JPH01224323A - 血漿製剤中の複製し得る濾過性病原体の不活化法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、血漿製剤中の複製し得る濾過性病原体を昇温
下に不活化する方法に関する。

このタイプの不活化法は、文献では広範に取り扱われて
いる。これら種々の方法は、 ａ）安定化剤の存在下に、要すれば殺ウイルス性物質を
添加して血液製剤の水溶液を加熱し、ｂ）得られた血液
製剤を乾燥状態で加熱する、工程を含む。

例えば、ＤＥ−Ａ−２９１６７１１には、凝固因子を含
有する調製物を水溶液中に於いて温度３０°Ｃ〜１００
’Ｃに適用して処理する方法であって、アミノ酸および
単糖、オリゴ糖または糖アルコール（ｓｕｇｅｒ　ａｌ
ｃｏｈｏｌ）を該凝固因子の溶液に加えることを特徴と
する方法が記載されている。

ＥＰ−Ａ２−０　０３５　２０４には、第■因子、フィ
ブロネクチン、グロブリン、フィブリノーゲンおよび他
のタンパク質を含有することのある水性タンパク質溶液
を不活化する方法であって、該組成物をポリオールと混
合し、得られた混合物を温度６０’Ｃ〜７５°Ｃに加熱
する方法が開示されている。

ＵＳ−Ａ−４，３７９，０８５には、血漿タンパク質、
例えばＣ１インヒビターまたは第１Ｘ因子を、クエン酸
カリウムまたはクエン酸アンモニウムを存在させた水溶
液中に於いて温度操作によって不活化する方法が記載さ
れている。

ＥＰ−Ａ２−０　０７７　８７０には、第■因子を含有
する水溶液を、アミノ酸、単糖、オリゴ糖、糖アルコー
ルおよび炭素数３〜１０の炭化水素系カルボン酸類また
はヒドロキシ炭化水素系カルホン酸類と共に温度５０°
Ｃ〜８０°Ｃに加熱することを特徴とするウィルスの不
活化方法が記載されている。

ＵＳ−Ａ−３，０４１，２４２には、乾燥ヒト血漿を加
熱した後、ウィルスを死滅させることを目的として高度
な真空圧力の条件下で致死ガス（ｌｅｔｈａｔ　ｇａｓ
）を適用する方法が記載されている。

ＤＥ−Ａ−３４３４４７２およびＥＰ−Ａ２−０　２４
０　７５０には、液状温度キャリアー（ｌｉｑｕｉｄ　
ｔｈｅｒｍａｌ　ｃａｒｒｉｅｒ）、特にアルコールと
脂肪酸のエステルに懸濁させた微粉砕凍結乾燥血漿タン
パク質に係る低温殺菌の方法が記載されている。

しかし、このシステムの水分含量は、０．０１よりも小
さい値であり、また、この方法はヒト病原性ウィルスに
対して有効であるとは報告されていない。

ＵＳ−Ａ−４，４９０，３６１にも、乾燥タンパク質粉
末の有機液体中懸濁液を加熱することが記載されている
。

国際公開されているＰＣＴ出願ＷＯ８５１０５２７３に
は、パーセル（Ｐｕｒｃｅｌ　ｌ）が、水分含有のハロ
炭化水素を用いて乾燥状態の脂質に含有されたウィルス
を不活化する方法を開示している。好ましいハロ炭化水
素であるクロロホルム中では、水は少量しか溶解しない
ので、このシステムの水分含量も０．０５よりも小さい
。

ＥＰ−Ａ２−０　０９４　６１１には、第■因子を含有
する乾燥状態の組成物を０．０５（５％重量）よりも少
ない水で処理する方法であって、存在する肝炎ウィルス
を不活化するために少なくとも６０°Ｃの温度で処理す
る方法が開示されている。

国際公開されたＰＣＴ出願ＷＯ３２１０３８７１には、
血液凝固酵素を含有する調製物を処理する方法であって
、乾燥状態にあるこの調製物を加熱して存在する感染性
ウィルスを不活化することを特徴する方法が開示されて
おり、乾燥状態としては０．０５（５％重量）よりも少
ない含水状態であると規定されている。

さらに、ＵＳ−Ａ−４，６４０，８３４の発明者らは、
固体状の血液製剤の水分、メタノール分またはエタノー
ル分の含量を０．０５　（５％重Ｍ）より多く、かつ０
．７０（７０％重量）より少なく、好ましくは０．４０
（４０％重量）より少なく調節し、気密容器内に於いて
温度５０〜１２１０Ｃで、水、メタノールまたはエタノ
ールの蒸気分圧を上昇させることによって処理すること
を特徴とする方法を記載している。

さらに従来技術としては、血液凝固因子第１Ｘ因子およ
び第Ｘ因子の水溶液をショ糖およびグリシンの存在下に
熱処理することであって、００５〜２Ｍのカルシウムイ
オンを添加することによってこれらの凝固因子の生物学
的活性を安定化させることを特徴とする方法がＥＰ−Ｂ
ｌ−００５３３３８から知られている。

また、ＥＰ−Ａ−０１３７４２８は、ショ糖、グリ７ン
、カルシウムイオン（１〜５０ｍＭ）およびキレート剤
を添加して水溶液中で加熱することによって、血液凝固
因子第■因子、第■因子、第１Ｘ囚子および第Ｘ因子の
調製物を製造する方法に関するものである。

これらの方法ではすへて共通して、血液製剤に潜在的な
感染性を排除する一方、製剤の生物学的活性の大部分を
保持するよう努力されている。熱安定性のウィルス、例
えば肝炎ウィルスを不活化する場合には、現在までのと
ころ、上記の目的にかなう程の満足のいく段階には至っ
ていない。

本発明は、現在直面している前記の困難性を排除するこ
とを目的とし、さらに、従来と同等な不活化時間および
不活化温度の条件下に於いても、ウィルスの不活化の効
率をより高め、従って病原性ウィルスの伝播に関して安
全性をより高め、それと同時に個々の血漿製剤の生物学
的活性の保存性を高度に保証する不活化方法を提供する
ことを目的とする。

本発明は、ＵＳ−Ａ−４，６４０，８３４とは異なり、
水処理した媒質および有機処理した媒質の特定の組合わ
せによって最善の結果が得られることを見いだしたこと
により、このＵＳ−Ａ！。

６４０．８３４を改良し、さらにそれを発展させたもの
である。

従って、本発明は、血漿製剤を、該血丁製剤に対して濃
度が０．０５　（５重世％）より大きいヒドロキ７基含
有化合物の存在下に不活化密閉容器内に固体形態で熱処
理することによって血漿製剤中の複製し得る濾過性病原
体を熱不活化する方法であって、 １）該血漿製剤を、熱処理前に、水分歯ｎｏ、。

８〜０．４０（８〜４０重量％）に調節し、系中の水分
を、熱処理中、血漿製剤と物理的に結合させておき、 ２）血漿製剤の熱処理中、エタノール、酢酸エチルエス
テル、ジエチルエーテル、ジメチルホルムアミド、トル
エン、クロロホルム、ｎ−ヘプタン、１．２−ンアセト
キシエタンおよびアセトンからなる群の中から選ばれる
有機化合物を容器体積１リツトル当たり濃度０．０１〜
１０ｇで容器の気相内に導入する ことを特徴とする方法に関するものである。

上記熱処理はカルシウムイオンの存在下に行うと都合よ
く、このカルシウムイオンは、凍結乾燥前に於ける血漿
製剤の分画工程のどの段階でも混合でき、あるいは得ら
れた凍結乾燥製剤を、カルシウムイオンを含有させた水
で湿らせてもよい。

カルシウムイオンの添加により、血漿製剤の活性の安定
性が改善される。

本発明の方法の好ましい態様は、血漿製剤を所望の水分
含量に達するまで水蒸気で湿らせ、この血漿製剤を不活
化容器に入れ、次いで有機化合物を気体状態でこの容器
に導入して所望の濃度に調節し、次いで、血漿製剤を入
れた密閉容器を不活化温度に調節し、ウィルスが不活化
されるのに必要な時間だけ加熱することを特徴とするも
のである。

血漿製剤を水蒸気で湿らせることは減圧下で行うと都合
よい。

好ましくは、熱処理を５０〜８０’Ｃで行う。

（有機化合物を導入する前の）容器内雰囲気を不活性ガ
ス、特に乾燥窒素による置換によって酸素除去すること
は好ましい態様である。

本発明の方法を以下の実施例によってさらに詳細に説明
する。

実施例１ 第■因子調製物を米国特許第４，５２２，７５１号に記
載の方法によって調製し、これを凍結乾燥した。あらか
じめ水分含量０．０１９に調節したこの凍結乾燥バルク
粉末３５０ｇを、蒸気供給手段を装備した排気用容器に
入れ、この容器を排気して圧力４ミリバール（ｍｂａｒ
）に調節した。蒸留水９０ＩＩｅ（コレは設定水分容ｆ
ｆ１０．２　（２０重量％）に相当する）を蒸気形態で
この容器に導入し、圧力を３３ミリバールにしてこの粉
末を湿らせた。

水蒸気をこの凍結乾燥物質に短時間で作用させると、平
衡圧力２３ミリバールになった。

次いで、湿潤用容器に乾燥窒素を吹き流し、環境圧力に
した。粉末の増加した重量は８５．５ｇであった。この
湿った粉末を２４時間平衡化し、水分含量をカール・フ
ィ、シャー法によって測定した［ショールツ（Ｓｃｈｏ
ｌｚ　Ｅ、）、Ｚ　、　ａｎａｌｙｔ、　Ｃｈｅｍ。

３１４．５６７−５７１　（１９８３）］。３つの標本
試料は、水分含量０．２０３１０．２００１０゜２０２
であった。

このようにして調製した含水バルク粉末の部分１１６２
ｇをガス供給口を装備した密閉できる排気用不活化容器
（体積１５．４リツトル）に入れ、２回連続して排気し
、圧力１００　ミＩＪバールとし、次いで乾燥窒素を用
いて環境圧力までに圧力を調節した。続いて、この不活
化装置内の圧力を再度１００ミリバールまで低め、気体
状態のエタノール３．８５ｇをガス供給口から導入した
［このエタノール量は、不活化容器の全体積に対しエタ
ノール０．２５　ｇ／（ｌの量に対応している］。

次いで、不活化容器内の圧力を、乾燥窒素を用いて環境
圧力にまで上昇させ、この容器を密閉し、１０時間６０
°Ｃに加熱した。この熱処理の間、容器内は、全圧力１
，２２２ミリバールであり、露点４９．８°Ｃと測定さ
れた。

露点を測定することにより、湿潤粉末の６０°Ｃに於け
る加熱中に、水分が不活化容器内の固相（凍結乾燥物（
ｌｙｏｐｈｉｌｉｓａｔｅ））および気相間にどの程度
分配されるかを結論付けることができる。閉鎖システム
では、平衡を乱さないで、６０℃に於いて粉末の水分含
量を直接測定することは不可能である。しかし、６０’
Ｃに於ける不活化密閉容器の気相中で測定される露点に
基づけば、容器雰囲気の水分含量、さらには凍結乾燥物
の水分含量をも計算することができる。こうして、第■
因子を含有する物質は、６０℃に加熱した場合でさえも
、物理的に結合した水の形態でその水分含量の約９６％
を含有していることが判明した。

詳細には、この計算は、第１表に示したデータを用いれ
ば行うことができる。

（以下余白） 第１表 ６０°Ｃ加熱時に於ける第■因子を含有した湿潤化製剤
の水分含量ｌ、第■因子凍結乾燥物　　　　　　　　　
　　　　　　　　−２、湿潤化製剤の質量（ｇ）　　　
　　　　　　　　　　　　　　１６２３、湿潤化製剤１
ｇ当たりの水分ｇ数　　　　　　　　　　０．２０４、
本システムの水分の全量（ｇ）　　　　　　　　　　　
　　　３２．４５、不活化容器の体積（の　　　　　　
　　　　　　　　　　１５．４６、温度（’Ｃ／Ｋ）　
　　　　　　　　　　　　　　　　６０／３３３７、全
圧力Ｐ　ｔｏｔ　（ｍｂａｒ）　　　　　　　　　　　
　　　　　１２２２８、露点［Ｄ　Ｐ］　（’Ｃ）　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　４９．８９、ＰＨ
，。／ＤＰ：露点に於ける飽和水蒸気圧（ｍｂａｒ）　
　　　ｌ　２２ｔｏ、ＰＮ！／６０［第７〜９欄コ（ｍ
ｂａｒ）　　　　　　　　　　１１００第　１　表（続
き） ｇＮ２ ＋２．　　　Ｖ　　　　／６０［等式（３）］Ｉ４、　
気相中のＨ２Ｏ 不活化容器 し第１３欄］・［第５欄］（ｇ）　　　　　　　　　１
．２２１５、　　気相中のＨ，０ 全本分債に対する％ この例では、湿潤化粉末の水分含量は、カール・フィッ
シャー法で測定すると０．２０であった（第１表の第３
欄）。

不活化密閉容器内に於いて窒素雰囲気下、６０°Ｃで湿
潤化粉末を連続処理する間は、全圧力ｌ。

２２２ミリバール（第７欄）および露点（Ｄ　Ｐ’）４
９．８°Ｃ（第８欄）と測定された。測定装置は、露点
湿度計（Ｄｅｗ　Ｐｏ１ｎｔ　Ｈｙｇｒｏｍｅｔｅｒ）
　ＣＥ　Ｇ＆ＧＥ　ｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ　Ｅ　ｑ
ｕｉｐｍｅｎｔの６６０型］であった。スミソニアン協
会の湿度および乾湿球表から、測定された露点に於ける
水の飽和蒸気圧・ＰＨ７゜／ＤＰか判読できた（第９欄
）。全圧力・Ｐ　ｔｏｔからこの飽和蒸気圧：Ｐ、１、
ｏ／ＤＰを差し引けば、６０°Ｃに於ける窒素の分圧・
ＰＮ、／６０が得られる［第１０欄−第７−一第９欄］
。これらの値から、以下の計算式に従い、気相に於いて
の数式： 等式（１） 第１１欄の数式を数式： に変換するために、第１１欄の数値を、不活化容器の条
件下のＩｇのＮ、の体積で割る。

０’Ｃ（＝２７３Ｋ）かつ７６　ＯＮｘＨｇ　（＝　１
気圧−１０１３ｍｂａｒ）に於けるＮ、　　１ｆ２の質
量は１゜２５０５ｇであり、これら標準状態のＮｔｌｇ
は体積ｏ、５ｏｏｃである。Ｇ　ａｙ　−Ｌ　ｕｓｓａ
ｃおよびＢｏｙｌｅ−Ｍａｒｉｏｔｔｅの法則に従えば
、以下の等式が適用できる： 等式（２） 標準状態かつ６０℃のｐｌ、ｖｌ、ＴＩおよびＰ２、Ｖ
２、Ｉ２の個々の値によって、以下の等式が導かれる： 等式（３） ＊＝６０°Ｃに於けるＮｔｌｇの体積 求めるリットル単位のＶ　　　　／６０値（第１ｇＮ ２欄）は、等式（３）を変形し、第１０欄の数値を挿入
することによって得られる。

（第１２欄） 第１１欄と第１２欄の数値を割り算することによって、
６０’Ｃの気相に於ける求める数式・が得られる。不活
化容器の体積（第５欄）との積によって、所望の結果が
得られる１６０℃に於ける不活化容器内の水蒸気（ｇ数
）。この計算では、凍結乾燥物の体積に基づく誤差を無
視している。

この結果によれば、６０°Ｃに於ける不活化容器中、気
相中には水分全量に対して約４％の水分しか存在してい
ない、即ち上昇温度でさえも、水分の大部分は、凍結乾
燥物に物理的に結合され、保持されていることになる。

容器内雰囲気中に於けるエタノール量は、注入シリンジ
によってガス試料を幾つか各々２０ｄ抜き取り、それら
の温度を６０°Ｃに調節し、容器内の固相物質および雰
囲気間に於ける平衡性を調節した後にガスクロマトグラ
フィーによって分析することによって測定できる。

その容器内雰囲気に於けるエタノール量は、容器体積Ｉ
Ｑ当たり総ｆｆ１９３．２１１ｇにのぼることが判明し
、これにより、エタ／−ルの利用できる量の４０％近く
の量はタンパク質に随伴されず、気相に存在しているこ
とが見いだされた。

既述の如く６０℃で１０時間加熱した後に、不活化した
バルク粉末を取り出し、温度＋２〜＋８°Ｃで保存した
。熱処理の前後に於ける第■因子活性を測定すると、０
．７１の残余活性を示した（第■因子の収率７１％）。

ウィルスの不活化効果を評価するために、各種のタイプ
のウィルスに対し同様の検定法で、本発明の不活化法の
動態（ｋｉｎｅｔｉｃｓ）を調査した。これを行い、さ
らに、ウィルス不含の試料に於いて同等の熱処理を行っ
た後に不活化操作後の残余筒■因子活性も測定した。

不活化の動態を追跡するために、水溶液の形態にある既
述の第■因子物質の標本を、ワタシニア・ウィルス（Ｖ
ａｃｃｉｎｉａ　ｖｉｒｕｓ）の細胞培養培地ＴＣＭ１
９９中懸濁液、中上濁液ィルス不含の１０Ｍ１９９とそ
れぞれ混合し、幾つかの試験管に充満させ、凍結乾燥し
た。凍結乾燥した第■因子濃縮物を水分含量０．２０　
（２０重量％）に調節し、既述の如く乾燥窒素を用いて
「ガス処理（ｇａｓｓｅｄ）Ｊし、次いで密閉試験管中
にて６０’Ｃで１０時間加熱した。１、３および１０時
間後に、熱処理した調製物を水にそれぞれ溶解し、等優
性生理食塩水で比率１；１０に連続して希釈し、ウィル
ス力価を測定した。マイクロタイタープレート中にて、
感受性ヴ工ロ・セル（Ｖｅｒｏ　ｃｅｌｌｓ）に対する
細胞毒性作用を評価することによってウィルスの力価を
測定した。得られた結果を統計学的に評価し、リード（
Ｒｅｅｄ　Ｊ、Ｌ、）およびミューンチ（Ｈ，Ｍｕｅｎ
ｃｈ）　［Ａｍｅｒ、　Ｊ、　Ｉｌｙｇ、　２７．４９
３（１９３８）］による式に従ったＴＣ■Ｄ５゜で表し
た。

同様の方法で、水分含量０．２０　（２０重量％）に調
節し、「窒素ガス処理」した後、容器体積中、エタノー
ル雰囲気を０．２５ｇ／（ｌでバイアル中を維持する本
発明の方法に従って、同じワク／ニアウィルスの不活化
の動態を調査した。

第２表は、従来技術であるＵＳ−Ａ−４，６４０，８３
４の既知の実施法と比較して、アルコール性雰囲気であ
る以外はすべてこれと同じ条件を利用した本発明の実施
法が顕著な発展性を示すことを示唆している。

本発明に係る不活化動態を評価するためのウィルスモデ
ルとしてさらにバクテリオファージＸ１７４を使用し、
従来技術と比較した。ワクシニアウィルスおよびバクテ
リオファージｘ１７４は両者ともに、極めて熱安定なウ
ィルスであることを指摘しなければならない。これらの
ウィルスモデルを使用して得られた結果により好適に結
論付けられることは、血漿製剤中で発生し得るウィルス
であって、製剤をヒトに適用した場合にはそれらを不活
化することが製剤の安全性にとって重要であるウィルス
、例えばＨＩＶ（ＡＩＤＳ媒介性）、Ｂ型肝炎ウィルス
、非Ａ非Ｂ（ＮＡＮＢ）肝炎ウィルス、ＣＭＶ、ＥＢＶ
に対し、本発明の方法が有効であるということである。

（以下余白） 第２表の結果により、調査すべき試料の水分含ｆｆ１０
．２０に於いてウィルスモデルとしてワクシニアウィル
スを使用するＵＳ−Ａ−４，６４０，８３４の実施法に
従った対照検定については、加熱１０時間後のウィルス
力価が１０”であることが詳細に明らかとなっている。

これとは対照的に、本発明の実施法、即ち不活化反応時
にエタノール雰囲気を維持した場合では３時間後には既
にこの値に達していた。本発明に係るエタノール雰囲気
を使用した場合、１０時間後にはもはやワクシニアウィ
ルスを検出することができなかったが、エタノール雰囲
気を使用しなかった場合には１０時間後でも未だにウィ
ルス力価として１０′４が算定された。

その上、エタノール不含の対照検定よりも優れた結果が
、ウィルスモデルとしてバクテリオファージＸ１７４を
使用した場合にも見いだされた。

即ち、アルコール不含の場合に於ける不活化反応の１０
時間後に測定されるウィルス力価１０Ｉ５は、本発明の
ようにアルコールを使用した方法では３時間後には既に
達成されるウィルス力価であった。本発明の方法では、
加熱１０時間後にはウィルスは全く検出されなかった。

熱処理の前後に、２段階試験によって第■囚子活性を測
定した。これにより計算される熱処理後の第■因子の残
余活性はすべての場合で満足のいくものであった。

実施例２ フｔ　ノクス・サンプ（Ｖｏｘ　Ｓａｎｇ、　）　［３
３，３７−５０（１９７７）］に記載された方法に従い
、ＤＥＡＥセファデックスに吸着させ、イオン交換剤で
洗浄し、部分的プロトロンビン複合体（ｐａｒｔｉａｌ
　ｐｒｏｔｈｒｏｍｂｉｎ　ｃｏｍｐｌｅｘ）の溶出を
行うことによって、ヒト布類から凝固因子第■、第■お
よび第Ｘ因子を含有する調製物を得た。

溶出液を透析し、凍結乾燥し、得られた物質から部分的
プロトロンビン複合体の４０３Ｉｇタンパク質／ｘＱ含
量の水溶液を調製した。この溶液の各々２酎をそれぞれ
、ワクシニアウィルスの細胞培養培地中懸濁液、および
等張性生理食塩水に混合し、バイアルに充填し、凍結乾
燥した。試料のすべてを水分歯ｍｏ、ｔｓに調節し、半
分の試料を容器体積１リツトル当たり０．２５　ｇのエ
タノールと混合した。凍結乾燥した部分的プロトロンビ
ン複合体を入れた密閉容器−ウィルス不含む容器および
ウィルス不含の容器−を異なる時間で７０°Ｃに加熱し
た。３つの試料、即ち加熱前、加熱後１時間および加熱
後３時間に於ける試料を各々取り出し、ウィルス力価を
測定すると共に、第１Ｘ因子の残余活性および水分含量
を測定した。

ウィルス力価を、実施例１に記載のように測定した。

第１Ｘ因子欠乏性血漿に試験する試料を加え、活性化部
分的トロンホブラスチン時間を計測することによって第
■因子活性を測定した（第１段階試験）。水分含量の測
定は、実施例１に記載の如く行った。

アルコール蒸気と共に湿潤化した凍結乾燥物を熱処理し
た後に測定したウィルス力価は、第３表から得ることが
できる。これより、３時間後にはウィルスの検出限界値
に既に達し、第１Ｘ因子の残余活性は十分な程度で保持
されていることが明らかである。これと比較して、アル
コールを加えていない湿潤化した部分的プロトロンビン
複合体試料は加熱後にはウィルス力価かほんの少ししか
減少していないことが明白である。

（以下余白） 実施例３ 米国特許筒４，５２２，７５１号に係る第■因子含有調
製物の水溶液の製剤を２つ調製し、塩化カルシウム形態
でカルシウムイオンを混合し、またワタシニアウイルス
懸濁液を混合し、凍結乾燥した。乾燥した凍結乾燥物１
ｇ当たりの塩化カルシウムの量は一つは１８屑ｇ１一つ
は２７．５ｍｇであった。凍結乾燥した第■因子の濃縮
物を、既述のように水分含量０．２０に調節し、窒素に
よってガス処理し、密閉容器中で１０時間６０°Ｃに加
熱した。実施例１に記載のようにウィルス力価を１．３
および１０時間後に測定した。同様に処理したがウィル
ス不含である試料に関して第■因子活性を測定した。水
分含量０．２０に調節した後、バイアル中を容器体積１
リツトル当たりエタノール雰囲気０．４ｇに維持する本
発明の方法を適用することによって、同様にウィルス力
価の動態および第■因子活性の動態を調査した。

第４表に示す結果から解るように、湿潤化した凍結乾燥
物にアルコール蒸気を作用させる組合わせによって従来
技術と比較して顕著に改良されたウィルス不活化が効果
的に行われる。同時に、カルシウムイオンが存在するこ
とが原因となって、エタノールおよび水の作用に関して
第■因子活性が安定化される。

（以下余白） 実施例４ 実施例１に記載の第■因子調製物の水溶液を調製した。

この溶液の各々２２ｇ溶液をそれぞれ、ワタシニアウイ
ルスの細胞培養培地中野濁液、および等張性生理食塩水
に混合し、バイアルに充填し、凍結乾燥した。試料のす
べてを第５表に示した水分含量に調節し、第５表に示し
た量で異なる有機化合物を混合した。密閉バイアルを異
なる時間間隔で温度６０°Ｃに加熱した。

ウィルス不活化および第■因子の残余活性に関する結果
は、第５表から得ることができる。これより明らかであ
るが、対照試料（当該粉末の重量当たり０．０５すなわ
ち５％以下の水分含量で個々の有機化合物で処理）に関
しては、ワク／ニアウィルス力価が処理後３０時間で１
１０ｇ段階より少ない分だけしか減少せず（残余力価約
１０”）、他方本発明の方法に係る試料（当該粉末の重
量当たり０．０５すなわち５％以上の水分含量）に関し
ては、個々の有機化合物によってワク／ニアウィルス力
価が加熱後１時間〜１０時間で検出できな（なった（１
０１以下のウィルス力価）。加熱後、第■因子残余活性
は、すべての場合で十分であった。以下の第５表に得ら
れた結果を示す。

（以下余白）

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、血漿製剤を、該血漿製剤に対して濃度が０．０５（
   ５重量％）より大きいヒドロキシ基含有化合物の存在下
   に不活化密閉容器内に固体形態で熱処理することによっ
   て血漿製剤中の複製し得る濾過性病原体を熱不活化する
   方法であって、 １）該血漿製剤を、熱処理前に、水分含量０．０８〜０
   ．４０（８〜４０重量％）に調節し、系中の水分を、熱
   処理中、血漿製剤と物理的に結合させておき、 ２）血漿製剤の熱処理中、エタノール、酢酸エチルエス
   テル、ジエチルエーテル、ジメチルホルムアミド、トル
   エン、クロロホルム、ｎ−ヘプタン、１，２−ジアセト
   キシエタンおよびアセトンからなる群の中から選ばれる
   有機化合物を容器容量１リットル当たり濃度０．０１〜
   １０ｇで容器の気相内に導入する ことを特徴とする方法。 ２、熱処理をカルシウムイオンの存在下に行う請求項１
   に記載の方法。 ３、血漿製剤を不活化容器に入れる前に、該血漿製剤を
   所望の湿潤度になるまで水蒸気で湿潤化し、有機化合物
   を不活化容器の気相に導入して所望の濃度に調節し、次
   いで該血漿製剤を含有した不活化容器を密閉し、不活化
   温度に調節し、ウィルスの不活化に必要な時間加熱する
   ことを特徴とする請求項１に記載の方法。 ４、血漿製剤の湿潤化を減圧下に水蒸気を用いて行う請
   求項３に記載の方法。 ５、熱処理を温度５０〜８０℃で行う請求項１に記載の
   方法。 ６、有機化合物を導入する前に、不活性ガスで置換する
   ことによって容器内雰囲気を酸素不含状態にする工程を
   さらに包含する請求項１に記載の方法。 ７、不活性ガスが乾燥窒素である請求項６に記載の方法
   。