JPH02218957A - 全血試料分析用多層分析要素 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は全血を試料とする血液中の成分の定量に用いる
乾式の一体型多層分析要素に間するもので、詳しくはガ
ラス繊維濾紙層を有する一体型多層分析要素に間するも
のである。

［技術的背景］ 臨床医学上重要な体液中の各種成分９例えば、グルコー
ス、ビリルビン、ＢＵＮ（尿素窒素）、尿酸、コレステ
ロール、各種酵素（クレアチンキナーゼ、ＧＯＴ（グル
タミン酸オキザロ酢酸トランスアミナーゼ）、ＧＰＴ（
グルタミン酸ピルビン酸トランスアミナーゼ）等）の定
量分析には、溶液試薬を用いる湿式法と、乾式化学分析
、すなわち乾燥状態の分析試薬系を含む試験片２分析ス
ライド、分析テープ等の分析要素を用いた分析法とがあ
る。乾式化学分析は湿式法に比し、操作の簡易性と分析
の迅速さの点で優れている。

微量の液体試料で高精度化学分析を迅速に行うことがで
きる分析手段として乾式の一体型多層分析要素が開発さ
れ２例えば、特公昭５３−２１６７７（ｔＪｓ　３９９
２１５８）、特開昭５５−１６４３５６（ＵＳ　４２９
２２７２）、特開昭６Ｏ−２２２７６９（ＥＰ　０１６
２３０２Ａ）で知られている。

一体型多層分析要素（多層分析要素ということがある）
は９例えば、透明支持体、試薬層、光反射層（光遮蔽層
）、展開層から構成されている。透明支持体。

例えばポリマシートの上に、塗布された試薬層には、液
体試料中に含まれる被検成分と反応し、その成分量に応
じた光学濃度に発色又は変色する試薬が含まれる。展開
層は点着された液体試料を一様に、液の量にほぼ比例す
る面積に、広げる（液体計量作用）、このような乾式分
析要素の展開層の表面に液体試料９例えば、血液の微小
量（例、約１ＯＪＩＬ）の一定量を点着すると、展開層
で展間された血液は光反射層を通って試薬層に達し、こ
こで試薬と反応し２発色又は変色する。多層分析要素を
予め定められた一定温度に（インクベーション）予め定
められた時間の問保ち発色反応を進行させた後、又は予
め定め′られた一定温度で発色反応を進行させつつ、透
明支持体側から、特定波長域の光で反射光学濃度を測定
し、検量線に基づいて定量分析を行う。

光反射層は光学濃度測定の際に展開層中の液体試料の色
の影響を排除し白色背景を形成する役割を持つ。

従来、湿式法、乾式化学分析法いずれにおいても。

血液試料としては全血から赤血球を除去した血清又は血
漿を試料として用いることが多かった。しかし血液から
赤血球を分離する操作には多くの労力と時間と装置のコ
ストを伴うので、全血をそのまま分析できることが望ま
しい。

全血を試料とする乾式化学分析では、血漿を血球成分か
ら分析要素中で何らかの手段で分離しなければならない
、特公昭５３−２１６７７（ＵＳ　３９９２１５８）に
記載された乾式分析要素は、血球及び全血中の高分子量
成分を分離するために９ｗ１過層を設けている。しかし
特開昭６０−１１１９６０（ＵＳ　４６３７９７Ｂ）に
記載されているように２分析要素中に設けた濾過層によ
り血球成分を除去する場合には非常に時間がかかり、ま
た血漿中の被分析物Ｖｔ＜被検成分、アナライト）の一
部が濾過層中で失われて２分析が不正確になる恐れがあ
った。

［従来の技術とその欠点］ 一体型多層分析要素の中で全血から血球を分離し、かつ
血漿中の被検成分の試薬層への拡散が速やかに行なわれ
る乾式分析要素が特開昭６ｌ−４９５９（ＥＰ　０１６
６３６５Ａ）、特開昭６２−１３８７５６〜８（ＥＰ　
Ｏ２２６４６５Ａ）等で提案された。その多層分析要素
は、複数の多孔性層が一体に積層されており、各多孔性
層がそれぞれ隣接する面の間で、液体の一様（又は均一
）透過が実質的に妨げられないような微少貫通部を形成
するように部分的に（又は断続的に）配置された接着剤
により実質的に密着して接着され一体化された多層分析
要素で９発色又は変色を生ずる試薬組成物が多孔性層の
いずれか又は多孔性層の下側に設けられた親水性ポリマ
バインダ層に含まれている一体型多層分析要素である。

しかしこれらの多層分析要素においてもなお被検成分の
測定値の再現性が不充分（測定値がバラつく）という問
題点があることが明らかになった。

一方、ガラス繊維濾紙は全血から血球と血漿とにわける
血球／血漿分離機能が高いことも知られている。ガラス
繊維濾紙による血球／血漿分離機能を利用した全血を試
料として用いうる分析要素の例として、特開昭５７−５
３６６１（ＥＰ　Ｏ０４５４７６Ａ）に記載の試薬組成
物を含有浸させた試験紙型の乾式診断片の上にガラスミ
ｍ層を重ねた構造の多層分析試験片、特開昭６１−９６
４６６（ＥＰ　Ｏ１５９７２７Ａ）に記載の眉間層の上
にガラス繊維層をほぼ一様に密接して重ねた構造の多層
分析要素がある。全血試料分析用のこれらの多層分析試
験片や多層分析要素は、ガラス繊維層又はガラス１ｍ維
濾紙を診断片又は展間層の上に密Ｗ載置させただけであ
るので接着強度が小さいため、ガラス繊維層が診断片又
は展開層から剥離し易く、かつ剥離によって検出機能層
への血漿移動量がバラつくためアナライトの測定値の再
現性に乏しいなどの欠点を有している。

［発明が解決しようとする課Ｈ１］ 本発明の目的は、Ｉｌ造（成形）時の加工がしやすく、
またアナライトの測定値の再現性の優れた。ガラス繊維
濾紙層を含む全血試料分析用の一体型多層分析要素を提
供することである。

［課題を解決するための手段］ 従来技術の有する前述の問題点は （１）ガラス１ｍ維濾紙と少なくとも１層の試薬層を含
む検出機能層が部分接着されてなる全血試料分析用多層
分析要素、又は （２）ガラス繊維濾紙、多孔性層、および少なくとも１
層の試薬層を含む検出機能層がこの順に積層され、かつ
、ガラス繊維濾紙と前記多孔性層が部分接着されてなる
全血試料分析用多層分析要素。

により解決された。

［課題を解決するための手段の詳細な説明］多孔性層と
してガラス繊維濾紙層を最上層（支持体から最遠の層）
に１層だけ有するａｍにおいて。

ガラスａ　ｍ　ｍ紙層は、液体試料の展開層としての役
割を有するので、液体計量（ｍｅｔｅｒｉｎｇ）作用を
有することが好ましい、液体計量作用とは、その表面に
点着供給された液体試料をその中に含有している成分を
実質的に偏在させることなしに面の方向に単位面積当り
ほぼ一定量の割合で広げる作用である。液体計量作用は
展開（ｓｐｒｅａｄ　ｉｎｇ）作用又は展延（ｓｐｒｅ
ａｄｉｎｇ）作用ともいわれる。

ガラス繊維濾紙層と多孔性層（前記ガラス繊維濾紙層と
は別のＮ）の２層を有する態様は２部分接着（多孔性接
着）された２層の多孔性層が渾然一体とな７て全血から
血球類を分離する作用、及び血漿の計量作用と血漿を下
側の層へ供給する作用を有する２本発明の好ましいｌ態
様である。

ガラスＩｉＩ維濾紙としてはガラス１ｍ維から抄造法で
製造された濾紙の他にガラス繊維をからませて製造され
たフェルト、ガラス繊維からフライズ織り（ｆｒｉｅｚ
ｅ）［、＋で製造された　フリース（Ｆｒｉｅｓ）を用
いることができる。これらのうちではガラス繊維から抄
造法で製造された濾紙が好ましい。ガラス繊維としてア
ルカリ含有硼珪酸ガラス組Ｌアルカリ不含硼珪酸ガラス
ａｍ、石英ガラス繊維、シリカ繊維９五英繊維等を用い
ることができる。用いられるガラス繊維の太さ（平均直
径）は約０．２μ鴎〜約１Ｏｕ−９好ましくは約０．５
μｍ〜約５μ腸の範囲である。

ガラス繊維濾紙の密度は約０．！ｇ／ｗ’〜約０．５３
／ｍ’。

好ましくは約０．２８／ｍ３〜約０．１ｇ／＋ｗ３の範
囲９ｗ１紙の厚さは約１００μ謬〜約２０００μｍ、好
ましくは約１５０７１ｍ〜約１０００μ属の範囲９ｗ１
紙の空隙率は約８５％〜約９５％。

好ましくは約８７％〜約９３％の範囲である。

多孔性Ｎ（前記ガラスｉ　！Ｉｔ　濾紙層とは別のＮ）
としては繊維質多孔性層、非繊維質多孔性層のいずれを
も用いることができる。繊維質多孔性層を構成する材料
として９ｗ１紙、不織布、＊物布地（例えば平織布地）
９編物布地（例えばトリコットｗＸ物布地）等を用いる
ことができる。これらのうちでは織物布地９編物布地が
好ましい、織物布地９編物布地等は特開昭５７−６６３
５９（ＧＢ　２０８７０７４Ａ）に記載されているよう
なグロー放電処理をすることができる。

あるいは特公昭５９−１１７０９．特公昭５９−２４２
３３に記載のアルカリエツチング（アルカリｍｍ＞処理
した織物布地、縦物布地等も用いることができる。非繊
維質多孔性層としては特公昭６３−２１６７７（ｕｓ　
３９９２１５８）、米国特許１４２１３４１等に記載さ
れたセルロースエステル類９例えばセルロースアセテー
ト、セルロースアセテートブチレート、硝酸セルロース
のプラッシヱ・ポリマの層（メンブランフィルタ）が好
ましい、その他に６−ナイロン、６，６−ナイロン等の
ポリアミド；ポリエチレン、ポリプロピレン等の微多孔
性膜、特開昭６２−２７００６に記載のポリスルホンか
らなる微多孔性膜も用いることができる。その他、特公
昭５３−２１６７７、特開昭５５−９０８５９（ＵＳ　
４２５８００１）等に記載のポリマ微小粒子、ガラス微
小粒子。

珪藻土等が親水性又は非吸水性ポリマで点接着状に結合
された連続空隙をもつ多孔性層も用いることができる。

多孔性層には、特開昭６Ｏ−２２２７７０（ＥＰ　Ｏ１
６２３０１Ａ）に記載の親水性セルロース誘導体；特開
昭６３−２１５３３（ＥＰ　Ｏ２５４２０２Ａ）に記載
のメチルセルロース。

エチルセルロース；ポリビニルアルコール；ポリビニル
ピロリドン；ポリアクリル酸等；特開昭６２−１８２６
５２（ＤＥ　３７１７９１３Ａ）等に記載のアクリルア
ミド、Ｎ−置換又はＮ、Ｎ−ジ置換アクリルアミドのホ
モポリマ又はコポリマ等の親水性高分子を含有すること
ができる。また特公昭５３−２１６７７（ＵＳ　３９９
２１５８）。

特開昭５５−１６４３５６（ｔＪｓ　４２９２２７２）
等に記載のノニルフェノキシポリエトキシエタノール等
のノニオン界面活性剤、特開昭６０−２２２７７０に記
載のＨＬＢ値ｌＯ以上のノニオン界面活性剤、特開昭６
３−２１５３３　（ＥＰｏ　２５４２０２Ａ）に記載の
多価アルコールエステルエチレンオキシド付加物；ポリ
エチレングリコール脂肪酸エステル類；高級アルコール
エチレンオキシド付加物；アルキルフェノールエチレン
オキシド付加物；高級脂肪酸アルカノールアミドのよう
なノニオンＷ面活性剤；特開昭６２−６１０７（Ｃ６２
−６１０７（Ｃｈｅ、ｒａｃｔｓ　１０７．１７１９６
＋ｗ）、特開昭６３−１９６８４９　（ＥＰｏ　２７８
４９６Ａ）等に記載の弗素含有界面活性剤等を含有する
ことができる。これらの親水性ポリマと界面活性剤を併
用することもできる。

検出機能層は少なくともＩＮの試薬層からなるか、ある
いは少なくとも１層の試薬層と検出層とからなる。

試薬層は、被検成分の存在下に、光学的に検出しうる発
色又は色変化、又は紫外線領域の吸収波長の変化を生じ
うる組成物（試薬組成物）を含む親水性ポリマバインダ
からなる水浸透性の層又は試薬組成物を含む多孔性層で
ある。

試薬組成物を含む親水性ポリマバインダからなる水浸透
性の層は試薬組成物の全成分又は一部の成分（この場合
、残余の成分は他の層に含まれる）が親水性ポリマバイ
ンダ（結合剤）中に含有されている実質的に−様な層で
ある。親水性ポリマとして、例えば、ゼラチン及びその
誘導体（例、フタル化ゼラチン）；セルロース誘導体（
例、ヒドロキシエチルセルロース）；アガロース；ポリ
アクリルアミド、ポリメタアクリルアミド、アクリルア
ミド又はメタアクリルアミドと各種ビニルモノマーとの
コポリマ：ポリビニルアルコール；ポリビニルピロリド
ン等を用いることができる。親水性ポリマをバインダと
する試薬層は、特公昭５３−２１６７７　（、ＩＪＳ３
９９２１５８）、特開昭５５−１６４３５６（ｔＪｓ　
４２９２２７２）、特開昭５４−１０１３９８（ＵＳ　
４１３２５２８）、特開昭６１−２９２０６３（Ｃｈｅ
ｍｉｃａｌ　Ａｂｓｔｒａｃｔｓ　１０６．２１０５６
７ｙ）等の明細書に記載の方法に従って、試薬組成物と
親水性ポリマを含む水溶液又は水分散液を支持体又は検
出層等の他の層の上に塗布し乾燥することにより設ける
ことができる。親水性ポリマをバインダとする試薬層の
乾燥時厚さは約３μ謂〜約５０μ画、好ましくは約５μ
厘〜約３０μ閣の範囲、被覆量では約３ｇ／ｒｌ〜約５
０ｇ／ぜ、好ましくは約３μ謂〜約３０３／ｌ＋１”の
範囲である。

試薬組成物を含む多孔性Ｎ（多孔性試薬層）は試薬組成
物を含む前記の多孔性層と同様な多孔性層。

又は特開昭５９−１２０９５７　（ＥＰ　Ｏ１１４４０
３Ａ）等に記載の固体微粒子とポリマをバインダとする
多孔性構造体層に試薬組成物が含有される層である。

試薬組成物を多孔性層に含有させるには、試薬組成物の
適当な溶液または分散液を予め含浸または塗布した多孔
性層を、他の水浸透性層９例えば試薬層の上に特開昭５
５−１６４３５６（ＵＳ　４２９２２７２）に記載のよ
うに水でほぼ一様に湿潤させた吸水層、検出層又は接着
層の上に軽く圧着する方法で接着させる方法がある。あ
るいは、吸水層、検出層又は接着層の上に多孔性層を特
開昭５５−１６４３５６に記載の前記のような方法で接
着させた後、試薬組成物の溶液又は分散液を多孔性層に
塗布する方法もある。

多孔性層への試薬組成物溶液の含浸又は塗布には公知の
方法を利用できる。１ｉ布には例えばデイツプ塗布、ド
クター塗布、ホッパー塗布、カーテン塗布等を適宜選択
して用いることができる。

試薬組成物は、被検成分の存在下に、光学的に検出しう
る物質９例えば色素（染料）を、生成しうる組成物であ
って、被検成分と直接に反応して、あるいは被検成分と
他の試薬（例、酵素を含む試薬組成物。

特開昭６２−１３８７５６　（３３３頁右下欄〜３３４
頁右上欄）（ＥＰ　Ｏ２２６４６５Ａ、５頁４８行〜６
頁４０行）に記載された試薬組成物など）との反応によ
り生成する中間体との反応の結果、光学的に検出しうる
物質（色素又は染料）を生成し得る組成物（指示薬）を
含む、ロイコ色素の酸化によって色素を生成する組成物
（例。

米国特許４０８９７４７等に記載のトリアリールイミダ
ゾールロイコ色素、特開昭５９−１９３３５２（ＥＰ　
０１２２６４１Ａ）等に記載のジアリールイミダゾール
ロイコ色素）；ジアゾニウム塩；酸化されたときに他の
化合物とカップリングにより色素を生成する化合物を含
む組成物（例えば４−７ミノアンチビリン類とフェノー
ル類又はナフトール類）；還元型補酵素と電子伝達剤の
存在下で色素を生成することのできる化合物からなるも
の等を用いることができる。

また、酵素活性を測定する分析要素の場合には２例えば
ρ−二トロフェノールのような有色物質を遊離しうる自
己顕色性基質を、試薬層や多孔性層に含ませることがで
きる。

試薬組成物には必要に応じ、活性化剤、緩衝剤。

硬膜剤、界面活性剤等を含有させることができる。

本発明の分析要素の試薬層に含有させることができる緩
衝剤の例として、炭酸塩、硼酸塩、燐酸塩やｒ８ｉｏｃ
ｈｅｓｉｓｔｒｙＪ５巻、４６７〜４７７頁（１９６６
年）に記載されているＧｏｏｄの緩衝剤などをあげるこ
とができる。

これらの緩衝剤は「蛋白質・酵素の基礎実験法」（堀尾
武−ほか著、南江堂、１９８１年）、ｒＢｉｏｃｈｅｗ
ｉｓｔｒｙ」５巻４６７頁〜４７７頁（１９６６年゛）
等の文献を参考にして選択することができる。

検出層は一般に被検酸の存在下で生成した色素等が拡散
し、透明支持体を通して光学的に検出される層で、ＩＩ
水性ポリマにより構成することができる。検出層は媒染
剤９例えばアニオン性色素に対してカチオン性ポリマを
含ことかできる。吸水層は一般に被検成分の存在下で生
成する色素が実質的にその層の内部に拡散しないような
層をいい。

水により膨潤しやすい親水性ポリマにより構成すること
ができる。検出層を有する多層分析要素において、支持
体と検出層又は試薬層との間に吸水層を設けてもよい、
試薬層と多孔性層との間、吸水層と試薬含有多孔性層と
の間、又は検出層と試薬含有多孔性層との間には光遮蔽
層を設けることができる。光遮蔽層は、検出層、試薬層
等に生じた検出可能な変化（色変化２発色等）を透明支
持体側から反射渕光する際に、血中の赤血球のヘモグロ
ビンの赤色を遮蔽するとともに、光反射層又は背景層と
して機能する層で、二酸化チタン、硫酸バリウム等の光
反射性微粒子を含有する親水性バインダからなる層又は
光反射性微粒子を含有する多孔性層である。

支持体の材料として好ましいものはポリエチレンテレフ
タレートである。セルローストリアセテート等のセルロ
ースエステル類、ポリスチレン、ビスフェノールＡのポ
リカルボネート等も用いることができる。支持体は一般
的には光透過性水不透過性支（透明）のものが用いられ
るが、水透過性又は水浸透性のもの、光透過性（不透明
）のものも用いることができる。支持体は親水性層を強
固に接着させるため通常、下塗層を設けるか、親水化処
理を施す、ガラス繊維濾紙、多孔性層などの層が要素の
構造を維持できる物理的強度を有する場合には支持体は
なくともよい。

本発明の分析要素は種々の構成を有することができる０
例えば、特開昭４９−５３８８８（ＵＳ　３９９２１５
８）。

特開昭５５−１６４３５６（ＵＳ　４２９２２７２）、
特開昭６０−２２２７６９（ＥＰ　Ｏ１６２３０２Ａ）
、特開昭６２−１３８７５６．特開昭鑓−１３８７５７
、特開昭６２−１３８７５８（ＥＰ　Ｏ２２６４６５Ａ
）等に記載の多層分析要素の層構成を参考にできる。な
お本発明の１態様においては、ガラス繊ｉｔ濾紙層に隣
接する多孔性層はない。

実用的には２例えば。

（１）支持体の上に、親水性ポリマバインダ含有試薬層
、ガラス繊維濾紙層をこの順に。

（２）支持体の上に、親水性ポリマバインダ含有試薬層
、多孔性層、ガラス繊維濾紙層をこの順に。

（３）支持体の上に、吸水層、親水性ポリマバインダ含
有試薬層、多孔性層、ガラスｌｌ！維濾紙層をこの順に
。

（４）支持体の上に、検出層、１１水性ポリマバインダ
含有試薬層、多孔性層、ガラス繊維濾紙層をこの順に。

（５）支持体の上に、吸水層、試薬含有多孔性層、ガラ
スａ維濾紙層をこの順に。

（６）支持体の上に、検出層、試薬含有多孔性層、ガラ
ス繊維濾紙層をこの順に。

それぞれ有するものが有用である（支持体は下塗層を含
んでいてもよい）。

次に本発明の多層分析要素の特徴をなすガラス繊！ｍａ
ｔ紙と多孔性層又は検出機能層との部分接着（多孔性接
着）について説明する。

部分接着とは、特開昭６１−４９５９（ＥＰ　０１６６
３６５Ａ）。

特開昭６２−１３８７５６〜８（ＥＰ　０２２６４６５
Ａ）等に記載の２つの隣接する多孔性層同士又は隣接す
る多孔性層と非孔性層との接着の態様であって、ｒ隣接
する２層の界面の間に部分的（又は断続的）に配置され
た接着剤によって実質的に密着され一体化されており、
かつ前記隣接する２面及びその間において液体の一様通
過が実質的に妨げられないように構成されている接着１
である０本発明の多層分析要素においては隣接するガラ
ス繊維濾紙と多孔性層又は隣接するガラス繊維濾紙と検
出機能層との界面が部分接着（多孔性接着）されている
、ガラス繊維濾紙に接着剤をに部分的に配置し、ついで
多孔性層又は検出機能層にガラス繊維濾紙を一様に軽く
圧力を加えながら貼りあわせるのが一般的な部分接着方
法である。逆に多孔性層又は検出機能層に接着剤をに部
分的に配置し、ついで多孔性層又は検出機能層にガラス
繊維濾紙を一様に軽く圧力を加えながら貼りあわせるこ
ともできる。さらに、ガラス繊維濾紙に接着剤をに部分
的に配置し。

多孔性層にする多孔性シート状物にガラス繊Ｉ１１に紙
を一様に軽く圧力を加えながら貼りあわせ、あるいは逆
に多孔性層にする多孔性シート状物に接着剤を部分的に
配置し、ついで多孔性シート状物にガラス繊維濾紙を一
様に軽く圧力を加えながら貼りあわせた後に、検出機能
層に多孔性シート状物を一様に貼りあわせることもでき
る。

接着剤をガラス繊維濾紙、多孔性層、又は検出機能層に
部分的に配置する方法は特開昭６１−４９５９゜特Ｈ昭
６２−１３８７５６　、特開昭６４−２３１６０　（Ｄ
Ｅ　３７２１２３６Ａ　’）等に記載の諸種の方法によ
ることができる。

それらの諸方法のうちで（よ印刷法による方法が好まし
い、印刷法のうちで、接着剤を印刷版（グラビア印刷版
又は凹版が好ましい）ローラーを用いて多孔性層又は検
出機能層に転写し付着させる方法及び隣接する２層を貼
りあわせる方法は９例えば。

日本印刷学会編ｒ印刷工学使覧」（技報堂出版（株）。

１９８３年）８３９〜８５３頁等に記載の公知の装置及
び方法により実施することができる。

用いられる接着剤としては特開昭６２−１３８７５６に
記載の諸種の接着剤、そのほか前記の「印刷工学便覧１
８３９〜８５３頁等に記載の公知の接着剤を用いること
ができる。接着剤としては水溶媒型の接着剤、有機溶剤
型の接着剤、熱接着性（又は感熱性）接着剤を用いるこ
とができる。水溶媒型の接着剤の例として、ｒｉ粉糊等
の水性の糊；デキストリ　ン、カルボキシメチルセルロ
ース、ポリビニルアルコール等の水溶液；酢酸ビニルー
プチルアクリレート共重合体エマルジョンがある。有機
溶剤型の接着剤としては、溶剤の蒸発のおそいものが適
する。

熱接着性（又は感熱性）接着剤は特に有用である。

熱接着性（又は感熱性）のホットメルト型接着剤として
は、「工業材料」２６巻（１１号）４〜５頁等に記載の
ホットメルト型接着剤を用いることができる。

その例として、エチレン−酢酸ビニル共重合体、エチレ
ン−アクリル酸エチル共重合体、エチレン−アクリル酸
共重合体等のエチレン共重合体；低分子量ポリエチレン
やアタクチックポリプロピレンのようなポリオレフィン
類；ナイロン等のポリアミド；ポリエステル系共重合体
；ＳＢＳなどのスチレンブロック共重合体のような熱可
塑性ゴム；スチレンブタジェンゴム、ブチルゴム、ウレ
タンゴム；ロジン、石油樹脂、テルペン樹脂；合成ワッ
クスがある。

実施例１及び比較例１ ［グルコース定量用一体型多層分析要素］厚さ１８０μ
園の無色透明ポリエチレンテレフタレー）　（ＰＥＴ）
シート（支持体）の表面に下記の被覆量になるようにし
て呈色試薬層（乾燥厚さ約２０μｓ＋）を水溶液から塗
布し乾燥して設けた。

呈色試薬層の被覆量（！ぜ当り） 脱イオンゼラチン　　　　　　　　　　　２６８グルコ
ースオキシダーゼ　　　　　　　２０００Ｕペルオキシ
ダーゼ　　　　　　　　　　３３００Ｌ１４−アミノア
ンチピリン　　　　　　　　１６００■ｇ１．７−シヒ
ドロキシナフタレン　　　　　　ｅａｏｓｇノニルフェ
ノキシポリエトキシエタノール（平均ｌＯグリシドール
単位含有）２７０−ｇ呈色試薬層の上に下記の被覆量に
なるようにして光遮蔽層（乾燥厚さ約７μ■）を水分散
液から塗布し乾燥して設けた。得られた多層塗布物を素
子１と称する。

光遮蔽層の被覆量（ｌぜ当り） 脱イオンゼラチン　　　　　　　　　　　２．９ｇルチ
ル型二酸化チタン微粒子　　　　　　！３８ノニルフエ
ノキシボリエトキシエタノール（平均ｌＯオキシエチレ
ン単位含有　　　６００ｍｇ素子１の光遮蔽層の上にガ
ラス繊＆Ｉ濾紙ＧＯ−１００ＲＮ（東洋濾紙（株）製：
厚さ約３２０μ肩、空隙率的９０％）をグラビア印刷法
により部分接着し多層分析要素（要素Ａ）を調製した０
部分接着は、ホットメルト型接着剤ニッタイトＨ−６３
５２−２Ａ（新田ゼラチン（株）製；スチレン−ブタジ
ェン共重合体；軟化点７６℃、１４０℃での粘度４１０
０ｃｐｓ）を１３５℃で溶融させ、第１図に示した格子
パターンのグラビア版（正方形の直交格子；格子を形成
する各線の深さ２０℃画、輻０．２ｍｍ。

浅いＵ字状断面、隣接する線の中心間隔１．０ｍｍ）を
用いて素子ｌの光遮蔽層の上に転写し、直ちに素子ｌの
光遮蔽層をガラス繊維濾紙に圧着ラミネートする工程で
実施した。

比較例として、素子ｌの光遮蔽層の上にガラス繊維濾紙
ＧＢ−１００ＲＮを密着載置した分析要素を調製した（
要素Ｂ）。

要１ｅＡ及びＢに、それぞれ正常人全血（ヘマトクリッ
ト（Ｈｃｔ）値４２％、血漿中グルコース濃度１２２ｍ
ｇ／ｄＬ）３０μＬを点着した。要素は３７℃で６分イ
ンキュベーションし、直ちににポリエチレンテレフタレ
ート支持体側から中心波長５１０止の可視光で要素内の
反射吸光度を測定した０点着と反射吸光度測定はそれぞ
れ３０個の要素を用いて３０回繰り返し行なった・ 要素への発色形は３０個すべてほぼ真円であったのに対
し、要素Ｂの発色形はいびつなものが多くほぼ真円であ
るものは１６個しか認められなかった。

また反射吸光度の標準偏差は、要素Ａが０．００７であ
ったのに対し、要素Ｂは０．０５３と大きな値であった
。

実施例２及び比較例２ ［全ビリルビン定量用一体型多層分析要素］厚さ１８０
μ■の無色透明ＰＥＴシート（支持体）の表面に下記の
被覆量になるようにして第１吸水層（乾燥厚さ約１５μ
ｍ）と第２吸水層（乾燥厚さ約１０．ｇｗ）をこの順に
水溶液から塗布し乾燥して設けた。

第１吸水層の被覆量（Ｉｔ／当り） ポリビニルアリコール（鹸化度８８％。

２０℃における４％水溶液の粘度５ｃｐｃｓ）　　　１
４ｇ４ｇノニルフェノキシポリグリシド ール均ｌＯグリシドール単位含有）３５０■ｇ第２吸水
層の被覆量（ｌｖｎ’当り） ポリビニルアリコール（鹸化度９９％。

２０℃における４％水溶液の粘度３０ｃｐｃｓ）　　　
９．４ｇノニルフエノキシボリグリシドール （平均ｌＯグリシドール単位含有）３００−ｇ第２吸水
層を一様に水で湿潤させておき、その上にノニルフェノ
キシポリグリシドール（平均ＩＯグリシドール単位含有
）水溶液で親水化処理し乾燥させた　１００番手双糸錦
糸製のブロード織物布地を一様に軽く圧力をかけながら
ラミネーションし乾燥させて多孔性試薬層のマトリック
スを形成した。ついで織物布地の上から下記組成の第１
試薬組成物塗布液を１−当り２００８の割合で塗布し、
含浸させ乾燥させた。さらに織物布地の上から下記組成
の第２試薬組成物塗布液を１１２当り２００ｇの割合で
塗布し含浸させ乾燥させて全ビリルビン定量用多層分析
素子（素子２）を調製した。

第１試薬組成物塗布液の組成 ？−（２，３−ジヒドロキシプロピル）テオフィリン［
ＣＡ　Ｒｅｇｉｓｔｒｙ　Ｎａ　４７９−１８−５］　
　　　　　　１５０ｇスルホサリチル酸　　　　　　　
　　　　　３０ｇヒドロキシピロピルメタクリレート− Ｎ−（α−スルホメチル−α−メチルエチル）−アクリ
ルアミド（６：４）コポリマ １．５％水溶液　　　　　　　　　　　　１０００ｇ２
．４−ジクロロベンゼンジアゾニウム舎スルホサリチレ
ート　　　　　　　　　　　１．９ｇ第２試薬絹成物塗
布液 二酸化チタン微粒子　　　　　　　　　　　５５ｇ？−
（２，３−ジヒドロキシプロピル）テオフィリン５０ｇ ノニルフェノキシポリグリシドール （平均１０グリシド一ル単位含有）５０％水溶液０ｇ 水を加えて　　　　　　　　　１０００履Ｌ　にする素
子２の織物布地の上にガラス繊維濾紙ＧＡ−５５（東洋
濾紙（株）１１；厚さ約２２０μ■、空隙率約９０％〉
をグラビア印刷法により部分接着し一体型多層分析要素
（要素Ｃ）を調製した０部分接着は、ホットメルト型接
着剤ニッタイ）　ＨＭ−２００９（新田ゼラチン（株）
製；エチレン−酢酸ビニル共重合体；軟化点７３℃。

１４０℃での粘度２０００ｃｐｓ）を１３５℃で溶融さ
せ、第２図に示したパターンのグラビア版（正方形の各
頂点に真円状ドツトを配置したパターン；各ドツトの深
さ３０μ■、直径０．３ｍｍ、浅いＵ字状断面、縦横の
ドツト中心間隔（ピッチ）０．６＋ｗ厘）を用いて素子
２の織物布地の上に転写し、直ちに素子２の織物布地を
ガラス繊維濾紙に圧着ラミネートする工程で実施した。

比較例として、素子２の織物布地の上にガラス繊維濾紙
ＧＡ−５５を密着載置した分析要素を調製した（要素Ｄ
）。

要素Ｃ及びＤに、それぞれ正常人全血（Ｈｃｔ値４２％
、血漿中ビリルビン濃度９．８■ｇ／ｄＬ）２０μＬを
点着した。要素を３７℃で６分インキュベーションし、
直ちにポリエチレンテレフタレート支持体側から中心波
長５４０ｎｍの可視光で要素内の反射吸光度を測定した
６点着と反射吸光度測定はそれぞれ３０個の要素を用い
て３０回繰り返し行なった。

要素Ｃの発色形は３０個すべてほぼ真円であったのに対
し、要素りの発色形はいびつなものが多くほぼ真円であ
るものは２１個しか認められなかった。

また反射吸光度の標準偏差は、要素Ｃが０．００３であ
ったのに対し、要素りは０．０３８と大きな値であった
。

実施例３及び比較例３ ［全コレステロール定量用一体型多層分析要素］厚さ１
８０μ■の無色透明ＰＥＴシート（支持体）の表面にロ
イコ色素の被覆量が４１５ａ＋ｇ／ｖ／になるようにし
て発色試薬層（乾燥厚さ約２０μｍ）を水分散液から塗
布し乾燥して設けた。

発色試薬層塗布液の組成 ［ロイコ色素油状有機溶媒液］ ２−（４−ヒドロキシ−３，５−ジメトキシフェニル）
−４−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］−５−フェ
ネチルイミダゾール（ロイコ色素）◆酢酸塩　　　２４
７０ｍｇ上記と同じロイコ色素・塩酸塩　　　　　３５
０１ＩｇＮ、Ｎ−ジエチルラウリルアミド　　　　　　
４３ｇ［ゼラチン水溶液］ 脱イオンゼラチン　　　　　　　　　　１３０８ビス［
（ビニルスルホニルメチルカルボニル）−アミノコメタ
ン　　　　　　　　　　　　１３００■ｇ水　　　　’
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　８
２３ｇ上記ゼラチン水溶液を乳化器（特殊機械工業社１
１７にオートホモミキサー）で約５７００回転１分で撹
拌しながら上記ロイコ色素油状有機溶媒液を添加し。

約３０分間撹拌を続けて分散乳化液（発色試薬組成物水
分散液）を調製した。

ついで発色試薬層の表面を一様に水で湿潤させておき、
その上に公称孔径（有効孔径又は最小孔径の平均値）１
．２μ■、厚さ約１４０μ票、空隙率約８０％のセルロ
ースアセテートメンブランフィルタを一様に軽く圧力を
かけながらラミネーションし乾燥させて発色試薬層とメ
ンブランフィルタを密着一体止させた。

ついでメンブランフィルタの上から下記組成のコレステ
ロール測定試薬組成物塗布液を１Ｔ１１″当り１１０ｇ
の割合で塗布し含浸させ乾燥させて全コレステロール定
量用多層分析素子（素子３）を調製した。

コレステロール測定試薬組成物塗布液の組成コレステロ
ールエステラーゼ　　　　　　７０ｋｔＪコレステロー
ルオキシダーゼ　　　　　　３３ｋＵリボプロテインリ
パーゼ　　　　　　　　４８ｋＵペルオキシダーゼ　　
　　　　　　　　７５０ｋＵフエロシアン化カリウム　
　　　　　　４４８０ｍｇ４８０ｍｇノニルフェノキシ
ポリエトキシエタノールルデヒドとの縮合物　　　　　
３６８０ｍｇ水を加えて　　　　　　全量を１０００■
Ｌにするつぎに素子３のメンブランフィルタの上にガラ
ス繊維濾紙ＧＣ−５０（東洋濾紙（株）！！；厚さ約２
００μ町空隙率約９０％）をグラビア印刷法により部分
接着して一体型多層分析要素（要素Ｅ）を調製した０部
分接着は、ホットメルト型接着剤ニッタイトＨ６３５２
−２Ａ（新田ゼラチン（株）製；スチレン−ブタジェン
共重合体；軟化点７６℃、１４０℃での粘度４１００ｃ
ｐｓ）を１３５℃で溶融させ、第３図に示したパターン
のグラビア版（正方形の各頂点に真円状ドツトを配置し
たパターン；各ドツトの深さ５０μ■、直径０．４ｍｍ
、浅いＵ字状断面、縦横のドツト中心間隔（ピッチ）０
．８■）を用いて素子３のメンブランフィルタに転写し
。

直ちに素子３のメンブランフィルタをガラス繊維濾紙に
圧着ラミネートする工程で実施した。

比較例として、素子３のメンブランフィルタの上にガラ
ス繊維濾紙ＧＣ−５０を密着載置した分析要素（要素Ｆ
）を調製した。

要素Ｅ及びＦに、それぞれ正常人全血（）Ｉｃｔ値４８
％、血漿中総コレステロール濃度１５０ｍｇ／ｄＬ）２
０μＬを点着した。ついで要素を３７℃で６分インクベ
ーションし、直ちに透明ポリエチレンテレフタレート支
持体側から中心波長６４０ｎｍの可視光で要素内の反射
吸光度を測定した０点着と反射吸光度測定はそれぞれ３
０個の要素を用いて３０回繰り返し行なった。

要素Ｅの発色形は３０個すべてほぼ真円であったのに対
し、要素Ｆの発色形はいびつなものが多くほぼ真円であ
るものは２０個しか認められなかった。

また反射吸光度の標準偏差は、要素Ｅが０．０１１であ
ったのに対し、要素Ｆは０．２０４と大きな値であった
。

【図面の簡単な説明】

第１〜３図は実施例１〜３の一体型多層分析要素におい
てガラス繊維濾紙を部分接着（多孔性接着）する際にグ
ラビア印刷法で接着剤を配置するために用いたグラビア
印刷版のパターンを示す図である。 第１図は実施例１において用いられたグラビア印刷版の
格子パターン（正方形の直交格子；格子を形成する各線
の深さ２０７１ａ＋、幅０．２ｍｍ、浅いＵ字状断面、
隣接する線の中心間隔１．０ａｍ）である。 第２図は実施例２において用いられたグラビア印刷版の
ドツトパターン（正方形の各頂点に真円状ドツトを配置
したパターン；各ドツトの深さ蜀μ■、直径０．３０Ｉ
＋１．浅いＵ字状断面、縦横のドツト中心間隔（ピッチ
）０．６ｍｍ）である。 第３図は実施例３において用いられたグラビア印刷版の
ドツトパターン（正方形の各頂点に真円状ドツトを配置
したパターン；各ドツトの深さ９μ閣、直径０．４ａ＋
ｍ、浅いＵ字状断面、縦横のドツト中心間隔（ピッチ）
０．８ｍｍ）である。 第１図

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）ガラス繊維濾紙と少なくとも１層の試薬層を含む
   検出機能層が部分接着されてなる全血試料分析用多層分
   析要素。
2. （２）ガラス繊維濾紙、多孔性層、および少なくとも１
   層の試薬層を含む検出機能層がこの順に積層され、かつ
   、ガラス繊維濾紙と前記多孔性層が部分接着されてなる
   全血試料分析用多層分析要素。