JPH01502753A - 生物学的活性分子 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 生物学的活性分子 本発明は、生物学的活性分子、特にペプチドに関する。

多くのポリペプチドホルモンが医薬上あるいは畜産業上１１！であり、特に成長 ホルモンが重要である。成長ホルモンは全てのを椎動物において見出され、それ ぞれの種が有する成長ホルモン（ＧＨ）は、他の種のＧＨとは若干相違するアミ ノ酸配列を有している。一般的に、成長ホルモン分子は約１９０個のアミノ酸の シングルリニアー配列から成っている。ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）のアミノ酸 配列については、Ｃｈｏｈ　ｔｌａｏ　Ｌｉ　”Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒａｎｄ　Ｃ ｅ１ｌｕｌａｒ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　”　４６．３１−４１　（１９８ ２）に記載されている。成長ホルモンは、成長を促進しくソマトジエネシス）、 ミルクの産生を促進しくラクトジエネシス）そしてインシュリン様の低血糖効果 を有することが知られている。

以前においては、抗体は少なくとも　ｉｎ　ｖｉｖｏではホルモンの作用を中和 すると考えられていたが、ＥＰ−Ａ−１３７２３４（ウェルカム）により成長ホ ルモンに対するある種の抗体が全ホルモン活性を増強することが知られている。

このような増強効果を有する抗体は、成長ホルモンの適当なフラグメントで宿主 動物をワクチン接種することによって　ｉｎ　５ｉｔｕで産生され、そして特異 性を有するある種のクラスのポリクローナル抗体が造られこれが内因性のホルモ ンの活性を増強するものと考えられる。ＥＰ−Ａ−１３７２３４には、大きなフ ラグメント（７Ｋ）がこのような目的に適していることが記載されている。

また例えばＷＯ３４１０４９１５（アムジエン）により、０８分子のある部分に 対応するペプチドが有用な生物学的活性を有すること、特に、インシュリンと共 にそれを投与した場合に低血糖効果をもたらすことが知られている。ＷＯ３４１ ０４９１５ではそのようなペプチドを抗原性を有するような形態で投与すること は教示されていない。なぜならＷＯ３４１０４９１５で示されているペプチドの 投与はペプチドに対する抗体を産生ずることを目的としたものではないからであ る。

本発明者によって、０８分子の特定部分の配列が、を椎動物におけるホルモン活 性を増強する抗体を産生するのに特に適していることが見出された。このペプチ ドは、上２した７にフラグメントよりも実質的に小さく、従ってより容易に且つ 安価に合成することができる。

本発明によれば、を椎動物におけるあらかじめ選択された生物学的に活性なペプ チド例えばホルモンなどの効果を増強する方法が提供される。この方法は、生物 学的に活性なペプチドの７ラグメントと一次構造相同性を有する特定のアミノ酸 配列を持つ小さなペプチドを用いる方法であって、生物学的に活性なペプチドの 効果を増強させるに必要な量のこの小さなペプチドでを椎動物を処理することか ら成るものである。

また本発明によれば、を椎動物のホルモンのアミノ酸配列を含む小さなペプチド であるを椎動物のホルモンの活性を増強するペプチドが提供される。本発明のペ プチドは、典型的には、約２５又はそれ以下のアミノ酸残塁、より好ましくは２ ０より少ないアミノ酸残基からなる。

本発明の小さなペプチド中に含まれるホルモンと構造相同性を有するアミノ酸残 基の数は、典型的には、本発明の小さなペプチド自体の長さに依存しており、２ ．３個のアミノ酸残基から成る配列から小さなペプチド全てを実質的に含む配列 まで変動し得るものである。典型的には、構造相同性を有するアミノ酸残基の配 列は、その長さは少なくとも５個のアミノ酸残基からなるものであり、好ましく は少なくとも約８−約ｉｏａ＋のアミノ酸残基からなるものである。

本明ｌｉｔ書において用いる用語“増強する”とは、本発明の小さなペプチドが 直接的に又は間接的に作用して、それと構造相同性を有するホルモンの活性を増 加しもしくは促進させることを意味する。

しかして本発明の１つの局面によれば、ウシ成長ホルモンの３５−５３の位置に 広がった領域におけるアミノ酸残基の配列好ましくは連続した配列に対して一次 構造相同性を有するペプチド、それと抗原性上等価なペプチド、及びそれらの塩 が提供される。

ウシ（及びヒツジ）ＧＨの上記した領域は以下の通りである。

ＮＨ２−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−１１ｅ−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ− Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−１１ｅ−Ｇｌｎ−＾５ｎ−Ｔｈｒ−Ｇｌｎ−Ｖａｌ−＾１ａ− Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−ＣＯＯＨ。

“−次構造相同性”とは、この領域と正確に重複するペプチド、他の種の成長ホ ルモンの対応する領域と重複するペプチド、及びそれらペプチドの３次元的配置 に実質的に変化を与えない１もしくはそれ以上のアミノ酸のマイナーな欠損もし くは保存性のある置換を受けた他のペプチドを意味する。ここで“保存性のある 置換”とは上記の通り３次元的配置に変化を与えないことを意味する。かかる意 味における保存性を有する置換の例としては、元のアミノ酸残基と実質的に同様 の疎水性、大きさ、電荷及び／又は芳香性を有するアミノ酸残基との置換がある 。このような置換及び修正の全ては、ペプチド化学分野における当業者にとって は一般的に周知である。例えばこのような置換の例としては、グリシンに代わる プロリン及びその逆ニゲリシンに代わるアラニン又はバリン及びその逆：ロイシ ンに代わるイソロイシン及びその逆：チロシンに代わるトリプトファン及びその 逆；リシンに代わるヒスチジン及びその逆：アスパラギンに代わるセリン及びそ の逆：グルタメートに代わるアルギニン及びその逆：シスチンに代わるスレオニ ン及びその逆；スレオニンに代わるセリン又はアラニン及びその逆；ア以下に、 ウシ成長ホルモンの３５−５３の位置の領域に対応するウシ以外のＧＨの領域の 例を示す。

ヒト３５−５３ ＮＨ，−Ｔｙｒ−１１ｅ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ− Ｓｅｒ−Ｐｔｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−Ｇｌｎ−Ｔｈｒ−３ｅｒ− Ｌｅｕ−Ｃｙｓ−ＣＯＯＩＩ。

ブタ及びラット３５−５３ ＾１ａ−Ｔｙｒ−１１８−Ｐｒｏ−Ｇ　１ｕ−ＧＨｙ−ｃ　Ｉ　ｎ−Ａｒｏ−Ｔ ｙｒ−ｓｅｒ−１１ｅ−Ｇｌ　ｎ−ＡＳｒｌ−Ａ　１ａ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ａｌ ａ−Ｐｈｅ−ＣｙｓＧｌｎ−＾１ａ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓサーモンζ又はト ラウド）３１−４９ Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ｇ　Ｉ　ｕ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｇ　 ｌ　ｎ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｙｓ−１ｌ　ｅ−Ｐｂｅ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ −Ｐｈｅ−Ｃｙｓ本明細書で言う“抗原性上等価”とは、当該ペプチドを適当な 形態で用いてを推動物において成長ホルモンの作用を増強するように作用する抗 体を産生できることを意味する。特に、上記した領域より若干長いもしくは短い 領域、上記した領域と実質的にオーバーラツプする領域例えば３０−４８．２６ −４３が、抗原性上等価であることが見出された。′若干長い”、“若干短い” 及び“実質的にオーバーラツプ”とは、等価のペプチドの少なくとも４５％（好 ましくは５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又は１００％）が上記３５− ５３の領域の少なくとも３５％（好ましくは４０％、５０％、６０％、７０％、 ８０％、９０％又は１００％）と重複していることを示す。特に、該フラグメン トよりも短い抗原性上の等価のペプチド、例えば３５−４３．３５−４８が用い られる。

ウシＧＨについては（しかしそれに限定されないが）、以下の配列が本発明を実 施する上で有用である。

２６−４３　（Ａｌａ−Ｔｙｒ　）　、３５−４３　（Ｔｈｒ−Ｔｙｒ　）、３ ７−４８　（Ｉｔｓ−Ｔｈｒ　）　、３９−４６　（Ｇｌｕ−Ｇｌｎ　）、４３ −５４　（Ｔｙｒ−Ｐｈｅ　）　、４３−６１　（Ｔｙｒ−Ｐｒｏ　）。

本発明者により、投与対象である動物以外の種から得た本発明の小さなペプチド を用いてその投与対象である動物に有利に投与することができること、例えばブ タ３５−５３をヒツジ又はウシに投与できることが見出された。投与対象である 動物自身のペプチド配列の変換体も、より高い免疫応答を誘導することができ、 この場合においても、その動物自身のＧＨをｉｉ！Ｘできる抗体が産生される。

更には、ペプチドを合成する前又は合成した後に、その１つもしくはそれ以上の アミノ酸残塁を化学的に修正したペプチドも、ペプチドの機能、即ち　ｉｎ　ｖ ｉｖｏでの特異的抗体の産生が実質的に変更されないならば使用する。

ことができる。このような修正としては、酸又はＦＡ基、特に生理学的に許容し 得る有機もしくは無機の酸及び塩基との塩の形成：末端カルボキシ基のエステル 又はアミドの形成：Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニルなどのアミノ酸保護基の結合等 がある。このような修正によって、１ｎｖｉｖｏでペプチドが代謝されるのを防 ぐことができる。ペプチドは、シングルコピーとしであるいは例えば（３５−５ ３）＋　（３５−５３）のようなタンデムリピートなどのマルチコピーとして存 在していてもよい。このようなタンデムもしくはマルチリピートの場合にはそれ 自身が十分な抗原性を有しているためキャリアーを使用する必要がない。ペプチ ドはＮ−末端とＣ−末端とが一緒になってループを形成しているのが有利であり 、また抗原性を高めるためにその末端に１つもしくはそれ以上のシスティン残基 が付加されており且つ（あるいは）ジスルフィド結合が形成されているのが有利 である。本発明のペプチドを、キャリアー好ましくはポリペプチドに共有結合さ せる場合には、ループを形成するように調整するのが好ましい。

本発明の第２の局面によれば、第１の局面によって提供される本発明のペプチド のいずれか１つもしくはそれ以上と、キャリアー及びアジュバント機能を有する 手段とを含む抗原性医薬組成物が提供される。現在の免疫学理論によれば、免疫 システムを促進し又は促進機能を増加するためには免疫原性製剤中にキャリアー 機能も存在していなければいけないとされている。キャリアーはヘルパーニーセ ルのエピトープを具現化しあるいは抗原とともに構成すると考えられている。ペ プチドは、例えば架橋化などによって、自消アルブミン、ミオグロブリン、バク テリア貴素、キーホールアオガイヘモニアニンなどのキャリアーと結合させるこ とができる。免疫応答においてヘルパーニーセルを誘導するキャリアーであって 最近開発されたものとしては、肝炎Ｂコア抗原（ヌクレオキャプシド蛋白とも言 われている）、あるいは７ｈｒ−Ａ　ｌ　ａ−８ｅ　ｒ−Ｇ　Ｉ　Ｖ−Ｖａ　ｌ 　−Ａ　ｌ　ａ−Ｇ　Ｉ　ｕ　−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｎなどの仮想ヘルパーニ ーセルエピトープ、ベータガラクトシダーゼ、インターロイキン−１の１６３− １７１ペプチドなどがある。後者の化合物は、キャリアー、あるいはアジュバン ト、あるいはその両者とも考えられている。また本発明の同じもしくは興なるペ プチドのいくつかのコピーをお互いに結合してもよく、この場合にはキャリアー を必要とせず、このよ。

うに結合して架橋化することによりキャリアー機能が付与される。適当な架橋化 剤としては、５１ｇ５ａ社及びＰｉｅｒｃｅ社のカタログに挙げられたものがあ り、例えばグルタルアルデヒド、カルボジイミド、スクシニミジル４−（Ｎ−マ レイミドメチル）シクロ−ヘキサン−１−カルボキシレートである。この後者の 架橋化剤は、３５−５３領域のＣ−末端システィン残基のＳＨ基を利用するもの である。

好適なアジュバントとしては、ワクチン分野において知られたものが挙げられ、 例えば、フロイント完全アジュバント、７０イント不完全アジユバント、水酸化 アルミニウム、サポニン、ＤＥＡＥ−デキストラン、ムラミルジペプチド、ミネ ラルオイル、中性オイル（ミグリオールなと）、野菜オイル（ビーナツツオイル など）、“Ｉｓｃｏｍｓ″、リポソーム、プルロニックポリオール、ａｔｂｔア ジュバントシステム（例えばＧＢ−Ａ−２１８９１４１参照）などがある。′プ ルロニック”は登録商標である。

本発明のペプチドは他の抗原と結合されて２重の効果を有するようになっていて もよい。例えば、本発明のペプチドがソマトスタチン分子の全て又は１部分と結 合して、抗−ＧＨ抗体に加えて更に成長を促進するであろう抗−ソマトスタチン 分子の産生な誘導するものであってもよく、また性ホルモン分子の全て又は１部 分と結合して免役学的去勢化効果が同時に付与されていてもよく、また黄体形成 ホルモル放出ホルモン（ＬＨＲＨ）の全て又は１部分と結合されていてもよい。

ペプチド、アジュバント及び／又はキャリアーは、公知のあるいはこれから開発 される賦形剤及び規格を用いて当業者が考えるようないずれの方法によっても製 剤化することができる。特に、ＥＰ−Ａ−５８４８１（ＩＣＩ）に記載されてい るようなラクチドグリコリドコポリマーなどの生体内分解性ポリマーによって製 剤化することができる。

更に本発明の他の局面によれば、例えば、を槓動物の成長を正常レベルより高め るまたはその成長速度を高めるだめに、あるいはミルクの産生を高めるために、 あるいはＧＨ＆：１１達した他の生物学的効果を高めもしくは促進するために、 正常なもしくは異常なを椎動物を上記した本発明の小さなペプチド又は抗原性組 成物で処置する方法が提供される。動物における脂肪のある肉に対する赤身の肉 の割合を、本発明の方法を用いることによって高めることもできる。“を椎動物 ”とはヒト及びヒト以外の動物を含む。

本発明の小さなペプチド及び抗原性組成物は、ある剤型では経鼻、経皮、経口又 は直賜内投与を行なうことができるが、通常は静脈内、腹腔内、あるいは筋肉内 投与される。製剤は通常は滅菌化され、非経口投与の場合にはパイロジエンフリ ーにされる。単位投与形態においては、本発明の小さなペプチドは典型的には１ −１０００μグ、更には１１０−５００ｕ、より好ましくは約５０μ９以下の路 で含有される。免疫学分野においてよく知られているように、１回もしくはそれ 以上の免疫化が有利である。製剤は一般的には医者又は獣医によって彼ら−の技 術に基づき調製され投与される。

更に本発明の他の局面によれば、公知のペプチド合成法によるあるいはネイティ ブＧＨ分子の適当な開裂による上記したペプチドの調製法が提供される。ペプチ ド合成は、”５ｏｌｉｄ　Ｐｈａｓｅ　Ｐｅｐｔｉｄｅ　５ｙｎｔｈｅｓｉｓ” （１＄１１Ｆｒｅｅｌａｎ、　Ｓａｎ　Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ、１９６９　）に記 載された５ｔｅＷａｒｔらの一般法により、あるいはＭａｒｌ；１ｌｉｎとＨｅ ｒｒｉｆｉｅｌｄ、Ａｎｎｕａｌ　Ｒｅｖｉｅｗｓ　ｏｆ　Ｂｉｏｃｈｅｓ＋１ ｓｔｒｙ　３９．８４１−８６６．８６２　（１９７０）及びそれの続編に記載 された方法によって達成することができる。固相法によるペプチド合成法及びそ れに類似した合成法は、大急生産には一般的に適していない（将来においては、 それらの方法は適したものになるがもしれないが）。従ってペプチドの工業的生 産は、目的とするペプチドをコードするポリヌクレオチド配列で形質転換された 適当な生物を培養することによって行なうのが通常である。

しかして本発明の更に他の局面においては、そのようなポリヌクレオチド、形質 転換、そのようなポリヌクレオチドを保持する発現ベクター、それで形質転換さ れた生物、及びそのような生物の培養法も包含される。

更に本発明の他の局面においては、本発明の方法によってその特性が変換された ヒトを除くを椎動物が包含される。

以下に本発明による実施例を次に示す図面とともに記述する。

第１図は、ｄｗａｒｆマウスを用いた予備実験の結果を示す。バーは１処置当り ６匹の動物を用いた時の１標準偏差（ｓ、ｄ、）を示す。

第２図は、第２回目のｄｗａｒｆマウスを用いた実験の結果を示し、ヒツジ７７ ２　（３５−５３のみ十ＦＯＡ）及びヒツジ７７５　（ＫＬＨフンシュゲート３ ５−５３）の１ｏＧ（グロブリン）活性を、異なるグロブリン濃度のＯＡ１オと 比較したものである。

７７２ニート−１０，５８ｊ蛋白質／ａ！ニア７５−９．６■蛋白質／ｄ。

０Ａｌｊ−５ａｙ蛋白質／−、バー−１ｓ、ｄ、：ｎ−６゜第３図は、第３番目 のｄｗａｒｆマウスを用いた実験の結果を示し、３５−５３Ｘ−結合＋ＦＣＡ（ ４６００，４６０９，４６０２，４６１２，４６１０）免疫処置又はネガティブ コントロール（４６６０，４６０８）免疫処置した異なるヒツジから得たグロブ リンの活性を表わしている。バー−１ｓ、ｄ、：ｎ−６゜ 第４図は、異なる方法で得られるｂ３５−５３に対する抗ｔｈ清が、ある場合に は、ウシ成長ホルモン及びブタ成長ホルモン分子にどのように結合できるかを示 したものである。後者に対する親和性は約１０Ｘ減少している。

ｄｗａｒ４マウスを用いた実験結果が示されている。バー−ｉｓ、ｃ１．：ｎ− ６゜ 第５図は、下垂体切除ラットを用いて後述するようにして実施した実験の結果を 示しており、９日間にわたるラット群（ｎ−６）の体重増加を示している。バー は１ｓ、　ｄ、を示しており、すべての処置でホルモンを与えた。

・：４匹の免疫化ヒツジから得て集めた抗−ウシ３５−５３抗血清を示し、ウシ 成長ホルモン結合（ＲＩＡ）はポジティブである。

×：４匹のヒツジのうちの１匹から得た上記と同様の抗血清 ○：ネガティブコントロール抗１１ｈＦＩ４−二モツクローナル抗体０Ａ１５（ 抗血清として処置）ロ：モノクローナル抗体ＯＡ　１７　（Ａｓｔｏｎ　ｅｔ　 ａｌ。

第６図は、下垂体切除ラットを用いて更に実施した実験の結果を示す。

Ａ：コントロールヒツジイムノグロブリンＢ：抗−３５−５３抗血清、ヒツジ１ ０６４．５■／−０ Ｃ：抗−３５−５３抗血清、ヒツジ１０６４．１５８９７ｄ、ニート。

バーはｉｓ、ｄ、を示す。ｎ−６゜ 第７図は、下垂体切除ラットを用いて更に実施した実験、即ち、オボアルブミン 又はソマトスタチンにコンジュゲートした抗−ペプチド抗体の比較実験の結果を 示す。

バーＬ；ｔ１ｓ、ｄ、を示す。ｎ＝６゜これらグロブリン調製物のそれぞれは、 ラットに投与前にウシ成長ホルモンと混合した。

第８図は、下垂体切除ラットを用いて更に実施した実験の結果を示し、族ウシ３ ５−５３がブタ成長ホルモンの活性も促進することを表わしている。１日当り１ ５μグのみをラットに投与したが抗−グロブリンは通常のレベルで用いた。バー はｉｓ、ｄ、を示す。ｎ＝６゜第９図は、下垂体切除ラットを用いて更に実施し た実験の結果を示しており、この実験では、ウシまたはブタ分子のいずれかに関 係した各種のペプチドに対する抗−ペプチド抗体でラットを処置した。ラットに 投与する前に全てブタ成長ホルモンと混合した。バーは１Ｓ、ｄ、を示す。ｎ＝ ６゜ 方旦 ±１Ｌ五匁ＩＩ 固相ペプチド合成のＦｍｏｃ−ポリアミド法により全てのペプチドを合成した。

９−フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏ　ｃ　）基でＮ（Ｘ−７ミノ 基を一時的に保護した。塩基に対して極めて不安定なこの保護基の解離は、２０ ％ピペリジンのＮ、Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液で行なった。

側鎖の官能基は、セリン、スレオニン及びチロシンである場合にはそのブチルエ ーテルとして、グルタミン酸及びアスパラギン酸である場合にはそのブチルエス テルとして、リシン及びヒスチジンである場合にはそのブチルオキシカルボニル Ｉｉ１体として、シスチンである場合にはそのトリチル誘導体として、アルギニ ンである場合にはその４−メトキシ−２，３，６−ドリメチルベンゼンスルホニ ル誘導体として保護した。Ｃ−末端残基がグルタミン又はアスパラギンである場 合には、その側鎖アミノ基は４．４′−ジメトキシベンズヒドリル基で保護した 。

固相支持体は、三つのモノマー即ちジメチルアクリル７ミド（バックボーン−モ ノマー）、ビス−アクリオイルエチレンジアミン（架橋化剤）及びアクリオイル ザルコシンメチルエステル＜ｍ能化剤）から構成されるポリジメチルアクリルア ミドポリマーを用いた。

ペプチドと樹脂とを結合する開裂可能な試薬として、酸に不安定な４−ヒドロキ シメチルフェノキシ酢酸誘導体を用いた。

アスパラギンとグルタミンとを除く全てのアミノ酸は、その対称性無水物誘導体 として加えた。アスパラギンとグルタミンとは、リバースＮ、Ｎ−−ジシクロへ キシルカルボジイミド／１−ヒドロキシベンゾトリアゾール介在カップリング法 によって加えた。

全てのカップリング反応及び脱保護反応は、ニンヒドリン、トリニトロベンゼン スルホン酸又はイソチンテスト法によってモニターした。合成の電絡段階では、 ５％スカベンジャー混合物を含む９５％トリフルオロ酢酸で処理することにより 、樹脂支持体よりペプチドを解離し同時に側鎖の保ｍ基も脱離した。一般的に使 用されるスカベンジャーは、エタンジチオール、フェノール、アニソール及び水 であり、合成されるペプチドの構成アミノ酸によって選択される。トリフルオロ 酢酸は真空下に留去することにより除かれ、次いでジエチルエーテルでトリチレ ーションすることにより粗生成物ペプチドが得られる。スカベンジャーは簡単な 抽出法によって除去することができ、得られる水層を凍結乾燥してスカベンジャ ーを含まない粗生成物ペプチドが得られる。

精製は、サイズ排除クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー及び（ 主として）逆相高速液体クロマトグラフィーなどの技術のいずれかにより、ある いはこれらを組合わせて行なうことができる。

ペプチドの分析は、薄層クロマトグラフィー、逆相高速液体り０マドグラフイー 、酸化水分解後のアミノ酸分析、及び＾速原子衝突（ＦＡＢ）マススペクトル分 析により行なうことができ、これらは当業者に周知である。

ヒツジを　いた　験：予備　験 方法：１：免疫原性組成物の調製 グルタルアルデヒドを用いたキーホールアオガイヘモシアニンへの架橋化： ペプチド（ヒツジ／ウシ３５−５３配列）１０ｑをジメチルホルムアミド５００ μｌに溶解し、これを、キーホール７オガイヘモシ７ニン１０ｑを加えた０、０ ５Ｍリン酸バッファー（ｐＨ７，８）４００μｌと混合した。

０．０２Ｍグルタルアルデヒドの０．０５Ｍリン酸バッファー（ｐＨ７，８）溶 液１−を、室温で撹拌しながら１時−で滴下した。得られる混合物を室温で更に ３時間撹拌し、次いでリン酸緩衝化食塩水（ｐＨ７，２）に対して透析した。

得られる調製物の半分を、２倍量の７０インド完全７ジユバンドと混合し、２匹 のヒツジに多数の皮下部位から注入した。２８日後に、調製物の残りの半分を同 様にして乳化しフロイント完全アジュバントとともに注入した。免疫期間中１週 間毎にヒツジより採面し、第２免疫後約１４日目に最適抗体応答が得られた。

２、ヒツジ血清のラジオイムノアッセイＧＨペプチドフラグメント３５−５３で 免疫後のヒラジによる抗体産生を、Ｉ−ｂＧＨを用いた液相直接結合アッセイ法 によりＡｓｔｏｎ、　ｅｔ　ａｌ、１９８５に記載されたと本質的に同様にして 測定した。

３、成長アッセイ 血清からγ−グロブリンを調製後に、ｄｗａｒｆマウスモデルで、成長促道ペプ チド抗血清（抗−３５−５３）の活性をＡｓｔｏｎ、　ｅｌ　ａｌ、　１９８６ 　：　１９８７に記載されたと同様にして評価した。

■ ウシ／ヒツジＧＨから得られるペプチドで免疫したとツジの血清について、Ｉ− ｂＧＨに対する結合及びｉｎ　ｖｉｖｏでのｂＧＨの生物活性に対する効果を評 価した。

抗−３５−５３抗自清とともにｂＧＨを与えたＤＩＩＴａｒｆ　マウスは、ｂＧ Ｈ及びコントロールヒツジグロブリンで処理したマウスよりもｈ意に成長した。

結果は第１図に示しである。

ヒ１１Ｓ″　いた　： 方法１．オポアルプミン又はキーホールアオガイヘモシアニン（ＫＬＨ）へのコ ンシュ゛−ジョンペプチド（例えばウシ３５−５３）１．４ａｆをジメチルホル ムアミド１４０μオに溶解した。１０１７ｄオポアルプミンもしくはＫＬＨのダ ルベツコリン酸緩衝化食塩水（ＰＢＳ）ｌ液を加えて十分に混合した。新たに調 製した０、０４Ｍグルタルアルデヒド２００μオをゆっくりと撹拌しながら１０ 分閤で加え、次いで室温で更に６０分間放置した。ＰＢＳｏ、７−を加え、更に 同様に０．０４Ｍグルタルアルデヒド１００μｌを加えた。室温で６０分間ｔｌ ｉ装した後、４℃でＰＢＳに対して１晩透析した。

ｌ−ｌ１１ ペプチド１．４ｊＦｊをジメチルホルムアミド１４０μｌに溶解し、上記と同様 にして０．０４Ｍグルタルアルデヒド１７０μｌを加えた。他は上記と同様にし て行なった。架橋化もコンジュゲーションも必要ない場合には、ペプチドをジメ チルホルムアミドに溶解し、ＰＢＳに分散したが、透析はしなかった。

３、ネガティブコントロール 上記したものに対するネガティブコントロールを、ペプチドを用いないでオボア ルブミン（又はＫＬＨ）のみを用いて、又はポリリシン（分子１１０００−２０ ００Ｄａ）と架橋化により、作成した。

シュバント　び　−７０゛ 透析後、上記の調製物の体積をＰＢＳにより４．５−とし、２倍量のフロイント 完全アジュバント（ＦＣＡ）（Ｄｉｆｃｏ又は５１ｇ１＋ａ　）を用いて油中水 型エマルジョンをＩＩ製した。冷却下に超音波処理することにより、あるいはＰ ｏｔｔｅｒ　−Ｅｌｖｅｈｊｅｎホモジナイザーを用いてエマルジョンを作成し た。氷表面での分散（又は分散なし）によりエマルジョンをテストした。Ｃｈｅ ＶｉＯｔヒツジ（９−１２ケ月、失熱した雄）の２ケ所（両側の横腹それぞれに ）に皮下投与した。それぞれの部位に１ＪＩｌｅ投与した。同様にして新たに調 製したフンシュゲートペプチドを７０イント不完全アジユバント（ＦＩＡ）　（ Ｄｉｒｃｏ又は５１ｇｇ＋ａ　）中に乳化したエマルジョンを用いて、２回目の 免疫化を同様に行なった。それ以後の免疫化も同様にして行なったが、その間隔 は２８日間であった。

５、アジュバント及び投与−その ＤＥＡＥ−デキストラン（２重に蒸留した水中で１晩十分に水和したもの）、サ ポニン（ｓｒｇｍａ　）　、アルミニウムヒドロゲルをそれぞれ単独で、あるい は組合わせて用いた。透析後、ＰＢＳ３．１ｄ、５％ＤＥＡＥ−デキストラン（ Ｄｄ）７ｄ及び５ＲＩ／ｄサポニン２．８ｄ：ＰＢＳ５．９ｄ及び５％Ｄｄ７Ｍ ！＝又はＰＢＳｌｏ、１−及び５１１９／ｌｌサポニン２．８ｄを加えた。アル ミニウム（ＡＪＯＨ）は、適当な場合には終濃度が１．０り／−となるように用 いた。

乳化は必要なかったが、懸濁液を均質に保つには注意が必要であった。上記と同 様にして、１−をヒツジに投与した。同様の間隔で免疫化を実施した。

６、血液サンプル 投与前及びその後３週間毎に、テスト期間のヒツジから、頚静脈バンクチャーに より血液サンプル１０ａｅを採取した。室温に放置して血清を形成せしめた後（ 約５時間）、遠心して血清を得、直ちに抗体検出ラジオイムノアッセイに供した 。同様にして約１５Ｃ）ｄの血液から、より多量の血清サンプルを集め、−２０ ℃で凍結して続く分画化及び成長アッセイ用に供した。

７、ラジオイムノアッセイ ウシ成長ホルモンにも結合するペプチドに対する抗体を、Ａｓｔｏｎ　ｅｔ　ａ ｌ、　１９８５　：　Ｃｈａｒｄ、　１９８７に記載されたと同様にして液相直 接結合法により検出した。

結果 ヒツジを用いた実験の結果が表１にまとめて示されている。これによれば、ペプ チド３５−５３を用いたほとんどのフンシュゲート（又はペプチド単独）につい てＦＣＡの優勢が示されている。ヒツジに与えられた１り３５−５３配列の場合 のように、わずかの変化によって応答速度（実際の力価も同様、示さず）が更に 改善される。３５−５３配列付近の配列であってその配列を含むもの、及び３５ −５３配列内のものは、少なくとも適度の応答を誘導した。

人−−ユ 液相　のインタクト　シ　ホルモン に結合するヒツジ血清中の抗体のラジ イムノ　ツセイによる ウシ３５−５３変化体： ＫＬＨＦＣＡ　６０ ＫＬＨＡｊＯＨナシ ＫＬＨサポニン　２０ ＫＬＨＤｄ　２０ ＫＬＨＤｄ＋ＡＪＯ）ｌ　２０ オボアルブミン　”　ＦＣＡ　（超音波処理）　２０〃　”　ＦＣＡ　８０ 〃　ＡｌＯＨ２０ 架橋化　ＦＣＡ　８０ 〃　サポニン　２０ 〃　Ｄｄサポニン　８０ 〃　Ｄｄ単独　２０ ナシ　ＦＣＡ　４０ ＡｊＯＨ２０ サポニン　２０ Ｄｄ　２０ Ｄｄ＋ＡｊＯＨ２０ 他のペプチド（ことわりのない限り、全て上記のウシペプチドをオボアルブミン にコンジュゲートし、ＦＣＡとともに投与した） ４６−６１ＣＶＳ　６０ ３５−４３Ｃｙｓ　２０ ブタ３５−５３　１００ ８他にことわりのない限り、エマルジョンはシアリング（ｓｈｅａｒｉｎｇ）に より調製した。

１２象亘里１１１ 友韮 ３５−５３配列（又はそのアナログ及び関連配列を他のペプチドあるいは免疫学 的に興味ある分子に結合し、それら両者に対する免疫応答が改良されることを照 明する実験を行なった。

これに関して、特に動物における免疫中和の役割りの観点から、ソマトスタチン をこの実験用に選択し、また免疫中和抗体を効果的に産生せしめる困難さを考慮 して（５ｐｅｎｃｅｒ、　１９８６　）ソマトスタチンを選択した。

ソマトスタチン（１−１４）　（Ｓｉｇｓ＋ａ　）を用ｕＮＴ、このソマトスタ チンを４ａｙ／−の濃度で加えて透析を実施しないこと以外は上記（１１−１） と同様にしてコンジュゲーシヨンを行なった。他の全てのコンジュゲートは上記 （１１−１）と同様にして調製した。

成長ホルモンに結合する抗体のラジオイムノアッセイはソマトスタチンについて も上記（１１−７）と同様であり、ニーラベル化Ｔｙｒ−ソマトスタチンを用い て５ｐｅｎｃｅｒ　ｅｔ　ａｌ、　（１９８３）に記載された方法に基づいて実 施した。

結果 表２にまとめたデータによれば、ソマトスタチンに対して良好な抗体力価を得る のは通常は困難であり、そしてウシ３５−５３配列に架橋化することにより（単 に内部架橋するものではなく）ソマトスタチンのそれ自身に対するこのトレラン スが顕著に克服されることが示されている。

表２ ３５−５３配列−ンマドスタチンコンジュゲートを用いた免疫後におけるインク クトウシ成長ホルモン及び／又はソマトスタチンに対する抗体のラジオイムノア ッセイ認識抗体（％）（ｎ＝５＞ 処　＠　ｂＧＨソマトスタチン 架橋化３５−５３：　ＦＣＡ　８０　ナシ架橋化ソマトスタチン：　ＦＣＡ　ナ シ　４０（３５−５３）＋ソマトスタチン架橋化Ａ　８０　８０ＦＩＡ４０６０ Ｄｄ＋サポニン　８０　４０ ■、ブタを　いた 」 １、一般的事項 ３５−５３配列及び前記したＴ−セルエピトープをジメチルホルムアミドに溶解 し、ＰＢＳに分散しくｎ−２参照）、次いでＦＩＡ中に乳化した後、ブタに投与 した。

ここで用いた配列はコンジュゲーションも架橋化も行なわなかった。

かくしてＩ製したペプチドを、ラージ−旧ｔｅ子ブタ（５週令、約９　Ｋｙ体重 ）の首の４ケ所の部位から皮下投与して、子ブタ１ド当り５００μ３を投与した 。２８日後に、同じペプチドを用いて第２回目の免疫化を実施した。この時は、 ＦＩＡを用いて投与した。この免疫化の直前及びそれから１週間毎に、吸収補助 器の付いた静脈注射器（Ｃｏｒｖａｃ、　５ａｒｓｔｅｄｔ、　Ｌｌ、　Ｋ、　 ）　Ｌ：Ｊ：Ｖ）肺静脈カラｔｈ液サンプルを採取した。得られる血清について 、酵素免疫吸着７’／セイ（Ｅｌ　ｌ５Ａ）を用いてＶＯＩｌｅｒ、１９７９に 記載された方法に基づきブタ成長ホルモンの抗体ＩＩをテストした。このアッセ イでは水性ホルモンとの競合反応による交差結合を行なわせた。

Ｌ一旦り土盈込 イムノアッセイテスト用の９６−ウェルプレート（Ｎｕｎｃ、免疫能：高結合能 ）を、炭素ナトリウム／重炭酸ナトリウムバッファー０．０５Ｍ　１）Ｈ９，５ 中５μグ。

ウェル（１００μｌ）となる割合いで５０μ９ホルモン／−を用いてコートし、 次いで４℃で１晩放置した。ホルモン溶液を注意深（除き、ウェルをＰＢＳで１ 回洗浄した。３％ヘモグロビン溶液を加えてウェルをブロックし、４℃で１＠放 置した。この溶液を除き、ウェルをＰＢＳと０．０５％Ｔｗｅｅ口で３回洗浄し た。全てのウェルを室温でゆっくりと乾燥させ、それぞれのウェルを粘着フィル ムで包んで一２０℃で保存した。テスト用の血清をウェルの１１５０の量で各ウ ェルに加え、次いでｌｏｇ１０希釈（１００μｌ）を行なって室温で２時間放置 した。次いでこれをウェルから除いて、ＰＢＳで３回洗浄し、次いでラビット抗 −ブタＩＧＧアルカリホスフェートコンジュゲート（Ｓｉｏｍａ　）　１００ｕ 　１　（１０−３希釈）を加えた。次いでこれを除き同様にして洗浄した。

１、ＯＪｌ／ａｎ−ニトロフェニルホスフェート１００μｌを加え、ウェルの吸 光度を、４０５ｎ−フィルターを用いたＴｉｔｅｒｔｅｋ　Ｈｕｌｔｉｓｃａｎ 　Ｐｌｕｓ　２により測定した。

■ コートされたブタ成長ホルモン（これは水性ホルモンと競合する）を認識する抗 体の存在が、多くのブタの血清で検出されたことが表３に示されている。

表　３ ４２日　のベプチ゛　での によって測　された抗−ＧＨ ３５−５３７−セルエピトープ　１００　１００Ｖ、ＧＨ活性について生物学的 アツセイム葦 １、イムノグロブリンの調製 特定の動物（イムノアッセイに用いた）から得た入日の白液サンプルから血清を 得、これを、硫酸ナトリウム沈殿法（Ｊｏｈｎｓｔｏｎｅ　＆　Ｔｈｏｒｐｅ、 　１９８２　）によって分画して、ガンマグロブリン（ＩａＧ）を単離し、ＰＢ Ｓに対して透析して、−２０℃に凍結した。動物実験に使う前に、精製１ｇＧ分 画の沈殿効果をモニターしてその力価を再測定した。

２、　Ｄｗａｒｆ　？’７ス ＤＷａｒｆマウス（下垂体欠除）の肋骨の軟骨組織での３５８０４−の取込みを 測定するのにこのマウスを用いた。

そしてこれはＡｓｔｏｎ　ｅｔ　ａｌ　、１９８６に記載されている。

３、下垂体切除ラット この動物は、外科手術によって下垂体が欠除されている、ソマトメジン−Ｃの循 環レベル並びにラットの体重に対するホルモンの全体的効果をアッセイによりモ ニターした。

雄性Ｗｉｓｔａｒラットの外科手術はＣｈａｒｌｅＳ　Ｒｉｄｅｒ　Ｕ、に。

Ｌｉｍ１ｔｅｄ　（ＨａｒＱａｔｅ、にｅｎｔ、　ｕ、に、）で行なわれ、１４ 日後に体１１２５−１４５ｇのラットとして供給された。

更に７−１０日間ラットを観察して、手術が完全に行なわれていて良い状態とな っていることを確認するため体重が安定していること及び肉体的特徴（例えば寧 丸がないこと）を調べた。満足のいくラットをランダムに抽出して１処胃当り６ 匹の群に割り当てた。このラットに、免疫化処置した実験中のヒツジ（ネカテイ ブコントロールも含む）から得たヒツジＩＱＧ約１Ｒ１１を含むＰＢＳＯ，５− を毎日性態した。このＰＢＳにはウシ又はブタ成長ホルモン５０μｇ（例外的に は１０μ９、結果参照）が加えられている。投与前に、このホルモンとＪＯＧと を混合し、室温で６０分開放置した。皮五及び肩甲骨注射を行なった。８日問、 毎日同じＲ間に体重を測定し注射を行なった。９８目にラットの体重を測定し、 最後に麻酔をかけて、大動脈分岐部分から血液サンプルを採取した。ＥＤＴＡ− プラズマを一２０℃で凍結した。これは、Ｎ１ｃｈｏｌｓ　Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅ 　（Ｓａｎ　Ｊｕａｎ　Ｃａｐｉｓｔｒａｎｏ、ＣＡ９２６７５、ＬＩＳＡ）の 材料を用いた相対的全ソマトメジン−Ｃレベルを評価するのに用いた。

級１ ｏｗａｒｒマ　− 第２．３及び４図にまとめられたデータから、ヒツジ抗−ウシ（ｂ）３５−５３ 抗血清とともに成長ホルモンを投与したｄｗａｒｆマウスは、コントロールヒツ ジクロプリンとともにｂＧＨを投与したｄｗａｒｒマウスに比べて、有意に多量 の　Ｓ　（Ｎ　ａ　２　Ｓ　Ｏ４から）を肋骨の軟骨組織に取込んだことが判る 。このことは、各種の免疫化方法で処置して得た抗血清を用いた場合に観察され ており、また抗ｒｆＢＷｉとホルモンとを混合する前の抗血清希釈に関係してい る（第２図）。またこの現象は、ウシ３５−５３配列に対する抗血清であってイ ンククトプタ成長ホルモンも認識する（同種ホルモンをｇ識する場合よりもずっ とその認識力は弱いが）抗血清を成長ホルモンと混合した場合にも観察すること ができ、この時に肋骨の軟骨組織での３５８の取込みが促進するものと考えられ る。

２、下垂体切除ラットモデル 各種の抗ペプチド血清を下垂体切除ラットに投与した時に、これらの抗ペプチド 血清がウシ及びブタ成長ホルモンの活性を促進することが、第５〜９図の結果か ら判る。

この系では、３５−５３領域に関係したペプチドに対する抗血清は、成長ホルモ ンに対する応答を促進する活性を有する（第７図）。この現象は、抗血清が問題 とするターゲットホルモンに結合する限り、種の相違による障害を乗り越えて種 が異なる場合であっても観察される（第７図）。結合能又は親和性が限られてい る場合には、グロブリンとホルモンとの割合いを調整して、ホルモン−抗体コン プレックスの割合いを最大にする必要がある（第８図のように）。

コゝシュ゛−ト　ソマトスタ　ン 友葦 Ｈａｒｔ　ｅｔ　ａｌ、　１９８４に記載された方払に従って、ヒツジ下垂体細 胞（−次培養）からの成長ホルモンの放出に対する抗−ソマトメジン抗Ｉｌｈ清 の活性を測定した。抗体の成長ホルモン結合特性はこの測定の際の障害となるの で、ヒツジ成長ホルモンがあらかじめ結合したアフィニティーカラムに通してこ れらを除去した。活性化セファロース−ＣＮＢｒカラムを、製造業者（Ｐｈａｒ ｇｉａｃｉａ。

Ｈｉｌｔｏｎ　Ｋｅｙｎｅｓ、　Ｂｕｃｋｓ、　Ｌｌ、　Ｋ、）の指針に従って 調製し°　た。

ソマトスタチン−１４（ｓｔｏｇｉａ　）を、免疫（ＲＩＡにより抗−ソマトス タチン活性）又は非免疫（抗−３５−５３のみ）ヒツジ血清１０μ！　（５−２ ５０ｘ１０”ｍｏｌ／ｊ）を含むウェルに加え、メディウム中に放出される成長 ホルモンのレベルに与えるこのペプチドの抑制活性を評価した。

結果 表４に示されているように、ソマトスタチン抗体を含む抗血清中に加えられたソ マトスタチンの抑制活性はかなり減少する。従って注目すべき重要な事項は次の ことである。即ち、ウシ３５−５３＋ンマトスタチンコンジユゲートに対する抗 血清中には、２つのグループの抗体、その１つはインククトウシ成長ホルモンに 結合してその活性を促進する抗体、他の１つはインタクトソマトスタチン−１４ に結合してそれを中和する抗体が含まれていると考えられる。

表　４ Ｈａｒｔ　ｅｔ　ａｌ、　１９８４に記載された一次培で　したと１１ｒ　に　 、マ スタチンの効果 ＧＨ−放出抑制（平均％ ソマトスタチン　抗−３５−５３単独　抗−ソマトスタチン弘亙叉１ １．　＾５ｔｏｎ、Ｒ，、Ｃｏｏｐｅｒ、Ｌ、、Ｈｏ１ｄｅｒ、＾、Ｔ、、１ｖ ａｎｙｉ。

Ｊ６．及びｐｒｅｅｃｅ、　Ｈ，＾、（１９８５）、　ＭｏｌｅｃｕｌａｒＩｍ ｍｕｎｏｌ、２２　２７１−２７５゜２、Ａｓｔｏｎ、Ｒ，、Ｈｏ１ｄｅｒ、＾ 、Ｔ、、　Ｐｒｅｅｃｅ、　Ｈ，Ａ、、及びＩｖａｎｙｉ、Ｊ、（１９８６）　 Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ、１１０　３８１−３８８゜３、Ａｓｔｏｎ、　Ｒ，、Ｈ ｏ１ｄｅｒ、　Ａ、Ｔ、、　Ｉｖａｎｙｉ、　Ｊ、及びＢｏｍｆｏｒｄ、　Ｒ， （１９８７）、１４ｏｌｅｃ、　■−５ｕｎｏｆ、２４１４３−１５０゜ ４、　Ｃｈａｒｄ、Ｔ、（１９８７）、Ａｎ　Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｔｏ 　Ｒａｄｉｏ−ｉｇ＋ｍｕｎｏａｓｓａｙ　ａｎｄ　Ｒｅ１ａｔｅｄ　Ｔｅｃｈ ｎｉｑｕｅｓ、３ｒｄＥｄｉｔｉｏｎ、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、Ａａ＋ｓｔｅｒｄａ ｍ。

５、Ｈａｒｔ、　１．　Ｃ，、Ｊａｓｅｓ、　Ｓ、、　Ｐｅｒｒｙ、Ｂ、Ｎ、、 及び６、Ｊｏｈｎｓｔｏｎｅ、Ａ、、及びＴｈｏｒｐｅ、　Ｒ，（１９８２）、 　Ｉｎ＋ｕｎｏ−ｃｈｅｓｉｓｔｒｙ　ｉｎ　Ｐｒａｃｔｉｃｅ、Ｂｌａｃｋｗ ｅｌｌｓ、Ｌｏｎｄｏｎ　。

７、５ｐｅｎｃｅｒ、Ｇ、Ｓ、Ｇ、（１９８６）、Ｃｏｎｔｒｏｌ　ａｎｄＭａ ｎｉｐｕｌａｔｉｏｎ　ｏｒ　Ａｎｉｍａｌ　Ｇｒｏｗｔｈ、Ｐｐ　１７９−２ ９３゜Ｂｕｔｔｅｒｗｏｒｔｈｓ、Ｌｏｎｄｏｎ　。

８、　５ｐｅｎｃｅｒ、　Ｇ、Ｓ、Ｇ、、　Ｇａｒｓｓｅｎ、　Ｇ、Ｊ　、、及 びＨａｒｔ。

１、Ｃ，、（１９８３）、Ｌｉｖｅｓｔｏｃｋ　Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　５ｃｉ ｅｎｃｅ１０　２５−３７゜ ｓ、ＶＯｌｌｅｒ、　Ａ、、　Ｂｉｄｗｅｌｌ、　Ｄ、Ｅ、及びＢａｒｔｌｅｔ ｔ、＾。

（１９７９）、Ｔｈｅ　Ｅｎｚｙｇ＋ｅ　Ｌｉｎｋｅｄ　Ｉｍ＊ｕｎｏｓｏｒｂ ｅｎｔ＾５ｓａｙ、Ｄｙｎａｔｅｃｈ　Ｅｕｒｏｐｅ、Ｇｕｅｒｎｓｅｙ。

ＦＩＧ、１ ＦＩＧ、２ ＦＩＧ、３ ＦＩＧ、４ 十つシへ゛長ホルモン　十７“タ底゛＆ホル七ンＦＩＧ、５ ＦＩＧ、６ ＦＩＧ、７ ＦＩＧ、８ 土つシへ゛長ホルＬン　士つ“り底゛長片、ｔＬ＋−ンＦＩＧ、９ 国際調査報告 ＋ｌＩ＋−−−ｅｅ−ａ−ｍｓ＋＋ｍ験＋ｎＩＩＩ＋＠、ＰＣＴＩ′ＧＢ８８１ ００２３１国際調査報告 ラボラトリ コート　（番地なし）、ザ　ウェルカム　１ノサーチーズ気付

Claims (15)

【特許請求の範囲】
1. １．ウシ成長ホルモンの３５−５３の位置に広がつた領域におけるアミノ酸残基 の配列に対して一次構造相同性を有するペプチド、それと抗原性上等価なペプチ ド、又はそれらの塩。
2. ２．以下のペプチドから選択されるペプチド、それと抗原性上等価なペプチド、 又はそれらの塩：（ａ）【配列があります】． （ｂ）【配列があります】． （ｃ）【配列があります】． （ｄ）【配列があります】． （ｅ）【配列があります】．
3. ３．以下のペプチドから選択されるペプチド：（ｆ）ｂＧＨ２６−４３ （ｇ）ｂＧＨ３５−４３ （ｈ）ｂＧＨ３７−４８ （ｉ）ｂＧＨ３９−４６ （ｊ）ｂＧＨ４３−５４ （ｋ）ｂＧＨ４３−６１ 又は上記（ｆ）−（ｇ）のペプチドのヒト、トリ、サーモンもしくはブタアナロ グ、又はそれらいずれかの塩。
4. ４．請求の範囲第２項又は第３項記載のペプチドに対して一次構造相同性を有す るペプチド、又はその塩。
5. ５．ペプチドの少なくとも４５％が、請求の範囲第２項記載のペプチド又はそれ に対して一次構造相同性を有するペプチドの少なくとも３５％と重複している請 求の範囲第１項記載のペプチド。
6. ６．５−２０個のアミノ酸残基を有する請求の範囲第１項から第５項のいずれか １項記載のペプチド。
7. ７．（ａ）それ自身；（ｂ）請求の範囲第１項から第６項のいずれか１項記載の 他のペプチド；（ｃ）Ｔ−セルエピトープ；又は（ｂ）ソマトスタチン分子の全 部又はその１部分にコンジユゲートされている請求の範囲第１項から第６項のい ずれか１項記載のペプチド。
8. ８．請求の範囲第１項から第７項のいずれか１項記載のペプチド、及びアジュバ ント機能並びにキャリアー機能を有する手段を含む抗原性医薬製剤。
9. ９．ペプチドがキャリアーに結合している請求の範囲第８項記載の製剤。
10. １０．ペプチドがキャリアーに結合されておりあるいは結合されておらず、且つ アジュバントと混合されている請求の範囲第８項又は第９項記載の製剤。
11. １１．請求の範囲第８項から第１０項のいずれか１項記載の製剤を脊椎動物に投 与することからなる脊椎動物の生物学的特徴を変化させる方法。
12. １２．ソマトジエネシス又はラクトジエネシスを促進するための請求の範囲第１ １項記載の方法。
13. １３．請求の範囲第１１項又は第１２項記載の方法によつてその生物学的特徴が 変化された脊椎動物。
14. １４．化学的ペプチド合成又は適当に形質転換された生物を培養することによる 請求の範囲第１項から第６項のいずれか１項記載のペプチドの調製法。
15. １５．請求の範囲第１項から第６項のいずれか１項記載のペプチドをコードする ポリヌクレオチド配列。