JPH022382A - トロパン系アルカロイドの製造方法 - Google Patents
トロパン系アルカロイドの製造方法Info
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- JPH022382A JPH022382A JP4321189A JP4321189A JPH022382A JP H022382 A JPH022382 A JP H022382A JP 4321189 A JP4321189 A JP 4321189A JP 4321189 A JP4321189 A JP 4321189A JP H022382 A JPH022382 A JP H022382A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野］
本発明はスコポラミン、ヒヨスチアミンなどのトロパン
系アルカロイドを効率的に製造する方法に関する。
系アルカロイドを効率的に製造する方法に関する。
トロパン系アルカロイドの主成分であるヒヨスチアミン
、スコポラミンは鎮痛、鎮痙作用を有すする医薬品およ
び医薬品原料として用いられており、天然の植物体中か
ら抽出して製造されている。
、スコポラミンは鎮痛、鎮痙作用を有すする医薬品およ
び医薬品原料として用いられており、天然の植物体中か
ら抽出して製造されている。
これらのアルカロイドは植物体中の含量も微量であり、
また植物の栽培は環境条件に著しく左右され、しかも収
穫に長期間を要する為、植物の細胞培養により生産しよ
うとする研究が数多く行われた。しかし、脱分化したカ
ルスでは母植物に比較して含量が低く、また選抜して得
られた高生産株の特性が継代培養中に失われるなどの問
題があった。
また植物の栽培は環境条件に著しく左右され、しかも収
穫に長期間を要する為、植物の細胞培養により生産しよ
うとする研究が数多く行われた。しかし、脱分化したカ
ルスでは母植物に比較して含量が低く、また選抜して得
られた高生産株の特性が継代培養中に失われるなどの問
題があった。
有用物質生産の一手段として、アグロバクテリウム・リ
ゾゲネス菌を植物の組織又は細胞に感染させ、感染によ
り誘発された毛状根を培養する方法がある。この毛状根
は通常の根に比較し、生育が非常に速く、しかも二次代
謝産物の生産量が同等以上であるという報告が出ており
、有用物質生産の製造方法として注目されている。真野
ら（住人化学）はトロパン系アルカロイドを製造するに
あたりズボイシアにアグロバクテリウム・リゾゲネス菌
を感染させ、誘発された毛状根をタンク培養することで
４週間でスコポラミンを７８ｍｇ生産可能にした。（第
１０回植物組織培養シンポジウム１９８７゜〔発明が解
決しようとする課題〕 上記の従来技術では、工業的規模でトロパン系アルカロ
イドの生産を可能にするためにはその生産量はまだ充分
とは言えず、さらに生産性を向上させることが課題であ
った。
ゾゲネス菌を植物の組織又は細胞に感染させ、感染によ
り誘発された毛状根を培養する方法がある。この毛状根
は通常の根に比較し、生育が非常に速く、しかも二次代
謝産物の生産量が同等以上であるという報告が出ており
、有用物質生産の製造方法として注目されている。真野
ら（住人化学）はトロパン系アルカロイドを製造するに
あたりズボイシアにアグロバクテリウム・リゾゲネス菌
を感染させ、誘発された毛状根をタンク培養することで
４週間でスコポラミンを７８ｍｇ生産可能にした。（第
１０回植物組織培養シンポジウム１９８７゜〔発明が解
決しようとする課題〕 上記の従来技術では、工業的規模でトロパン系アルカロ
イドの生産を可能にするためにはその生産量はまだ充分
とは言えず、さらに生産性を向上させることが課題であ
った。
本発明の目的は生産性の高いトロパン系アルカロイドの
製造法を提供することにある。
製造法を提供することにある。
本発明者らは、上記目的を達成すべく研究した結果、ナ
ス科植物の毛状根を培養することによるトロパン系アル
カロイドの製造方法において、前記毛状根として、ナス
科植物の半数性Ｍｉ織にアグロバクテリウム・リゾゲネ
ス菌の保持するＲｉプラスミドを導入し、誘発された半
数体由来の毛状根の中からトロパン系アルカロイド高生
産株を、選抜し、得られた前記選抜株の毛状根を使用す
ることにより上記目的が良好に達成されることを見出し
た。本発明は上記新知見に基づいて完成されたものであ
って、その要旨は、 「ナス科植物にアグロバクテリウム・リゾゲネス菌の保
持するＲｉプラスミドを導入し、誘発された毛状根を培
養することによるトロパン系アルカロイドの製造方法に
おいて、ナス科植物の半数性組織にアグロバクテリウム
・リゾゲネス菌の保持するＲｉプラスミドを導入し、誘
発された半数体由来の毛状根の中からトロパン系アルカ
ロイド高生産株を選抜し、前記選抜株の毛状根を培地で
培養し、トロパン系アルカロイドを採取することを特徴
とするトロパン系アルカロイドの製造方法。」にある。
ス科植物の毛状根を培養することによるトロパン系アル
カロイドの製造方法において、前記毛状根として、ナス
科植物の半数性Ｍｉ織にアグロバクテリウム・リゾゲネ
ス菌の保持するＲｉプラスミドを導入し、誘発された半
数体由来の毛状根の中からトロパン系アルカロイド高生
産株を、選抜し、得られた前記選抜株の毛状根を使用す
ることにより上記目的が良好に達成されることを見出し
た。本発明は上記新知見に基づいて完成されたものであ
って、その要旨は、 「ナス科植物にアグロバクテリウム・リゾゲネス菌の保
持するＲｉプラスミドを導入し、誘発された毛状根を培
養することによるトロパン系アルカロイドの製造方法に
おいて、ナス科植物の半数性組織にアグロバクテリウム
・リゾゲネス菌の保持するＲｉプラスミドを導入し、誘
発された半数体由来の毛状根の中からトロパン系アルカ
ロイド高生産株を選抜し、前記選抜株の毛状根を培地で
培養し、トロパン系アルカロイドを採取することを特徴
とするトロパン系アルカロイドの製造方法。」にある。
本発明で用いるナス科植物としてはヒヨスチアムス属、
アトロバ属、スコボリア属、ダツラ属、ズボイシア属に
属する植物が挙げられる。
アトロバ属、スコボリア属、ダツラ属、ズボイシア属に
属する植物が挙げられる。
半数性組織としては例えば豹、花粉培養により直接得ら
れたカルス、半数性植物体、前記植物体の切片、前記植
物体から誘導したカルス、プロトプラスト等が挙げられ
る。
れたカルス、半数性植物体、前記植物体の切片、前記植
物体から誘導したカルス、プロトプラスト等が挙げられ
る。
半数性組織の作成方法としては親植物から採取した蕾を
次亜塩素酸ナトリウム等で滅菌後、蕾の中から豹を取り
出し培養するか、さらには朽から花粉を取り出し培養す
ると１〜３ケ月で半数性の植物体もしくはカルスが得ら
れる。朽、花粉の培養に用いる培地としては必要に応じ
て植物ホルモンを添加した一般の植物の培養に用いられ
る８５Ｍ５等の培地が挙げられる。また、植物ホルモン
は例えば２．４−ジクロロフェノキシ酢酸（２，４−Ｄ
）。
次亜塩素酸ナトリウム等で滅菌後、蕾の中から豹を取り
出し培養するか、さらには朽から花粉を取り出し培養す
ると１〜３ケ月で半数性の植物体もしくはカルスが得ら
れる。朽、花粉の培養に用いる培地としては必要に応じ
て植物ホルモンを添加した一般の植物の培養に用いられ
る８５Ｍ５等の培地が挙げられる。また、植物ホルモン
は例えば２．４−ジクロロフェノキシ酢酸（２，４−Ｄ
）。
インドール醋酸（ＩＢＡ） 、 インドール酢酸（Ｔ
ＡＡ）。
ＡＡ）。
ナフタレン酢酸（ＮＡＡ）等のオーキシン類、およびカ
イネチン、ヘンシルアデニン等のサイトカイニン類が挙
げられるが半数性組織の形成に適したホルモンの種類、
ホルモン濃度は植物の種類によって異なる。
イネチン、ヘンシルアデニン等のサイトカイニン類が挙
げられるが半数性組織の形成に適したホルモンの種類、
ホルモン濃度は植物の種類によって異なる。
半数性組織へのアグロバクテリウム・リゾゲネス菌の保
持するＲｉプラスミドの導入方法としては、例えば植物
体組織への直接接種法、リーフディスク法、共存培養法
、マイクロインジェクション法等が挙げられる。
持するＲｉプラスミドの導入方法としては、例えば植物
体組織への直接接種法、リーフディスク法、共存培養法
、マイクロインジェクション法等が挙げられる。
植物に毛状根を作らせるために利用できるアグロバクテ
リウム・リゾゲネス菌としては八ｇｒｏｂａｃｔｅｒｉ
ｕｍ ｒｈｉｚｏｇｅｎｅｓ ＡＴＣＣ１
３３３２〃 八ＴＣＣ
１３３３３ＡＴＣＣ１５８３４ Ｎ ＡＴＣＣ２５８１８ＡＴＣＣ１１
３２５ が挙げられる。
リウム・リゾゲネス菌としては八ｇｒｏｂａｃｔｅｒｉ
ｕｍ ｒｈｉｚｏｇｅｎｅｓ ＡＴＣＣ１
３３３２〃 八ＴＣＣ
１３３３３ＡＴＣＣ１５８３４ Ｎ ＡＴＣＣ２５８１８ＡＴＣＣ１１
３２５ が挙げられる。
本発明のトロパン系アルカロイドの製造方法においては
、前述のような半数性組織にアグロバクテリウム・リゾ
ゲネス菌の保持するＲｉプラスミドを導入することによ
り誘発された半数体由来の毛状根を培養するものである
。その際、培養に用いる半数体由来毛状根としては、得
られた半数性毛状根をそのまま使用してもよいし、ある
いは半数性毛状根より例えばコルヒチン、ポドフィリン
、亜酸化窒素等の処理により作出した倍数性毛状根を使
用してもよい。
、前述のような半数性組織にアグロバクテリウム・リゾ
ゲネス菌の保持するＲｉプラスミドを導入することによ
り誘発された半数体由来の毛状根を培養するものである
。その際、培養に用いる半数体由来毛状根としては、得
られた半数性毛状根をそのまま使用してもよいし、ある
いは半数性毛状根より例えばコルヒチン、ポドフィリン
、亜酸化窒素等の処理により作出した倍数性毛状根を使
用してもよい。
さらに、本発明においては、半数体由来毛状根の中から
例えばガスクロマトグラフィー等でヒヨスチアミン、ス
コポラミン等の含量を測定し、高含量株を選抜すること
によって親植物（２倍体）由来毛状根よりも生産能力の
高い株を取得することができる。
例えばガスクロマトグラフィー等でヒヨスチアミン、ス
コポラミン等の含量を測定し、高含量株を選抜すること
によって親植物（２倍体）由来毛状根よりも生産能力の
高い株を取得することができる。
詳しくは、豹、花粉培養により得られた基本数の染色体
しか持たない半数体由来毛状根の中からトロパンアルカ
ロイド高生産株を選抜することにより２倍体（親植物）
由来毛状根よりも生産能力の高い株を取得できるが、選
抜した前記毛状根を基本数の整数倍の染色体をもつ例え
ば２倍体、３倍体、４倍体等に倍数化することにより、
さらに倍数化前の半数体由来毛状根を上回るトロパンア
ルカロイド高生産株を取得することができる。即ち、２
倍体（親植物）由来毛状根に比べ遥かに生産性の高いト
ロパンアルカロイド高生産株を取得することができる。
しか持たない半数体由来毛状根の中からトロパンアルカ
ロイド高生産株を選抜することにより２倍体（親植物）
由来毛状根よりも生産能力の高い株を取得できるが、選
抜した前記毛状根を基本数の整数倍の染色体をもつ例え
ば２倍体、３倍体、４倍体等に倍数化することにより、
さらに倍数化前の半数体由来毛状根を上回るトロパンア
ルカロイド高生産株を取得することができる。即ち、２
倍体（親植物）由来毛状根に比べ遥かに生産性の高いト
ロパンアルカロイド高生産株を取得することができる。
〔実施例１］
以下、本発明の方法を実施例によって更に具体的に説明
する。
する。
温室内で生育させた２倍株（染色体数＝２８）のヒヨス
（Ｈｙｏｓｃｙａｍｕｓ ｎｉｇａｒ Ｌ、）の蕾を採
取し、１％次亜塩素酸ナトリウム溶液で１５分間表面滅
菌した後、５０〜６０個の朽を蕾から取り出し、０．０
３■／ｆｆｉ ２．４−Ｄ、 ０．３■／ｌカイネチン
を添加したＢ５寒天培地上に植え付けた。１〜２ケ月後
に７個の豹から半数体（染色体数＝１４）として幼植物
およびカルスが得られた。カルスについてはあらかじめ
０．０６ｍｇ／／２ ＮＡＡ、 ０．２５■／βカイネ
チンを添加したＢ５寒天培地上に植えつけ植物体に再生
させた。
（Ｈｙｏｓｃｙａｍｕｓ ｎｉｇａｒ Ｌ、）の蕾を採
取し、１％次亜塩素酸ナトリウム溶液で１５分間表面滅
菌した後、５０〜６０個の朽を蕾から取り出し、０．０
３■／ｆｆｉ ２．４−Ｄ、 ０．３■／ｌカイネチン
を添加したＢ５寒天培地上に植え付けた。１〜２ケ月後
に７個の豹から半数体（染色体数＝１４）として幼植物
およびカルスが得られた。カルスについてはあらかじめ
０．０６ｍｇ／／２ ＮＡＡ、 ０．２５■／βカイネ
チンを添加したＢ５寒天培地上に植えつけ植物体に再生
させた。
上記の異なる朽から得られた７系統の半数性植物体の茎
に傷をつけ傷口にアグロバクテリウム・リゾゲスネ菌（
１５８３４株）を接種すると、約２週間後に傷口から毛
状根が生じた。誘発された毛状根を切り取り、各々１０
０μｇ／ｍｌタラフォランを添加したＢ５寒天培地上に
植えつけ除菌をした。除菌後、７系統（Ｎα１〜Ｎｏ、
７ ）の半数体由来毛状根（染色体数＝１４）につい
て各々乾燥重量で０．１ｇをホルモン無添加の８５液体
培地（２００ｍ／）を含む三角フラスコ（３００ｎｆ）
に植え付け、回転振盪培養した（回転数１５０ｒｐｍ、
温度２８°Ｃ３光２０００１ｕｘ）。培養中、細胞およ
び培地の一部からアルカロイドを抽出し、毛状根のヒヨ
スチアミン、スコポラミン生産量（含量、培地への分泌
量）を調べた。
に傷をつけ傷口にアグロバクテリウム・リゾゲスネ菌（
１５８３４株）を接種すると、約２週間後に傷口から毛
状根が生じた。誘発された毛状根を切り取り、各々１０
０μｇ／ｍｌタラフォランを添加したＢ５寒天培地上に
植えつけ除菌をした。除菌後、７系統（Ｎα１〜Ｎｏ、
７ ）の半数体由来毛状根（染色体数＝１４）につい
て各々乾燥重量で０．１ｇをホルモン無添加の８５液体
培地（２００ｍ／）を含む三角フラスコ（３００ｎｆ）
に植え付け、回転振盪培養した（回転数１５０ｒｐｍ、
温度２８°Ｃ３光２０００１ｕｘ）。培養中、細胞およ
び培地の一部からアルカロイドを抽出し、毛状根のヒヨ
スチアミン、スコポラミン生産量（含量、培地への分泌
量）を調べた。
細胞からのアルカロイド抽出方法としては乾燥させた毛
状根を一部エタノール：アンモニア（９：１）に浸し、
アルカロイドを抽出した。抽出液を減圧濃縮後、１ｍｆ
の０．ＩＮ ｌｌＣｌを加え濃縮物を溶解しＫＯＨでア
ルカリ性にした後、クロロホルムでアルカロイドを再抽
出した。抽出液を減圧濃縮し、濃縮物をクロロホルム二
Ｎ、０−ビス（トリメチルシリル）アセトアミド（４：
１ ｖ／ｖ）に溶解し、ガスクロマトグラフィーの
試料とした。一方、培地からのアルカロイド抽出は培地
をに０１１でアルカリ性にした後、クロロホルムで抽出
し、以後上記と同様の操作を行なった。
状根を一部エタノール：アンモニア（９：１）に浸し、
アルカロイドを抽出した。抽出液を減圧濃縮後、１ｍｆ
の０．ＩＮ ｌｌＣｌを加え濃縮物を溶解しＫＯＨでア
ルカリ性にした後、クロロホルムでアルカロイドを再抽
出した。抽出液を減圧濃縮し、濃縮物をクロロホルム二
Ｎ、０−ビス（トリメチルシリル）アセトアミド（４：
１ ｖ／ｖ）に溶解し、ガスクロマトグラフィーの
試料とした。一方、培地からのアルカロイド抽出は培地
をに０１１でアルカリ性にした後、クロロホルムで抽出
し、以後上記と同様の操作を行なった。
また、ガスクロマトグラフィー〇カラムとしてキャピラ
リー０ｖ−１を用い、ヒヨスチアミン、スコポラミンを
定量した。 （カラム温度２３０°Ｃ，ｌｉｅ流速５０
ｉ／ｍ１ｎ） 半数体由来不定根（Ｎｏ、１〜Ｎ０１７）の１ケ月当た
りのヒヨスチアミン、スコポラミン生産量と培養中の含
量の最大値を表−１に示す。
リー０ｖ−１を用い、ヒヨスチアミン、スコポラミンを
定量した。 （カラム温度２３０°Ｃ，ｌｉｅ流速５０
ｉ／ｍ１ｎ） 半数体由来不定根（Ｎｏ、１〜Ｎ０１７）の１ケ月当た
りのヒヨスチアミン、スコポラミン生産量と培養中の含
量の最大値を表−１に示す。
〔実施例２〕
実施例１で用いた７系統（Ｎｏ、 １〜Ｎｏ、 ７ ）
の半数体由来毛状根（染色体数＝１４）を各々０．０１
％コルヒチン溶液に４８時間浸し、倍数体として各々に
対応する７系統（Ｎｏ、１３〜Ｎｏ、 １９ ）の毛状
根（染色体数＝２８または染色体数＝５６）を得た。以
上の７系統（Ｎα−１３〜Ｎｏ、 １９ ）の半数体由
来毛状根（染色体数−２８または染色体数＝５６）につ
いて実施例１と同様の方法で培養し、各々についてヒヨ
スチアミン。
の半数体由来毛状根（染色体数＝１４）を各々０．０１
％コルヒチン溶液に４８時間浸し、倍数体として各々に
対応する７系統（Ｎｏ、１３〜Ｎｏ、 １９ ）の毛状
根（染色体数＝２８または染色体数＝５６）を得た。以
上の７系統（Ｎα−１３〜Ｎｏ、 １９ ）の半数体由
来毛状根（染色体数−２８または染色体数＝５６）につ
いて実施例１と同様の方法で培養し、各々についてヒヨ
スチアミン。
スコポラミン生産量を調べた。１ケ月当たりのヒヨスチ
アミン、スコポラミン生産量と培養中の含量の最大値を
表−２に示す。
アミン、スコポラミン生産量と培養中の含量の最大値を
表−２に示す。
〔比較例１〕
実施例１で用いた２倍体ヒヨス（Ｈｙｏｓｃｙａｍｕｓ
ｎｉｇｅｒ Ｌ、）の異なる部位から採取した５切片の
茎を１％次亜塩素酸ナトリウム溶液で滅菌し、寒天培地
に植え付け５系統の無菌植物を作成した。実施例１と同
様の操作で５系統の無菌植物にアグロバクテリウム・リ
ゾゲネス菌（１５８３４株）を感染させ、各々の植物体
から誘発された５系統（Ｎｏ、８〜Ｎｏ、１２）の毛状
根についてヒヨスチアミン、スコポラミン生産量を調べ
た。２倍体由来毛状根（Ｎｏ、８〜Ｎｏ、 １２ ）の
１ケ月当たりのヒヨスチアミン、スコポラミン生産量と
培養中の含量の最大値を表−１に示す。
ｎｉｇｅｒ Ｌ、）の異なる部位から採取した５切片の
茎を１％次亜塩素酸ナトリウム溶液で滅菌し、寒天培地
に植え付け５系統の無菌植物を作成した。実施例１と同
様の操作で５系統の無菌植物にアグロバクテリウム・リ
ゾゲネス菌（１５８３４株）を感染させ、各々の植物体
から誘発された５系統（Ｎｏ、８〜Ｎｏ、１２）の毛状
根についてヒヨスチアミン、スコポラミン生産量を調べ
た。２倍体由来毛状根（Ｎｏ、８〜Ｎｏ、 １２ ）の
１ケ月当たりのヒヨスチアミン、スコポラミン生産量と
培養中の含量の最大値を表−１に示す。
表−１から明らかなように、半数体由来毛状根は２倍体
由来毛状根に比べ、各クローン間のヒヨスチアミン生産
量の相異が大きく、ヒヨスチアミン高生産株を取得する
ことができた。
由来毛状根に比べ、各クローン間のヒヨスチアミン生産
量の相異が大きく、ヒヨスチアミン高生産株を取得する
ことができた。
また、表−２から明らかなように、倍数体として得られ
た半数体由来毛状根（Ｎα１３〜Ｎｏ、 １９ ）は、
倍数化前の半数体由来毛状ｆｌｉｔ（表−Ｉ Ｎｏ、
１〜Ｎα７）をさらに上回るヒヨスチアミン高生産株を
取得することができた。即ち、２倍体由来毛状根に比べ
溝かに生産性の高いヒヨスチアミン高生産株が得られた
。
た半数体由来毛状根（Ｎα１３〜Ｎｏ、 １９ ）は、
倍数化前の半数体由来毛状ｆｌｉｔ（表−Ｉ Ｎｏ、
１〜Ｎα７）をさらに上回るヒヨスチアミン高生産株を
取得することができた。即ち、２倍体由来毛状根に比べ
溝かに生産性の高いヒヨスチアミン高生産株が得られた
。
〔実施例３］
温室内で生育させた２倍体（染色体数＝７２）のベラド
ンナ（Ａｔｒｏｐａ ｂｅｌｌａｄｏｎｎａ Ｌ、）の
蕾を採取し、１％次亜塩素酸ナトリウム溶液で表面滅菌
した後、７０個の豹を蕾から取り出し、０．０３ｍｇ／
１２．４−Ｄ、０．３■／ｌカイネチンを添加したＢ
５寒天培地上に植え付けた。１ケ月後に６個の朽から半
数体（染色体数−３６）として幼植物が得られた。
ンナ（Ａｔｒｏｐａ ｂｅｌｌａｄｏｎｎａ Ｌ、）の
蕾を採取し、１％次亜塩素酸ナトリウム溶液で表面滅菌
した後、７０個の豹を蕾から取り出し、０．０３ｍｇ／
１２．４−Ｄ、０．３■／ｌカイネチンを添加したＢ
５寒天培地上に植え付けた。１ケ月後に６個の朽から半
数体（染色体数−３６）として幼植物が得られた。
上記の異なる豹から得られた６系統の半数性植物体に実
施例１と同様の操作で６系統の無菌植物にアグロバクテ
リウム・リゾゲネス菌（１５８３４株）を感染させ、各
々の植物体から誘発された６系統（Ｎｏ、 １−Ｎα６
）の半数体由来毛状根（染色体数−３６）についてヒヨ
スチアミン、スコポラミン生産量を調べた。１ケ月当り
のヒヨスチアミン、スコポラミン生産量と培養中の含量
の最大値を表−３に示す。
施例１と同様の操作で６系統の無菌植物にアグロバクテ
リウム・リゾゲネス菌（１５８３４株）を感染させ、各
々の植物体から誘発された６系統（Ｎｏ、 １−Ｎα６
）の半数体由来毛状根（染色体数−３６）についてヒヨ
スチアミン、スコポラミン生産量を調べた。１ケ月当り
のヒヨスチアミン、スコポラミン生産量と培養中の含量
の最大値を表−３に示す。
〔実施例４〕
実施例３で用いた６系統（Ｎｏ、 １−Ｎｏ、 ６ ）
の半数体由来毛状根（染色体数＝３６）を各々０．１％
コルヒチン溶液に４８時間浸し、倍数体として各々に対
応する６系統（Ｎα７〜Ｎα１２）の毛状根（染色体数
＝７２．１４４）を得た。以上の６系統（Ｎｏ、７〜Ｎ
ｏ、１２）の半数体由来毛状根（染色体数＝７２．１４
４）について実施例１と同様の方法で培養し、各々につ
いてヒヨスチアミン、スコポラミン生産量を調べた。
の半数体由来毛状根（染色体数＝３６）を各々０．１％
コルヒチン溶液に４８時間浸し、倍数体として各々に対
応する６系統（Ｎα７〜Ｎα１２）の毛状根（染色体数
＝７２．１４４）を得た。以上の６系統（Ｎｏ、７〜Ｎ
ｏ、１２）の半数体由来毛状根（染色体数＝７２．１４
４）について実施例１と同様の方法で培養し、各々につ
いてヒヨスチアミン、スコポラミン生産量を調べた。
１ケ月当りのヒヨスチアミン、スコポラミン生産量と培
養中の含量の最大値を表−４に示す。
養中の含量の最大値を表−４に示す。
〔比較例２〕
実施例３で用いた２培体ベラドンナ（Ａｔｏｒｏｐａｂ
ｅｌｌａｄｏｎｎａ Ｌ、）の異なる部位から採取した
６切片の茎を１％次亜塩素酸ナトリウム溶液で滅菌し、
寒天培地に植え付け６系統の無菌植物を作成した。
ｅｌｌａｄｏｎｎａ Ｌ、）の異なる部位から採取した
６切片の茎を１％次亜塩素酸ナトリウム溶液で滅菌し、
寒天培地に植え付け６系統の無菌植物を作成した。
実施例１と同様の操作で６系統（Ｎα１３〜Ｎｏ、 １
８ ）の無菌植物にアグロバクテリウム・リゾゲネス菌
（１５８３４株）を感染させ、各りの植物体から誘発さ
レタ６ 系統（Ｎｏ、１３〜Ｎｏ、 １８ ）の毛状根
についてヒヨスチアミン、スコポラミン生ｉｔを調べた
。２倍体由来毛状根（Ｎｏ、 １３〜Ｎｏ、 １８ ）
の１ケ月当りのヒヨスチアミン、スコポラミン生産量と
培養中の含量の最大値を表−３、表−４に示す。
８ ）の無菌植物にアグロバクテリウム・リゾゲネス菌
（１５８３４株）を感染させ、各りの植物体から誘発さ
レタ６ 系統（Ｎｏ、１３〜Ｎｏ、 １８ ）の毛状根
についてヒヨスチアミン、スコポラミン生ｉｔを調べた
。２倍体由来毛状根（Ｎｏ、 １３〜Ｎｏ、 １８ ）
の１ケ月当りのヒヨスチアミン、スコポラミン生産量と
培養中の含量の最大値を表−３、表−４に示す。
表−３から明らかなように、半数体由来不定根は２倍体
由来不定根に比べ、各クローン間のヒヨスチアミン、ス
コポラミン生産量のばらつきが大きく、ヒヨスチアミン
高生産株およびスコポラミン高生産株を取得することが
できた。また、表４から明らかなように、倍数体として
得られた半数体由来不定ｊＦｉ （Ｎｏ、１３〜Ｎｏ、
１８ ）中から倍数化前の半数体由来不定根（表−Ｉ
Ｎｏ、１〜Ｎｏ、 ６ ）をさらに上回るヒヨスチア
ミン高生産株およびスコポラミン高生産株を取得するこ
とができた。即ち、２倍体由来不定根に比べ溝かに生産
性の高い株が得られた。
由来不定根に比べ、各クローン間のヒヨスチアミン、ス
コポラミン生産量のばらつきが大きく、ヒヨスチアミン
高生産株およびスコポラミン高生産株を取得することが
できた。また、表４から明らかなように、倍数体として
得られた半数体由来不定ｊＦｉ （Ｎｏ、１３〜Ｎｏ、
１８ ）中から倍数化前の半数体由来不定根（表−Ｉ
Ｎｏ、１〜Ｎｏ、 ６ ）をさらに上回るヒヨスチア
ミン高生産株およびスコポラミン高生産株を取得するこ
とができた。即ち、２倍体由来不定根に比べ溝かに生産
性の高い株が得られた。
（本頁以下余白）
〔発明の効果〕
本発明により、きわめて生産性の高いトロパン系アルカ
ロイドの製造方法が提供される。
ロイドの製造方法が提供される。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、ナス科植物にアグロバクテリウム・リゾゲネス菌の
保持するＲｉプラスミドを導入し、誘発された毛状根を
培養することによるトロパン系アルカロイドの製造方法
において、ナス科植物の半数性組織にアグロバクテリウ
ム・リゾゲネス菌の保持するＲｉプラスミドを導入し、
誘発された半数体由来の毛状根の中からトロパン系アル
カロイド高生産株を選抜し、前記選抜株の毛状根を培地
で培養し、トロパン系アルカロイドを採取することを特
徴とするトロパン系アルカロイドの製造方法。 ２、誘発された半数体由来の毛状根をさらに倍数化処理
することを特徴とする請求項１記載のトロパン系アルカ
ロイドの製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4321189A JPH022382A (ja) | 1988-02-26 | 1989-02-27 | トロパン系アルカロイドの製造方法 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4223188 | 1988-02-26 | ||
| JP63-42231 | 1988-02-26 | ||
| JP4321189A JPH022382A (ja) | 1988-02-26 | 1989-02-27 | トロパン系アルカロイドの製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH022382A true JPH022382A (ja) | 1990-01-08 |
Family
ID=26381881
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4321189A Pending JPH022382A (ja) | 1988-02-26 | 1989-02-27 | トロパン系アルカロイドの製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH022382A (ja) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5640063A (en) * | 1994-11-10 | 1997-06-17 | Nanomotion Ltd. | Window raising device |
| US5932952A (en) * | 1993-12-14 | 1999-08-03 | Nikon Corporation | Vibration motor having a two-phase drive of a longitudinal vibration and a bending vibration mode |
| US6046527A (en) * | 1996-07-05 | 2000-04-04 | Honeybee Robotics, Inc. | Ultrasonic positioner with multiple degrees of freedom of movement |
| US6066911A (en) * | 1995-02-23 | 2000-05-23 | Robert Bosch Gmbh | Ultrasonic driving element |
| US6707232B2 (en) * | 2000-01-31 | 2004-03-16 | Seiko Instruments Inc. | Piezoelectric driving body, ultrasonic motor and electronic apparatus having an ultrasonic motor |
-
1989
- 1989-02-27 JP JP4321189A patent/JPH022382A/ja active Pending
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5932952A (en) * | 1993-12-14 | 1999-08-03 | Nikon Corporation | Vibration motor having a two-phase drive of a longitudinal vibration and a bending vibration mode |
| US5640063A (en) * | 1994-11-10 | 1997-06-17 | Nanomotion Ltd. | Window raising device |
| US6066911A (en) * | 1995-02-23 | 2000-05-23 | Robert Bosch Gmbh | Ultrasonic driving element |
| US6046527A (en) * | 1996-07-05 | 2000-04-04 | Honeybee Robotics, Inc. | Ultrasonic positioner with multiple degrees of freedom of movement |
| US6707232B2 (en) * | 2000-01-31 | 2004-03-16 | Seiko Instruments Inc. | Piezoelectric driving body, ultrasonic motor and electronic apparatus having an ultrasonic motor |
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