JPH01238530A - 角膜上皮層障害症治療剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は、ヒアルロン酸又はその塩からなる角膜上皮層
障害症治療剤に関するものである。

［従来の技術及び発明が解決しようとする課題］角膜は
、上皮細胞層、ボーマン膜、実質層、デスメ膜、内皮細
胞層の５層からなる。

角膜ヘルペス、外傷、アルカリ、酸等によって、前記上
皮細胞層が障害を受は欠損することがあるが、これまで
に角膜の感染や乾燥を防止して、自然治癒を期待するほ
かに積極的な治療法はなく、かかる障害の治癒を促進す
るような薬剤は゛知られていなかった。

最近、患者自身の血漿から調製したフィブロネクチンが
上皮の再被覆に著効を示すことが報告され（Ｎｉｓｈｉ
ｄａ、　Ｔ、、　ｅｔ　ａｌ　：　Ｏｐｈｔｈａｌｍｏ
ｌ、、　９２゜２１３（１９８５１；　Ｗａｔａｎａｂ
ｅ、　Ｋ、、　ｅｔ　ａｌ　：　、Ｉｎｖｅｓｔ。

Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ、　Ｖｉｓ、　Ｓｃｉ、、　２８
．２０５（１９８７１１，一部の病院で使用されている
が、安定性や抗原性に難点があり汎用性に乏しい。

一方、ヒアルロン酸は、水分の保持、潤滑作用、高い粘
弾性等の物理的性質を有するとともに種々の生理活性を
有することが知られている。眼科領域では、前記物理的
性質に基（角膜保護作用及び角膜表面の乾燥防止作用を
利用して角膜乾燥症の治療に適用されている（特開昭６
０−８４２２５号公報）。

しかしながら、ヒアルロン酸について角膜上皮層の障害
に対する積極的治療効果に関しては何ら報告はなされて
いない。

そこで、本発明者らは、ヒアルロン酸の角膜上皮層に対
する効果について鋭意研究を重ねた結果、ヒアルロン酸
が角膜上皮層の伸展促進作用を有することを見出し、本
発明を完成するに至った。

［課題を解決する発明が解決しようとする課題］本発明
は、ヒアルロン酸又はその塩を有効成分として含有する
ことを特徴とする角膜上皮層障害症治療剤に関するもの
である。

ヒアルロン酸の塩としては、通常、ナトリウム塩を用い
るが、カリウム塩等を用いてもよい。

本発明に用いるヒアルロン酸又はその塩としては、その
分子量が５０万〜３００万であるものが好ましく、６０
万〜１２０万であるものが更に好ましい。分子量が５０
万未満又は３００万を超えると角膜上皮層の伸展促進作
用が低下する。

分子量が６０万〜１２０万であるヒアルロン酸・　は、
鶏冠をプロテアーゼ消化、塩化セチルピリジニウム沈殿
、エタノール分画（日本国特許第１２８４０２３号、特
公昭６１−２１２４１号）することにより得ることがで
きる。

本発明の角膜上皮層障害症治療剤は、好まし°（は水溶
液として用いるが、そのときのヒアルロン酸の濃度は、
好、ましくは２００〜５．０００μｇ／ｎ＋１である。

該濃度が２００μｇ／ｍ１未満又は５．０００μｇ／ｎ
＋１を超えると角膜上皮層の伸展促進作用が低下する。

更に、５．０００μｇ／ｍｌを超えると適用が困難とな
る。

本発明の角膜上皮層障害症治療剤には、ヒアルロン酸以
外に他の添加物、例えば、塩化ナトリウム、リン酸水素
二ナトリウム、リン酸水素−カリウムなどの塩類、バラ
オキシ安息香酸エステル類、塩化ベンザルコニウムなど
の保存剤、コンドロイチン硫酸やグリチルリチンなどの
抗炎症剤等を適宜添加してもよい。

本発明の角膜上皮層障害症治療剤を臨床に適用するに際
しては、リン酸塩緩衝化生理食塩液に分子量６０万〜１
２０万のヒアルロン酸ナトリウムを２００〜５．０−０
０μｇ／ｍｌの濃度で溶解したものを一日１〜１０回、
１回１〜３滴点眼する。

なお、ヒアルロン酸の安全性（毒性・非炎症性）につい
ては、既に数多（の実験がなされており、その安全性が
確認されている０例えば、服毒性については、ウサギを
用いた実験により刺激性、抗原性がないことが確認され
ている（上野則夫他二日本眼科紀要共、　５８４　（１
９８４）及び同長、８０３（１９８４）　）　。

［実施例］ 以下、実施例により本発明を更に詳細に説明するが、こ
れらの実施例は本発明の範囲を何ら制限するものではな
い。

実施例１ １、動物 体重２．８〜３．０ｋｇの日本白色在来種ウサギ（雄）
６０匹を使用した。

２、ヒアルロン酸ナトリウム、コンドロイチンナトリウ
ム、ヘパラン硫　ナトリウム 、　ヒアルロン酸ナトリウム（Ｎａ−ＨＡ）は分子量４
千、２万、１０万、５０万、６８万、１０２万のものを
使用した。コンドロイチン硫酸ナトリウム（Ｎ　ａ−Ｃ
ｈｓ）とヘパラン硫酸ナトリウム（Ｎａ−ＨＳ）は分子
量３万のものを使用した。

’Ｎａ−ＨＡは鶏冠から、Ｎ　ａ−Ｃｈｓはサメ軟骨か
ら、Ｎａ−ＨＳはウシ腎臓から精製されたもので、いず
れも生化学工業株式会社製造のものである。

旦−ＪＩＵ竹生皇蓑 Ｗａｔａｎａｂｅらの方法　（Ｗａｔａｎａｂｅ、　Ｔ
、、　ｅｔ　ａｌ　：Ｉｎｖｅｓｔ、０ｐｈｔｈａｌａ
＋ｏ１．　Ｖｉｓ、　Ｓｃｉ、、　２８．２０５　（１
９８７１１に準じて培養した。

ウサギ摘出眼球から張角膜片を分離し、中央部で垂直に
２分割した。２分割した一方をデキストランＴ４０を５
％含む１９９培地で培養し、対照群とした。他方は更に
各種のグリコ与ミノグリカン（ＧＡＧ）を添加した培地
で培養した。ＧＡＧの濃度は４００μｇ／ｍｌとした。

また、分子量６８万（７）　Ｎ　ａ−ＨＡ　ニツイテハ
、濃度５０，１００、２００．４００．８００．２．５
００μｇ／ｍｌについても検討した。

各濃度、分子量のＧＡＧ群について９眼を使用し、それ
ぞれに対照群を設け、独立して実験を行った。培養時間
は２０時間、温度は３７℃、ＣＯ２濃度は５％とした。

４、病理標本の　製 培養終了後、角膜片をリン酸緩衝化生理食塩液（ＰＢＳ
）で洗浄し、３％のグルタルアルデヒド、２．５％のホ
ルムアルデヒドを含む１００ｍＭのリン酸ナトリウム緩
衝液（ｐＨ１，２）で１５時間固定した。固定後、更に
２分割し、強膜を除いて更に２４時間以上固定した０次
に、常法どおりパラフィン包埋、薄切、Ｈ−Ｅ染色、封
入した。

５、上皮層申展距離の測定 角膜実質層切断面を１００倍で写真撮影し、８５Ｘ１２
０ｍｍに引き伸ばしたプリント上から上皮層の伸展距離
を測定した。測定後、平均値と標準偏差を算出し、有意
差の検定を行った。検定に゛は、対応のある２標本間の
ｔ−検定を用いた。

［結果］ 角膜上皮層の伸展に対する種々な濃度のＮａ−ＨＡ（分
子量６８万）の作用を図１に示す。

結果は対照群に対する百分率で表示しである。

濃度２００．４００．８００ｕｇ／ｍｌで有意な上皮層
伸展促進効果が認められ、４００μｇ／ｍｌの濃度で最
も伸展距離が長かった（ｐ＜０．００５）、そこで、以
下の実験では、濃度を４００μｇ／ｍｌに固定して検討
した。

角膜上皮層の伸展に対する種々な分子量のＮａ−ＨＡ（
ｉｎ度４００　ｕ　ｇ／ｍｌ）の作用を図２に示す、い
ずれの分子量のＮａ−ＨＡも伸展を促進する作用を示し
、分子量５０万、６８万、１０２万では有意であった。

角膜上皮層の伸展に対する他のＧＡＧの作用を図３に示
す６分子量３万、濃度４００μｇ／ｍｌのＮ　ａ−Ｃｈ
ｓ、及びＮａ−Ｈ３は僅かに伸展を促進したが、有意差
は認められなかった。

実施例２ 上−憇肋 体重２．６〜３．５ｋｇの日本白色在来種ウサギ（雄）
６匹を使用した。

２、ヒアルロン　ナトリウム 分子量７２万のＮａ−ＨＡを生理食塩液に０．５％の濃
度で溶解したものを使用した。

３、角膜上　層の剥離 一定面積の上皮層を剥離するために、内径１０ｍｍ、長
さ約５０１のリム付き試験管にヨードを２０ｇ入れ、先
端にガラスウールを詰めたものを使用した（Ｐａｒｋｉ
ｓｏｎ、　Ｇ、、　ｅｔ　ａｌ　：　Ｉｎｖｅｓｔ。

０ｐｈｔｈａｌｌＩＩｏ１．　Ｖｉｓ、　Ｓｃｉ、、　
１８．１０３（１９７９）ｌ。

ウサギをベンドパルビタールで全身麻酔し、塩酸オキシ
ブブロ力インを点眼して局所麻酔した後、前述のヨード
を充積した試験管の開口部をウサギ角膜中央部に３．５
分間軽く圧着して、上皮層をヨードガスで障害した。障
害後２〜３時間で上皮層は剥離した。ヨードガスによる
障害は午前９＝００に行い、午後ｌ：００及び５　：　
００．翌日の午前９：００．午後１：０Ｏ９５：００に
点眼した。右眼には０．５％のＮａ−ＨＡ、左眼には生
理食塩液を点眼した。

４、剥離部層の染　と　　撮影 ヨードガスによる障害後４８時間に、フルオレッセイン
の２％生理食塩液溶液を点眼して上皮層の剥離部位を染
色し、３５６ｒ＋ｍの紫外線下で写真層形した。剥離部
位の直径は写真プリント上から測定し、平均値と標準偏
差を算出した。有意差の検定には対応のある２標本間の
ｔ−検定を用いた。

［結果］ ヨードガスによる障害後４８時間に、フルオレッセイン
で染色した角膜を肉眼的に観察した結果、生理食塩液を
点眼した角膜に比べて、０．５％Ｎａ−ＨＡを点眼した
角膜の上皮層剥離部が小さくなっているのが観察された
。

図４に上皮層剥離部の直径の測定値を示す。

Ｎａ−ＨＡ点眼群では生理食塩滴群に比べて、有意（Ｐ
＜０．０５）に直径が小さくなっていた。

以上のように、０．５％のＮａ−ＨＡを点眼したｉｎ　
ｖｉｖｏの系においても、上皮層の再被覆を促進する作
用が認められたことは、Ｎａ−ＨＡが遷延化した角膜上
皮層障害症に対して有効な治療薬になり得ることを示唆
するものである。

［発明の効果］ 本発明によれば、角膜上皮層障害の治療薬及び角膜移植
後の上皮層治価促進薬を提供することができる。

【図面の簡単な説明】

図１は、角膜上皮層伸展に対する種々の濃度のＮａ−Ｈ
Ａの作用を示す図である。図２は、角膜上皮層伸展に対
する種々の分子量のＮａ−ＨＡの作用を示す図である。 図３は、角膜上皮層伸展に対する種々のＧＡＧの作用を
示す図である１図４は、ヨードガスで障害後４８時間の
角膜上皮層剥離部位置径を示す図である。 図３

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）ヒアルロン酸又はその塩を有効成分として含有す
   ることを特徴とする角膜上皮層障害症治療剤。
2. （２）ヒアルロン酸又はその塩の分子量が５０万〜３０
   ０万である請求項１記載の角膜上皮層障害症治療剤。
3. （３）ヒアルロン酸又はその塩を２００〜５，０００μ
   ｇ／ｍｌ含有する水溶液である請求項１記載の角膜上皮
   層障害症治療剤。