JPH02270896A - ジャンチノマイシン - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はジャンチノマインン（ｊａｎｔｈｉｎｏｍｙｃ
ｉｎ）、更に詳しくは、微生物ジャンチノバクテリウム
・リビダム（Ｊ　ａｎＬｈｉｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　
］　ｉｖｉｄｕｍＸＡ　、　ＴＣ，Ｃ，Ｎｏ、５３８５
７）の菌株の培養によって製造される新規抗生物質に関
する。

発明の構成と効果 本発明が提供するジャンチノマイソンは、ザ・アメリカ
ン・タイプ・カルチャー・コレクション（ｔｈｅ　　Ａ
ｍｅｒｉｃａｎ　　Ｔｙｐｅ　　Ｃｕ１ｔｕｒｅ　　Ｃ
ｏ１１ｅｃｔｉｏｎ］こ寄託している微生物、１　ａｎ
ｔｈｉｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｌｉｖｉｄｕｍ（Ａ、
Ｔ、Ｃ，Ｃ，Ｎｏ、５３８５７）の菌株の培養によって
製造される新規な抗生物質（以下、慣用化学名で“ジャ
ンチノマイシンＡ、ＢおよびＣと称する）である。ジャ
ンチノマインンＡ、ＢおよびＣは、グラム陽性菌および
ダラム陰性菌並びに嫌気性菌に対して活性を有する。こ
れらのジャンチノマイシンを分析すると、１記式〔ｌ〕
で示される一般化学構造を有することがわかった。

Ｌ−Ｈｅ−βＨＬ　−Ｌ　−Ｔ　ｂｒ−＞Ｌ　−Ｓ　ｅ
ｒ→βＩ−（Ｌ　−＝〔式中、△−Δｂ口はデヒドロ−
α−アミノ酪酸；Ｂ　ＨＬはＤ−エリトロ−β−ヒトロ
キシロイソン；および Ｘはβ−ヒドロキソトリプトファン（ンヤンチノマイシ
ンＡの場合）、β−ケｌ−）リプトファン（ジャンチノ
マイシンＢの場合）またはデヒドロトリプトファン（ジ
ャンチノマインンＣの場合）である〕溶液中、ジャンチ
ノマイシンＢのβ−ケトトリプトファン残基は幾何異性
体の混合物、すなわちβ−ケトトリプトファンのＥおよ
びＺエノールとして存在する（後記ジャンチノマイシン
Ｂ１およびＢ、参照）。２つの異性体はクロマトグラフ
ィーで分離可能であるが、ゆっくりと和瓦変換して、ｐ
Ｈおよび溶剤依存性平衡混合物となる。かかる２つの異
性体をジャンチノマインンＢ、およびＢ。

と称する。

第１図はジャンチノマイノンＡの水、０．０１Ｍ　−Ｉ
−Ｉ　Ｃｉ２および０，０　］Ｍ−ＮａＯＨ中の紫外線
スペクトルを示す。

第２図はジャンチノマイシンＡの臭化カリウム中の赤外
線スペクトルを示す。

第３図はジャンヂノマイシンＡのシュウチリウム置換ア
セトニＩ・リル／重水（１：４）中の６７．５ＭＨｚ炭
素ＮＭＲスペクトルを示す。

第４図はジャンヂノマイシンＡのシュウチリウム置換ア
セトニトリル／重水（４：Ｉ）中の４００ＭＨｚプロト
ンＮＭＲスペクトルを示す。

第５図はジャンヂノマイシンＢの水中の紫外線スペクト
ルを示す。

第６図はジャンチノマイシンＢの臭化カリウム中の赤外
線スペクトルを示す。

第７図はジャンチノマイシンＢ（Ｂｌ・Ｂ、が約３・１
）のジコウテリウム置換アセトニトリル／重水（１・４
）中の６７．５Ｍｌ−１ｚ炭素ＮＭＲスペクトルを示す
。

第８図はジャンヂノマイシンＢ（Ｂ２：Ｂｌが約４１　
　：１）のシュウチリウム置換アセトニトリル／重水（
１：Ｉ、ＮａｔＤＰＯ，でｐｌ−１７，ｔ）中の４００
ＭＩ（ＺプロトンＮＭＲスペクトルを示す。

第９図はジャンチノマイシンＢ（Ｂ２＋Ｂ、か約１４）
のシュウチリウム置換アセトニトリル／重水（４１）中
の４００　Ｍｌ−（ｚプロトンＮＭＲスペクトルを示す
。

第１０図はジャンチノマインンＣの水中の紫外線スペク
トルを示す。

第２図はジャンチノマイシンＣの臭化カリウム中の赤外
線スペクトルを示ず。

第１２図はジャンチノマインンＣのシュウチリウム置換
アセトニトリル／重水（４ｌ）中の６７５　Ｍ　Ｈｚ炭
素ＮＭＲスペクトルを示す。

第１３図はジャンチノマインンＣのノユウテリウム置換
アセトニトリル／重水（４・Ｄ中の４００Ｍ）Ｉｚプロ
トンＮＭＲスペクトルを示す。

微尖腹 ジャンヂノマイノンＡ、ＢおよびＣの製造に用いる微生
物は、ペンシルバニア州ニュータウンのタイラー・ステ
ート・パークの採集〆η水から単離した。、Ｔ　ａｎｔ
ｈｉｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｌ　ｉｖｉｄｕｍの菌株
である。

この微生物の二次培養物は、メリーランド州ロックビル
のザ・アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション
から入手できる。この機関における寄託番号はΔＴ、Ｃ
，Ｃ，Ｎｏ、　５３８５７である。

なお、上述の特有微生物以外にも、化学的または物理的
突然変異誘発因子を用いて得られる該微生物の突然変異
体も、これを培養することにより目的化合物が製造しう
ろことを理解すべきであるＪ　ａｎｔｈｉｎｏｂａｃＬ
ｅｒｉｕｍ　Ｉｉｖｉｄｕｍの培養物は、汚水試料から
該試料を下記成分からなる媒地で適当に希釈することに
より単離することかできる。

成分　　　　　　　　　　　　　　　１ＮａＣσ　　　
　　　　　　　　・・・　８．５ＫＨ，ＰＯ，・・・　
０３ Ｎａ２ＨＰ０４　　　　　　　　　　・・・　０．６ゼ
ラヂン　　　　　　　　　　・・・　ＯＩ全全体蒸留水
でＩＱとする この物質０　、１　ｍＱを下記成分を含有する寒天平板
に植えつける。

敷　　　　　　　　　　　　　　　計量ペプトン　　　
　　　　　　　・・・　　１ｇＫ２ＨＰＯ，・・・　０
．２ｇ グルコース　　　　　　　　　　・・・　　　１ｇ１％
クリスタルバイオレット　・・・　０　、１　ｍ１２土
壌抽出物　　　　　　　　　・・・　　■ρ寒天　　　
　　　　　　　　　・・・　＋５ｇｐＨを６．８に調整
し、混合物を１２１℃のオートクレーブで１５分間加熱
加圧する。次いで１ｇの媒地に、ｌ０ｍｆｆの１％（ｗ
／ｖ）ンクロヘキシミト溶液を加える。なお、土壌抽出
物は以下の手順で調製した。１０１００Ｏの土壌を２ｇ
の水中で１時間沸とうさせる。固体を寒冷じゃで濾去し
、次いで溶液を２８００　Ｏｒｐｍで２０分間遠心分離
する。

次いで上層液をウォットマン濾紙で濾過し、１２１℃の
オートクレーブで３０分間加熱加圧する。

この微生物は、側ペン毛に副極性（ｓｕｂ　−ｐｏｌａ
ｒ）を持つ棒状の運動性ダラム陰性閑である。栄養寒天
上のコロニーはゼラヂン状で、色は暗い紫がかっ＝８− た黒である。ゼラチン状物質は細胞外ポリザラカライド
である。生成するピグメントはピオラセイン（ｖｉｏｌ
ａｃｅｉｎ）である。グルコースは酸化的に利用される
。酸はトレハロースから生じるか、Ｉ−アラビノースま
たはｄ−キソロースからは生じない。微生物はアルギニ
ンジハイドロラーゼ、ＨＣＮ生成およびエスクリン分解
に対して陰性である。

細菌はＪ　ａｎＬｈｉｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｌｉｖ
ｉｄｕｍの異常菌株として固定する。

抗生物質Ｊ　ａｎｔｈｉｎｏｍｙｃｉｎ抗生物質ｊａｎ
ｔｈｉｎｏｍｙｃｉｎは、同化しつる炭水化物および窒
素源を含有する水性栄養培地において、浸水好気条件下
２５°Ｃでまたはその付近で、Ｊａｎｔｈｉｎｏｂａｃ
ｔｅｒｉｕｍ　　ｌｉｖｉｄｕｍ（Ａ、Ｔ、Ｃ，Ｃ，Ｎ
ｏ、５　３８５７）を培養することにより、製造するこ
とができる。発酵は、培地に実質的な活性が与えられる
まで、通常約２４〜２８時間にわたって行う。

発酵後、液体培地の全体に硫酸アンモウム固体を加え（
２５％ｗ／ｖ）、液体培地を遠心分離し、得られるペレ
ットをメタノールで抽出する。メタノール／ペレット混
合物を遠心分離し、得られるメタノール抽出物に水を加
えて約１０％水溶液とし、次いで四塩化炭素で抽出する
。各層を分離し、メタノール抽出物を分取して単離に供
する。

メタノール抽出物を水中のＭＣＩゲルＣｔｌ　Ｐ　２０
　Ｐ（ＣＨＰ　２０　Ｐ）に加え、混合物を１時間攪拌
する。減圧濾過で荷電樹脂を集め、メタノール、水およ
びアセトニトリルで洗う。次いて、荷電樹脂をカラムに
充填し、抗生物質をアセトニトリル／水／ギ酸で溶離す
る。さらにアセトニトリル／水中のＳ　ｅｐｈａｄｅｘ
Ｌ　Ｈ−２０にてクロマトグラフィーを行い精製する。

ＣＨＰ２０Ｐにてアセトニトリル／水／ギ酸勾配で溶離
するクロマトグラフィーに付し、３つの抗生物質、ずな
わちンヤンチノマイシンＡ、ＢおよびＣの部分分割を行
う。最後に、ＣＨＰ２０Ｐにてアセトニトリル／水性リ
ン酸二水素アンモニウム緩衝液勾配で溶離するクロマト
グラフィーに付した後、ＣＨＰ２０１）にてアセトニト
リル／水／ギ酸で溶離しながら脱塩することにより、ジ
ャンヂノマインンＢおよびＣの分離および精製を行って
、オフホワイト粉末の純粋な抗生物質を得る。発酵にお
：３るジャンヂノマイシンＣの量は変りやすく、その存
在は単離条件で人工的ｊこ変えることができる（酸性条
件下でジャンチノマインンＡはジャンヂノマイシンＣに
変化する）。ジャンヂノマイシンＣが存在すると、それ
は最初の各クロマトグラフィーでジャンヂノマインンＢ
と共に溶離する。

ジャンチノマイシンＡの紫外線スペクトルが第１図に示
され、λｍａｘｃＥ　’％　１ｃｍ）３３７（８）。

２８７（３０）、２７６（３６）、２０４．ｎｍ（２７
０）が認められる。ジャンチノマイノンＡの臭化カリウ
ム中の赤外線スペクトルが第２図に示され、３３４２．
２９６２．＋７４３．１６５９．＋　６０２．１５２５
．１３８３および１１２６ｃｍ−’のピークが明らかで
ある。ジャンチノマイシンＡのジヂオトレイトール／ジ
ヂオエリスリトール／ジメチルスルホキシド／グリセロ
ール中（ヨウ化ナトリウム添加）のＦＡＢ質量スペクト
ルによれば、（ＭｌＮａ）”　Ｉ　２　＋　５．（Ｍ−
＋−Ｈ）”　Ｉ　Ｉ　９３（弱）　、　（Ｍ　＋　Ｈ−
１（２０）ＩＩ　１７５．（Ｍ十Ｉ）−１３１９のイオ
ンが認められる。ヨウ化すｌ・リウムを加えない場合は
、（ＭｌＨ−１４，０）”　１　＋　７５および（Ｍ−
ＨＨｔ　Ｏ）−イオンのみが見られるにすぎない。ジャ
ンチノマイシンＡのンコウテリウム置換アセトニトリル
／重水（１：４）中の６７　、５　Ｍｌ（ｚ１３Ｃ−Ｎ
ＭＲスペクトルが第３図に示されている。ノヤンヂノマ
イシンＡのノコウテリウム置換アセトニトリル／重水（
４・１）中の４００Ｍｌ−１ｚ’Ｈ−ＮＭＲスペクトル
が第４図に示されている。ジャンヂノマイシンＡをメル
ク（Ｍｅｒｃｋ）ソリカゲル−６０にて、クロロホルム
／メタノール／７０％水性エタノール（７：３：５）を
用いる薄層クロマトグラフィーに付すと、０３８のＲｆ
値が得られる。ジャンチノマイシンΔをＨａｍｉ　１ｔ
ｏｎＰ　ＲＰ　−１カラム（１５０Ｘ　４　、　Ｉ　ｍ
ｍ）にて、Ｉ　ｍｆ２／分の緩衝液へで溶離し、かつ２
２０ｎｍの吸光度を監視しながら高性能液体クロマトグ
ラフィーに付し、３９０分の保持時間を得る。緩衝液Ａ
は、８５％］（３ＰＯ４でｐＩ（３，６ｉニ調整し　〕
こ、　　ＣＩ（３ＯＮ／Ｈ、Ｏ（３３：６７）の１％Ｎ
　Ｈ４Ｉ４２　Ｐ　Ｏ４溶液である。

ジャンチノマイシンＢの紫外線スペクトルが第５図に示
され、λｍａｘ（Ｅ　’％　］　０ｃｍ３１２　（８２
）。

２６０（ｓｈ）、２４２（１２０）、２０４ｎｍ（３５
０）が認められる。ジャンチノマイシンＢの臭化カリウ
ム中の赤外線スペクトルが第６図に示されている。

３３２２．３０６６．２９６７．１７４２．１６５５゜
１５２２．１３８４．ＩＩ　１６ｃ＋ｎ−’のピークが
明らかである。ノヤンヂノマイノンＢのジヂオトレイト
−ル／ノヂオエリスリトール／ジメヂルスルホキシド／
グリセロール中（ヨウ化すトリウム添加）のＦＡ　Ｉ３
質量スペクトルによれば、（Ｍ　十Ｎ　ａ：）’］　２
１３．（Ｍｌ１（）”　Ｉ　１９１．（ＭｌＤ　　Ｉ　
３１７のイオンが認められる。ヨウ化ナトリウムを加え
ない場合は、（ＭｌＩ−Ｔ戸＋１９１および（Ｍ−Ｈ）
−１１８９のみのイオンが見られるにすぎない。高分割
ＦΔＢ質量スペクトルにより、１１９１．６１４２の（
ＭｌＨ）＋が認められ、これは分子式Ｃ５７Ｈ＋＋３１
’Ｊ＋ｙＯ＋ｅ（Ｉ　ｌ　９１．６０５０）に−致する
。ジャンチノマインンＢのシュウチリウム置換アセトニ
トリル／重水（１・／Ｉ）中の６７５Ｍ１−Ｔｚ１３Ｃ
−ＮＭＲスペクトルが第７図に示されている。この試料
のンヤンヂノマイノンＢ、：Ｉ３．の割合は約３１であ
る。ンヤンヂノマインンＢ　（１３２、Ｂｌか約４・１
）のジ、ウテリウム置換アセトニトリル／重水（ｌ叫、
Ｎａ２ＤＰＯｔでｐＩ−１７，１）中の４００ＭＨｚ’
＋（−ＮＭＲスペクトルが第８図に示されている。ジャ
ンヂノマインンＢ（Ｂ２：Ｂ、が約１．４）のシュウチ
リウム置換アセト二ｌ・リル／重水（４：　ｌ　）中の
４００ＭＨｚＭ（−ＮＭＲスペクトルが第９図に示され
ている。ジャノヂノマインンＢをＭｅｒｃｋンリカゲル
ー６０にて、クロロホルム／メタノール／７０％水性エ
タノール（７・３．５）を用いる薄層クロマトグラフィ
ーに付すことにより、０．３５（ジャンヂノマイシンＢ
、の場合）および０．３９（ジャンヂノマインンＢ１の
場合）の［値が得られる。ジャンチノマイソンｒ３をト
１ａｍｉｌｔ。

ｎＰＲＰ−１カラム（１５Ｘ　４　、　Ｉ’ｍｍ）にて
、Ｉｍｆ７／分の緩衝液Ａで溶離し、かつ２２０ｎｍの
吸光度を監視しながら高性能液体クロマトグラフィーに
付し、１７４分（Ｂ、の場合）および２．７６分（Ｂ２
の場合）の保１５時間を得る。

ジャンヂノマイシンＣの紫外線スペクトルが第１Ｏ図に
示され、λｍａｘ（Ｅ　’％Ｉｃｍ）３３９（１００）
、２２０（２５０）、　＋　９５ｎｍ（４０，０）が認
められる。ジャンヂノマイシンＣの臭化カリウム中の赤
外線スペクトルが第１１図に示されている。

３３４２．３０６６．２９６８，１７４４．＋６５４．
。

１６０２．１５２６．１３８４ｃｍ−１のピークが明ら
かである。ジャンヂノマイシンＣのジチオトレイトール
／ンヂオエリスリトール／ジメチルスルホキッド／グリ
セロール中のＦＡＢ質量スペクトル（こより、（Ｍ−＋
−Ｈ）”　　ｌ　Ｉ　７５　、（Ｍ−１−１）　　１１
７３のイオンが認められ、高分割ＦＡＢ質量スペクトル
により、分子量ｃ５ｑＩｑ８３Ｎ＋ｖｏＩ５（ｌ１７　
］　。

６１０１）に一致する１１７５．６２０５の（Ｍ＋）１
　）＋が認められる。ジャンチノマインンＣのジコウテ
リウム置換アセトニトリル の６　７．５ＭＨｚ１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルが第１２
図に示されている。ジャンヂノマインンＣのンユウテリ
ウム置換アセトニトリル／重水（／１．：Ｉ）中の４　
０　０Ｍ！ー１ｚ’ＨーＮＭｆｌスペク１−ルが第１３
図に示されている。ジャンチノマイシンＣをＭｅｒｃｋ
シリカゲル−６０にて、クロロポルム／メタノール／７
０％水性エタノール（７：３＋５）を用いる薄層クロマ
トグラフィーに付すことにより、０３７のＲｆ値が得ら
れる。（ノヤンチノマインンＣとＢ，が存在する場合、
ＣをＢ，から分割しない。）ジャンヂノマインンＣをＨ
ａｍｉｌｔｏｎ　Ｐ　Ｒ　Ｐ−１カラム（１　５　０Ｘ
４．、Ｉｍｍ）にて、Ｉｍｇ／分の緩衝液Ａで溶離し、
かつ２２０ｎｍの吸光度を監視しながら高性能液体クロ
マトグラフィーに付し、２．０６分の保持時間を得る。

本発明化合物［）およびその医薬的に許容しうる塩は、
哺乳動物（たとえばイヌ、ネコ、ウシ、ウマなどの家畜
やヒト）の細菌感染（特にグラム陽性感染）に対抗する
薬剤として使用できる。これらの化合物は、感染部位へ
ペニシリン類やセファロスポリン類を伺与するのに従来
より用いられている方法で投与することができる。かか
る投与方法としては、静脈注射、筋肉注射、生薬投与が
挙げられる。使用する本発明化合物（抗生物質）〔Ｉ〕
の投与量は勿論、個々の抗生物質、宿主の大きさおよび
感染程度によって変化する。大人の場合、約２５０ｘｙ
〜２ｇの１日用量が具体例である。なお、本発明化合物
の薬理効果についての情報は、後記実施例中の“生物学
的活性”の欄で記載する。

次に挙げる実施例は、本発明化合物であるジャンチノマ
イシンの製法および有用性を示すものである。

実施例Ｉ 下記成分からなる殺菌媒地Ａに、Ｊ　ａｎＬｈｉｎｏｂ
ａｃｔｅｒｉｕｍ　Ｉｉｖｉｄｕｍを保持する。

成分 酵母エキス　　　　　　　　　・・・　５．０ｇグルコ
ース　　　　　　　　　　・・・　５．ＯｇＭ　ｇ　Ｓ
　Ｏ　４・７Ｈ，Ｏ　　　　　　　・・・　０，１ｇＦ
ｅＳ０４・７Ｉ−■，０　　　　　　・・・　０　１ｇ
土壌抽出物濾液＊　　　　　　・・・２００ｍｌ！寒天
　　　　　　　　　　　　・・・１７．５ｇ水道水　　
　　　　　　　　　・・・８００ｍＱこの媒地Ａは１２
１℃で１５分間殺菌した。

＊）土壌抽出物濾液は、■容量の土壌＋２容量のＩ−Ｔ
　２０を１００°Ｃで１時間抽出し、濾過したものであ
る。

Ｊ　ａｎｔｈｉｎｏｂａｃＬｅｒｉｕｍ　Ｉ　ｉｖｉｄ
ｕｍの寒天斜面培地（培地Ａ）のループ状表面生長を用
い、下記成分からなる殺菌培地１３をそれぞれ１００ｍ
ρ含有する３つの５００ｍ（！エルレンマイヤーフラス
コに接種する。

成分　　　　　　　　　　　　　　　　　１−酵母エキ
ス　　　　　　　　　・・・　５，０グルコース　　　
　　　　　　　・・・　５０ＭｇＳＯ４・７Ｈ２０　　
　　　　・・・　ＯＩＦｅＳＯ，・７Ｈ，Ｏ　　　　　
　　−　・−　　０．１全体を水道水で１ρとする この培地Ｉ３は＋２１’Ｃで１５分間殺菌した。

接種後、フラスコを回転振とう器（３００ｒｐｍ、２イ
ンチストローク）にて、２５°Ｃで約９６時間培養する
（得られる液体培地のｐｌ−Ｉ８．Ｏ〜８　５）。

上述の適切な培養後、生長した培養物フラスコから２％
（ｖ／ｖ）を、上記殺菌培地ＢをそれぞれＩ００ｍＱ含
有する２００個の５００ｍＣエルレンマイヤーフラス＝
Ｊに移す。接種後、フラスコをもう一度上述の回転浸と
う器にて、２５°Ｃて約２４〜２８時間培養する（得ら
れる液体培地のｐＨ７，１〜７゜５）。プールした液体
培地（約１９〜２０ρ）に（ＮＨ４）ｚｓ　０４（５ｋ
ｇ、　２５％ｗ／　ｖ）を加え、混合物を１時間攪拌す
る。次いて液体培地／（Ｎ　Ｉ−１４）、　Ｓ　Ｏ。

混合物を遠心分離し、上層液を捨てる。ペレット（８０
０〜９００ｇ）をメタノール（２，５１！、１．５時間
）で抽出し、混合物を再度遠心分離する。メタノール」
二層液に０．２（の水を加えて、約１０％水溶液とし、
次いで０８ｇの四塩化炭素で抽出する。各層を分離し、
上層を０．６Ｑの水および０゜６ａのＣＨＰ２０Ｐに加
える。これを１時間攪拌し、減圧濾過で樹脂を集める。

荷電樹脂を２１２のメタノール、１ｇの水および２ｇの
ＣＨ３ＣＮで洗う（漏斗中）。次いて荷電樹脂をカラム
（５Ｘ　５０ｃｍ）に充填し、ＣＨ３ＣＮ／Ｉ−ｒ、Ｏ
／ＨＣＯＯＨ（７０：３０：１）で、酸フロント（ａｃ
ｉｄ　ｆｒｏｎｔ）のパープルバンド（ｐｕｒｐｌｅ　
ｂａｎｄＸ６０　ｍｃ）として活性成分を溶離する。こ
れらの両分を減圧乾燥に（；Ｉす（１０９，２ｍｇ）。

当該物質、ジャンチノマインン／ＩにびＢの混合物、並
びに他の不純物を２５×２３ｃｍのＳ　ｅｐｈａｄｅｘ
　Ｌ　Ｉ（−２０カラムにてＣＩ−１３ＯＮ　／　Ｈ２
０（８・２）中、クロマトグラフィーにイ」す。

１０５ｍｇと１８０Ｍｇ間で活性成分を共に溶離する。

活性流出液を減圧濃縮して、５３５ｇの物質を得る。Ｃ
ＨＰ２０Ｐ（１，５Ｘ３４ｃ＋ｎ、２ｍＱ１分）にてＣ
Ｈ３ＣＮ　／　Ｈ２０／　）Ｉ　Ｃ００１−１（２０・
８０；０および６０４０・１、各２２０ｇ）から調整し
た直線勾配で溶離するクロマトグラフィーを行って、ノ
ヤンチノマインンＡおよびＢの部分分割を行う。

主成分のジャンチノマインンＢ（１３８ｍｇと１５２ｍ
ｇ間で溶離）またはノヤンチノマイソンＡ（１６６ｍｆ
２と１９２１′Ｉｃ間て溶離）を含有する両分を別々に
プールし、減圧下で濃縮乾燥して、５　、５　ｔｎｙの
粗ジャンヂノマインンＢおよび２２．８ｘｇの粗ジャン
ヂノマイシンＡを得る。

実施例２ 実施例１に記載の６０Ｃの液体培地から得た粗ジャンチ
ノマインンＡ（８４，８Ｍ９）を繰返し、ＣＴ（Ｐ２０
Ｐ（＋、５Ｘ３６ｃｍ、２ｍρ／分）にてＣ１−（３Ｃ
Ｎ／Ｈ，Ｏ／Ｉ−（Ｃ００Ｉ（（２０：８０：Ｏ〜６０
：４０：Ｌ各２２５ｇ）の直線勾配を用いるクロマトグ
ラフィーに付して、最終的な精製を行う。ジャンヂノマ
インンへを１２４ｍｇと１４８ｍｆｆ１間で溶離し、こ
れを少量のジャンチノマイシンＢおよび黄色不純物から
正確に分離する。活性画分を減圧乾燥に付し、残渣を０
．５ｍｇの水に溶解し、沈澱物が生成するまでＣ）（３
０Ｎを加える。もう−度溶剤を減圧除去して、５８．５
ｇ９のジャンチノマインンへをオフホワイト粉末で得る
。

実施例３ 実施例１記載の、（ｊ−ＩＰ２０Ｐにおけるクロマトグ
ラフィーより得た部分精製ジャンチノマイソンＢ（５，
５Ｍｇ）を１．）−り早い発酵での類似物質（１０１，
１ｇｇ）とコンバインする。ＣＨＰ２０Ｐ（２゜５Ｘ３
５ｃｍ）にて、Ｃｌ−１３ＣＮ／Ｈ，０／ＨＣＯＯＩ−
（（２０：８０　：０および６０：４０：Ｉ、各６４０
ｇ）から調整した直線勾配のクロマ）・グラフィーを繰
返して、最終精製を行う。ジャンチノマインンＩ３を２
５０Ｍｇと３７６ｍ（！間で溶離する。活性画分をコン
バインし、減圧下で濃縮乾燥する。乾燥した残渣を最小
量の水に溶解し、沈殿物が生成するまでＣＨ３ＣＮを加
え、試料を減圧下で濃縮乾燥して、ジャンチノマイシン
Ｂをオフホワイト粉末で得る（８６．１ｇｇ）。

実施例４ 実施例１に記載の数回の２０１！発酵から得た、ジャン
チノマイソンＢ（Ｂ、＆Ｂ、の混合物）およびＣの両方
を含有する粗抗生物質（１２５，１ｍｇ）を緩衝液に懸
澗する。緩衝液は、８５％Ｔ（、ＰＯ，でｐＨ７，１に
調整した、６　、７　ｍＱ、の水および０，１ｇの（Ｎ
Ｈ，）２８ＰＯ４の溶液に、３　、３　ｍＱのＣＨ３Ｃ
Ｎを加えることによって作成する。この試料のｐｌ−Ｉ
を８５％Ｈ，１３０４で３６に調整した後、直ちにＣＨ
Ｐ２０Ｐにて、緩衝液Δ（５０＋ｎＱ）、次いて緩衝液
Ａ−緩衝液Ｂの直線勾配（各２２０ｇ）を用いるクロマ
トクラフィーに付す。緩衝液Ａは、８５％Ｈ３Ｐ０．で
ｐＨ３，６に調整した、６７０ｍ（ｉの１−（，０と１
００ｇのＮＨ４Ｈ２ＰＯ４の溶液に、３３０ｍＣのＣｌ
−１３ＣＮを加えることによって作成する。

緩衝液Ｂは、８５％８３ＰＯ，てｐＴ（３、６に調整し
た、４００ｍ（のＩ−Ｉ　、　Ｏと１０．ＯｇのＮＨ，
８２ＰＯ４の溶液に、６００叶のＣＨ、ＣＮを加えるこ
とによって作成する。ジャンヂノマイノンＣを６３ｍＱ
と７５ｍＱ間で溶離し、一方、ジャノヂノマインン１３
、を１５０ｍ１２と２２５ｍＱ間で溶離する。活性成分
を別々にプールし、減圧乾燥に付す。それぞれをＢ　ｕ
　ＯＨ／　Ｉ−Ｉ　、　Ｏ（Ｂ　ｕ　ＯＨおよびトＩ２
０は各３ｍの間に分配しく３回）、ＢａＯ２層をコンバ
インし、次いで減圧乾燥に付して部分的に脱塩を行い、
４４．８＋９のジャンチノマイシンＢ（Ｂ＋とＢ２の混
合物として）および３９．５ｍｇのジャンチノマイシン
Ｃを作る。Ｇｌ−ＩＰ　２０　Ｐ（１，５Ｘ　２０ｃｍ
）にてＣＩｆ３ＯＮ／Ｈ，Ｏ／ＨＣＯＯＨ（２０：８０
　０〜６０：４０：１、各１２０ｇ）の直線勾配で溶離
する脱塩処理に付して最終精製を行い、３７．０ｍｇの
ジャンヂノマインンＢを得る。ノヤンヂノマイノン０の
同じ試料のコンバインしたプール（９４，、Ｉ　ｍｙ）
を脱塩して、５３．５ｇｇの純粋物を得る。

生物学的活性 本発明化合物の最小抑制濃度（以下、ＭｒＣと称す）に
ついて、以下に示す方法で測定した。

約１５〜２０ｍ１２の液体培地（デイフコ社のＡｎｔｉ
ｂｉｏｔｉｃ　Ａｓ５ａｙ　Ｂｒｏｔｈ）において、該
液体培地に寒天斜面培地（デイフコ社の１３　ＨＩ　）
からのループ状微生物と共に接種して（デユープ中）、
好気性試験微生物を生長させる。接種したデユープを３
７°Ｃで１８〜２４時間培養する。これらの培養物（Ｊ
１１０９コロニー形成ユニット（ＣＦＵ）／ｍｃを含有
すると思われる。培養物をＩｇｌｏｏに希釈して、最終
接種剤濃度をＩＯ’ＣＦＵとづ−る。希釈はＹｅａｓｔ
　Ｂｅｅｆ　Ｂｒｏｔｈ（デイフコ社）で行う。

ジャンヂノマイシンを適当な希釈剤に、１００Ｏμｇ／
ｍρの濃度で溶解する。Ｙｅａｓｔ　Ｂｅｅｆ　Ｂｒ。

ｔｈ（デイフコ社）で２倍希釈を行い、ｌ０００〜００
５μｇ／ｍρの範囲とする。個々のペトリ皿に１５ｍ［
の各希釈物を入れ、これに１３．５ｍｇのに一１０寒天
を加える。Ｋ−１０寒天の組成は以下の通りである。

υ−ユ ヒーフエギス　　　　　　　　　・・・　１．５酵母エ
キス　　　　　　　　　・・・　３．０ペプトン　　　
　　　　　　　・・・　６，０デキストロース　　　　
　　　・・・　１０寒天　　　　　　　　　　　　・・
・１５．０全体を蒸留水で１ρとする 寒天中最終薬物濃度は、１００μｇ／ｍｆ！〜０，０５
ｔｔｇ／ｍρの範囲にある。試験平板の前後に、寒天の
みを含有する微生物生長対照平板を用意し、接種する。

接種後（Ｄｅｎｌｙ　Ｍｕｌｔｉｐｏｉｎｔ　Ｉ　ｎｏ
ｃｕｌａｔｏｒ、約０．００１ｍρの各微生物を放出す
る）を用いて、各平板の寒天表面に微生物を適用し、寒
天表面の最終接種剤をＩＯ’ＣＦＵとする。

平板を３７℃で１８時間培養し、ＭＩＣを測定する。Ｍ
ＴＣは、微生物の生長を抑制する化合物の最小濃度であ
る。

寒天希釈検定の結果は、以下の通りである。

（以下余白） 次に、ジャンヂノマインンΔおよびＩ３の混合物に対す
る多数の嫌気性細菌の感受性についても、寒天希釈法で
測定した。試験微生物は、液体培地（ロードアイランド
州フィスケビレのスコツト・ラボラトリーズ社のＣｈｏ
ｐｐｅｄ　Ｍｅａｔ　Ｂｒｏｔｈ）で生長した２４〜４
８時間培養物、またはチョコレート寒天斜面培地の洗浄
液から調製する。上記斜面培地は、寒天（デイフコ社の
Ｐ　ｒｏｔｅａｓｅ＃　３　）にヘモグロビンを１％濃
度まで加えることにより作成した。斜面培地から液体培
地（ＢＢＬミクロピオロジイ’システムズ社のＢｒａｉ
ｎ　Ｈｅａｒｔ　　Ｉ　ｎｆｕｓｉ。

ｎ　Ｂｒｏｔｈ）と共に生長物を洗い出し、Ｉ　Ｘ　Ｉ
　０８ＣＦＵ／ｍＱの密度に希釈する。ジャンチノマイ
シンＡおよびＢの混合物のトリフルオロアセート塩を適
当な希釈剤に、１０００μｇ／ｍρ濃度で溶解する。液
体培地（デイフコ社のＹｅａｓｔ　Ｂｅｅｆ　Ｂｒｏｔ
ｈ）で２倍希釈を行い、１０００〜０，５μｇ／ｍＱの
範囲とする。個々のベトリ皿へ１．５ｍｆ！の各希釈試
料を入れ、これに１３．５ｍｃのＤＳＴ寒天（メリーラ
ンド州コロンビア、レッド・ブランチ・ロードのオクソ
イド・ＵＳＡ・インコーホレイテッド社、５％に溶解し
たひつじの血および０．５μｇ／ｍρのビタミンＫを含
有）を加える。寒天中の最終薬物濃度は１００〜００５
μｇ／ｍρの範囲にある。試験平板の前後に、寒天のみ
を含有する微生物生長対照平板を用意し、接種する。接
種器（Ｄｅｎｌｙ　Ｍｕｌｔｉｐｏｉｎｔ　Ｉ　ｎｏｃ
ｕｌａｔｏｒ、約０．００１１１１２の各微生物を放出
する）を用いて、各平板の表面に微生物を適用し、寒天
表面の最終接種剤濃度を１０５０ＦＵとする。平板を嫌
気性室（オハイオ州マリエッタのポルマ・サイエンティ
フィック社）にて３７℃で１８時間培養し、次いでＭＩ
Ｇ値を測定する。

ＭＩＧは、微生物の生長を抑制する抗生物質の最小濃度
である。

かかる寒天希釈検定の結果を下記表３に示す。

表３ ｔｈｅｔａｉｏｔａｏｍｉｃｒｏｎ Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ　ｆｒａｇｉｌｉｓ　　９８４
４　　　　２５　、０Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ　ｆｒａ
ｇｉｌｉｓ　Ｉ　０２７７　　　５０　、０Ｂａｃｔｅ
ｒｏｉｄｅｓ　　　　　１０２７８　　　２５．Ｏｔｈ
ｅｔａｉｏｔａｏｍｉｃｒｏｎ Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ　ｆｒａｇｉｌｉｓ　Ｉ　０２
７９　　　２５　、０Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ　ｆｒａ
ｇｉｌｉｓ　１０２８０　　　５０　、０Ｂａｃｔｅｒ
ｏｉｄｅｓ　Ｉ’ｒａｇｉｌｉｓ　Ｉ　Ｉ　Ｏ８５５０
、０Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ　　　　　］　２８８５ｍ
ｅｌａｎｉｎｏｇｅｎｉｃｕｓ Ｃ１ｏｓｔｒｉｄｉｕｉｎ　　　　　　８５７２　　　
　０．４ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃｕｍ Ｃｌｏｓｌｒｉｄｉｕｍ　　　　　Ｉ　Ｉ　２５６　　
　　０．４ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ　　　　　　］　７８０　　　
　０　、２ｓｅｐｔｉｃｕｍ Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ　　　　　　２３７２　　　　
０　、０５ｓｐｏｒｏｇｅｎｅｓ Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ　　　　　Ｉ　Ｉ　２５１　　
　　５０．０ｄｉｆＴｉｃｉｌｅ 表３（続き） ｖａｇｉｎａｌｉｓ Ｈｅｍｏｐｈｉｌｕｓ　　　　　　　　９６４０　　　
　　　０　、１ｖａｇｉｎａｌ　ｉｓ Ｂ　ｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　　　　Ｉ　１２６
０　　　　　　０　、２ｄｅｎｔｉｕｍ Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｌｅｎｔｕｍ　　　ｌ　１２
６１Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　　　　　Ｉ　Ｏ３３
８ｎｅｃｒｏｐｈｏｒｕｍ Ｐｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　　　　　　　　　　　　１　
１　２　６　４　　　　　　　　　　　０．８ｖａｒｉ
ａｂｉ　Ｉ　１ｓ Ｐｅｐｔｏｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　　　１１２６
３　　　　　　０　、８ａｎａｅｒｏｂｉ　ｕｓ Ｐ　ｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ　　　　４０２
０　　　　　　０　、４ンのイー・アール・スクイブ・
アンド・ザンズ・インコーホレイテッドで収集した微生
物の番号である。

【図面の簡単な説明】

第１．２．３および４図はそれぞれ、ジャンヂノマイノ
ンＡの紫外線スペクトル、赤外線スペクトル、１３Ｃ−
ＮＭＲスペクトルおよび’Ｈ−ＮＭＲスペクトル、第５
．６，７並びに８および９図はそれぞれ、ジャンチノマ
インンＢの紫外線スペクトル。 赤外線スペクトル、１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル並びに’
　Ｈ−Ｎ　Ｍ　Ｒスペクトル、第１０．Ｊｌ、＋２およ
び１３図はそれぞれ、ノヤンチノマイシンＣの紫外線ス
ペクトル、赤外線スペクトル、１３（、−ＮＭＲスペク
トルおよび’Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示すグラフである
。 特許出願人　イー・アール・スクイブ・アンド・ザンズ
・インコーホレイテッド 代　理　人　弁理士　青白　　葆　　外１名平成　２年
　４月　９日

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、式、 ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中、△−Ａｂｕはデヒドロ−α−アミノ酪酸；ＢＨ
   ＬはＤ−エリトロ−β−ヒドロキシロイシン；および Ｘはβ−ヒドロキシトリプトファン、β−ケトトリプト
   ファンまたはデヒドロトリプトファンである〕 で示される化合物またはその医薬的に許容しうる塩。 ２、Ｘがトレオ−β−ヒドロキシトリプトファンである
   請求項第１項記載の化合物。 ３、Ｘがβ−ケトトリプトファンである請求項第１項記
   載の化合物。 ４、Ｘがデヒドロトリプトファンである請求項第１項記
   載の化合物。 ５、添付図面第１図の紫外線スペクトル、第２図の赤外
   線スペクトル、第３図の６７．５ＭＨｚ炭素ＮＭＲスペ
   クトルおよび第４図の４００ＭＨｚプロトンＮＭＲスペ
   クトルを有する化合物またはその医薬的に許容しうる塩
   。 ６、添付図面第５図の紫外線スペクトル、第６図の赤外
   線スペクトル、第７図の６７．５ＭＨｚ炭素ＮＭＲスペ
   クトルおよび第８および９図の４００ＭＨｚプロトンＮ
   ＭＲスペクトルを有する化合物またはその医薬的に許容
   しうる塩。 ７、添付図面第１０図の紫外線スペクトル、第１１図の
   赤外線スペクトル、第１２図の６７．５ＭＨｚ炭素ＮＭ
   Ｒスペクトルおよび第１３図の４００ＭＨｚプロトンＮ
   ＭＲスペクトルを有する化合物またはその医薬的に許容
   しうる塩。