JPH02111728A - アルブミン製剤及びその製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〈産業上の利用分野〉 本発明は、アルブミン製剤の製造方法に関し、より詳細
には、凝集体含量が低減された血清アルブミン製剤の製
造方法に関する。

〈従来の技術及び発明が解決しｊ：うとする課題〉血清
アルブミンは血漿中に最も多く含まれている蛋白質で、
血液中で浸透圧の維持、栄養物質や代謝物質と結合して
その運搬などの機能を果たしている。上記血清アルブミ
ンを含有する製剤は、アルブミンの喪失及びアルブミン
合成低下による低アルブミン血症、出血性ショックなど
の治療に用い゛られている。アルブミン製剤は、そこに
混入してくる懸念のあるウィルスを不活化するために、
通常、アルブミン含有水溶液の状態での加熱処理が汎用
されている。このような方法により製造される市販のア
ルブミン製剤は、製剤中にゲル濾過分析で５〜１０％の
凝集体（通常ポリマーと称されるので、以下、ポリマー
という）が存在することが知られている。このポリマー
は上記の加熱処理前には全く存在しないことから、加熱
処理により熱に不安定な蛋白質が部分的に変性して凝集
化したものと考えられる。市販のアルブミン製剤は安全
に広く使用されていることから、このポリマーが特に人
に害を及ぼすとは考えられていないが、加熱変性物であ
ることより、製剤中にできるだけ含有しないことが好ま
しい。

本発明は上記の課題を解決すべくなされたちので、ポリ
マー含量の少ないアルブミン製剤を提供することを目的
とする。

く課題を解決するための手段〉 上記の課題を解決すべくなされた、本発明のアルブミン
製剤の製造方法は、アルブミン含有水溶液を加熱し、生
成したポリマーを除去する工程を少なくとも含むことを
特徴とするものである。なお、生成したポリマーを除去
する方法としては、硫安分画法、ポリエチレングリコー
ル（以下、ＰＥＧという）分画法、アルコール分画法及
び等重点分画法が好ましい。

本発明にかかる製剤の主成分であるアルブミンの由来に
は特に制限がなく、具体的には哺乳動物、例えば、ヒト
、ウシ、ウサギ等に由来するものが挙げられ、特にヒト
由来″のものが使用される。アルブミンを調製するため
の出発原料としては、例えば、コーン氏の冷アルコール
分画によって得られたＦｒ、Ｖ画分等が例示される。

本発明のアルブミン製剤の製造方法は、上記アルブミン
を含有する水溶液を加熱し、生成したポリマーを除去す
る工程を少なくとも包含するものである。

上記の工程において、アルブミン含有水溶液中のアルブ
ミン含量としては、通常、０．１〜３０％（Ｗ／Ｖ、特
に明示のない限り以下同様）、好ましくは１〜５％とさ
れ、適当なｐＨ調整剤にてｐＨを５〜９程度に調整する
のが好ましい。また、必要に応じて、アルブミンの安定
化剤、例えば、Ｎ−アセチルトリプトファンナトリウム
、カプリル酸ナトリウム等を単独で又は混合して添加し
てもよく、これらの安定化剤は１０〜６０ｍＭ、通常、
２０〜４０ｍＭ程度の濃度で使用される。上記のアルブ
ミン含有水溶液の加熱条件としては、ポリマーを生成さ
せるに十分な温度及び時間待なえばよく、例えば、５０
〜７０℃、好ましくは約６０℃で１〜１０時間、好まし
くは約３時間行われる。

上記で生成したポリマーの除去方法としては蛋白質の精
製に用いられる慣用の方法のいずれも用いることができ
るが、硫安分画法、ＰＥＧ分画法、アルコール分画法及
び等重点分画法が好ましく、これらの方法はこの分野で
用いられる慣用の方法にて行やれる。例えば、硫安分画
法を採用する場合においては、加熱処理された溶液に、
硫安濃度が２８０〜３５０ｔｒ／ＩＩとなるように硫安
を添加するとともにｐＨを５．０〜８．０程度に調整し
てポリマーを沈澱させ、遠心分離等の慣用の手段で除去
する。次いで、上清に硫安を添加して硫安濃度を４５０
ｇ／ｌ）程度とし、アルブミンを沈澱させて回収する。

ＰＥＧ分画法を採用する場合には、加熱処理された溶液
に、ＰＥＧ濃度が５〜２０％となるようにＰＥＧを添加
するとともにｐＨを５．０〜６゜５程度に調整してポリ
マーを沈澱させて除去する。

次いで、ＰＥＧ濃度が１５〜２５％及びｐＨが４゜５〜
５．５となるように上清を調整してアルブミンを回収す
る。上記方法に使用されるＰＥＧの分−７−ｆｆｉは特
に限定されないが、通常、４．０００程度のものが使用
される。

アルコール分画法を採用する場合には、加熱処理された
溶液にアルコール、例えばエタノールを添加してエタノ
ール濃度が１０〜Ｂ　５　（Ｖ／Ｖ）％となるようにす
るとともにｐＨを４．５〜６．５程度、好ましくはエタ
ノール濃度１０′〜２０　（Ｖ／Ｖ）％、ｐＨ４，５〜
５．５となるように調整してポリマーを沈澱させて除去
する。次いで、エタノール濃度を約４０　（Ｖ／Ｖ）％
及びｐＨを約４．８となるように上清を調整してアルブ
ミンを回収する。

上記処理は、アルブミンの変性を抑制するため、処理温
度を溶液が凍結しない範囲でできるだけ低い温度に維持
して行なうのがよい。また、アルブミンの回収は、透析
、限外濾過等の膜分離技術を用いて脱エタノールを行な
って回収してもよい。

なお、前記の硫安分画法やＰＥＧ分画法によると回収ア
ルブミン中に分画剤である硫安やＰＥＧが残存する可能
性があるが、アルコール分画法によれば、このような問
題が少なくなるのでより好ましい。

さらに、等電点分画法を採用する場合には、加熱処理さ
れた溶液のアルブミン濃度及びイオン強度を低下させた
後、ｐＨを４．５〜５．０程度に調整してポリマーを沈
澱させて除去する。次いで、透析、限外濾過等の膜分離
技術を用いてアルブミンを回収する。

なお、ポリマーの除去手段は、上記方法に限定されるも
のではなく、例えば、硫酸ナトリウムを用いた塩析法等
、適宜な方法を用いることができる。

上記工程により精製されたアルブミンは、この分野で慣
用の方法にて製剤化される。例えば、回収アルブミンが
固体状の場合には注射用蒸溜水等に所望濃度となるよう
に溶解してアルブミン含有水溶液とし、また回収アルブ
ミンが溶液状の場合には濃縮又は希釈して所望濃度とな
るように調整してアルブミン含有水溶液とした後、バイ
アル等に充填して加熱処理することによりアルブミン製
剤が得られる。上記のアルブミン含有水溶液の濃度とし
ては、５〜２５％程度とされ、さらに必要に応じて、前
記の安定化剤を添加してもよい。また加熱処理は、ポリ
マーの除去工程中に混入する恐れのあるウィルスを不活
化するもので、夾雑ウィルスを不活化するに十分な温度
及び時間待なえばよ＜１０例えば、５０〜７０℃、好ま
しくは約６０℃で５〜２０時間、好ましくは約１０時間
行われる。

斯くして得られたアルブミン製剤は、従来のアルブミン
製剤と同様な用量、用法にて使用される。

〈発明の効果〉 本発明のアルブミン製剤の製造方法によれば、加熱処理
により生成するポリマーが予め除去されているので、ポ
リマー含量の少ないアルブミン製剤を得ることができる
。特に、ポリマーを除去して精製されたアルブミンは再
加熱してもポリマーの生成が極めて少なくなるので、加
熱処理を要するアルブミン製剤の製造方法として好適で
ある。

〈実施例〉 以下、本発明をより詳細に説明するため、実験例及び実
施例を挙げるが、本発明はこれらの実施例によってなん
ら限定されるものではない。

実験例 コーン氏の冷アルコール分画によって得られたＦｒ、Ｖ
画分をアセトンて脱アルコールし、アセトンパウダーを
得た。次いで、アルブミン濃度力（・２５９６となるよ
うに水に溶解し、安定化剤としてＮ−アセチルトリプト
ファンナトリウム及びカプリル酸ナトリウムをそれぞれ
２０ｍＭ添加した。

このアルブミン溶液をｐＨ７，０に調整した後、６０℃
で加熱処理し、生成するポリマー量をゲル濾過分析法に
て測定した。その結果を第１図１こ示す。第１図から明
らかなように、ポリマーの生成量は、約３時間まで経時
的に増加するが、３時間以降は略プラトーとなった。こ
れより、３時間程度の加熱処理を行なえばポリマー化は
完了することが判明した。

実施例１ コーン氏の冷アルコール分画によって得られｔ二Ｆｒ、
Ｖ画分をアセトンで脱アルコールし、アセトンパウダー
を得た。次いで、アルブミン濃度力（２５％となるよう
に水に溶解し、安定化剤としてＮ−アセチルトリプトフ
ァンナトリウム及びカプリル酸ナトリウムをそれぞれ２
０ｍＭ添加した。

このアルブミン溶液をｐＨ７，０に調整した後、６０℃
で加熱処理した。

次いで、上記の加熱処理溶液を生理食塩液で希釈してア
ルブミン濃度が２．５％となるようにし、ｐＨをそれぞ
れ５．５及び７．０に調整した液を作製し、硫安を添加
しポリマーを沈澱させ、上清中のポリマー含量をゲル濾
過分析法により測定した。その結果を第２図に示す。第
２図に示されるように、上清中のポリマー含量は硫安濃
度の上昇に伴って減少し、いずれのｐＨにおいても、硫
安濃度３４０ｇ／ＩＩ程度とすることによりポリマー含
量を著しく低減することができた。

さらに、上記の沈澱したポリマーを除去したのちの上清
に硫安を添加し、硫安濃度４５０　ｇ／Ｄとしてアルブ
ミンを回収した。このアルブミンを脱塩、濃縮し、アル
ブミン濃度を２５％となるように注射用蒸溜水に溶解さ
せ、実験例と同様に安定化剤を添加した後、バイアルに
充填して密封し、６０℃で１０時間加熱してアルブミン
製剤を得た。

上記加熱処理中に生成するポリマー量を経時的にゲル濾
過分析法により測定した。その結果を第３図に示す。第
３図に示されるように、該製剤中のポリマー含量は、再
加熱前では０％、再加熱後でも１％以下であり、ポリマ
ー含量を著しく低減できた。なお、比較例として、硫安
分画していない未処理のアルブミンを、上記と同様にバ
イアルに充填して加熱処゛理した。その結果、加熱３〜
１０時間後には、ポリマー含量が５〜６％となった。

実施例２ 実施例１と同様にして得られたアルブミン加熱処理溶液
を、生理食塩液で希釈してアルブミン濃度が５％になる
ように調整し、さらにＰＥ０４度がそれぞれ１０％及び
１５％となるようにＰＥＧを溶解し、ＩＮ塩酸を用いて
ｐＨを変化させてポリマーを沈澱させ、上滑中のポリマ
ー含量をゲル濾過分析法により測定した。その結果を第
４図に示す。第４図に示されるように、ＰＥＧ濃度１５
＼ ％ではｐＨが約５．６で、またＰＥＧ濃度１０％ではｐ
Ｈが約４．８でポリマー含量が略零になつた。

さらに、上記の沈澱したポリマーを除去したのちの上清
にＰＥＧを添加し、ＰＥＧ濃度２０％、ｐＨ４，８とし
゛てアルブミンを回収した。回収したアルブミンを実施
例１と同様にして製剤化し、加熱処理した。その結果、
生成ポリマー量は１％以下であった。

実施ρＪ３ 実施例１と同様にして得られたアルブミン加熱処理溶液
を、水で希釈してアルブミン濃度が５％となるように調
整し、さらにエタノール濃度がそれぞれ１３．１５．１
９．２ｏ及び２１　（Ｖ／Ｖ）％となるようにエタノー
ルを添加し、そのエタノール濃度を含む０．８Ｆｗ１酢
酸緩衝液を用いてｐＨを変化させてポリマーを沈澱させ
、上清中のポリマー含量をゲル濾過分析法により測定し
た。その結果を第５図に示す。第５図に示されるように
、エタノール濃度１３　（Ｖ／Ｖ）％テ＋ｉ　ｐ　Ｈ約
４．８、同１５　（Ｖ／Ｖ）　９６　テハｐ　Ｈ約４．
９、同１９　（Ｖ／Ｖ）　％ではｐＨ約５．２５、同２
０　（Ｖ／Ｖ）％ではｐＨ約５．３５、同２１（■ハ）
％ではｐＨ約５．４でポリマー含量が略零になった。

さらに、上記の沈澱したポリマーを除去したのちの上清
に・エタノールを添加し、エタノール濃度４０　（Ｖ／
ｖ）％、ｐＨ４，８とシテアルフミンヲ回収した。回収
したアルブミンを実施例１と同様にして製剤化し、加熱
処理した。その結果、生成ポリマー量は１％以下であっ
た。

実施例４ 実施例１と同様にして得られたアルブミン加熱処理溶液
を水で希釈してアルブミン濃度が０６５．１．５及び２
．５％となるように調整し、ＩＮ塩酸を用いてｐＨを変
化させてポリマーを沈澱させ、上清中のポリマー含量を
ゲル濾過分析法により測定した。その結果を第６図に示
す。第６図に示されるように、アルブミン濃度０．５％
ではｐＨ約４．５〜５．０、アルブミン濃度１．２５９
６ではｐＨ約４．５〜４．８の範囲でポリマー含量が略
２・％以下となった。

さらに、上記の沈澱したポリマーを除去したのちの上清
を限外濾過に付して濃縮した。得られたアルブミンを実
施例１と同様にして製剤化し、加熱処理した。その結果
、生成ポリマー量は１％以下であった。

【図面の簡単な説明】

第１図は、未処理アルブミン含有水溶液の加熱処理によ
るポリマー形成の時間推移を示す図、第２図は、硫安分
画法による上清中のポリマー含量のｐＨ及び硫安添加量
依存性を示す図、第３図は、硫安分画法で得られたアル
ブミン及び未処理アルブミン含有製剤におけるポリマー
生成量の時間推移を示す図、 第４図は、ＰＥＧ分画法におひる上清中のポリマー含量
のＰＥＧ濃度及びｐＨ依存性を示す図、第５図は、エタ
ノール分画法における上清中のポリマー含量のエタノー
ル濃度及びｐＨ依存性を示す図、及び 第６図は、等重点分画法における上清中のポリマー含量
のアルブミン濃度及びｐＨ依存性を示す図である。 第 図 加熱時間（ｈｒ） 第 図 硫安添加ＱＣｔ／Ｉ＞ 第 図 ５．５ ５．２５ ５．０ ４．７５ Ｈ 第 図 ５．５　５．３　５．１　４．９　４．７　４．５Ｈ 第 図 加熱時間（ｈ「） 第 図 Ｈ 手 続 補 正 書（自発）

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、血清アルブミン含有水溶液を加熱し、生成した凝集
   体を除去する工程を含むことを特徴とするアルブミン製
   剤の製造方法。 ２、凝集体の除去を、硫安分画法、ポリエチレングリコ
   ール分画法、アルコール分画法及び等電点分画法のいず
   れかより選ばれた方法で行なう請求項１記載のアルブミ
   ン製剤の製造方法。