JPH01143955A - 生物学的液体中の抗ｄｎａ抗体価の測定法および測定用キット - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は生物学的液体試料中の抗ＤＮＡ抗体価を測定す
る方法および測定用キットに関するものである。

〔従来の技術および問題点〕

周知のように全身性紅斑性狼１（ＳＬＥ。

Ｓ　ｙｓｔｅｍｉｃ　Ｌ　ｕｐｕｓ　Ｅ　ｒｙｔｈｅｍ
ａｔｏｓｕｓ）の診断には、ＤＮＡに対する自己抗体の
検査がよく行なわれている。抗原となるＤＮＡには一本
鎖と二本鎖があり、その各々に対する抗体の検査がある
。検査方法としては、ラジオイムノアッセイ法（Ｒ１Ａ
法）、エンザイムイムノアッセイ法（ＥＩＡ法）、受身
赤血球凝集法（ＰＨＡ法）等があるが、これらの測定法
は、全ていわゆる絶対的測定法でないため、常に標準物
質を患者検体と同時に測定する必要がある。ところが、
ＤＮＡに対する抗体（砦に２本鎖Ｄ　Ｎ　Ａに対する抗
体）は、ＳＬＥ患者のみに見られるものであって、通常
の方法では他の動物より得ることはできなかった。この
ため、従来の抗ＤＮＡ抗体測定用キットは、重篤なＳＬ
Ｅ患者より供与された血清を標準物質としており、倫理
的にも、安定供給の面からも問題があった。特に本邦に
おいては、このような血清はほんど入手不可能であり、
全て輸入にたよっている。また、ＳＬＥ患者より得られ
る血清は、抗体価、抗原ＤＮＡへの親和性、反応速度な
ど種々の性質が患者により異っている。従って、キット
の標準物質はロフト間のバラツキが太き（なり、測定上
大きな問題となっている。

この問題を解決するためにヒストン等の他のＤＮＡ結合
性タンパクを標準物質とする特許（特願昭６２−１９９
７０号）も提出されているが、これらの物質は本質的に
抗ＤＮＡ抗体と異るものであり、実用化されるに至って
いない。

このように、従来の抗ＤＮＡ抗体価測定用キットは、標
準物質の安定供給、ロフト聞誤差、等における大きな問
題点を有していた。

〔問題点を解決するための手段〕

上記従来の問題に対し、本願発明者らは鋭意研究を重ね
たところ、次のような知見を得るに至った。

近年、細胞融合法によるモノクローナル抗体作製法が確
立して以来、極めて多種類のモノクローナル抗体が生産
され利用されるに至っている。ＤＮＡに対するモノクロ
ーナル抗体は、マウス、ヒト由来のものがいくつか作ら
れているが、−本積ＤＮＡに対するものが多（，２本鎖
ＤＮＡに特異性を持つものは少ない。本発明では２本鎖
ＤＮＡに対して結合能を有するモノクローナルを生産す
るマウス由来ハイブリドーマを取得し、モノクローナル
抗体を作製した。このモノクローナル抗体の抗ＤＮＡ抗
体価測定系への応用を試みた。

”’ｌ−ＤＮＡ　　を用いるラジオイムノアッセイ法の
場合、抗体と結合したトレーサーと結合していない遊離
トレーサーを分離するために５０％飽和硫安塩析法を用
いる事が一般に行なわれている。

この方法ではマウスモノクローナル抗ＤＮＡ抗体は、Ｓ
ＬＥ患者の血液中の抗体と全く同様に５０％飽和硫安で
塩析するため、標準物質として利用する事ができる。

ＤＮＡを固相化したＥＩＡやＲＩＡの場合は、固相ＤＮ
Ａに対して結合した抗ＤＮＡ抗体に対する第２抗体を標
識して用いる。ＤＮＡに結合する患者の抗体はヒト１ｇ
Ｇ　　またはＩｇＭ　であるから、第２抗体としては、
抗ヒトＩｇＧ抗体または抗ヒトＩｇＭ抗体が用いられる
。この場合、マウスのモノクローナル抗体を標準物質に
用いても、第２抗体が結合せず、測定系は不完全である
。しかしながら、第２抗体のかわりにＩｇＧ　に特異的
に結合するプロティンＡを標識して用いれば、本発明は
十分応用可能である。また、ヒト、マウス両種のＩｇＧ
　　に対して結合可能な特異性の広い抗１ｇＧ抗体を標
識してもよい。

ＤＮＡを赤血球、ラテックス粒子等に眼前させ、血清に
混和した場合の凝集像を観察する測定法（凝集法）にお
いても本性は利用可能である。凝集法はＩｇＧ、ＩｇＭ
　が抗原ＤＮＡへの複数の結合部位を持つ事により、粒
子の凝集塊を作らせるという原理に基づいており、マウ
スのモノクローナル抗体もヒトｓＬＥ患者の抗ＤＮＡ抗
体と同様の挙動をすると考えられる。

このようなモノクローナル抗体を使う他の利点としては
、一定の品質のものを大量に製造する事が可能な点であ
る。また、ハイプリドーマ等のモノクローナル抗体生産
株を保存しておけば、同一の性質の抗体を隋時製造する
事が可能であり、ロット間誤差の少ない標準物質を安定
的に供給する事が可能である。

次に本発明を実施例を用いて、具体的に説明する。

〔実施例１〕 抗ＤＮＡ抗体の測定系として、ニラポン・デイ−ピーシ
−・コーポレーションｔｔ１２ｒリコンビジェン抗ＤＮ
Ａキット」を用いた。この測定用キットは、現在日本国
内で製造販売されているラジオイムノアッセイキットで
あり、標準物質としてヒトＳ　Ｌ　Ｅ　患者血清を用い
ている。

抗２本積ＤＮＡモノクローナル抗体は小泡らによって取
得されたＢＷ、０２Ｈ１株により生産される物を用いた
（Ｔａｋａｏ　ＫＯＩＫＥ、　Ｒｙｕｊｉ　ＮＡＧＡＳ
ＡＹＡ。

Ｎｏｒｉｋａｚｕ　　ＮＡＧＡＴＡ　　ａｎｄ　　Ｔｏ
ｓｈｉｋａｚｕ　　５ＩｌｌＲＡＩ　　’　　５ＰＥ−
ＣＩＦＩＣＩＴＹ　　ＯＦ　　ＭＯＵＳＥ　　ＩＩＹＢ
ＲＩＤＯＭＡ　　ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ　　Ｔ。

ＤＮＡ　”　　１ｍｍｕｎｏｌｏｇｙ　　Ｌｅｔｔｅｒ
ｓ、４（１９８２）９３−９７　　Ｅｌｓｅｒ−ｖｉｃ
ｒ　Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ　Ｐｒｅｓｓ）　。このモノ
クローナル抗体は通常の方法でマウス腹水より作製した
。この腹水を０濃度血清（抗ＤＮＡ抗体を含まない血清
）で、Ｏ１５，１０，２５，５０，１００Ｕ／ｍＱとな
るように稀釈した。

これらを前肥りコンビシュン抗ＤＮＡキットの標準物質
として使用し、コントロール血清、ブール血清を測定し
た。これらの測定値と通常のキットでの測定値の比較を
表１に示す。

以下余白 〔表１〕 〔実施例２〕 実施例１で述べたモノクローナル抗体を０７ａ度血清に
て、約９０　Ｕ　／１ｌＩＱに稀釈したサンプルを、ざ
らにＯ濃度血清で、１　／２　、　ｌ　／４．１　／８
．１　／１６と稀釈し、これをリコンビジュン抗ＤＮＡ
キットで測定した。

このサンプルの稀釈曲線を第１図に示す。図に見るよう
に、稀釈曲線は原点を通る直線であり、本測定系におい
て、モノクローナル抗体がヒトＳしＥ患者直情と同様に
挙動する事が示された。

〔発明の効果〕

以上説明したように、本発明によれば、生物学的液体中
の抗ＤＮＡ抗体価の測定用キットにおいて、一定の品質
のものを大量に製造する事が可能になり、同一の性質の
抗体を陰晴製造する事が可能であり、ロフト聞誤差の少
ない標準物質を安定的に供給する事が可能であり、生物
学的液体中の抗ＤＮＡ抗体価の測定を随時、正確に行う
ことができる。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明の第２の実施例を説明するためのもので
、モノクローナル抗体サンプルの希釈曲線を示すもので
ある。 出願人　　ニラポン・デイ−ピーシ− ６コーポレーション Ｖ／ｍ　Ｉ 平易９山王書く自発） ｌ、事件の表示 昭和６２年特許願第２８２９３３号 ２、発明の名称 生物学的液体中の抗ＤＮＡ抗体価の測定法および測定用
キット ３、補正をする者 ｑ（件との関係　特許出願人 ニラポン・デイ−ビーシー・フーボレーンヨン４、代理
人 ６、補正の内容 （１）　本願発明に利用した動物細胞であるマウス由来
ハイブリドーマ（ＢＷ、０２Ｈ１）の原寄託についての
受託証（別紙）を提出いたします。 （２）　明細書の第６貫最下行にＦＢＷ、０２Ｈ１株に
よりｊとあるのをｒ　ＢＷ、０２Ｈ１株［寄託の受託番
号；機工のＦ条寄第１６２７号（ＦＥＲＭ　　ＢＰ−１
６２７）］により」と訂正する。 以上

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）抗原とするＤＮＡトレーサーと、このＤＮＡに対
   して結合し得る標準物質とを用い、免疫学的方法により
   生物学的液体中の抗ＤＮＡ抗体価を測定する測定法であ
   って、 前記標準物質としてＤＮＡに対するモノクローナル抗体
   を用いることを特徴とする生物学的液体中の抗ＤＮＡ抗
   体価の測定法。
2. （２）抗原とするＤＮＡトレーサーと、このＤＮＡに対
   して結合し得る標準物質とを有し、免疫学的方法により
   生物学的液体中の抗ＤＮＡ抗体価を測定するための測定
   用キットであって、 前記標準物質としてＤＮＡに対するモノクローナル抗体
   を用いたことを特徴とする生物学的液体中の抗ＤＮＡ抗
   体価の測定用キット。