JPH02303457A

JPH02303457A - 骨疾患治療・予防剤

Info

Publication number: JPH02303457A
Application number: JP1126062A
Authority: JP
Inventors: Yukihiro Takada; 幸宏高田; Masatoshi Yahiro; 八尋　政利; Ichiro Nakajima; 一郎中島
Original assignee: Snow Brand Milk Products Co Ltd
Current assignee: Snow Brand Milk Products Co Ltd
Priority date: 1989-05-19
Filing date: 1989-05-19
Publication date: 1990-12-17
Anticipated expiration: 2013-09-24
Also published as: JP2802436B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】皮呈上二剋■圀団本発明は、ホエ−蛋白濃縮物を有効成分とする骨形成促
進及び骨吸収防止効果のある飲食品又は医薬に関する。

本発明の飲食品又は医薬は、これを飲食すると骨を強化
し、各種骨疾患を予防乃至治療することができる。

メタｙすえ避近年、高齢化の進行に伴い、骨粗Ｒ症が問題となってい
る。高齢者は、多量のカルシウムを摂取しなければなら
ないが、所要量を大きく下回っている。特に女性は、ニ
ストロジエンの低下により、骨粗８症になりやすい。骨
粗に症とならないまでも、日本人のカルシウム摂取量は
、所要量を下回っており、骨折の増加をみても骨が弱い
子供、成人が多いと考えられる。

骨粗に症や骨強化のための飲食品又は医薬品として、カ
ルシウムを強化することも重要であるが、それだけでは
不充分である。すなわち、カルシウムを摂取しても、骨
に蓄積されなければ、効果がない。

そこで今後、骨形成促進及び骨吸収防止効果のある物質
が必要となると考えられる。現在、骨粗〃症や骨強化の
ための医薬としては、ビタミン１α（０）１）　Ｄ　、
、カルシトニン製剤などがある。しかし、これらは医薬
そのものであって長期間マイルドな条件で摂取して骨形
成を促進し、骨吸収を防止する作用のある物質について
は知られていない。

課　を”ンするための本発明者等は、カルシウム含有量が高く、古くからカル
シウム供給源として知られている牛乳中の成分について
このような骨形成促進及び骨吸収防止効果のある物質が
存在しないかどうかを検索したところホエ−蛋白濃縮物
について意外にも予想以上に骨形成を促進し、骨吸収を
防止する作用があることを見出し、本発明を完成した。

ホエ−（Ｗ）ＩＥＹ、乳清）は、乳または脱脂乳に酸を
加えるかまたはレンネットを作用させて生ずる凝固物を
除いた透明な黄緑色の液体であって、チーズまたはカゼ
イン製造の副産物として得られる。

固形分は６〜７％で、その主成分はラクトースであり、
そのほかに乳清蛋白質、非蛋白態窒素、糖質、脂質、無
機質、ビタミンＢ＋、Ｂｚ、ニコチン酸、ビタミンＣな
どの水溶性ビタミンを含有している。

本発明におけるＷＰＣは、このホエ−を限外濾過または
逆浸透法などによって濃縮した液または乾燥物（本発明
では、これをホエ−蛋白濃縮物又はＷＰＣという）であ
る。

濃縮の倍率は４０倍乃至１５０倍程度がよい。このよう
にするとＷＰＣの性状は、脂肪１５％以下、窒素化合物
ｌＯ〜９０％、灰分１）％以下のホエ−濃縮物となる。

本発明者等は、ｗｐｃが骨形成を促進し骨吸収を防止す
る作用があるかどうかを検討するために次の実験を行っ
た。

実験例１牛乳１００　Ｎにレンネット　（ハンセン社製）を最終
濃度で０．００３２％になるように加えて、カードを形
成させ、カードを除去してホエ−を得た。このホエ−を
分画分子量１．０００の膜を備えた限外濾過装置（Ｄ　
Ｄ　Ｓ社製）を用いて濃縮し、凍結乾燥してｗｐｃを調
製した。

一方、骨芽細胞ＭｃａＴａ−Ｅｔ細胞を３５ｍ−培養皿
を用いて、１０％ＦＣ３（血清）を含むα−メディウム
に植え、３７℃で、５％ＣＯｚ存在下で６０〜７２時間
培養して、試験用培養細胞とした。

この培養細胞に、培地交換と同時に、上記ＷＰＣをミリ
ボアＧＶで濾過し、上記ＷＰＣが最終濃度で０．１ｔａ
ｇ／ｄ及びｌａｇ／ｄになるように培地に添加し、３７
℃で３日間培養した。培養終了後、培地をＰＢＳ　（リ
ン酸緩衝食塩水）で３回洗浄し、ラバーポリスマンで細
胞をはがした。細胞を界面活性剤の０．２％Ｎｏｎ１ｄ
ｅｔ　Ｐ−４０（Ｓｉｇｍａ社製）と超音波で破砕し、
細胞中に含有される蛋白質及びＤＮＡ含量の定量を行っ
た。

蛋白質の定量は、蛋白質キット（Ｂｉｏ−Ｒａｄ社製）
により行い、ＤＮＡの定量は、Ｋ１５ｓａｎｅ　％　Ｒ
ｏｂｉｎｓ等による３、５ジアミノ安息香酸（ＤＡＢＡ
）の螢光発色法により行った。

その結果を第１図（蛋白質の定量）及び第２図（ＤＮＡ
の定量）に示す。この結果、骨芽細胞ＭＣ３Ｔ３−Ｅｌ
にＷＰＣを添加して培養すると、該骨芽細胞中の蛋白質
及びＤＮＡ含量をＷＰＣの用量に依存しｔ上昇させるこ
とが判明し、ＷＰＣに骨芽細胞の増殖促進効果および蛋
白合成促進効果があることが予測された。

そこでＷＰＣの効果をさらに詳しく検討するために骨芽
細胞ＭＣ３Ｔ３−Ｅｌの培養を７日間行い、培養当初、
培養３日目、培養５日目にｗｐｃを培地中に最終濃度で
１ｍｇ／ｍｌになるように添加した時と添加しなかった
時とで骨芽細胞の蛋白合成がどのような影響を受けてい
るかについて、培地交ｔａ（２日目）毎に骨芽細胞中の
蛋白質を定量することによって検討した。その結果を第
１表に示す、第１表の有はＷＰＣを添加して培養したこ
とを、無は添加せずに培養したことを示す。

培養中すべて添加した時は、蛋白量が増加しつづけたの
に対して培養中まったく無添加（対照）の時には、５日
目から蛋白の増加が見られず添加したものと比べて蛋白
合成量が少なかった。また、３日目、５日目から添加し
た時は、蛋白の増加がみられるのに対して、３日目、５
日目を無添加にすると、蛋白が増加しないという結果が
得られた。

このことからＷＰＣには骨芽細胞の蛋白合成促進効果が
あることがｉＩ　Ｌ＝された。

実験例２骨芽細胞ＭＣ３Ｔ３−Ｅｌを実験例１に用いたものと同
一の培養細胞を用い、各培地にｗｐｃを最終濃度でｌＯ
μｇ／ｄ、１００μｇ／ｐｔｌ及び１０００μｓ／Ｗｌ
を添加して３７℃、３日間培養し、合成されたコラーゲ
ンの量とハイドロキシプロリンを定量することにより行
った。ハイドロキシプロリンの定量は、細胞破砕液を６
Ｎ−１）ｃＩで加水分解し、ｐ−ジメチルアミノベンズ
アルデヒドを用いることにより行った。

この結果を第３図に示す、この結果、ＷＰＣを添加する
と濃度依存的にハイドロキシプロリンの量が増加し、骨
芽細胞のコラーゲン合成が促進されることが判明した。

さらに、この効果を詳細に検討するために培養を６日間
行い、培養当初、培養２日目、培養３日目の培地交換時
にｗｐｃを培地に最終濃度でｌｌ１ｇ／＋＋ｆになるよ
うに添加した時と添加しなかった時とで骨芽細胞中のハ
イドロキシプロリンの合成量がどのように変化するかに
ついて検討を行った。

その結果を第２表示す。第２表中の有はｗｐｃを添加し
て培養したことを、無は添加しなかったことを示す。

培養中すべてｗｐｃを添加した骨芽細胞は、培養中無添
加の骨芽細胞に比べて、コラーゲンの合成量が多かった
。また、添加を中止するとコラーゲンの合成Ｉは添加し
たものに比べて少なかった。

したがって、ＷＰＣ中の成分の中にコラーゲン合成促進
効果を持つことが予想された。

実験例３予めマウス１０ｇ当り１　、５ｍｇの割合で５−フルオ
ロウラシル（５−ＦＬＪ）を尾静脈より投与したマウス
の牌細胞（造血幹細胞）を採取し、インターロイキン３
、（ＩＬ−３）によりメチルセルロース上で分化誘導し
、ＧＭ−ＣＳＦ　（顆粒球−マクロファージコロニー刺
激因子）と１．２５（ＯＨ）ｔＤｉでこれが破骨細胞（
Ｏｓｔｅｒｃｌａｓｔ）を形成する分化誘導を、ｗｐＣ
の添加により阻止することができるか否かについて、細
胞の中から生成される破骨細胞の数を測定することによ
り行った。

すなわち、Ｆｅ２　（最終濃度３０％）、牛血清アルブ
ミン（最終濃度１％）、ＩＬ−３（最終濃度５０１７ｍ
ｆ）に牌細胞とメチルセルロースを混合して、３５１培
養皿に１ｍｆずつ分注して、３７℃７日間培養した。

培養により出現したコロニーをピペットによりつり上げ
、４８穴プレートに１穴当り９００個まきこんだ、これ
に５％ＦＣＳ、ＧＭ−Ｃ３Ｆ　　（最終濃度１００　Ｕ
／ｄ）を添加したα−メディウムで３７℃４日間培養し
た。

このプレートに破骨細胞形成促進作用のあるＬ２５（Ｏ
ｌｌ）ｚビタミンＤ３（最終濃度１０１０−１ｌを５％
ＦＣ３，ＧＭ−Ｃ３Ｆを添加したα−メディウムに加え
て、この培養液にｗｐｃを最終４度でＩＯμｇ／ａ＋ｆ
１００μｇ／ｒｌ、１０００μｇ／−になるように添加
して、形成される破骨細胞の数を測定した。

その結果を第４図に示す。この結果、ＷＰＣを添加する
と無添加の対照に比べてｗｐｃ添加量に依存して破骨細
胞の数が少なくなり、破骨細胞の形成が抑制されること
が判明した。

本発明では上記実験例１〜３↓こ示したようにホエ−蛋
白濃縮物が骨形成促進及び骨吸収防止作用を有するので
これを経口的に投与すると、骨を強化し、各種骨疾患を
予防乃至治療することができ、健康を保持する飲食品又
は医薬として有用である。

医薬として使用するとき、その投与量は、ホエ−を４０
倍〜１５０倍に濃縮し、成人１日１０．〜１５ｇ、幼児
１日５ｇ−１０ｇを１日数回に分けて投与することが望
ましい。

また投与の形態としては、ドリンク剤、濃縮液、ペース
ト、顆粒、錠剤、カプセル剤等適宜の形にすることがで
きる。

ＷＰＣは牛乳中に存在するものであるからその毒性につ
いて全く心配のないものである。

また、飲食品として使用するときは、この濃縮物をその
ままあるいは溶液にして香料、甘味料等を加えて飲料の
形やこれを濃縮固化してゼリー、キャンディ、ドロップ
等として用いることもできる。また、食品添加物として
種々の他の食品に添加することもできる０例えば、乳製
品、香辛料、調味料、甘味料、酒類、ビタミン類、野菜
類、卵類、きのこ類、果実類、果汁類、魚肉、畜肉、魚
肉畜肉加工品、パン類、麺類等積々の食品に添加して用
いることもできる。

このときのＷＰＣの摂取量はホエ−の４０倍〜１５０倍
濃縮物として成人１日当り１０〜１５ｇ、幼児１日当り
５〜ｌＯｇが望ましい。

以下に本発明の実施例を示す。

実施例１（１）ｗｐｃの調製実験例１と同様に牛乳にレンネフトを加えてカードを形
成させ、カードを除去してホエ−を得た。

このホエ−を分画分子１　ｔ　、　ｏｏｏの膜を備えた
限外濾過装置（ＤＤＳ社製）により濃縮して、凍結乾燥
して、ｗｐｃを調製した。

（２）飲料の調製上記方法により得られたＷＰＣｌｋｇに砂糖１ｋｇ、ブ
ドウ糖０．５ｋｇ、水１０ｊ’を加えよく混合し瓶に充
填し、加熱殺菌して骨形成を促進し、骨吸収防止効果の
ある健康飲料を得た。

実施例２実施例１　（１）で得られたＷＰＣｌｋｇ、ゼラチンＯ
，Ｉｋｇ、ブドウ＃３０．５ｋｇ、砂糖１ｋｇ、水１０
１を加えて加熱し、冷却を行ってゼリーを得た。このゼ
リーは実施例１と同様の効果のある健康食品となった。

実施例３実施例１　（１）で得られたＷＰＣ’１ｋｇを魚肉ソー
セージ製造のさい原料に５％添加して常法により魚肉ソ
ーセージを製造した。

実施例４実施例１（１）で得られたＷ　Ｐ　Ｃ５００ｇ、シロッ
プ２００ｇ　。

水５１を混合し、５０−のドリンク剤の瓶に分注し、加
熱殺菌してドリンク剤とした。

このドリンク剤は１日３回飲用すると骨形成を促進し、
骨吸収を防止する効果を示し、骨疾患の予防乃至治療に
有用である。

又凱免羞果本発明におけるホエ−蛋白濃縮物を有効成分とする骨形
成促進及び骨吸収防止効果のある飲食品及び医薬は、こ
れを経口的に投与することにより骨を強化し、各種の骨
疾患を予防乃至治療することができる。

【図面の簡単な説明】

第１図は、骨芽細胞ＭＣ３Ｔ３−Ｅｌ細胞の培地にｗｐ
ｃを添加して培養°し々時の該細胞中における蛋白質生
成量を、第２図はＤＮＡ生成含量をそれぞれ示す。第３図は、骨芽細胞ＭＣ３Ｔ３−Ｅｌ細胞の培地にＷＰ
Ｃを添加して培養した時の該細胞中におけるコラーゲン
生成含量をハイドロキシプロリンにより定量した結果を
示す。第４図はマウ゛ス牌細胞を分化ｍｌし、これがＷｐｃの
添加により破骨細胞の形成に与える影響を示す。第１表は、培養中にｗｐｃを添加した時の骨芽細胞ＭＣ
３Ｔ３−Ｅｌの°蛋白質含量の変化を、第２表は、培養
中にｗｐｃを添加した時の該細胞のハイドロキシプロリ
ン含量の変化をそれぞれ示す。

Claims

【特許請求の範囲】

（１）ホエ−蛋白濃縮物を有効成分とする骨形成促進及
び骨吸収防止効果のある飲食品。
（２）ホエ−蛋白濃縮物を有効成分とする骨形成促進及
び骨吸収防止効果のある医薬。
（３）ホエ−蛋白が４０倍乃至１５０倍に濃縮されたも
のである請求項（１）または請求項（２）の飲食品又は
医薬。
（４）ホエ−蛋白が４０倍乃至１５０倍に濃縮され、経
口的に投与される形態をしたものである請求項（１）乃
至（３）のいずれかである飲食品又は医薬。