JPH02265565A - 抗甲状腺刺激ホルモンレセプター抗体の吸着体およびそれを用いた抗甲状腺刺激ホルモンレセプター抗体の除去装置 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は体液から有害な成分を吸着除去するための吸着
体およびそれを用いた除去装置に関する。さらに詳しく
は体液中より抗甲状腺刺激ホルモンレセプター（以下、
抗ＴＳＨレセプターという）抗体を除去し、自己免疫疾
患を抑制するための吸着体およびそれを用いた抗ＴＳＩ
Ｉレセプター抗体の除去装置に関する。

［従来の技術および発明が解決しようとする課題］ 自己免疫疾患は、その名称のごとく自己の組織の構成成
分に対する抗体が出現する疾患である。

代表的な自己免疫疾患である、自己免疫性甲状腺疾患に
おいては、ＴＳＨ（甲状腺刺激ホルモン）レセプターに
対する抗体の出現がみられる。これらの抗体はポリクロ
ーナルであり、ＴＳＨレセプターへの結合部位も様々で
機能も異なる。レセプターに結合することにより甲状腺
機能を冗進する抗体を甲状腺刺激抗体（ＴＳＡｂ、　ｔ
ｈｙｒｏｌｄｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ　ａｎｔｌｂｏｄ
ｙ）　、ＴＳＩＩレセプターへのＴＳＨの結合を阻害す
る抗体を甲状腺結合阻害抗体（ＴＢＩＩ、ｔｈｙｒｏｉ
ｄ　ｂｌｎｄｉｎｇ　ｉｎｈｌｂｌｔｏｒｙＩｍＩｌｕ
ｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ）と呼ばれている〇甲状腺機能が
冗進されると血中における甲状腺ホルモンが過剰になる
ため、これに基づく種々の臨床症状、すなわち甲状腺中
毒症が発現する。また、ＴＳ１１レセプターへのＴＳｉ
ｌの結合が阻害されると、甲状腺ホルモンの合成と分泌
が障害されてＴ４　　　Ｔ３の血中濃度を正常に維持で
きず、その結果種々の症状が現われ、甲状腺機能の低下
を呈する。

これらの症状の改善には抗ＴＳＩ＋レセプター抗体の除
去が有効と思われる。自己免疫性甲状腺疾患の従来の治
療法としては、抗甲状腺剤（ステロイド剤）の投与、放
射性ヨード法、手術による甲状腺の摘出などがある。こ
の中で、ステロイドには副作用があり、また長期にわた
る薬剤投与は、薬剤耐性を生じるなどの問題もある。

また、放射性ヨード法は、特定の施設でしか使えない、
発癌性の可能性や、遺伝子への影響が考えられる等の問
題点がある。

一方、手術による甲状腺の摘出により永続的な甲状腺機
能低下症を引き起こすこともある。

以上のことを考えると、病態の大きな要因となっている
抗ＴＳＨレセプター抗体を血中から除去する方法が、治
療法としては有効であると考えられる。

本発明者らは、かかる実情に鑑み鋭意研究を重ねた結果
、体液中の有効成分をほとんど失うことなく抗ＴＳＨレ
セプター抗体を選択的に吸着しうる吸着体を見出し、本
発明を完成するに至った。

［課題を解決するための手段］ すなわち本発明は、水不溶性多孔質担体に、糖脂質が固
定されてなる抗ＴＳＩ＋レセプター抗体の吸着体ならび
に流体の流入口および流出口を有する容器、流体および
該流体に含まれる成分は通過できるが、前記の抗ＴＳＩ
Ｉレセプター抗体の吸着体は通過できないフィルター、
および前記容器内に充填された前記抗ＴＳＨレセプター
抗体の吸着体からなる抗ＴＳＨレセプター抗体の除去装
置に関する。

［実施例］ 本明細書において体液とは血液、血漿、゛血清、腹水、
リンパ液、関節内液およびこれらからえられた分画成分
、ならびにその他の生体由来の液性成分をいう。

本発明において水不溶性多孔質担体とは、糖脂質を固定
するための水に溶解しない性質を有する物質をいう。本
発明に用いる水不溶性多孔質担体は、大きな径の連続し
た細孔を有するものが好ましい。すなわち抗ＴＳＨレセ
プター抗体は、おもにＩｇＧ　　（免疫グロブリンＧ）
であり、分子量が約１６万の巨大分子であり、これを効
率よく吸着するためには、この分子が容易に多孔質体内
に侵入しうろことが必要である。

細孔径の測定方法には種々あり、水銀圧入法がもっとも
よく用いられているが、親水性多孔質体のばあいには適
用が難しい。これに変わる細孔径の目安として排除限界
分子量がよく用いられ、親水性多孔質体、疎水性多孔質
体のいずれにも適用できる。排除限界分子量とは成書（
たとえば波多野博之、花卉俊彦、実験高速液体クロマト
グラフィー、化学同人）などに述べられているごとく、
ゲル浸透クロマトグラフィーにおいて細孔内に侵入でき
ない（排除される）分子のうちもっとも小さい分子量を
もつ物の分子量をいう。

排除限界分子量は、対象とする化合物により異なること
が知られており、一般に球状蛋白質、デキストラン、ポ
リエチレングリコールなどについてよく調べられている
が本発明に用いる担体のばあい、抗ＴＳＨレセプター抗
体にもっとも類似していると思われる球状蛋白質を用い
てえられた値を用いるのが適当である。

排除限界の異なる種々の水不溶性多孔質担体を用いて検
討した結果、抗ＴＳＨレセプター抗体の吸着に適当な細
孔径の範囲は、ｌＯ万以上６０００万以下であることが
明らかになった。すなわちｌＯ万未満の排除限界分子量
をもつ水不溶性多孔質担体を用いたばあいには抗ＴＳ）
ｌレセプター抗体の吸着量は小さく実用に耐えない。一
方排除限界分子量が大きくなるにつれて、抗ＴＳＨレセ
プター抗体の吸着量は増加するがやがて頭打ちとなり、
排除限界分子量が６０００万をこえると表面積が少なす
ぎ吸着量は目だって低下するばかりでなく、目的とする
抗ＴＳＨレセプター抗体以外の吸着、すなわち非特異吸
着が増加し選択性がいちじるしく低下する。

したがって本発明に用いる水不溶性多孔質担体の好まし
い排除限界分子量はｌＯ万以上Ｂ０００万以下であり、
さらに好まし・くは、より選択性吸着容量を大きくする
ために１００万以上２０００万以下であるのがよい。

つぎに水不溶性多孔質担体の多孔構造については表面多
孔性よりも全多孔性が好ましく、空孔容積が吸着容量が
大きいという点から２０％以上であることが望ましい。

水不溶性多孔質担体の形状は、粒状、球状、繊維状、膜
状、ホローファイバー状など任意の形状を選ぶことがで
きる。粒状の水不溶性多孔質担体を用いるばあい、その
粒径は１遍未満のばあい圧力損失が大きく、５０００１
１ｍをこえるばあい吸着容量が小さい点から１、ｃＩｆ
ｆ１以上５０００週以下であるのが好ましい。

本発明に用いる水不溶性多孔質担体は有機性、無機性い
ずれであってもよいが、目的とする抗ＴＳＨレセプター
抗体以外の体液成分の吸着（いわゆる非特異吸着）の少
ないものが好ましい。

親水性であるほうが非特異吸着が少ないので水不溶性多
孔質担体は疎水性であるよりも、親水性であるほうが好
ましい。

さらに、水不溶性多孔質担体表面には、糖脂質の固定化
反応に用いうる官能基が存在していると好都合である。

これらの官能基の代表例としては、水酸基、アミノ基、
アルデヒド基、カルボキシル基、チオール基、シラノー
ル基、アミド基、エポキシ基、ハロゲン基、スクシニル
イミド基、酸無水物基などがあげられるがこれらに限定
されるものではない。

また、水不溶性多孔質担体は前記官能基のなかでも水酸
基を有する化合物よりなるものであるばあい、非特異吸
着が少ないのでとくに好ましい。これら官能基をスペー
サーとして導入された水不溶性多孔質担体も用いうろこ
とはいうまでもない。

本発明に用いる水不溶性多孔質担体の代表例としては、
アガロース、デキストラン、ポリアクリルアミドなどの
軟質多孔質体、多孔質ガラス、多孔質シリカゲルなどの
無機多孔質体、ポリメチルメタクリレート、ポリビニル
アルコール、スチレン、ジビニルベンゼン共重合体など
の合成高分子および／またはセルロースなどの天然高分
子を原料とする多孔質ポリマーノ１−ドゲルなどがあげ
られるがこれらに限定されるわけではない。

本発明の吸着体を体外循環治療に用いる際には、血液、
血漿のごとき高粘性流体を高速で流す必要があるために
、圧密化を引き起こさない充分な機械的強度を有する硬
質水不溶性多孔質担体を用いるのが好ましい。すなわち
硬質水不溶性多孔質担体とは後記参考例に示すごとく、
水不溶性多孔質担体を円筒状カラムに均一に充填し、水
性流体を流通したばあいの圧力損失と流量との関係が少
なくとも０．３ｋｇ／ｅ−まで直線関係にあるものをい
う。

本発明吸着体の糖脂質は、脂肪酸アルコールまたは脂肪
酸を結合した糖質からなる複合脂質であればいかなるも
のも使用できる。

本発明に用いる糖脂質の代表例としては、セラミドへキ
ソシド、ムコリビド、スルファチド、ガングリオシドな
どのスフィンゴ糖脂質、グルコセレブロシド、セラミド
トリマンノシドなどのフィトグリコリピド、モノグリコ
シルジクリコシド、ジガラクトシルジグリセリドなどの
グリセロ糖脂質などがあげられるが、これらに限定され
るわけではない。また、糖脂質の中でもガングリオシド
がＴＳＨレセプターの構成成分でもあり好ましい。

本発明の吸着体に固定される、糖脂質は１種類であって
もよいし、２種類量−ヒであってもよい。

水不溶性多孔質担体に糖脂質を固定させる方法としては
、物理的吸着による方法、イオン結合による方法、共有
結合による方法などがあり、公知の種々の方法を制限な
しに用いることができる。しかしながら、本発明の吸着
体は、体外循環治療に供せられるため、滅菌時あるいは
治療時においての糖脂質の脱離溶出を極力おさえること
が安全上重要であり、そのためには、共有結合による方
法を用いることが望ましい。

本発明の吸着体を治療に用いるには種々の方法がある。

もっとも簡便な方法としては患者の血液を体外に導出し
て血液バッグに貯め、これに本発明の吸着体を混合して
抗ＴＳＨレセプター抗体を除去後、フィルターを通して
吸着体を除去し、血液を患者に戻す方法がある。この方
法は、複雑な装置を必要としないが、１回の処理量が少
なく治療に時間を要し、操作が煩雑になるという欠点を
有する。

つぎの方法は吸着体をカラムに充填し、体外循環回路に
組み込みオンラインで吸着除去を行うものである。すな
わち流体の流入口および流出口を有する容器、流体およ
び該流体に含まれる成分は通過できるが、水不溶性多孔
質担体に糖脂質が固定されてなる抗ＴＳＩＩレセプター
抗体の吸着体は通過できないフィルター、および前記容
器内に充填された前記抗ＴＳＨレセプター抗体の吸着体
からなる抗ＴＳＨレセプター抗体の除去装置に体液を通
液する方法が簡便で好ましい。

第２図に本発明の抗ＴＳＨレセプター抗体の除去装置の
一実施例の概略断面図を示す。第２図中、（１）および
（２）はそれぞれの流体の流入口と流出口、（３）は本
発明の吸着体、（４）および（５）は流体および流体に
含まれる成分は通過できるが本発明の吸着体は通過でき
ないフィルターまたはメツシュ、（６）はカラム、（７
）は容器である。ここで流体の流入口側のフィルター（
４）は存在しなくてもよい。

以下、実施例により本発明をさらに詳しく説明するが、
本発明はかかる実施例のみに限定されるものではない。

参考例 両端に孔径１５遍のフィルターを装着したガラス製円筒
カラム（内径９ｆｌ１１１１カラム長さ　１５０ａｍ）
にアガロースゲル（バイオラド（Ｂｌｏｒａｄｏ）社製
のバイオゲルＡ　５　ｍ　（Ｂｌｏｇｅｌ　Ａ　５　ｍ
）　、粒径５０〜１００メツシユ）、ポリマー硬質ゲル
（東ソー■製のトヨバールＩＩＷ　６５　、粒径５０〜
１００Ｉ、およびチッソ■製のセルロファインＧＣ−７
００ｍ　、粒径４５〜１０５ＡＩＩ１１）をそれぞれ均
一に充填しベリスタルティックボンブによりカラム内に
水を流通し、流速と圧力損失ΔＰとの関係を求めた。そ
の結果を第１図に示す。同図より明らかなように軟質ゲ
ルであるアガロースゲルは一定の流速以上では圧密化を
おこし、圧力を増加させても流速が増加しないのに対し
、トヨバール、セルロファインなどの硬質ゲルは圧力の
増加にほぼ比例して流速゛が増加する。

製造例１ 多孔質セルロースゲルであるセルロファインにＣ−７０
０ｍ　（商品名、チッソ■製、球状蛋白質の排除限界分
子ｆｆ１４０万、粒径４５〜１０１０５ｕ　７０ｍ１に
水を加え、全量を　１２０　ｍｌとした。２Ｎ　ＮａＯ
Ｈ４２ｍ１を加え、４０℃で攪拌後、エピクロルヒドリ
ンを１２ｍ１加え、４５℃で２．５時間攪拌した。反応
終了後ゲルを濾別、水洗しエポキシ基の導入されたセル
ロースゲル（以下、エポキシ化ＧＣ−７００ｍゲルとい
う）をえた。

製造例２ 製造例１でえたエポキシ化ＧＣ−７００ｍゲル５０　ｍ
ｌに水を加え、８０ｍ１とした。ヘキサメチレンジアミ
ン１ｇを加えよく混合後４５℃で２時間振盪した。

反応終了後ゲルを濾別水洗し、アミノ基の導入されたセ
ルロースゲル（以下、アミノ化ＧＣ−７００ｍゲルとい
う）をえた。。

実施例１ 酸性糖脂質であるガングリオシド（フナコシ薬品■製の
ＧＡＮＧＬＩＯ８ＩＤＥ　Ｇ旧）１５ａ＋ｇを２　ｍｌ
の水に溶かしたものに、製造例２でえたアミノ化ＧＣ−
７００ｍゲル８　ｍｌと、１０ｍｇ／　ｍｌ　ＮａＢＴ
ｏを含む０．２Ｎ　ＮａＯＨ２ｍｌを加えよく混合した
。４５℃で３０分放置後１０ｏ＋ｇ／　ｍｌ　ＮａＢＨ
＋を含む０．２Ｎ　ＮａＯＨを１　ｍｌ追加混合し、４
５℃で８時間放置後室温で１晩放置した。反応終了後ゲ
ルを濾別水洗し、ガングリオシドが固定されたセルロー
スゲル（以下、ガングリオシド−〇〇−７００　ｍとい
う）をえた。

実施例２ 実施例１でえた吸着体を生理食塩水で平衡化し、そのｌ
　ｍｌをチューブ（容量７　ｍｌ　）にとった。

これにバセドウ病患者血漿を１　ｍｌずつ加え、３７℃
で２時間振盪した。この吸着操作終了後、遠心分離して
ゲルを沈降させ、採取した上澄み中の抗ＴＳＩＩレセプ
ター抗体（ＴＢｌｌ）の活性値を測定した。ＴＢＩＩは
ＴＳＨのラジオレセブターアッセーを用いる方法で測定
した。すなわち、ＴＢｌｌの活性値は、レセプターへの
抗体の結合により１２５１−ＴＳＨのレセプター結合が
阻害されることにより、間接的に抗体の存在を検出する
方法で行なった。またＩｇＧ濃度を測定し、吸着の選択
性を見た。第１表に吸着後の吸着体の上澄み中のＴＢｌ
ｌの活性値およびＩｇＧ濃度、ならびにバセドウ病患者
血漿のＴＢＩＩの活性値およびＩｇＧ濃度を示す。第１
表から実施例１でえられた吸着体は、ＩｇＧを吸着しな
いのに対し、ＴＢｌｌは吸着することが観察された。

［以下余白］ ［発明の効果］ 本発明の吸着体およびそれを用いた除去装置は体液より
抗ＴＳＨレセプター抗体を選択的に吸着しうるという効
果を奏する。

【図面の簡単な説明】

第１図は３８類のゲルを用いて流速と圧力損失との関係
を調べた結果を示すグラフであり、第２図は本発明の抗
ＴＳＩＩレセプター抗体の除去装置の一実施例の概略断
面図である。 （図面の主要符号） （１）二流入口 （２）二流出口 （３）：吸着体 （４）、（５）：フィルター （７）：容　器 才１ 園 圧力損失 ／Ｐ （ｋｇ／Ｃｍ２） 第２ 図

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １　水不溶性多孔質担体に、糖脂質が固定されてなる抗
   甲状腺刺激ホルモンレセプター抗体の吸着体。 ２　水不溶性多孔質担体の球状蛋白質の排除限界分子量
   が１０万以上６０００万以下である請求項１記載の抗甲
   状腺刺激ホルモンレセプター抗体の吸着体。 ３　水不溶性多孔質担体が水酸基を有する化合物よりな
   る請求項１記載の抗甲状腺刺激ホルモンレセプター抗体
   の吸着体。 ４　流体の流入口および流出口を有する容器、流体およ
   び該流体に含まれる成分は通過できるが、請求項１記載
   の抗甲状腺刺激ホルモンレセプター抗体の吸着体は通過
   できないフィルター、および前記容器内に充填された前
   記抗甲状腺刺激ホルモンレセプター抗体の吸着体からな
   る抗甲状腺刺激ホルモンレセプター抗体の除去装置。