JPH01285118A - キク科ヨモギ属に属する植物の大量増殖法及びそれを利用した利胆作用を有する物質の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明はキク科ヨモギ属に属する植物の茎頂培養による
該植物の幼苗の大量増殖法及びそれを利用した有用物質
、特に利胆作用を有する物質の生産に関するものである
。

更に詳細には本発明は、かわらよもぎなどのキク科ヨモ
ギ属に属する植物の茎頂点を回転培養、振とう培養ある
いは攪拌培養して苗条原基を得てこれを増殖し、次いで
得られる苗条原基を静置培養して苗化してキク科ヨモギ
属に属する植物の幼苗を大量に増殖する方法、及び該方
法を利用した、有用物質、特にキャピラリシンなどの利
胆作用を有する物質を人聞に得る方法に関するものであ
る。

（従来の技術と問題点） かわらよもぎ、はまよもぎ、にがよもぎなどはキク科ヨ
モギ属に属する多年生草木植物であり、医薬品として有
用な物質などを含有している。即ち、例えば、かわらよ
もぎは利胆作用を持つキを持つｐ−ヒドロキシアセトフ
ェノン （ｐ−ｈｙｄｒｏｘｙａｃｅｔｏｐｈｃｎｏｎｅ　）　
、あるいはイソクラクシジン（１ｓｏｆｌａｘｉｄｉｎ
　）やスコボレチン（５ｃｏｐｏｌｅｔｉｎ）などのク
マリン誘導体が含まれてイル［薬学雑１Ｖｏ１．９６．
　Ｎｏ、　７　、１）Ｅ）、　８４１−８５４　（１９
７６）］、みぶよもぎ、しなよもぎ、クラムよもぎには
回虫駆除薬のサントニンが含有されている。またにがよ
もぎは利胆作用を有し、また健胃剤として利用されてい
る。しかし、これら植物中の有用物質の含有量は、生育
場所、季節あるいは組織等によって大きく異なる。その
ため、これら有用物質の含有量が＾くて均一な植物を犬
曇に得る方法が希望されている。

他方、植物体より有用物質を得る方法として、甘味配糖
体含有植物ステビアの茎填部を回転環バして苗条原基を
得、この苗条原基を増殖させ次いで静置培養して苗化し
、幼苗を大量に得てステビアを再生し、再生植物体より
有用物質である甘味配糖体を（ｑる、苗条原基を利用し
た方法がある（特開昭６１−９６９９４号公報）。苗条
原基は遺伝的に安定しておりかつ増殖率が高いため、苗
条原基を利用して植物体より有用物質をＩＵる方法は優
れた方法と言える。

苗条原基としては、例えばハブロパツブス、イネ、トウ
モロコシなどの１年生植物あるいはテラポウユリ、アス
パラガスなどの多年生植物の苗条原基が知られている。

しかしながら、例えばキャピラリシンなどの利胆作用を
有する物質を含有する、キク科ヨモギ属に属する植物の
苗条原基は知られていない。

（問題点を解決するための手段） 本発明者らは、上記問題点のあるキク科ヨモギ属に属す
る植物において、利胆作用を有する物質の含有量が高く
て均一な植物体を得ることを目的として、苗条原基の誘
導を行った所、例えばかわらよもぎの茎頂点を植物生長
ホルモンを含む人工培地で例えば回転培養することによ
ってかわらよもぎの苗条原基が誘導され、これを苗化す
ることによって大量の幼苗を得ることができ、またこの
苗条原基を利用することによってかわらよもぎより例え
ばキャピラリシンを大Ｗに得ることが可能になることを
見出した。本発明はかかる知見に基き完成されたもので
ある。

即ち、本発明は、キク科ヨモギ属に属する植物の茎頂点
を、植物生長ホルモンを含む培地で光照射下に回転培養
、振とう培養または攪拌培養して苗条原基を得てこれを
増殖し、次いで１ｑられた苗条原基を静ｎ培養して苗化
することを特徴とする、キク科ヨモギ属に属する幼苗の
大ψ増殖法；上記方法により、キク科ヨモギ属に属する
植物の苗条原基を増殖させて苗条原基より、あるいは更
に苗化して幼苗より、あるいは更に再生植物体造方法；
及び キク科ヨモギ属に属する植物の苗条原基である。

以下に本発明をさらに詳しく説明する。

本発明で対象とする植物は、キク科ヨモギ属に属する植
物であり、例えばかわらよもぎ（Ａｒｔ（！ｌ１Ｓｉａ
　Ｃａｐｉｌｌａｒｉ３）　、よもぎ（＾ｒｔｅａ＋ｔ
ｓｔａｐｒｉｎｃｅｐｓ　）　、はまよもぎ（＾ｒ’ｔ
ｅｍｉｓｉａ　５ｃｏｐａｒｉａ。

八ｒｔｏＩｉｓｉａ　ａｂｒｏｔａｎｕｓ　）　、にが
よもぎ（ＡｒｔｅｌｌｌｉＳｉａ　ａｂｓｉｎｔｈｉＬ
Ｉｍ）　、みぶよもぎ（八ｒｔ（！１ｌｌｉｓｉａ　１
ｌａｒｉｔｉｌｌｌａ）、しなよもぎ（ＡｒｔＯｍｉＳ
ｉａｃｉｒａ）　、クラムよもぎ（＾ｒｔｅｍｉｓｉａ
　ｋｕｒａｍｅｎｓｉｓ）などである。利胆作用を有す
る物質を得ることを目的とする場合には、かわらよもぎ
、はまよもぎ、にがよもぎなどが好ましい。

本発明においては、先ずこれら植物の茎から切りとった
茎頂をオスパン液、ヒユーラックス液、アルコール液な
どの溶液に浸漬し、滅菌水で洗浄した後、莱原基１〜２
枚を付けた茎偵部を摘出し、植物生長ホルモンを含む培
地に移植する。本発明で用いる培地としては１例えばム
ラシゲ−スクーグ（Ｈｕｒ’ａｓｈｉｇｅ−８ｋｏｏｇ
）培地、ガンボーグ（Ｇａｍｂｏｒｇ）のＢ５培地、ニ
ッチ（旧ｔｃｈ）培地、シエンクーヒルデプラント（５
ｃｈｅｎｋ−Ｉｆ　ｉ　Ｉｄｃｂｒａｎｄｔ　）培地な
どの植物組織培養に通常使用される培地、あるいはこれ
らの改変培地を用いることができる。

植物生長ホルモンとしてはα−ナフタレン酢酸、２．４
−ジクロルフェノキシ酢酸、インドール酢酸等のオーキ
シン類およびベンジルアミノプリン、カイネチン等のサ
イトカイニン類を用いることができる。

かかる植物生長ホルモンを含む培地で光照射下に回転培
養、振とう培養あるいは攪拌培養することによって苗条
原基が誘導される。苗条原基の誘導及び培養には、回転
培養、振とう培養、攪拌培養のいずれの培養においても
強い光が必要であり、２．０００〜２０，０００ルクス
の範囲にある照明度が適当である。照明度がこの範囲外
にあると、苗条原基の生長が悪いので好ましくない。光
照Ｑ］は、例えば光を一定時間照射した後、光の非照射
下に保ち、次いで同様にして光の照射下と非照射下に保
つことを繰返すようにしてもよいが、光の照射を絶つこ
となく、即ち光を連続的に照ｒＪＪすることの方が好ま
しい。培養温度は１５〜３０℃の恒温が適当である。こ
れより低い温度では増殖の進行が遅れ、また温度が高す
ぎると生長が悪く枯死する場合もある。

さらに培養は静置培養ではなく回転培養、娠とう培養あ
るいは攪拌培養をする必要がある。回転培養を行なう際
には特に１分間に０．５〜１０回転のゆるやかな回転数
で回転培養すると良い結果が得られる。静置培養では生
長が遅く苗化の傾向にあり、また回転培養での回転数が
大きすぎるとカルスになりやすいため良い結果が得られ
ない。

同様の理由により、振とう培養の場合には、１分間に１
０〜１００回、特に１０〜５０回の振とう回数で培養す
るのが好ましく、攪拌培養の場合には、例えばカルスタ
ー型の攪拌ＩＸ（ｏｏ字型羽根付ぎ回転翼）で、１分間
に１０〜５０回の攪拌で培養するのが好ましい。攪拌培
養は特に通気量０、１〜１．　ＯＶＶｍ　、好ましくＧ
；ｔＯ，３ＶＶｍ　（７）条件下で行なうのが適当であ
る。

かわらよもぎなどのキク科ヨモギ属に属する植物の苗条
原基を誘導及び増殖するには、特に植物生長ホルモンと
してα−ナフタレン酢酸を０〜約２．０■／１、ベンジ
ルアミノプリンを約０．０２〜約２．Ｏｒ！ｔｇ／ｌ含
有する培地で培養するのが好ましい。

誘導した苗条原基は最初は淡緑色で小球状形をなしてい
るが次第に大きさ、数が増え、暗緑色の球状集塊となる
。この段階の苗条原基を例えば滅菌ニクロム線付棒で数
個の小片に分割し、前記のような成分を含む新しい最適
培地に移してやると、新しい苗条原基が以前と同様に誘
ηされてくる。

最初の苗条原基は茎頂ドームから誘導されるが、以模の
苗条原基は、苗条原基から形成される。従って、このよ
うにして継代培養を行なうことによって苗条原基を大量
に増殖することができる。苗条原基の最外層のある細胞
が種々の分裂軸で分裂し、小形の苗条原基となる（−次
苗条原基、第１図参照）。この小形の苗条原基は最外側
の細胞が内外２層となった人形の苗条原基となる（二次
苗条原基、第２図参照）。苗条原基集塊は、すべて基部
側に小量のカルスを付着させている。

誘導した苗条原基の染色体数は、例えばかわらよもぎの
−次、二次苗条原基あわせて２４７個の細胞を検討した
が、母植物と同様２ｎ＝１８で安定であり核型も変化が
見られなかった（第３表参照）。

かくして得られる苗条原基は遺伝的に極めて安定し、か
つ増殖率が高く、また植物体への転換を容易に行なうこ
とができ、苗条原基は一種の栄養体生殖であり、種子に
とってかわるものである。

このようにして誘導された苗条原基は更に人聞増殖させ
て苗化用の静置培地に移植することができる。静置培養
は、前記した回転培養、振とう培養あるいは攪拌培養に
用いた培地の組成を適宜希釈あるいは若干変更した寒天
培地で行なうことができる。静置培養を、１５〜３０℃
の温度で約２゜ＯＯ０〜２０．０００ルクスの光の照射
下に行なうことによってｗ化を円滑に進めることができ
る。

光の照射は連続的であっても非連続的であってもよい。

静置培養により、先端に葉原基を形成し茎葉をもつ幼苗
に生長する。最終的にはこの幼苗の発根後に得られる再
生植物体を野外栽培覆ることによって、キク科ヨモギ属
に属する植物を人聞に得ることができる。

かくして、キク科ヨモギ属に属する植物の苗条原基、幼
苗、再生植物体を人けに増殖することができる。

以上に説明した方法によって人聞に得られるキク科ヨモ
ギ属に属する植物の苗条原基、幼苗あるいは再生植物体
より有用物質を得ることができる。

例えばかわらよもぎの場合は利胆剤として有用な例えば
キャピラリシン、キヤピラルテミシン、６゜７−ジメチ
ルエスクレチン等を得ることができる。

これら有用物質を得る方法は公知の方法［特開昭５１−
９７０９号公報：薬学雑誌、Ｖｏｌ、９６゜Ｎｏ、７．
Ｉ）ｌ）、８４１−８５４　（１９７６）：Ｃｈｃｇ＋
、　　Ｐｈａｒｍ、　　Ｂｕｌｌ、、　　Ｖｏｌ、３　
１　　、　　Ｅｌｆ）、　　３　５　２−３５５　（１
９８３）］と同様の方法を採用することができる。即ち
、かわらよもぎの苗条原基、幼苗あるいは再生植物体を
、メタノール、エタノールなどのアルコール類：テトラ
ヒドロフラン、ジオキサンなどのエーテル類；アセトン
、メチルエチルケトンなどのケトン類：酢酸メチル、酢
酸エチルなどのエステル類等の極性溶媒で抽出し、必要
に応じてアセトンで処理して不純物を除き、次いで抽出
液をｎ−ヘキサン、石油エーテルなどの上記極性溶媒と
混和し難い有機溶媒で処理する。かかる有機溶媒処理に
より抽出液より葉緑素、樹状物質等が除去される。次い
で抽出液より６．７−ジメチルエスクレチンを結晶化け
しめ、残った抽出液を濃縮し、シリカゲルを用いたカラ
ムクロマトグラフィーに付し、クロロホルム、メタノー
ル、ベンゼン、アセトン等を適当に組み合わせた展開溶
媒で溶出せしめることによって目的とするキャピラリシ
ンを得ることができる。

キヤピラルテミシンも、かわらよもぎより公知の方法に
よって単離抽出することができる。また、例えばはまよ
もぎから公知の方法により、利胆作用を有するρ−ヒド
ロキシアセトフェノン、あるいはイソクラクシジン、ス
コボレチンなどのクマリン誘導体を単離抽出することが
できる。

以上に詳細に説明したように、かわらよもぎなどのキク
科ヨモギ属に属する植物の茎Ｉｎ点を回転培養、振とう
培養あるいは攪拌培養することによって、キク科ヨモギ
属に属する植物の苗条原基を得ることができ、これを増
殖せしめ更に静置培養することによってこれら植物の幼
苗を大量に得ることが可能となる。またかかる方法によ
って得られる苗条原基、幼苗、あるいはこの幼苗から再
生して得られる再生植物体より、例えば利胆剤として有
用なキャピラリシン等の物質を大過に得ることもできる
。従って本発明ぐ提供される方法は、キク科ヨモギ属に
属する植物の大量増殖法、有用物質、特にキャピラリシ
ンなどの利胆作用を有する物質の大量製造法として極め
て工業的に価値の高いものである。

（実施例） 以下、本発明を実施例により更に詳細に説明する。

実施例 かわらよもぎの苗条原基の誘導 かわらよもぎの茎から茎先端部を切り取り、外側の展開
した葉を除き、長さ１〜２ｃ屑に調整する。

この植物片を１％オズバン液に５分間ついで２０％ビュ
ーラックス液に５分間、７０％エタノールに数秒間、浸
漬し、その後滅菌水に３０秒ずつ３回浸漬し、殺菌する
。

殺菌した植物片から実体顕微鏡下で葉原基を１〜２個伴
った茎頂部約０．５ｍを摘出し植え付＋Ｊ切片とした。

培地は、第１表に示した組成を有するムラシゲ・スケー
グ培地を用い、ショ糖３０ｇ／ｌを添加し、植物生長ホ
ルモンとしてα−ナフタレン酢酸（ＮＡＡ）と６−ベン
ジルアミノプリン（ＢＡＰ）溶液を第２表に示すように
調整した。ｐＨは０．５Ｎ　　ＫＯＨおよび０．５Ｎ　
　ＨＣｆにより５．７に調整した。それぞれの培地を３
０ｍφ×２００ａｍ＋の試験管に３０ｄ！ずつ分注した
。次いでオートクレーブ中（１２１℃、１．ｌｙ／α２
）１５分間で滅菌した。

培養条件は約２，０００〜２０．０００ルクス、２４時
間照明、２２±３℃、回転培養器で１分間に２回転とし
た。

培養開始後約２か月で第２表の「苗条原基」と記入した
組成の培地で苗条原基塊が得られたがその中でも第２表
中に下線を引いた培地が最適であった。

第２表から明らかな通り、α−ナフタレン酢酸０．０２
Ｉｒｇ１１及びベンジルアミノプリン０．２もしくは２
．０η／オニあるいはベンジルアミノプリン２．Ｏｔｙ
／Ｉを含む培地が苗条原基の誘尋に最適であることがわ
かる。

得られたかわらよもぎの一次苗条原基、二次苗条Ｉｒｊ
括を第１図、第２図にそれぞれ示した。

−次苗条原基、二次苗条原基の合計２４７個の細胞につ
いて染色体を調べた。同時に苗条原基から得られる幼苗
、苗条原基の基部から形成されるカルス、親植物の染色
体についても調べた。結果は第３表に示した。

苗条原基の増殖 誘導した苗条原基は１〜２週間毎に苗条原基塊を直径３
〜４ｍ＋に分割して新鮮な同じ組成の培地に移しかえ、
継代培養を行った。この時の苗条原基の倍加時間（乾重
量）は約２日である。

苗条原基の苗化 この苗条原基の苗化には、寒天０．８％、２％ショ糖、
０．２巧／ＩＮＡＡを添加した　１／３淵度の第１表に
示した組成を有するガンボークＢ５培地を用いた。温度
２２±３℃、２．０００〜５゜０００ルクスの光照射下
において静置倍長した。

苗化用培地に移されたかわらよらぎ苗条原基は１〜２週
間のうちに先端に緑色の菓原基を形成し次第に草葉をも
つ幼苗へと生長する。発根後再生植物体を滅菌バーミュ
キュライト中で育てながら除徐に野外の環境へと馴化さ
せ、最終的には野外栽培へ移行させた。

キャピラリシンの単離 かわらよもぎの苗条原基および再生植物体中には、６．
７−ジメチルエスクレチン及びキャピラリジンが含有さ
れていた。このことは以下のようにして行なった、６．
７−ジメチルエスクレチン及びキャピラリシンの単離抽
出によって確認された。

まず苗条原基および再生植物体をすりつぶしメタノール
′で抽出する。アセトンとｎ−ヘキサジで不純物を除去
した後のメタノールエキスから無色針晶の６．７−ジメ
チルエスクレチンを結晶化させた。残ったメタノールエ
キスをシリカゲルカラムクロマトグラフィーに２回付し
て無色プリズム晶のキャピラリシンを単離した。６，７
−ジメヂルエスクレチンおよびキャピラリシンの融点は
それぞれ、１４６〜１４７℃、２２６〜２２８℃でそれ
ぞれ２３０．２５２．２９５．３４４と２３４．２８８
であった。

以上よりかわらよもぎの苗条原基および再生植物体中に
６．７−ジメチルエスクレチンおよびキャピラリシンが
含有されていることを確認した。

しかしながら、かわらよもぎのカルスからはキ　４゜１
７ビラリシン及び６．７−ジメチルエスクレチンを単離
することができなかった。

（発明の効果） 本発明方法によれば、苗条原基によって例えばかわらよ
もぎなどのキク科ヨモギ属に属する植物を多年にわたっ
て遺伝的に安定に栄養体増殖することができる。またこ
の苗条原すによってこれら植物を天吊増殖でき、更にこ
の苗条原基の増殖性を利用してこれら植物からのキャピ
ラリシン等の有用物質の天吊生産が可能となる。

本発明方法により有用物質含有量および植物形態的に均
一な植物を作ることによって、従来のかわらよもぎなど
の植物の栽培労力および時間を軽減短縮し、コストを大
幅に引下げることができる。

さらにキャピラリシンなどの有用二次代謝産物を含有す
る植物体から誘導したカルスには有用二次代謝産物が含
まれないか含有量が少ない場合が多い。これに対し本発
明方法を適用すればその有用二次代謝産物を大間に生産
できる。

【図面の簡単な説明】

第１図は、生物の形態を示す写真であって、かわらよも
ぎの−次苗条原基の断面を表わし、第２図は、生物の形
態を示１゛写真であって、かわらよもぎの二次苗条原基
の断面を表わす。

Claims (7)

【特許請求の範囲】
1. （１）キク科ヨモギ属に属する植物の茎頂点を、植物生
   長ホルモンを含む培地で光照射下に回転培養、振とう培
   養または攪拌培養して苗条原基を得てこれを増殖し、次
   いで得られた苗条原基を静置培養して苗化することを特
   徴とする、キク科ヨモギ属に属する幼苗の大量増殖法。
2. （２）キク科ヨモギ属に属する植物がかわらよもぎ（Ａ
   ｒｔｅｍｉｓｉａ　ｃａｐｉｌｌａｒｉｓ）である請求
   項１記載の大量増殖法。
3. （３）培地が、植物生長ホルモンとしてα−ナフタレン
   酢酸を０〜約２．０ｍｇ／ｌ、ベンジルアミノプリンを
   約０．０２〜約２．０ｍｇ／ｌを含有する請求項１また
   は２記載の大量増殖法。
4. （４）請求項１記載の方法により、キク科ヨモギ属に属
   する植物の苗条原基を増殖させて苗条原基より、あるい
   は更に苗化して幼苗より、あるいは更に再生植物体を得
   て再生植物体より、利胆作用を有する物質を得ることを
   特徴とする、利胆作用を有する物質の製造方法。
5. （５）キク科ヨモギ属に属する植物がかわらよもぎ（Ａ
   ｒｔｅｍｉｓｉａ　ｃａｐｉｌｌａｒｉｓ）である請求
   項４記載の製造方法。
6. （６）利胆作用を有する物質がキヤピラリシン、キヤピ
   ラルテミシンまたは６，７−ジメチルエスクレチンであ
   る請求項４または５記載の製造方法。
7. （７）キク科ヨモギ属に属する植物の苗条原基。