JPH01254642A - ドコサヘキサエン酸のアルキルエステルの分離濃縮方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はドコサヘキサエン酸のアルキルエステルの分離
濃縮方法に関する。

（従来の技術） ドコサヘキサエン酸のアルキルエステルの分離濃縮のた
めにクロマトグラフィーを用いることは公知であり、下
記のように種々の方法がある。すなわち、薄層クロマト
グラフィー法、シリカゲル銀イオンクロマトグラフィー
法、逆相分配クロマトグラフィー法等があり、例えば、
アルキル基をシリカに化学結合させた充填剤とテトラヒ
ドロフラン−低級アルカノール（またはアセトニトリル
）−水（または酢酸水溶液）系溶離液を用いる方法（特
開昭５６−１１５７３６号）、または前記充填剤とアセ
トン−メチルアルコール−水系溶離液を用いる方法（特
開昭５８−８８３３９号）、オクタデシル基をシラノー
ル結合により保持しているシリカゲル系担体またはオク
タデシル基若しくはステアリル基をエステル結合により
保持している合成高分子系担体と、水−低級アルコール
ー脂肪族ケトン、または、アセトニトリル系溶離液を用
いる方法（特開昭５８−１０９４４４号）等がある。

（発明が解決しようとする課題） 上記方法のうちＦＩＪクロマトグラフィーにおいては、
極ｍｌのサンプルを調製するには適していても、大量に
分離、濃縮することはできない。シリカゲル銀イオンク
ロマトグラフィーは吸着クロマドグラフィーの一種であ
り、繰り返し使用するとシリカゲルＩ旦体の吸着力が失
われ、分離能力が無くなるため実用的でない。更に、こ
の場合は重金属である銀が溶出し、製品を汚染する問題
があり、医薬品原料や食品強化剤原料となるドコサヘキ
サエン酸の濃縮法としては不適当である。また、上記逆
相分配クロマトグラフィーは、１回あたりの分取量が小
さ（、大量のサンプルを処理できず、さらに常圧でのカ
ラムクロマトグラフィーは通常できない。

本発明の目的は、これらの問題点を解消するためにドコ
サヘキサエン酸のアルキルエステルをオープン系カラム
クロマトグラフィーにより分離、濃縮することにより、
簡単でかつ多量に分取でき、繰り返し使用することが可
能であり、また常圧で高純度の分離濃縮の可能な方法を
提供することである。

（課題を解決するための手段） 本発明はドコサヘキサエン酸のアルキルエステルの分Ｍ
？ｍ縮に際し、オープン系のカラムクロマトグラフィー
を用いてヘキサンを溶離液とし、充填剤としてアクリル
酸メチルまたはメタクリル酸メチル（以下、（メタ）ア
クリル酸メチルと呼ぶ）と架橋剤との共重合物であり、
その平均粒径が２０〜１０００ｐのポリマーゲルを用い
ることを特徴とする。

本発明に用いるドコサヘキサエン酸のアルキルエステル
とは、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル等のア
ルキルエステル化物である。本発明に用いるオープン系
カラムクロマトグラフィーの充填剤は官能基としてメチ
ル基を持つポリマーゲルであり、具体的には、ポリメチ
ルアクリレート系、ポリメチルメタクリレート系等を例
示することができる。ポリマーゲルは、特に（メタ）ア
クリル酸エステルと架橋剤との共重合物であることが望
ましい。更に詳細には、（メタ）アクリル酸メチルと架
橋剤とをその体積比率１：（１，３〜５の範囲で′Ａ！
、濁重合して得られる粒径が２０〜１００１Ｍのポリマ
ーゲルを特に好ましく用いることができる。

架橋剤としては、芳香族のポリビニルモノマーまたはア
クリル酸系のポリビニルモノマーを用いることができ、
具体的にはジビニルベンゼン、ジビニルトルエン、ジビ
ニルキシレン、ジビニルピリジン、トリビニルベンゼン
またはジアリルフタレート、アリルアクリレート、エチ
レングリコールジメタクリレート、トリメタクリル酸ト
リメチロールプロパン、ペンタエリスリトールテトラメ
タクリレート等を挙げることができる。また、上記アク
リル酸系のポリビニルモノマーの一部、たとえばメタク
リレート１００重量部に対し１０〜８０重量部程度をス
チレン系芳香族化合物またはアクリル系脂肪族化合物な
どのモノビニル化合物で置き換えてもよい。上記スチレ
ン系芳香族化合物としてはスチレン、エチルスチレン、
ビニルナフタレン等を挙げることができ、また、アクリ
ル酸系脂肪族としては、アクリル酸エステル、メタクリ
ル酸エステル等を挙げることができる。

メタクリレートと架橋剤との配合割合はメタクリレート
：架橋剤が体積比にてｔ：Ｏ，３〜５、好ましくは１：
０，４〜２である。架橋剤が０．３未満では、ゲルの機
械的強度が低下し、また、５を超えると試料の保持力が
小さくなる。

重合は水中においてポリビニルアルコール等を分散安定
化剤として用い、懸濁重合゛を行う。重合開始剤として
は過酸化ベンゾイル、ブチルパーオキシド、過酸化コハ
ク酸、ブチルヒドロキシパーオキシドのような有機過酸
化物、２．２′−アゾビス（２，４−ジメチルバレロニ
トリル）、アゾビスイソブチロニトリル等が利用できる
。

重合にあたっては稀釈剤として（メタ）アクリル酸メチ
ルおよび架橋剤と反応性がなく、これらと相溶性のある
もの、たとえばトルエン、キシレン、クロルベンゼン、
ジクロルベンゼン、クロロホルム、アセトン、酢酸エチ
ルなどを用いることができ、また沈澱剤として、たとえ
ばパラフィン類、高級アルコール、天然の油脂、低重合
度の線状高分子類およびこれらのハロゲン化物、あるい
は膨潤剤として高沸点有機溶媒でハロゲン化物や芳香族
系溶剤およびこれらのハロゲン化物を加えてもよい。重
合は通常温度２５〜１００℃にて１〜２０時間程度行う
。

ポリマーゲルの粒径は２０〜１０００ρ、特に、２０〜
１００−が望ましい。粒径が２０庫未満のものを用いる
と分離に時間を要する。１００Ｏ岬を超えると、ドコサ
ヘキサエン酸のアルキルエステルの分離能が低下する。

なお、ポリマーゲルの粒径とは体積平均粒径をいう。

本発明に用いるオープン系カラムクロマトグラフィーに
おいては、溶離液としてカラム充填剤よりも極性が小さ
い溶媒、例えば、ｎ−ヘキサン（？容解パラメータ：δ
＝７．１）、ｎ−ヘキサン（δ＝７．３）、ｎ−へブタ
ン（δ＝７．４）、ｎ−オクタン（δ＝７．５）、ｎ−
イソオクタン（δ＝６．９）、ｎ−シクロヘキサン（δ
＝８．２）などの炭素数約５〜８の鎖状または環状飽和
炭化水素類、ｎ−プロピルエーテル（δ＝６．９）、エ
チルエーテル（δ−７，４）などの低級アルキルエーテ
ル類などが挙げられ、なかでもｎ−ヘキサン、ｎ−オク
タンが好適である。

本発明に用いるカラム充填剤の官能基と溶離液の種類は
分離精製の目的によって任意に選択することができる。

（発明の効果） 以上、本発明によれば、オープン系カラムクロマトグラ
フィーを用いるので、容易に大口径のカラムが使用可能
となり、ドコサヘキサエン酸エステルを大量に処理する
ことにより、１回の分取で多量の目的物を分離濃縮する
ことができる。本発明により得られるドコサヘキサエン
酸のアルキルエステルは、血小板の凝集を抑制し、血栓
の生成を防ぐ働きがあり、高血圧症、心筋梗塞、脳梗塞
などの成人病の予防、改善に効果がある。

（実施例） 以下、本発明を合成例、実施例によって詳しく説明する
。

ポリマーゲルのム １／のフラスコに、水６００−に？容かしたポリビニル
アルコール３．６ｇを入れ、メタクリル酸メチル４０減
、およびエチレングリコールジメタクリレート４０−お
よび２．２′−アゾビス（２，４−ジメチルバレロニト
リル）　２．０ｇを添加して均一混合液を調製した。８
０℃に保った水浴にフラスコを入れ、舟型翼付攪拌棒で
フラスコ内の温度を均一に保つ程度に攪拌しながら、８
０℃で１０時間重合した。重合終了後、生成したゲルを
熱水、アセトン、クロロホルム、ヘキサンで洗浄後、減
圧乾燥器に入れて乾燥させた。この重合法で合成した粒
径５０〜１００μｍのポリマーゲルをカラムに充填した
。

実施貫よ 上記の方法で合成したゲルを用い、６０％のドコサヘキ
サエン酸を含む精製魚油のエチルエステル化物を試料と
し、下記のオープンカラムを用いてヘキサンを溶離液と
して分離した。その時の溶出曲線を第１図に示す。さら
に、それぞれの溶出フラクションをａ　％　ｄの４つに
分画し、その時の組成を第１表に示す。

〔カラムクロマトグラフィー分離条件〕カラム：内径　
　３０鶴 長さ　　５５０貫１ 流速　１．３ｉ／ｍｉｎ 試料量　８９６．６■ ン容離液：ヘキサン 第１表 第１表のｄ分画は、純度８６％以上のドコサヘキサエン
酸エチルエステルを７３■分離濃縮でき、ＰＯ■は４で
あった。

天ｊｌ生■ 実施例１のポリマーゲルを用い、６０％のドコサヘキサ
エン酸を含む精製魚油でのエチルエステル化物を試料と
し、カラムの内径を１７３、長さを２倍にした下記のオ
ープンカラムを用いて実施例１と同様に分離した。

〔カラムクロマトグラフィー分離条件〕カラム：内径　
　１０１１ 長さ　１０００鶴 流速　１ｍｊ！／ｍｉｎ 試料量　　１００■ 溶離液：ヘキサン 純度９０％以上のドコサヘキサエン酸エチルエステルを
分離、精製できた。

尖狙炎主 実施例１のポリマーゲルを用い尿素付加、分子蒸留法に
より得た９７％のドコサヘキサエン酸を含む精製魚油の
エチルエステル化物を試料としてオープンカラムを用い
て分離した。

〔カラムクロマトグラフィー分離条件〕カラム：内径　
　１０龍 長さ　１０００嘗１ 流速　１ｍｆ／ｍｉｎ 試料量　１００■ ？容部液：ヘキサン 純度９９％以上のドコサヘキサエン酸エチルエステルが
分離、精製できた。

【図面の簡単な説明】

第１図は、本発明の実施例によるドコサヘキサエン酸を
含む精製魚油のエチルエステル化物の溶出曲線を示す図
であり、縦軸はエチルエステル濃度を、横軸は流量（ｍ
ｌ）を示す。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １、ドコサヘキサエン酸のアルキルエステルの分離濃縮
   に際し、オープン系のカラムでヘキサンを溶離液とし、
   充填剤としてアクリル酸メチルまたはメタクリル酸メチ
   ルと架橋剤との共重合物であり、その平均粒径が２０〜
   １０００μｍのポリマーゲルを用いることを特徴とする
   クロマトグラフィーによるドコサヘキサエン酸のアルキ
   ルエステルの分離濃縮方法。