JPH0216451A - 流体標本を診断装置に供給する装置および分析成分の検定法 - Google Patents
流体標本を診断装置に供給する装置および分析成分の検定法Info
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- JPH0216451A JPH0216451A JP1071624A JP7162489A JPH0216451A JP H0216451 A JPH0216451 A JP H0216451A JP 1071624 A JP1071624 A JP 1071624A JP 7162489 A JP7162489 A JP 7162489A JP H0216451 A JPH0216451 A JP H0216451A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
(産業上の利用分野)
本発明は、生態外診断試験装置に関する。より具体的に
は、本発明は制御された量の流体標本を試験装置に供給
するための装置に関する。
は、本発明は制御された量の流体標本を試験装置に供給
するための装置に関する。
(従来の技術及びその課題)
免疫学における最近の発達の結果、フロースロー装置と
して公知の診断装置に新たな型式の装置が登場している
。一般的に、これらの装置により行われる試験は従来の
免疫学的詮所検定法と比べてはるかに容易である。これ
らの方法は分注の精度がより低くて済み、又、操作手順
も少なくて済む、これらの装置は、又測定結果を読み取
るための高価な装置が不要である。
して公知の診断装置に新たな型式の装置が登場している
。一般的に、これらの装置により行われる試験は従来の
免疫学的詮所検定法と比べてはるかに容易である。これ
らの方法は分注の精度がより低くて済み、又、操作手順
も少なくて済む、これらの装置は、又測定結果を読み取
るための高価な装置が不要である。
かかるフロースロー装置は、ヴアルカース(Valki
rs)への米国特許第4,632,901号に開示され
ている。この特許に開示された装置は抗体と境を接する
か、又は流体標本から細胞又は細胞小片を抽出すること
が可能な膜又はフィルタである第1部材を備えている。
rs)への米国特許第4,632,901号に開示され
ている。この特許に開示された装置は抗体と境を接する
か、又は流体標本から細胞又は細胞小片を抽出すること
が可能な膜又はフィルタである第1部材を備えている。
この第1部材の機能は分析成分を酸膜又はフィルタ上に
捕集することである。
捕集することである。
かかるフロースロー装置は、該第1部材を通って標本を
流動させる第2部材をさらに備えている。
流動させる第2部材をさらに備えている。
使用時、流体標本及び液体試薬は第1部材の片面に置か
れる。試薬は第1部材を通って第2部材まで流動する1
分析成分の特別の結合種に結合することにより、又はそ
の分析成分に関係する細胞又は細胞片を物理的に遮断す
ることにより、第1部材上に捕集される分析成分は全て
トレーサ装置により検出される。このトレーサ装置の試
薬も又、該第1部材の第1面に使用されて、第2部材ま
で流動する。第1部材上に検出可能な反応が存在するか
否かにより、その第1部材と境を接する分析成分の有無
をしることが出来る。
れる。試薬は第1部材を通って第2部材まで流動する1
分析成分の特別の結合種に結合することにより、又はそ
の分析成分に関係する細胞又は細胞片を物理的に遮断す
ることにより、第1部材上に捕集される分析成分は全て
トレーサ装置により検出される。このトレーサ装置の試
薬も又、該第1部材の第1面に使用されて、第2部材ま
で流動する。第1部材上に検出可能な反応が存在するか
否かにより、その第1部材と境を接する分析成分の有無
をしることが出来る。
別のフロースロー装置はトム(rom )等への米国特
許第4,366.241号に記載されている。このフロ
ースロー装置は免疫吸着領域と、及び該免疫吸着領域か
ら液体を受け取る関係にある液体受理領域とを備えてい
る。この免疫吸着領域は、該免疫吸着領域と非拡散状態
に境を接する一対の免疫学的部材を有している。使用時
、流体標本及び信号発生装置の試薬が免疫吸着領域に置
かれる。検出可能な反応が該免疫吸着領域に存在するか
否かにより、標本中の分析成分の有無を知ることが出来
る。
許第4,366.241号に記載されている。このフロ
ースロー装置は免疫吸着領域と、及び該免疫吸着領域か
ら液体を受け取る関係にある液体受理領域とを備えてい
る。この免疫吸着領域は、該免疫吸着領域と非拡散状態
に境を接する一対の免疫学的部材を有している。使用時
、流体標本及び信号発生装置の試薬が免疫吸着領域に置
かれる。検出可能な反応が該免疫吸着領域に存在するか
否かにより、標本中の分析成分の有無を知ることが出来
る。
上記トムの米国特許は、幾つかの装置及び検定手順を開
示している。該特許は免疫吸着層と液体吸着領域との間
に1又は2以上の層を介在させることが出来ることを明
らかにしている。これらの層は流体が液体吸着層から免
疫吸着層まで移行するのを阻止するバリヤーとして、又
フィルタとして、あるいは流量制御手段等として機能す
る。
示している。該特許は免疫吸着層と液体吸着領域との間
に1又は2以上の層を介在させることが出来ることを明
らかにしている。これらの層は流体が液体吸着層から免
疫吸着層まで移行するのを阻止するバリヤーとして、又
フィルタとして、あるいは流量制御手段等として機能す
る。
これらフロースロー装置に対する要求条件の1つは、典
型的に特有の結合反応により、標本を上部層に対して十
分に!に露させ分析成分が同上部層の上に捕集されるよ
うにすることである。その後、トレーサの試薬を該上部
層に十分に&露させて適当な反応が生ずるようにする必
要がある。装置が流体を層を通じて過度に急速に吸引し
た場合、かかる反応は発生し得ない、 1987年10
月8日付けにて共同出願された米国特許出願第106.
757号は、上部面に試験領域を有する多孔質の支持体
を通る流量を制御するときの問題点を対象としている。
型的に特有の結合反応により、標本を上部層に対して十
分に!に露させ分析成分が同上部層の上に捕集されるよ
うにすることである。その後、トレーサの試薬を該上部
層に十分に&露させて適当な反応が生ずるようにする必
要がある。装置が流体を層を通じて過度に急速に吸引し
た場合、かかる反応は発生し得ない、 1987年10
月8日付けにて共同出願された米国特許出願第106.
757号は、上部面に試験領域を有する多孔質の支持体
を通る流量を制御するときの問題点を対象としている。
この発明の装置は、十分に大きい孔径を有し、未結合の
トレーサ及び分析成分が吸着層まで流動することが出来
るようにしである。多孔質の層及び吸着層は協働して、
多孔質層を通って吸着層に流動する試薬の流量を制御し
得るようにしである。
トレーサ及び分析成分が吸着層まで流動することが出来
るようにしである。多孔質の層及び吸着層は協働して、
多孔質層を通って吸着層に流動する試薬の流量を制御し
得るようにしである。
この装置は、又多孔質層と吸着層の間に位置決めされた
流量制御層を備えることが出来る。
流量制御層を備えることが出来る。
グループAの31!鎖球菌を検出するために最近開発さ
れた試験キットは、特許出願第106,757号に記載
された発明を利用している。該試験キットは、患者の喉
から採取された標本の分析成分を検出するために必要な
全ての試薬及び用品を備えている。
れた試験キットは、特許出願第106,757号に記載
された発明を利用している。該試験キットは、患者の喉
から採取された標本の分析成分を検出するために必要な
全ての試薬及び用品を備えている。
標本はDispensTube (登録商標)装置によ
り抽出される。この抽出装置は、その中に標本及び抽出
試薬が加えられる試験管である。標本の抽出後、ドロッ
パトップが該管の上に位置決めされ、抽出された標本は
試験装置に分与することが出来る。
り抽出される。この抽出装置は、その中に標本及び抽出
試薬が加えられる試験管である。標本の抽出後、ドロッ
パトップが該管の上に位置決めされ、抽出された標本は
試験装置に分与することが出来る。
ドロッパトップは、標本中に存在する大きな細胞片を捕
集するための粗なフィルタを備えている。
集するための粗なフィルタを備えている。
標本が抽出されたならば、全部の検定法は惺か5分足ら
ずにて完了させることが出来る。試験キットは極めて小
さい値のグループAの連鎖球菌を検出することが出来る
。
ずにて完了させることが出来る。試験キットは極めて小
さい値のグループAの連鎖球菌を検出することが出来る
。
上述のDirectigen 1−2−3 (登録商標
)試験キット(マレーランド州、コツケイズビルのBe
ctonDickinson 14icrobiolo
gy Systemsの製品)は、グループAの連鎖球
菌に対して極めて良好に作用することが出来るが、その
他の分析成分を検定する場合、流量を制御し得る追加的
機能を有することが望ましい。
)試験キット(マレーランド州、コツケイズビルのBe
ctonDickinson 14icrobiolo
gy Systemsの製品)は、グループAの連鎖球
菌に対して極めて良好に作用することが出来るが、その
他の分析成分を検定する場合、流量を制御し得る追加的
機能を有することが望ましい。
極めて鋭敏でかつ特定の検定法の開発に伴い、トレーサ
の特定の結合種に結合し、さらに試験装置の分析成分の
固定層に不明確な状態にて結合する分析物以外の物質が
存在することにより、偽りの正の結果が出るという問題
点が生じている。このため、はつかねずみからの抗血清
から得た単クーロン性の抗体をトレーサ装置内にて使用
して行う検定法の場合、はつかねずみに対する抗体を有
する人から得た標本は誤った正の値を示す結果になる。
の特定の結合種に結合し、さらに試験装置の分析成分の
固定層に不明確な状態にて結合する分析物以外の物質が
存在することにより、偽りの正の結果が出るという問題
点が生じている。このため、はつかねずみからの抗血清
から得た単クーロン性の抗体をトレーサ装置内にて使用
して行う検定法の場合、はつかねずみに対する抗体を有
する人から得た標本は誤った正の値を示す結果になる。
かかる理由のため、検定法に使用する抗血清を作るため
の種に対する抗体が存在することに起因する、検定法の
有効性の低下を解消することが必要とされている。
の種に対する抗体が存在することに起因する、検定法の
有効性の低下を解消することが必要とされている。
(課題を解決するための手段)
本発明は、制御された流量の流体標本を生態外の診断装
置に供給するための装置である。この装置は流体標本を
受け取るための凹所と、該凹所の底部に形成された開口
部と、及び該開口部を覆う流量制御膜とを備えている。
置に供給するための装置である。この装置は流体標本を
受け取るための凹所と、該凹所の底部に形成された開口
部と、及び該開口部を覆う流量制御膜とを備えている。
該開口部の寸法、及び流量制御膜の孔径は、凹所内の流
体が制御された流量にて診断装置に供給されるように選
択される。
体が制御された流量にて診断装置に供給されるように選
択される。
本発明の別の特徴によると、この装置は検定の妨害にな
る種を選択的に除去する一方、分析成分が凹所から流出
するのを許容する手段を備えている。望ましくは、検定
妨害物質を除去するための手段は、かかる妨害物質を感
知し、分析成分には結合しない特異的な結合種である。
る種を選択的に除去する一方、分析成分が凹所から流出
するのを許容する手段を備えている。望ましくは、検定
妨害物質を除去するための手段は、かかる妨害物質を感
知し、分析成分には結合しない特異的な結合種である。
妨害物質を除去するためのかかる特異的な結合種は流量
制御膜に便宜な方法にて固着される。
制御膜に便宜な方法にて固着される。
本発明のさらに別の特徴によると、流量制御膜はその上
に検定用試薬が剥離可能なように被覆されている。この
ため、試薬は使用されるまで乾燥状態に貯蔵することが
出来る。標本及びその他の流体が流量制御膜を通るとき
、試薬は試験装置に溶出する。
に検定用試薬が剥離可能なように被覆されている。この
ため、試薬は使用されるまで乾燥状態に貯蔵することが
出来る。標本及びその他の流体が流量制御膜を通るとき
、試薬は試験装置に溶出する。
好適な構造において、装置は凹所を備えて形成されてお
り、該凹所の底部は試験装置の試験領域と係合し得るよ
うな寸法及び形状を備えている。
り、該凹所の底部は試験装置の試験領域と係合し得るよ
うな寸法及び形状を備えている。
この構造により、該装置は、制御された流量の流体を試
験領域の全表面に供給する働きをする。最も好適な構造
の装置は凹所に固着されたハンドルをさらに備えている
。このハンドルにより凹所内に入った流体に接触するこ
となく、装置を取り扱うことが可能となる。この装5置
を使用し、トレーサ試薬が診断装置に加えられる前に該
゛装置を廃棄しなければならない場合、このハンドルを
使用することは特に望ましい。
験領域の全表面に供給する働きをする。最も好適な構造
の装置は凹所に固着されたハンドルをさらに備えている
。このハンドルにより凹所内に入った流体に接触するこ
となく、装置を取り扱うことが可能となる。この装5置
を使用し、トレーサ試薬が診断装置に加えられる前に該
゛装置を廃棄しなければならない場合、このハンドルを
使用することは特に望ましい。
本発明の試験キットは、上述の流量制御装置と、その流
体供給性能に適合した生態外の診断装置とを備えている
。かくて、流体供給装置と診断装置を流動する流量が、
特定の分析成分及び検定法に適合している装置の開発が
可能となる。
体供給性能に適合した生態外の診断装置とを備えている
。かくて、流体供給装置と診断装置を流動する流量が、
特定の分析成分及び検定法に適合している装置の開発が
可能となる。
本発明の方法において、流体標本は流体供給装置の凹所
に供給され、流量制御膜と交差して開口部から診断装置
の試験領域まで流動することが出来る。その後、トレー
サ装置の試薬は流体供給装置を通じて、又は、流体供給
装置とは独立的に試験領域に供給することが出来る。か
くて、試験領域を共役するトレーサの流量を制御するこ
とが重要である場合、流体供給装置を使用してこの流体
の流量を制御することが可能となる。同様にして、多数
の流体供給装置を使用し、著しく異なる寸法の種を制御
された流量にて供給することが出来る装置の開発も可能
となる。
に供給され、流量制御膜と交差して開口部から診断装置
の試験領域まで流動することが出来る。その後、トレー
サ装置の試薬は流体供給装置を通じて、又は、流体供給
装置とは独立的に試験領域に供給することが出来る。か
くて、試験領域を共役するトレーサの流量を制御するこ
とが重要である場合、流体供給装置を使用してこの流体
の流量を制御することが可能となる。同様にして、多数
の流体供給装置を使用し、著しく異なる寸法の種を制御
された流量にて供給することが出来る装置の開発も可能
となる。
(実施例)
添付図面を参照すると、本発明の供給装置は、その頂部
に外方に伸長するフランジ11及び垂下する側壁12を
有する凹所10を備えている。この垂下する側壁12の
端末は底部13にある。底部13の開口部14により凹
所10内の流体が流出することが出来る。供給装置は凹
所10に固着されたハンドル20を備えることが望まし
い、このハンドル20は該ハンドル20の他部分よりも
肉厚が薄い断面を有する部分21を有し、該ハンドル2
0が容易にたわむことができるようにすることが望まし
い。
に外方に伸長するフランジ11及び垂下する側壁12を
有する凹所10を備えている。この垂下する側壁12の
端末は底部13にある。底部13の開口部14により凹
所10内の流体が流出することが出来る。供給装置は凹
所10に固着されたハンドル20を備えることが望まし
い、このハンドル20は該ハンドル20の他部分よりも
肉厚が薄い断面を有する部分21を有し、該ハンドル2
0が容易にたわむことができるようにすることが望まし
い。
凹所10及びハンドル20は成形により一体に形成する
ことが望ましい、材料の選択は重要ではない、当業者は
適当なプラスチック材料を熟知している。凹所10は例
えば、400μmの流体標本を保持するのに十分な大き
さであることを要する。
ことが望ましい、材料の選択は重要ではない、当業者は
適当なプラスチック材料を熟知している。凹所10は例
えば、400μmの流体標本を保持するのに十分な大き
さであることを要する。
開口部14は当該検定法を実施するのに望ましい流量を
実現し得るような寸法にする。この開口部14は、0.
13 cm乃至0.58 am (0,05乃至0.0
2インチ)の範囲の直径を備える。該開口部14は0.
3 am(0,12インチ)の直径を備えることが望ま
しい。
実現し得るような寸法にする。この開口部14は、0.
13 cm乃至0.58 am (0,05乃至0.0
2インチ)の範囲の直径を備える。該開口部14は0.
3 am(0,12インチ)の直径を備えることが望ま
しい。
流量制御B30は凹所10の底部に固着されている。こ
の流量制御膜30は当業者に公知の多数の販売業者から
入手することが出来る。現在好適なものは、孔径が3.
0μmであるナイロン66の膜であるにューヨーク州1
1548、イーストヒルズのpall Corpora
tionから販売されているl麟mun−odyne
(登録商標))である、この膜は、接着剤と共に、熱密
封及び超音波溶接といった任意の適当な方法により凹所
10に固着することが出来る。
の流量制御膜30は当業者に公知の多数の販売業者から
入手することが出来る。現在好適なものは、孔径が3.
0μmであるナイロン66の膜であるにューヨーク州1
1548、イーストヒルズのpall Corpora
tionから販売されているl麟mun−odyne
(登録商標))である、この膜は、接着剤と共に、熱密
封及び超音波溶接といった任意の適当な方法により凹所
10に固着することが出来る。
本発明の好適な試験キットは上述の供給装置及び第3図
乃至第5図に図示したフロースルー型式の診断装置を利
用するものである。この試験装置40は上面及び下面、
並びにその上面に形成された試験領域48を有する多孔
質な支持体41から構成されている。多孔質な支持体4
1の下面に隣接して、流量制御層42がある。この流量
制御層42の直下には多孔質のスペーサ層43がありま
たこのスペーサ層43の直下には吸収層44が設けられ
ている。
乃至第5図に図示したフロースルー型式の診断装置を利
用するものである。この試験装置40は上面及び下面、
並びにその上面に形成された試験領域48を有する多孔
質な支持体41から構成されている。多孔質な支持体4
1の下面に隣接して、流量制御層42がある。この流量
制御層42の直下には多孔質のスペーサ層43がありま
たこのスペーサ層43の直下には吸収層44が設けられ
ている。
試験装置の層41.42.43及び44は例えば、これ
らの層を互いに縫合するといった、任意の適当な方法に
て互いに取り付けることが出来る。
らの層を互いに縫合するといった、任意の適当な方法に
て互いに取り付けることが出来る。
組み立てられた装置は基部45及びカバー46を備える
容器内に位置決めすると都合がよい、多孔質な支持体4
1の上方に位置するカバー46は試験領域の上方に位置
する適当な穴47を有する隆起部分を備えている。図示
するように、試験領域48はこの穴47により画成され
た領域内に位置決めされた多孔質な支持体の背後部分に
より完全に囲繞された三角形状を呈している。
容器内に位置決めすると都合がよい、多孔質な支持体4
1の上方に位置するカバー46は試験領域の上方に位置
する適当な穴47を有する隆起部分を備えている。図示
するように、試験領域48はこの穴47により画成され
た領域内に位置決めされた多孔質な支持体の背後部分に
より完全に囲繞された三角形状を呈している。
カバー46は基部45の側部から上方に伸長する歯状突
起4つにより多孔質な支持体41の上方に支持されてい
る。この歯状突起49は十分な高さを備え、試験装置4
0の側部に換気するための空気スペース50を提供し得
る。
起4つにより多孔質な支持体41の上方に支持されてい
る。この歯状突起49は十分な高さを備え、試験装置4
0の側部に換気するための空気スペース50を提供し得
る。
カバー46の穴47を囲繞する隆起部分は、着色領域5
1を備えることが出来る。この着色領域51の色はカバ
ーの色および試験領域にて発生される色と対照的な色と
し、一般的に色により判定される試験結果をより一暦良
く読み取ることが出来るようにする。好適な実施例にお
いて、基部45、及び着色領域51を有するカバー46
は、プラスチック材料にて形成される。
1を備えることが出来る。この着色領域51の色はカバ
ーの色および試験領域にて発生される色と対照的な色と
し、一般的に色により判定される試験結果をより一暦良
く読み取ることが出来るようにする。好適な実施例にお
いて、基部45、及び着色領域51を有するカバー46
は、プラスチック材料にて形成される。
望ましくは、供給装置は、凹所10が容器頂部の穴47
に嵌入し得るように形成される。最も望ましくは、凹所
の底部が穴47の上面と嵌合し得るような寸法及び形状
にする。使用時、流量を制御しようとする標本及び試薬
は、凹所に供給され膜を通って試験領域まで流動する。
に嵌入し得るように形成される。最も望ましくは、凹所
の底部が穴47の上面と嵌合し得るような寸法及び形状
にする。使用時、流量を制御しようとする標本及び試薬
は、凹所に供給され膜を通って試験領域まで流動する。
供給装置が必要でなくなった場合、ハンドルを利用して
該供給装置を取り外し、廃棄することが出来る。
該供給装置を取り外し、廃棄することが出来る。
本発明の別の特徴において、供給装置は検定に使用され
る流体から干渉物質を除去するという別の機能を果す、
この機能は、分析成分及び検定中活性な種には結合しな
いが、干渉物質には結合する特異的な結合種を凹所の内
壁、流量制御膜又はその両方に被覆することにより実現
することが出来る。流量制御膜はかかる特異的な結合種
にて被覆することが望ましい1例えば、検定がはつかね
ずみ、ウサギ又はやぎの抗体を使用し、極めて微量の分
析成分物を検出しようとする場合、試薬を作るために使
用された動物の種に対する患者の血清中の抗体は偽りの
正の値を示すことがある。この問題点は、モノクロール
抗体を使用する場合にも発生する。
る流体から干渉物質を除去するという別の機能を果す、
この機能は、分析成分及び検定中活性な種には結合しな
いが、干渉物質には結合する特異的な結合種を凹所の内
壁、流量制御膜又はその両方に被覆することにより実現
することが出来る。流量制御膜はかかる特異的な結合種
にて被覆することが望ましい1例えば、検定がはつかね
ずみ、ウサギ又はやぎの抗体を使用し、極めて微量の分
析成分物を検出しようとする場合、試薬を作るために使
用された動物の種に対する患者の血清中の抗体は偽りの
正の値を示すことがある。この問題点は、モノクロール
抗体を使用する場合にも発生する。
本発明のさらに別の特徴及び利点は、説明上、単に一例
として掲げた以下の実施例の記載から明らかになるであ
ろう。
として掲げた以下の実施例の記載から明らかになるであ
ろう。
比較例
改貫じ←(ΩJJL
孔径5μmの5ehleieher & 5ehuel
lニトロセルロース膜は、米国特許第4,670,38
2号に記載された連鎖球状白色カンジダの細胞質抗原に
対するモノクロール抗体50μmにて被覆されている。
lニトロセルロース膜は、米国特許第4,670,38
2号に記載された連鎖球状白色カンジダの細胞質抗原に
対するモノクロール抗体50μmにて被覆されている。
この被覆溶液は0.2zのNaN、を含有するリン酸#
1衝食塩水(0,IN、 pH6,0)中に100μg
/m +の抗体を含んでいる。乾燥後、酸膜はリン酸M
街食塩水(0,I N、pH8,0)中にて0.5$ノ
ゼラチンによりブロックし、次いで、膜を乾燥させる。
1衝食塩水(0,IN、 pH6,0)中に100μg
/m +の抗体を含んでいる。乾燥後、酸膜はリン酸M
街食塩水(0,I N、pH8,0)中にて0.5$ノ
ゼラチンによりブロックし、次いで、膜を乾燥させる。
試験装置は、ニトロセルロース膜を層状の複合体の頂部
の上に位置決めすることにより組み立てる。2つの底部
層は、吸収性のセルロース紙(厚み約6.35mm ;
1/4″)とする、これら底部層の上には、レーヨン
の不布織ウェブ(Schleicher& 5chue
llCat、 no、 5−S)から成る多孔質のスペ
ーサ層がある。これら3つの層は互いに縫合され、その
頂部にニトロセルロースの多孔質の支持体を位置決めす
る0組み立てられた複合体は、1cm2であり、その厚
みは0.5c−である、このニトロセルロース膜上の抗
体部分は、三角形の形状をしている。この複合体は図示
するように、容器内に収容する。
の上に位置決めすることにより組み立てる。2つの底部
層は、吸収性のセルロース紙(厚み約6.35mm ;
1/4″)とする、これら底部層の上には、レーヨン
の不布織ウェブ(Schleicher& 5chue
llCat、 no、 5−S)から成る多孔質のスペ
ーサ層がある。これら3つの層は互いに縫合され、その
頂部にニトロセルロースの多孔質の支持体を位置決めす
る0組み立てられた複合体は、1cm2であり、その厚
みは0.5c−である、このニトロセルロース膜上の抗
体部分は、三角形の形状をしている。この複合体は図示
するように、容器内に収容する。
良庇髭Iα11
凹所及びハンドルは、ポリスチレン樹脂(オークランド
州、バートレイズビルのPh1llips Petro
leu−の製品であるに一樹脂KRO3)から成形する
。
州、バートレイズビルのPh1llips Petro
leu−の製品であるに一樹脂KRO3)から成形する
。
凹所は外径が1.0 amの円筒形である。この凹所の
容積は400μmであり、その底部には直径0.3 a
mの開口部が形成されている。該凹所はフロースルー装
置の孔にきちっと嵌まる。
容積は400μmであり、その底部には直径0.3 a
mの開口部が形成されている。該凹所はフロースルー装
置の孔にきちっと嵌まる。
流量制御膜が凹所の底部に熱密封されている。
酸膜は凹所底部の開口部を完全に覆っている。同腹はナ
イロン66にて形成する。平均孔径3μmの膜及び1.
2μmの膜にューヨーク州、イーストヒルズのPa1l
Corporationの製品である、それぞれ1m
1Ilunodtne I Cat、No、 81八0
3011C5及びB1^012HC5)を有する装置が
形成される。
イロン66にて形成する。平均孔径3μmの膜及び1.
2μmの膜にューヨーク州、イーストヒルズのPa1l
Corporationの製品である、それぞれ1m
1Ilunodtne I Cat、No、 81八0
3011C5及びB1^012HC5)を有する装置が
形成される。
制用
既知の濃度の連鎖球状白色ガンシダ菌の細胞形質抗体(
48−50kD)を含有する血清標本は、500μg/
ml、200 B/++l、100 ng/s+1.5
0ng/+*l及び25nH/mlの濃度にて抗体を接
種する。
48−50kD)を含有する血清標本は、500μg/
ml、200 B/++l、100 ng/s+1.5
0ng/+*l及び25nH/mlの濃度にて抗体を接
種する。
上1!二ケ!戸艷傅−
A、リボゾーム粒子標識の準備
1 、100 mlの丸型底部の回転蒸発フラスコに次
ぎのらのを加える。
ぎのらのを加える。
a 、 50 Bのコレストロール(Sigma #c
)l−S)b 、 94 mgのdistearoyl
ホスファチジルコリン(^vanti Po1ar
Lipids #850365)c 、 10 Bのd
isLearoylホスファチジルグリセリン(^va
nti Po1ar Lipids)d 、 3.75
mgの架橋剤(distearoylホスファチジル
エタノール−アミン−p−マルイミドーフェニル)カプ
リルにューヨーク州、オレンドバーグのBeckon
Dickinson Immunodoagnosti
cの製品) e 、 50 mlのクロロホルム (Fisher)
2、撹拌して混合させる。
)l−S)b 、 94 mgのdistearoyl
ホスファチジルコリン(^vanti Po1ar
Lipids #850365)c 、 10 Bのd
isLearoylホスファチジルグリセリン(^va
nti Po1ar Lipids)d 、 3.75
mgの架橋剤(distearoylホスファチジル
エタノール−アミン−p−マルイミドーフェニル)カプ
リルにューヨーク州、オレンドバーグのBeckon
Dickinson Immunodoagnosti
cの製品) e 、 50 mlのクロロホルム (Fisher)
2、撹拌して混合させる。
3、回転蒸発器を次ぎの状態に設定する。
水浴の温度−44°C
回転速度−4
4、泡立ちが無くなるまでゆっくりと真空を増加させる
(約30−40分がける)。
(約30−40分がける)。
5、減圧し、リポソームを44℃にて30分間焼きなま
す。
す。
6.−昼夜凍結乾燥させる。
7、回転蒸発器上にて、50m1の蒸留水を加え、肪質
膜が溶解するまで、非真空状態で60℃の温度にて撹拌
する。
膜が溶解するまで、非真空状態で60℃の温度にて撹拌
する。
8、ドライアイス及びメタノール中にて凍結させる。
9、凍結乾燥させて、乾燥した粉末リポソームにする。
10、スルホローダミンB (0,IN、pH4,5ナ
トリウムアセテ一ト食塩緩衝液中に0.1M)の着色溶
液を別個に調整する。
トリウムアセテ一ト食塩緩衝液中に0.1M)の着色溶
液を別個に調整する。
11.50+*Iの着色溶液をリポソーム粉末に加え、
60℃にて15分間加熱する。
60℃にて15分間加熱する。
12、それぞれの孔径が1.0μm、0.4μm及び0
.2μmのBiorad Uniporeポリ炭酸エス
テル製膜(Biorad)を通じて加熱されたリポソー
ムを排出させる。
.2μmのBiorad Uniporeポリ炭酸エス
テル製膜(Biorad)を通じて加熱されたリポソー
ムを排出させる。
13 、50mMのナトリウムアセテート緩衝液pH4
,5内にて1 mHのEDT^及び50 mHのNaC
lにより平衡状態にした5epl+arose CL6
Bクロマトグラフィーカラム(Phar+eacia)
上にてリポソーム懸濁液から遊離した着色材を分離する
。
,5内にて1 mHのEDT^及び50 mHのNaC
lにより平衡状態にした5epl+arose CL6
Bクロマトグラフィーカラム(Phar+eacia)
上にてリポソーム懸濁液から遊離した着色材を分離する
。
14、段階13にて指定された[i−液中にリポソーム
を貯蔵する。
を貯蔵する。
B、リポソーム粒子ラベルと特異的な結合種との結合。
1、リン酸緩衝食塩水(100糟M、pH7,5)内の
ウサギに対するヤギ抗体(61I1g、ペンシルベニア
州、ウェストグローブのJackson Imnuno
Reasearch )を6,6μg Sr’DP:
1mg抗体の質量比にて5PDP(シグマ)と混合させ
る。この混合体を窒素で洗滌し、密封する。この混合体
は撹拌しながら、室温にて30分間反応させる。
ウサギに対するヤギ抗体(61I1g、ペンシルベニア
州、ウェストグローブのJackson Imnuno
Reasearch )を6,6μg Sr’DP:
1mg抗体の質量比にて5PDP(シグマ)と混合させ
る。この混合体を窒素で洗滌し、密封する。この混合体
は撹拌しながら、室温にて30分間反応させる。
2、I Mナトリウムアセテ−)−p[(4,5を17
10容積加え、30秒間撹拌する。
10容積加え、30秒間撹拌する。
3、IMのジチオスレトールを17100容積、水に加
える。
える。
4、トリス緩@液(50mM トリス、50nMナトリ
ウムアセテート50 mM NaC1,1mM EDT
^、pns、o)にて平衡状態にした5ephadex
G−25中間カラムの上に反応溶液を通すことにより
、ジチオスレト−ルを除去する。窒素にて洗浄し密封す
る。
ウムアセテート50 mM NaC1,1mM EDT
^、pns、o)にて平衡状態にした5ephadex
G−25中間カラムの上に反応溶液を通すことにより
、ジチオスレト−ルを除去する。窒素にて洗浄し密封す
る。
5 、0.D、280を監視し、タンパク質を含有する
部分を集める。
部分を集める。
6、この溶液を新たに作製された10m1リポソームと
混合させる。リポソームの量は、リン酸20μM対回収
されたタンパク質1.25 mgの比にて決定する。リ
ン酸の量は、リポソームの準備する度毎に異なる。
混合させる。リポソームの量は、リン酸20μM対回収
されたタンパク質1.25 mgの比にて決定する。リ
ン酸の量は、リポソームの準備する度毎に異なる。
7、N2により洗浄し、密封する。
8、常温にて夜間2日間、反応させる。
9、標準ホウ酸塩#+!衝液(pl+8)にて平衡状態
にした5epharose Fast Flow (登
録商標)クロマトグラフィーカラム上にて結合された生
成物を分離させる。
にした5epharose Fast Flow (登
録商標)クロマトグラフィーカラム上にて結合された生
成物を分離させる。
10、ボイド容積部分を集める。
11.4°Cにて貯蔵する。
mξ
検定は、供給装置を使用し、又は使用せずに行われる。
供給装置を使用しない場合、試験懸濁液及び全ての試薬
は、診断装置の試験領域に直接加えられる。供給装置を
使用する場合、供給装置は診断装置の孔の中に挿入し、
試験懸濁液(200μm)は凹所内に入れる。この懸濁
液は、試験領域まで流動し、ここから、吸着層まで流動
する0次に、連鎖球状白色ガンシダ菌(150μm、3
00μgem lの細胞質の抗体(48−52KO)に
対するウサギ抗体のアリコートを供給装置の凹所中に入
れ、そこから試験領域まで流動し得るようにする。その
後、供給装置を診断装置から取り外し、廃棄する。トレ
ーサ(150μm)を加える。
は、診断装置の試験領域に直接加えられる。供給装置を
使用する場合、供給装置は診断装置の孔の中に挿入し、
試験懸濁液(200μm)は凹所内に入れる。この懸濁
液は、試験領域まで流動し、ここから、吸着層まで流動
する0次に、連鎖球状白色ガンシダ菌(150μm、3
00μgem lの細胞質の抗体(48−52KO)に
対するウサギ抗体のアリコートを供給装置の凹所中に入
れ、そこから試験領域まで流動し得るようにする。その
後、供給装置を診断装置から取り外し、廃棄する。トレ
ーサ(150μm)を加える。
次いで試験領域を洗滌緩衝液(0,IM quanid
ine11C+)にて洗滌し、試験領域に鮮明な桃色部
分(三角形)が存在することを視覚的に確コ2すること
によりその結果を読み取る。
ine11C+)にて洗滌し、試験領域に鮮明な桃色部
分(三角形)が存在することを視覚的に確コ2すること
によりその結果を読み取る。
各検定を行うのに要する合計時間は、3〜5分である。
第1表において、記号「+◆」は、鮮明な桃色部分が試
験領域に存在することを意味する一方、記号「+」は1
い桃色部分が存在すること及び記号「−」は桃色部分が
全く存在しないことをそれぞれ意味する。供給装置を使
用することにより、検定の感度は200 ng/mlか
ら25 ng/mlまで著しく向上する。
験領域に存在することを意味する一方、記号「+」は1
い桃色部分が存在すること及び記号「−」は桃色部分が
全く存在しないことをそれぞれ意味する。供給装置を使
用することにより、検定の感度は200 ng/mlか
ら25 ng/mlまで著しく向上する。
第1表
装置を使用
例2
詮1←fiυi
平均孔径5μmのニトロセルロース膜(ミネソタ州、ウ
ェストボローのMSIの製品)は、米国特許第4,67
0,382号に記載された連鎖球状白色ガンシダ菌の細
胞質抗体(48−52KD)に対するモノクロール抗体
50μ!にて被覆する。被覆溶液は、0.2χのNaN
、を含有するリン酸&II液食塩水(0,IM、pH6
,0)中に75 mg/mlの抗体を含んでいる。乾燥
後、膜はリン酸wI街食塩水(0,I M、、all
8.0)中にて0.5%のゼラチンによりブロックする
0次いで酸膜を乾燥させる。
ェストボローのMSIの製品)は、米国特許第4,67
0,382号に記載された連鎖球状白色ガンシダ菌の細
胞質抗体(48−52KD)に対するモノクロール抗体
50μ!にて被覆する。被覆溶液は、0.2χのNaN
、を含有するリン酸&II液食塩水(0,IM、pH6
,0)中に75 mg/mlの抗体を含んでいる。乾燥
後、膜はリン酸wI街食塩水(0,I M、、all
8.0)中にて0.5%のゼラチンによりブロックする
0次いで酸膜を乾燥させる。
試験装置は、ニトロセルロール膜を層状複合体頂部に位
置決めすることにより組立てる。2つの底部層は吸着性
のセルロース紙(厚み6.35mm:174″)である
、これらの底部層の上には、レーヨンの不織ウェブ(S
chleicher & 5chuell Cat。
置決めすることにより組立てる。2つの底部層は吸着性
のセルロース紙(厚み6.35mm:174″)である
、これらの底部層の上には、レーヨンの不織ウェブ(S
chleicher & 5chuell Cat。
no、 5−S)から成る多孔質のスペーサ層がある。
このレーヨン層の上には、平均孔径1.0μmのポリ炭
酵エステル製の一方向流量制御膜(カリフォルニア州、
プレザントヴイルのNucleporeの製品)がある
、4つの層は、互いに縫合されており、その頂部にはニ
トロセルロース多孔質支持層が位を決めされている。組
立てられた複合体は1cm2であり、その肉厚は0.5
cmである。ニトロセルロース股上における抗体部分は
三角形の形状をしている。この複合体は、図示するよう
に容器内に位置決めされる。
酵エステル製の一方向流量制御膜(カリフォルニア州、
プレザントヴイルのNucleporeの製品)がある
、4つの層は、互いに縫合されており、その頂部にはニ
トロセルロース多孔質支持層が位を決めされている。組
立てられた複合体は1cm2であり、その肉厚は0.5
cmである。ニトロセルロース股上における抗体部分は
三角形の形状をしている。この複合体は、図示するよう
に容器内に位置決めされる。
1支友直
検定は比較例に記載されているように、供給装置及びト
レーサを使用して行われた。供給装置が診断装置の孔中
に挿入された状悪にて、連鎖球状白色カンジダ菌の細胞
質(48−52KD) 10 ng/mlを接種した2
00μmの血清標本を加え、診断装置まで流動するよう
にする。次いで、この抗体に対するウサギ抗体のアリコ
ート(150μm、75118/ml)を供給装置の凹
所内に入れ、試験領域まで流動するようにした。その後
、この供給装置を除去し、廃棄した。トレーサ(150
μm)を試験領域に加えた。
レーサを使用して行われた。供給装置が診断装置の孔中
に挿入された状悪にて、連鎖球状白色カンジダ菌の細胞
質(48−52KD) 10 ng/mlを接種した2
00μmの血清標本を加え、診断装置まで流動するよう
にする。次いで、この抗体に対するウサギ抗体のアリコ
ート(150μm、75118/ml)を供給装置の凹
所内に入れ、試験領域まで流動するようにした。その後
、この供給装置を除去し、廃棄した。トレーサ(150
μm)を試験領域に加えた。
トレーサが試験装置を流動した後、試験領域は緩衝液(
0,I M guanidine IIcL)にて洗浄
し、試験領域上に鮮明な桃色の三角形部分が存在するこ
とを視覚的に確認することにより測定結果を読み取る。
0,I M guanidine IIcL)にて洗浄
し、試験領域上に鮮明な桃色の三角形部分が存在するこ
とを視覚的に確認することにより測定結果を読み取る。
抗体が接種されていない血清を使用して実験を反復した
とき、負の値が測定された。
とき、負の値が測定された。
例 3
供1弓1]ΦIL
凹所及びハンドルは1、ポリスチレン樹脂(オークラン
ド州、パートレイズビルのPhilipsPetrol
eumの製品であるに一樹脂KRO3)にて成形される
。凹所は、外径1.0cm (0,395インチ)の円
筒状である。その容積は400μmである。凹所の底部
には0.3c m (0,12インチ)の開口部が形成
されている。この凹所はフロースルー装置の孔内にきち
っと嵌まる。
ド州、パートレイズビルのPhilipsPetrol
eumの製品であるに一樹脂KRO3)にて成形される
。凹所は、外径1.0cm (0,395インチ)の円
筒状である。その容積は400μmである。凹所の底部
には0.3c m (0,12インチ)の開口部が形成
されている。この凹所はフロースルー装置の孔内にきち
っと嵌まる。
流量制御膜は、凹所の底部に熱密封されている。
この膜は凹所底部の開口部全体を覆う、使用される膜は
ナイロン66にューヨーク州、イーストヒルズのPa1
l Corporationの製品であるImmuno
dyne■(登録商凛)〉又はニトロセルロース(マサ
チューセッッ州、ウェストポロウのMSIの製品)とす
る。供給装置内の流量制御膜は次のようなブロック溶液
にて処理した。
ナイロン66にューヨーク州、イーストヒルズのPa1
l Corporationの製品であるImmuno
dyne■(登録商凛)〉又はニトロセルロース(マサ
チューセッッ州、ウェストポロウのMSIの製品)とす
る。供給装置内の流量制御膜は次のようなブロック溶液
にて処理した。
装置1−−1%の平滑でない乾燥膜にてブロックした平
均孔径3.0μmのナイロン 膜 装置2−−10%のはっかねずみ血清にてブロックした
平均孔径30μmのナイ ロン膜 装置3−−10%のはつかねずみ血清にてブロックした
平均孔径5.0μmのニトロセ ルロース膜 挾淀ブねL 検定は、例2に記載したような診断装置、トレーサ及び
方法を利用して行われた。標本は偽りの正の値を示す通
常の人間の血清とした。平滑でないドライミルクにてブ
ロックした流量制御膜を有する供給装置を使用して、検
定を行った場合、正の値が得られた。はつかねずみの血
清にてブロックした2つの供給装置にて検定を行った場
合、負の値となった。
均孔径3.0μmのナイロン 膜 装置2−−10%のはっかねずみ血清にてブロックした
平均孔径30μmのナイ ロン膜 装置3−−10%のはつかねずみ血清にてブロックした
平均孔径5.0μmのニトロセ ルロース膜 挾淀ブねL 検定は、例2に記載したような診断装置、トレーサ及び
方法を利用して行われた。標本は偽りの正の値を示す通
常の人間の血清とした。平滑でないドライミルクにてブ
ロックした流量制御膜を有する供給装置を使用して、検
定を行った場合、正の値が得られた。はつかねずみの血
清にてブロックした2つの供給装置にて検定を行った場
合、負の値となった。
第1図は本発明の供給装置の側面図、第2図は第1図の
線2−2に沿った断面図、第3図は本発明の試験キット
に使用するのに好適なフロースルー型式の診断装置の平
面図、第4図は第3図に示した診断装置の立面図、及び
第5図は第3図のフロースルー型式の装置の線5−5に
沿った断面図である。 (主要符号の説明) 10・・・ 凹所、 12・・・ 側壁、 46・・・ カバー ド・・ 20・・・ フランジ、 ハンドル、
線2−2に沿った断面図、第3図は本発明の試験キット
に使用するのに好適なフロースルー型式の診断装置の平
面図、第4図は第3図に示した診断装置の立面図、及び
第5図は第3図のフロースルー型式の装置の線5−5に
沿った断面図である。 (主要符号の説明) 10・・・ 凹所、 12・・・ 側壁、 46・・・ カバー ド・・ 20・・・ フランジ、 ハンドル、
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1、流体標本を制御された量にて診断装置に供給する装
置であって、 底部を有する、流体標本を受け入れるための凹所と、 前記流体標本が凹所から流出し得るように、該凹所の底
部に形成された開口部と、 前記開口部を覆い、流体標本を制御された量にて診断装
置の上面に供給するための流量制御膜と、を備えること
を特徴とする流体標本を診断装置に供給する装置。 2、内部に設けられて、分析成分を流体標本中に封じ込
めずに、干渉物質を流体標本から選択的に除去する手段
を備えることを特徴とする請求項1記載の装置。 3、干渉物質を選択的に除去する前記手段が、干渉物質
に対する特異的な結合種であることを特徴とする請求項
2記載の装置。 4、前記特異的な結合種が流量制御膜に固着されること
を特徴とする請求項3記載の装置。 5、前記流量制御装置がその上に剥離可能に被覆された
検定試薬を有することを特徴とする請求項1記載の装置
。 6、凹所の底部が診断装置を通る流れの上面に接触する
寸法及び形状の下面を有することを特徴とする請求項1
記載の装置。 7、凹所に固着されて、凹所内の流体標本に接触せずに
、装置の操作を容易にするハンドルを備えることを特徴
とする請求項1記載の装置。 8、請求項1記載の装置と、フロースルー型式の診断装
置とを備えることを特徴とする診断キット。 9、流体標本中の分析成分の検定法であって、流体標本
が制御された流量にて開口部から流出し得るように、該
流体標本を請求項1の装置に供給する段階と、 頂部面に固着された分析成分に対して特異的な結合特性
を有するフロースルー型式の診断装置の上面に接触する
ように、該流体を開口部から流出させる段階と、 トレーサを使用して分析成分の存在を検出する段階とを
備えることを特徴とする検定法。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US17210888A | 1988-03-23 | 1988-03-23 | |
US172108 | 1988-03-23 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPH0216451A true JPH0216451A (ja) | 1990-01-19 |
JPH0765994B2 JPH0765994B2 (ja) | 1995-07-19 |
Family
ID=22626394
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP1071624A Expired - Lifetime JPH0765994B2 (ja) | 1988-03-23 | 1989-03-23 | 流体標本を診断装置に供給する装置および分析成分の検定法 |
Country Status (10)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP0334015B1 (ja) |
JP (1) | JPH0765994B2 (ja) |
AT (1) | ATE105634T1 (ja) |
AU (1) | AU620077B2 (ja) |
CA (1) | CA1340048C (ja) |
DE (1) | DE68915194T2 (ja) |
DK (1) | DK172575B1 (ja) |
ES (1) | ES2051900T3 (ja) |
FI (1) | FI96449C (ja) |
MY (1) | MY104403A (ja) |
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-
1989
- 1989-02-15 DE DE68915194T patent/DE68915194T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1989-02-15 AT AT8989102546T patent/ATE105634T1/de not_active IP Right Cessation
- 1989-02-15 ES ES89102546T patent/ES2051900T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1989-02-15 CA CA000591095A patent/CA1340048C/en not_active Expired - Fee Related
- 1989-02-15 EP EP89102546A patent/EP0334015B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1989-02-23 AU AU30267/89A patent/AU620077B2/en not_active Ceased
- 1989-02-23 MY MYPI89000213A patent/MY104403A/en unknown
- 1989-03-22 FI FI891379A patent/FI96449C/fi not_active IP Right Cessation
- 1989-03-22 DK DK198901416A patent/DK172575B1/da active
- 1989-03-23 JP JP1071624A patent/JPH0765994B2/ja not_active Expired - Lifetime
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