JPH0232263A - 核酸の塩基配列決定法 - Google Patents
核酸の塩基配列決定法Info
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- JPH0232263A JPH0232263A JP63183829A JP18382988A JPH0232263A JP H0232263 A JPH0232263 A JP H0232263A JP 63183829 A JP63183829 A JP 63183829A JP 18382988 A JP18382988 A JP 18382988A JP H0232263 A JPH0232263 A JP H0232263A
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- dna
- nucleic acid
- fragments
- gel
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- Pending
Links
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Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は、核酸の塩基配列決定法に関するらのである。
蛍光標識を用いた核酸の塩基配列決定法は、特開昭６０
−２２０８６０に出願されているように、４種類の塩基
の断片に、各々異なる波長を持つ蛍光物質で標識してい
た。
−２２０８６０に出願されているように、４種類の塩基
の断片に、各々異なる波長を持つ蛍光物質で標識してい
た。
従って、核酸断片を調製するために４［ｉ類の反応を行
ない、４種の蛍光物質を用いなければならなかった。ま
た、蛍光物質を検出するために４色を弁別する必要があ
り、ピーク検出時の基準信号となるものがなく、常時４
種のピークをサンプリングしている必要があった。
ない、４種の蛍光物質を用いなければならなかった。ま
た、蛍光物質を検出するために４色を弁別する必要があ
り、ピーク検出時の基準信号となるものがなく、常時４
種のピークをサンプリングしている必要があった。
本発明は、上記欠点を解決するために、蛍光物質でｌｉ
！識した核酸断片をポリアクリルアミドゲル電気泳動に
より展開し核酸の塩基配列決定を行う方法において、前
記核酸断片を ■［Ｗ＋Ｘ］ ■［Ｗ＋Ｘ＋Ｙ＋Ｚ］ ■ ［Ｗ＋Ｙ］ （Ｗ、Ｘ、Ｙ、Ｚはそれぞれ核酸塩基Ａ、Ｃ１Ｇ、Ｔの
いずれかを示す、） の集合で調製し、かつ、上記３種はそれぞれ別々な蛍光
波長を持つ蛍光物質で標識することを特徴とするもので
ある。
！識した核酸断片をポリアクリルアミドゲル電気泳動に
より展開し核酸の塩基配列決定を行う方法において、前
記核酸断片を ■［Ｗ＋Ｘ］ ■［Ｗ＋Ｘ＋Ｙ＋Ｚ］ ■ ［Ｗ＋Ｙ］ （Ｗ、Ｘ、Ｙ、Ｚはそれぞれ核酸塩基Ａ、Ｃ１Ｇ、Ｔの
いずれかを示す、） の集合で調製し、かつ、上記３種はそれぞれ別々な蛍光
波長を持つ蛍光物質で標識することを特徴とするもので
ある。
以下に本発明の一実施例を第１図により説明する。まず
、塩基配列を決定したいＤＮＡ断片を挿入された一本原
ＤＮＡ１に相補鎖の合成開始点を決める蛍光１ライマー
２を３種類用いて各々、別々にアーニングさせる。
、塩基配列を決定したいＤＮＡ断片を挿入された一本原
ＤＮＡ１に相補鎖の合成開始点を決める蛍光１ライマー
２を３種類用いて各々、別々にアーニングさせる。
次に、酵素を触媒とし、ＤＮＡ合成のための基質３が各
々の蛍光プライマー２より合成してゆく。
々の蛍光プライマー２より合成してゆく。
このとき基質３に含まれているダイデオキシヌクレオチ
ドの種類に応じたＤＮＡ断片４が合成される。
ドの種類に応じたＤＮＡ断片４が合成される。
これらＤＮＡ断片４の内容を例えば以下の種類に分け、
電気泳動ゲルに供給しゲル６で分離、展開を行う。
電気泳動ゲルに供給しゲル６で分離、展開を行う。
■Ａ、Ｇ
■Ａ、Ｃ，Ｇ、Ｔ
■Ａ、Ｔ
ゲル６に電場を与え、その中をＤＮＡ断片４が、分子量
の大きさ順に並びながら移動してゆく、このとき、レー
ザー５をゲル６のある点で照射しておく、すると、その
点を蛍光標識されたＤＮＡ断片４が移動してきたときに
、蛍光物質が励起され蛍光を発する。この蛍光を検出器
７により検出し、信号を、処理装置８に送る。蛍光の波
長を■、■、■各々異なっているため、検出器７にて、
波長により信号を選択させると、第２図のチャートが得
られる。基準信号１０は、塩基ごとに必ず検出され、基
準信号１０が検出されるたびに識別信号９．１１の有無
を確認することで塩基配列１２が決定できる。
の大きさ順に並びながら移動してゆく、このとき、レー
ザー５をゲル６のある点で照射しておく、すると、その
点を蛍光標識されたＤＮＡ断片４が移動してきたときに
、蛍光物質が励起され蛍光を発する。この蛍光を検出器
７により検出し、信号を、処理装置８に送る。蛍光の波
長を■、■、■各々異なっているため、検出器７にて、
波長により信号を選択させると、第２図のチャートが得
られる。基準信号１０は、塩基ごとに必ず検出され、基
準信号１０が検出されるたびに識別信号９．１１の有無
を確認することで塩基配列１２が決定できる。
本発明によると、基準信号をもとにし、識別信号の有無
のみで、塩基の判定が行なわれるため、採取されるデー
ターの量は、基準信号が出ていないときは１／４になり
、基準信号が観測されたときには、３／４になる。この
ため、情報処理量が減るため、短時間で結果が出力でき
、また、蛍光プライマーの種類も３種類に減少でき、Ｄ
ＮＡ断片の調製も同様になり、より簡便な方法を堤供で
きる。
のみで、塩基の判定が行なわれるため、採取されるデー
ターの量は、基準信号が出ていないときは１／４になり
、基準信号が観測されたときには、３／４になる。この
ため、情報処理量が減るため、短時間で結果が出力でき
、また、蛍光プライマーの種類も３種類に減少でき、Ｄ
ＮＡ断片の調製も同様になり、より簡便な方法を堤供で
きる。
８ ・
９．
１０ ・
１２ ・
・処理装置
・識別信号
・基準信号
・塩基配列
以上
第１図は本発明の一実施例を示すフローチャート図、第
２図は第１図より得られた結果の一例、第３図は従来の
方法で行われて出された結果の一例である。 出願人 セイコー電子工業株式会社 代理人 弁理士 林 敬 之 助−重鎖ＤＮＡ 蛍光プライマー 基質 合成されたＤＮＡ断片 レーザー ゲル 検出器 ■ 本発明のフローチャ ト図 本弁明の尤カチ↑−Ｆ図 第 ？ 図 従来の１六１Ｃより士カフ０１−ル品
２図は第１図より得られた結果の一例、第３図は従来の
方法で行われて出された結果の一例である。 出願人 セイコー電子工業株式会社 代理人 弁理士 林 敬 之 助−重鎖ＤＮＡ 蛍光プライマー 基質 合成されたＤＮＡ断片 レーザー ゲル 検出器 ■ 本発明のフローチャ ト図 本弁明の尤カチ↑−Ｆ図 第 ？ 図 従来の１六１Ｃより士カフ０１−ル品
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 蛍光物質等で標識した核酸断片をポリアクリルアミドゲ
ル電気泳動により展開し核酸の塩基配列の決定を行う方
法において、前記核酸断片を（１）［Ｗ＋Ｘ］ （２）［Ｗ＋Ｘ＋Ｙ＋Ｚ］ （３）［Ｗ＋Ｙ］ （Ｗ、Ｘ、Ｙ、Ｚはそれぞれ核酸塩基Ａ、Ｃ、Ｇ、Ｔの
いずれかを示す。） の集合で調製し、なおかつ上記３種はそれぞれ別々な蛍
光波長を持つ蛍光物質で標識したことを特徴とする核酸
の塩基配列決定法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63183829A JPH0232263A (ja) | 1988-07-22 | 1988-07-22 | 核酸の塩基配列決定法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63183829A JPH0232263A (ja) | 1988-07-22 | 1988-07-22 | 核酸の塩基配列決定法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0232263A true JPH0232263A (ja) | 1990-02-02 |
Family
ID=16142574
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP63183829A Pending JPH0232263A (ja) | 1988-07-22 | 1988-07-22 | 核酸の塩基配列決定法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0232263A (ja) |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS62502423A (ja) * | 1985-04-01 | 1987-09-17 | ザ・サーク・インステチュート・フォー・バイオロジカル・スタディーズ | Ｄｎａの塩基配列決定 |
-
1988
- 1988-07-22 JP JP63183829A patent/JPH0232263A/ja active Pending
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS62502423A (ja) * | 1985-04-01 | 1987-09-17 | ザ・サーク・インステチュート・フォー・バイオロジカル・スタディーズ | Ｄｎａの塩基配列決定 |
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