JPH01501624A - 非極性吸着樹脂の使用下に強心性グリコシドを増量しかつ／または単離する方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 非極性吸着ｌＩＢ￥１の使用下に強心性グリコシドを増量しかつ／または単離す る方法 技術分野 不発明に、強心性グリコシドを含有する混合物、例えば粗製佃出液、化学的変化 および結晶化段階の生成物、２よび母液の後処理方法に関する・背景技術 強心性グリコシドとａｌ一般式１．Ｂｉ九は１：Ｒ−０−（Ｄ−０す１−ｓ−＜ 、グルコース基−○−）、〜、−Ｈ（１）Ｒ−０−（Ｄ−０−ｈｌｌｑ４ｓ−Ｒ ’　Ｕｌ）Ｒ−〇−（グルコース基−０−）ｚ−＊−Ｈ（Ｊ）〔式中Ｒ１（それ ぞれアグリコンを表わし、Ｒ′μ水素、メチル基ま丸はアセチル基を表わし、Ｄ にデスオキ７楯基を表わ丁〕で示される化合物のことでろる（　Ｕ１１ｍａｎｎ ＊　３．　Ａｕｆｌｑ　Ｂａｎｄ８＊　Ｓ、　２２２〜２５１）。

例えば１９部分の慣出、化学的変化および結晶化操作の際に生じる混合物から、 強心性グリコシド、例えばゾゴキシ／（Ｄｉｇｏｚｉｎ　）　、メチルジゴキシ ン（Ｍｅｔｉｌｄｉｇｏｘｉｎ　）、ストロ７アンチン（Ｓｔｒｏｐｈａｎｔｉ ｎ）、ラナトサイド（Ｌａｎａｔｏａｉｄ　）　ｔ−単離する九めには、反復回 流分配〜再溶解および再沈殿のような大抵費用のり１かる方法が必要である（例 えばＵｌｌｍａｎｎ　、上記個所参照）０ これらの方法は、環境を汚染する可能性のめる有機溶剤、例えばクロロホルム、 ジクロルメタン、トリクロルエチレンを多量に使用する必要がある。このような 溶剤を多量に取扱うと、空気および水を汚染しないようにするための技術的費用 が大きくなる。利用できない母液および濃縮液中の有用なグリコシドの損失が大 きい。

発明の開示 本発明は上記点点に対する解決手段を提供しようとするものである。本発明は、 粗抽出液、化学的変化および結晶化段階の生成物のような長金物および母液から 強心性グリコシドを増量しかつ単離する方法において、従米技ｍ＜よって必要な 、環境汚染の可能性のるる浴剤を用いなめて十分うまくいき、さらに有用なグリ コシドの損失？：′：ｔｃ少させ、ひｒては収率を増大させるような前記複類の 方法を提供するという課題を解決樹脂で吸着し、次に水／ｆ＃剤混合物ま九は純 粋溶剤を用いて脱着することによって、上述の混合物および母液からの強心性グ リコシドを増量し、精製することができることが判明した。この場合特に、脱着 浴液の組成を変えることによってグリコシド混合物を個々の化金物またはグルー プに分離することができることは意外である。

従来、著しく希釈された浴液から高分子非極性ｗ脂を用いて有用な物質、例えば 抗生性セファロスポリン（ＣｅｐｋｌＪＬ１０８ｐＯｒ！Ω）を単離することは 公知である。複雑な強心性グリコシド混合物から強心性グリコシドを増量して単 離する問題、特にこのために必要な溶剤によって起る危険も久しく公知でるる。

本発明は従来存続している妥京も満足させる。

本発明による増量および単離のために必要な吸着および脱着は、連続的また不連 続的（バッチ法）に行うことができる。しかしこの方法は、有利には２０〜５０ ℃の温度で好ましくはＮ＠で１〜１０バールの弱圧下のカラムで行う。

この方法の几めに、粗抽出液を非極性溶剤、好ｌしくはヘキサノ、トリオール、 イソヘキテンまたは石油エーテルで６理することによって脂肪状成分１−除去し た後％適当なｌ［を脂を光槙した力２ム上に、粗抽出液つまり不純化されたグリ コシド混合物の水性溶液を、場合によっては１〜８０チの低級アルコール、特に メタノール、エタノール４ｚはイソグロパノール、低級クトン特にアセトンを加 えつつ施す。

すべての強極性物質、例えば糖は、樹脂の充填されたカラムから水で洗浄するこ とによって除去される。

水と混合可能の溶剤、特にアルコール、低級ケトンまたは環状エーテルを加え、 塩を加え、特定のβ値を調整して溶離液を変えると、個々の強心性グリコシドま たはグリコシドのグルニブが樹脂から脱着される。ナベての溶剤は、可及的に環 境適合性であるように選択することができる・これによって、前精製にとって必 要な）多量の塩素化炭化水素を回避することができる。

わち好ましくは架橋され次スチロールポリマー、アクリルエステル重合体および ／またはスチロール−ジビニルベンゾ−ルー共重合体が好適である。化学的に変 性され、臀にハロゲン化されまたは物理的に分類され、例えば−別され、程径、 表面積につめて規格化されていてもよめ樹脂が好適である。

このような＊脂は、例えばアンバーライト（Ａｍｂｅｒｌ　１ｔｓ）ＸＡＤ（商 ［１：　Ｒｏｈ！ｌＩ＆　Ｈａａａ　Ｃｏ、　）、ダイヤイをン（Ｄｉａｉｏｎ 　）　ＨＰ　（商標二三菱化成）またはセパビーズ（８ｅｐａｂｅａｄｓ　）　 Ｓ　Ｐ　（商標二三菱化成）ノ名称で、それぞれ異なる表面嵜性、ひいては吸Ｍ ｔ＃性を臀する系列として得られる。例： ＊）　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ａｂｓｔｒａｃｔｓ　ＳｅｒｖｉｃｅＲｅｇｉａｔｅ ｒｎｕｍｍｅｒ 上記の４種の樹脂が極めて適当であることが判明した。しかし特にダイヤイオン ａｐ２０ｓｓ＞よびＨＰ２１ｓｓが最適でるる。

種々の８４脂の種々の吸着能力を極めて有利な分離方法に組合わすことができる 。

他の漬物性含有物、例えばクロロフィルも有機溶剤、好ましくはアルコール、ケ トンまたはエステルをカラム上に供給することによって脱着される。このように して得られた溶液を蒸発濃縮した後、場合により補助物質、好ましくは活性炭、 酸化アルミニウムまｆｃは漂白±（フロリジン）の添加下に再溶解および再沈殿 により純粋物質が得られる。水性溶液からの単ｇ１は、エネルギー費用のかかる 濃縮の代シに、ポリマー樹脂への吸着および有機溶剤での脱脂によっても行いう る０図面の簡単な説明 図面は例６の方法を説明する７０−シートである：１・・・ダイヤイオンＨＰ２ ＭＧ４１０１Ｌｔｔ光横し九カラム、２・−・ダイヤイオンＨＰ２ＱＳＳ’ｉ元 項したカラム、３・・・ポンプ、４・・・三方弁、５・・・三方弁、６・・・三 方弁、７・・・研出管、８・・・排出管 発明を笑流するための最良の形態 次の実施例によρ本発明を詳述する： 発酵、加水分解および脱脂を予め行った後のゾイタリス・ラナータ（Ｄｉｇｉｔ ａｌｉｓ　１ａｎａｔａ　）の水性メタノールε粗畑出叡３−６７　ｔ　ｓダイ ヤイオン−（商標）２０　ｓ　ｓ　（ｇ造者二三菱化成）４１０ｍ＋／″を光横 したカラムに吸着させる。この佃出液はジゴキシン含分１．９５Ｉの乾燥物質１ １７ｙを含有する。水４．９７で洗浄し次後刀ラム上にはジゴキシン１．９５ｇ を含有する乾燥切質１２．２ｇが固定される０ ３バールで水性インプロパツールを用いて溶離した後、ジゴキシンの著しく増量 されｆｃ７ラクシヨンが得られる。１５％イソプロパツール溶液６−３１　ｋ集 めて、１００１１ＬｔＫなるまで濃縮する。晶出した粗製ジゴキシン７ラクシヨ ン（４，９，９）を熱時にメタノール／クロロホルム（ｉ：１）ｓｏｙ中に浴か し、活性炭で処理し、酸化アルミニウム７．５．９　ｔ−介して濾過する。メタ ロ５８１”を用いて沈訳を行う、ジゴキシン１．４９が単離ゾイタリス・ラナー タ起源グリコシドの乾燥グリコシド（含有物ニラナトサイドＣｌ２ｑｂ１ジゴキ シン約１チ、α−アセチルジゴキシン約１．５％）２０ｇを、水１５０１Ｌｔお よびメタノール４５ｍ中に浴か丁。この溶液を、ダイヤイオンｎＰ２Ｏ５８４１ ０ｄｔ−含有するカラム上に流速１．４ｊ／ｈをもって施す・次に４〜５バール の圧力で水（メタノール量を高めながら添加する）で溶層する。メタノール分５ ０チから浴出液中にグリコシドが、ラナトサイドＣ１ゾゴキシン、α−アセチル ジゴキシン、β−アセチルジゴキシン、ラナトサイドＡＯＪＩＩ序で検出されう る。メタノール５５チを含有する７２クシヨン６！を完全に蒸発濃縮しく２．５ ３．？、ラナトサイドＣ６０〜７０Ｉｓおよびゾビキシン３チを含有）、活性炭 の添加下に再結晶させる。

純粋ラナトサイドｃｉ、ｏｙが得られる。母液残留物および混合フラクションを 再びカラムを介して精製しかつ分離する。

ストロ７アンテン・コンペ（Ｓ＄ｒｏｐｈａｎｔｈｕｓ　ｋｏｚｂＪ）の種子の 、ヘキサンでＢｉ脂したエタノール佃出液の乾燥物質２［［’を、水１００ｄ中 に溶かし、ダイヤイオンＨＰ　２０　Ｓ　８４１０１１７ｔ”光横シｆｔカラム （Ｃｌ：：ｙｆテ注ぐ。

すべての非グリゴシドｔ−４〜５バールおよび流速１．４／／ｈで水４．２！を 用いて洗浄する（乾燥物質８．３．９）。

溶離液にメタノール４５−を加えた後１グリコシドを含む液体７．８ノが得られ る。蒸発ａ縮しく　６．９　ｇ）、エタノール中に浴り為し、活性炭で処理し、 ジイソプロビルエーテルで沈殿を行う。純粋グリコシド混合物（ｉ−に−ストロ ７アンチン７５チ％／ｌ−に一ストロ７アノチン１２−５　％　ｓ　／’ｚ　− Ｋ−ストロ７アンテン９．５％）　６．０６　Ｎが得られる。同混合物は、さら に処理することなく丁でに薬局】の要求にかなってしる０例　４　： 例３と同様な乾燥物質２０Ｆを水に溶かして、ダイヤイオンＦｉｐ２０ｓｓ４１ ０ｍ上く施す。このカラムを３０係まで増大するメタノール分を含む水でｉｇ− 離する。こうして得られたフラクション（乾Ａ物質：　１０．１＆　）ｔｄＫ− ストロファンチンのグリコシドｔ″′＠有していない。メタノール４０チを含有 する７ラクシヨン（２，８１）は蒸発ａ縮後にγ−に一ストロファンテン５ｊｔ ＩＩ’ｌＥじる。メタノール分を４５チに高めると、γ−βニーおよびβ、−に 一ストロ７アンテンのｍ　合７５クシヨン（７，５Ｊ　ＪＩＭ後３．ｔｌ　ｇ） が得られ、メタノール５０％を含有する溶離液２．１１はβ、−に一ストロ７ア ンテン０．６１．９　（乾１に＊質）を含有する。

ストロ７アンツス・グラフ　ス（５ｉｒｏｐｈａｎｔｕｓ　ｇｒａｔｕｓ）のエ タノール泪出液の抽出液の母液（もはや結晶化できないが、なおグリコ７ドを含 有する）を蒸発乾固する。

乾燥物質２０，９を１０％メタノール１００ａｄｌｌ、＞し、ダイヤイオ７ＨＰ ２０ＳＳ４ｉ０ｄを含むカラムに流速０．９４？／ｈをもって施す。１０チメタ ノール４１を用Ａて丁ぺての糖成分および極性非強心性グリコシドを溶離する・ メタノール分に２０−に増大させた後、６〜４バール、流速１．．４！／ｈで水 ３！を用いて力２ムからｇ−ストロファンチン（３，６９＃）ｔ−洗浄する。濃 縮後活性炭を加えて水から再結晶させる。純粋ｇ−ストロ７アンチン２．１２． ９が得られる・ 例　６　： ジゴキシン（図面参照） 乾燥畑出物（ジゴキシン約１．０ｇ含有）〔ゾイタリス・ラナータの水性／メタ ノール抽出、発酵、加水分解、脱脂および乾燥によって製造〕６０ｇを、メタノ ール１２０ｇおよび水４８０―中に＃かじ、濃アンモニア溶液でｐＨ７，５にｌ ｌ監し、ポンプ３によって、ダイヤイオンＢＰ２ＭＧ４　ｉ　Ｑｄを光項し九力 ２ム１上に供給する。弁６は排出管８上に設けられている。水２．２１２よびメ タノール／水（２５ニア５容１チ）３．８ノで洗浄した後、同排出管中には濃縮 後、もはや強心性グリコシドを含有しない乾燥物質５４．８　Ｉ！が得られる。

さて弁６および５を１溶出液が力２ム１からカラム２（ダイヤイオンＨＰ２０８ ８５０１１／を兄槙）に行くようにｖ４Ｉｉする・溶ＩＩ液メタノール／水（４ ５：５５各ｔ％）５１は排出ｖ１ではジゴキシンを含有しない。付殖的グリコシ ドを含有する７ラクシヨンは別個に後処理することができる。

さて弁４および５は、溶離液がカラム２に直接供給されるようにセットする。シ ブキシン２７％に含む乾燥物ｉ　０．９１１ｔ−を有するメタノール／水混合物 （５０：５０容量％）１ノの後、メタノール／水混合物（５５：４５容量Ｓ）１ ．５７を用いて溶離する。この７ラクシヨンを蒸発濃縮し、メタノール／水から 再沈殿し、メタノール／クロロホルム中に溶かし、活性炭および酸化アルミニウ ムで処理し、ジイソプロピルエーテルで沈殿させる・高純度のジブキシン６８４ Ｍ９が単離される。

例　７　： メチルシブキシン（Ｍｅｔｉｌｄｉｇｏｘｉｎ　）ジゴキシンをジメチルスルフ ェートでメチル化することによシ得らｎる、主としてβ−メチルシカ中シン（６ ０〜６５−〇。α−メチルジゴキシン（約７．５％λジゴキシン（１５〜２０チ ）およびジゴキシンのジメチルエーテル（約８−）から成る混合物１０Ｉを、無 水エタノール８５１１１Ｊおよび水１２１１４に熱時に溶かし、濾過して透明に する。この溶液を、予め３０％エタノールで洗浄した、ＨＰ２０ＳＳ４１０１１ ｊを含むカラム上にポンプで施す。久にエタノール分の高−水を用いての圧力テ バールおよび流量的１！／ｈで洗浄する。

エタノール４０％を含む溶出液４．７５　ｊは固体３．９１ｙｔ−含有する。こ の混合物は未反応の全シゴキクン、α−メチルジゴキシンおよびβ−メチルゾゴ キクンを含有しておｐｌさらにカラムで分離することができる。

次の７２クシヨン５ノは稍々不純化されたβ−メチルジデキシン４．７３　＃　 ｔ−含有する。エタノール分が増大溶離される。メチルシブキシンを含有する主 要クラクションはメタノール／水から再沈１１２　シ、／　ｏ　ｏ　＄　ルムと 一緒に煮沸し、アセトンと共に攪拌する。

標準品質のβ−メチルシビキクン３．６５１が得られる。

例　８　： ジゴキシン ゾゴキ７ン約１．９１！を含有する乾燥抽出ａｉｋＪ（例６参照）１２０９ｔ、 室温で水９６０１、エタノール２４ＯＮおよび濃アンモニア溶液５ｄ中に浴かし 、濾過して透明にする。この溶液をダイヤイオンＨＰ２０を宮むカラムにポンプ で施す。

溶ｍ：圧力２バール、流速１〜１．２７／ｈ。

カラム浴出液および洗浄水１．８ノは強心性グリコシドを百１ない乾燥物質８７ ．２９を含有する。

久にエタノール２０％の溶離液４．４１ｓｐ工びエタノール２７．５％Ｊ）浴ｆ Ｅ液２．４７を用いて溶離を行う。後右に少量のジゴキシン（＜２．５チ）ｔ− 含有しておｐ１再び使用される。

エタノール４註 ゴキシ／（！Ｅ燥物質８．３　Ｆ　、クコ９−？フン約２０チノを含有している 。復帰される、エタノール４５％に含む中間７ラクシヨン（　１．２　７　）の 後、久のサイクルのためにカラムを純粋エタノールで洗浄する。洗浄エタノの主 要量（乾燥残留物３．５　＃　、シイトキシン１０チ）が存在する。ジブキシ／ フラクションは、蒸留によって１．４２７　Ｋａ！Ｉｊｉｉｆ　Ｌ、ポンプでＨ Ｆ２［］５８４ｉ［］ｄを含むカラムに送る（圧力４〜１０バール、流速１．２ １７時）。カラム溶出液１．５１およびエタノール２０チを官ひ２ラクシヨン（ １，５４り、エタノール２４．５％を含ひフラクション（４，６７）およびエタ ノール２７チの７，７クシヨン（３，７５７）はジゴキシンを含有していない。

ゾゴキシデニンービスーシイトクソ７ドを分離するためにエタノール３ろ饅の溶 液（０，！Ｍ）で洗浄した後、エタノール分を４０−に高める。

６つの７２クシヨン全集めると、０．３９７　Ｋなる。７ラクシヨン１，５およ び６はＨＰ２０カラムの溶離のために使用する。７之り７ヨン２．３および４の 乾燥物質３−７２．／ｌ？’ｌｌｃはゾがキシン１．８６．？が含有されている 。刀ラムを再住のたのに純粋エタノールで洗浄する。粗製ジゴキシンを熱時にエ タノール／水（１：１）５Ｑ７Ｃ７））’（浴ｐ為し、濃縮して２５ｍとなし、 冷却し、吸引濾過する。１．８５Ｆが得られる。これをクロロホルム／メタノー ル（９：１．）に浴かし、迂酸ダルおよび活性炭で処理し、濃縮する。結晶化生 成物をエタノール中でアンモニアの添加下に煮沸し、熱時に吸引濾過したつ乾燥 する。純粋ジゴキシン１．１２が得られる。

例　９　： ジゴキシン、イトキシン（Ｇｉｔｏｘｉｎ　）　、ジギトキシンゾイタリス・ラ ナータの脱脂乾燥抽出物（例６と同様）５０ｇを、水４１５Ｍ＋７．メタノール １５４−および！ｌｌファンモニア溶液２ａｌｌ’ＰＫ溶す。ｍ通して透明にし 友溶液をポンプで、ダイヤイオンＢＰ２１８８４７０１１Ｊ′ｆｔｔむカラムに 供給する。次に圧力４バールおよび流速１．０Ｊ／ｈで分別溶離する。

メｌ／−Ａ−５５％までの力２ム溶出液１．５９７）は１乾燥＊質４３．４　、 ？甲に禾同定の砧およびグリコシドを含有している口 最後の７２クシヨンは署しく増量されたゾゴキシデニンービスーゾヤトクソシド を含有しており、このグリコシド金目標に後処理することができる。

メタノール６５チを含有する溶出液２．５１は、ジゴキシン６０チ以上金言むＥ 魚資質１．１２．Ｆを含有してお９１同物質から常用の精製方法により純粋ゾゴ キシｙ　Ｏ，５２＆が得られる。メタノール７０チの７２クシヨン（２，５ｊ） 中には、少量のジゴキシンが＋ａする。

このフラクションはもう一度カラムに供給する。

メタノール８０％の７２クション１．５！は、著しく増量されたグリコシド・ゼ トキクンを含有して２９、同イトキシンを目標に後処理することができる。純粋 メタノールを官有する７ラクシヨン０・８１＃（０，９１ｄゾ＝ｊ？ト＊シフ８ ＣＪ９に含有してお５、同７５’／ジヨンたら該ジギトキシンを単離することが できる。

３勾 国際調査報告 国際調査報告

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. １．液体分配クロマトグラフィーによつて強心性グリコシドを増量しかつ／また は単離する方法において、架橋スチロールポリマー、アクリルエステル重合体お よび／またはスチロールージビニルベンゾール−共重合体を基材とする、粗大孔 を有する非極性非イオン性樹脂により吸着および脱着を行うことを特徴とする強 心性グリコシドを増量しかつ／または単離する方法。
2. ２．該樹脂が１００〜１０００ｍ２／ｇ樹脂の比表面積を有する請求の範囲第１ 項記載の方法。
3. ３．溶離剤として、９９：１〜２０：８０の割合の水と低級アルコールまたにケ トンとの混合物を使用する請求の範囲第１項または第２項記載の方法。
4. ４．強心性グリコシドの増量および／または単離のたりに、架橋スチロールポリ マー、アクリルエステル重合体および／またはステロールージビニルベンゾール ー共重合体を基材とする粗大孔を有する非極性非イオン性樹脂を使用すること。