JPH01294621A - 幹細胞増殖促進剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野コ 本発明は、制癌剤マイトマイシンＣにより惹起される幹
細胞障害からの回復を促進させる幹細胞増殖促進剤に関
するものである。

［従来の技術および課題］ 現在、マイトマイシンＣは有用な制癌剤として多用され
ているが、その反面、骨髄細胞とりわけ幹細胞に対して
障害を与えることが知られている。

この障害を除去し、幹細胞の増殖を促進させるための薬
剤が数多く開発されているが、所期の目的を達成するも
のではない。

［課題を解決するための手段］ 本発明者等は、マイトマイシンＣにより障害を被った幹
細胞の増殖を促進させる作用を有する薬剤を開発すべく
、鋭意研究を行った結果、υす１１ｍ ■ で表される化合物および十全大補湯が幹細胞増殖促進作
用を有することを見い出し、本発明を完成するに至った
。

すなわち、本発明は、下記に示す如くである。

■ で表される化合物（以下、式■の化合物と称する。）を
有効成分とする幹細胞増殖促進剤。

（２）十全大補湯よりなる幹細胞増殖促進剤。

以下、（１）および（２）を併せて本発明の幹細胞増殖
促進剤と称する。

式■の化合物は文献［出口ら：Ｃｈｅｍ、Ｐｈａｒｓ、
Ｂｕｌｌ。

（Ｔｏｋｙｏ）、　２３巻、３２９６頁、１９７５年、
および出口ら二Ｃｈｅｓ、Ｐｈａｒｓ、Ｂｕ１１．（Ｔ
ｏｋｙｏ）、　２５巻、３６４頁、１９７７年］に記載
の方法により得られる。すなわち北五味子を低級炭化水
素類（例えば石油エーテル、ｎ−ヘキサン、ベンゼン等
）で温時抽出し、得られた抽出液の溶媒を留去して得た
残渣を水に溶解し、水蒸気蒸留を行い、精油を除いた非
精油部分をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し
、ｎ−ヘキサン、ベンゼン、アセトンより選ばれる少な
くとも一つの溶剤を用いて展開することにより単離する
ことができる。

十全大補湯は漢方の古典（和剤局方）にその構成生薬、
分量、抽出法等が記載されており、疲労倦怠、食欲不振
および貧血等の諸疾患に使用されている。本発明でいう
ところの十全大補湯とは、和剤局方に記載された生薬の
配合割合により製造される十全大補湯であればいかなる
ものでも構わない。

十全大補湯の各生薬の配合割合を例示するならば、黄１
２〜４重量部、桂皮２〜４重量部、地黄２〜４重量部、
５薬２〜４重量部、用笥２〜４重量部、蒼／１２〜４重
量部、当帰２〜４重量部、人参２〜４重量部、決苓２〜
４重量部およびせＩＥＩ〜３重量部が好ましい。

十全大補湯は、例えば、黄１３９、桂皮３９、地黄３ｇ
、荀薬３ｇ、用笥３９、蒼１．３ｇ、゛当帰３９、人参
３９、決苓３９および甘草１．５ｇを６００１ｄ！の水
で煎じて滓を取り去り、再び薬液だけを煎じつめてこれ
を幹細胞増殖促進剤として３回に分けて服用することら
できるが、服用のし易さ、携帯の便利さを考慮して乾燥
エキス粉末としたもの、またはこれを製剤化して漢方薬
エキス製剤としたものを幹細胞増殖促進剤として用いる
こともできる。

特に、下記の方法のもとに製造される十全大補湯がその
薬理作用を期待する上で好ましい。

和剤局方に則って、黄１３ｇ、桂皮３ｇ、地黄３９、荀
薬３９、川ぢ３９、蒼ｔ３ｇ、当帰３９、人参３ｇ、決
苓３ｇおよび甘草１．５９に１０〜１２倍量の精製水を
加え、９５〜１００℃で６０分間程度抽出し、固液分離
し、得られた分離液をスプレードライして十全大補湯乾
燥エキス粉末を得る。

以下に、本発明の幹細胞増殖促進剤の有効成分の製造の
具体例を示す。

具体例１ 北五味子１．３８＆９を粉砕したものを石油エーテル３
Ｑで８時間還流抽出し、これを４回繰り返した。抽出液
を合併し、石油エーテルを減圧下で留去して石油エーテ
ルエキス１８８ｇを得た。該石油エーテルエキスを水４
５０−に懸濁させ、水蒸気蒸留を３時間行い精油を除去
して得た残留物をエーテル２００ｄで４回抽出した後、
エーテル抽出液を合併し、エーテルを留去して石油エー
テル可溶の非精油部分１７９　ｇ（Ａ画分という）を得
た。

次に石油エーテルで抽出した北五味子をメタノール３Ｑ
を用いて８時間ずつ３同温時抽出した後、メタノール抽
出液を合併し濃縮してメタノールエキス３８３ｇを得た
。該メタノールエキスを水５８０ｄに溶解し、酢酸エチ
ル８５０ｄで３回振盪抽出して得た酢酸エチル抽出液を
合併し、減圧上濃縮して７８９の酢酸エチル抽出エキス
を得た。

該酢酸エチル抽出エキスをメタノールに溶解し、セライ
ト５３５　（Ｊｏｈｎｓ−Ｍａｎｖｉｌｌｅ社製）３０
０９にまぶし、カラムクロマトグラフィーに付し、ｎ−
へキサン２ｉ２で展開し、得られた溶出液を減圧下濃縮
して２０．８９のエキス（Ｂ画分という）を得た。

Ａ画分（１７９９）とＢ画分（２０，８９）を合併しシ
リカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、最初ｎ−ヘ
キサン、２番目にベンゼン、３番目にベンゼン−アセト
ン混合溶剤で展開した。ベンゼン−アセトン（４：ｌ）
とベンゼン−アセトン（３：１）の溶出部を合併し濃縮
して２３．５９の残留物を得、該残留物を再びシリカゲ
ルカラムクロマトグラフィーに付し、ベンゼン−エーテ
ル混合溶剤で展開した。ベンゼン−エーテル（４：１）
の溶出部をメタノールで結晶化させ、式Ｉの化合物３．
０４ｙ（収率０．２２％）を得た。

具体例２ 黄！３ｙ、桂皮３ｇ、地黄３ｇ、勺薬３ｇ、川ぢ３２、
蒼友３ｇ、当帰３ｇ、人参３ｇ、決苓３ｇおよび甘草１
．５ｇに２８５７の精製水を加え、１００℃で６０分間
抽出し、遠心分離により固液分離し、得られた分離液を
５０℃以下でスプレードライして十全大補湯乾燥エキス
粉末を得た。

次に、本発明の幹細胞増殖促進剤が優れた幹細胞増殖促
進作用を有することについて実験例を示して説明する。

実験例Ｉ ＢＡＬＢ／ｃ系雄性マウスにマイトマイシンＣ（以下、
ＭＭＣと称する。）３ｍｙ／に９を腹腔内投与した。そ
の４日前より具体例１で得た式■の化合物を１日２０Ｑ
／ｋｖを経口投与し始め、ＭＭＣ投与１４日後にＣＰＵ
　−Ｃアッセイ（マウス骨髄細胞インビトロコロニー法
）を行い、コロニー数を数え、このコロニー数よりＣＦ
Ｕ−Ｃの増加率を式■を用いて算出した。

式■ ム 但し、Ａ：具体例１で得た式■の化合物投与群のｃｐｕ
−ｃのコロニー数 Ｂ：対照群のＣＦＵ−Ｃのコロニー数 対照群として、具体例１で得た式Ｉの化合物を投与しな
いものを用いた。

その結果、ＣＦＵ−Ｃ増加率は７３％であった。

実験例２ Ｃ５７ＢＬ／６系雄性マウスにＭＭＣ３Ｑ　／に？また
は８ｘｇ／ｋｇそれぞれを腹腔内投与し、それより８日
前に具体例２で得た十全大補湯乾燥エキス粉末１９／＆
９を経口投与シタ。ＭＭＣ投与ｌＯ日後ニＣＦＵ−Ｓア
ッセイ（マウス牌コロニー法）を行い、コロニー数を数
え、このコロニー数よりＣＰＵ−８の増加率を式■を用
いて算出した。

弐■ −Ｂ ＣＦＵ−Ｃ増加率（％”）＝　−Ｘ　１００但し、Ａ：
十全大補湯乾燥エキス粉末投与群のＣＦＵ−Ｓのコロニ
ー数 Ｂ：対照群のＣＦＵ−３のコロニー数 対照群として、十全大補湯乾燥エキス粉末の替わりに蒸
留水を投与したものを用いた。

その結果を第１表に示す。

第１表 実験例３ Ｃ５７ＢＬ／６系雄性マウスにＭＭＣ３ｇ／ｋｖまたは
８Ｍｖ／ｋｙをそれぞれ腹腔内投与し、その直後に具体
例２で得た十全大補湯乾燥エキス粉末１９／に９を経口
投与開始し、以後１日１回投与し続けた。

８日後および１５日後にＣＦＵ−Ｓアッセイを行い、コ
ロニー数ヲ数え、このコロニー数よｔ）　ＣＰＵ−５ノ
増加率を弐■を用いて算出した。

対照群として、十全大補湯乾燥エキス粉末の替わりに蒸
留水を投与したものを用いた。

その結果を第２表に示す。

第２表 実験例４ Ｃ５７ＢＬ／６系雄性マウスｌ、：　ＭＭＣ３３１９／
に９を腹腔的投与し、具体例２で得た十全大補湯乾燥エ
キス粉末０．５９／＆９．１．０９／に９または２．ｏ
９／に９をそれぞれ！日菫回投与し、７日後および１４
日後にＣＰＵ　−Ｓアッセイを行い、コロニー数を数え
た。対照群として、ＭＭＣのみを投与したものを、また
無処置群としてＭＭＣおよび十全大補湯乾燥エキス粉末
を投与しないものを用いた。

その結果を第３表に示す。

第３表 このように、本発明の幹細胞増殖促進剤が、優れた幹細
胞増殖促進作用を有することが確認された。

次に、本発明の幹細胞増殖剤の経口投与での急性毒性試
験をｄｄＹ系雄性マウスおよびウィスター（ｆｉｓＬａ
ｒ）系雄性ラットを用いて行ったところ、式■の化合物
のＬＤ、。はｄｄＹ系雄性マウス、経口投与で７７７　
ｍ６７ｋｇであり、具体例２で得た十全大補湯乾燥エキ
ス粉末は１５９／＆ｙでも死亡例はなかった。

以上のように、本発明の幹細胞増殖促進剤は、毒性が低
く、安全性の高いものであり、制癌剤等を使用する化学
療法によって起こる骨髄障害、種々の原因による造血障
害疾患の治療薬として有用である。

次に、本発明の幹細胞増殖促進剤の投与量および製剤化
について説明する。

式Ｉの化合物および十全大補湯乾燥エキス粉末はそのま
ま、あるいは慣用の製剤担体と共に動物および人に投与
することができる。投与形態としては、特に限定がなく
、必要に応じ適宜選択して使用され、錠剤、カプセル剤
、顆粒剤、細粒剤、散剤等の経口剤、注射剤、坐剤等の
非経口剤が挙げられる。

経口剤として所期の効果を発揮するためには、患者の年
令、体重、疾患の程度により異なるが、通常成人で式Ｉ
の化合物の重量として５〜５００１！９、十全大補湯乾
燥エキス粉末の重量として１〜１０９を、！日数回に分
けての服用が適当と思われる。

経口剤は、例えばデンプン、乳糖、白糖、マンニット、
カルボキシメチルセルロース、コーンスターチ、無機塩
類等を用いて常法に従って製造される。

この種の製剤には、適宜曲記賦形剤の他に、結合剤、崩
壊剤、界面活性剤、滑沢剤、流動性促進剤、矯味剤、着
色剤、香料等を使用することができる。それぞれの具体
例は以下に示す如くである。

［結合剤］ デンプン、デキストリン、アラビアゴム末、ゼラチン、
ヒドロキシプロピルスターチ、メチルセルロース、カル
ボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピ
ルセルロース、結晶セルロース、エチルセルロース、ポ
リビニルピロリドン、マクロゴール。

［崩壊剤］ デンプン、ヒドロキシプロピルスターチ、カルボキシメ
チルセルロースナトリウム、カルボキシメチルセルロー
スカルシウム、カルボキシメチルセルロース、低置換ヒ
ドロキシプ口ピルセルロース。

［界面活性剤］ ラウリル硫酸ナトリウム、大豆レシチン、ショ糖脂肪酸
エステル、ポリソルベート　８００［滑沢剤］ タルク、ロウ類、水素添加植物油、ショ糖脂肪酸エステ
ル、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウ
ム、ステアリン酸アルミニウム、ポリエチレングリコー
ル。

［流動性促進剤］ 軽質無水ケイ酸、乾燥水酸化アルミニウムゲル、合成ケ
イ酸アルミニウム、ケイ酸マグネシウム。

また、本発明の幹細胞増殖剤は、懸濁液、エマルジョン
剤、シロップ剤、エリキシル剤としても投与することが
でき、これらの各種剤形には、矯味矯臭剤、着色剤を含
有してもよい。

非経口剤として所期の効果を発揮するためには、患者の
年令、体重、疾患の程度により異なるが、通常成人で式
Ｉの化合物の重量として１日０．５〜１００１１９まで
の静注、点滴静注、皮下注射、筋肉注射か適当と思われ
る。

この非経口剤は常法に従って製造され、希釈剤として一
般に注射用蒸留水、生理食塩水、ブドウ糖水溶液、注射
用植物油、ゴマ油、ラッカセイ油ダイズ油、トウモロコ
シ油、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール
等を用いることができる。さらに必要に応じて、殺菌剤
、防腐剤、安定剤を加えてもよい。また、この非経口剤
は安定性の点から、バイアル等に充填後冷凍し、通常の
凍結乾燥技術により水分を除去し、使用直前に凍結乾燥
物から液剤を再調製することもできる。さらに、必要に
応じて適宜、等張化剤、安定剤、防腐剤、無痛化剤等を
加えても良い。

次に、実施例を示して具体的に説明するが本発明の幹細
胞増殖剤はこれにより制限されるものではない。

実施例１ ■コーンスターチ　　　　　　　４４９０結晶セルロー
ス　　　　　　４０９ ■カルボキシメチル セルロースカルシウム　　　５９ ■軽質無水ケイ酸　　　　　　０．５９■ステアリン酸
マグネシウム　０．５９■具体例１で得た Ｉの　　　　１０ 計　　　　　１００ｇ 上記の処方に従って■〜■を均一に混合し、打鍵機にて
圧縮成型して一部２００ｑの錠剤を得た。

この錠剤−錠には、式Ｉの化合物２０Ｒ９が含有されて
おり、成人１日５〜２５錠を数回にわけて服用する。

実施例２ ■結晶セルロース　　　　　８４．５９０ステアリン酸
マグネシウム　０．５９０カルボキシメチル セルロースカルシウム　　　　５９ ■具体例監で得た Ｉの　Ａ　　　　１０ 計　　　　　１００９ 上記の処方に従って■、■および■の一部を均一に混合
し、圧縮成型した後、粉砕し、■および■の残量を加え
て混合し、打鍵機にて圧縮成型して一部２００　Ｒ９の
錠剤を得た。

この錠剤−錠には、式Ｉの化合物２０Ｒ９が含有されて
おり、成人１日５〜２５錠を数回にわけて服用する。

実施例３ ■結晶セルロース　　　　　３４．５９■１０％ヒドロ
キシプロピル セルロースエタノール溶液　５０９ ■カルボキシメチル セルロースカルシウム　　　５９ ■ステアリン酸マグネシウム　０．５９■具体例１で得
た ■　の　　八　　　　ｌＯ 計　　　　　ｔｏｏｇ 上記の処方に従って■、■および■を均一に混合し、常
法によりねつ和し、押し出し造粒機により造粒し、乾燥
・解砕した後、■および■を混合し、打錠機にて圧縮成
型して一錠２００　Ｑの錠剤を得た。

この錠剤−錠には、式１の化合物２０ｊ！９が含有され
ており、成人１日５〜２５錠を数回にわけて服用する。

実施例４ ■コーンスターチ　　　　　　　８４９■ステアリン酸
マグネシウム　０，５９■カルボキシメチル セルロースカルシウム　　　５９ ■軽質無水ケイ酸　　　　　　０．５９■具体例１で得
た １１の　４　　　１０ 計　　　　　１００９ 上記の処方に従って■〜■を均一に混合し、圧縮成型機
にて圧縮成型後、破砕機により粉砕し、篩別して顆粒剤
を得た。

この顆粒剤１９には、式Ｉの化合物１００　ｍ９が含有
されており、成人１日０．５〜５ｇを数回にわけて服用
する。

実施例５ ■結晶セルロース　　　　　　４０９ ■１０％ヒドロキシプロピル セルロースエタノール溶液５０９ ■具体例１で得た ■のヒム　　　ｌＯ 計　　　　　１００９ 上記の処方に従って■〜■を均一に混合し、ねつ和した
。押し出し造粒機に上り造粒後、乾燥し、篩別して顆粒
剤を得た。

この顆粒剤１９には、式■の化合物１００１１９が含有
されており、成人１日０．５〜５９を数回にわけて服用
する。

実施例６ ■コーンスターチ　　　　　８９．！Ｍ■軽質無水ケイ
酸　　　　　　０．５９■具体例！で得た ■　の　　ム　　　　　　１０ 計　　　　　１００９ 上記の処方に従って■〜■を均一に混合し、２００　ｍ
ｔｉを２号カプセルに充填した。

このカプセル剤ｌカプセルには、式■の化合物２０１９
が含有されており、成人１日５〜２５カプセルを数回に
わけて服用する。

実施例７ ■大豆油　　　　　　　　　　　　５９■注射用蒸留水
　　　　　　　８９．５９■大豆リン脂質　　　　　　
　　２．５９■グリセリン　　　　　　　　　　２ｇ■
具体例１で得た 式■の化合物　　　　１ｇ 計　　　　　　　１００９ 上記の処方に従って■を■および■に溶解し、これに■
と■の溶液を加えて乳化し、注射剤を得なＯ 実施例８ 具体例２で得た乾燥エキス粉末２００９を乳糖８９ｇ及
びステアリン酸マグネシウム１ｇと混合し、この混合物
を単発式打錠機にて打錠して、直径２０　ｘｍ　ｓ重量
約２．３９のスラッグ錠を作りこれを、オシレーターに
て粉砕し、整粒し、篩別して２０〜５０メツシユの粒子
の良好な顆粒剤を得た。

この顆粒剤は、症状に合わせて１同量０．５〜４．５９
（乾燥エキス粉末重量として０．３４〜３．１０９に相
当）を１日３回服用する。

実施例９ 具体例２で得た乾燥エキス粉末２００９を微結晶セルロ
ース２０ｇおよびステアリン酸マグネシウム５ｇと混合
し、この混合物を単発式打錠機にて打錠して直径７ＲＲ
ｓ重！２２５１１ｇの錠剤を製造した。本院剤ｌ綻中に
は本発明の幹細胞増殖剤の乾燥エキス粉末を２００１９
含有する。本錠剤は、症状に合わせて１同量２〜１６錠
を１日３回服用する。

実施例１０ 具体例２で得た乾燥エキス粉末５００　ｍｙを硬カプセ
ルに充填した。本カプセルは、症状に合わせて２〜２０
カプセルを１日３回に分けて服用する。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）式 I ▲数式、化学式、表等があります▼ I で表される化合物を有効成分とする幹細胞増殖促進剤。
2. （２）十全大補湯よりなる幹細胞増殖促進剤。