JPH01152366A - 免疫学的診断用試薬 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） この発明は免疫学的診断用試薬に係るものであって、感
作用の担体として色彩を有するものを用いた試薬に関す
る。

（従来技術及び問題点） 抗原抗体反応を利用する免疫学的検査において被検体液
中に含まれる抗原又は抗体にそれらに対応する抗体また
は抗原を適当な大きさの粒子担体に物理吸着または化学
結合させたものを作用させ、抗原抗体反応によってこの
粒子を凝集させ、凝集像の有無の肉眼的観察により、そ
の凝集の程度を測定するこの方法は間接受身凝集反応と
よばれている。この反応は被検液中の抗体や抗原を簡便
かつ高感度に検出できるので免疫学的診断に広く採用さ
れている。

上記の凝集反応において担体粒子としては動物赤血球細
菌菌体、炭末、カオリン、ベントナイト又はポリスチレ
ンラテックス等積々のものが公知で、これら担体を使用
した種々の免疫学的診断用試薬が既に知られる。

（問　題　点） 特にポリスチレンラテックスは現体の免疫学的診断用担
体の主流ともいえるものであるが本質的には白色であり
、反応像の判定には熟練を要する。

また２種以上の抗原又は抗体を別々のポリスチレンラテ
ックスに吸着させて、これらを混合して同時に２種以上
の免疫学的診断を同時に同一の反応をスライドガラス上
で行ったとしても、抗原又は抗体別に色彩を識別できな
いので、何れの反応が起こったのか判別できず、混合試
薬とすることはできない。

また前記のポリスチレンラテックスに着色したものも、
一部に市販されているが、淡色であり反応像が判定し難
いことには変わりなく、しかも高価である。

（解決しようとする問題点） この発明は前記事情に鑑みて、担体自身の色彩が鮮明で
、それ自身免疫学的に不活性であり、しかも免疫学的反
応において非特異的凝集反応を起こさないこと、保存中
に自己凝集を起こさないこと、退色しないこと、及び特
異的凝集反応の精度が従来品と損色のない試薬とするこ
とであり、か＼る試薬を市場に提供することを目的とす
る。

（問題点を解決するための手段） この発明は白色と明瞭に識別しうる色彩を有する有機顔
料を担体とし、この担体に抗体又は抗原が吸着させてあ
る事を特徴とする免疫学的診断用試薬とすることによっ
て問題点を解決した。

（担　体） この発明に用いる担体としては有機顔料の微細粉末であ
り、例えば以下に示すものがあるがこれらに限定される
わ↓ｔｔ’はない。

黄色有機顔料してはカラーインデックス（Ｃ０Ｉ）１１
７１０．１１６６０．１１６７０，１１６８０．１１７
３０．１１７３５．１１７４０．１２７１０．１２７２
０．２１０９０．２１０９５．２１１００．２００４０
．２１２２０、などが拳げられる。

また、赤色有機顔料としては、カラーインデックス（Ｃ
，Ｉ）１２１２０．１２０７０．１２０８５．１２０９
０．１２３１５．１２３１０．１２３３５．１２４４０
．２１１２０．１５６３０．１５５８５．１５５００．
１５８００．１５８２５、１５８６５、１５８５０．１
６１０５．１２１７０、１２３５０、１２３８５、１４
８３０．１５８８０．１５８２６などが拳げられる。

次に、青色有機顔料としては、カラーインデックス（Ｃ
，Ｉ）７４１００．７４１６０．６９８ｏＯなどが、ま
た緑色有機顔料としてはカラーインデラックス７４２６
０．７４２６５などが拳げられる。

（試薬の製造方法） この発明の試薬の製造方法は上記の有機顔料のうち任意
のものを選び、適当量を０．０１乃至１゜０重量％、好
ましくは０．１乃至０．３重量％の界面活性剤を含有す
る緩衝液に投入し、２５乃至３５ＫＨ２の超音波を加え
て、前記緩衝液中の有機顔料を機械的に粒径０．００５
乃至３．０μｍの粒子に破砕する。

このとき使用する界面活性剤としては非イオン性、陰イ
オン性、陽イオン性、両性イオン性の制限はないが、好
ましくは非イオン性界面活性剤を用いる。

次に破砕した有機顔料粒子を含む緩衝液を遠心分離操作
により有機顔料濃度０．５乃至２．０重量％、粒径０．
０５乃至３．０μｍの有機顔料懸濁液を得る。

前述の界面活性剤の種類、濃度及び超音波の出力及び時
間並びに遠心力分離の条件を変えることによって、有機
顔料の粒径及びｌＩ！濁液の温度を適宜選定することが
できる。

次に抗体又は抗原として代表的なものを例示すればヒト
ガンマグロブリン、変性ヒトガンマグロブリン、ウサギ
ガンマグロブリン、変性ウサギガンマグロブリン、ヒト
アルブミン、ストレプトリジン０、抗Ｃ−反応性蛋白抗
体、抗アルファフェストプロテイン抗体、抗ＣＥＡ抗体
、抗ヒト絨毛性ゴナドトロピン抗体、抗ＨＢＳ抗体、梅
毒トレポネーマ抗原、トキソプラズマ抗原、マイコプラ
ズマ抗原、抗ＤＮＡ抗体などの公知の抗原および／また
は抗体が拳げられるが上記の例示したものに限定される
ものではない。

前述の有機顔料懸濁液に上記の例示した抗原又は抗体の
一種を例えば有機顔料１■当り２００μｇとその他添加
剤例えば３００μｇの牛血清アルブミンと共に混合し、
３６℃乃至５６℃に加熱して攪拌して前記抗原又は抗体
を有機顔料粒子に吸着させ、その後公知の方法同様に、
安定剤、防腐剤を添加し、吸着抗原又は抗体の濃度を最
適値に調整して試薬を得る。

２種以上（現実には２種）の抗原又は抗体を吸着させた
単一の試薬を製造するには、上記の方法において、色彩
が明瞭に識別し得る２種類以上の有機顔料を選定し、他
方異なる抗原又は抗体を同数選定し、各有機顔料に対し
、一種の抗原又は抗体のみを吸着させた後これらを混合
して単一の試薬とする。

（使用方法） このようにして製造された試薬は通常の抗原抗体反応と
同様の術式によって被検液と反応させて、その凝集像の
有無乃至程度によって判定する。

また凝集像自体は色彩が異なる以外は全く同様である。

（効　果） 叙上のように構成している有機顔料よりなる担体は非球
形で、平坦面を有する多面体であるため、表面積が球形
のものよりは広く、多数の抗原又は抗体が吸着させるこ
とができ、従って抗原抗体反応において凝集する場合も
凝集力が強くなって大きな凝集塊が形成され、未凝集の
担体とはその大きさにおいて格段の差を有し、凝集、未
凝集の判定が容易となる。

また有機顔料は比重が１．４から２．３であるが緩衝液
中では若干の界面活性剤を添加させることによって、容
易に分散させることができ、抗原又は抗体を吸着後の試
薬においても、長時間保存すれば沈殿することがあって
も反応試験前に軽く振動を与えて攪拌することによって
容易に懸濁状態にすることができ、反応試験中に自然凝
集や、沈殿をおこすことはない。

また、特異的反応は他のポリスチレンラテックを担体と
して用いたものと損色なく、むしろ凝集像が鮮明である
ために判定時の読み（判定）間違いが起こるおそれがな
い。

また２種以上の試薬が混合されている場合においても、
そのうちの一種のものに凝集像が起これば、その色彩が
中央部に鮮明に表出し、未凝集の担体の色彩はその周辺
に位置し、何れの担体の抗原又は抗体が反応したが直ち
に識別できる。

また双方の担体の抗原又は抗体が共に反応したときは凝
集像は混合色となるため、これもその色彩によって、凝
集の有無が判定でき、一つの試薬で数種の反応が単一の
操作によって行うことができる。

（実施例） 次にこの発明の実施例について説明する。

実施例１ （１）担体粒子の調整 橙赤色顔料レーキラドＣ（Ｃ，Ｉ、１５５８５）に、０
．１重量％のポリオキシ　エチレン　ジニル　フェノー
ル　エーテル（ノニオンＮＳ−２０６、日本油脂（株）
登録商標）を含むグリシン緩衝液（ｐＨ８，２）を加え
２９　ＫＨｚの音波を用いて機械的にその顔料粒子を破
砕分散し、さらに遠心分離により、粒径０．２〜０．３
μｍ、粒子濃度０．６重量％になるように調整した顔料
粒子懸濁液を得た。

（２）リウマチ因子検出用試薬の調整 上記（１）で得た顔料粒子懸濁液における顔料粒子１■
当り２００μｇのヒトガンマグロブリン及び３００μｇ
の牛血清アルブミンを混合し、５６℃で１時間加熱した
。

加熱後、この懸濁液にポリオキシ　エチレンオクチル　
フェニル　エーテル（トリトンメ−１００）、塩化コリ
ン、シーｉＮを加え、最終的に顔料粒子０．３２重量％
、トリトンメ−１０００゜０８４重量％、塩化コリン８
．４重量％、ショ糖８．４重量％さらに防腐剤としてア
ジ化ナトリウム０．１重量％がそれぞれ含有されている
リウマチ因子検出用試薬を得た。

（３）抗原−抗体反応 上記（２）で得られた試薬５０μＱと血清検体５０μＱ
とを凝集判定用スライドグラス上で混合し、１分後の凝
集像を肉眼で観察した。また従来のポリエチレンラテッ
クス試薬を用いて同様の反応を行い本発明で得られた試
薬と反応を比較した。

判定規準 強陽性（廿）：はっきりした大きな凝集塊が見られるか
、試薬の色がなく なり凝集塊の凝集塊の背景が 透明になるもの。

弱陽性（＋）：ｉｌｌ集していることが認められるか、
部分的に塊の認められ るもの。

疑陽性（±）：陰性に比べて粒子が粗いか明かには凝集
塊が認められない もの。

陰　性（−）：試薬が一様に分散し、凝集塊が全く認め
られないもの。

第１表（その１） 血清番号　１　２　３　４　５　６　７　８　９　１０
本件試薬　十廿−士−−一±−− 対照試薬　＋廿−±−−−±−− 仝　（その２） 血清番号　１１１２１３１４１５１６１７１８１９　２
０本件試薬　−一一士士士廿＋十　廿 対照試薬　−一一士士士廿＋十　甘 木発明による試薬はポリスチレンラテックス試薬と同等
の検出感度を有していた。

実施例２ （１）担体粒子の調整 赤色顔料パーマネント　レッド２Ｂ　（Ｃ，Ｉ。

１５８６５）を実施例１と同様の方法で調整し、粒径０
．２〜０．３μｍ、粒子濃度０．７重量％の顔料粒子懸
濁液を得た。

（２）リウマチ因子検出用試薬の調整 上記（１）で得た顔料粒子懸濁液における顔料粒子１■
当り２００μｇのヒトガンマグロブリン及び７０μｇの
牛血清アルブミンを混合し、５６℃で１時間加熱した。

加熱後この懸濁液にポリオキシ　エチレン　オクチル　
フェニル　エーテル（トリトンメ−１００）塩化コリン
、ショ糖を加え、最終的に顔料粒子０．３２重量％、ト
リトンメ−１００，０，０８４重量％、塩化コリン８．
４重量％、ショＮ８゜４重量％、更に防腐剤としてアジ
化ナトリウム０゜１重量％がそれぞれ含有されているリ
ウマチ因子検出用試薬を得た。

（３）抗原−抗体反応 上記（２）で得られた試薬５０μＱと血清検体５０μＱ
とを凝集判定用スライドグラス上で混合し１５分後の凝
集像を肉眼でＲ察した。また従来のポリエチレンラテッ
クス試薬を用いて同様の反応を行い本発明で得られた試
薬と反応を比較した。

第２表（その１） 血清番号　１２３４５６７８９１０ 本件試薬　＋廿−±−−−±−一 対照試薬　＋廿−±−−−士一一 仝　（その２） 血清番号　１１１２１３１４１５１６１７１８１９２０
本件試薬　−一一士士士廿＋十廿 対照試薬　−一一士士士廿＋十廿 実施例３ （１）担体粒子の調整 深紅色顔料ブリリアントカーミン６Ｂ　（Ｃ，Ｉ。

１５８５０）を、実施例１と同様の方法で調整し、粒径
０．２〜０．３μｍ粒子濃度０．６７重量％の原料粒子
懸濁液を得た。

（２）リウマチ因子検出用試薬の調整 上記（１）の顔料粒子懸濁液を用いて実施例１と同様の
方法で調整した。

（３）抗原−抗体反応 実施例１と同様の方法で反応を行った。

第３表（その１） 血清番号　１　２　３　４　５　６　７　８　９　１０
本件試薬　＋廿−±−−−±−− 対照試薬　十廿−±−一一±−− 仝　（その２） 血清番号　１１１２１３１４１５１６１７１８１９　２
０本件試薬　−一一士士士廿＋十　廿 対照試薬　−一一士士士廿＋十　廿 実施例４ （１）担体粒子の調整 青色顔料フタロシアニンブルー（ｃ、ｒ、７４１６０）
に、０．３重量％のポリオキシ　エチレン　ノニル　フ
ェノール　エーテル（ノニオンＮＳ−２０６、日本油脂
（株）登録商標）を含むグリシン緩衝液（ｐＨ８，２）
を加え２９ＫＨｚの音波を用いて機械的にその顔料粒子
を破砕分散し、さらに遠心分離により、粒径０．２〜０
．３μｍ。

粒子濃度２．０重量％になるように調整した顔料粒子懸
濁液を得た。

（２）リウマチ因子検出用試薬の調整 上記（１）で得た顔料粒子懸濁液における顔料粒子１■
当り２５０μｇのヒトガンマグロブリンを加え５６℃で
１時間加熱した。加熱後この懸濁液に牛血清アルブミン
、塩化コリンを加え、最終的に顔料粒子０．５重量％牛
血清アルブミン０゜３重量％、塩化コリン１３．０重量
％さらに防腐剤としてアジ化ナトリウム０．１重量％が
それぞれ含有されているリウマチ因子検出用試薬を得た
。

（３）抗原−抗体反応 実施例１と同様の方法で反応を行った。

第４表（そのｌ） 血清番号　１　２　３　４　５　６　７　８　９　１０
本件試薬　＋廿−±−−−±−− 対照試薬　＋廿−±−−−±−− 仝　（その２） 血清番号　１１１２１３１４１５１６１７１８１９　２
０本件試薬　−一一士士士廿十十　廿 対照試薬　−一一士士士廿十十　廿 実施例５ （１）担体粒子の調整 緑色顔料フタロシアニングリーン（Ｃ，Ｉ、７４２６０
）を実施例１と同様の方法で調整し１粒径０．２〜０．
３μｍ１粒子濃度２．０％の顔料粒子懸濁液を得た。

（２）リウマチ因子検出用試薬の調整 上記（１）の顔料粒子懸濁液を用いて、実施例４と同様
の方法で調整した。

（３）抗原−抗体反応 実施例１と同様の方法で反応を行った。

第５表（その１） 血清番号　１　２　３　４　５　６　７　８　９　１０
本件試薬　＋廿−±−−−±−− 対照試薬　＋廿−±−−−±−− 仝　（その２） 血清番号　１１１２１３１４１５１６１７１８１９　２
０本件試薬　−一一士士士廿十十　廿 対照試薬　−一　−士士士廿十十　廿 実施例６ （１）担体粒子の調整 橙赤色顔料レーキラドＣ（Ｃ，Ｉ、１５５８５）に、０
．３重量％のポリオキシ　エチレン　ノニル　フェノー
ル　エーテル（ノニオンＮＳ−２０６、日本油脂（株）
登録商標）を含むグリシン食塩緩衝液（ｐＨ８，２）を
加え２９　Ｋ　Ｈｚの音波を用いて機械的にその顔料粒
子を破砕分散し、さらに遠心分離により、粒径０．２〜
０．３μｍ、粒子濃度２．０重量％になるように調整し
た顔料粒子懸濁液を得た。

（２）Ｃ反応性蛋白検出用試薬の調整 上記（１）で得た顔料粒子懸濁液における顔料粒子１■
当り１００μｇのヒツジ産抗ヒトＣＲＰ抗血清を感作し
、３６℃で１時間加熱した。

加熱後この懸濁液にショ糖、牛血清アルブミンを加え、
最終的に顔料粒子０．６７重量％、ショ９３．３重量％
、牛血清アルブミン０．１７重量％、更に防腐剤として
アジ化ナトリウム０．１重量％がそれぞれ含有されてい
るＣ反応性蛋白検出用試薬を得た。

（３）感度判定 上記（２）で得られた診断試薬５０μｇとＣ反応性蛋白
陽性血清をグリシン食塩緩衝液で稀釈した検体５０μ０
とを凝集判定用スライドグラス上で混合し、１分後の凝
集像を肉眼で観察した。また従来のポリスチレンラテッ
クス試薬を用いて同様の反応を行い、未発明で得られた
試薬と反応を比較した。

判定規準 強陽性（廿）　：はっきりした大きな凝集塊が見られる
か、試薬の色がなく なり凝集塊の凝集塊の背景が 透明になるもの。

東隣性（＋）：凝集していることが認められるか１部分
的に塊の認められ るもの。

縦隔性（±）：陰性に比べて粒子が粗いか明かには凝集
塊が認められない もの。

・　陰　性（−）：試薬が一様に分散し、凝集塊が全く
認められないもの。

第６表 稀釈倍数　原血清Ｘ２　Ｘ３　Ｘ４　Ｘ８　Ｘ１６　Ｘ
３２本件試薬　　廿　　廿　＋　±　−−−対照試薬　
　廿　　廿　＋　±　−−−本発明による試薬はポリス
チレンラテックス試薬と同等の検出感度を有していた。

実施例７ （１）担体粒子の調整 赤色顔料パーマネントレッド（Ｃ，Ｉ、１５８６５）を
実施例６と同様の方法で調整し、粒径０゜２〜０．３μ
ｍ１粒子濃度２ｏ重量％の顔料粒子懸濁液を得た。

（２）Ｃ反応性蛋白検出用試薬の調整 上記（１）で得られた顔料粒子懸濁液を用いて実施例６
と同様の方法で調整した。

（３）感度判定 上記（２）で得られた試薬について実施例６と同様の方
法で反応を行った。

第７表 稀釈倍数　原血清Ｘ２　Ｘ３　Ｘ４　Ｘ８　Ｘ１６　Ｘ
３２本件試薬　　廿　　廿　＋　±　−−−対照試薬　
　廿　　廿　＋　±　−−一実施例８ （１）担体粒子の調整 深紅色顔料ブリリアントカーミン（Ｃ，１１５８５０）
を実施例６と同様の方法で調整し１粒径０．２〜０．３
μｍ、粒子濃度２０重量％の顔料粒子懸濁液を得た。

（２）Ｃ反応性蛋白検出用試薬の調整 上記（１）で得られた顔料粒子懸濁液を用いて実施例６
と同様の方法で調整した。

（３）感度判定 上記（２）で得られた試薬について実施例６と同様の方
法で反応を行った。

第８表 稀釈倍数　原血清Ｘ２　Ｘ３　Ｘ４　Ｘ８　Ｘ１６　Ｘ
３２本件試薬　　廿　　廿　＋　±　−−−対照試薬　
　廿　　廿　＋　±　−−一実施例９ （１）担体粒子の調整 青色顔料フタロシアニンブルー（Ｃ，Ｉ、７４１６０）
を実施例６と同様の方法で調整し、粒径０．２〜０．３
μｍ１粒子濃度２．０重量％の顔料粒子懸濁液を得た。

（２）Ｃ反応性蛋白検出用試薬の調整 上記（１）で得られた顔料粒子懸濁液を用いて実施例６
と同様の方法で調整した。

（３）感度判定 上記（２）で得られた試薬について実施例６と同様の方
法で反応を行った。

第９表 稀釈倍数　原血清Ｘ２　Ｘ３　Ｘ４　Ｘ８　Ｘ１６　Ｘ
３２本件試薬　　廿　　廿　＋　±　＋　−−対照試薬
　　廿　　廿　＋　±　＋　−一実施例１０ （１）担体粒子の調整 緑色顔料フタロシアニンブルー（Ｃ，Ｉ、７４２６０）
を実施例６と同様の方法で調整し１粒径０．２〜０．３
μｍ、粒子濃度２０重量％の顔料粒子懸濁液を得た。

（２）Ｃ反応性蛋白検出用試薬の調整 上記（１）で得られた顔料粒子懸濁液を用いて実施例６
と同様の方法で調整した。

（３）感度判定 上記（２）で得られた試薬について実施例６と同様の方
法で反応を行った。

第１０表 稀釈倍数　原血清Ｘ２　Ｘ３　Ｘ４　Ｘ８　Ｘ１６　Ｘ
３２本件試薬　　廿　　廿　＋　±　−−−対照試薬　
　廿　　廿　＋　±　−−一実施例１１ （１）担体粒子の調整 橙赤色顔料レーキラドＣ（Ｃ，１１５５８５）に、０．
１重量％のポリオキシ　エチレン　ノニル　フェノール
　エーテル（ノニオンＮＳ−２０６、日本油脂（株）登
録商標）を含むグリシン緩衝液（ｐＨ８，２）を加え２
９　ＫＨｚの音波を用いて機械的にその顔料粒子を破砕
分散し、さらに遠心分離により、粒径０．２〜０．３μ
ｍ、粒子濃度０．６重量％になるように調整した顔料粒
子懸濁液を得た。

（２）ウサギＩｇＧ感作試薬の調整 上記（１）で得た顔料粒子懸濁液における顔料粒子１■
当り２５０μｇのウサギＩｇＨを感作し５６℃で１時間
加熱した。

加熱後、この懸濁液に塩化コリン、牛血清アルブミンを
加え最終的に顔料粒子０．３２重量％、塩化コリン８，
４重量、牛血清アルブミン０．２重量％、さらに防腐剤
としてアジ化ナトリウム０゜１重量％がそれぞれ含有さ
れているウサギＩｇＧ感作試薬を得た。

（３）感度判定 上記（２）で得られた試薬５０μＱとリウマチ因子陽性
血清をグリシン緩衝液で稀釈した検体５０μｍとを凝集
判定用スライドグラス上で混合し、１分後の凝集像を肉
眼で観察した。また従来のポリスチレンラテックス試薬
を用いて同様の反応を行い本発明で得られた試薬と反応
を比較した。

判定規準 強陽性（廿）：はっきりした大きな凝集塊が見られるか
、試薬の色がなく なり凝集塊の凝集塊の背景が 透明になるもの。

東隣性（＋）：ｉｇ集していることが認められるか１部
分的に塊の認められ るもの。

縦隔性（±）：陰性に比べて粒子が粗いか明かには凝集
塊が認められない もの。

陰　性（−）：試薬が一様に分散し、凝集塊が全く認め
られないもの。

第１１表 稀釈倍数　原血清Ｘ２　Ｘ４　Ｘ８　Ｘ１６　Ｘ３２　
Ｘ６４本件試薬　　廿　　廿　＋　十　±　−−対照試
薬　　廿　　廿　＋　十　±　−−本発明による試薬は
、ポリスチレンラテックス試薬と同等の検出感度を有し
ていた。

実施例１２ （１）担体粒子の調整 赤色顔料パーマネントレッド（Ｃ，Ｉ、１５８６５）を
実施例１１と同様の方法で調整し粒径０゜２〜０．３μ
ｍ１粒子濃度０．６％の顔料懸濁液を得た。

（２）ウサギＩｇＧ感作試薬の調整 上記（１）で得られた顔料粒子懸濁液を用いて実施例１
１と同様の方法で調整した。

（３）感度判定 上記（２）で得られた試薬について実施例１１と同様の
方法で反応を行った。

第１２表 稀釈倍数　原血清Ｘ２　Ｘ４　Ｘ８　Ｘ１６　Ｘ３２　
Ｘ６４本件試薬　　廿　　廿　＋　十　±　−−対照試
薬　　廿　　廿　＋　十　±　−一実施例１３ （１）担体粒子の調整 深紅色顔料ブリリアントカーミン（Ｃ，Ｉ、１５８５０
）を実施例１１と同様の方法で調整し粒径０．２〜０．
３μｍ、粒子濃度０．６％の顔料粒子懸濁液を得た。

（２）ウサギＩｇＧ感作試薬の調整 上記（１）で得られた顔料粒子懸濁液を用いて実施例１
１と同様の方法で調整した。

（３）感度判定 上記（２）で得られた試薬について実施例１１と同様の
方法で反応を行った。

第１３表 稀釈倍数　原血清Ｘ２　Ｘ４　Ｘ８　Ｘ１６　Ｘ３２　
Ｘ６４本件試薬　　廿　　廿　＋　十　±　　−−対照
試薬　　廿　　廿　＋　十　±　−一実施例１４ （１）担体粒子の調整 青色顔料フタロシアニンブルー（Ｃ，Ｉ、７４１６ｏ）
に、０．３重量％のポリオキシエチレンフェノール　エ
ーテルを含むグリシン緩衝液ｐＨ８，２）を加え、２９
ＫＨｚの音波を用いて機械的にその顔料粒子を破砕分散
し、更に遠心分前により粒径０．２〜０．３μｍ、粒子
濃度２．０重量％になるように調整した顔料粒子懸濁液
を得た。

（２）ウサギＩｇＧ感作試薬の調整 上記（１）で得られた顔料粒子懸濁液における顔料粒子
１■当り２５０μΩのウサギＩｇＧを感作し、５６℃で
１時間加熱した。

加熱後この懸濁液に塩化コリン、牛血清アルブミンを加
え、最終的に顔料粒子０．５重量％、塩化コリン１３．
０重量％、牛血清アルブミン０゜３重量％更に防腐剤と
してアジ化ナトリウム０゜１重量％がそれぞれ含有され
ているウサギＩｇＧ感作試薬を得た。

（３）感度判定 上記（２）で得られた試薬について実施例１１と同様の
方法で反応を行った。

第１４表 稀釈倍数　原血清Ｘ２　Ｘ４　Ｘ８　Ｘ１６　Ｘ３２　
Ｘ６４本件試薬　　廿　　廿　＋　十　±　−−対照試
薬　　廿　　廿　＋　十　　±　−一実施例１５ （１）担体粒子の調整 緑色顔料フタロシアニングリーン（Ｃ，ｌ７４２６０）
を実施例１１と同様の方法で調整し粒径０．２〜０．３
μｍ、粒子濃度２０重量％の顔料粒子懸濁液を得た。

（２）ウサギＩｇＧ感作試薬の調整 上記（１）で得られた顔料粒子懸濁液を用いて実施例１
１と同様の方法で調整した。

（３）感度判定 上記（２）で得られた試薬について実施例１１と同様の
方法で反応を行った。

第１５表 稀釈倍数　原血清Ｘ２　Ｘ４　Ｘ８　Ｘ１６　Ｘ３２　
Ｘ６４本件試薬　　廿　　廿　＋　十　±　　−−対照
試薬　　廿　　廿　＋　十　±　　−−本発明による試
薬はいずれもポリスチレンラテックス試薬と同等の検出
感度を有していた。

実施例１６ 混合試薬の調整 （１）緑色顔料フタロシアニングリーンを実施例５と同
様の方法で処理し、その粒子１■当り２５０μｇのヒト
ガンマグロブリンを感作し、５６℃で１時間加熱して、
懸濁液Ａを得た。

深紅色顔料ブリリアントカーミンを実施例８と同様の方
法で処理し、その粒子１■当り１００μｇのヒツジ産ヒ
トＣＲＰ抗血清を感作し、３６℃で１時間加熱して、懸
濁液Ｂを得た。

青色顔料フタロシアニンブルーを実施例４と同様の方法
で処理し、その粒子１■当り２５０μｇのヒツジ産抗ヒ
トＣＲＰ抗血清を感作し、３６℃で１時間加熱して懸濁
液Ｃを得た。

赤色顔料パーマネントレッドを実施例７と同様の方法で
処理しその粒子１■当り１００μｇのヒツジ産抗ヒトＣ
ＲＰ抗血清を感作し、３６℃で１時間加熱して懸濁液り
を得た。

（２）懸濁液ＡとＢを顔料重量比で１＝１に混合し、更
にショ糖及び牛血清アルブミンを加え最終的に緑色顔料
０．２５重量％、深紅色顔料０．２５％、ショＷ３．Ｏ
％、牛血清アルブミン０．２重量％、更に防腐剤として
アジ化ナトリウム０゜１重量％が含有されているリウマ
チ因子、及びＣ反応性蛋白の２種類を同時に検出する試
薬Ｅを得た。（３）　ｌ！！濁液ＣとＤを上記（２）と
同様に調整し、試薬Ｆを得た。

（４）懸濁液ＡとＤを上記（２）と同様に調整し、試薬
Ｇを得た。

（５）＠濁液ＣとＢを上記（２）と同様に調整し、試薬
Ｈを得た。

第１６表 試薬　リウマチ因子検出子ＣＲＰ検出 Ｅ　　　　Ａ（緑色）　十Ｂ（深紅色）Ｆ　　　　Ｃ（
青色）　＋Ｄ（赤色） ＯＡ（緑色）　＋Ｄ（赤色） ＨＣ（青色）　十Ｂ（深紅色） （６）抗原−抗体反応 上記（２）〜（５）で得られた試薬５０μ悲と、血清検
体５０μΩとを凝集判定用スライドグラス上で混合し３
分後の凝集像を肉眼でｉｌｌ察した。

判定規準 リウマチ因子、ＣＲＰ共に陰性： 試薬Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈそれぞれ凝 集塊が全く認められないもの リウマチ因子陽性、ＣＲＰ陰性： 試薬Ｅ、凝集録色、背景深紅色 試薬Ｆ、ｉ集青色、背景赤色 試薬Ｇ、ｉｉ集録色、背景赤色 試薬Ｈ，凝集青色、背景深紅色 リウマチ因子、ＣＲＰ共に陽性： 試薬Ｅ、緑色、深紅色共に凝集 試薬Ｆ、青色、赤色共に凝集 試薬Ｇ、緑色、赤色共に凝集 試薬Ｈ１青色、深紅色共に凝集 リウマチ因子陰性、ＣＲＰ陽性： 試薬Ｅ、凝集深紅色、背景緑色 試薬Ｆ、凝集赤色、背景青色 試薬Ｇ、凝集赤色、背景緑色 試薬Ｈ，凝集深紅色、背景青色 （７）反応結果 第１７表（そのｌ） 試薬　　ＲＦ（−）ＣＲＰ（−）ｔｉｌｌ　　　ＲＦ（
＋）ＣＲＰ（−）ＩｌｌｉＥ　　　凝集せず　　　　緑
色凝集 Ｆ　　　凝集せず　　　　青色凝集 Ｇ　　　凝集せず　　　　緑色凝集 Ｆ　　　凝集せず　　　　青色凝集 第１７表（その２） 試薬　　ＲＦ（＋）ｃＲｐ（＋）＊１　　　ｎｒ（−）
ｃＲｐ（＋）ｕＥ　　緑色深紅色凝集　　深紅色凝集 Ｆ　　青色赤色凝集　　　赤色凝集 Ｇ　　緑色赤色凝集　　　赤色凝集 Ｆ　　青色深紅色凝集　　深紅色凝集 具なる色の顔料にそれぞれ異なる抗原又は抗体を感作し
た試薬を二種以上混合して使用することにより、−回の
試験で二種以上の抗原又は抗体を同時に検出することが
できる。本発明の試薬は血清検査において緊急、又は多
人数のスクリーニング試験が必要な場合極めて有効であ
る。

保存試験 実施例１から５で調整した試薬を６°で１２ケ月保存後
、血清検体を用いて凝集反応試験を行い。

ポリスチレンラテックス試薬の反応と比較した６また退
色の有無、分散性を検討した。

第１８表 実施例　退色　分散性　１２３４５ １　　無し　良好　−−−−廿 ２　　　〃　　　　〃　　　　廿　　−−−廿３　　　
〃　　　　〃　　　　廿　　−−−廿４　　　〃　　　
　　　　　　廿　　−−−廿５　　　〃　　　　〃　　
　　廿　　−−−廿ｌリスチレンラテックス試薬　廿　
−−−廿実施例６から１５で調整した試薬を６°で６ケ
月間保存後それぞれの血清検体を用いて凝集反応試験を
行い、ポリスチレンラテックス試薬の反応と比較した。

また退色の有無分散性を検討した。

第１９表 実施例退色分散性　［ｔｈｌ　　Ｘ２　Ｘ３　Ｘ４　Ｘ
８　Ｘ１６６　　無し　良好　廿　廿＋±−− ７ｎ　　　　　ｎ　　　　　廿　　廿　＋　±　−−８
〃　　　　　　　　　廿　　廿　＋　±　−−９ｌｉ　
　　　　　　　　廿　　廿　＋　±　−−１Ｑ　　　　
ｒ＋　　　　　ＩＩ　　　　　廿　　廿　＋　±　−−
ポリエチレンラテックス試薬　廿　　廿　＋　±　−−
第２０表 実施例　退色　分散性　Ｉｔｈ滑　Ｘ２　Ｘ４　Ｘ８　
Ｘ１６６　　無し　良好　廿　廿＋十　± ７　　　〃　　　　　　　　　廿　　廿　＋　十　　±
８　　１１　　　　〃　　　　廿　　廿　＋　十　　±
９　　　　　ＩＩ　　　　　７１　　　　　廿　　廿　
＋　十　　±１０　　　〃　　　　　　　　　廿　　廿
　＋　十　　±ポリスチレンラテックス試薬　廿　　廿
　＋　十　　±第１８表から第２０表より、本発明の試
薬は、経時的に変化することなく、特異適に凝集反応を
示し、ポリスチレンラテックス試薬に比べても損色のな
いことが確認された。

手続補正書（白側 昭和６３年２月２日

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）白色と明瞭に識別しうる色彩を有する有機顔料を担
   体とし、この担体に、抗体又は抗原が吸着させてある事
   を特徴とする免疫学的診断用試薬。 ２）前記有機顔料よりなる担体の大きさは０．０５乃至
   ２．０μｍであることを特徴とする特許請求の範囲第１
   項記載の免疫学的診断用試薬。 ３）色彩が相互に識別可能な数種の前記担体の各一種に
   他の担体とは異なる抗体又は抗原が一種それぞれ吸着し
   てあって、これら吸着担体が混合して単一の試薬として
   あることを特徴とする特許請求の範囲第１項記載の免疫
   学的診断用試薬。