JPH02184635A

JPH02184635A - 免疫原性組成物および医薬組成物

Info

Publication number: JPH02184635A
Application number: JP31663488A
Authority: JP
Inventors: J Manino Raphael; ラフアエル　ジェー．マニノ; Goodman-Snickov Gale; ゲイル　グッドマン−スニツコフ
Original assignee: Albany Medical College
Current assignee: Albany Medical College
Priority date: 1988-12-16
Filing date: 1988-12-16
Publication date: 1990-07-19
Anticipated expiration: 2010-05-31
Also published as: JPH0749376B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】〔産業上の利用分野〕本発明は選択的抗体生産を誘導する能力のある免疫原性
複合物に関する。特に、本発明は合成及び天然のペプチ
ドの両者に対して選択的に抗体生産を誘導する能力のあ
る免疫原性複合物に関し、前記ペプチドは異種タンパク
質担体（たとえばＢＳＡ又はＫＬＨ）と結合させる必要
はなく、又追加のアジュバントと共に注射する必要もな
い。

父、本発明は免疫原性複合物を使用する医薬組成物とそ
の医薬組成物を使用して選択的に抗体生産を誘導する方
法に関する。

〔従来の技術〕

有効なワクチンの開発は病気の抑制と予防に棒めて重要
である。合成ペプチドを免疫原として使用することは安
全で有効なワクチンを製造するための一つの有望な人口
である（ラーナー、アール・ニー（Ｌｅｒｎｅｒ、Ｒ，
＾、）、グリーン、エフ（Ｇｒｅｅｎ。

Ｎ、）、アレキサンダー、ｓｙチ（＾１ａｘａｎｄｅｒ
。

■、）、リュー、エフ・テ（−（Ｌｉｕ、Ｆ、Ｔ、）　
、ストクリフ、リュー・ジー（５ｕｔｃｌｉｆｆｅ、Ｆ
、Ｇ、）及びシニック、ティー・エム（５ｈｉｎｎｆｃ
ｋ、Ｔ、Ｍ、）、７’。

、ＮａＬＩ　、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、ＵＳＡ）（１９８１
年）７８巻、３４０３〜３４０７ベージ；バートネーガ
ー、ビー・ケー（Ｂｈａｔｎａｇｅｒ、Ｐ、に、）、バ
バス、イー（Ｐａｐａｓ　。

Ｅ、）、ブルム、工ｙチ・イー（８１ｕｍ、Ｈ，ｌｉ、
）、ミリチ、デイ−・アール（Ｍｉｌｉｃｈ、Ｄ、Ｒ，
）、ニテツキ、デイ−（Ｎ１Ｌｅｃｋｉ、Ｄ、）　、カ
レルス、エム・リュー（にａｒｅｌｓ、Ｍ、Ｊ、）及び
ピアス、ジー・エフ（ｖｙａｓ、Ｇ、Ｎ、）、プロシー
プ　ングス・オブ・シ　　ル・　カブミー・オブ・　　
エンス・　ブ・ニーニスニー（１９８２年）７９巻、４
４００〜４４０４ベージ；ニューラス、ニー・アール（
ＮａｕｒａＬｈ、＾」、）、ゲント、ニス・ビー・エッ
チ（にｅｎｔ、Ｓ、Ｂ、Ｉｌ、）及びストリック、エフ
（Ｓｔｒｉｃｋ。

Ｎ、）、ぐ゛　−・　プ・ゼール・ピロロ’）　−（Ｊ
、Ｇｅｎ、Ｖｅｒｏｌ、）　　（１９８４年）６５巻、
１００９〜１０１４ベージニドリースマン、ジー・アー
ル（Ｄｒｅｅｓｍａｎ、Ｇ、Ｒ，）、スパロー、リュー
・テ４−　（Ｓｐａｒｒｏｗ、Ｊ、Ｔ、）　、フレンチ
ツク、ピー・ジｓ　−（Ｆｒｅｎｃｈｉｃｋ、Ｐ、Ｊ、
）及びタネデイ−。７−ル・シー（Ｋｅｎｎｅｄｙ、Ｒ
，Ｃ，）　、アバパンシス・オブ・エ　スベ１メンタル
・メゾ　シン・アンド・バイオロジー（Ａｄｖ、ｈｘｐ
、Ｍｅｄ、Ｂｉｏｌ、）　（１９８５年）１８５巻、１
２９〜１３７ベージ；サナバラ、ワイ・エム（Ｔｈａｎ
ａｖａｌａ、Ｙ、Ｍ、）　、ブラウン、ニス・イー（Ｂ
ｒｏｗｎ、Ｓ、Ｅ、）　、ホワード、シー・アール（Ｈ
ｏｗａｒｄ、Ｃ，Ｒ，）、ロイド、アイ・エム（Ｉｌｏ
ｉｔｔ、Ｉ。

−８）及びスチュワード、エム・タブリュー（Ｓｔｅｗ
ａｒｄ、Ｍ、Ｗ、）　、ジ　−　ル・　ブ・エ　スベ１
メンタル・メゾ　シン（Ｊ、Ｅｘｐ、Ｍｅｄ、）　　（
１９８６年）１６４巻、２２７〜２３６ベージ；ミュラ
ー、ジー・エム（Ｍｕｌｌｅｒ、Ｇ、Ｍ、）、シャピラ
、エム（Ｓｈａｐｅｒａ、Ｍ、）及びアーノン、アール
（＾ｒｎｏｎ、Ｒ，）（１９８２年）７９＠、５６９〜
５７３ページ；ケネディー、アール・シー、ヘンケル、
アール・デ４−　（Ｈｅｎｋｅｌ、Ｒ，Ｄ、）、ボーレ
ッティ、デイ−（Ｐａｕｌｅｔｔｉ、Ｄ、）　、アラン
、リュー・ニス（ＡＩｌａｎ。

Ｊ、Ｓ、）　、　　シー、テ４−−　ｚｙチ（Ｌｅｅ、
Ｔ、１１．）、エッセクス、エム（Ｅｓ５ｅｘ、Ｍ、）
及びドリースマン、ジー・アール、”ｔＡ−王’Ｊ　２
　（５ｃｉｅｎｃｅ）　（１９８６年）２３１巻、１５
５６〜１５５９ベージ；ピットル、リュー・エル（Ｂｉ
ｔｔｌｅ、Ｊ、Ｌ、）、ホーテン、アール・ニー（Ｈｏ
ｕｇｈｔｅｎ、Ｒ，Ａ、）、アレキサンダー、エッチ、
シニック、ティー・エム、ストクリフ、リュー・ジー、
ラーナー、アール・エーローランズ、デイ−・ジｚ　−
（Ｒｏｗｌａｎｄｓ、Ｄ、Ｊ、）及びブラウン、エフ（
Ｂｒｏｗｎ、Ｆ、）　、Ｌ二±工：（ＮａＬｕｒｅ）　
　（１９８２年）２９８巻、３０〜３３ベージ；及びジ
マルチ、アール（Ｄｉ　Ｍａｒｃｈｉ　、Ｒ，）、ブル
ーフ、ジー（Ｂｒｏｏｋｅ、Ｇ、）、アール、シー（Ｇ
ａ１ｅ、（：、）、クラックネル、ブ４　（ｃｒａｃｋ
ｎｅｌｌ、Ｖ、）、ゾール、ティー（Ｄｏｅｌ、Ｔ、）
及びそワト、エフ（Ｍｏｗａｔ、Ｎ、）　、　ｉ仁シツ
（１９８６年）２３２巻、６３９〜６４１ページ）。

（発明か解決しようとする計則）しかしなから、合成ペプチドワクチンは必要とする担体
とアジュバントのいずれもがしばしば望ましくない副作
用を持つことよりその開発が妨げられた（ラーナー、ア
ール・ニー、グリーン、エフ（Ｇｒｅｅｎ、Ｎ、）　、
アレキサンダー、エッチ、リュー、エフ・ティー、スト
クリフ、リュー・ジー及びシニック、ティー・エム、プ
ロシープイア８巻、３４０３〜３４０７ベージ；バート
ネーガー、ピー・ケー、ババス、イー、ブルム、エッチ
・イー、ミリチ、デイ−・アール、ニテッキ、デイ−、
カレルス、エム・リュー及びピアス、ジー・エフ、プロ
シープ　ングス・　ブ・　ショル・アカデミ−・オプ・
　イエンス・　ブ・ニーニスニー（１９８２年）７９巻
、４４００〜４４０４ベージ；ニューラス、ニー・アー
ル、ケント、ニス・ビー・エッチ及びストリック、エッ
チ、ジ　−　ル・オブ・ゼネール・ピロロジー（１９８
４年）６５巻、１００９〜１０１４ベージ：及びムラ−
、ジー・エム、シャビラ、エム及びアーノン、アール、
プロシープ　ング　　　ブショ　ル・　力　）−・　ブ
・　　エンス・ブ・ユーエ　ニー（１９８２年）７９巻
、５６９〜５７３ページ）。その上、ペプチド−タンパ
ク質担体複合体による免疫は、通常外来担体に対するＴ
細胞の感作を引き起こす。従って、動物Ｔ細胞は中和エ
ピトープの自然担体に感作されないので、自然感染は二
次免疫応答を作らない。

従って、ペプチドが異質タンパク質担体への結合を要せ
ず、追加のアジュバントと共に注射することを要しない
有効な免疫原に対する必要性がなお存在する。

（’！題を解決するための手段〕本発明の第一の目的は自然感染又は現在利用可能な方法
（不活化又は減弱された作用物、もしくは感染因子の外
部表面の巨大分子又はそのサブユニットを含む。）によ
るワクチン接種の有効性を模倣し、一方現在利用可能な
製剤の望ましくない副作用を何等示さない免疫原性複合
物と医薬組成物を提供するととである。

本発明の第二の目的はＴ細胞が異質担体に特異的に感作
し、その結果前記Ｔ細胞はその後の自然暴露の間応答し
ないという問題を回避する免疫原性複合物と医薬組成物
を提供することである。

本発明の第三の目的は自然感染の間迅速に反応し、その
結果第二次免疫応答を起こす同質補助Ｔ細胞を感作する
方法を提供することである。

これら及びその他の目的は選択的に抗体生産を誘導又は
増強する能力のある免疫原性複合物を提供することによ
り達成される。

第一の具体化において、本発明は脂質に共役的に結合し
た非免疫原性両親媒性ペプチドから成るペプチド−脂質
複合体から成る非免疫原性ペプチドに対して選択的に抗
体生産を誘導し又は増強する能力のある免疫原性複合物
を提供する。好ましい具体化においては、ペプチド−脂
質複合体は１つ又は複数の脂質と１つ又は複数のステロ
ールとの混合物と会合している。

第二の具体化において、本発明は脂質に共役的に結合し
た混成ペプチドから成り、前記混成ペプチドは（ａ）非
免疫原性親水性ペプチド、（ｂ）非免疫原性中性ペプチ
ド、（ｃ）非免疫原性両親媒性ペプチド、及び（ｄ）前
記ペプチド（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）の２つ又はそれ以
上の任意の組合せから成る混成ペプチドから成る群より
選ばれる１つのペプチドに共役的に結合した非免疫原性
両親媒性ペプチドから成るペプチド−脂質複合体から成
る１つ又は複数の非免疫原性ペプチドに対して選択的に
抗体生産を誘導し又は増強する能力のある免疫原性複合
物を提供する。好ましい具体化においては、ペプチド−
脂質複合体は１つ又は複数の脂質と１つ又は複数のステ
ロールとの混合物と会合している。

第三の具体化において、本発明は第一のペプチド−脂質複合体（前記第一のベブ。

チドー詣質複合体は（１）脂質に共役的に結合した非免
疫原性両親媒性ペプチド、及び＜ｚ＞ｍ貿に共役的に結
合した混成ペプチド（前記混成ペプチドは（ａ）非免疫
原性親水性ペプチド、（ｂ）非免疫原性中性ペプチド、
（ｃ）非免疫原性両親媒性ペプチド、及び（ｄ）前記ペ
プチド（２）（ａ）、（２）（ｂ）及び（２）（ｃ）の
２つ又はそれ以上の任意の組合せから成る混成ペプチド
から成る群より選ばれるペプチドに共役的に結合した非
免疫原性親媒性ペプチドから成る。）から成る群より選
ばれる１員から成る。）と、１つ又は複数の脂質と１つ又は複数のステロールとの混
合物と会合している１つ又は複数の追加のペプチド−脂
質複合体く前記ペプチド−脂質複合体は（１）脂質に共
役的に結合した非免疫原性親水性ペプチド、（２）脂質
に共役的に結合した非免疫原性中性ペプチド、（３）脂
質に共役的に結合した非免疫原性両親媒性ペプチド、及
び（４）脂質に共役的に結合した混成ペプチド（前記混
成ペプチドは（ａ）非免疫原性親水性ペプチド、（ｂ）
非免疫原性中性ペプチド、（ｃ）非免疫原性両親媒性ペ
プチド、及び（ｄ）前記ペプチド（４）（ａ）（４）（
ｂ）及び（４）（ｃ）の２つ又はそれ以上の任意の組合
せから成る混成ペプチドから成る群より選ばれるペプチ
ドに共役的に結合した非免疫原性両親媒性、親水性又は
中性ペプチドから成る。）から成る群より選ばれるｌ員
又は複数質から成る。）とから成る１つ又は複数の非免
疫原性ペプチドに対して選択的に抗体生産を誘導し又は
増強する能力のある免疫原性複合物を提供する。

又１本発明は１つ又は複数の前記免疫原組成物と薬学的
に受容し得る担体、希釈剤又は賦形剤の混合物とから成
る選択的に抗体生産を誘導し又は増強する医薬組成物を
提供する。

別の具体化においては、本発明は免疫応答が外来物によ
る感染防御の正常手段である宿主に前記医薬組成物の薬
学的有効量を投与することから成る選択的に抗体生産を
誘導し又は増強する方法を提供する。

ペプチド配列の記載のためにここで使用するアルファベ
ット命名法は、下表に示す標準のアミノ酸アルファベッ
トである。

ア　ミ　ノ　酸　　　工学略号　　−字略号この発明の
目的から、次の用語は下記のように定義される。

ペプチドーーつのカルボン酸基と次のアミノ酸基の間の
ペプチド結合により頭から尾へ重合した一連のアミノ酸
。ペプチドは天然に存在するか、組換えにより生産する
か、合成により生産するか、もしくはこのようにして得
られる巨大ポリペプチド又はタンパク質の化学的又は酵
素的分裂により生産するか、もしくはより小さい単位か
ら化学的又は酵素的なペプチド構築により生産すること
ができ、又ペプチドは糖のようなアミノ酸以外の部分を
持ち、又は種々な化学変換、たとえばリン酸化、メチル
化、硫酸化又はアセチル化を受けることができ、これら
の変換は微生物における生産、又は化学的又は酵素的合
成技術を使用する背定的変換の結果起こる。

非免疫原性ペプチド：追加の物質と結合するか、又は混
合することなく動物に投与した場合、該動物に免疫応答
を刺激しない上で定義したようなペプチド（あるペプチ
ドは一つの動物には免疫原性であるが、異なるアロタイ
プの動物には非免疫原性である。）。更に、ここで使用
するように、用語［非免疫原性ペプチド」は免疫原性で
あるが、その免疫原性は本発明による「免疫原性複合物
」の形成により増強されるペプチドを含むことができる
。

両親媒性ペプチド：明瞭な疎水性及び親水性領域を含む
上で定義したようなペプチド。両親媒性ペプチドの例は
（１）主として疎水性アミノ酸が隣接する範囲とそれに
続く主として親水性アミノ酸が隣接する範囲とを含むペ
プチド、又は（２）一方の側は主として疎水性アミノ酸
から成り、他の側は主として親水性アミノ酸から成るα
−へソックス構造を溶液中でとることができるペプチド
である。ペプチドの第２の種類の両親媒性はα−へソッ
クスの周期性を持つといえる。

領域の疎水性又は親木性はアミノ酸側鎖残基の疎水的性
質又は親木的性質を考慮するプログラムを用いるコンピ
ュータ分析により明確にされる。

疎水性又は親水性範囲の存在の測定に適用できるような
プログラムの例は、ホップ及びウツズ（ホップ、ティー
・ビー（Ｈｏｐｐ、Ｔ、Ｐ、）及びウッズ、ケー・アー
ル（宵ｏｏｄｓ、Ｘ、Ｒ，）　、　２　ｏ　ｓ仁二！Δ
−７８巻、３８２４〜３８２７ページ、並びにホップ、
ティー・ビー、及びウッズ、ケー・アール、モレ　ニー
−・　　ムノロジー（Ｍｏ１．　Ｉｍａ＋ｕｎｏ１．）
（１９８３年）２０巻、４８３〜４８９ページ）又はカ
イト及びトウーリットル（カイト、ジエー（にｙｔｅ、
Ｊ、）及びトウーリットル、アール・エフ（Ｄｏｏｌｉ
Ｌｔｌｅ、Ｒ，Ｆ、）　、ジャーナル・オフ・モレュー
ー・バイオロジー（Ｊ、Ｍｏ１．Ｂｉｏｌ、）　（１９
８２年）１５７巻、１０５〜１３１ページ）によって開
発されたそれであるが、他の類似のプログラムも使用す
ることができる。

溶液中でα−ヘリックス構造を形成する場合のペプチド
の両親媒的性質を測定することができるコンピュータ・
プログラムも開発された。この場合、明白な親木性領域
はα−ヘリックス・ペプチドの一方の側に関係してあり
、一方明白な疎水性領域はペプチドの他の側に関係する
。そのようなプログラムの例はデリシ（Ｄｅｌｊｓｉ）
及びバーシフスキー（Ｂｅｒｚｏｆｓｋｙ）　（プロシ
ーデインゲス・オフシ　　ル・アカデミ−・　ブ・　　
エンス・オフ・ニーニスニー（１９８５年）８２巻、７
０４８ページ）により提供されている。

又、この発明の目的のため、疎水性、親水性又は中性領
域は一次配列で又は上述のα−ヘリックス周期性との関
連でコンピュータ分析により明確される。

両親媒性の１つの物理的試験はリン脂質膜の完全性を混
乱させる能力の測定である。この性質は下で説明するよ
うに、予め形成されたりボゾーム内部水性領域からカル
ボキシフルオレセインの放出を促進するペプチドの能力
を測定することにより試験することができる。しかしな
から、すべての両親媒性ペプチドが必ずリン脂質膜の完
全性を混乱させるのではなく、従ってこの発明の目的の
ためには、リン脂質膜の混乱は両親媒性ペプチドの定義
の絶対必要条件ではない。

疎水性ペプチド：上述のような隣接範囲についてのホッ
プ・アンド・ウッズ型又はカイト・アンド・トウーリッ
トル型分析、もしくはα−ヘリックス周期性についての
デリシ・アンド・バーシフスキー型分析で疎水性である
上で定義したようなペプチド。

親水性ペプチド；上述のような隣接範囲についてのホッ
プ・アンド・ウッズ型又はカイト・アンド・ドユーリッ
トル型分析、もしくはα−ヘリックス周期性についての
デリシ・アンド・パーシフスキー形分析で親水性である
上で定義したようなペプチド。

中性ペプチド：上述のような隣接範囲についてのホップ
・アンド・ウッズ型又はカイト・アンド・トウーリット
ル型分析、もしくはα−ヘリックス周期性についてのデ
リシ・アンド・バーシフスキー型分析で中性である上で
定義したようなペプチド。

本発明により、免疫原性ペプチドの少なくとも３つの一
般的具体化が想像される。

第一の具体化は非免疫原性両親媒性ペプチドに対して選
択的に抗体生産を誘導し増強する能力のある免疫原性複
合物を提供する。第二と第三の具体化は非免疫原性両親
媒性ペプチドの外に非免疫原性親水性及び／又は非免疫
原性中性ペプチドに対して選択的に抗体生産を誘導し増
強する能力のある免疫原性複合物を提供する。

第一の具体化による複合物はｉ質に共役的に結合した非
免疫原性両親媒性ペプチドから成るペプチド−脂質複合
体から成る。好ましい具体化においては、ペプチド−脂
質複合体は１つ又は複数の脂質と１つ又は複数のステロ
ールとの混合物と会合している。

ペプチド−脂質複合体は多くの公知の方法、例えばグリ
スフィンゴリピドへの架橋結合（ヒース、ティー・デ４
−　（ｔｌｅａｔｈ、Ｔ、Ｄ、）外、ビオキミカ・ビオ
フ　シカ・アクタ（Ｂ、Ｂ、＾、）（１９８１年）６４
０巻、６６〜８１ページ）、又はＮ−（ｐ−アミノフェ
ニルステアリルアミドによる方法（スナイダー、ニス−
エル（５ｎｙｄｅｒ、Ｓ、Ｌ、）及びハニアー、ダブリ
ュー・イー（ｖａｎｎｉｅｒ、Ｗ、Ｅ、）、毫　φと　
　　　　　　（１９８４年）７７２巻、２８８〜２９４ページ）、又はバルミチ
ン酸のＮ−とドロキシサクシンイミド・エステルによる
方法（ハシ、ニー（Ｈｕａｎｇ、Ａ、）外、ジ　−　ル
・　プ・パ　オロぐ゛カル・ケミス２九：　（Ｊ、８．
Ｃ）　（１９８０年）２５５巻、８０１５〜８０１８ペ
ージ）により、適当な脂質を両親媒性ペプチドに共役的
に結合させることにより製造される。

ペプチドの脂質への共役的な結合は架橋結合によるのが
好ましく、当該技術分野で公知の方法、例えばＮ−サク
シンイミジルー４−　（ｐ−マレイミドフェニル）ブチ
レート（マーチン、エフ・ジェ−（Ｍａｒｔｉｎ、Ｆ、
Ｊ、）及びパパハジョプーａス、デイ−（Ｐａｐａｈａ
ｄｊｏｐｏｕｌｏｓ、Ｄ、）　　、　　竺マ：二±」仁
二マブ・バ　　ロジカル・ケミス　１−（１９８２年）
２５７＠、２８６〜２８８ページ）、Ｎ−ヒドロキシサ
クシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオ
ネート（バーベット、リュー（Ｂａｒｂｅｔ、Ｊ、）外
、リュー・スブー・ス　−クン゛°・セル・ビ　ケム（
Ｊ、５ｕｐｒａ、５ｔｒｕｃｔ、ａｎｄＣｅｌｌ　Ｂｉ
ｏｃｈｅｓ＋、）　　（１９８１年）１６巻、２４３〜
２５８ページ）、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒド
ロキシサクシンイミド・エステル（ハシそト、ワイ（Ｈ
ａｓｈｉｍｏｔｏ、Ｙ、）外、之エニュル・　ブ・　ム
ノロジカル・　ソッズ（Ｊ　、　Ｉａ＋ｍｕｎｏ　。

Ｍｅｔｈｏｄｓ）　（１９８３年）６２巻、１５５〜１
６２ページ）、シトラコニル化（ジャンソンス、ブイ・
ケイ（Ｊａｎｓｏｎｓ、Ｖ、に、）及びマレット、ビー
ーｚル（ＭａｌｌｅｔＬ、Ｐル、）、ア　１テ　カＪＬ
／　−ｔ＜　　、ｔ　’ｙ−Ｌ目」：（Ａｎａｌ、Ｂｉ
ｏｃｈｅｍ、）　　（１９８１年）１１１巻、５４〜５
９ページ）を使用する方法により達成することができる
。

ペプチドとしては、上述の定義に当てはまる如何なる両
親媒性ペプチドも使用することができる。もちろん免疫
原性複合体をワクチンとして使用する場合は、ペプチド
は動物の健康に対して有毒であるか、その他有害であっ
てはならない。

更に上で述べたように、両親媒性はペプチドの予め形成
されたりボゾームの内部水性領域からのカルボキシフル
オレセインの放出を促進する能力を測定することにより
試験することができるが（シカ（５ｚｏｋａ）及びパバ
へジョブ−ロス、７’。

７８年）７５巻、４１９４〜４１９８ページ、及びワイ
ンスタイン、ジエー、エフ（Ｗｅｉｎｓｔｅｉｎ、Ｊ。

Ｎ、）外、太ヱ王之ヌ（１９７７年）１９５巻、４８９
〜４９１ページ）、これは本発明の目的のために必須の
試験ではない。

特別には、カルボキシフルオレセイン（ｃＦ）は公知の
方法（シカ及びババハジョプーロス、）９７８年）７５
巻、４１９４〜４１９８ページ）で大きな単層のリン脂
質小嚢中に自己消滅濃度（２００ｍＭ、ワインスタイン
、リュー・エフ外、±工王２ス（１９７７年）１９５巻
、４８９〜４９１ページ）で包むことができる。ＣＦは
ラルストン（Ｒａ１ｓｔｏｎ）ら（ビ　　ミカ・ビ　）
　ジ１＝ヱｌｌ（Ｂｉｏｃｈｉｍ、Ｂｊｏｐｈｙｓ、＾
ｃｔａ）（１９８１年）６４９巻、１３３〜１３７ペー
ジ）によって記述された公知の方法により精製すること
ができる。ペプチドがリボゾームニ層の完全性を混乱さ
せる能力はりボゾームの懸濁液にペプチド添加後３０分
における５２０ｎｍにおける発光を測定することにより
求めることができる。一般に、全部の可能な増加の５％
より大きい蛍光の増加は両親媒性を示す。全部の可能な
蛍光の増加は小嚢を０゜１％トリト’Ｊ　（Ｔｒｉｔｏ
ｎ）　Ｘ　−１００”ｔ’溶解する前後の５２０ｎｍに
おける発光を測定することにより求めることができる。

両親媒性ペプチドの例には次の人間の免疫不全ウィルス
、ＨＩＶのエンヴエローブタンパク質ＨＩＶ（４８７〜
５１１）、ＨＩＶ　（４６９〜５１１）及びＨＩｖ（５
７８〜６０８）　（スターキッチ（５ｔａｒｃｉｃｈ）
外、！Ａｔ　（ｃｅｌｌ）　　（１９８６年）４５ａ、
６３７〜６４８ページ）から得られるべプチドを含む。

更に、次の配列、ＨＩＶ（７３５〜７５２）（Ｄ−Ｒ−
Ｐ−Ｅ−Ｇ−１−Ｅ−Ｅ−Ｅ−Ｇ−Ｇ−Ｅ−Ｒ−Ｄ−Ｒ
−３−ＮＨ２、ケネデ４−　（Ｋａｎｎｅｄｙ）外、”
ｔＡ−王）２（１９８６年、３月）２３１巻、１５５６
〜１５５９ページ）、ＨＩＶ　（３４０〜３６８）（Ｎ
−Ｎ−Ｔ−Ｌ−に−Ｑ−１−Ｄ−３−に−Ｌ−Ｒ−Ｅ−
Ｑ−Ｆ−Ｇ−Ｎ−Ｎ−Ｌ−Ｑ−５５−Ｇ−Ｃ−ＮＨ２）
単独、又は抗体生産を増強するためＨＩＶの両親媒性ペ
プチド（例えば４８７〜５１１）を伴うＨＩＶ　（２９
９〜３２９）（Ｈ−Ｒ−Ｐ−Ｎ−Ｎ−Ｎ−Ｔ−Ｒ−に−
１−Ｒ−１−Ｅ−Ｒ−Ｅ−Ｐ−Ｅ−Ｒ−Ａ−Ｅ−に−１
−Ｅ−Ｎ−Ｍ−Ｒ−Ｑ−Ｃ−ＮＨ＊　）に対する抗体は
ＨＩＶ表面糖タンパク質又は中和抗体が生産される領域
に含まれる配列を認識する。ＨＩＶ　（３４０〜３６８
）とＨＩＶ（２９９〜３２９）の両者は中和抗体を生産
するウィルスの領域に由来する（ブットニ（Ｐｕｔｎｅ
ｙ）外、ｉＬ五之ヌ（１９８６年、１２月）２３４巻、
１３９２〜１３９５ページ）。

ＨＩＶ　　（４８７〜５１１）、ＨＩＶ　　（４６９〜
５１１）及びＨＩＶ（５７８〜６０８）の−次配列を第
１図に示す。

ＨＩ　Ｖ　（４８７〜５１１　）　トＨＩ　Ｖ　（４６
９〜５１１）のホップ・アンド・ウッズ分布を第２図に
示し、ＨＩＶ（５７８〜６０８）のホップ・アンド・ウ
ッズ分布を第３図に示す。

両親媒性ペプチドに共役的に結合する脂質としては、ペ
プチドを脂質に共役的に結合する方法を見出し得ること
を条件としてあらゆる脂質を使用することができる。当
業者はそのような方法がある場合は容易に見出すことが
できる。

適当な脂質の例にはホスファチジルエタノールアミン（
ＰＥ）のようなリン脂質類、コレステロールのようなス
テロール類、スフィンゴミエリンのようなスフィンゴリ
ピド類、ミニリンのような糖脂質類、及び他のジアシル
基を含む脂質構造、例えばジアシルアミンが含まれる。

リン脂質が好ましく、ホスファチジルエタノールアミン
が特に好ましい。

ペプチド−脂質複合体は使用のために透析により未反応
成分と界面活性剤を除くことにより精製することができ
る。透析後、透析バッグに残る物質は免疫原である。こ
れ以上の精製を行う必要はない。

ペプチドを脂質に共役的に結合してペプチド−脂質複合
体を製造する外に、天然に存在する複合体も使用するこ
とができる。そのような天然に存在するペプチド−リン
脂質複合体の例はホスファチジルイノシト、−ルに結合
したタンパク質から成る複合体である。

上述のペプチド−脂質複合体は単独で本発明による免疫
原性楔金物として使用することができる。しかしなから
好ましい具体化においては、ペプチド−脂質複合体は１
つ又は複数の脂質と１つ又は複数のステロールとの混合
物と会合している。

１つ又は複数の脂質と１つ又は複数のステロールとの混
合物と会合しているペプチド−脂質複合体から成る複合
物は、高限界ミセル濃度の無毒の界面活性剤中ですべて
の成分すなわちペプチド−脂質複合体、追加の脂質及び
ステロールを可溶化することにより生成させることがで
きる。次いでこの溶液を透析して界面活性剤を除く。生
成物は性質が小嚢状であるか又は光学顕微鏡で見た場合
、無定形微粒子構造である微粒子懸濁液である。

以下の説明により限定しようとするものではないが、複
合物中のペプチドの性質は結果として生ずる構造を決定
する因子であるように見える。すなわち、親水性又は中
性であるペプチドはよりしばしば小嚢構造を形成するよ
うに見え、一方線水性であるペプチドはよりしばしば無
定形微粒子集合体を形成するように見える。

ペプチドはほとんどの場合、互いに及び追加の脂質及び
ステロールとペプチドが結合している脂質のアシル鎖並
びに他の脂質とステロールの疎水性領域に由来する疎水
性相互作用により会合している。しかしなから膜構造に
おけるように、イオン性相互作用とファン・デル・バー
ルスカも含まれるであろう。

会合は高速（ｉｏｏ、ｏθＧ　〜３０Ｇ、Ｇｏｏ　ｘ　
ｇ　）における超遠心分離により透析溶液を遠心分離す
ることにより試験することができる。ペプチド−脂質複
合体が追加の脂質及びステロールと会合して本発明によ
る免疫原性複合物を形成する場合、ペプチド−脂質複合
体は追加の脂質及びステロールと共にベレット化する。

ペプチド−脂質複合物の運命は、例えば放射性標識、蛍
光標識、分光測定、薄層クロマドグフィー又は高圧液体
クロマトグラフィーにより監視することができる。

より特別には、１つ又は複数の脂質と１つ又は複数のス
テロールとの混合物と会合したペプチド−脂質複合体か
ら成る複合物を生産する少なくとも２つの方法がある。

１つの方法においては、（ペプチド−脂質複合体形成の
ため）誘導体化した脂質を１つ又は複数の誘導体化して
ない間質と１つ又は複数のステロールとの混合物と共に
界面活性剤に溶解する。

次いで予め作ったペプチドを溶液に添加し、誘導体化し
た脂質と反応させてペプチド−脂質複合体を形成させる
０反応が完了した後、溶液を適当な緩衝剤水溶液に透析
して界面活性剤を除き、それによって免疫原性複合物を
含む微粒子懸濁液が形成される。

上述の方法に使用する誘導体化した脂質は、それ自身に
よりペプチド−詣＊ａ合体を生産するために記述したよ
うな通常の方法により製造される０例えば、架橋剤をペ
プチド−脂質複合体の形成に使用する場合はｍ’ｉｔに
架橋剤を結合することにより脂質を誘導体化する。必要
なら、誘導体化した脂質は次いで反応混合物から通常の
方法により抽出する。

ペプチドはそれを＊Ｘに結合するために使用した方法に
より活性化する。例えば、ペプチドを脂質に結合するた
めに架橋剤を使用した場合、ペプチドは通常の方法によ
りジチオスレイトールで還元する。このようにして活性
化したペプチドはアフィニティー・クロマトグラフィー
又はＨＰＬＣ（高圧液体クロマトグラフィー）のような
通常の方法により積装する。

このようにして製造した誘導体化した脂質が１つ又は複
数の誘導体化してない脂質及び１つ又は複数のステロー
ルと共に溶解している界面活性剤は高限界ミセル濃度の
任意の無毒の界面活性剤であることができる。「高」限
界ミセル濃度は界面活性剤が透析により除き得ることを
意味する。Ｔｒｉｔｏｎ　　Ｘ　−１００又はＣｌ２Ｅ
ａ　　（Ｎ−ドデシルオクタエチレン・モノエーテル（
Ｎ−ｄｏｄｅｃｙｌｏｃｔａｅＬｈｙｒｅｎｅ　ｍｏｎ
ｏｅｔｈｅｒ））のような「低」限界ミセル濃度の他の
界面活性剤も適当であるが、除去は透析以外の他の方法
、例えば５Ｍ−２ビーズへの吸着のような方法により達
成される。高限界ミセル濃度を持つ適当な界面活性剤は
当業者が容易に決めることができ、その例にはオクチル
−β−Ｄ−グルコシドとオクチル−β−Ｄ−チオグルコ
ピラノシドが含まれる。

オクチル−β−〇−グルコシドが好ましい。

脂質とステロールは界面活性剤に可溶化する準備として
、最初に可溶化１するが酸化せず又は如何なる場合もリ
ン脂質の完全性を破壊′しない有機溶媒に溶解する。適
当な有機溶媒はジエチルエーテル、クロロホルム、ベン
ゼン及びアセトンを含む。

誘導体化した脂質、誘導体化してない脂質とステロール
は約２：３：５のモル比で使用するが、広範囲の比率を
用いることが可能であり、又有機溶媒には約１０ｍｇ（
脂質とステロール）／ｍＪ２（溶媒）の濃度で溶解する
が、ある範囲の濃度比を用いることができる。

次いで試料は窒素気流又はアルゴンのような非酸化性気
体中で乾燥する。

乾燥した試料はｐＨ４，５〜６．５のリン酸緩衝剤水溶
液又はクエン酸緩衝剤水溶液のような緩衝剤水溶液に約
４ｍｇ　（脂質とステロール）／１ｍＩＬ（溶媒）の濃
度で再懸濁し、試料は室温で超音波処理して小嚢の微粒
子懸濁液を形成させる。

次いでこの試料に界面活性剤を添加し、試料を再び室温
で超音波処理してすべての成分を溶解する。

添加した界面活性剤の量は混合物の成分を可溶化するに
十分な■である。適当な量は脂質とステロールの全重量
に基づいて重量で約１０二１である。当業者は界面活性
剤の他の適当な量を容易に決めることができる。

ペプチド−脂質複合体を形成するには、上述のように製
造した活性化したペプチドを界面活性剤混合物に対して
ペプチドの誘導体化した脂質への結合が最適になされる
のに必要な量、例えば誘導体化した脂質モル当り約１＝
２モルのペプチドの量で添加する。ｐｌ＋と他の反応条
件は実施する個別の反応により、又ペプチドと誘導体化
した脂質が適当に反応するように調節する。反応条件は
当業者によって容易に決定される。適当な反応時間は般
に一晩中である。

透析は通常の方法により、木質的にすべての界面活性剤
が除かれる時間間隔と十分なＭ衝剤の交換を行いなから
実施する。

透析用緩衝剤としては、脂質を酸化せず又は免疫原性複
合物の完全性を破壊しない任意の緩衝剤水溶液を使用す
ることができる。

生成物は１つ又は複数の脂質と１つ又は複数のステロー
ルとの混合物と会合したペプチド−脂質複合体から成る
免疫原性複合物の微粒子懸濁液である。

１つ又は複数の脂質と１つ又は複数のステロールとの混
合物と会合したペプチド−脂質から成る免疫原性複合物
を製造する第２の方法に従って、第１の方法で記述した
ように製造した予め作ワた活性化したペプチドを同じく
第１の方法に記述したように製造した誘導体化した脂質
と、１つ又は複数の１脂質と１つ又は複数のステロール
との混合物とから成る小嚢を含む懸濁液に添加し、ペプ
チドを小嚢中の誘導体化した脂質と反応させてペプチド
−脂質複合体を形成させる。その中にすでにペプチド−
脂質複合体がある免疫原性組成物も小嚢として使用する
ことができる。反応が完了した後、すべての成分は界面
活性剤中で可溶化され、溶液は第１の方法におけるよう
に適当な緩衝剤水溶液に透析されて界面活性剤は除かれ
、それによって免疫原性複合物から成る微粒子懸濁液が
形成される。

第２の方法においては単層小嚢を含む溶液は第１の方法
で小嚢の微粒子懸濁液が作られるのと同様の方法で作ら
れる。ペプチドは界面活性剤の添加油に反応させる。界
面活性剤は一晩中のカップリング反応の終りに添加する
。すべての他の工程、時間、濃度、温度、ｐｔ＋などは
第１の方法で記述したのと同一である。

より特別には、ペプチド−脂質複合体を作るには活性ペ
プチドを混合物に対してペプチドと誘導体化した脂質の
カップリングを最適にする必要量、例えば誘導体化した
脂質モル当り約１：２モルの量のペプチドを添加する。

ｐＨと他の反応条件は実施する個別の反応により調節す
る。反応条件は当業者によって容易に定められる。適当
な反応時間は通常−晩中である。

反応混合物中の成分を可溶化するために使用する界面活
性剤は第１の方法につき上で述べたのと同じである。

試料は界面活性剤を混合物中の成分を可溶化する十分量
を反応混合物に添加することにより可溶化して作られる
。１ｍｇの脂質とステロールの全量に対して約１０ｍｇ
の界面活性剤の比率が一般に適当である。次いで試料を
超音波処理してすべての成分を溶解する。

一度界面活性剤中に可溶化すると透析は第１の方法につ
き上に述べたように実行される。

発明のこの具体化に使用する脂質とペプチドとしては、
脂質に共役的に結合した両親媒性ペプチドのみから成る
免疫原性複合物を作るためのト述のような任意の脂質と
任意の両親媒性ペプチドを使用することができる。

脂質とステロール混合物中の脂質は、免疫原性でないこ
とすなわち動物は脂質の単独又は複合物中のいずれにお
いても免疫応答を示さないことを条件として任意の脂質
であることができる。又脂質は動物のペプチドに対する
免疫応答を準備する能力を妨害してはならない。

当業者は標準検定法により脂質に対して反応性の抗体を
検定することにより脂質が免疫原性であるか否かを容易
に決めることができる。

更に、脂質とステロール混合物のＩ！買酸成分すべての
１種類の脂質又は２つ以上の脂質の混合物から成ること
ができ、又脂質はタンパク質−脂質複合体に存在するそ
れと同じでも異なってもよい。

脂質とステロール混合物の脂質成分として有用な脂質の
例にはホスファチジルセリン（ｐｓ）、ホスファチジル
コリン（ｐｃ）、スフィンゴミエリン（ｓｐ）、ホスフ
ァチジルエタノールアミン（ＰＥ）、ホスファチジルイ
ノシトール（ＰＩ）、ホスファチジルグリセロール（Ｐ
Ｇ）、ホスファチジン酸（ＰＡ）、及びカルシオリビン
が含まれる。

リン脂質が好ましい。

ステロールとしては、任意のステロールをそれが脂質集
合体を可溶化せず、免疫原性でないこと、すなわちそれ
自身に対して免疫応答を誘導せず、動物がペプチドに対
して応答する能力を妨害しないこと、例えば抗炎症的性
質を持つことを条件として使用することができる。

１つ以上のステロールの混合物を使用することができる
が、１つのステロールのみを使用するのが好ましい。

脂質とステロールの混合物の場合に使用したように、ス
テロールはＣ３炭素にアルコール性水酸基とＣＩ７炭素
に炭素８個又はそれ以上の分枝脂肪族鎖を含む多数の種
類のステロイドを意味する。

それらはＣ３炭素において遊離アルコール又は水酸基の
長鎖脂肪酸エステルとして存在する。

混合物中で使用することのできるステロールの例にはコ
レステロールとラノステロールが含まれる。

特に好ましいステロールはコレステロールである。

第二及び第三の具体化における免疫原性複合物は非免疫
原性両親媒性ペプチドに対してのみならず非免疫原性親
水性及び／又は非免疫原性中性ペプチドに対しても選択
的に抗体生産を誘導し又は増強する能力を持つ。

これらの２つの免疫原性複合物の１つは脂質に共役的に
結合した混成ペプチドから成るペプチド−脂質複合体か
ら成り、前記混成ペプチドは（ａ）非免疫原性親水性ペ
プチド、（ｂ）非免疫原性中性ペプチド、（ｃ）非免疫
原性両親媒性ペプチド、及び（ｄ）２つ又はそれ以上の
上述のペプチド（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）の任意の組合
せから成る混成ペプチドから成る群より選ばれる１つの
ペプチドと共役的に結合した非免疫原性両親媒性ペプチ
ドから成る。好ましい具体化においては、ペプチド−脂
質複合体は１つ又は複数の脂質と１つ又は複数のステロ
ールとの混合物と会合している。

ペプチド−脂質複合体単独又は１つ又は複数の脂質と１
つの又は複数のステロールとの混合物と会合している免
疫原性複合物は脂質に共役的に結合した非免疫原性両親
媒性ペプチドから成る免疫原性複合物について上で述べ
たのと同じ方法で作ることができ、但しペプチド−脂質
複合体中のペプチドは（ａ）非免疫原性親水性ペプチド
、（ｂ）非免疫原性中性ペプチド、（ｃ）非免疫原性両
親媒性ペプチド、及び（ｄ）上で定義したペプチド（ａ
）、（ｂ）及び（ｃ）の２つ又はそれ以上の任意の組合
せから成る混成ペプチドの１つと共役的に結合している
非免疫原性両親媒性ペプチドから成る混成ペプチドから
戊っている。

両方の混成ペプチドの両方を形成するペプチドは共に共
役的に結合しており、好ましくは末端と末端が結合して
いる。

更に、アミノ基とアミノ基の結合及びカルボキシル基と
カルボキシル基の結合は水性環境下では通常不安定であ
るから、末端と末端の結合はアミノ末端とカルボキシル
末端によるのが好ましい。

親水性又は中性ペプチドとしては、上の定義に適合する
任意の親水性又は中性ペプチドを使用することができる
。免疫原性複合物がワクチンとして使用される場合は、
ペプチドは有毒であったり又はその他動物の健康にとフ
て有害であってはならない。

親水性ペプチドの例にはＨＩＶ（４６９〜４８５）、Ｈ
ＩＶ（５００〜５１１）及びＨＩＶ（６４７〜６５９）
が含まれる。

これらのペプチドの一次配列は第１図に示す。

ＨＩＶ　（４６９〜４８５）とＨＩｖ（５００〜５１１
）のホップ・アンド・ウツズ分布は第２図に示し、ＨＩ
　Ｖ　（６４７〜６５９）（Ｄ＊ツブ−７ンド・ウッズ
分布は第４図に示す。

中性ペプチドの例は（ＮＡＮＰ）ｎである。

（ＮＡＮＰ）３の一次配列は第１図に示し、ホップ・ア
ンド・ウッズ分布は第５図に示す。

混成ペプチドに使用する両親媒性ペプチドは免疫原性複
合物の第一の具体化につき上で記述したのと同じである
。

特に、両親媒性ペプチドＴ２　（ＨＩＶｅｎｖ　　（１
１２−１２４）、Ｈ−Ｅ−Ｄ−１−ｌ−５−Ｌ−Ｗ−Ｎ
−Ｑ−Ｓ−Ｌ−Ｋ）及びＴ、（ＨＩＶｅｎｖ（４２８−
４４３）、Ｌ−Ｑ−１−１−Ｎ−Ｍ−Ｗ　　Ｑ　　Ｅ　
　Ｖ　　Ｌ−Ａ　　Ｍ　　Ｙ−Ａ　　Ｎｌ２　）（シー
ス（ｃｅａｓｅ）外、プロシープ　ン　ス・　ブショ　
ル・アカデミ−・　ブ・サ　エンス・ブ・ニーニスニー
（１９８７年）８４巻、４２４９〜４２５３ページ）は
、ＨＩＶ　（例えばＨＩＶ　（２９９−３２９））から
の親水性又は中性ペプチドと結合してこれらの非免疫性
ペプチドに免疫応答を誘導するのに有用である。

混成ペプチドはペプチド合成反応の公知技術の任意の１
つにより、手動で又は自動ペプチド合成装置のいずれか
で作ることができる。又は、混成ペプチドは遺伝子工学
の標準技術により生産することができる。その上、混成
ペプチドはペプチド断片からの酵素的構築又はより大き
い混成ポリペプチド又はタンパク質からの分裂により生
産することができる。

更に、この発明の具体化により、任意の数と種類のペプ
チドを結合させて多重抗体を作る免疫原複合物を得るこ
とができる。もちろん、最終のペプチドの長さについて
は、ペプチドがあまりに長く又はあまりに短い場合ペプ
チド折りたたみに基づく構造上の問題があるのみならず
、合成ペプチドを作る場合の長さについて技術的な制限
があるという実際的な限界がある。この制限は当業者に
よって容易に決めることができる。

このようにして作った構成ペプチドは、混成ペプチドを
形成するペプチドのとわに脂質との共役的結合が形成さ
れるかについて顧慮することなく、免疫原性複合物の第
一の具体化につき上で記述したのと同じ方法により脂質
と結合させて免疫原性ペプチド−詣質複合物を作ること
ができる。

混成ペプチドの例には、（ａ）ＨＩＶ（４６９−５１１）（非免疫原性親水性ペ
プチドＨＩＶ　（４６９−４８５）及び非免疫原性両親
媒性ペプチドＨＩＶ（４８７−５１工）から成る。）及
び（ｂ）ＨＩＶ　（４８７−５１１）（非免疫原性親水性
ペプチドＨＩＶ　（５００−５１１）及び非免疫原性両
親媒性ペプチドＨＩＶ（４８７，−４９９）から成る。

）がある。

ＨＩＶ　（４６９−５１１）が本発明による免疫原性複
合物の一部分を形作っているときは、抗体は非免疫原性
親水性ペプチドＨＩＶ（４６９−４８５に対して（並び
にペプチドＨＩＶ（４８７−５１１）、（４６９−５１
１）及び（５００５１１）に対して）作られる。

ＨＩＶ　（４８７−５１１）が本発明による免疫原性複
合物の一部分を形作っているときは、抗体は非免疫原性
親水性ペプチドＨＩＶ（５００−５１１）に対して（並
びにペプチドＨＩＶ（４８７−５１１）と（４６９−５
１１）に対して）作られる。

非免疫原性両親媒性ペプチドに対してのみならず非免疫
原性親水性ペプチド及び／又は非免疫原性中性ペプチド
に対しても選択的に抗体生産を誘導又は増強する能力の
ある本発明による２つ複合物のその他は、ペプチドは少
なくとも一部分は両親媒性ペプチドから成る第１のペプ
チド−脂質複合体と、１つ又は複数の脂質と１つ又は複
数のステロールの混合物と会合している１つ又は複数の
追加のペプチド−脂質複合体から成る。

第１のペプチド−脂質複合体はそれに会合している両親
媒性ペプチドを持つ上述の免疫原性複合体の１つから成
る。

すなわち、第１のペプチド−脂質複合体は脂質に共役的
に結合した非免疫原性両親媒性ペプチドから成る上述の
ペプチド−脂質複合体か、又は脂質に共役的に結合した
混成ペプチドから成る上述の混成ペプチド−脂質複合体
であることができ、この場合前記混成ペプチドは（ａ）
非免疫原性親水性ペプチド、（ｂ）非免疫原性中性ペプ
チド、（ｃ）非免疫原性両親媒性ペプチド、及び（ｄ）
上で定義したペプチド（ａ）、（ｂ＞及び（ｃ）の任意
の２つ又はそれ以上の組合せから成る混成ペプチドの１
つに共役的に結合した非免疫原性両親媒性ペプチドから
成る。

１つ又は複数の追加のペプチド−脂質複合体は次の複合
体、（１）脂質に共役的に結合した非免疫原性親水性ペ
プチド、（２）脂質に共役的に結合した非免疫原性中性
ペプチド、　　（３）Ｊｕｌ質に共役的に結合した非免
疫原性両親媒性ペプチド、及び（４）脂質に共役的に結
合した混成ペプチドの１つ又は複数から成り、この場合
前記混成ペプチドは（ａ）非免疫原性親水性ペプチド、
（ｂ）非免疫原性中性ペプチド、（ｃ）非免疫原性両親
媒性ペプチド、及び（ｄ）上で定義したペプチド（ａ）
、（ｂ）及び（ｃ）の任意の２つ又はそれ以上の組合せ
から成る混成ペプチドから選ばれるペプチドに共役的に
結合する非免疫原性両親媒性、親水性又は中性ペプチド
から成る。

すなわち、１つ又は複数の追加のペプチド−脂質複合体
は任意の前に記述したようなそれであることができ、但
し更に両親媒性ペプチドを持たないペプチド−脂質複合
体を含むことができる。

本発明のこの具体化により、これら自身免疫原性である
ことができないペプチド−脂質複合体、すなわち両親媒
性ペプチドを含まない任意の複合体に対して抗体を作る
ことができる。

従って、例えばペプチドがＨＩＶからのＴ２又はＴ１の
ような両親媒性ペプチドである１つのペプチド−脂質複
合体とペプチドがＨＩＶ（２９９−３２９）のような親
水性ペプチドである他のペプチド−脂質複合体とが会合
している１つ又は複数の脂質と１つ又は複数のステロー
ルの混合物から成る免疫原性複合物は両親媒性ペプチド
Ｔ２又はＴ１に対してのみならず、親水性ペプチド）１
１Ｖ　（２９９−３２９）に対しても抗体を誘導する。

他のペプチド−脂質複合体が含まれている場合は、追加
の複合体に含まれる１つ又は複数の抗体が誘導される。

本発明の第３の具体化によるこの免疫原性複合物は、２
つ又はそれ以上のペプチド−脂質複合体を１つ又は複数
の脂質と１つ又は複数のステロールとの混合物に会合さ
せることを除いて、他の免疫原性複合物につき上で述べ
たのと同じ方法で作ることができる。この結果は、例４
ば２つの上述の方法のいずれかにより１つ以上のペプチ
ドを同時に誘導体化した脂質と反応させることにより実
現することができる。

脂質に共役的に結合した非免疫性親水性ペプチド、脂質
に共役的に結合した非免疫性中性ペプチド及び脂質に共
役的に結合した混成ペプチドから成るペプチド−脂質複
合体に使用する親水性又は中性ペプチドは混成ペプチド
につき上で記述したのと同様であり、両親媒性ペプチド
を使用する任意のペプチド−脂質複合体に使用する両親
媒性ペプチドは免疫原性複合物の第１の具体化につき上
で記述したのと同じである。

親水性及び中性ペプチドは脂質に両親媒性ペプチド−脂
質複合体につき上で記述したのと同じ方法で共役的に結
合している。

更に、本発明により任意の２つ又はそれ以上の上述の免
疫原性複合物を混合して組み合わせ、免疫原性組成物を
得ることができる。この方法は１つ以上のペプチドに対
する抗体を生産するのに使用することもできる。

本発明による免疫原性複合物は免疫原として有用である
。実際の適用には臨床的使用と非臨床的使用が含まれる
。非臨床的使用の例にはモノクローナル抗体を高めるた
めの免疫処理と診断に使用する限定された特別のエピト
ープに対する抗体の生産を含む。

臨床使用の例にはワクチンの製造及び避妊に使用するた
め粒子に対する全身系又は粘膜系の抗体の誘導が含まれ
る。

従フて、本発明は医薬組成物及び選択的に抗体生産を誘
導し又は増強する方法も提供する。

医薬組成物は上述の免疫原性複合物の１つ又は複数の混
合物と薬学的に受容し得る担体、希釈剤又は賦形剤から
成る。

この方法は医薬組成物の薬学的有効量を免疫応答が外来
物による感染を防御する正常な手段である宿主に投与す
ることから成る。

適当な薬学的に受容し得る担体、希釈剤又は賦形剤の例
には、例えば等慢性塩類溶液、任意の緩衝剤水溶液、水
及び任意の多くの不活性担体が含まれる。

投与形態は経口、鼻内、筋肉内、静脈内、履腔内、眼内
、皮下、膣内、又は任意の粘膜表面上用とすることがで
きる。

投与量は免疫が求められている感染物及び／又は抗体生
産が求められているペプチドの性質により変動するが、
当業者は適当な投与量を容易に決定することができる。

マウスの適当な投与量は体重ｇ当り約１０μｇないし約
１００μｇの間で変動する。

（実施例）この発明は特別な実施例との関連で記述するが、この発
明はそれに限定されるものではない。

別記しない限り、すべてのパーセント、比率などは重量
による。

実施例１非免疫原性両親媒性ペプチドに対して選択的に抗体生産
を誘導する能力のある免疫原性複合物の生産−最初のペ
プチド−脂質複合体の調製（Ｉ）架橋剤のホスファチジ
ルエタノールアミンとの結合はマーチンとパパハジョブ
ーロスの方法（ジ　−　　・　　・バ　　ロジカル・ケ
ミスｐ　（１９８２年）２５７巻、２８６〜２８８ペー
ジ）により、次のように実施した。

（Ａ）試薬（１）　　サクシンイミジル−４−（ｐ−マレイミドフ
ェニル）ブチレート（ＳＭＰＢ）（２）　　ホスファチ
ジルエタノールアミン（ＰＥ）（３）無水メタノール（４）トリエチルアミン（Ｂ）方法（１）　　試薬（例えば２ｍｊｌのメタノール、５μＬ
のトリエチルアミン、１７ｍｇのＳＭＰＢを２５ｍｇの
乾燥ＰＥ１．：添加する。）を窒素ガス下室温で２時間
反応させた。

（２）窒素気流中でメタノールを反応生成物から除いた
。

（３）　　２ｍ１ｌのＣＨＣｌｌ３を添加し、混合物を
水中１％ＮａＣ１の２ｍＩＬで１５０Ｏｒｐｍ、５分間
遠心分離することにより２回抽出した。この工程のすべ
ての操作は窒素ガス下で行った。

（４）　　次いで、シリカゲル上のクロマトグラフを、
（ａ）カラムを５０ｍ１のＣＨＣｕ、で洗浄し、（ｂ）
５ｍｌ！のＣＨＣｌ２３中の試料をカラムにかけ、次い
でＣＨＣＩｔ　ｓ　：　Ｍ　ｅ　ＯＨの４０：１．３０
：１．２５：１．２０：１．．１５：１の混合物の各１
０ｍ１、次に１０：１の混合物の４０ｍ２を順次かけ、
一方５ｍＩＬの分画を補集することにより実施した。

（５）　　次いでシリカゲルカラム分画（溶媒、ＣＨＣ
ｆｌｚ　　＋　ＭｅＯＨ：　Ｈ２０，６５：２５：４）
の薄層クロマトグラフを行った。早いＣＨＣｌ１３　：
　ＭｅＯＨの１０：１分画で溶離したカップリングした
架橋剤とリン脂質（ＭＰＢ−ＰＥ）はＰＥ標準と共同移
動する単一スポットを示した。

誘導化したＰＥのスポットはニンヒドリン反応陰性、ヨ
ード反応陽性であった。ＰＥ標準はニンヒドリン陽性で
あった。ＭＰＢ−ＰＥを含むシリカゲルカラム分画を合
併し、窒素ガス下−２０℃で保存した。

（６）　　リン脂質をバートレット（Ｂａｒｔｌｅｔｔ
）の方法（ジ　−　ル・　ブ・パ　オロジカル・ケえム
五ユニ（１９５９年）２３４巻、４６６ベージ）により
定量した。平均収率は５０％であった。

（ＩＩ）ロッシュ（Ｒｏｃｈｅ）法によるペプチドの還
元（Ａ）反応（１）固相法（ヤーニー（Ｙａｒｎｅｙ）及びマリフィ
ールド（Ｍａｒｒｉｆｉｅｌｄ）、「ザーヘプタイド、
アナリシス、シンセシス、バイオロジー（ＴｈｅＰｅｐ
ｔｉｄｅ：＾ｎａｌｙｓｉｓ、５ｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ｂ
ｉｏｌｏｇｙ）　Ｊ　　（アカデミツク・プレス（＾ｃ
ａｄｅ＠ｉｃ　Ｐｒｅｓｓ）　　にューヨーク）刊）、
２＠、１〜２８４ページ）により調製した両親媒性ペプ
チドＨＩＶ（４８７−５１１）、ＨＩＶ　（４６９−５
１１）又はＨＩＶ（５７８−６０８）を１Ｍ酢酸（ＨＡ
ｃ）に溶解した（例えば１ｍｊ！のＨＡｃ中２　ｍ　ｇ
のペプチド）。

（２）ジチオスレイトール（ＤＴＴ）をｌＱＯｍＭ濃度
となるように添加した。

（３）　　試料を脱気し、窒素充填し、次いでねし栓付
きチューブの中で３７°、３時間定温保持した。

（Ｂ）ボンドルート（ＢｏｎｄｅｌｕＬｅ）カラム上の
アフィニティー・クロマトグラフィー（３ｃｃカラムは
アナリティケム・インターナショナル（八ｎａｌｙｔｉ
ｃｈｅｍ　Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）Ｃ１８、バー
ト６０７２０３から入手した。）（１）　　カラムを２倍量の１００％ＭｅＯＨ。

次いで１０倍ｍ１　ＭＨＡｃで洗浄した。

（２）ペプチドをボンドルート・カラムにかけた。

（３）　　カラムを５倍量のＨＡｃ、次いで５倍量の０
．０２％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）で洗浄した。

（４）　　試料を５倍量の６０％アセトニトリル、０．
０２％ＴＦＡで溶離した。

（５）　　溶離した試料を一晩中凍結乾燥し、−２０℃
で保存した。木質的に完全な回収がなされた。

（Ｉｌｌ）脂質とステロール（コレステロール）との混
合物と会合したペプチド−脂質複合体から成る免疫原性
複合物の調製（Ａ）Ｊｌ！質、ＭＰＢ−ＰＥ、スフィンゴミエリン（
ｓｐ）、ホスファチジルコリン（ｐｃ）、ホスファチジ
ルセリン（ｐｓ）。ステロール；コレステロール（ｃｈ
）。

（Ｂ）方法（１）　　脂質とコレステロール（ｃｈ）をＭＰＢ−Ｐ
Ｅ　：　ＳＰ　：　ＰＣ：　ＰＳ　：　Ｃｈのモル比が
２：１：１：１：５となるようにエーテルに溶解した（
１０ｍｇ／ｍＪＮ。

（２）　　試料を窒素気流中で乾燥した。

（３）　　乾燥した試料を緩衝液（２０ｍＭクエン酸、
３５ｍＭリン酸二ナトリウム、１０８ｍＭＮａＣＩｔ、
１ｍＭ　　ＥＤＴＡ、ｐＨ４，５）に４ｍｇ・脂質及び
コレステロール／　ｍ　ＩＬとなるように再懸濁した。

（４）　　試料を超音波処理して微粒子懸濁液を形成さ
せた。

（５）　　オクチル−β−Ｄ−グルコシド（１０ｍ　ｇ
／ｍ　ｇ・脂質及びステロール）を超音波処理した試料
に添加した。

（６）　　試料を再び超音波処理してすべてのＪ脂質を
溶解した。

（７）　　試料を窒素ガス下暗所に保存した。

（ＩＶ）ペプチドの誘導体化したホスファチジルエタノ
ールアミン（ＭＰＢ−ＰＥ）を含む脂質混合物とのカッ
プリング（Ａ）方法（＋）　　予め作った上の工程■からの還元したペプチ
ドをｐＨ４，５でＭＰＢ−ＰＥを含む上の工程■からの
脂質とステロールの混合物（ＭＰＢ−ＰＥモル濃度はペ
プチドのモル濃度の２倍であった。）に添加した。

（２）　　ｐＨをＩ　ＮＮａＯＨで６．５に調節した。

（３）　　混合物中のＭＰＢ−ＰＥとペプチドを窒素ガ
ス下室温で一晩中反応させた。

（４）　　混合物を４℃、ｐＨ７，２でリン酸塩緩衝化
食塩水に対して数回交換しなから透析した。

（５）　　脂質とコレステロールとの混合物と会合した
タンパク質−脂質複合体から成る免疫原性複合物を透析
バッグから回収し、冷蔵庫（４℃）に保存した。

実施例２非免疫原性親水性ペプチドに対して選択的に抗体生産を
誘導する能力のある免疫原性複合物の調製非免疫原性中性又は親水性ペプチドを選択的に誘導する
能力のある免疫原性複合物は（１）例えばバーニー、ジー（ｖａｒｎｅｙ、Ｇ、）及
びマリフィールド、アール、ビー（ＭａｒｒｉｆＪｅｌ
ｄ、Ｒ，８，）によって「ザ・ベブタイデス、アナリシ
ス、シンセシス、バイオロジー」　（イー・グロス（ε
、ＧｒｏｓＳ）及びジエー・マインホーフ７−　（Ｊ、
Ｍｅｉｎｈｏｆｅｒ）編集）（アカデミツク・プレスに
ニーヨーク）刊）、２巻、１〜２８４ページに記述され
ているような標準方法により１両親媒性ペプチドに隣接
する中性又は親水性ペプチドを組み立てて混成ペプチド
を形成し、混成ペプチドを還元し、次いで実施例１に記
述したように他の脂質とコレステロールと共に溶液中に
存在する誘導体化した脂質に還元した混成ペプチドを共
役的に結合し、実施例１に記述したように透析して混成
ペプチド−脂質複合体の脂質とコレステロールとの混合
物との会合を形成させるか、又は（２）還元した非免疫原性中性又は親水性ペプチドと還
元した両親媒性ペプチドとの混合物を実施例１に記述し
たように溶液中に他の脂質とコレステロールと共に存在
する誘導体化した脂質に共役的に結合し、実施例１に記
述したように透析して両方のペプチド−脂質複合体の脂
質とステロールとの会合を形成させる２つの方法により
作られた。

方法１を用いて、ＨＩＶペプチド（４８７−５１１）、
（４６９−５１１）及び（５７８−６０８）を使用して
免疫原性複合物を調製した。

実施例３実施例１の免疫原性複合物の抗体生産６週ないし８週令の雌の同血統のマウスを実施例１で調
製した免疫原性複合物（及び実施例１におけるように調
製したが、但しペプチドは（ＮＡＮＰ）ｓ、Ｉ　Ｌ−２
（１−１２）　−４ｒａｎｓ（−次アミノ酸配列は第１
表に示されている。）ＨＩＶｅｎｖ　　（４６９−４８
５）、ＨＩＶｅｎｖ（５００−５１１）及びＨＩＶｅｎ
ｖ　　（５７８−６０８）であり、これらのすべては親
水性か中性である複合物）を腹腔内投与して免疫した。

各々は０日と１４日に３０μｇのペプチドと等価の量を
使用した。２８日にマウスを複合物の７．５μｇのペプ
チドと等価の量で免疫した。マウスを０１．１４日、２
８日及び４２日に１＆眼窩梢から出血させた。集めた後
、血液を凝血させ、遠心分離により血清を分離した。血
清につき以下に記述する酵素連結免疫吸収試験（ＥＬＩ
ＳＡ）により抗体を測定した。

ＥＬＩＳＡ−直接結合試験（Ａ）平板コーティング（１）　　糟を重炭酸塩−炭酸塩添加食塩水（ｐ１１９
．６）巾約０．５〜１　μｇ／ｍｆｆ１に希釈した抗Ｌ
’ｌ　（免疫する又は対向して試験するいずれのペプチ
ドも使用した。）を被覆した。

（２）　　糟を対照として抗原濃度の１０倍に希釈した
ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）又はゼラチンで被覆した
。

（ａ）　　ｆｆ（炭酸塩−炭酸塩緩衝液中１００μｌの
ＢＳＡを各種に添加した。

（ｂ）　　平板を３７℃で一晩乾燥した。

（ｃ）　　糟を蒸留水又はＰＢＳ／ツイーン（Ｔｗｅｅ
ｎ）　（３ｘ　）で５回洗浄した。

（Ｂ）封鎖反応（１）　　ρ１１８．２のホウ酸塩緩衝化食塩水（ｐＨ
８，２）中１％ゼラチン、又はＰＢＳ　（ツイーン無添
加）　　（ｐＨ７，０）中１％ＢＳＡの２００μ２を各
種に添加した。

（ａ）　　平板をおおい、３７℃で１時間定温保持した
。

（ｂ）　　定温保持後、檜を１ｘＰＢＳ／ツイーンで５
回洗浄した。

（ｃ）結合反応抗体含有血清をツイーン添加ＰＢＳ（０，５ＭＮ　ａ　Ｃｆｆｉ　）　　（ｐｎｓ、ｓ　’
）中１％ＢＳＡで・希釈した（１　：　１００から出発
して一連の２倍希釈）。

（ａ）　　Ｊ４当り１００μｍの試料を添加し、平板を
おおった。

（ｂ）　　試料を室温で振盪機上で２時間室温保持した
。

（ｃ）　　平板をＰＢＳ／ツイーンで５回洗浄した。

（Ｄ）マウス抗体の検出反応（１）　　アフィニティー・クロマトグラフィーにより
精製したヤギ抗マウス免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）及び
免疫グロブリンＭ（ＩｇＭ）−ＨｒＰ　（ベーリンガー
・マンハイム（ＢＯＥＨ。

ＭＡＮＮ、）、Ｃａｔ、＃６０５−２６）をＰＢＳ／ツ
イーン（ｐＨ６）中１％ＢＳＡで１：１０００に希釈し
た。

（ａ）ｔｏｏμｍの溶液を８棺に添加し、平板をおおい
、光から保護した。

（ｂ）　　溶液を室温で振盪機上で２時間定温保持した
。

（ｃ）　　平板をＰＢＳ／ツイーンで５回洗浄した。

（Ｅ）基質反応（ｌ）０−フェニレンジアミン・二塩酸（シグマ（ＳＩ
ＧＭ＾）、＃Ｐ−１５２６）をｐｌ量４．５の０．１Ｍ
クエン酸緩衝液に混合し、０．４ｍｇ７ｍ１の最終濃度
とした。４μｌの３０％Ｈ２Ｏ２を各１０ｍｊ！のＭ＃
液に添加した。

（ａ）ｔｏｏμｍの溶液を各種に添加し、平板を光から
保護した。

（ｂ）　　溶液を室温で振盪機上で１５分間反応させた
。

（ｃ）　　抗体結合の進行を４８８ｎｍにおける光学密
度を測定することにより求めた。

ＥＬＩＳＡ用溶液重炭酸塩−炭酸塩（Ｂ−Ｃ）緩衝液−１０ｘＯ，５ＭＮ
ａＨＣＯ３０，５ＭＮａ、Ｃｏ。

ｐＨ９，６になるまでほぼ等量づつ混合する。

重炭酸塩−炭酸塩食塩水２５ｍ１の１０ｘＢ−Ｃ４ｊｌ衝液７．５ｍｊ！の５ＭＮａＣＩｔ１．８ｍＪＬの１ＭＮａＮ３蒸留水で２５０ｍＪ！とし、濾過（０，２０μの孔径）
する。

Ｐ　Ｂ　Ｓ　（ｐＨ７，０）中１％ＢＳＡ２０ｍＫの０
　、５　Ｍ　Ｎ　ａ　Ｐ　０４緩衝液、ｐＨ７，０１５
ｍＩＬの５ＭＮａＣｌ！。

０．５ｍｊ！のＩＭＭｇＣＩｔ２１．０ｍＪ！の０．５　Ｍ　Ｃａ　Ｃｌ　２５．０　ｇ
のウシ血清アルブミン（Ｂｏｖｉｎｅ　ｓｅｒｕｍａｌ
ｂｕｍｉｎ）、分画Ｖ　（Ｆｒａｃｔｉｏｎ　Ｖ）　、
試薬級（Ｒｅａｇｅｎｔ　Ｇｒａｄｅ）蒸留水で５００ｍｊ！とじ、濾過（０，４５μの孔径）
する。４℃に保存する。

０．５　Ｍ　Ｎ　ａ　Ｐ　０４緩衝液（＋）　　Ｎａｚ　ＨＰＯ４・７Ｈ２７Ｈ２Ｏ−６７０
０ｍＪｌ（２）　　Ｎ　ａ　Ｈｚ　Ｐ　Ｏ４・Ｈ２０−３４，５
ｇ　ｍ７５００ｍ　ｌｌ（１）と　（２）を所望のｐＨとなるまで混合する。

ｐＨ６，５とするには　（１）と　（２）をほぼ等量づ
つ混合する。ｐＨ７，０にするには５００ｍｊ！の　（
１）と２００ｍＩＬの（２）を混合する。

ＰＢＳ／ツイーン（ｐＨ６，５）中１％ＢＳＡ２０ｍｊ
！の０．５　ＭＮａＰＯ４４１衝液、ｐＨ６，５１５ｍ
ｊ！の５ＭＮａＣ１０，５ｍＪ！のＩＭＭｇＣＩｔ２１．２５ｍ　Ｉｔの２０％ツイーン−２０１，０ｍｆｆ
１の０．５　Ｍ　Ｃａ　Ｃ１１２５，０ｇのウシ血清ア
ルブミン、分画Ｖ、試薬級蒸留水で５００ｍｊ！とじ、濾過（０，４５μの孔径）
する。４℃に保存する。

ツイーン添加Ｐｕｓ　（０，５ＭＮａＣｊＮ（ｐＨ６，
５）中里　％ＢＳＡ２０ｍＩｔの０．５　ＭＮａＰＯ４＄１衝液、ｐ）１６
．５５０ｍＪｌの５ＭＮａＣｌ１０．５ｍｆのＩ　ＭＭｇ（１！２１．２５ｍ　ｌの２０％ツイーン−２０１，０ｍｆｔの
０．５ＭＣａＣｊ２２５、Ｏｇのウシ血清アルブミン、分画Ｖ、試薬級蒸留水で５００ｍ１１．とじ、濾過（０，４５ｕの孔径
）する。４℃に保存する。

０．１Ｍクエン酸Ｍ衝液、ｐＨ４，５７，３５ｇのクエン酸三ナトリウム（Ｎａ３　Ｃ６Ｈ５
０７・２Ｈ２０）５．２５ｇのクエン酸・−水和物５００ｍｊ！、ｐｉ＋４．５とする。

２．５　ＭＨ，ＳＯａと５０ｍＭＮａ２５．０６（メタ
重亜硫酸ナトリウム）６９．４ｍ　Ｊ２の４８２　Ｓ　Ｏ４４，７５ｇ　ｍのメタ重亜硫酸ナトリウム蒸留水で５０
０ｍＲとし、濾過（０，４５μの孔径）する。４℃で保
存する。

Ｂ　Ｂ　Ｓ　（ｐｌ＋８．２　）中１％ゼラチン１０１
ｍのゼラチン６．１８ｇ　ｍの８３ＢＯ３９，５４ｇｍのＮａ２　Ｂ２Ｏ，・１０Ｈ２０４，３８
ｇ　ｍのＮａＣｌ２蒸留水で５００ｍｆｉとし、濾Ａ（０，４５μの孔径）
する。室温で保存する。

ツイーン２０（０，１５％）添加ＰＢＳ　（ＩＭＮａＣ
Ｑ　）　（ｐＨ６，５）中２％ＢＳＡ１００ｍｊ！の５
　Ｍ　Ｎ　ａ　Ｃ１２０ｍｌ１の０．５　ＭＮａＰＯ４Ａ１衝液、ｐＨ６，
５０，５ｍｆｔのＩＭＭｇＣＪ２□ １．０ｍｌ１．の０．５ＭＣａＣ１１，２３，７５ｍ　
１２の２０％ツイーン−２０蒸留水で５００ｍβとし、
濾過（０，４５μの孔径）する。４℃に保存する。

最初の免疫後４２日に得られた血ｔｉ？についての結果
を下の第１表に示す。

第１表種々なペプチド−脂質結合物で免疫したマウスの抗体力
価ペプチド　　　　　　　Ｌｏｇ、（、ＡＴ”親水性又は
中性（ＮＡＮＰ）３　　　　　　０．０　（６）　”ＩＬ−
２（１−１２）ｔｒａｎｓ　　　　１．２±１．３（６
）１１１Ｖｅｎｖ、　（４６９−４８５）　　　　０．
０　（５）１１１Ｖｅｎｖ、　（５００−５１１）　　
　　０．０（５）ＨＩＶｅｎｖ、　（６４７−６５９）
　　　　　０．０　（５）両親媒性１１１Ｖｅｎｖ、（４６９−５１１）　　　４．４±０
．５（５）ＨＩＶｅｎｖ、　（４８７−５１１）　　　
　　４．３±０．８（４））ＩＩＶｅｎｖ、　（５７８
−６０８）　　　４．４±０．４（５）註”　　ＡＴは
免疫したペプチドに対する抗体力価を表す。

註１１（）内数字はグループ当りマウス数を表す。

を表の結果は両親媒性ペプチドをリン脂質と複合体化し
追加のリン脂質及びコレステロールと会合させると、マ
ウスに注射し゛た場合著しい免疫応答を誘導することを
明らかに示している。これとは対照的に中性及び親水性
ペプチドはリン脂質と共役的に結合し、追加のリン脂質
及びコレステロールと複合体化してもマウスに免疫応答
を誘導しない結果となっている。

両親媒性ペプチドはそれ自身では免疫原性でないことは
実施例５の第４表に示したデータより明らかである。

実施例４実施例２の免疫原性複合物による抗体生産マウスを実施
例２で調製した免疫原性複合物及び実施例１のように調
製し、但し）ＩＩＶペプチド（４６９−４８５）と（５
００−５１１）を使用した複合物で免疫した。抗体力価
は実施例３のように求めた。

その結果を下の第２表に示す。

第２表ＨＩＶ被覆タンパク質の非免疫原性親水性ペプチドを同
一タンパク質の疎水性配列に隣接させて合成した場合の
免疫応答下記ペプチドに対するＬＯｇ＋ｏＡＴ”免疫ペプチド４
８９−４８５　４８７−５１１　４６９−５１１　５０
０−５１１４６９−４８５　（５）　”　　０．０　　
　０．０　　　　Ｇ、０　　　　Ｇ、０４８７−５１１
　（５）　　　０．０　　５−３±０．２　３．２±０
．８　３．２±０．５４６９−５１１（５）　　２．８
±０．７　３．２±０．８　４．４±０．５　３．１±
０．８５０［＋−５１１（５）　　　０．０　　　０．
０　　　０．０　　　　Ｇ、０註”　　ＡＴはそれぞれ
ペプチドに対する抗体力価を表わす。

註１　（）内数字はグループ当りマウス数を表わす。

上表の結果は非免疫原性ペプチド（４６９−４８６，５
００−５１１）を両親媒性ペプチドに隣接させて合成し
た場合、マウスは中性及び親水性領域に対する抗体を生
産できるようになったことを示した。従って、これらの
領域はより大きい両親媒性領域と結合し、リン脂質と複
合体化し、追加のリン脂質及びコレステロールと会合す
ることにより免疫原性とな７だ。

両親媒性構造を添加する方法として、精製したウィルス
糖タンパク質（ニス・グールドーフすゲライト（Ｓ、Ｇ
ｏｕｌｄ−ｆＯｇｅｒｉｔｅ）及びジェー・マンニノ（
Ｊ　、Ｍａｎｎｊｎｏ）、　　１−　カフＬ／　−ハ’
ｒ　ミＥユニ（＾ｎａ１．Ｂｉｏｃｈｅｍ、）　　（１
９８５年）１４８巻、１５〜２６ページ）を溶解したペ
プチド−脂質、リンＩｌｌ質及び単純な脂質と混合する
ことにより、いくらかの非免疫原性ペプチド−リン脂質
複合体に対してそれらが天然に存在する濃度の１／２０
０で添加され、複合物を室温でｐＨ７，２のリン酸緩衝
液添加食塩水に対してこれを３回交換しなから一晩透析
した。その結果を下の第３表に示す。

第３表非免疫原性ペプチド−リン脂質結合物を含むリボゾーム
への高度免疫原性タンパク質の添加の効果ペプチド　　
　ウィルス糖タンパク質　　Ｌｏｇ、。ＡＴ”−一一一
　　　　　インフルエンザ　ｏ、ｏ”（６）””−一一
一　　　　　　センダイ　　　　　　Ｏ，０（Ｓ）（Ｎ
ＡＮＰ）　３−　　　　　　　０．０　（６）（ＮＡＮ
Ｐ）３イア　７　／ｌ／　、ｍ　：／ザ　　３．４　＋
０．２（６）（ＮＡＮＰ）！ｌ　　　　　　　センダー
１’　　　　　　　　３．７　ｆＯ，５（５）ＩＬ−２
（＋−１２）−ｔｒａｎｓ　　　−−−−１，２±１．
３（６）ＩＣ−２（１−１２）−ｔｒａｎｓ　　インフ
ルエンザ　　３．５±０．３（６）ＩＬ−２（＋−１２
）−ｔｒａｎｓ　　　センダイ　　　　　　４．１　±
０．４（６）センダイ及びインフルエンザ糖タンパク買
に対する抗体力価は試験をしたすべてのマウスでＬＯｇ
ｔｏ４．５より大きかった。

註’　　ＡＴは免疫したペプチドに対する抗体力価を表
す。

註”　　（ＮＡＮＰ）３又はＩＬ−２（１−１２）−Ｌ
ｒａｎｓの両方で抗体が検出されなかった。

註０ｓ　（）内数字はグループ当りマウス数を表す。

第３表に示すように、ウィルス糖タンパク買の形にある
両親媒性分子の添加は、２つの前出の非免疫原性ペプチ
ドに抗体生産をもたらす。各々の場合、抗体力価の増加
はその対数値として２より大きい。

従って、中性又は親水性ペプチドをリン脂質と複合体化
し、両親媒性構造及び追加のリン脂質とコレステロール
とを含む調製物に添加すると免疫原性となる。

実施例５免疫応答を作るため脂質に非免疫原性ペプチドをカップ
リングすることの重要性第４表は免疫原性構造を作るため脂質に両親媒性ペプチ
ドをカップリングすることの重要性を示している。

第４表ペプチドＨＩＶｅｎｖ（４８７−５１１）−混合脂質結合物１旧
Ｖｅｎｖ（４８７−５１１）−混合脂質結合物１ｌｌｌ
ＨＩＶｅｎｖ（４Ｂ？−５１１）−混合脂質不存在１１
ｓ１１Ｌｏｇ１゜八Ｔ５．３　±０．２（５）５．４　±０．３　（５）０．０（５）無＠　ｐｕｓ中ＨＩＶｅｎｖ（４８７−５１１）””　
　　　　０．０（５）上表は次の方法でリン脂質に結合
したＨＩＶｅｎｖ、　（４８７−５１１）で免疫したマ
ウスの抗体力価を示している。

註’　　ＭＰＢ−ＰＥを小単層小嚢中の他のリン脂質及
びコレステロールと混合し、ペプチドと一晩室温で反応
させる。反応混合物をオクチル−β−Ｄ−グルコシド（
１０ｍｇ／ｍ５−１１３！［）に溶解し、ＣＭＦ−ＰＢ
Ｓに対して透析してペプチド−リン脂質複合体を形成す
る。

註”　　ＭＰＢ−ＰＥと混合したリン脂質とコレステロ
ールとをオクチル−β−Ｄ−グルコシド（１０ｍｇ・オ
クチル−β−Ｄ−グルコシド／ｍｇ・脂質）に溶解し、
ペプチドと一晩室温で反応させ、次いでＣＭＦ−ＰＢＳ
に対して反応させてペプチド−リン脂質複合体を形成す
る。

註０１ｍ合体化せず、予め形成した脂質−コレスチロー
ル構造物と混合するか、複合体化せず、無菌食塩水に可
溶化して注射する。

第４表の結果は、ペプチドを脂質としてリン脂質と複合
体化し、追加の脂質としてのリン脂質とステロールとし
てのコレステロールと会合すると免疫原性複合物が生産
される。この複合物は最初にカップリングするＭＰＢ−
ＰＥが既に構造中に他の脂質及びコレステロールと会合
しているか、オクチル−β−Ｄ−グルコシド中に溶解し
ていることにより溶液中で自由になっているかの如何に
かかわらず著しく免疫原性である。これに対して、ペプ
チドを予め形成した脂質−コレスチロール構造物と混合
し、リン脂質と複合体化しない場合は、免疫応答は観察
されない、更に、無菌ＰＢＳに可溶化した４８７−５１
１を動物に注射した場合も免疫応答は観察されない。

実施例６マラリアに対する合成ワクチンの組立てペプチド（ＮＡ
ＮＰ）、、はマラリア病原虫の感染防御に大きな免疫学
的重要性を持つ反復するペプチドである。しかしなから
、（ＮＡＮＰ）ｎは中性ペプチドであり、それ自身では
大部分の動物に対して免疫原性でない。

最近、マラリア病原虫から免疫学的に重要な両親媒性ペ
プチドが確認された（エム・エフ・グツド（Ｍ、Ｆ、Ｇ
ｏｏｄ）外、ｉＬ玉＞２（１９８７年）２３５巻、１０
５９〜１０６２ページ）。この両親媒性ペプチドは次の
配列、Ｐ−Ｓ−Ｄ−に−Ｈ−１−Ｅ−Ｑ−Ｙ−Ｌ−に−
に〜Ｉ−に−Ｎ−Ｓ−Ｉ−Ｓを持つ。

ワクチンは次のように生産される。

結合したペプチド、Ｐ−５−Ｄ−に−）１−１−Ｅ−Ｑ
−Ｙ−Ｌ−に−に−１−に−Ｎ−Ｓ−Ｉ　−５−（ＮＡ
ＮＰ）ｎ（ｎ＝３）が合成タンパク質合成装置により合
成された。

次いで、結合したペプチドをジチオスレイトールで還元
し、誘導体化したホスファチジルエタノールアミン（Ｐ
Ｅ）　、脂質混合物例えばスフィンゴミエリン、ホスフ
ァチジルセリン、及びホスファチジルコリンから成るそ
れ、及びステロールとしてコレステロールと共に、高限
界ミセル濃度におけるオクチル−β−Ｄ−グルコシドの
ような非イオン性界面活性剤中で可溶化した。

結合したペプチドは、マーチン及びバパハジョプーロス
、ジ　−　ル・　ブ・パ　オロジカル・ム主久五ユニ（
１９８２年）２５７巻、２８６〜２８８ページに記述さ
れたような公知の方法の一つにより誘導化したＰＥに架
橋結合される。

溶液はリン酸緩衝液添加食塩水（ｐＨ７，２）に対して
透析して免疫原性複合物の微粒子懸濁液を得、この懸濁
液はリン酸緩衝液添加食塩水中で適当な濃度に調節され
る。

実施例７ＨＩＶｍに対する合成ワクチンの組立て免疫学的重要性
を持つ次の非免疫原性親水性ペプチド、ＨＩ　Ｖｍ　：
　　（２９９〜３２９）Ｈ−Ｒ−Ｐ−Ｎ−Ｎ−Ｎ−Ｔ−
Ｒ−に−１−Ｒ−１−Ｒ−Ｅ−Ｐ−Ｅ−Ｒ−Ａ−Ｅ−に
−１−Ｅ−Ｎ−Ｍ−Ｒ−Ｑ−Ｃ−ＮＯ３と（７３５〜７
５２）Ｄ−Ｒ−Ｐ−Ｅ−Ｇ−１−Ｅ−Ｅ−Ｅ−Ｇ−Ｇ−
Ｅ−Ｒ−Ｄ−Ｒ−３が知られている。

次の免疫学的に重要な両親媒性ペプチドもＨＩＶｍ由来
であり、最近ケー・ビー・シース（Ｋ、Ｂ、Ｃｅａｓｅ
）　（プロシープ　ングス−プ・ショ　ル・アカデミ−
・　ブ・　　エンス・　プ・ニーニスニー（１９８７年
、６月）８４巻、４２４９〜４２５３ページ）によりＴ
ｔ（ＨＩＶｅｎｖ　（１１２−１２４）、　Ｈ−Ｅ−Ｄ
−１−１−３−Ｌ−Ｗ−）１−Ｑ−３−Ｌ−Ｋ）、及び
Ｔ。

（ＨＩＶｅｎｖ　　（４２８−４４３）、Ｌ−Ｑ−１−
Ｉ−Ｎ−Ｍ−Ｗ−Ｑ−Ｅ−Ｖ−Ｌ−Ａ−Ｍ−Ｘ−Ａ−Ｎ
Ｏ３）が、又ブトニー　（ＰｕＬｎｅｙ）ら（４Ｌｉと
之ヌ（１９８６年、１２月）２３４巻、１３９２〜１３
９５ページ）によすＨＩ　Ｖ　（３４０−３６８）、Ｈ
−Ｎ−Ｎ−Ｔ−Ｌ−に−Ｑ−１−Ｄ−３−に−Ｌ−Ｒ−
Ｅ−Ｑ−Ｆ−Ｇ−Ｎ−Ｎ−Ｌ　　Ｑ−３−３Ｇ−ＣＮＯ
３）が記述されている。

１つ又は複数のワクチンは本発明の方法により、タンパ
ク賀、１１質複合体と共に免疫原性複合物を形成するこ
とにより生産され、この場合前記タンパク質は次の、３
４０−３６８単独、４８７−５１１に結合した３４０−
３６８．３４０−３６８に結合した２９９−３２４．４
８７−５１１に結合した２９９−３２４．５７Ｂ−６０
８に結合した２９９−３２４、及び５７Ｂ−６０８に結
合した３４０−３６８である。

より好ましくは、上述のタンパク質−１１質複合体の１
つ以ｔを含む免疫原性複合物が形成され、例えば４８７
−５１１に結合した３４０−３６８と３７０−６０８に
結合した２９９−３２４が同複合物に含まれる。

この発明は詳細にその特別な具体化との関連で記述した
が、その鯖神と範囲から通説することなく、種々な変更
と修正ができることは当業者にとって明らかなことであ
る。

〔発明の効果〕

第２表の結果は非免疫原性ペプチドを両親媒性ペプチド
に隣接させて合成した場合、マウスに投与して動物が中
性及び親水性領域に対する抗体を生産できるようになっ
たことを示しており、これら領域はより大きい両親媒性
領域と結合し、リン脂質と複合体化し、追加のリン脂質
及びコレステロールと会合することにより免疫原性とな
ることを示している。

第３表の結果は、ウィルス糖タンパク質の形である両親
媒性ペプチドを非免疫原性ペプチド−脂質複合体に添加
すると、後者に抗体生産をもたらすことを示しており、
従って、中性又は親水性ペプチドをリン脂質と複合体化
し、両親媒性構造及び追加のリン脂質とコレステロール
を含む調製物を添加すると免疫原性になることを示して
いる。

以上の結果により、本来非免疫原性である合成及び天然
ペプチドに選択的に免疫原性を付与する方法が示された
。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明の免疫原性複合物に有用な種々なペプチ
ドの一次アミノ酸配列を示す。第２図、第３図、第４図及び第５図は本発明の免疫原性
複合物に有用なペプチドのホップ・アンド・ウッズ分析
から得られる輪郭である。第２図は両親媒性ペプチド、
ＨＩＶ　（４６９−５１１）とＨＩＶ　（４８７−５１
１）及び親水性ペプチド、ＨＩＶ　（４６９−４８５）
とＨＩＶ（５００５１１）の輪郭を示し、第３図は両親
媒性ペプチド、ＨＩ　Ｖ　（５７Ｂ−６０８）（７）輪
郭を示し、第４図は親木性ペプチド、ＨＩＶ（６４７−
６５９）の輪郭を示し、又第５図は中性ペプチド（ＮＡ
ＮＰ）ｎの輪郭を示す、★は親水性又は疎水性の程度を
示し、親木は一字アミノ酸略号の上に表し、疎水は一字
アミノ酸略号の下に表す。★の数が多いほど親水性又は
疎水性は大きい。第図第図

Claims

【特許請求の範囲】

（１）脂質に共役的に結合した非免疫原性両親媒性ペプ
チドから成るペプチド−脂質複合体から成る非免疫原性
ペプチドに対して選択的に抗体生産を誘導し又は増強す
る能力のある免疫原性複合物。
（２）ペプチド−脂質複合体は、更に１つ又は複数の脂
質と１つ又は複数のステロールとの混合物と会合してい
る請求項１記載の免疫原性複合物。
（３）脂質に共役的に結合した混成ペプチドから成るペ
プチド−脂質複合体から成り、前記混成ペプチドは（ａ
）非免疫原性親水性ペプチド、（ｂ）非免疫原性中性ペ
プチド、（ｃ）非免疫原性両親媒性ペプチド、及び（ｄ
）前記ペプチド（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）の任意の２つ
又はそれ以上の組合せから成る混成ペプチドから成る群
より選ばれる１つのペプチドに共役的に結合した非免疫
原性両親媒性ペプチドから成る１つ又は複数の非免疫原
性ペプチドに対して選択的に抗体生産を誘導し又は増強
する能力のある免疫原性複合物。
（４）ペプチド−脂質複合体は、更に１つ又は複数の脂
質と１つ又は複数のステロールとの混合物と会合してい
る請求項３記載の免疫原性複合物。
（５）第１のペプチド−脂質複合体及び１つ又は複数の
脂質と１つ又は複数のステロールとの混合物と会合して
いる１つ又は複数の追加のペプチド−脂質複合体から成
り、前記第１のペプチド−脂質複合体は（１）脂質に共役的
に結合した非免疫原性両親媒性ペプチド、及び（２）脂
質に共役的に結合した混成ペプチドから成る群より選ば
れる１員から成り、前記混成ペプチドは（ａ）非免疫原
性親水性ペプチド、（ｂ）非免疫原性中性ペプチド、（
ｃ）非免疫原性両親媒性ペプチド、及び前記ペプチド（
２）（ａ）、（２）（ｂ）及び（２）（ｃ）の任意の２
つ又はそれ以上の組合せから成る混成ペプチドから成る
群より選ばれるペプチドに共役的に結合した非免疫原性
両親媒性ペプチドから成り、前記１つ又は複数の追加のペプチド−脂質複合体は（１
）脂質に共役的に結合した非免疫原性親水性ペプチド、
（２）脂質に共役的に結合した非免疫原性中性ペプチド
、（３）脂質に共役的に結合した非免疫原性両親媒性ペ
プチド、及び（４）脂質に共役的に結合した混成ペプチ
ドから成る群より選ばれる１員又は複数員から成り、前
記混成ペプチドは（ａ）非免疫原性親水性ペプチド、（
ｂ）非免疫原性中性ペプチド、（ｃ）非免疫原性両親媒
性ペプチド、及び（ｄ）前記ペプチド（４）（ａ）、（
４）（ｂ）及び（４）（ｃ）の任意の２つ又はそれ以上
の組合せから成る群より選ばれるペプチドに共役的に結
合した非免疫原性両親媒性、親水性又は中性ペプチドか
ら成る１つ又は複数の非免疫原性ペプチドに対して選択
的に抗体生産を誘導し又は増強する能力のある免疫原性
複合物。
（６）混成ペプチドは非免疫原性両親媒性ペプチドに共
役的に結合した非免疫原性親水性ペプチドから成る請求
項３記載の免疫原性複合物。
（７）混成ペプチドは非免疫原性両親媒性ペプチドに共
役的に結合した非免疫原性中性ペプチドから成る請求項
３記載の免疫原性複合物。
（８）混成ペプチドは非免疫原性両親媒性ペプチドに共
役的に結合した非免疫原性親水性ペプチドから成る請求
項４記載の免疫原性複合物。
（９）混成ペプチドは非免疫原性両親媒性ペプチドに共
役的に結合した非免疫原性中性ペプチドから成る請求項
４記載の免疫原性複合物。
（１０）１つ又は複数の追加のペプチド−脂質複合体は
脂質に架橋結合した非免疫原性親水性ペプチドから成る
請求項５記載の免疫原性複合物。
（１１）１つ又は複数の追加のペプチド−脂質複合体は
脂質に架橋結合した非免疫原性中性ペプチドから成る請
求項５記載の免疫原性複合物。
（１２）ペプチド脂質複合体中の脂質はホスファチジル
エタノールアミンである請求項１記載の免疫原性複合物
。
（１３）ペプチド脂質複合体中の脂質はホスファチジル
エタノールアミンである請求項２記載の免疫原性複合物
。
（１４）ペプチド脂質複合体中の脂質はホスファチジル
エタノールアミンである請求項３記載の免疫原性複合物
。
（１５）ペプチド脂質複合体中の脂質はホスファチジル
エタノールアミンである請求項４記載の免疫原性複合物
。
（１６）ペプチド脂質複合体中の脂質はホスファチジル
エタノールアミンである請求項５記載の免疫原性複合物
。
（１７）ステロールはコレステロールである請求項２記
載の免疫原性複合物。
（１８）ステロールはコレステロールである請求項４記
載の免疫原性複合物。
（１９）ステロールはコレステロールである請求項５記
載の免疫原性複合物。
（２０）請求項１ないし請求項５のいずれか１項記載の
免疫原性複合物の２つ又はそれ以上の混合物から成る免
疫原性組成物。
（２１）（Ａ）（ｉ）脂質に共役的に結合した非免疫原
性両親媒性ペプチドから成るペプチド−脂質複合体と、（ｉｉ）１つ又は複数の脂質と１つ又は複数のステロー
ルとの混合物と会合している脂質に共役的に結合した非
免疫原性両親媒性ペプチドから成るペプチド−脂質複合
体と、（ｉｉｉ）脂質に共役的に結合した混成ペプチドから成
るペプチド−脂質複合体であって、前記混成ペプチドは
（ａ）非免疫原性親水性ペプチド、（ｂ）非免疫原性中
性ペプチド、（ｃ）非免疫原性両親媒性ペプチド、及び
（ｄ）前記ペプチド（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）の任意の
２つ又はそれ以上の組合せから成る混成ペプチドから成
る群より選ばれる１つのペプチドと共役的に結合した非
免疫原性両親媒性ペプチドから成る前記脂質に共役的に
結合した混成ペプチドから成るペプチド−脂質複合体と
、（ｉｖ）１つ又は複数の脂質と１つ又は複数のステロー
ルとの混合物と会合している脂質に共役的に結合した混
成ペプチドから成るペプチド−脂質複合体であって、前
記混成ペプチドは（ａ）非免疫原性親水性ペプチド、（
ｂ）非免疫原性中性ペプチド、（ｃ）非免疫原性両親媒
性ペプチド、及び（ｄ）前記ペプチド（ａ）、（ｂ）及
び（ｃ）の任意の２つ又はそれ以上の組合せから成る混
成ペプチドから成る群より選ばれる１つのペプチドと共
役的に結合した非免疫原性両親媒性ペプチドから成る前
記１つ又は複数の脂質と１つ又は複数のステロールとの
混合物と会合している脂質に共役的に結合した混成ペプ
チドから成るペプチド−脂質複合体と、（ｖ）第１のペプチド−脂質複合体と１つ又は複数の脂
質と１つ又は複数のステロールとの混合物と会合してい
る１つ又は複数の追加のペプチド−脂質複合体であって
、前記第１のペプチドは（１）脂質に共役的に結合した非
免疫原性ペプチド、及び（２）脂質に共役的に結合した
混成ペプチドであって、前記混成ペプチドは（ａ）非免
疫原性親水性ペプチド、（ｂ）非免疫原性中性ペプチド
、（ｃ）非免疫原性両親媒性ペプチド、及び（ｄ）前記
ペプチド（２）（ａ）、（２）（ｂ）及び（２）（ｃ）
の任意の２つ又はそれ以上の組合せから成る混成ペプチ
ドから成る群より選ばれるペプチドに共役的に結合した
両親媒性ペプチドから成る前記脂質に共役的に結合した
混成ペプチドから成る群より選ばれる１員から成り、前記１つ又は複数の脂質と１つ又は複数のステロールと
の混合物と会合している１つ又は複数の追加のペプチド
−脂質複合体は（１）脂質に共役的に結合した非免疫原
性親水性ペプチド、（２）脂質に共役的に結合した非免
疫原性中性ペプチド、（３）脂質に共役的に結合した非
免疫原性両親媒性ペプチド、及び（４）脂質に共役的に
結合した混成ペプチドであって、前記混成ペプチドは（
ａ）非免疫原性親水性ペプチド、（ｂ）非免疫原性中性
ペプチド、（ｃ）非免疫原性両親媒性ペプチド、及び（
ｄ）前記ペプチド（４）（ａ）、（４）（ｂ）及び（４
）（ｃ）の任意の２つ又はそれ以上の組合せから成る混
成ペプチドから成る群より選ばれるペプチドに共役的に
結合した非免疫原性両親媒性、親水性又は中性ペプチド
から成る前記脂質に共役的に結合した混成ペプチドから
成る群より選ばれる１員又は複数員から成る前記第１の
ペプチド−脂質複合体と前記１つ又は複数の脂質と１つ
又は複数のステロールとの混合物と会合している１つ又
は複数の追加のペプチド−脂質複合体とから成る群より
選ばれる１つ又は複数の免疫原性複合物と、（Ｂ）薬学的に受容可能な担体、希釈剤又は賦形剤との
混合物から成る選択的に抗体生産を誘導し又は増強する
ための医薬組成物。
（２２）ペプチド−脂質複合体中の脂質はホスファチジ
ルエタノールアミンである請求項２１記載の医薬組成物
。
（２３）免疫原性複合物（ｉｉ）、（ｉｖ）及び（ｖ）
中のステロールはコレステロールである請求項２１記載
の医薬組成物。
（２４）免疫応答が外来物に対する感染防御の正常手段
である宿主に（Ａ）（ｉ）脂質に共役的に結合した非免疫原性両親媒
性ペプチドから成るペプチド−脂質複合体と、（ｉｉ）１つ又は複数の脂質と１つ又は複数のステロー
ルとの温合物と会合している脂質に共役的に結合した非
免疫原性両親媒性ペプチドから成るペプチド−脂質複合
体と、（ｉｉｉ）脂質に共役的に結合した混成ペプチドから成
るペプチド−脂質複合体であって、前記混成ペプチドは
（ａ）非免疫原性親水性ペプチド、（ｂ）非免疫原性中
性ペプチド、（ｃ）非免疫原性両親媒性ペプチド、及び
（ｄ）前記ペプチド（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）の任意の
２つ又はそれ以上の組合せから成る混成ペプチドから成
る群より選ばれる１つのペプチドと共役的に結合した非
免疫原性両親媒性ペプチドから成る前記脂質に共役的に
結合した混成ペプチドから成るペプチド−脂質複合体と
、（ｉｖ）１つ又は複数の脂質と１つ又は複数のステロー
ルとの混合物と会合している脂質に共役的に結合した混
成ペプチドから成るペプチド−脂質複合体であって、前
記混成ペプチドは（ａ）非免疫原性親水性ペプチド、（
ｂ）非免疫原性中性ペプチド、（ｃ）非免疫原性両親媒
性ペプチド、及び（ｄ）前記ペプチド（ａ）、（ｂ）及
び（ｃ）の任意の２つ又はそれ以上の組合せから成る混
成ペプチドから成る群より選ばれる１つのペプチドと共
役的に結合した非免疫原性両親媒性ペプチドから成る前
記１つ又は複数の脂質と１つ又は複数のステロールとの
混合物と会合している脂質に共役的に結合した混成ペプ
チドから成るペプチド−脂質複合体と、（ｖ）第１のペプチド−脂質複合体と１つ又は複数の脂
質と１つ又は複数のステロールとの混合物と会合してい
る１つ又は複数の追加のペプチド−脂質複合体であって
、前記第１のペプチドは（１）脂質に共役的に結合した非
免疫原性ペプチド、及び（２）脂質に共役的に結合した
混成ペプチドであって、前記混成ペプチドは（ａ）非免
疫原性親水性ペプチド、（ｂ）非免疫原性中性ペプチド
、（ｃ）非免疫原性両親媒性ペプチド、及び（ｄ）前記
ペプチド（２）（ａ）、（２）（ｂ）及び（２）（ｃ）
の任意の２つ又はそれ以上の組合せから成る混成ペプチ
ドから成る群より選ばれるペプチドに共役的に結合した
両親媒性ペプチドから成る前記脂質に共役的に結合した
混成ペプチドから成る群より選ばれる１員から成り、前記１つ又は複数の脂質と１つ又は複数のステロールと
の混合物と会合している１つ又は複数の追加のペプチド
−脂質複合体は（１）脂質に共役的に結合した非免疫原
性親水性ペプチド、（２）脂質に共役的に結合した非免
疫原性中性ペプチド、（３）脂質に共役的に結合した非
免疫原性両親媒性ペプチド、及び（４）脂質に共役的に
結合した混成ペプチドであって、前記混成ペプチドは（
ａ）非免疫原性親水性ペプチド、（ｂ）非免疫原性中性
ペプチド、（ｃ）非免疫原性両親媒性ペプチド、及び（
ｄ）前記ペプチド（４）（ａ）、（４）（ｂ）及び（４
）（ｃ）の任意の２つ又はそれ以上の組合せから成る混
成ペプチドから成る群より選ばれるペプチドに共役的に
結合した非免疫原性両親媒性、親水性又は中性ペプチド
から成る前記脂質に共役的に結合した混成ペプチドから
成る群より選ばれる１員又は複数員から成る前記第１の
ペプチド−脂質複合体と前記１つ又は複数の脂質と１つ
又は複数のステロールとの混合物と会合している１つ又
は複数の追加のペプチド−脂質複合体とから成る群より
選ばれる１つ又は複数の免疫原性複合物と、（Ｂ）薬学的に受容可能な担体、希釈剤又は賦形剤との
混合物を投与することから成る選択的に抗体生産を誘導
し又は増強する方法。
（２５）ペプチド−脂質複合体中の脂質はホスファチジ
ルエタノールアミンである請求項２４記載の方法。
（２６）免疫原性複合物（ｉｉ）、（ｉｖ）及び（ｖ）
中のステロールはコレステロールである請求項２４記載
の方法。