JPH02227073A - プトレッシン：ピルビン酸トランスアミナーゼ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野〕 本発明はプトレッシン；ピルビン酸トランスアミナーゼ
に関するものである。 本発明による酵素、プトレッシン：ピルビン酸トランス
アミナーゼは、Ｌ−アラニンの合成、また、微量のプト
レッシン、ピルビン酸、４−アミノブタナール及び１ニ
アラニンの定量等に使用される。さらに、ポリアミンを
分析定量する用途にも使用される０例えば、生体試料中
のポリアミンを分析し、その増減で腫瘍の発生等の診断
に使用出来る。 【従来の技術】 プトレッシン；ピルビン酸トランスアミナーゼは次の反
応を触媒する酵素である。 プトレッシン　＋　ピルビン酸　−子一喝−アミノブタ
ナール　＋　Ｌ−アラニン従来、プトレッシンに作用す
るトランスアミナーゼとしては、ジャーナル・オプ・バ
イオロジカル・ケミストリー（Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈ
ｅｗ、　）、２３９巻、７８３頁（１９６４年）に記載
のエシェリヒア・コリーＢ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　
ｃｏｌｉ　Ｂ）の生産するジアミン：α−ケトグルタル
酸トランスアミナーゼ、アグリ力ルチャラル・バイオロ
ジカル・ケミストリー（Ａｇｒｉｃ。 Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｗ、）、４３巻、１０４３頁（，１
９７９年）に記載のシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏ
ｎａｓ　）属細菌Ｆ−１２６の生産するω−アミノ酸：
ビルピン酸トランスアミナーゼ、さらにジャーナル・オ
プ・バクテリオロン−（Ｊ、　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、）
、　１２８巻、７２２頁（１９７６年）に記載のシュー
ドモナス・アエルギノサ（Ｐｓｅｕｄｏａ。 ｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）由来のγ−アミノ酪酸
：α−ケトグルタル酸トランスアミナーゼが知られてい
る。 ［発明が解決しようとする問題点］ プトレッシン：ピルビン酸トランスアミナーゼは、Ｌ−
アラニンの合広　また、微量のプトレッシン、ピルビン
酸、４−アミノブタナール及びＬ−アラニンの定量等に
使用することが期待される。さらに、ポリアミンを分析
定量する用途にも使用される。しかしそれらの目的に使
用するためには、従来から知られているトランスアミナ
ーゼでは次に示すような欠点を有していた。即ち、ジャ
ーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー　２３９
巻、７８３頁（１９６４年）に記載のエシェリヒア・コ
リーＢ由来のジアミン：α−ケトグルタル酸トランスア
ミナーゼは、スペルミジンやスペルミンのようなポリア
ミンに対して作用しないので、ポリアミン定量の目的に
は不適当である。また、保存安定性の面でも工業的に該
酵素を供給するに充分なものではない。また、アグリ力
ルチャラル・バイオロジカル・ケミストリー　４３巻、
１０４３頁（１９７９年）に記載のシュードモナス属細
菌Ｆ−１２６由来のω−アミノ酸：ビルピン酸トランス
アミナーゼもスペルミジンやスペルミンに対して作用し
ない。 ジャーナル・オブ・バクテリオロジー、１２８巻、７２
２頁（１９７６年）に記載のシュードモナス・アエルギ
ノサ由来のγ−アミノ酪酸；α−ケトグルタル酸トラン
スアミナーゼがプトレッシン、スペルミジンやスペルミ
ンに作用する酵素として知られているが、Ｌ−リジンや
し一オルニチンに対しても作用するために試料中のポリ
アミン量が正確に測定できないという問題点があった。 さらにこれらの酵素ではプトレッシンやピルビン酸に対
するに■値が大きく、微量のプトレッシンやピルビン酸
に対して反応速度が遅いという欠点を有していた。 ［問題点を解決するための手段］ 本発明者らは、かかる従来の欠点を解決すべく鋭意研究
した結果、Ｌ−オルニチン、Ｌ−リジンには作用せず、
プトレッシン、スペルミジン、スペルミンに作用し、か
つプトレッシンに対するに一値が従来の酵素のに１値の
１／　１０程度であり、さらに熱安定性の高いプトレッ
シン：ビルピン酸トランスアミナーゼを微生物中に見出
し本発明を完成するに至った。 即ち、本発明は以下の理化学的性質を有するプトレッシ
ン：ビルピン酸トランスアミナーゼを提供するものであ
る。 ■作用 次式に示す通り、アミノ基供与体であるプトレッシンと
アミノ基受容体であるピルビン酸に作用して、４−アミ
ノブタナールとＬ−アラニンを生成するアミノ基転移反
応、及びその逆反応を触媒する。 ＮＨ（ＣＨ）　ＮＨ＋　　ＣＨ３ＣＯＣ０ＯＨ芒＝−Ｎ
Ｈ（ＣＨ）　ＣＨＤ　　÷　Ｃ）１３Ｃ８（Ｎ）Ｉ２）
ＣＯＯＨ■基質特異性 （１）アミノ基供与体 プトレッシン、カダペリン、スペルミ ジン、スペルミンに対して作用し、Ｌ−リジン、Ｌ−オ
ルニチンに対しては、作用を示さない。 （２）アミノ基受容体 ピルビン酸、グリオキシル酸に対して 作用し、α−ケトグルタル酸に対しては作用しない。 これらのアミノ基供与体及びアミノ基受容体に対する作
用の強さを、それぞれプトレッシン及びピルビン酸に対
する作用を１００とした相対活性値で第１表に示す。 第１表 基質特異性 基質 アミノ基供与体 プトレッシン カダペリン スペルミシン スペルミン Ｌ−リジン Ｌ−オルニチン アミノ基受容体 ピルビン酸 グリオキシル酸 α−ケトグルタル酸 相対活性（％） ２３．８ ３０．７ １１．９ ７２．７ ■至適ｐＨ二ｐＨ９，５〜１０．５　（第１図に示す）
■ｐＨ安定性：３０℃で１時間保存した時、ｐＨ　４．
５〜１３．０において９０％以上の残存活性を有する。 　（第２図に示す） また、本発明のプトレッシン：ピルビン酸トランスアミ
ナーゼが有するその他の理化学的性質は以下の通りであ
る。 １、至適温度：　ｐＨ１０，５，３０分間の反応におい
て、５５−６０℃である。　（第３図に示す）２、温度
安定性：　ｐＨ７，５，１時間の処理条件下において、
７Ｇ’Ｃまでの温度で９０％以上の残存活性を有する。 また、８０℃１ １時間の処理で完全に失活する。 （第４図に示す） ３、分子ｆｆｉ：　１９２，０００±５，０００（バイ
オシルＴＳＫ−２５Ｊ　バイオラド社製によるゲル濾過
法で測定） ４、サブユニットの分子量：　４８，０００±５，００
０＜　５ＯＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動法で測
定） ５、サブユニットの数：４個 ６、Ｋｓ（１３：プトレッシンとピルビン酸を基質とし
て、ｐＨ１０，５，３０℃の条件下で求めたプトレッシ
ンに対するに１値は０．２ ｓＭであり、ピルビン酸に対するに１値は１．０ｍＭで
ある。 ７、補酵素；ビリドキサルリン酸 ８、吸収スペクトル：　２８０ｎ−及び４１６ｎ−に吸
収極大を持つ。（第５図に示す） ９、阻害剤二種々の試薬及び金属イオンの濃度１ｍＭで
の本発明の酵素に対する影響を 第２表に示す。ヒドロキシルアミン、 フェニルヒドラジン、Ｄ−シクロセリ ンなどのビリドキサルリン酸阻害剤 により強く阻害を受ける。また、バ ラクロロメルクリ安息香酸、銀イオ ン、水銀イオンにより強く阻害され る。 第２表 試薬及び金属イオンの影響 試薬及び金属イオン 相対活性（％） 上記理化学的性質を有するプトレヅシン：ビルビン酸ト
ランスアミナーゼと従来から知られている、プトレッシ
ンに作用し得るトランスアミナーゼとを比較した結果、
本発明の酵素は従来のトランスアミナーゼとは性質を異
にする酵素であることが明らかになった。 第３表に本発明によるプトレッシン：ピルビン酸トラン
スアミナーゼと従来から知られているトランスアミナー
ゼの理化学的性質の比較を示す。 第３表における従来のトランスアミナーゼとは、ジャー
ナル・オプ・バイオロジカル・ケミストリー　（Ｊ、　
Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｗ、）、２３９巻、７８３頁（１９
６４年）に記載のエシェリヒア・コリーＢ　（Ｅｓｃｈ
ｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ　Ｂ）由来のジアミン：α−ケ
トグルタル酸トランスアミナーゼ、アグリ力ルチャラル
・バイオロジカル・ケミストリー（Ａｇｒｉｃ、　Ｂｉ
ｏｌ、　Ｃｈｅｗ、　）、４３巻、１０４３頁（１−９
７９年）に記載のシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎ
ａｓ）属細菌Ｆ−１２６由来のω−アミノ＃！：ビルビ
ン酸トランスアミナーゼ、さらにジャーナル・オブ・バ
クテリオロン−（Ｊ、　ＢａＣ１ｅｒｉＯ１，）、１２
８巻、７２２頁（１９７６年）に記載のシュードモナス
キアエルギノサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇ
ｉｎｏｓａ）由来のγ−アミノ酪酸：α−ケトグルタル
酸トランスアミナーゼである。 第３表かられかるように、本発明のプトレッシン：ピル
ビン酸トランスアミナーゼは、従来から知られていたト
ランスアミナーゼとは基質特異性を異にする酵素である
。 このプトレッシン；ピルビン酸トランスアミナーゼはプ
トレッシン及びピルビン酸に対するＫｍ値がそれぞれ０
．２鳳に及び１．０ｍＭと低く、微量のプトレッシン及
びピルビン酸に対しても反応が速く進行する。 また、常温で生育する放線菌ストレプトミセス０アベラ
ニウス（５ｔｒｅｐｔｏｓｙｃｅｓ　ａｖｅｌｌａｎｅ
ｕｓ）から得られたにも関わらず、７０℃１１時間の熱
処理によっても９０％以上の残存活性を有するという高
い耐熱性を持っている。また、ｐＨ４，５〜１３．０の
広いｐｌ範囲で安定であるという優れた性質を持ってい
ることも判明した。本発明のプトレッシン：ピルビン酸
トランスアミナーゼが以上のような基質に対する親和性
、耐熱性、ｐＨ安定性に優れていることは、工業的にあ
るいは臨床的にこの酵素を用いる際に大変有用な性質で
ある。 本発明におけるプトレッシン：ピルビン酸トランスアミ
ナーゼの酵素活性測定方法及び酵素活性の表示方法は以
下の通りである。 ２■にのプトレッシン、２ｍＭピルビン酸及び０．０２
％ローアミノベンズアルデヒドを含む０．ＩＭリン酸緩
衝液（ｐＨ７，５）　１．８■ｌとプトレッシン：ピル
ビン酸トランスアミナーゼを含有する被検体０．２■ｌ
を混合し、３Ｇ’　Ｃで３０分間〜１時間反応させた後
、直ちに４３５ｎ■における吸光度を測定する。１分間
当りの吸光度の増加量（Ａ）から以下の換算式（１）を
使用して被検体１．０■ｌ当りのプトレッシン：ピルビ
ン酸トランスアミナーゼの酵素活性値を計算する。 酵素活性値は、１分間当り１μｍｏｌｅの１−ビロリン
を生成させる酵素量を１ユニツト（μ■ａｌｅ／■ｉｎ
）として表示する。 ＋　　Ａ　　　　　　２．２ 酵素活性値−丁ｒ　　　　ＴＴ　　　　（１）本発明の
プトレッシン：ピルビン酸トランスアミナーゼは、該プ
トレッシン：ピルビン酸トランスアミナーゼの生産能の
ある微生物の培養物から採取することが出来る。その微
生物としては、例えばストレプトミセス属に属する菌株
であり、好ましくはストレプトミセス・アペラニウスト
２０［微工研菌寄第５４４３号］が挙げられる。 生産菌の培養に使用する培地としてはグルコース、糖蜜
、可溶性でんぷん等の炭素源、肉エキス、酵母エキス、
ポリペプトン等の窒素源、及びリン酸第−カリウム、リ
ン酸第二カリウム、塩化ナトリウム、硫酸マグネシウム
等の無機塩類を含有するものであれば特に限定されない
が、これらの成分の他にアセチルプトレッシン、ベンゾ
イルプトレッシン等のアシルポリアミンやプトレッシン
、スペルミジン、ジアミノプロパン、又はカルジン等の
ポリアミンを含有させることが該酵素の生産性を高める
上において有利である。 本発明のプトレッシン；ピルビン酸トランスアミナーゼ
を生産する生産菌を培養する際の培養条件としては、通
気攪拌条件下で培養温度が１５〜４０℃の範囲、好まし
くは２０〜３５℃の範囲で培養する方法が好適である。 培養時のｐｉ条件は、５．０〜９．０の範囲で、好まし
くはｐＨ６，０〜８．０の範囲が適当である。培養時間
は、特に限定されないが酵素の生産性等の経済性を考慮
すると増殖の後期に達する時間から休止状態に入ってか
ら１０時間以内の範囲が適当である。 培養によって得られた培養物から培養液と菌体とを分離
する方法としては、従来から行われている遠心分離法や
濾過等の方法が使用出来るが、遠心分離の方法が好適で
ある。 本発明のプトレッシン：ピルビン酸トランスアミナーゼ
の分離精製は、次の様にして行うことが出来る。 菌体内に蓄積された該酵素を菌体から抽出する方法とし
ては、従来から行われている超音波による菌体破砕、あ
るいはガラス・ビーズと共に回転させるダイノミル細胞
破砕機による菌体破砕又は、リゾチーム等の酵素やトル
エン等の有機溶媒による細胞膜の破壊等の方法が挙げら
れる。これらの中から適当な方法を選択して菌体から酵
素の抽出を行うことにより、酵素を採取することが出来
る。 これらの方法で抽出された粗酵素液からプトレッシン：
ピルビン酸トランスアミナーゼをさらに精製する必要が
ある場合には、通常実施されている一般的な酵素の精製
手段である硫酸アンモニウム沈澱法、イオン交換カラム
クロマトグラフィー法、ゲル濾過法、ヒドロキシアパタ
イト・カラムクロマトグラフィー法、アフィニティーク
ロマトグラフィー法、調製用電気泳動法等の方法を適宜
組み合わせるか、あるいは繰り返すことによって精製を
行うことが出来る。 また、本発明によるプトレッシン：ピルビン酸トランス
アミナーゼの高い耐熱性を利用して、熱処理により夾雑
タンパク黄を変性させた後分離除去する方法も精製の有
効な手段となり得る。 本発明によるプトレッシン：ピルビン酸トランスアミナ
ーゼの完全に純化された酵素の比活性値は、約４．５１
ニツ）／ａｇ−タンｎすを示す、また、　ドデシル硫酸
ナトリウムの存在、非存在下でのポリアクリルアミドゲ
ル電気泳動法において両者共に単一のタンパクバンドが
観測される。 ［効果］ 本発明のプトレッシン；ピルビン酸トランスアミナーゼ
は、プトレッシン及びピルビン酸に対するに量値が低く
、また、スペルミジン、スペルミンに対しても作用し、
さらに広い範囲のｐＨで安定であり、温度安定性にも優
れているという特徴を持つ、これらの性質は工業的に、
また臨床検査薬としてこの酵素を使用するに当たって大
変有利なものである。以下、本発明を実施例によってさ
らに具体的に説明するが、本発明はこの実施例に限定さ
れるものではない。 ［実施例］ ０．５％グルコース、０．４％ポリペプトン、０．５％
魚肉エキス、０．３％アセチルプトレッシン、０．２％
食塩、０．０２％消泡剤から成る培地（ｐＨ７，５）　
　１４１を５１の三角フラスコに入れ、１２０℃で２０
分間オートクレーブした後、２８℃下でこの培地にスト
レプトミセス・アベラニウスト２０［微工研菌寄　第５
４４３号］を植菌した。２８℃で２４時時間上う培養を
行った後この培養液を、予め上記と同様の組成を有する
培地１５０童を仕込み滅菌しておいたジャー・ファーメ
ンタ−に加えて本培養を行った。培養条件は２８℃１撹
拌回転数３０Ｏｒｐｍ、通気１００１７ｓｉｎで、１８
時間培養の後、培養液を遠心分離機にかけて菌体を採取
した。 帰られた国体の約２．１Ｋｇ　（湿菌体重量）を４０％
エタノールを含む１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７，５）
　１２】に懸濁し、その懸濁液をダイノミル細胞破砕機
に連続的に通過させて菌体破砕を行った。その破砕液を
連続遠心分離機を使用して遠心分離し、上清液を得た。 この上清液中のプトレッシン：ビルピン酸トランスアミ
ナーゼの総活性は２２，０００ユニツト、比活性は０．
０７２ユニット／膳ｇ−タンバり　であった。 この上清液を、予め１０ｍＮのリン酸緩衝液（１＞８７
．５）にて平衡化した４λのＤＥＡＥ−セルロース（商
品名工　ワットマン社製）に加え、１時間撹拌した後４
０ｍＭの硫酸アンモニウムを含むｌｈＭリン酸緩衝液（
ｐＨ７，５）　　１５ｍで洗浄した。次いで、０．５Ｍ
の食塩を含む１０ｇ＋Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，５）　
　５Ｎで酵素成分を溶出させた。　［総酵素活性＝　１
５，４００ユニツト、比活性＝　０．５６ユニツト／ｓ
ｇ−タンバり］　　　　この酵素溶液を限外濾過により
脱塩した後、６５℃で３０分間熱処理を行い、生じた沈
澱を遠心分離により除いた。　［総酵素活性＝　　１２
，２００ユニツト、　　比活性＝２．１ユニット／鳳ｇ
−タンハ０り１ こうして得られた酵素液を、予め１０１にリン酸緩衝液
（ｐＨ７，５）で平衡化しておいた１ｊのＤＥＡＥ−セ
ルロースのカラムに通し吸着させた。カラムを同様の緩
衝液２鷹で洗浄し゛た徨、食塩の直線濃度勾配によりプ
トレッシン：ビルピン酸トランスアミナーゼを溶出させ
た。　［総酵素活性＝　８．８２０１ニツト、比活性＝
３．５ユニット／ｗａｇ−タン？１“り］この溶出液を
限外濾過により脱塩した後、硫酸アンモニウムを２０％
となるように添加し、次いで予め２０％の硫酸アンモニ
ウムを含む１０−Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，５）で平衡
化しておいた０、１２のブチルトヨバール６５０に　（
商品名；東ソー社製）のカラムに通し、酵素を吸着させ
た。カラムを同様のリン酸緩衝液で洗浄した後、硫酸ア
ンモウニラムの逆直線濃度勾配によりプトレッシン：ビ
ルピン酸トランスアミナーゼを溶出させた。　［総酵素
活性＝　７，４３０ユニツト、　　比活性＝　４．４１
ニット／−ｇ−タンバり］得られた酵素溶液を限外濾過
により濃縮した後、１．７ｊｌのセファクリルＳ−４０
０（商品名：ファルマシア社製）を充填したカラムに通
しゲル濾過を行い活性画分を集めた。　【総酵素活性＝
　７．３６０１ニツト、比ｉ性＝４．５ユニット／ｍｇ
−タンバり］こうして得られた酵素の純度をドデシル硫
酸ナトリウム存在下、及び非存在下でのポリアクリルア
ミド・ゲル電気泳動によって調べた結果、両者共に一本
のバンドのみが観察され、純粋なプトレッシン：ビルピ
ン酸トランスアミナーゼであることが確認された。 また、本酵素の分子量をバイオシルτ５Ｋ−２５０（商
品名：バイオラド社製）によるゲル濾過法により測定し
たところ、約１９２，０００と推定された。さらに、サ
ブユニットの分子量をドデシル硫酸ナトリウム−ポリア
クリルアミド・ゲル電気泳動法により測定したところ、
約４８，０００と推定された。該分子量及びサブユニッ
トの分子量から、本発明の酵素が４個のサブユニットか
ら構成されるオリゴマー酵素であることがわかる。 次に、こうして得られた精製酵素を２０−Ｍリン酸緩衝
液（ｐＨ７，５）により適当な濃度に希釈して調製した
酵素標品を用いて本酵素の至適−、ｐＨ安定性、至適温
度、温度安定性、及び吸収スペクトルを調べた。 ［至適ｐＨ１ ２ｍＭプトレッシン、２ｓＭピルビン酸を含む０．１Ｍ
酢酸緩衝液（ｐＨ３，２，４，４，５，１）または０．
１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ５，０，６，０，７，０，７，
５）または０．１Ｍ）リス（ヒドロキシメチル）アミノ
メタン−塩酸緩衝液（ｐＨ７，０，８，２，９，２）ま
たは０．１Ｍ炭酸緩衝液（ｐ）１９、（１，９，４，１
（Ｌ、Ｓ、　１１．７）または０．１Ｎ四ホウ酸緩衝液
（ｐＨ１０，５，１１，４，１２，１，１３，０）　１
．８１１に０．２■ｌの酵素標品（０，００２ユニツト
）を添加混合し、３０’Ｃ下で３０分間反応を行った。 この反応溶液１．Ｏ■１＋＝２０％トリクロロ酢酸水溶
液を０．２■ｌ加え、０℃下で２０分間放置した。次い
で、０．０２％０−アミノベンズアルデヒドを含む０．
５Ｍリン酸１１ｆｆｉ液（ｐｔｌ　７．５）　１．０■
ｌを加えて室温で３０分間放置した接、４３５ｎ■に於
ける吸光度を測定し、それぞれの酵素活性値を算出した
。 以上の操作の後、最高の酵素活性値を１００％とした相
対活性（Ｒｅ１ａｔｉｖｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ）を算出
し、グラフ化して第１図を得た。第１図より、本酵素の
至適ｐｌは９．５〜１０．５の範囲にあることがわかる
。 ［ｐｔ１安定性］ ５０１Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ３，５，４，５，５，５，５
，９）または　５０１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ５，６，６
，２，６，７，７，５゜８．３）または５ＱａＭ　ｈリ
ス（ヒドロキシメチル）アミノメタン−塩酸緩衝液（ｐ
ｌ（７，６，８，１，８，９）または５０−Ｍホウ酸緩
衝液（ｐＨ８，２，９，３，９，９）または５０ｍＭ炭
酸緩衝液（Ｐ）Ｉ　９．４．１０．６．１１．７）また
は５０謹に四ホウ酸緩衝液　（ｐＨ１０，８，１２，７
，１３，２，１３，７）０．９５■ｌと酵素標品　０．
０５ｍ１　（５０ユニット）を混合し、３０℃で１時間
放置した後、各溶液０．０２■ｌを２０−Ｈリン酸ｌ！
衝液（ｐＨ７，５）　１．９８ｍ１を混合した。この酵
素溶液０．２■ｌを２ｍＭプトレッシン、２１１Ｍピル
ビン酸及び０．０２％ローアミノベンズアルデヒドを含
有する０、　１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，５）　２．０
■ｌに加えて、３０℃で１時間反応させた隆直ちに４３
５　ｎｍにおける吸光度を測定し、それぞれの酵素活性
値を算出した。 以上の操作の後、 最高の酵素活性値を１００％とした相対活性を算出し、
グラフ化して第２図を得た。第２図から明らかなように
、本酵素はｐ）ｌ　４．５〜１３．０の範囲において９
０％以上の残存活性を有している。 ｒ至適温度〕 ２５−Ｍプトレッシン及び２５１Ｍピルビン酸を含むＱ
、１Ｍ炭酸緩衝液（ｐＨ１０，５）　１．８■ｌと０．
２■ｌの酵素標品（０，０１３ユニット）　を混合し、
　！（１，３９，４４，５０，５６゜６０、６８．７９
℃の各温度下において３０分間反応させた。　各反応溶
液ＩＩｌに２０％トリクロロ酢酸溶液０．２■ｌを加え
、０℃下で２０分間放置した。次いで、０．０２％の０
−アミノベンズアルデヒドを含む０．５Ｍリン酸緩衝液
（ｐＨ７，５）　１．０■ｌを加えて室温で３０分間放
置した徨、　４３５ｎ−における吸光度を測定し、それ
ぞれの酵素活性値を算出した０以上の操作の後、最高の
酵素活性値を１００％とした相対活性を算出し、グラフ
化して第３図奄得た。第３図より、本酵素の至適温度が
５５〜６０″Ｃであることがわかる。 【温度安定性】 ２５１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，５）で希釈した酵素標
品　（０，０３４ユニット／−１）　を４．　３０．　
４０．　５０．　６０．　７０゜７５、８０℃の各温度
で１時間放置した。この酵素溶液０．２■ｌを２ｓＭプ
トレッシン、２鳳にピルビン酸及び０．０２％０−アミ
ノベンズアルデヒドを含有する０、ＩＮリン酸緩衝液（
ｐＨ７，５）　２．０■ｌに加えて、３０℃で１時間反
応させた後直ちに４３５　ｎｍにおける吸光度を測定し
、それぞれの酵素活性値を算出した０以上の操作の後、
最高の酵素活性値を１００％とした相対活性を算出し、
グラフ化して第４図を得た。第４図から明らかなように
、本酵素は７０℃までの温度において９０％以上の残存
活性を有している。 ［吸収スペクトル］ 精製酵素を２０−Ｈリン酸緩衝液（ｐＨ７，５）で希釈
して調製した酵素標品−（ａ）　（１８０μｇ／ｍｌ　
）を用いて、紫外部領域での吸収スペクトルを測定して
第５図−（ａ）を得た。同様にして調製した酵素標品（
ｂ）　（９１０μｓ／ｍｌ）を用いて、可視部領域での
吸収スペクトルを測定して第５図−（ｂ）を得た。第５
図より、本酵素が２８０１１１１．４１６　ｎｓに吸収
極大を有することがわかる。

【図面の簡単な説明】

第１図は、本発明のプトレッシン：ピルビン酸トランス
アミナーゼのｐＨ活性曲線（０；酢酸緩衝液、Δニリン
酸ＩＩ衛液、ロ：トリスー塩酸緩衝液、・：炭酸緩衝液
、ム：四ホウ酸緩衝液）を示し、第２図は同じ＜ｐＨ安
定性（ｏ：酢酸緩衝液、Δニリン酸緩衝液、Ｏニドリス
−塩酸緩衝液、・ニホウ酸緩衝液、ム：炭酸緩衝液、ｌ
：四ホウ酸緩衝液）であり、第３図は温度活性曲線を、
第４図は温度安定性を、第５図は（ａ）が紫外部領域で
の、（ｂ）が可視部領域での吸収スペクトルをそれぞれ
示すものである。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 下記の理化学的性質を有するプトレッシン ：ピルビン酸トランスアミナーゼ ［１］作用：プトレッシンとピルビン酸に作用して、４
   −アミノブタナールとＬ−アラニンを生 成するアミノ基転移反応を触媒する。 ［２］基質特異性： （１）アミノ基供与体としてプトレッシン、カダペリン
   、スペルミジン、スペルミ ンに対して作用する。 （２）アミノ基受容体としてピルビン酸、グリオキシル
   酸に対して作用する。 ［３］至適ｐＨ：ｐＨ９．５〜１０．５ ［４］ｐＨ安定性：３０℃で１時間保存した時、ｐＨ４
   ．５〜１３．０において９０％以上の残存活性を有する
   。