JP7688733B2 - 蒸し生姜抽出物又はこれから分離された１－デヒドロ－６－ジンジャージオンを有効成分として含む変形性関節症の予防、改善又は治療用組成物 - Google Patents

Description

本発明は、蒸し生姜抽出物又はこれから分離された１－デヒドロ－６－ジンジャージオンを有効成分として含む変形性関節症の予防、改善、又は治療用組成物に関する。

本出願は、２０２１年６月１５日に出願された韓国特許出願第１０－２０２１－００７７６９９号に基づいた優先権を主張し、該当の出願の明細書及び図面に開示された全ての内容は本出願に援用される。

変形性関節症は、骨関節炎とも言い、関節部位の物理的刺激を通じてコンドロサイト（ｃｈｏｎｄｒｏｃｙｔｅ）と関節膜（ｓｙｎｏｖｉａｌ ｆｌｕｉｄ）で発現されるサイトカインと軟骨分解酵素によって関節内軟骨が持続的に分解及び損傷することによって関節面の運動機能が消失し、不安定性が誘発される状態を称する。変形性関節症は、６５歳以上の年齢での有病率が、男性の場合は約６０％で、女性の場合は約７０％である最も一般的な形態の関節炎である。変形性関節症のための現在の治療選択肢は制限的であり、これらは、単純鎮痛剤、非ステロイド性抗炎症薬物（ＮＳＡＩＤ）又は関節内（ＩＡ）注射グルココルチコイド及びヒアルロン酸（ＨＡ）製剤による対症的治療を含む。非薬理学的な尺度は、身体運動及び体重損失から関節洗浄液、究極的には外科的な関節置換に至るまでの範囲である。

関節炎の治療に多く使用するイブプロフェン、アスピリン、インドメタシンなどの非ステロイド性消炎鎮痛剤（Ｎｏｎｓｔｅｒｏｉｄａｌ ａｎｔｉ－ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｄｒｕｇｓ、ＮＳＡＩＤｓ）は、速効性があるという長所を有するが、胃腸管の損傷を誘発し、長期間の使用に制約を有する。また、関節の健康と関連した個別認定型及び告示型素材は２２個であって、そのほとんどは、中国、インドなどの海外で原材料を輸入したり、海外で開発された素材を輸入して販売しており、韓国産原材料を活用した関節健康機能性素材の開発が必要な実情である。

一方、生姜（Ｚｉｎｇｉｂｅｒ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ Ｒｏｓｃｏｅ）は、ショウガ科に属する多年生熱帯植物であって、全世界に約４７属、約１，４００種があり、主にインドとマレー諸島などの熱帯に分布し、古代からアジアの暖かい地域で栽培されたが、現在は、主に熱帯と温帯地域の高温地帯で栽培されており、韓国では、ショウガ属のミョウガ、ハナショウガ属のハナショウガ、ハナミョウガ属のハナミョウガが南部地方に自生している。

生姜は、韓国で食用可能な食品として登載されており、米国、ヨーロッパなどの海外でも古くから食用してきた素材であって、主要成分としては、６－ジンゲロール（ｇｉｎｇｅｒｏｌ）、８－ジンゲロール、１０－ジンゲロール、６－ショウガオール（ｓｈｏｇａｏｌ）、６－パラドール（ｐａｒａｄｏｌ）、８－パラドール、１－デヒドロ（ｄｅｈｙｄｒｏ）－６－ジンジャージオン（ｇｉｎｇｅｒｄｉｏｎｅ）、及び１－デヒドロ－８－ジンジャージオンなどがある。食品原料としては、根茎（乾姜）、根、幹、葉を食用可能であることが食品公典に登載されており、ＧＬＰ機関では、単回投与毒性（齧齒類及び非齧齒類）、遺伝毒性３種（復帰突然変異、染色体異常、小核試験）及び１３週の反復投与毒性（齧齒類）試験を行うことによって安全性を確認したことがある。

東医宝鑑などの漢方では、根茎を乾かしたものを薬剤として使用しており、これは、風邪による悪寒、発熱、頭痛、嘔吐、咳、痰を治療し、食中毒による腹痛、下痢などの症状に飲用された。また、生姜抽出物は、抗酸化、脳神経保護、胃腸管の不便さ改善などに対する活性が知られており、生姜の主成分であるジンゲロール及びショウガオールは、抗酸化、抗癌、抗菌、神経保護効能以外にも、糖尿、血圧及びコレステロール低下などの代謝症侯群に効果があるものとして知られている。

本発明者等は、生姜を蒸熟させて得た蒸し生姜抽出物を用いて様々な生理活性を分析することによって、変形性関節症の予防、改善、又は治療に対する天然物由来の機能性素材としての開発を試みた。

本発明者等は、既存の関節炎治療剤の副作用を改善し、優れた変形性関節症の改善効果を示す素材を開発するために研究した結果、一般に高麗人参を紅参に作る過程に含まれる方法として、人体に有益な成分を生成し、吸収率を改善し、長期保存を可能にする蒸熟過程を生姜に適用することによって蒸し生姜抽出物を製造し、その変形性関節症改善の効果を確認したので、これに基づいて本発明を完成した。

そこで、本発明の目的は、蒸し生姜抽出物を有効成分として含む変形性関節症の予防又は改善用食品組成物を提供することにある。

本発明の他の目的は、蒸し生姜抽出物を有効成分として含む変形性関節症の予防又は治療用薬学的組成物を提供することにある。

本発明の更に他の目的は、蒸し生姜抽出物を用いた変形性関節症の予防、改善、又は治療用組成物の製造方法を提供することにある。

しかし、本発明が達成しようとする技術的課題は、以上で言及した課題に制限されなく、言及していない他の課題は、下記の記載から本発明の属する技術分野で通常の知識を有する者に明確に理解され得るだろう。

上記のような目的を達成するために、本発明は、蒸し生姜抽出物；これから分離された１－デヒドロ－６－ジンジャージオン（１－ｄｅｈｙｄｒｏ－６－ｇｉｎｇｅｒｄｉｏｎｅ）；又はその食品学的に許容可能な塩を有効成分として含む、変形性関節症の予防又は改善用食品組成物を提供する。

また、本発明は、蒸し生姜抽出物；これから分離された１－デヒドロ－６－ジンジャージオン；又はその薬学的に許容可能な塩を有効成分として含む、変形性関節症の予防又は治療用薬学的組成物を提供する。

本発明の一具現例として、前記食品組成物は健康機能性食品組成物であり得るが、これに制限されない。

本発明の他の具現例として、前記蒸し生姜抽出物は、水、Ｃ₁乃至Ｃ₄の低級アルコール、ｎ－ヘキサン、エチルアセテート、アセトン、アセトニトリル、ｎ－ブチルアセテート、１，３－ブチレングリコール、メチレンクロライド、及びこれらの混合溶媒からなる群から選ばれた一つの溶媒で抽出されるものであり得るが、これに制限されない。

本発明の更に他の具現例として、前記蒸し生姜抽出物は、１－デヒドロ－６－ジンジャージオン、６－ジンゲロール、８－ジンゲロール、１０－ジンゲロール、６－ショウガオール、６－パラドール、８－パラドール、１－デヒドロ－８－ジンジャージオン、これらの食品学的に許容可能な塩、及びこれらの薬学的に許容可能な塩からなる群から選ばれた一つ以上を含み得るが、これに制限されない。

本発明の更に他の具現例として、前記１－デヒドロ－６－ジンジャージオンは、蒸し生姜抽出物の乾燥重量に対して０．００１重量％乃至１０重量％の容量で含まれ得るが、これに制限されない。

本発明の更に他の具現例として、前記組成物は、ＩＬ－１β、ＴＮＦ－α、ＩＦＮ－γ、及びプロスタグランジンＥ₂（ＰＧＥ₂）からなる群から選ばれる一つ以上の発現を減少させ得るが、これに制限されない。

本発明の更に他の具現例として、前記組成物は、軟骨組織回復、軟骨生成、又は軟骨分解抑制活性を有し得るが、これに制限されない。

本発明の更に他の具現例として、前記組成物は、Ｉ－κＢ又は核因子（ＮＦ）－κＢタンパク質の発現を減少させ得るが、これに制限されない。

また、本発明は、蒸し生姜抽出物；これから分離された１－デヒドロ－６－ジンジャージオン；又はその薬学的又は食品学的に許容可能な塩を含む組成物を、これを必要とする個体に投与する段階を含む、変形性関節症の治療又は改善方法を提供する。

また、本発明は、蒸し生姜抽出物；これから分離された１－デヒドロ－６－ジンジャージオン；又はその薬学的又は食品学的に許容可能な塩を含む組成物の変形性関節症の予防、改善、又は治療のための使用を提供する。

また、本発明は、蒸し生姜抽出物；これから分離された１－デヒドロ－６－ジンジャージオン；又はその薬学的又は食品学的に許容可能な塩の変形性関節症の予防、改善、又は治療に用いられる薬剤の製造のための使用を提供する。

また、本発明は、下記の段階を含む、蒸し生姜抽出物を含む変形性関節症の予防、改善、又は治療用組成物の製造方法を提供する：

（ａ）生姜を洗浄し、８５℃乃至１０５℃で１時間乃至３時間にわたって蒸熟させる段階；

（ｂ）蒸熟させた生姜を４０℃乃至６０℃で３０時間乃至５０時間にわたって乾燥させる段階；

（ｃ）前記乾燥させた蒸し生姜を溶媒に入れ、７５℃乃至９５℃で１０時間乃至２０時間にわたって抽出する段階；

（ｄ）前記抽出した蒸し生姜をろ過し、１０℃乃至６５℃の温度で減圧濃縮する段階；及び

（ｅ）前記減圧濃縮した蒸し生姜抽出物をろ過し、噴霧乾燥させることによって蒸し生姜抽出粉末を製造する段階。

本発明に係る蒸し生姜抽出物又はこれから分離された１－デヒドロ－６－ジンジャージオンは、炎症性サイトカイン発現抑制、軟骨組織回復、軟骨生成、又は軟骨分解抑制などの効果を示し、炎症性サイトカイン及びＭＭＰ生成に関与するＩ－κＢ又はＮＦ－κＢタンパク質の発現を抑制するので、変形性関節症を予防、改善、又は治療するための機能性食品組成物、薬学的組成物などに有用に用いられることが期待される。

本発明の一具現例に係る生姜抽出物と蒸し生姜抽出物の１－デヒドロ－６－ジンジャージオンの変化を示した図である。 本発明の一具現例に係る蒸し生姜抽出物の処理による細胞毒性（左側の図面）及びＮＯ生成抑制効果（右側の図面）を確認した図である。 本発明の一具現例に係る蒸し生姜抽出物の各有効成分の処理による細胞毒性を確認した図である。 本発明の一具現例に係る蒸し生姜抽出物の各有効成分の処理によるＮＯ生成変化を確認した図である。 本発明の一具現例に係る蒸し生姜抽出物及び１－デヒドロ－６－ジンジャージオン処理によるＩＬ－１βのｍＲＮＡの発現変化を確認した図である。 本発明の一具現例に係る蒸し生姜抽出物及び１－デヒドロ－６－ジンジャージオン処理によるＩＬ－１βのタンパク質の発現変化を確認した図である。 本発明の一具現例に係る変形性関節症動物モデルの誘導及び蒸し生姜抽出物の投与過程を図式化して示した図である。 本発明の一具現例に係る変形性関節症動物モデルにおいて、蒸し生姜抽出物の投与による軟骨組織の構造変化をマイクロ（Ｍｉｃｒｏ）－ＣＴイメージで確認した図である。 本発明の一具現例に係る変形性関節症動物モデルにおいて、蒸し生姜抽出物の投与による軟骨組織の形態学的指標を定量化して示した図である。 本発明の一具現例に係る変形性関節症動物モデルの血液において、蒸し生姜抽出物の投与によるＩＬ－１β、ＴＮＦ－α、及びＰＧＥ₂の発現変化を確認した図である。 本発明の一具現例に係る変形性関節症動物モデルの軟骨において、蒸し生姜抽出物の投与によるＩＬ－１β、ＩＦＮ－γ、及びＴＮＦ－αの発現変化を確認した図である。 本発明の一具現例に係る変形性関節症動物モデルの軟骨において、蒸し生姜抽出物の投与によるＴＩＭＰ１、ＴＩＭＰ２、ＭＭＰ－９、及びＣＯＬ－２の発現変化を確認した図である。 本発明の一具現例に係る変形性関節症動物モデルの軟骨において、蒸し生姜抽出物の投与によるＩ－κＢ及びＮＦ－κＢタンパク質の発現変化を確認した図である。

本発明の一実施例では、生姜の蒸熟処理によって蒸し生姜抽出物を製造した（実施例１を参照）。

本発明の他の実施例では、蒸し生姜抽出物から分離された６－ショウガオール、６－ジンゲロール、及び１－デヒドロ－６－ジンジャージオンのうち、特に１－デヒドロ－６－ジンジャージオンの含量が生姜抽出物に比べて大きく増加することを確認し、１－デヒドロ－６－ジンジャージオンを指標成分として設定した（実施例２を参照）。

本発明の一実験例では、ｉｎ ｖｉｔｒｏ上で蒸し生姜抽出物及びこれから分離された１－デヒドロ－６－ジンジャージオンが低い細胞毒性を示し、高いＮＯ生成及びＩＬ－１β発現抑制などの効果を示すことを確認した（実験例１を参照）。

本発明の他の実験例では、ＭＩＡ（Ｍｏｎｏ－ｉｏｄｏａｃｅｔａｔｅ）で誘導した変形性関節症動物モデルの血液又は軟骨組織において、蒸し生姜抽出物が炎症性サイトカインの発現を減少させ、軟骨組織回復、軟骨生成、及び軟骨分解抑制活性を示し、軟骨における変形性関節症の進行によって炎症性サイトカイン及びＭＭＰ生成に関与するＩ－κＢ及びＮＦ－κＢタンパク質の発現を減少させるという効果を示すことを確認した（実験例２を参照）。

そこで、本発明は、蒸し生姜抽出物；これから分離された１－デヒドロ－６－ジンジャージオン；又はその食品学的に許容可能な塩を有効成分として含む、変形性関節症の予防又は改善用食品組成物を提供する。

本発明において、「蒸熟」とは、一般に熱処理を通じて蒸して煮る過程を言い、一定の温度で湿熱した空気を提供して熟成させる方法であって、人参を紅参に製造するときに多く使用されている。蒸熟は、長期保管及び流通を目的とする加熱処理方法の一つであって、漢方では修治と言い、漢方薬の加熱処理を通じて毒性を低下させ、副作用を最小化することによって治療効果を高め、加工や切片に便利に使用しようとする方法の一つとして使用してきた。

本発明において、「抽出物」は、前記蒸し生姜の抽出処理によって得られる抽出液、前記抽出液の希釈液や濃縮液、前記抽出液を乾燥させて得られる乾燥物、前記抽出液の粗精製物や精製物、又はこれらの混合物などのように、抽出液自体及び抽出液を用いて形成可能な全ての剤形の抽出物を含む。本発明の一実施例によると、前記蒸し生姜抽出物は、乾燥粉末の形態であり得るが、これに制限されない。

本発明の前記蒸し生姜の抽出物において、前記蒸し生姜の抽出は、特に制限されなく、当該技術分野で通常使用する方法によって行うことができる。前記抽出方法の非制限的な例としては、熱水抽出法、超音波抽出法、ろ過法、還流抽出法などを挙げることができ、これらは、単独で行われたり、２種以上の方法を併用して行われ得る。

本発明において、前記蒸し生姜を抽出するときに使用される抽出溶媒の種類は、特に制限されなく、天然物から抽出物を抽出する当業界で公知となった通常の方法によって、すなわち、通常の温度、圧力の条件下で通常の溶媒を使用して抽出することができる。例えば、本発明において、前記蒸し生姜抽出物は、水、Ｃ₁乃至Ｃ₄の低級アルコール、ｎ－ヘキサン、エチルアセテート、アセトン、アセトニトリル、ｎ－ブチルアセテート、１，３－ブチレングリコール、メチレンクロライド、及びこれらの混合溶媒からなる群から選ばれた一つの溶媒で抽出することができ、本発明の一実施例によると、エタノールを溶媒として使用して抽出できるが、これに制限されない。

本発明において、前記エタノールを溶媒として使用して蒸し生姜を抽出する場合、例えば、１０％乃至１００％のエタノール、１０％乃至９０％のエタノール、１０％乃至８０％のエタノール、１０％乃至７０％のエタノール、２０％乃至９０％のエタノール、２０％乃至８０％のエタノール、２０％乃至７０％のエタノール、３０％乃至９０％のエタノール、３０％乃至８０％のエタノール、３０％乃至７０％のエタノール、４０％乃至９０％のエタノール、４０％乃至８０％のエタノール、４０％乃至７０％のエタノール、５０％乃至９０％のエタノール、５０％乃至８０％のエタノール、５０％乃至７０％のエタノール、６０％乃至９０％のエタノール、６０％乃至８０％のエタノール、６０％乃至７０％のエタノール、６５％乃至７５％のエタノール、又は７０％のエタノールを使用できるが、これに制限されない。

前記製造された抽出物は、後でろ過したり、濃縮又は乾燥過程を行うことによって溶媒を除去することができ、ろ過、濃縮及び乾燥を全て行うことができる。例えば、ろ過は、ろ過紙を用いたり、減圧ろ過器を用いて行うことができ、濃縮は減圧濃縮器、乾燥は噴霧乾燥、凍結乾燥法などを用いて行えるが、これに制限されるものではない。

本発明において、「変形性関節症」とは、骨の関節面を覆っている関節軟骨の摩耗によって軟骨の下にある骨が露出し、関節周辺の滑液膜に炎症が生じることによって痛症と変形が発生する疾患であって、頻繁に骨関節炎（ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ）とも呼ばれ、関節疾患のうち最も多く発生する疾患である。

本発明において、前記蒸し生姜抽出物は、１－デヒドロ－６－ジンジャージオン、６－ジンゲロール、８－ジンゲロール、１０－ジンゲロール、６－ショウガオール、６－パラドール、８－パラドール、１－デヒドロ－８－ジンジャージオン、これらの食品学的に許容可能な塩、及びこれらの薬学的に許容可能な塩からなる群から選ばれた一つ以上を含み得るが、これに制限されない。

本発明において、「１－デヒドロ－６－ジンジャージオン」は、分子式Ｃ₁₇Ｈ₂₂Ｏ₄の化合物として、下記の化学式１の構造を有するフェノール化合物の一種であって、分子量は２９０．４である（ＣＡＳ Ｎｏ．７６０６０－３５－０）。本発明において、前記１－デヒドロ－６－ジンジャージオンは、蒸し生姜から分離されたものであり得るが、これに制限されなく、当業界で公知となった方法で化学的に合成したり、又は市販される物質であり得る。

本発明において、前記１－デヒドロ－６－ジンジャージオンは、蒸し生姜抽出物の指標成分であって、その含量は、蒸し生姜抽出物の乾燥重量に対して０．００１重量％以上であってもよく、例えば、０．００１重量％乃至１０重量％、０．００１重量％乃至５重量％、０．００１重量％乃至３重量％、０．００１重量％乃至１重量％、０．００１重量％乃至０．５重量％、０．００１重量％乃至０．３重量％、０．００５重量％乃至１０重量％、０．００５重量％乃至５重量％、０．００５重量％乃至３重量％、０．００５重量％乃至１重量％、０．００５重量％乃至０．５重量％、０．００５重量％乃至０．３重量％、０．０１重量％乃至１０重量％、０．０１重量％乃至５重量％、０．０１重量％乃至３重量％、０．０１重量％乃至１重量％、０．０１重量％乃至０．５重量％、０．０１重量％乃至０．３重量％、０．１重量％乃至１０重量％、０．１重量％乃至５重量％、０．１重量％乃至３重量％、０．１重量％乃至１重量％、０．１重量％乃至０．５重量％、０．１重量％乃至０．２重量％、０．１重量％乃至０．１５重量％、又は０．１１８重量％の容量で蒸し生姜抽出物に含まれ得るが、これに制限されない。

本発明において、「指標成分」とは、原料中に含有されている化学的に究明された成分のうち品質管理の目的で定めた成分を言い、生薬を確認するときに基準になる物質である。

本発明において、「食品学的に許容可能な塩」とは、食品学的に許容される有機酸、無機酸、又は塩基から誘導された塩を含む。

本発明において、「食品」とは、栄養素を一つ又はそれ以上含有している天然物又は加工品を意味し、好ましくは、一定程度の加工工程を経て直接食べられる状態になったものを意味し、通常、健康機能性食品、飲料、食品添加剤及び飲料添加剤などを全て含む。

本発明において、前記食品組成物は健康機能性食品組成物であり得るが、これに制限されない。

本発明において、前記「健康機能性食品（ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｆｏｏｄ）」とは、特定の保健用食品（ｆｏｏｄ ｆｏｒ ｓｐｅｃｉａｌ ｈｅａｌｔｈ ｕｓｅ、ＦｏＳＨＵ）と同一の用語であって、栄養供給以外にも、生体調節機能が効率的に表れるように加工された医学、医療効果の高い食品を意味し、錠剤、カプセル剤、丸剤、顆粒剤、粉末、液剤、片状（ｆｌａｋｅ）、ペースト、シロップ剤、ゲル、ゼリー、バー（ｂａｒ）、又はフィルムの剤形として製造され得る。ここで、「機能性」とは、人体の構造及び機能に対する栄養素の調節、生理学的作用などの保健用途に有用な効果を得ることを意味する。

本発明において、前記蒸し生姜抽出物；これから分離された１－デヒドロ－６－ジンジャージオン；又はその食品学的に許容可能な塩は、変形性関節症の予防又は改善用食品組成物に有効成分として含まれ得る。

本発明において、「有効成分」は、直接又は間接にその成分自体が有している薬理作用が製剤の効能・効果を示すと期待される物質又は物質群であって、その成分は、全体の組成物の乾燥重量に対して１重量％以上含まれてもよく、例えば、１０重量％乃至１００重量％、２０重量％乃至１００重量％、３０重量％乃至１００重量％、４０重量％乃至１００重量％、５０重量％乃至１００重量％、６０重量％乃至１００重量％、７０重量％乃至１００重量％、８０重量％乃至１００重量％、９０重量％乃至１００重量％、１０重量％乃至８０重量％、２０重量％乃至８０重量％、３０重量％乃至８０重量％、４０重量％乃至８０重量％、５０重量％乃至８０重量％、６０重量％乃至８０重量％、又は７０重量％乃至８０重量％含まれていてもよいが、これに制限されない。

本発明の蒸し生姜抽出物；これから分離された１－デヒドロ－６－ジンジャージオン；又はその食品学的に許容可能な塩を食品添加物として使用する場合、これをそのまま添加したり、他の食品又は食品成分と共に使用することができ、通常の方法によって適宜使用することができる。有効成分の混合量は、使用目的（予防、健康又は治療的処置）によって適宜決定され得る。一般に、食品又は飲料の製造時、本発明の蒸し生姜抽出物；これから分離された１－デヒドロ－６－ジンジャージオン；又はその食品学的に許容可能な塩は、原料に対して１５重量％以下、又は１０重量％以下の量で添加され得る。しかし、健康及び衛生を目的としたり、又は健康調節を目的とする長期間の摂取の場合、前記量は、前記範囲以下であってもよく、安全性の面で何ら問題もないので、有効成分は、前記範囲以上の量でも使用され得る。

前記食品の種類には特別な制限がない。前記物質を添加できる食品の例としては、肉類、ソーセージ、パン、チョコレート、キャンディ類、スナック類、菓子類、ピザ、ラーメン、その他の麺類、ガム類、アイスクリーム類を含む酪農製品、各種スープ、飲料水、お茶、ドリンク剤、アルコール飲料及びビタミン複合剤などがあり、通常の意味での健康機能食品を全て含む。

本発明に係る健康飲料組成物は、通常の飲料のように、様々な香味剤又は天然炭水化物などを追加成分として含有することができる。上述した天然炭水化物は、ブドウ糖及び果糖などのモノサッカライド、マルトース及びスクロースなどのジサッカライド、デキストリン及びシクロデキストリンなどのポリサッカライド、及びキシリトール、ソルビトール及びエリトリトールなどの糖アルコールである。甘味剤としては、タウマチン、ステビア抽出物などの天然甘味剤や、サッカリン、アスパルテームなどの合成甘味剤などを使用することができる。前記天然炭水化物の比率は、本発明の組成物１００ｍＬ当たり、一般に約０．０１ｇ～０．２０ｇ、又は約０．０４ｇ～０．１０ｇである。

前記以外にも、本発明の組成物は、様々な栄養剤、ビタミン、電解質、風味剤、着色剤、ペクチン酸及びその塩、アルギン酸及びその塩、有機酸、保護性コロイド増粘剤、ｐＨ調節剤、安定化剤、防腐剤、グリセリン、アルコール、炭酸飲料に使用される炭酸化剤などを含有することができる。その他に、本発明の組成物は、天然果汁、果汁入り飲料及び野菜汁飲料を製造するための果肉を含有することができる。このような成分は、独立的に又は組み合わせて使用することができる。このような添加剤の比率は、それほど重要ではないが、本発明の組成物１００重量部当たり０．０１重量部～０．２０重量部の範囲で選ばれることが一般的である。

本発明の他の様態として、本発明は、蒸し生姜抽出物；これから分離された１－デヒドロ－６－ジンジャージオン；又はその薬学的に許容可能な塩を有効成分として含む、変形性関節症の予防又は治療用薬学的組成物を提供する。

本発明において、「薬学的に許容可能な塩」とは、薬学的に許容される無機酸、有機酸、又は塩基から誘導された塩を含む。

本発明の更に他の様態として、本発明は、蒸し生姜抽出物；これから分離された１－デヒドロ－６－ジンジャージオン；又はその薬学的又は食品学的に許容可能な塩を含む組成物を、これを必要とする個体に投与する段階を含む、変形性関節症の治療又は改善方法を提供する。

本発明の更に他の様態として、本発明は、蒸し生姜抽出物；これから分離された１－デヒドロ－６－ジンジャージオン；又はその薬学的又は食品学的に許容可能な塩を含む組成物の変形性関節症の予防、改善、又は治療のための使用を提供する。

本発明の更に他の様態として、本発明は、蒸し生姜抽出物；これから分離された１－デヒドロ－６－ジンジャージオン；又はその薬学的又は食品学的に許容可能な塩の変形性関節症の予防、改善、又は治療に用いられる薬剤の製造のための使用を提供する。

本発明において、「予防」とは、変形性関節症の発病を抑制又は遅延させる全ての行為を意味し、「治療」とは、本発明に係る薬学的組成物の投与によって変形性関節症及びそれによる代謝異常症が好転したり有利に変更される全ての行為を意味し、「改善」とは、本発明に係る組成物の投与によって変形性関節症と関連したパラメーター、例えば、症状の程度を減少させる全ての行為を意味する。

本発明に係る薬学的組成物は、薬学的組成物の製造に通常使用する適切な担体、賦形剤及び希釈剤をさらに含むことができる。前記賦形剤は、例えば、希釈剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、吸着剤、保湿剤、フィルム－コーティング物質、及び制御放出添加剤からなる群から選ばれた一つ以上であり得る。

本発明に係る薬学的組成物は、それぞれ通常の方法によって散剤、顆粒剤、徐放性顆粒剤、腸溶性顆粒剤、液剤、点眼剤、エリキシル剤、乳剤、懸濁液剤、酒精剤、トローチ剤、芳香水剤、リモナーデ剤、錠剤、徐放性錠剤、腸溶性錠剤、舌下錠、硬質カプセル剤、軟質カプセル剤、徐放性カプセル剤、腸溶性カプセル剤、丸剤、チンキ剤、軟エキス剤、乾燥エキス剤、流動エキス剤、注射剤、カプセル剤、灌流液、硬膏剤、ローション剤、パスタ剤、噴霧剤、吸入剤、パッチ剤、滅菌注射溶液、又はエアロゾルなどの外用剤などの形態に剤形化して使用され得る。また、前記外用剤は、クリーム、ジェル、パッチ、噴霧剤、軟膏剤、硬膏剤、ローション剤、リニメント剤、パスタ剤又はカタプラズマ剤などの剤形を有することができる。

本発明に係る薬学的組成物に含まれ得る担体、賦形剤及び希釈剤としては、ラクトース、デキストロース、スクロース、オリゴ糖、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、エリスリトール、マルチトール、デンプン、アカシアゴム、アルギネート、ゼラチン、カルシウムホスフェート、カルシウムシリケート、セルロース、メチルセルロース、微晶質セルロース、ポリビニルピロリドン、水、メチルヒドロキシベンゾエート、プロピルヒドロキシベンゾエート、タルク、マグネシウムステアレート及び鉱物油を挙げることができる。

製剤化する場合は、通常使用する充填剤、増量剤、結合剤、湿潤剤、崩壊剤、界面活性剤などの希釈剤又は賦形剤を使用して調製される。

本発明に係る錠剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、丸剤、トローチ剤の添加剤として、トウモロコシデンプン、ジャガイモデンプン、小麦デンプン、乳糖、白糖、ブドウ糖、果糖、Ｄ－マンニトール、沈降炭酸カルシウム、合成ケイ酸アルミニウム、リン酸一水素カルシウム、硫酸カルシウム、塩化ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、精製ラノリン、微結晶セルロース、デキストリン、アルギン酸ナトリウム、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、カオリン、尿素、コロイド状シリカゲル、ヒドロキシプロピルスターチ、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、ＨＰＭＣ １９２８、ＨＰＭＣ ２２０８、ＨＰＭＣ ２９０６、ＨＰＭＣ ２９１０、プロピレングリコール、カゼイン、乳酸カルシウム、プリモジェルなどの賦形剤；ゼラチン、アラビアゴム、エタノール、寒天粉、酢酸フタル酸セルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、ブドウ糖、精製水、カゼインナトリウム、グリセリン、ステアリン酸、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、微結晶セルロース、デキストリン、ヒドロキシセルロース、ヒドロキシプロピルスターチ、ヒドロキシメチルセルロース、精製セラック、デンプン糊、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドンなどの結合剤が使用され得、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、トウモロコシデンプン、寒天粉、メチルセルロース、ベントナイト、ヒドロキシプロピルスターチ、カルボキシメチルセルロースナトリウム、アルギン酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロースカルシウム、クエン酸カルシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、無水ケイ酸、１－ヒドロキシプロピルセルロース、デキストラン、イオン交換樹脂、酢酸ポリビニル、ホルムアルデヒド処理カゼイン及びゼラチン、アルギン酸、アミロース、グアーガム（Ｇｕａｒ ｇｕｍ）、重曹、ポリビニルピロリドン、リン酸カルシウム、ゲル化デンプン、アラビアゴム、アミロペクチン、ペクチン、ポリリン酸ナトリウム、エチルセルロース、白糖、ケイ酸マグネシウムアルミニウム、Ｄ－ソルビトール液、硬質無水ケイ酸などの崩壊剤；ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、水素化食物油（Ｈｙｄｒｏｇｅｎａｔｅｄ ｖｅｇｅｔａｂｌｅ ｏｉｌ）、タルク、石松子、カオリン、ワセリン、ステアリン酸ナトリウム、カカオ脂、サリチル酸ナトリウム、サリチル酸マグネシウム、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）４０００、ＰＥＧ ６０００、流動パラフィン、水素添加大豆油（Ｌｕｂｒｉ ｗａｘ）、ステアリン酸アルミニウム、ステアリン酸亜鉛、ラウリル硫酸ナトリウム、酸化マグネシウム、マクロゴール（Ｍａｃｒｏｇｏｌ）、合成ケイ酸アルミニウム、無水ケイ酸、高級脂肪酸、高級アルコール、シリコーン油、パラフィン油、ポリエチレングリコール脂肪酸エーテル、デンプン、塩化ナトリウム、酢酸ナトリウム、オレイン酸ナトリウム、ＤＬ－ロイシン、硬質無水ケイ酸などの滑沢剤；が使用され得る。

本発明に係る液剤の添加剤としては、水、希塩酸、希硫酸、クエン酸ナトリウム、モノステアリン酸スクロース類、ポリオキシエチレンソルビトール脂肪酸エステル類（ツインエステル）、ポリオキシエチレンモノアルキルエーテル類、ラノリンエーテル類、ラノリンエステル類、酢酸、塩酸、アンモニア水、炭酸アンモニウム、水酸化カリウム、水酸化ナトリウム、プロラミン、ポリビニルピロリドン、エチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウムなどが使用され得る。

本発明に係るシロップ剤としては、白糖の溶液、他の糖類或いは甘味剤などが使用され得、必要に応じて芳香剤、着色剤、保存剤、安定剤、懸濁化剤、乳化剤、粘稠剤などが使用され得る。

本発明に係る乳剤としては、精製水が使用され得、必要に応じて乳化剤、保存剤、安定剤、芳香剤などが使用され得る。

本発明に係る懸濁剤としては、アカシア、トラガカント、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、微結晶セルロース、アルギン酸ナトリウム、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、ＨＰＭＣ １８２８、ＨＰＭＣ ２９０６、ＨＰＭＣ ２９１０などの懸濁化剤が使用され得、必要に応じて界面活性剤、保存剤、安定剤、着色剤、芳香剤が使用され得る。

本発明に係る注射剤としては、注射用蒸留水、０．９％の塩化ナトリウム注射液、リンゲル注射液、デキストロース注射液、デキストロース＋塩化ナトリウム注射液、ＰＥＧ、乳酸リンゲル注射液、エタノール、プロピレングリコール、不揮発性油－ゴマ油、綿実油、落花生油、ダイズ油、とうもろこし油、オレイン酸エチル、ミリスチン酸イソプロピル、安息香酸ベンゼンなどの溶剤；安息香酸ナトリウム、サリチル酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、尿素、ウレタン、モノエチルアセトアミド、ブタゾリジン、プロピレングリコール、ツイン類、ニコチン酸アミド、ヘキサミン、ジメチルアセトアミドなどの溶解補助剤；弱酸及びその塩（酢酸と酢酸ナトリウム）、弱塩基及びその塩（アンモニア及び酢酸アンモニウム）、有機化合物、タンパク質、アルブミン、ペプトン、ガム類などの緩衝剤；塩化ナトリウムなどの等張化剤；重亜硫酸ナトリウム（ＮａＨＳＯ₃）二酸化炭素ガス、メタ重亜硫酸ナトリウム（Ｎａ₂Ｓ₂Ｏ₅）、亜硫酸ナトリウム（Ｎａ₂ＳＯ₃）、窒素ガス（Ｎ₂）、エチレンジアミンテトラ酢酸などの安定剤；ナトリウムビサルファイト０．１％、ナトリウムホルムアルデヒドスルホキシレート、チオウレア、エチレンジアミンテトラ酢酸ジナトリウム、アセトンナトリウムビサルファイトなどの硫酸化剤；ベンジルアルコール、クロロブタノール、塩酸プロカイン、ブドウ糖、グルコン酸カルシウムなどの無痛化剤；カルボキシメチルセルロースナトリウム、アルギン酸ナトリウム、ツイン８０、モノステアリン酸アルミニウムなどの懸濁化剤；を含むことができる。

本発明に係る坐剤としては、カカオ脂、ラノリン、ウィテプソル、ポリエチレングリコール、グリセロゼラチン、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ステアリン酸とオレイン酸の混合物、スバナル（Ｓｕｂａｎａｌ）、綿実油、落花生油、ヤシ油、カカオバター＋コレステロール、レシチン、ラネットワックス、モノステアリン酸グリセロール、ツイン又はスパン、イムハウゼン（Ｉｍｈａｕｓｅｎ）、モノレン（モノステアリン酸プロピレングリコール）、グリセリン、アデプスソリダス（Ａｄｅｐｓ ｓｏｌｉｄｕｓ）、ブチラムテゴ－Ｇ（Ｂｕｙｔｙｒｕｍ Ｔｅｇｏ－Ｇ）、セベスファーマ１６（Ｃｅｂｅｓ Ｐｈａｒｍａ １６）、ヘキサライドベース９５、コトマー（Ｃｏｔｏｍａｒ）、ヒドロコテＳＰ、Ｓ－７０－ＸＸＡ、Ｓ－７０－ＸＸ７５（Ｓ－７０－ＸＸ９５）、ヒドロコテ（Ｈｙｄｒｏｋｏｔｅ）２５、ヒドロコテ７１１、イドロポスタル（Ｉｄｒｏｐｏｓｔａｌ）、マッサエストラリウム（Ｍａｓｓａ ｅｓｔｒａｒｉｕｍ、Ａ、ＡＳ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｉ、Ｔ）、マッサ－ＭＦ、マスポル、マスポル－１５、ネオスポスタル－エン、パラマウンド－Ｂ、スポシール（ＯＳＩ、ＯＳＩＸ、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｈ、Ｌ）、坐剤基剤ＩＶタイプ（ＡＢ、Ｂ、Ａ、ＢＣ、ＢＢＧ、Ｅ、ＢＧＦ、Ｃ、Ｄ、２９９）、スポスタル（Ｎ、Ｅｓ）、ウェコビー（Ｗ、Ｒ、Ｓ、Ｍ、Ｆｓ）、テゲスタートリグリセライド基剤（ＴＧ－９５、ＭＡ、５７）などの基剤が使用され得る。

経口投与のための固形製剤には、錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤などが含まれ、このような固形製剤は、前記抽出物に少なくとも一つ以上の賦形剤、例えば、デンプン、カルシウムカーボネート（ｃａｌｃｉｕｍ ｃａｒｂｏｎａｔｅ）、スクロース（ｓｕｃｒｏｓｅ）又はラクトース（ｌａｃｔｏｓｅ）、ゼラチンなどを混ぜて調製される。また、単純な賦形剤以外に、マグネシウムステアレート、タルクなどの潤滑剤も使用される。

経口投与のための液状製剤としては、懸濁剤、内用液剤、乳剤、シロップ剤などが該当するが、頻繁に使用される単純希釈剤である水、リキッドパラフィン以外に、様々な賦形剤、例えば、湿潤剤、甘味剤、芳香剤、保存剤などが含まれ得る。非経口投与のための製剤には、滅菌された水溶液、非水性溶剤、懸濁剤、乳剤、凍結乾燥製剤、坐剤が含まれる。非水性溶剤、懸濁剤としては、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブオイルなどの植物性油、エチルオレートなどの注射可能なエステルなどが使用され得る。

本発明に係る薬学的組成物は、薬学的に有効な量で投与する。本発明において、「薬学的に有効な量」は、医学的治療に適用可能な合理的なベネフィット・リスク比で疾患を治療するに十分な量を意味し、有効用量レベルは、患者疾患の種類、重症度、薬物の活性、薬物に対する敏感度、投与時間、投与経路及び排出比率、治療期間、同時に使用される薬物を含む要素、及びその他の医学分野でよく知られている要素によって決定され得る。

本発明に係る薬学的組成物は、個別治療剤で投与されたり、他の治療剤と併用して投与されてもよく、従来の治療剤とは順次に又は同時に投与されてもよく、単一又は多重投与されてもよい。上記の各要素を全て考慮した上で、副作用なしに最小限の量で最大効果を得られる量を投与することが重要であり、これは、本発明の属する技術分野で通常の技術者によって容易に決定され得る。

本発明の薬学的組成物は、個体に多様な経路で投与され得る。投与の全ての方式は予想され得るが、例えば、経口服用、皮下注射、腹腔投与、静脈注射、筋肉注射、脊髓の周囲空間（硬膜内）注射、舌下投与、頬粘膜投与、直腸内挿入、膣内挿入、眼球投与、耳投与、鼻腔投与、吸入、口又は鼻を介した噴霧、皮膚投与、経皮投与などによって投与され得る。

本発明の薬学的組成物は、治療する疾患、投与経路、患者の年齢、性別、体重及び疾患の重症度などの様々な関連因子と共に、活性成分である薬物の種類によって決定される。

本発明において、蒸し生姜抽出物；これから分離された１－デヒドロ－６－ジンジャージオン；その食品学的に許容可能な塩；又はその薬学的に許容可能な塩は、１日に２００ｍｇ乃至６００ｍｇ、２５０ｍｇ乃至６００ｍｇ、３００ｍｇ乃至６００ｍｇ、３５０ｍｇ乃至６００ｍｇ、４００ｍｇ乃至６００ｍｇ、４５０ｍｇ乃至６００ｍｇ、２００ｍｇ乃至５５０ｍｇ、２００ｍｇ乃至５００ｍｇ、２５０ｍｇ乃至５５０ｍｇ、２５０ｍｇ乃至５００ｍｇ、３００ｍｇ乃至５５０ｍｇ、３００ｍｇ乃至５００ｍｇ、３５０ｍｇ乃至５５０ｍｇ、３５０ｍｇ乃至５００ｍｇ、４００ｍｇ乃至５５０ｍｇ、４００ｍｇ乃至５００ｍｇ、４５０ｍｇ乃至５５０ｍｇ、４５０ｍｇ乃至５００ｍｇ、又は４８０ｍｇの用量で、６週乃至１８週、６週乃至１６週、６週乃至１４週、８週乃至１８週、８週乃至１６週、８週乃至１４週、１０週乃至１８週、１０週乃至１６週、１０週乃至１４週、又は１２週間にわたって個体に投与できるが、これに制限されない。

本発明において、「個体」とは、疾病の治療を必要とする対象を意味し、より具体的には、ヒト又は非ヒトである霊長類、マウス、ラット、イヌ、ネコ、ウマ、及びウシなどの哺乳類を意味する。

本発明において、「投与」とは、任意の適切な方法で個体に所定の本発明の組成物を提供することを意味する。

本発明の更に他の様態として、本発明は、下記の段階を含む、蒸し生姜抽出物を含む変形性関節症の予防、改善、又は治療用組成物の製造方法を提供する：

（ａ）生姜を洗浄し、８５℃乃至１０５℃で１時間乃至３時間にわたって蒸熟させる段階；

（ｂ）蒸熟された生姜を４０℃乃至６０℃で３０時間乃至５０時間にわたって乾燥させる段階；

（ｃ）前記乾燥させた蒸し生姜を溶媒に入れ、７５℃乃至９５℃で１０時間乃至２０時間にわたって抽出する段階；

（ｄ）前記抽出した蒸し生姜をろ過し、１０℃乃至６５℃の温度で減圧濃縮する段階；及び

（ｅ）前記減圧濃縮した蒸し生姜抽出物をろ過し、噴霧乾燥させることによって蒸し生姜抽出粉末を製造する段階。

本発明において、前記（ａ）段階での蒸熟は、８５℃乃至１０５℃、９０℃乃至１０５℃、９５℃乃至１００℃、又は９７℃で１時間乃至３時間、１時間乃至２．５時間、１．５時間乃至３時間、１．５時間乃至２．５時間、又は２時間にわたって行えるが、これに制限されない。

本発明において、前記（ｂ）段階での乾燥は、３０時間以上行うことができ、例えば、４０℃乃至６０℃、４５℃乃至６０℃、４５℃乃至５５℃、又は５０℃で３０時間乃至５０時間、３０時間乃至４５時間、３０時間乃至４０時間、又は３０時間乃至３５時間にわたって行えるが、これに制限されない。

本発明において、前記（ｃ）段階での抽出は、７５℃乃至９５℃、７５℃乃至９０℃、８０℃乃至９５℃、８０℃乃至９０℃、又は８５℃で１０時間乃至２０時間、１０時間乃至１７時間、１２時間乃至２０時間、１２時間乃至１７時間、又は１５時間にわたって行えるが、これに制限されない。

本発明において、前記（ｄ）段階での減圧濃縮は、６５℃以下の温度で行うことができ、例えば、１０℃乃至６５℃、２０℃乃至６５℃、３０℃乃至６５℃、４０℃乃至６５℃、５０℃乃至６５℃、又は６０℃乃至６５℃で行うことができ、２０ｂｒｉｘ以上、例えば、２０ｂｒｉｘ乃至１００ｂｒｉｘ、２０ｂｒｉｘ乃至８０ｂｒｉｘ、２０ｂｒｉｘ乃至６０ｂｒｉｘ、又は２０乃至４０ｂｒｉｘになるように減圧濃縮できるが、これに制限されない。

本発明において、前記（ｅ）段階は、減圧濃縮した蒸し生姜抽出物をろ過した後、蒸し生姜抽出物及び炭水化物を１：０．５乃至２、１：０．５乃至１．５、１：０．５乃至１、１：１乃至２、１：１乃至１．５、又は１：１の乾燥重量比で混合する段階をさらに含むことができ、本発明の一実施例によると、前記炭水化物はデキストリンであり得るが、これに制限されない。

本発明において、前記（ｅ）段階は、蒸し生姜抽出物及び炭水化物の混合物を８０℃乃至１００℃、８５℃乃至１００℃、８０℃乃至９５℃、８５℃乃至９５℃、又は９０℃で１０分乃至２０分、１０分乃至１７分、１２分乃至１７分、又は１５分間殺菌する段階をさらに含み得るが、これに制限されない。

本発明において、前記（ｅ）段階において、噴霧乾燥は、入口（ｉｎｌｅｔ）の温度が１８０℃乃至２００℃、１８０℃乃至１９５℃、１８５℃乃至２００℃、１８５℃乃至１９５℃、又は１９０℃で、出口（ｏｕｔｌｅｔ）の温度が８０℃乃至１００℃、８０℃乃至９５℃、８５℃乃至１００℃、８５℃乃至９５℃、又は９０℃である乾燥器で行えるが、これに制限されない。

以下、本発明の理解を促進するために、好ましい実施例及び実験例を提示する。しかし、下記の実施例及び実験例は、本発明をより容易に理解するために提供されるものに過ぎなく、下記の実施例及び実験例によって本発明の内容が限定されることはない。

実施例１．蒸し生姜抽出物の製造

１－１．蒸し生姜の製造

生の生姜を購入し、その根茎部位を使用しており、精製水で５分～７分間洗浄した後、洗浄された生姜を蒸熟器に入れ、９７℃で２時間にわたって蒸熟させた。その後、蒸熟された生姜を乾燥器に入れ、５０℃で３０時間以上乾燥させることによって蒸し生姜を製造した。

１－２．蒸し生姜抽出物の製造

前記実施例１－１で製造した蒸し生姜の原材料に７０％の酒精（エタノール）を１５倍加え、８５℃で１５時間にわたって抽出した。その後、これをろ過した後、６５℃以下の低温で２０ｂｒｉｘ以上になるように減圧濃縮し、これを再びろ過した。その後、蒸し生姜濃縮液をデキストリンと混合し、９０℃で１５分間殺菌した後、入口の温度１９０℃、出口の温度９０℃の乾燥器で噴霧乾燥させることによって蒸し生姜抽出粉末を製造した。

上記のような蒸し生姜抽出粉末の製造過程及び条件を下記の表１に示した。

実施例２．蒸し生姜抽出物からの化合物の分離

前記実施例１で製造した蒸し生姜抽出物からｎ－ヘキサンと蒸留水を活用して溶媒系統分画を行った。収得したｎ－ヘキサン分画物からＳｉＯ₂、ＯＤＳ、Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ－２０などの多様なレジンを活用してオープンカラムクロマトグラフィーを繰り返し行うことによって、主要成分である１－デヒドロ－６－ジンジャージオン、６－ジンゲロール、８－ジンゲロール、１０－ジンゲロール、６－ショウガオール、６－パラドール、８－パラドール、及び１－デヒドロ－８－ジンジャージオンを収得した。

また、下記の条件のように、蒸し生姜抽出物に対して液体クロマトグラフィー（Ｈｉｇｈ Ｐｒｅｓｓｕｒｅ Ｌｉｑｕｉｄ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ、ＨＰＬＣ）分析を行った。

蒸し生姜抽出物と生姜抽出物を８０％のメタノールに溶かし、１０，０００ｐｐｍの溶液に製造した後、０．２２μｍのメンブレンフィルター（Ｗｏｏｎｇｋｉ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．，ソウル、韓国）で精製することによってサンプルを製造した。分析に使用されたＨＰＬＣとしては、アジレント・テクノロジー（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）１２６０シリーズを使用し、分析用カラムとしては、Ｃａｄｅｎｚａ ＣＤ－Ｃ１８（３μｍ、２５０ｍｍ×４．６ｍｍ）を使用した。このとき、測定波長は３７０ｎｍ、試料注入量は１０μＬ、溶媒溶出速度は０．４ｍＬ／ｍｉｎとし、分析溶媒としては、ギ酸（ｆｏｒｍｉｃ ａｃｉｄ）が０．１％含有された水（Ａ）及びアセトニトリル（Ｂ）を使用し、溶媒の組成を次のように変化させながら６０分間観測を行った。

（Ｂ）基準、３０％（０分）→３０％（５分）→５５％（１０分）→５５％（１３分）→８０％（２０分）→８０％（２３分）→１００％（３０分）→１００％（６０分）。

その結果、図１に示したように、蒸し生姜抽出物と生姜抽出物とを比較したとき、特徴的に１－デヒドロ－６－ジンジャージオンの含量が大きく増加することを確認し、１－デヒドロ－６－ジンジャージオンを指標成分として設定した。蒸し生姜中の指標成分である１－デヒドロ－６－ジンジャージオンの含量を確認するために、標準品を活用して検量曲線を作成し、作成された検量曲線に基づいて、蒸し生姜抽出物に対して１－デヒドロ－６－ジンジャージオンが１．１８ｍｇ／ｇ含有されていることを確認した。生姜抽出物に対する１－デヒドロ－６－ジンジャージオンの含量は０．５４ｍｇ/ｇであった。

［実験例］

実験例１．Ｉｎ ｖｉｔｒｏ上での抗炎症効果の確認

１－１．細胞生存率及びＮＯ生成抑制効果の確認

マウス大食細胞であるＲＡＷ ２６４．７細胞において、生姜抽出物（ＧＥ）、蒸し生姜抽出物（ＧＧＥ）、及び蒸し生姜の各有効成分を用いて細胞生存率及びＮＯ生成抑制効果を確認した。

細胞生存率は、ＭＴＴ（３－（４，５－ジメチルチアゾール－２－イル）－２，５－ジフェニルテトラゾリウムブロマイド）を用いて確認した。生存細胞は、ＭＴＴをホルマザン（ｆｏｒｍａｚａｎ）に変換することを用いて吸光度を測定するものであって、ＲＡＷ ２６４．７細胞を９６ウェル－プレートに１×１０⁴細胞／ウェルの濃度で接種した後、３７℃、５％ＣＯ₂条件のインキュベーターで２４時間にわたって培養し、生姜抽出物（ＧＥ）及び蒸し生姜抽出物（ＧＧＥ）を２５μｇ／ｍＬ、５０μｇ／ｍＬ、１００μｇ／ｍＬ、２００μｇ／ｍＬの濃度で処理し、蒸し生姜の各有効成分は１．３μｇ／ｍＬ、２．５μｇ／ｍＬ、５μｇ／ｍＬ、１０μｇ／ｍＬ、２０μｇ／ｍＬの濃度で処理し、２４時間にわたって培養した後、５ｍｇ／ｍＬのＭＴＴ溶液を１０μＬずつ添加し、これを２時間にわたって培養した。その後、培地上清液を除去し、ＤＭＳＯ １００μＬを入れて溶解させた後、５４０ｎｍで吸光度を測定した。

ＮＯ生成抑制効果の確認のために、ＲＡＷ ２６４．７細胞を９６ウェル－プレートに１×１０⁴細胞／ウェルの濃度で接種した後、３７℃、５％ＣＯ₂条件のインキュベーターで２４時間にわたって培養し、炎症誘導のためにＬＰＳ（ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ）を１μｇ／ｍＬの濃度で２時間にわたって前処理した後、蒸し生姜抽出物を２５μｇ／ｍＬ、５０μｇ／ｍＬ、１００μｇ／ｍＬ、２００μｇ／ｍＬの濃度で処理し、蒸し生姜の各有効成分は１．３μｇ／ｍＬ、２．５μｇ／ｍＬ、５μｇ／ｍＬ、１０μｇ／ｍＬ、２０μｇ／ｍＬの濃度で処理し、２４時間にわたって培養した後、上清液を新しい９６ウェル－プレートに５０μＬだけ移し、グリース試薬（Ｇｒｉｅｓｓ ｒｅａｇｅｎｔ）を５０μＬ添加し、常温で２０分間反応させた後、４５０ｎｍで吸光度を測定した。

その結果、図２ａに示したように、蒸し生姜抽出物の場合は、生姜抽出物に比べて細胞毒性が低く（左側の図面）、ＬＰＳによって誘導されたＮＯ生成を抑制する効果を示すことを確認した（右側の図面）。

また、図２ｂ及び図２ｃに示したように、蒸し生姜の各有効成分のうち、特に指標成分である１－デヒドロ－６－ジンジャージオンは、低い細胞毒性を示しながら（図２ｂ）濃度依存的に高いＮＯ生成抑制効果（図２ｃ）を示すことを確認した。

１－２．ＩＬ－１β発現抑制効果の確認

ＲＡＷ ２６４．７細胞において、蒸し生姜抽出物（ＧＧＥ）及び蒸し生姜の有効成分である１－デヒドロ－６－ジンジャージオン（６－ＧＤ）処理によるインターロイキン－１β（ＩＬ－１β）のｍＲＮＡ及びタンパク質の発現を確認した。

具体的には、ＲＡＷ ２６４．７細胞を６ウェル－プレートに１×１０⁴細胞／ウェルで接種した後、ＬＰＳを１μｇ／ｍＬの濃度で２時間にわたって前処理し、蒸し生姜抽出物を濃度別（５０μｇ／ｍＬ、１００μｇ／ｍＬ、２００μｇ／ｍＬ）に２４時間にわたって処理した。トータルＲＮＡは、ＴＲＩｚｏｌ溶液を用いて抽出し、Ｎａｎｏｄｒｏｐを通じてＲＮＡを定量した後、同量のＲＮＡをｃＤＮＡ合成キット（Ｔａｋａｒａ、Ｊａｐａｎ）を用いてｃＤＮＡに合成した後、ｑＲＴ－ＰＣＲ（ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｒｅａｌ ｔｉｍｅ－ＰＣＲ）を行った。

実験に使用したプライマー配列は、下記の表２に示した。

また、インターロイキン－１β（ＩＬ－１β）のタンパク質発現を確認するために、ＲＩＰＡバッファーを用いてタンパク質を抽出し、同量のタンパク質を１２％のＳＤＳ－ＰＡＧＥで電気泳動した後、ニトロセルロースメンブレン（ｎｉｔｒｏｃｅｌｌｕｌｏｓｅ ｍｅｍｂｒａｎｅ）に移動（ｔｒａｎｓｆｅｒ）させた。その後、５％のスキムミルク（ｓｋｉｍ ｍｉｌｋ）で常温で１時間にわたってブロッキング（ｂｌｏｃｋｉｎｇ）を行った後、ＩＬ－１βに対する１次抗体（Ｉｎｖｉｒｏｇｅｎ、ＵＳＡ）を４℃で一晩中反応させ、酵素、放射線物質、又は蛍光物質などが付着した２次抗体（ＨＰＲ－ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ ｒａｂｂｉｔ、Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、ＵＳＡ）を常温で１時間にわたって反応させた。１時間後、Ｌｕｍｉ－Ｐｉｃｏ試薬でタンパク質を検出した。

その結果、図３ａ及び図３ｂに示したように、蒸し生姜抽出物又は１－デヒドロ－６－ジンジャージオン処理によって炎症性サイトカインであるＩＬ－１βのｍＲＮＡ（図３ａ）及びタンパク質（図３ｂ）の発現が減少することを確認した。

実験例２．変形性関節症動物モデルでの効果の確認

２－１．変形性関節症動物モデルの誘導及び蒸し生姜抽出物の投与

５週齢のウィスター（Ｗｉｓｔａｒ）ラットの関節腔にＭＩＡ（Ｍｏｎｏ－ｉｏｄｏａｃｅｔａｔｅ）５０μＬ（３ｍｇ／ｋｇ）を２週間にわたって投与し、変形性関節症を誘導した。

その後、６週間にわたって生姜抽出物（２００ｍｇ／ｋｇ）、蒸し生姜抽出物（５０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ、２００ｍｇ／ｋｇ）及び陽性対照群（ＰＣ）としてのセレコキシブ（１０ｍｇ／ｋｇ、ｃｅｌｅｃｏｘｉｂ）を経口投与し、マイクロ－ＣＴ分析、血液及び関節軟骨での関節構造及び炎症マーカーの分析を実施した。

上記のような変形性関節症動物モデルの誘導及び蒸し生姜抽出物の投与過程は、図４に図式化して示した。

２－２．マイクロ－ＣＴ分析

前記実験例２－１のＭＩＡ誘導変形性関節症動物モデルを用いて関節組織の構造変化を確認するために、マイクロ－ＣＴ撮影及び分析を実施した。

その結果、図５ａに示したように、正常群（ＮＣ）に比べて、ＭＩＡ誘導群の場合は、軟骨組織が破壊され、変形性関節症が誘導されたことを確認し、生姜抽出物（ＧＥ）、蒸し生姜抽出物（ＧＧＥ）及びＰＣ（ｃｅｌｅｃｏｘｉｂ）投与群の場合は、正常群のレベルに軟骨組織が回復されることを確認することができた。

また、図５ｂに示したように、骨表面積（ｂｏｎｅ ｓｕｒｆａｃｅ、ＢＳ）、骨表面密度（ｂｏｎｅ ｓｕｒｆａｃｅ ｄｅｎｓｉｔｙ、ＢＳ／ＴＶ）、及び骨梁数（ｔｒａｂｅｃｕｌａｒ ｎｕｍｂｅｒ、Ｔｂ．Ｎ）は、ＭＩＡによって増加したが、生姜抽出物及び蒸し生姜抽出物の投与によって減少することを確認し、骨梁幅（ｔｒａｂｅｃｕｌａｒ ｔｈｉｃｋｎｅｓｓ、Ｔｂ．Ｔｈ）は、ＭＩＡによって減少したが、生姜抽出物及び蒸し生姜抽出物の投与によって増加することを確認した。特に、生姜抽出物に比べて、蒸し生姜抽出物投与群でさらに優れた軟骨組織回復効果が表れることを確認した。

２－３．変形性関節症動物モデルの血液における炎症性サイトカイン発現の確認

前記実験例２－１のＭＩＡ誘導変形性関節症動物モデルの血液において、炎症性サイトカインの発現を確認した。

具体的には、ＭＩＡ誘導変形性関節症動物に６週間にわたって生姜抽出物及び蒸し生姜抽出物を投与し、剖検前に節食した後、腹帯静脈から血液を採取し、４℃、１２，０００ｒｐｍで１５分間遠心分離することによって血清を分離した。血中炎症性サイトカインの含量を測定するために、ＩＬ－１β、ＴＮＦ－α、ＰＧＥ₂の含量をキット（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍ、米国）に構成された物品で製造社の実験方法に合わせて反応させた後で測定した。

その結果、図６に示したように、ＭＩＡ誘導変形性関節症動物モデルの血液において、炎症性サイトカインであるＩＬ－１β、ＴＮＦ－α、及びプロスタグランジンＥ₂（ＰＧＥ₂）の発現は、蒸し生姜抽出物の処理によって有意に減少することを確認し、ここで、蒸し生姜抽出物の処理時、生姜抽出物を処理した場合に比べて炎症性サイトカインの発現減少効果がさらに高いことが分かった。

２－４．変形性関節症動物モデルの軟骨における炎症性サイトカイン発現の確認

前記実験例２－１のＭＩＡ誘導変形性関節症動物モデルの軟骨において、炎症性サイトカインの発現を確認した。

具体的には、実験動物の膝関節軟骨組織を採取し、ＴＲＩｚｏｌ試薬を用いてＲＮＡを抽出した後、Ｎａｎｏｄｒｏｐを通じてＲＮＡを定量し、同量のＲＮＡをｃＤＮＡ合成キット（Ｔａｋａｒａ、Ｊａｐａｎ）を用いてｃＤＮＡに合成した後、ｑＲＴ－ＰＣＲを行った。

実験に使用したプライマー配列は、下記の表３に示した。

その結果、図７に示したように、ＭＩＡ誘導変形性関節症動物モデルの軟骨において、炎症性サイトカインであるＩＬ－１β、ＩＦＮ－γ、及びＴＮＦ－αの発現が蒸し生姜抽出物の処理によって有意に減少することを確認し、特に、ＩＬ－１β及びＴＮＦ－αの場合は、生姜抽出物を処理した場合に比べて発現減少効果がさらに高いことが分かった。

２－５．変形性関節症動物モデルの軟骨における軟骨分解抑制及び生成効果の確認

ＭＩＡ誘導変形性関節症動物モデルの軟骨において、軟骨構成成分であるコラーゲンとゼラチンなどを分解するＭＭＰｓ（Ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ）、前記ＭＭＰｓの作用を抑制するＴＩＭＰ（ｔｉｓｓｕｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ）、及び軟骨組織の生成に関与するＣＯＬ－２（ｃｏｌｌａｇｅｎ ｔｙｐｅII）の発現を確認した。

具体的には、変形性関節症動物モデルの関節軟骨における軟骨分解抑制及び軟骨生成効果を確認するために、前記実験例２－４と同一の方法で実験動物の軟骨組織において、ＴＲＩｚｏｌ試薬を用いてＲＮＡを抽出し、Ｎａｎｏｄｒｏｐを通じてＲＮＡを定量した後、同量のＲＮＡをｃＤＮＡ合成キット（Ｔａｋａｒａ、Ｊａｐａｎ）を用いてｃＤＮＡに合成した後、ｑＲＴ－ＰＣＲを用いて遺伝子の発現を確認した。

実験に使用したプライマー配列は、下記の表４に示した。

その結果、図８に示したように、ＭＩＡ誘導変形性関節症動物モデルの軟骨において、生姜抽出物に比べて、蒸し生姜抽出物を処理したときに高いＴＩＭＰ１及びＴＩＭＰ２の発現増加、ＭＭＰ－９の発現減少などの効果を確認しただけでなく、ＣＯＬ－２の発現が有意に増加することを確認した。

これによって、本発明に係る蒸し生姜抽出物は、変形性関節症における軟骨の分解抑制及び軟骨生成効果を示すことを確認した。

２－６．変形性関節症動物モデルの軟骨におけるＩ－κＢ及びＮＦ－κＢ発現の確認

ＭＩＡ誘導変形性関節症動物モデルの軟骨において、変形性関節症の進行によって炎症性サイトカイン及びＭＭＰ生成に関与するＩ－κＢ及びＮＦ－κＢタンパク質の発現を確認した。

具体的には、ＩκＢ及びＮＦ－κＢの発現を確認するために、ＲＩＰＡバッファーを用いて実験動物の軟骨組織からタンパク質を抽出し、同量のタンパク質を１２％のＳＤＳ－ＰＡＧＥで電気泳動した後、ニトロセルローズメンブレンに移動させた。その後、５％のスキムミルクで常温で１時間にわたってブロッキングを行った後、ｐｈｏｓｐｈｏ－ＩκＢ（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ、ＵＳＡ）、ＩκＢ（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ、ＵＳＡ）、ｐｈｏｓｐｈｏ－ＮＦ－κＢ（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、ＵＳＡ）、及びＮＦ－κＢ（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、ＵＳＡ）に対する１次抗体を４℃で一晩中反応させ、酵素、放射線物質、又は蛍光物質などが付着した２次抗体（ＨＰＲ－ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ ｒａｂｂｉｔ又はｍｏｕｓｅ、Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、ＵＳＡ）を常温で１時間にわたって反応させた。１時間後、Ｌｕｍｉ－Ｐｉｃｏ試薬でタンパク質を検出して定量化した。

その結果、図９に示したように、ＭＩＡ誘導変形性関節症動物モデルの軟骨において、生姜抽出物に比べて、蒸し生姜抽出物を処理したときにＩ－κＢ及びＮＦ－κＢのタンパク質発現がさらに有意に減少することを確認し、これによって、本発明に係る蒸し生姜抽出物は、ＮＦ－κＢ減少による抗炎症作用によって変形性関節症改善効果を示すことが分かった。

上述した本発明の説明は、例示のためのものであって、本発明の属する技術分野で通常の知識を有する者であれば、本発明の技術的思想や必須的な特徴を変更せずとも、他の具体的な形態に容易に変形可能であることを理解できるだろう。そのため、以上で記述した各実施例は、全ての面で例示的なものであって、限定的なものではないことを理解しなければならない。

本発明に係る蒸し生姜抽出物又はこれから分離された１－デヒドロ－６－ジンジャージオンは、変形性関節症を予防、改善、又は治療するための機能性食品組成物、薬学的組成物などに有用に用いられることが期待されるので、産業上の利用可能性がある。

Claims (12)

1. １－デヒドロ－６－ジンジャージオンを含む蒸し生姜抽出物、それから分離された１－デヒドロ－６－ジンジャージオン、又はその食品学的に許容可能な塩、を有効成分として含む、変形性関節症の予防又は改善用食品組成物。
2. 前記食品組成物は機能性食品組成物であることを特徴とする、請求項１に記載の食品組成物。
3. 前記蒸し生姜抽出物は、水、Ｃ₁乃至Ｃ₄の低級アルコール、ｎ－ヘキサン、エチルアセテート、アセトン、アセトニトリル、ｎ－ブチルアセテート、１，３－ブチレングリコール、メチレンクロライド、及びこれらの混合溶媒からなる群から選ばれた溶媒で抽出されることを特徴とする、請求項１に記載の食品組成物。
4. 前記蒸し生姜抽出物は、６－ジンゲロール、８－ジンゲロール、１０－ジンゲロール、６－ショウガオール、６－パラドール、８－パラドール、１－デヒドロ－８－ジンジャージオン、及びこれらの食品学的に許容可能な塩からなる群から選ばれた一つ以上を含むことを特徴とする、請求項１に記載の食品組成物。
5. 前記１－デヒドロ－６－ジンジャージオンは、前記蒸し生姜抽出物の乾燥重量に対して０．００１重量％乃至１０重量％の量で含まれることを特徴とする、請求項１に記載の食品組成物。
6. 前記組成物は、インターロイキン－１β（ＩＬ－１β）、腫瘍壊死因子－α（ＴＮＦ－α）、インターフェロン－γ（ＩＦＮ－γ）、及びプロスタグランジンＥ₂（ＰＧＥ₂）からなる群から選ばれる一つ以上の発現を減少させることを特徴とする、請求項１に記載の食品組成物。
7. 前記組成物は、軟骨組織回復、軟骨生成、又は軟骨分解抑制活性を有することを特徴とする、請求項１に記載の食品組成物。
8. 前記組成物は、Ｉ－κＢ又は核因子（ＮＦ）－κＢタンパク質の発現を減少させることを特徴とする、請求項１に記載の食品組成物。
9. １－デヒドロ－６－ジンジャージオンを含む蒸し生姜抽出物、それから分離された１－デヒドロ－６－ジンジャージオン、又はその薬学的に許容可能な塩、を有効成分として含む、変形性関節症の予防又は治療用薬学的組成物。
10. 前記蒸し生姜抽出物は、６－ジンゲロール、８－ジンゲロール、１０－ジンゲロール、６－ショウガオール、６－パラドール、８－パラドール、１－デヒドロ－８－ジンジャージオン、及びこれらの薬学的に許容可能な塩からなる群から選ばれた一つ以上を含むことを特徴とする、請求項９に記載の薬学的組成物。
11. 下記の段階を含む、蒸し生姜抽出物を含む変形性関節症の予防、改善、又は治療用組成物の製造方法：
    （ａ）生姜を洗浄し、８５℃乃至１０５℃で１時間乃至３時間にわたって蒸熟させる段階；
    （ｂ）蒸熟された生姜を４０℃乃至６０℃で３０時間乃至５０時間にわたって乾燥させる段階；
    （ｃ）前記乾燥させた蒸し生姜を溶媒に入れ、７５℃乃至９５℃で１０時間乃至２０時間にわたって抽出する段階；
    （ｄ）前記抽出した蒸し生姜をろ過し、１０℃乃至６５℃の温度で減圧濃縮する段階；及び
    （ｅ）前記減圧濃縮した蒸し生姜抽出物をろ過し、噴霧乾燥させることによって蒸し生姜抽出粉末を製造する段階。
12. １－デヒドロ－６－ジンジャージオンを含む蒸し生姜抽出物、それから分離された１－デヒドロ－６－ジンジャージオン、又はその薬学的又は食品学的に許容可能な塩の、変形性関節症の予防、改善、又は治療に用いられる薬剤の製造のための使用。