JPH02240004A - アイツリン―ａを用いるアフラトキシン汚染の防除方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、アイツリン−△（Ｉｔｕｒｉｎ△）あるいは
この物質を産生ずるバチルス・ズブブルス菌株を用いる
ことによって、農産物特に穀類又はナッツ類が強い毒性
物質であるアフラトキシンにより汚染されることを防除
する方法に関するものである。

（従来の技術》 アフラトキシンは、現在知られている物質の中で発癌性
の最も強い物質の一つと考えられている（日木臨林３９
巻１月　１３５頁１９８１年）。

このアフラ］・キシンは、アスベルギルス・フラバス（
Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｆｌａｖｕｓ）　、アスベル
ギルス・パラシティカス（＾ｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｐ
ａｒａｓｉｔｉｃｕｓ）、アスペルギルス・ノミウス（
＾ｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｎｏｌｉＬｌｓ）などのアフ
ラ１・キシン産生菌により産生され、Ｂ１、０１など幾
つかの誘導体が知られている。

小麦、大麦、米、メイズ（コーン》などの穀類ハーゼル
ナツツ、アーモンド、ブラジルナッツ、ピーナツツなど
のナッツ類などにアフラトキシンで汚染されたもの（＾
■、＾３３．　Ｃｅｒｅａｌ　ＣｈｅｌｌｉＳｔＳＩｎ
ｃ．　　５９５　　１９７４：６０３．　１９７５：Ｊ
＾ＯＣＳ　９８０＾，　１９８１Ｊ．　Ａｇｒｉｃ．　
　Ｆｏｏｄ　Ｃｈｅｗ．，　２６，　２４９，　　１９
７８；　ＤｔｓｃｈＬｅｂｅｎｓｍ．　Ｒｕｄｓｃｈ．
　　７６　　４７　１９８０　Ｌｅｈｅｎｓｉ．−ｗｉ
ｓｓｕ．　−Ｔｅｃｈｎｏｌ．，　１４，２５２．　１
９８１など》が見つかっており、これらの汚染された作
物が栽培、収穫された地域は、アフラトキシン産生菌で
汚染されている可能性が大きい。特に、熱帯地方や亜熱
帯地方では、アフラトキシン産生菌で汚染ざれている所
が多く見つかっている。

穀類やナッツ類がこれらのアクラ１−キシン産生菌で汚
染された畑で我培された場合、その畑で収穫される穀類
やナッツ類はアフラトキシンで汚染される可能性が大き
くなる。このようなアフラトキシンに汚染された穀類や
ナッツ類は、健康上問題があるため、多くの国で輸入を
厳しく規制している。

この汚染を防除するために、従来、アンモニア（丁ｒａ
ｎｓａｃ口ＯｎＳ　ｏｆ　ｔｈｅ　八Ｓ＾［誌１１６０
頁１９７７年）、ブロビオンＭ（Ｐｏｕｌｔ．　Ｓｃｉ
．誌５６巻１６３０頁１９７７年）あるいは亜硫酸水素
ナトリウム（Ｊ．　Ｆｏｏｄ　Ｐｒｏｔ誌４３ｖｊ５７
１頁１９８０年）、安息香酸の誘導体（　Ｈｉｃｒｏｂ
ｉｏｓ誌３１巻９３頁１９８１年》、シンナモン（Ｊ．
　ｒｏｏｄ　Ｓｃｉ．誌４２ｊｔｊ１１０７頁１９７７
年》、スパイス類（！．　　Ｌｅｂｅｎｓｔ　ｌＪｎｔ
ｅｒｓ．　　Ｆｏｒｓｃｈ．　誌　１７１巻　３４４頁
１９８０年》、殺虫剤等が試験されてきた。

その他、アフラトキシンが土壌中で減少すること（Ｓｏ
ｉｌ　Ｓｃｉ．　Ｓａｃ．八ｍ．　Ｊ．，４４．１２３
７．１９８０）が知られており、土壌への吸着や微生物
の関与が考えられる。また、多くの微生物がアフラトキ
シンを溶解した溶液中のアフラトキシンを減少させるこ
とＣ）報告されている（Ｊ．　８ａｃｔ．，９３，４６
４，１９６７；　Ｊａｅｎ．Ｈｉｃｒｏｂｉｏｌ．，　
　５４，　　１８５．　　１９６８　　；　　Ｍａｔｕ
ｒｗｉｓｓｅｎｓｃｈａｆｔｅｎ　　６２　　５３７，
　１９７５　；　Ｐｒｏｃ．　Ｊｐｎ．＾ｓｓｏｃ．ｏ
ｙｃｏｔｏｘ＋ｃｏ＋．，　１２，３３．１９８０）。

そのなかで、溶液中の７フラトキシンを特に減少させる
微生物としてフラボバクテリウム・オウランティアカム
（　Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ａｕｒａｎｔｉａ
ｃｕｍ＞、バチルス・メガテリウム（Ｂａｃｉｌｌｕｓ
　ｉｅｇａｔｅｒｉｕｍ）、コリネパクテリウム・ルプ
ラム（　ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｔｕｍ　ｒｕｂｒｕ
＋ｔ）、ペニシリウム・イスランディカム（Ｐｅｎｉｃ
ｉｌｌｉｕｍ　ｉｓｌａｎｄｉｃｕｍ）　、スタキボト
リス・ロプラータ（ｓｔａｃｈｂｏｔｒｙｓ　ｌｏｂｌ
ｊｌａｔａ）　，カニングハメラ−エキヌラータ（Ｃｕ
ｎｎｉｎ（ｌｈａｌｌ０＋１ａ　ｅｃｈｉｎｕ−Ｉａｔ
ａ）　、ストレプトコッカス・ラクチス（Ｓｔｒｅｐｔ
ｏｃｏｃｕｓ　Ｉａｃｔｉｓ）などが報告ざれている（
＾ｐｐ旧ｃｒｏｂｉｏ１．誌１ｔ＋ｔｉ９３４頁１９６
６年；　Ｊ．　Ｇａｎ．旧ｃｒｏ−ｂｉｏｌ．　　誌５
４巻　１８５頁１９Ｇ８年）。

また、アスペルギルス・フラバスがコーンや米中で、ア
スベルギルス・ニガーや１・リコデルマ・ヴイリデと共
存すると、その成育と７フラトキシン産生が著しく阻害
されるとの報告がなされている　（Ｄ．　　Ｔ．　　Ｗ
ｉｃｋｌｏｗ　　　Ｃ．　　Ｌ　　ｌｌｅｓｓｅｌｔｉ
ｍｃ　　　Ｄ．　　Ｌ．Ｓｈｏｔｗｅｌｌ　　ａｎｄ　
　Ｇ．Ｌ．　　Ａｄａｍｓ，　　Ｐｈｙｔｏｏａｔｈｏ
ｌｏｇｙ，７０７６１（１９８０））． なお、Ｒ，　Ｍａｎｎらは、バチルス・ズプチルスのな
かにアフラトキシンを除去する菌株（ＡＴＣ　０　６６
３３株、Ａ　Ｔ　Ｃ　０９３７２株）があることを報告
している（２．Ｌｅｂｅｎ＋ｖ．　−Ｉｎｔｅｒｓ．　
−Ｆｏｒｓｃｈ．，　　１６３．３９　　１９７７）。

さらに本発明の発明者は、食品に用いても安全な微生物
を用いて穀類やナッツ類がアフラトキシンに汚染される
のを防除する方法を開発すべく各地の土壌菌を検索し、
昔から食品と関係の深いバチルス・ズブヂルス（Ｂａｃ
ｉｌｌｕｓ　ｓｕｂｔｉｌ＋ｓ）に属する菌株で、溶液
中の７フラトキシンを減少させ、しかもアフラトキシン
産生菌の成育とアフラトキシンの産土を阻害する性質を
有するバチルス・ズプヂルスＮ　Ｋ　−　３３０株（微
工研条寄第１５８０号（ＦＥＲＭ　　ＢＰ−１５８０）
　）及びＮＫ−Ｃ−３株（微工研条寄第１５８１号（Ｆ
ＥＲＭ　　ＢＰ−１５８１）　）を見ツケ、先ニ特１１
１’ｆｌ　［　６３−１９２３８０Ｆ！及び特開［６４
−２５７（ｌとして特許出願をしている。

また、下記一般式（１） （式中、ＲはアルキルＵである．） で表されるアイツリン一八なる物質は、１１５物病原性
閑に対し抗菌性を有するベブブドの混合物であり、以下
の文献に記載されている（Ｊ．＾ｎｔｉｂｉＯｔｉｃｓ
．誌ｘＸ■巻１０４３頁１９７Ｇ年；Ｔｅｔｒａｈｅｄ
ｒｏｎ　Ｌｅｔｔ．誌２３巻３０６５頁１９８２年；特
開昭５９−　２１２４１６号》。すなわち、ＲがＣＨ３
０Ｈ２−《ＣＨ３》２ＣＨＣＨ２一 ＣＨ　　ＣＨ　　ＣＨ　　ＣＨ２− ？ＣＨ　　　　　）　　　　　　ＣＨＣ　　ト１　■　
　ＣＨ　　２　　−ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２一
又はＣＨ３ の８種のべブチド化合物の混合物として同定されている
。

また、バチルス・ズブチルスＡＴＣ０　１０７７４株が
バシロマイシン＝８（アイツリン−Ａと同じもの）を産
生ずることが知られている（Ｐｒｏｃ．　Ｓｏｃ．［ｘ
ｐ．　　Ｂｉｏｌ．　　Ｈｅｄ．誌６７巻　５３９頁１
９４８年）。

しかしなから、アイツリン−八がアフラトキシン産生国
の生育あるいはアフラトキシンの産生能を阻害すること
は知られておらず、アイツリン−Ａをアフラトキシン汚
染の防除に用いることについては全く報告されていない
。

（発明が解決しようとする課題） 前記の化学物質を用いる防除方法のうち、実用化に至っ
ているのは、アンモニアによる処理及びブロビオン酸に
よる処理である。

しかしアンモニア処理においては汚染の予防が必ずしも
十分ではなく、すでに汚染された穀類等を処理するため
、穀類等の′ｌｉ色が甚だしく、辛うじて飼料用のもの
を処理する場合に用いられているにずぎない。またブロ
ビオン酸処理は貯蔵時に行われる方法であり、収穫前後
には適用できない。

また、微生物によるアフラトキシンの減少の多くは、菌
休に吸着するためであると報告（Ｊｇｅｎ．　Ｍ＋ｃｒ
ｏｂｉｏｌ．　　５４　１８５　１９６８・Ｊ．　Ｂａ
ｃｔｃｒｉｏ９３，　４６４．１９６７）されており、
しかも溶液中のアフラトキシンを減少させるのであって
、アフラトキシン産生閑の繁殖を阻害したり、収穫した
穀類やナッツ類又は畑で栽培されている穀類やナッツ類
のアフラトキシンを減少させるかどうかなどは調べられ
ていない。したがって、これらの微生物を用いて畑で栽
培されている穀類やナッツ類からアフラトキシンを除去
したり、アフラトキシンに汚染されるのを防ぐことは、
行われていない。また、収穫後の穀類ナッツ類からアフ
ラトキシンを除去りるにしてし多甲の菌休庖川いイｒｌ
Ｊれば＜Ｃらず、食品に不向きな方法である。しかも、
穀類やナッツ類の内部に存在するアフラト−１シンを完
全に除去することは困難である。その上、バチルス・ズ
プヂルス菌以外のこれらの菌は、食品に用いた場合、人
体に無害であるかどうか不明であり、病原性などで衛生
上問題があるものが多い。さらに、例えばストレブトコ
ッカス・ラクチスなどのように菌の栄養要求性が高いた
め、穀類やナッツ類を処理するのに適さないものもある
。

なお、Ｒ，Ｍａｎｎらのバチルス・ズブチルス菌株を用
いる報告においては、使用された菌株はアイツリン−へ
とは異なる他の抗生物質（マイコズブヂリン》を産生ず
るものであり（［ｕｒ．　ＪＢｉｏｃｈｃｎ．，　７７
，６１．１９７７）　、また、アフラトキシン溶液を用
いて２０日聞処理し４０〜５０％減少したとしているが
、この程度の減少では畑で栽１８シている穀類やナッツ
類に用いてもほとんど効果が明持できない。

本発明者はアフラトキシン産生菌の成育及びそのアフラ
トキシン産生を阻害するバチルス・ズブヂルスに属する
菌株について鋭意研究を進めた結果、ある種のバチルス
・ズブチルス菌株がアイツリン−Ａを産生し、このアイ
ッリン−△がアフラトキシン産生閑の生育及びそのアフ
ラ１−キシンの産生を著しく阻害リることを見いだし本
発明を完成するに至った。

（ＩＩ題を解決するための手段） すなわち、本発明は、上記一般式（Ｉ）で表されるアイ
ツリン−Ａを用いることを特徴とする穀類及びナッツ類
から選ばれる農産物のアフラトキシン汚染の防除方法を
提供するものである。

本発明の方法において用いられるアイツリン−Ａは、化
学的方法あるいは生物学的方法のいずれの手段を用いて
合成されたものであってもよいが、アイツリン−Ａ産生
能を有するバチルス◆ズブチルスに属する菌株を用いて
微生物学的方法により好適に製造することができる。

この際、用いることのできるバチルス・ズブチルス菌株
としてはアイツリン−Ａを産生じうるちのであればいか
なるものでもよいが、例えばバチルス・ズブチルスＮ　
Ｋ　−　３３０株（ＦＥＲＭ　　ＢＰ−１５８０）　、
ＮＫ−Ｃ−３株（ＦＥＲＭ　　ＢＰ−１５８１）　、Ａ
ＴＣ０　１０７７４株、ＩＡＭ１１４５株等を挙げるこ
とができる。

木微生物を用いてアイツリン−Ａを生産する培養には通
常の液体培地が用いられる・が、例えばボテト・デキス
トロース培地、ニュートリエント培地、等が用いられる
。また必要に応じて燐酸水素二カリウム、硫酸マグネシ
ウム等の無機塩が添加される。培養は、好ましくは２０
〜３０℃で２ないし７日聞、通気下好気的条件で行う。

培養後、アイツリン−Ａはそのほとんどが培養液中に存
在するので、本物質の培養液からの単離はまず遠心分離
又は濾過にＪ：り菌体を除去したのら、その上消液を濃
縮し、酸による沈澱、エタノール等の有機溶剤による抽
出、シリカゲルによる分配・吸着クロマトグラフィー等
を適宜組合わせることにより違成されろく下記製造例参
照）。

このようにして得られたアイツリン−八を穀類及びナッ
ツ類から選ばれる農産物に適用することによりアフラト
キシンの汚染から防除することができる。

なお、本発明の方法において、アイツリン−へを用いる
ということには、単離されたアイツリン−Ａを用いる以
外に、アイツリン−Ａを含有する溶液、組成物を用いる
ことのみならず、アイツリン−Ａを産生ずる菌株及びこ
の菌を培養した培養液を用いることも含むものである。

対象となる贋産物のうち穀類としてはメイズ（コーン）
、米、麦、粟、稗などを挙げることができ、ナッツ類と
しては、ピーナッツ、ピスタチオナッツ、アーモンド、
ハーゼルナッツ、ブラジルナッツなどを例示することが
でき、特にメイズ（コーン）、ピーナッツ、ピスタチオ
ナッツ、アーモンドが汚染の可能性の点で重要作物であ
る。

適用方法としては、例えば、貯蔵時にアイッリンーＡを
添加するのみならず、収穫前後の穀類やナッツ類にアイ
ツリン−八を敗布することによりアフラ１ヘキシンによ
る汚染を防除することができる。また、栽培中の穀類や
ナッツ類にアイツリン＝Ａを散布することにより（栽培
中の畑地への散布を含む）収穫した穀類やナッツ類がア
フラトキシンにより汚染されるのを防ぐことができる。

さらに、穀類やナッツ類を栽培する畑にアイツリン−Ａ
を散布、混入させ、あるいは種了をアイツリン−△で処
理後播種することにより、アフラトキシン汚染を防止す
るこどもできる。なＪ３、本明細閤中、収穫前とはいわ
ゆるブレハーベスト（　ｐｒｅ−ｈａｒＶ．ＱＳｔ　）
のことであり、結実したあと収穫までの期間を指し、収
穫後とはボストハーベス１・（　ｐｏｓｔ−ｈａｒｖｅ
ｓｔ　）　、すなわち収穫後貯蔵に至ルマでの期聞をい
う。

用いるアイツリン−Ａの母は、適用方法により異なるが
、穀類やナッツ類を栽培する畑を播種前にｍＷ！ｔる場
合には、１ヘクタールあたりアイツリン−Ａを１〜＋ｏ
ｏｇ、あるいは菌株を１０１１〜１０１３細胞用いるこ
とが好ましい。栽培中あるいは収Ｎ前の穀類やナッツ類
に散布する場合は、１ヘクタールあたりアイツリン−Ａ
を１〜５０ＩＪ、あるいは菌株を１０１１〜１０１２［
ＩＦ，用いることが好ましい。

また、硬子を処理する場合は、アイツリン−Ａの１〜５
ｍ，／ｉｓｓｓ６いはｍａの１０６〜１ｏ８ＩＩＩ胞／
ｆｌの溶液に浸漬してｍｌすることができる。さらに収
穫後や貯蔵中の穀類やナッツ類に対して用いる場合、０
．　００５！ｎ　ｆｆｉ％以上の添加で十分な防除効果
をあげることができ、好ましい笥囲はｏ．　ｏｏｓ〜０
．１１１ｆｉ％であり、より好ましい範囲は０．　０１
〜０．０５１ｆｉ％である。

アイツリン−八の作物への適用はアイツリン−八をその
まま水その他の溶剤で希釈して用いるほか、通常ａ薬製
造において行われている製剤方法により製剤化して用い
ることができる。製剤としては、水和剤、乳剤、粉剤、
粒剤等を、使用時期、使用形態にあわＶで適宜１１沢し
つる。このうち例えば永和剤としては、アイツリン−Ａ
５〜２０重儂％を、高級アルコール硫酸エステル塩、高
級アルキルエーテル＠酸エステル塩、ア・ルキルベンゼ
ンスルホン酸塩、高級アルコールリン酸エステル塩、高
級アルコールエブ叫ノンオ嘗シド付加物、ソルビタンの
脂肪酸エステル、ｉｒ′％ＮＪＡ脂肪酸塩のような補助
剤及びジナフチルメタンスルホン酸ナ１〜リウムホルマ
リン綜合物、リグニンスルホン酸塩、ガム類、メチルＬ
ルロースなどの展者剤と几にクレーベントナイト、シリ
カ、ホワイトカーボン、アクバルガイトのような担体に
担持させたしのを例示することができる。

また、乳剤としては、アイッリン−へ　５〜２０１量％
を、エチレングリコール、グリセリンなどの液休担体及
びアルキルジメチルベンジルアンモニウムクロリドのよ
うな補助剤と共に、ジメチルホルムアミド、ジメブール
スルホキシドのような極性溶剤及びメタノール、エタノ
ール、イソブロバノール、７ｌ？トン、メチルエチルケ
トン等の溶剤を用いて乳化させたものを例示することが
できる。

このようにして得られる水和剤、乳剤は、作物への適用
にあたっては常法に従い水で希釈して用いる。

菌株を用いる場合には、例えば、分枝デキストノンのよ
うな希釈剤と共に乾燥した後、上記のような展着削を添
加し、乾燥物を１０５〜１０７ＩＩＢ胞／一の淵１立と
なるように水に懸濁したものを用いることができる。

また、培Ｎ液を用いる場合には、培養液を上記希釈剤と
共に乾燥した俊、展春剤を添加し、製剤を水に懸濁・溶
解したものを用いることができる。

（発明の効果） アイツリン−八は、穀類やナッツ類に対して０．　００
５ないし０．１！’ｌｌｊ！！１％というごく微恐添加
することにより、アフラ１−キシン産生菌の生育とその
アフラト１シン産生を阻害する。したがってアイツリン
−△あるいはその産生菌株及び培長物を少那適用するこ
とにより、極めて高いアフラトキシンの防除を達成する
ことが可能である。また種々の適用形態が可能であるた
め、容易かつ簡便に防除を行うことができる。

これにより、アフラトキシンによる発癌の心配のない農
産物を提供することがｉｉＪ能となり、またこれまで耕
作できなかったアフ５１〜キシン産生菌で汚染された畑
での食用作物の栽培が可能となると考えられる。

以下、実施例、比較例、製造例により本発明をざらに詳
細に説明する。

製造例 第１表に示した培地５０ＭＩを分注した１００一容フラ
スコを１２（｝℃で、１５分間殺菌して、これにバチル
ス・ズプチルスＮ　Ｋ−３３０株の菌体を一白金耳接種
し、３０℃で一晩培養した。１方１０ｉ）容のジャーフ
アーメンターの中に前記の培地７ｇを入れ殺菌したもの
に上記種母５０−を接種し撹拌（　３００ｒｐｍ　）、
通気（＋／２ＶＶｌ）　Ｌ３０℃（−　３　ＩＩ間ＩＡ
ト９ｉｃ　ＩＪ　／：　．，７！の培養液を遠心分離し
菌休９．５９と除菌液６１を１９だ。除菌液をエバボレ
ーターを用いて３　０　０　ｍｌに濃縮したＵ濃縮液に
９９．５％土タノール１．２ｇを加え撹拌し、活性物質
を抽出し、遠心分離により抽出液と沈澱液とに分離した
。沈澱物は８０％エタノール１．５Ｉｌで更に抽出を行
い、遠心分離により抽出液を分離した。この抽出液を初
めの抽出液と合わせて減圧乾固し３５９の褐色物質を得
た。次にこの褐色物質を水５００＋＋ｄに溶解し、得ら
れた溶液を濃塩酸でＤＨを４．０に調節し沈澱物を得た
。沈澱物を凍結乾燥して４．１８ｇの褐色粉末を得た。

第　　１ 表 この褐色粉末を希アンモニア水でｐｌｌを調箇してアル
カリ性にした水２００ｄに溶解し、活性炭４．２ｇを加
え６０℃に加温、振とうし活性物質を活性炭に吸着せし
めた。活性炭を濾別し２　０　０　ｍｆｔの水で洗滌後
８０％プロパノール５００ｄを用いて活性物質を溶出さ
せた。溶出液を減圧乾固し７　７　０　ｍ９の微褐色粉
末をｔ９た。この微褐色粉末約３００１Ｒ！Ｊをエウノ
ール５Ｉｌ１に溶解させた。次にカラムクロマＩ・グラ
フィー（シリカゲル６０カラム：４７ｍ（内径）×３５
０ａｇ＋）に上記エタノール溶液を付し、エタノール／
酢′ｆａ／水（１７／１／２）　　１．２ｊ　ヲ注イテ
活性物質の溶離を行い溶離液を１５−ごとに分取した。

上記操作で活性画分は溶出開始後３０ないし６０両分に
溶出された。これらの両分を採取しエバボレーターで減
圧乾固した。上記操作を３回繰り返して白色粉末１１５
Ｉ！９（粗精製アイツリン−へ）を得た。この活性物質
を含む乾固物５Ｉｌｖをメタノールに溶解し逆相系の液
体クロマトグラフィーを行った。すなわち、カラム：日
本ウォーターズ（株〉製ミクロボンダスフェア（　μＢ
ｏｎｄａｓｐｈａｒｃ）Ｏ　Ｄ　Ｓ　：移動相；アｔ？
＋−ニトリル／水（２／３）：流速：８＋ｅ／ｍｉｎ：
検出波艮：　２１０ｎｌｌ１　、の条件下で分取・分画
し活性画分を採取した。上記操作を２０回繰り返して精
製し、白色粉末状の精製アイツリン−Ａ７９．１■を得
た。

上記の逆相液体クロマトグラフィーを行うことにより得
られた精製アイツリン−八は主成分として６つの両分に
分離された。この両分を保持時間の小さい方からＡ，Ｂ
，Ｃ．Ｄ．Ｅ．ＦとするとＡ２２．２ｑ、Ｂ１５．７ｑ
、Ｃ　２３．　１〜、Ｄ１０．７η、Ｅ４，９■、Ｆ２
．５ηが碧られた。

得られた各物質を６Ｎ塩酸中、１１０℃で２０時間加水
分解し、ＴＬＣでアミノＦｌ！ｉｌ［ｌ成を調べると、
各物質はアスパラギン酸、グルタミン酸、ブロリン、ヂ
ロシン、セリン及び、保持時間がいかなる通常のアミノ
酸よりも大きな異常アミノ酸と思われるニンヒドリン陽
性のスボッＩ〜を与えた。アミノ酸自動分析計でアミノ
酸分析を行った結果、いずれの物質からも１分子あたり
アスパラ１゛ンＭ３分子、グルタンミン酸１分子、チロ
シン１分子、ブロリン１分子、ヒリン１分子、アンモニ
ア４分子が検出された。このことからＡ〜Ｆの各々の物
質がアスパラギン３分子、グルタミン１分子、ブロシン
１分子、ブロリン１分子、セリン１分子から成ることが
確認された。

またこれらの各物質についてのＦＡＢ−マススベクトル
（親ピーク（Ｍ＋ＨビのｌＩＩＩ）、プロトン核磁気共
鳴吸収スペクトル（δ　０．９付近のメチル基について
のみ記載）、及び紫外吸収スペクトル〈メタノール中、
λｌｌｌａＸの埴〉を第２表に示す。

なおブロ１・ン核磁気共鳴吸収スペクトルにおいて、上
記Ａ−Ｆの各物質は、メチル基のパターン以外はほぼ完
全に同じスベク１・ルパターンを示した。

また、物！１Δのスペクトルパターンは対応する標品の
パターンと完全に一致した。

以上の結果からＡ−Ｆの物質は、次の側鎖構造を持つ化
合物と同定される。

Ａ）　　　Ｒ−−ＣＨ　　　　−ＣＩ−１　　２　　−
ＣＨ　　３ＣＨ３ Ｒ　　＝　　−　　Ｃ　　Ｉ−｛　　−　Ｃ　　Ｆ＋（
ＣＨ　　３　　）　　　２Ｒ＝−ＣＨ　　２　　−ＣＨ
　　２　　−Ｃ　　ト１　２　　−　Ｃ　ト１３Ｒ　＝
　−　Ｃ　１−１。−ＣＩ−１２−ＣＩ−１　＜ＣＩ−
１３）　２Ｒ　−　　−　　Ｃ　　トｔ　　２　　−Ｃ
｝−１　　２　　−ＣＭ　　２　　−Ｃ　　ト１　２−
　Ｃ　ト１　３ 第　　　２　　　表 実施ｆｒＡ１ 実施例２ ｇ１方作用 製造例で得た粗精製アイツリン−Ａを０，０１％添加し
たポテト・デ−ヤストロース寒天培地を直径９０馴の円
形シ１Ｉ−レに入れた。このシャー｛／の中央にアスベ
ノレギノレス・バラシティカスＮ　Ｒ　Ｒ　１２９９９
株の濃胞子懸濁液（約１０３胞子／ｄ）を１白金耳接種
し、２５℃で培養した。シャーレ中のコロニの直径を経
時的に測定した結束をアイツリン−Ａを添ＩＸ１シない
場合（コントロール）と合わせて第３表に示す。

装漬例で得た粗精製アイッリンー△を０３０１％轟加し
たポテト・デギス１・ロース寒天培地に、アスベノレギ
ノレス・バラシティカスＮ　Ｒ　Ｒ　Ｌ　２９９９１を
シャーレあたり約５０胞子接種し、２５℃で培養した。

アイツリン−Ａを添加しない場合（コントロール）と合
わせて、培地中のアフラ１・キシン淵麿の杼時変化を第
４表に示ず。

一一測定せず 実施例３ 第５−１表 １９８６年米■産の小粒ピーナッツ（ｔＪｓフロランナ
ー、品種名）をおよそ２時間水に浸漬しく吸水率約５０
％）、その１５ｇを三角フラスコに取り、各々のフラス
コにｆｆｉｉ比で０．００５，　０．０１及び０．１％
のアイツリン−Ａを添加し、その各々にアスペルギルス
・パラシティカスＮ　Ｒ　Ｒ　１　２９９９株をフラス
コ当り約２０胞子接秤した。２５℃でｉ８￥ｌしたとき
のピーナッツ中のアフラトキシンＢ　及びＧ１の１を経
時的に測定した結果、第５−１表及び第５ー２表に示す
通り、アイツリン−八を加えたものは、比較例１に比ベ
アフラトキシンの産生ｍが著しく少なく、その産生阻害
効果が明らかである。

第５−２表 本　ｔ　ｒ　　　　　：　　痕跡石１ −Ｎ．Ｄ．：　　検出せず なお、比較例１は、アイツリン−△を添加せずアスベル
ギノレス・バラシティカスＮ　Ｒ　Ｒ　１　２９９９株
のみを接種したときのアフラトキシンの産生吊である。

実施例４ 第　　６　　表 実施例３と同様に処理した小粒ピーナツツの１５９を三
角フラスコに取り、各々のフラスコに重量比で０．００
５，　０．０１及び０．１％のアイツリン−Ａを添加し
、その各々のフラスコにアスペルギルス・フラバスＮ　
Ｒ　Ｒ　Ｌ　３３５７株をフラスコ当り約２０胞子接種
した。２５℃で培養したときのピーナツツ中のアフラト
キシンＢ１の聞を経時的に測定した結果、第６表に示す
通り、アイツリン−八を加えたものは、比較例２に比ペ
アフラトキシンの産生憬が著しく少なく、その産生阻害
効果が明らかである。

：ｌ：ｔｒ　　　　：　　　痕跡ｍ ＩＮ．Ｄ．：　　検出せず なお、比較例２は、アイツリン−△を添ＩＪｌＩぜずア
スベルギルス・フラバスＮ　ＲＲ　１　３３５７株のみ
を接種したときのアフラトキシンの産１吊である。

実施例５ 市販の生食用コーンの約１５３を三角フラスコに取り、
各々に重吊比で０．００５，　０．０１及び０１％のア
イツリン−八を添加し、その各々にアスベルギノレス・
パラシティカスＮ　Ｒ　Ｒ　１　２９９９株をフラスコ
当り約２０胞子接種した。２５℃で培養したときのコー
ン中のアフラトキシンＢ　及びＧ１の酢を経時的に測定
した結宋、第７−１表及び第７−２表に示す通り、アイ
ツリン−Ａを加えたものは、比較例３に比ペアフラトキ
シンの産生苗が著しく少なく、その産生阻害効果が明ら
かである。

第７−１表 ＊ｔｒ　　　：　　痕跡聞 ＊Ｎ．Ｄ．：　　検出Ｕず なお、比較例３は、アイツリン−八を添加Ｖずアスペル
ギノレス・バラシティカスＮ　Ｒ　Ｒ　１　２９９９株
のみを接種したときのアフラトキシンの産生通である。

実施例６ 第７−２表 市販の生食用コーン１５９を三角フラスコに取り、各々
に重量比で０．００５，　０．０１及び０．１％のアイ
ツリン−八を添加し、その各々にアスペルギルス・フラ
バスＮ　Ｒ　Ｒ　Ｌ３３５７株をフラスコ当り約２０胞
子接種した。２５℃で培養したときのコーン中のアフラ
トキシンＢ１の量を経時的に測定した結果、第８表に示
す通り、アイツリン−八を加えたものは、比較例４に比
ペアフラトキシンの産生間が著しく少なく、その産生阻
害効果が明らかである。

第　　８　　表 ：Ｉ：Ｌｒ　　　　　　：　　　　痕２ダトｂ｝＊Ｎ．
ｏ．：　　検出せず なお、比較例４は、アイツリン−△を添加せずアスベル
ギルス・フラバスＮ　Ｒ　Ｒ　１　３３５７株のみを接
種したときのアフラトキシンの産生吊である。

実施例７ １９８６年産南アフリカ産の小粒ピーナツツ（ナタ一ル
コモン秤）をおよそ２時間水に浸漬し（吸水率約５０％
）、その１５ｇを三角フラスコにとり、オートクレーブ
で　１２１℃、１５分間加熱殺菌した模、アスペノレギ
ノレス・バラシティカス・Ｎ　Ｒ　Ｒ　Ｌ　２９９９株
（約２０胞子／フラスコ）と」（にバブルス・ズブブル
スＮ　Ｋ　−　３３０株（実施例７−１）あるいは、バ
ヂルス・ズブヂルスへＴＣ０　　１０７７４株（実施例
７２）を約２００ｗＩ胞／フラスコ接種した。２５℃で
ｉａ養したときのピーナッツ中のアフラトキシンＢ　及
びＧ１の量を経時的に測定した結果、第９−１表及び第
９−２表に示す通り、Ｎ　Ｋ　−　３３０株あるいはＡ
ＴＣ０　１０７７４株を加えたちのは、比較なお、比較
例５−１は、バヂルス・ズブブルスを｝妄種ぼずアスベ
ノレギノレス・パラシティカスＮＲＲ　Ｌ　２９９９株
のみを接種したときのアフラトキシンの産生伍である。

また、比較例５−２は、バチルス・ズプチルスｒ　Ａ　
Ｍ　１０２６株を用い、比較例５−３はシュードモナス
・エルギノーザＩ　Ａ　Ｍ　１５１４株を用いて実施例
７−１、７−２と同様に処理したときのピーナツツ中の
アフラトキシンの産生聞である。これらの対照菌株のア
フラトキシン産生阻害効果は極めて不十分であった。

第９−２表 第９−１表 ＊ｔｒ：痕跡量 実施例８ 実施例７と同様に処理したピーナッツに、アスベルギル
スφフラパスＮ　Ｒ　Ｒ　１　３３５７株（約２０胞子
／フラスコ）と共にバヂルス・ズブヂルスＮＫ３３０株
（実施例８−１）あるいは、バチルス・ズブチルスΔＴ
ＣＣ　１０７７４株〈実琉例８−２）を約２００細胞／
フラスコ接種した。２５℃で培養したときのピーナッツ
中のアフラトキシンＢ１の含量を経時的に測定した結果
、第１０表に示す通り、Ｎ　Ｋ　−　３３０株あるいは
へＴＣＣ　　１０７７４株を加えたらのは、比較四〇ｌ
．６　２．０−３に比ベノ／第１０表 なお、比較例６−１は、バチルス・ズブチルスを接種せ
ずアスペルギルス・フラバスＮＲＲ１３３５７株のみを
接種したときのアフラ１・キシンの産生ｍである。また
、比較例６−２は、バチルス・ズブヂルスＩΔＭ　１０
２６株を用いて、比較例６−３はシュードモナス・エル
ギノーザＩＡＭ１５１４株を用いて実施例８−１．８−
２と同様に処理したときのピーナッツ中のアフラトキシ
ンの産生量である。これらの対照菌株のアフラトキシン
産生阻害効果は穫めて不十分であった。

ｔｒ＝痕跡母 実施例９ 生食用のコーン１５ｇを三角フラスコにとり、アスベノ
レギノレス・パラシティカスＮ　Ｒ　Ｒ　１　２９９９
株（約２０胞子／フラスコ）と共にバチルス・ズブブル
スＮ　Ｋ　−　３３０株（実施例９−１）あるいは、バ
チルス・ズブグールスＡＴＣ０　　１０７７４株（実施
例９＝２》を約２００細胞／フラスコ接種した。２５℃
で培養したときのコーン中のアフラトキシンＢ１及びＧ
１の１を経時的に測定した結果、第１１−１表及び第１
１−２表に示す通り、Ｎ　Ｋ　−　３３０株あるいはＡ
ＴＣ０　１０７７４株を加えたものは、比較例第１１−
１表 なお、比較例７−１は、バチルス・ズプヂルスを接種せ
ずアスベルギルス・パラシティカスＮＲＲ　１　２９９
９株のみを接種したときのアフラトキシンの産生ωであ
る。また、比較例７−２は、バチルス・ズブチルスｌ　
Ａ　Ｍ　１０２６株を用い、比較例７一３はシュードモ
ナス・エルギノーザＩ　Ａ　Ｍ　１５１４株を用いて実
施例９−１、９−２と同様に処理したときのコーン中の
アフラトキシンの産生伍である。

これらの対照菌株のアフラトキシン産生阻害効果は極め
て不十分であった。

＊ｔｒ：痕跡吊 第１１−２表 実施例１０ 生食用のコーン１５ｇを三角フラスコにとり、アスペル
ギルス・フラバスＮ　Ｒ　Ｒ　１　３３５７株（約２０
胞了／フラスコ）と共にバヂルス・ズプヂルスＮＫ３３
０株（実施例１０−１）あるいは、バチルス・ズブヂル
スＡＴＣ０　１０７７４株（実施例１０−２）を約２０
０細胞／フラスコ接種した。２５℃で培養したときのコ
ーン中のアフラトキシンＢ１のωを経時的に測定した結
果、第１２表に示す通り、ＮＫ一３３０株あるいはＡＴ
Ｃ０　１０７７４株を加えたものは、比較例８−１、８
−２、８−３に比ベアフラ３３５７株のみを接種したと
きのアフラトキシンの産生けである。また、比較例８−
２は、バチルス・ズブチルスＩΔＭ　１０２６株を用い
、比較例Ｂ−３はシ」一ドモノ゜ス・エル１′ノーザＩ
ΔＭ１５１４株を用いて実施例１０−１、１０−２と同
様に処理したときの−！−ン中のアノラｌ−　１シンの
ρτ牛吊である。

これらのス・１照菌株のアフラト−１−シン産牛阻害効
宋は極めて不」分であった。

第１２表 なお、比較例８−１は、バチルス・ズブチルスを接種せ
ずアスペルギルス・フラバスＮＲＲＬｔｒ：痕跡昂 実施例１１ 市販の培養土を５００ＩＲＩｌの三角フラスコに約２５
９入れ、オー１・レーブで１２１℃、１時間殺菌し、ア
スベルギルス・バラシティカスＮ　Ｒ　Ｒ　１　２９９
９株（約２０胞子／フラスコ）と共にバチルス・ズブチ
ルスＮ　Ｋ　−　３３０株（実施例１１−１）あるいは
バチルス・ズブチルスへＴＣ０　１０７７４株（実施例
１１−２）を約２００細胞／フラスコ接種した。この菌
を接種した培養土に、実施例７に記載の殺菌処理した南
アフリカ産ビー少ツッ１５ｊＪを加え２５℃で培養した
。ピーナッツ中の７フラトキシンＢ１及びＧ１含ｍを測
定した結果、第１３−１表及び第１３−２表に示す通り
、Ｎ　Ｋ　−　３３０株あるいは△ＴＣ０　１０７７４
株を加えたものは、バチルス・ズプチルス株を接種しな
いでその他の処理は実施例１１−１又は１１−２と同様
に行った比較例９と比ベアフラ１〜キシンの産生が著し
く阻害されている。

第１３−１表 第１３ ２表 【ｒ：痕跡ｍ 実施例１２ 市販の１８養生を５００一の三角フラスコに約２５Ｕ入
れ、Ａ−１・レーブで１２１℃、１時聞殺菌し、アスベ
ルギルス・フラバ２　Ｎ　Ｒ−ＲＬ　３３５７株（杓２
ｏ胞子／フラスコ）と共にバチルス・ズブｊルスＮ　Ｋ
　−　３３０株（実施例１２−１）あるいはバチルス・
ズブチルスＡＴＣ０　１０７７４株（実施例１２２）を
約２００細胞／フラスコ接種した。この菌を接種した培
養土に、実施例７に記載の殺菌処理した南アフリカ産ピ
ーナッツ１５ヒを加え２５℃で培養した。ピーナッツ中
の７フラトキシンＢ１含量を測定した結果第１４表のよ
うになり、Ｎ　Ｋ　−　３３０株あるいはΔＴＣ０　１
０７７４株を加えた乙のは、バチルス・ズブヂルス株を
接種しないでその他の処理は実施例１２−１又は１２−
２と同様に行った比較例１０と比ペアフラトキシンの産
生が著しく少なく、その産生阻害効果が明らかである。

第１４表 ｔｒ：痕跡ｍ

Claims (12)

【特許請求の範囲】
1. （１）下記一般式（ I ）で表されるアイツリン−Ａを
   用いることを特徴とする穀類及びナッツ類から選ばれる
   農産物のアフラトキシン汚染の防除方法。 ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） （式中、Ｒはアルキル基である。）
2. （２）栽培する畑に前記一般式（ I ）で表されるアイ
   ツリン−Ａを散布、混入させ、穀類及びナッツ類から選
   ばれる農産物の種子をこの畑に播種することを特徴とす
   る請求項１に記載のアフラトキシン汚染の防除方法。
3. （３）収穫の前後に、穀類及びナッツ類から選ばれる農
   産物に前記一般式（ I ）で表されるアイツリン−Ａを
   散布することを特徴とする請求項１に記載のアフラトキ
   シン汚染の防除方法。
4. （４）栽培中に、穀類及びナッツ類から選ばれる農産物
   に前記一般式（ I ）で表されるアイツリン−Ａを散布
   することを特徴とする請求項１に記載のアフラトキシン
   汚染の防除方法。
5. （５）穀類及びナッツ類から選ばれる農産物の種子に前
   記一般式（ I ）で表されるアイツリン−Ａを被覆させ
   、この種子を播種することを特徴とする請求項１に記載
   のアフラトキシン汚染の防除方法。
6. （６）穀類及びナッツ類から選ばれる農産物の貯蔵中に
   前記一般式（ I ）で表されるアイツリン−Ａを作用さ
   せることを特徴とする請求項１に記載のアフラトキシン
   汚染の防除方法。
7. （７）穀類及びナッツ類から選ばれる農産物がメイズ（
   コーン）、ピーナッツ、ピスタチオナッツ又はアーモン
   ドである請求項１から請求項６のいずれかに記載のアフ
   ラトキシン汚染の防除方法。
8. （８）アイツリン−Ａの使用量が穀類及びナッツ類から
   選ばれる農産物に対して０．００５〜０．１重量％の範
   囲である請求項３から請求項６のいずれかに記載のアフ
   ラトキシン汚染の防除方法。
9. （９）バチルス・ズブチルスに属する菌株により産生さ
   れるアイツリン−Ａを用いる請求項１から請求項６及び
   請求項８のいずれかに記載のアフラトキシン汚染の防除
   方法。
10. （１０）前記一般式（ I ）で表されるアイツリン−Ａ
    を産生するバチルス・ズブチルス菌株を用いる請求項１
    から請求項６のいずれかに記載のアフラトキシン汚染の
    防除方法。
11. （１１）前記一般式（ I ）で表されるアイツリン−Ａ
    を含有するバチルス・ズブチルス菌株の培養液を用いる
    請求項１から請求項６のいずれかに記載のアフラトキシ
    ン汚染の防除方法。
12. （１２）バチルス・ズブチルスに属する菌株がＮＫ−３
    ３０株（ＦＥＲＭＢＰ−１５８０）又はＮＫ−Ｃ−３（
    ＦＥＲＭＢＰ−１５８１）である請求項９から請求項１
    １のいずれかに記載のアフラトキシン汚染の防除方法。