてもよく、あるいは注射
剤、坐剤等の非経口剤としてもよい。
しては、特に限定がなく、必要に応じて適宜選択するこ
とが可能である。例えば、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、
細粒剤、散剤等の経口剤としてもよく、あるいは注射
剤、坐剤等の非経口剤としてもよい。
【００１３】経口剤として使用する場合、所期の効果を
発揮するためには、患者の年齢、体重、疾患の程度にも
より異なるが、例えば、ステレラマクリンの場合、成人
に対し１日当り１ｍｇ〜２０ｍｇを数回に分けて投与す
ることが適当であり、グニディマクリンの場合、成人１
日あたり１ｍｇ〜１０ｍｇを投与することが適当であ
る。経口剤は、例えばデンプン、乳糖、白糖、マンニッ
ト、カルボキシメチルセルロース、コーンスターチ、無
機塩類等を賦形剤として用い、常法に従って製造すれば
よい。経口剤として調整するには、前記賦形剤の他に、
適宜、結合剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤、流動性促
進剤、矯味剤、着色剤、香料等を配合することができ、
それぞれの具体例は以下に示す如くである。
発揮するためには、患者の年齢、体重、疾患の程度にも
より異なるが、例えば、ステレラマクリンの場合、成人
に対し１日当り１ｍｇ〜２０ｍｇを数回に分けて投与す
ることが適当であり、グニディマクリンの場合、成人１
日あたり１ｍｇ〜１０ｍｇを投与することが適当であ
る。経口剤は、例えばデンプン、乳糖、白糖、マンニッ
ト、カルボキシメチルセルロース、コーンスターチ、無
機塩類等を賦形剤として用い、常法に従って製造すれば
よい。経口剤として調整するには、前記賦形剤の他に、
適宜、結合剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤、流動性促
進剤、矯味剤、着色剤、香料等を配合することができ、
それぞれの具体例は以下に示す如くである。
【００１４】結合剤としては例えば、デンプン、デキス
トリン、アラビアゴム末、ゼラチン、ヒドロキシプロピ
ルスターチ、メチルセルロース、カルボキシメチルセル
ロースナトリウム、ヒドロキシプロピルセルロース、結
晶セルロース、エチルセルロース、ポリビニルピロリド
ン、マクロゴール等を挙げることができる。崩壊剤とし
ては、例えばデンプン、ヒドロキシプロピルスターチ、
カルボキシメチルセルロースナトリウム、カルボキシメ
チルセルロースカルシウム、カルボキシメチルセルロー
ス、低置換ヒドロキシプロピルセルロース等を挙げるこ
とができる。界面活性剤としては、例えばラウリル硫酸
ナトリウム、大豆レシチン、ショ糖脂肪酸エステル、ポ
リソルベート８０等を挙げることができる。滑沢剤とし
ては、例えばタルク、ロウ類、水素添加植物油、ショ糖
脂肪酸エステル、ステアリン酸マグネシウム、ステアリ
ン酸カルシウム、ステアリン酸アルミニウム、ポリエチ
レングリコール等を挙げることができる。流動性促進剤
としては、例えば軽質無水ケイ酸、乾燥水酸化アルミニ
ウムゲル、合成ケイ酸アルミニウム、ケイ酸マグネシウ
ム等を挙げることができる。また本発明化合物類は、懸
濁液、エマルジョン剤、シロップ剤、エリキシル剤とし
ても投与することができ、これらの各種剤形には、矯味
矯臭剤、着色剤等を含有してもよい。
トリン、アラビアゴム末、ゼラチン、ヒドロキシプロピ
ルスターチ、メチルセルロース、カルボキシメチルセル
ロースナトリウム、ヒドロキシプロピルセルロース、結
晶セルロース、エチルセルロース、ポリビニルピロリド
ン、マクロゴール等を挙げることができる。崩壊剤とし
ては、例えばデンプン、ヒドロキシプロピルスターチ、
カルボキシメチルセルロースナトリウム、カルボキシメ
チルセルロースカルシウム、カルボキシメチルセルロー
ス、低置換ヒドロキシプロピルセルロース等を挙げるこ
とができる。界面活性剤としては、例えばラウリル硫酸
ナトリウム、大豆レシチン、ショ糖脂肪酸エステル、ポ
リソルベート８０等を挙げることができる。滑沢剤とし
ては、例えばタルク、ロウ類、水素添加植物油、ショ糖
脂肪酸エステル、ステアリン酸マグネシウム、ステアリ
ン酸カルシウム、ステアリン酸アルミニウム、ポリエチ
レングリコール等を挙げることができる。流動性促進剤
としては、例えば軽質無水ケイ酸、乾燥水酸化アルミニ
ウムゲル、合成ケイ酸アルミニウム、ケイ酸マグネシウ
ム等を挙げることができる。また本発明化合物類は、懸
濁液、エマルジョン剤、シロップ剤、エリキシル剤とし
ても投与することができ、これらの各種剤形には、矯味
矯臭剤、着色剤等を含有してもよい。
【００１５】本発明化合物類を非経口剤として用いる場
合、所期の効果を発揮するためには、患者の年齢、体
重、疾患の程度により異なるが、通常、成人で本発明化
合物類の重量として１日０．５ｍｇ〜５ｍｇ程度の量を
静注、点滴静注、皮下注射、筋肉注射すればよい。これ
らの非経口剤は、常法に従って製造され、希釈剤として
一般に注射用蒸留水、生理食塩水、ブドウ糖水溶液、注
射用植物油、ゴマ油、ラッカセイ油、ダイズ油、トウモ
ロコシ油、プロピレングリコール、ポリエチレングリコ
ール等を用いることが可能である。さらに必要に応じ
て、殺菌剤、防腐剤、安定剤を加えてもよい。また、こ
の非経口剤は、安定性の点から好ましい方法として、バ
イアル等に充填後冷凍し、通常の凍結乾燥技術により水
分を除去して凍結乾燥物とした後、使用直前に液剤とし
て再調整することも可能である。さらに必要に応じて適
宜、等張化剤、安定剤、防腐剤、無痛化剤等を加えても
よい。その他の非経口剤としては、外用液剤、軟膏等の
塗布剤、直腸内投与のための坐剤等が挙げられ、常法に
従って製造することが可能である。次に実施例を挙げ、
本発明を更に詳しく説明する。
合、所期の効果を発揮するためには、患者の年齢、体
重、疾患の程度により異なるが、通常、成人で本発明化
合物類の重量として１日０．５ｍｇ〜５ｍｇ程度の量を
静注、点滴静注、皮下注射、筋肉注射すればよい。これ
らの非経口剤は、常法に従って製造され、希釈剤として
一般に注射用蒸留水、生理食塩水、ブドウ糖水溶液、注
射用植物油、ゴマ油、ラッカセイ油、ダイズ油、トウモ
ロコシ油、プロピレングリコール、ポリエチレングリコ
ール等を用いることが可能である。さらに必要に応じ
て、殺菌剤、防腐剤、安定剤を加えてもよい。また、こ
の非経口剤は、安定性の点から好ましい方法として、バ
イアル等に充填後冷凍し、通常の凍結乾燥技術により水
分を除去して凍結乾燥物とした後、使用直前に液剤とし
て再調整することも可能である。さらに必要に応じて適
宜、等張化剤、安定剤、防腐剤、無痛化剤等を加えても
よい。その他の非経口剤としては、外用液剤、軟膏等の
塗布剤、直腸内投与のための坐剤等が挙げられ、常法に
従って製造することが可能である。次に実施例を挙げ、
本発明を更に詳しく説明する。
【００１６】（実施例１）中国四川省成都で入手したチ
ベット産瑞香狼毒３ｋｇの乾燥根茎をよく粉砕し、メタ
ノール１０リットルにて加熱還流しながら５時間抽出す
る。抽出物を濾紙で濾過した後、溶媒を減圧下で留去
し、メタノール抽出物約４５０ｇを得た。このうち５０
ｇを水５００ｍｌに懸濁し、石油ベンヂン５００ｍｌで
分液ロートで抽出する。石油ベンヂン抽出を３回繰り返
した後、溶媒を減圧下留去して活性物質を得た。これを
シリカゲルカラム（カラム、５ｃｍ×２０ｃｍ）にかけ
て、ヘキサン：酢酸エチル（１：２）で溶出し、溶媒を
留去して活性物質ＭＭＢ−Ｉ，２．７ｇを得る。さらに
シリカゲルカラムをヘキサン：酢酸エチル（１：４）で
溶出してＭＭＢ−II，１．７ｇを得た。ＭＭＢ−II，５
００ｍｇをメタノールに溶解し、水を加え５５％メタノ
ール水になるようにする。一方、ウォータース社製分取
用Ｃ−１８（Ｎｏ．２０５９４）２５ｇを５５％メタノ
ール水でよく撹拌して膨潤させ、ガラスカラム（直径５
ｃｍ）に充填しておく。これに上記試料をのせてから、
７０％メタノール水で溶出する。その後１０％メタノー
ル水約７００ｍｌで溶出するとグニディマクリンとステ
レラマクリンが溶出する。これを分取用ＯＤＳカラム
（直径２ｃｍ×２０ｃｍ、Ｓｈｉｍ Ｐａｃｋ ｐｒｅ
ｐ）にかけメタノール：水（１０：１）で展開して分取
すると、純粋なグニディマクリンおよびステレラマクリ
ンを約０．００１％の収率で得ることができる。この収
量は従来法（特開平３−２６１７２３号）の凡そ１０倍
近い効率である。
ベット産瑞香狼毒３ｋｇの乾燥根茎をよく粉砕し、メタ
ノール１０リットルにて加熱還流しながら５時間抽出す
る。抽出物を濾紙で濾過した後、溶媒を減圧下で留去
し、メタノール抽出物約４５０ｇを得た。このうち５０
ｇを水５００ｍｌに懸濁し、石油ベンヂン５００ｍｌで
分液ロートで抽出する。石油ベンヂン抽出を３回繰り返
した後、溶媒を減圧下留去して活性物質を得た。これを
シリカゲルカラム（カラム、５ｃｍ×２０ｃｍ）にかけ
て、ヘキサン：酢酸エチル（１：２）で溶出し、溶媒を
留去して活性物質ＭＭＢ−Ｉ，２．７ｇを得る。さらに
シリカゲルカラムをヘキサン：酢酸エチル（１：４）で
溶出してＭＭＢ−II，１．７ｇを得た。ＭＭＢ−II，５
００ｍｇをメタノールに溶解し、水を加え５５％メタノ
ール水になるようにする。一方、ウォータース社製分取
用Ｃ−１８（Ｎｏ．２０５９４）２５ｇを５５％メタノ
ール水でよく撹拌して膨潤させ、ガラスカラム（直径５
ｃｍ）に充填しておく。これに上記試料をのせてから、
７０％メタノール水で溶出する。その後１０％メタノー
ル水約７００ｍｌで溶出するとグニディマクリンとステ
レラマクリンが溶出する。これを分取用ＯＤＳカラム
（直径２ｃｍ×２０ｃｍ、Ｓｈｉｍ Ｐａｃｋ ｐｒｅ
ｐ）にかけメタノール：水（１０：１）で展開して分取
すると、純粋なグニディマクリンおよびステレラマクリ
ンを約０．００１％の収率で得ることができる。この収
量は従来法（特開平３−２６１７２３号）の凡そ１０倍
近い効率である。
【００１７】（実施例２）実施例１で得たＭＭＢ−Ｉ，
５００ｍｇをメタノールに溶解し、水を加え５５％メタ
ノール水になるようにする。一方、ウォータース社製分
取用Ｃ−１８担体（Ｎｏ．２０５９４）２５ｇを５５％
メタノール水によく撹拌して膨潤されてから、ガラスカ
ラム（直径５ｃｍ）に充填しておく。これに上記試料を
のせて、５５％メタノール水約１リットルで溶出する。
溶出物は溶媒を留去してＭＭＢ−Ｉ−１ １１０ｍｇを
得る。さらに７０％メタノール水で溶出した後１０％メ
タノール水で溶出すると、ＭＭＢ−Ｉ−２ １３０ｍｇ
を得る。ここに得られたＭＭＢ−Ｉ−２はＵＶ吸収スペ
クトルにおいて２７９ｎｍ（実際的には２８０±３ｎ
ｍ）に極大吸収をもつ。次に９０％メタノール水で上記
のカラムを溶出するとＭＭＢ−Ｉ−３ ２１０ｍｇを得
る。これをさらに分取用ＯＤＳカラム（直径２ｃｍ×２
０ｃｍ、Ｓｈｉｍ Ｐａｃｋ ｐｒｅｐ）にかけてメタ
ノール：水（１０：１）で溶出すると、ＵＶ吸収で２９
２±３ｎｍに極大吸収をもつＭＭＢ−Ｉ−３１と３２５
±３ｎｍに極大吸収をもつＭＭＢ−Ｉ−３２を得ること
ができる。ＭＭＢ−Ｉ−３１およびＭＭＢ−Ｉ−３２は
狼毒の地上部からも得られる。
５００ｍｇをメタノールに溶解し、水を加え５５％メタ
ノール水になるようにする。一方、ウォータース社製分
取用Ｃ−１８担体（Ｎｏ．２０５９４）２５ｇを５５％
メタノール水によく撹拌して膨潤されてから、ガラスカ
ラム（直径５ｃｍ）に充填しておく。これに上記試料を
のせて、５５％メタノール水約１リットルで溶出する。
溶出物は溶媒を留去してＭＭＢ−Ｉ−１ １１０ｍｇを
得る。さらに７０％メタノール水で溶出した後１０％メ
タノール水で溶出すると、ＭＭＢ−Ｉ−２ １３０ｍｇ
を得る。ここに得られたＭＭＢ−Ｉ−２はＵＶ吸収スペ
クトルにおいて２７９ｎｍ（実際的には２８０±３ｎ
ｍ）に極大吸収をもつ。次に９０％メタノール水で上記
のカラムを溶出するとＭＭＢ−Ｉ−３ ２１０ｍｇを得
る。これをさらに分取用ＯＤＳカラム（直径２ｃｍ×２
０ｃｍ、Ｓｈｉｍ Ｐａｃｋ ｐｒｅｐ）にかけてメタ
ノール：水（１０：１）で溶出すると、ＵＶ吸収で２９
２±３ｎｍに極大吸収をもつＭＭＢ−Ｉ−３１と３２５
±３ｎｍに極大吸収をもつＭＭＢ−Ｉ−３２を得ること
ができる。ＭＭＢ−Ｉ−３１およびＭＭＢ−Ｉ−３２は
狼毒の地上部からも得られる。
【００１８】（実施例３）実施例２によって得られるＭ
ＭＢ−Ｉ−１ ３００ｍｇを分取用逆相薄層クロマト板
（メルク社製 Ｎｏ．１５３８９）にチャージして、７
０％メタノール水で展開すると、Ｒｆ約０．８に青色の
強い蛍光をもつ物質が得られる。これをかき取り抽出し
て、更に分取用順相薄層クロマト板、クロロホルム：メ
タノール（１０：１）で精製して、ＳＣ＃１−１（ハイ
ドロオキシクマリン）１３ｍｇを得た。上記の逆相ＴＬ
ＣでＲｆ約０．６の物質を同様に抽出し、順相ＴＬＣ、
クロロホルム：メタノール（２０：３）で精製すると、
蛍光はないがＵＶのあるＳＣ＃２ １０ｍｇを得る。Ｓ
Ｃ＃２は新規のビスフラボンである。またこの逆相ＴＬ
ＣでＲｆ約０．２５の物質を更に順相ＴＬＣ、クロロホ
ルム：エチルエーテル（２：１）で精製すると、２つの
物質ＳＣ＃４−１ １２ｍｇ、ＳＣ＃４−２ ６ｍｇを
得た。なおここで得られたＳＣ＃４−１は、ＦＡＢ−Ｍ
ＳよりＣ22Ｈ26Ｏ6 の化学式が与えられ、ＵＶ吸収の極
大は２３１，２７８ｎｍにあり、プロトン及びＣ−１３
ＮＭＲ等よりオイデスミン（ｅｕｄｅｓｍｉｎ，Ａｕ
ｓｔ．Ｊ．Ｃｈｅｍ．２３，１３３（１９７０），Ｊ．
Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９６７，２２２８）であることが
決定された。ＳＣ＃４−２は、ＦＡＢ−ＭＳより、分子
量２５０であり、Ｃ15Ｈ22Ｏ3 であることがわかった。
オイデスミン、ＳＣ＃１−１、ＳＣ＃２、ＳＣ＃４−１
およびＳＣ＃４−２は狼毒の地上部からも得られる。
ＭＢ−Ｉ−１ ３００ｍｇを分取用逆相薄層クロマト板
（メルク社製 Ｎｏ．１５３８９）にチャージして、７
０％メタノール水で展開すると、Ｒｆ約０．８に青色の
強い蛍光をもつ物質が得られる。これをかき取り抽出し
て、更に分取用順相薄層クロマト板、クロロホルム：メ
タノール（１０：１）で精製して、ＳＣ＃１−１（ハイ
ドロオキシクマリン）１３ｍｇを得た。上記の逆相ＴＬ
ＣでＲｆ約０．６の物質を同様に抽出し、順相ＴＬＣ、
クロロホルム：メタノール（２０：３）で精製すると、
蛍光はないがＵＶのあるＳＣ＃２ １０ｍｇを得る。Ｓ
Ｃ＃２は新規のビスフラボンである。またこの逆相ＴＬ
ＣでＲｆ約０．２５の物質を更に順相ＴＬＣ、クロロホ
ルム：エチルエーテル（２：１）で精製すると、２つの
物質ＳＣ＃４−１ １２ｍｇ、ＳＣ＃４−２ ６ｍｇを
得た。なおここで得られたＳＣ＃４−１は、ＦＡＢ−Ｍ
ＳよりＣ22Ｈ26Ｏ6 の化学式が与えられ、ＵＶ吸収の極
大は２３１，２７８ｎｍにあり、プロトン及びＣ−１３
ＮＭＲ等よりオイデスミン（ｅｕｄｅｓｍｉｎ，Ａｕ
ｓｔ．Ｊ．Ｃｈｅｍ．２３，１３３（１９７０），Ｊ．
Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９６７，２２２８）であることが
決定された。ＳＣ＃４−２は、ＦＡＢ−ＭＳより、分子
量２５０であり、Ｃ15Ｈ22Ｏ3 であることがわかった。
オイデスミン、ＳＣ＃１−１、ＳＣ＃２、ＳＣ＃４−１
およびＳＣ＃４−２は狼毒の地上部からも得られる。
【００１９】（実施例４）成人病Ｔ細胞白血病の培養株
ＭＴ−２を５０００乃至１００００個づつを９６穴培養
プレートに入れ、一群にはエイズウィルス感染細胞４０
０個を他の群には非感染細胞４００個をそれぞれ加え
る。それぞれの群に各試料０．０００１ｍｃｇ／ｍｌ、
０．００００１ｍｃｇ／ｍｌを添加したものと添加しな
いコントロール群とをつくり、７日間５％炭酸ガス孵卵
器で３７℃に保って培養する。７日間後ＭＭＴ法によっ
て、各群の生細胞数を測定する。そして各試料の一定濃
度におけるウィルス感染細胞と非感染細胞の生細胞数を
求めて、試料の抗ウィルス活性を測定し、 によって評価し、表１にその結果を示した。比較のた
め、ＡＺＴの試験結果を表示した。
ＭＴ−２を５０００乃至１００００個づつを９６穴培養
プレートに入れ、一群にはエイズウィルス感染細胞４０
０個を他の群には非感染細胞４００個をそれぞれ加え
る。それぞれの群に各試料０．０００１ｍｃｇ／ｍｌ、
０．００００１ｍｃｇ／ｍｌを添加したものと添加しな
いコントロール群とをつくり、７日間５％炭酸ガス孵卵
器で３７℃に保って培養する。７日間後ＭＭＴ法によっ
て、各群の生細胞数を測定する。そして各試料の一定濃
度におけるウィルス感染細胞と非感染細胞の生細胞数を
求めて、試料の抗ウィルス活性を測定し、 によって評価し、表１にその結果を示した。比較のた
め、ＡＺＴの試験結果を表示した。
【００２０】
【表１】
【００２１】
【発明の効果】本発明の方法により、狼毒中に存在する
抗癌性成分グニディマクリン及びステレラマクリンが比
較的簡単に高収量で得られることに加え、オイデスミ
ン、新規のビスフラボン、Ｃ15Ｈ22Ｏ3 、２８０±３ｎ
ｍ、２９２±３ｎｍ及び３２５±３ｎｍに夫々吸収極大
を有する成分が得られる。抗癌性成分を含むこれらの成
分全てが従来にない強い抗ウィルス作用、特に抗エイズ
ウィルス作用を有するので抗エイズ剤としての利用が期
待できる。
抗癌性成分グニディマクリン及びステレラマクリンが比
較的簡単に高収量で得られることに加え、オイデスミ
ン、新規のビスフラボン、Ｃ15Ｈ22Ｏ3 、２８０±３ｎ
ｍ、２９２±３ｎｍ及び３２５±３ｎｍに夫々吸収極大
を有する成分が得られる。抗癌性成分を含むこれらの成
分全てが従来にない強い抗ウィルス作用、特に抗エイズ
ウィルス作用を有するので抗エイズ剤としての利用が期
待できる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ０７Ｇ 17/00 Ｚ
Claims (7)
- 【請求項１】 狼毒の低級アルコール抽出物をシリカゲ
ルクロマト処理し、ヘキサン−酢酸エチル１：４（Ｖ／
Ｖ）混合溶媒での溶離部を逆相クロマト及びメタノール
水処理する抗癌性を有する成分であるグニデイマクリン
及びステレラマクリンの採取法。 - 【請求項２】 狼毒の地上部およびまたは地下部低級ア
ルコール抽出物をシリカゲルクロマト処理し、ヘキサン
−酢酸エチル１：２（Ｖ／Ｖ）混合溶媒での溶離部を逆
相クロマト及びメタノール水処理し、抗ウィルス性を有
する区分を採取することを特徴とする抗ウィルス性成分
の採取法。 - 【請求項３】 メタノール水が５５％メタノール水であ
る請求項２の採取法。 - 【請求項４】 メタノール水が７０％メタノール水であ
る請求項２の採取法。 - 【請求項５】 メタノール水が９０％メタノール水であ
る請求項２の採取法。 - 【請求項６】 抗ウィルス性成分が、狼毒に存在する２
９２±３ｎｍに吸収極大をもつ成分、２８０±３ｎｍに
吸収極大をもつ成分、３２５±３ｎｍに吸収極大をもつ
成分、及びＣ15Ｈ22Ｏ3 で示される成分並びにグニディ
マクリン、ステレラマクリンおよびオイデスミンおよび
新規のビスフラボンからなる群から選ばれた少くとも１
つである抗ウィルス剤としての使用法。 - 【請求項７】 抗ウィルス剤が抗エイズウィルス剤であ
る請求項６の使用法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6256052A JPH0892118A (ja) | 1994-09-27 | 1994-09-27 | 狼毒に含まれる抗癌および抗ウィルス性成分の採取法および使用法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6256052A JPH0892118A (ja) | 1994-09-27 | 1994-09-27 | 狼毒に含まれる抗癌および抗ウィルス性成分の採取法および使用法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0892118A true JPH0892118A (ja) | 1996-04-09 |
Family
ID=17287240
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP6256052A Pending JPH0892118A (ja) | 1994-09-27 | 1994-09-27 | 狼毒に含まれる抗癌および抗ウィルス性成分の採取法および使用法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0892118A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2003066556A1 (en) * | 2002-02-05 | 2003-08-14 | Hormos Medical Corporation | Lignan derivatives |
| CN102603765A (zh) * | 2012-02-02 | 2012-07-25 | 齐齐哈尔医学院 | 狼毒大戟有效成分提取方法及由该成分制备的二萜类药物 |
-
1994
- 1994-09-27 JP JP6256052A patent/JPH0892118A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2003066556A1 (en) * | 2002-02-05 | 2003-08-14 | Hormos Medical Corporation | Lignan derivatives |
| CN102603765A (zh) * | 2012-02-02 | 2012-07-25 | 齐齐哈尔医学院 | 狼毒大戟有效成分提取方法及由该成分制备的二萜类药物 |
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