JP7590441B2 - 濃縮デバイス、検体液の濃縮方法、検体液の検査方法、及び、検査キット - Google Patents
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Description
本発明は、濃縮デバイス、検体液の濃縮方法、検体液の検査方法、及び、検査キットに関する。
従来、抗原等の生体液中に含まれる高分子を含む水溶液（以下、「検体液」とも言う）を限外濾過器具によって濃縮する技術が知られている（例えば、特許文献１）。
昨今、イムノクロマトグラフィー等の免疫検査方法において、より高感度な方法が求められている。このようななか、本発明者らは、限外濾過器具を用いて検体液を濃縮し、濃縮された検体液を用いて免疫検査を行う方法について検討した。その結果、確かにこのような方法によって感度は向上するが、一方で限外濾過器具を用いた検体液の濃縮は時間がかかり、現場診断（ＰＯＣＴ）には向いていないことが明らかになった。
そこで、本発明は、上記実情を鑑みて、短時間で検体液を濃縮することができる濃縮デバイス、上記濃縮デバイスを用いて検体液を濃縮する検体液の濃縮方法、上記検体液の濃縮方法を用いた検体液の検査方法、及び、上記濃縮デバイスと検出デバイスとを備える検査キットを提供することを目的とする。
本発明者らは、上記課題について鋭意検討した結果、以下の構成により上記課題が解決できることを見出した。
（１） 生体液中に含まれる高分子を含む水溶液である検体液を濃縮するための濃縮デバイスであって、
高吸水性ポリマーが収容された第１の容器と、第２の容器とを備え、
上記第１の容器は、その一部が、孔径が０．０５μｍ以上１０μｍ以下の多孔質膜からなる排出部によって構成され、
上記高吸水性ポリマーが、上記第１の容器の注入された上記検体液に含まれる溶液を吸収し、上記第１の容器中に上記検体液の濃縮液である検体液濃縮液を生成し、
上記第２の容器が、上記排出部から排出された上記検体液濃縮液を回収する、濃縮デバイス。
（２） 上記多孔質膜の材質が、セルロースアセテート、ポリエーテルスルホン、親水性ポリテトラフルオロエチレン、ガラスファイバー、ナイロン、ポリフッ化ビニリデン、及び、ポリオレフィンからなる群より選択される少なくとも１種である、上記（１）に記載の濃縮デバイス。
（３） 上記多孔質膜が、２４ｄｙｎｅｓ／ｃｍ以上７５ｄｙｎｅｓ／ｃｍ以下の表面エネルギーを有する材料からなる、上記（１）又は（２）に記載の濃縮デバイス。
（４） 上記高吸水性ポリマーの膨潤率が、０．２ｇ／ｇ超８００ｇ／ｇ未満である、上記（１）～（３）のいずれかに記載の濃縮デバイス。
（５） 上記高吸水性ポリマーが、ポリアクリル酸系、ポリアクリルアミド系、セルロース系、又は、ポリエチレンオキシド系のポリマーである、上記（１）～（４）のいずれかに記載の濃縮デバイス。
（６） 上記生体液中に含まれる高分子が、抗原である、上記（１）～（５）のいずれかに記載の濃縮デバイス。
（７） 上記検体液が、尿である、上記（１）～（６）のいずれかに記載の濃縮デバイス。
（８） 上記検体液濃縮液中の尿素の濃度が、上記検体液中の尿素の濃度の５倍以下である、上記（７）に記載の濃縮デバイス。
（９） 上記（１）～（８）のいずれかに記載の濃縮デバイスを用いて、生体液中に含まれる高分子を含む水溶液である検体液を濃縮する、検体液の濃縮方法であって、
上記第１の容器に上記検体液を注入する、検体液注入工程と、
上記第１の容器に注入された検体液に含まれる溶液が上記第１の容器に収容された高吸水性ポリマーによって吸収されて、上記第１の容器中に上記検体液の濃縮液である検体液濃縮液が生成する、吸水工程と、
上記検体液濃縮液に対して外力を加えることで、上記検体液濃縮液を上記排出部から排出する、排出工程と、
上記排出部から排出された上記検体液濃縮液を上記第２の容器に回収する、回収工程とをこの順に備える、検体液の濃縮方法。
（１０） 上記外力が、遠心力である、上記（９）に記載の検体液の濃縮方法。
（１１） 上記遠心力が、４，０００～１０，０００回転／分の条件で加えられたものである、上記（１０）に記載の検体液の濃縮方法。
（１２） 生体液中に含まれる高分子を含む水溶液である検体液中の生体液中に含まれる高分子を検出する、検体液の検査方法であって、
上記（９）～（１１）のいずれかに記載の検体液の濃縮方法を用いて、上記検体液濃縮液を得る、濃縮工程と、
得られた上記検体液濃縮液中の生体液中に含まれる高分子を検出する、検出工程とをこの順に備える、検査方法。
（１３） 上記検体液が、抗原を含み得る水溶液であり、
上記濃縮工程が、上記（９）～（１１）のいずれかに記載の検体液の濃縮方法を用いて、上記抗原を含み得る水溶液を濃縮して、抗原濃縮液を得る工程であり、
上記検出工程が、抗原抗体反応を用いたイムノクロマトグラフィーによって上記抗原濃縮液中の抗原を検出する工程である、上記（１２）に記載の検査方法。
（１４） 生体液中に含まれる高分子を含む水溶液である検体液中の生体液中に含まれる高分子を検出するための検査キットであって、
上記（１）～（８）のいずれかに記載の濃縮デバイスと、
上記生体液中に含まれる高分子を検出するための検査領域を有する検査用ストリップと、上記検査領域における検査信号を増幅するための第１の増幅液及び第２の増幅液がそれぞれ封入された第１のポット及び第２のポットと、上記検査用ストリップ、上記第１のポット及び上記第２のポットを内包するハウジングケースとを備える、検出デバイスと、
を備える、検査キット。
高吸水性ポリマーが収容された第１の容器と、第２の容器とを備え、
上記第１の容器は、その一部が、孔径が０．０５μｍ以上１０μｍ以下の多孔質膜からなる排出部によって構成され、
上記高吸水性ポリマーが、上記第１の容器の注入された上記検体液に含まれる溶液を吸収し、上記第１の容器中に上記検体液の濃縮液である検体液濃縮液を生成し、
上記第２の容器が、上記排出部から排出された上記検体液濃縮液を回収する、濃縮デバイス。
（２） 上記多孔質膜の材質が、セルロースアセテート、ポリエーテルスルホン、親水性ポリテトラフルオロエチレン、ガラスファイバー、ナイロン、ポリフッ化ビニリデン、及び、ポリオレフィンからなる群より選択される少なくとも１種である、上記（１）に記載の濃縮デバイス。
（３） 上記多孔質膜が、２４ｄｙｎｅｓ／ｃｍ以上７５ｄｙｎｅｓ／ｃｍ以下の表面エネルギーを有する材料からなる、上記（１）又は（２）に記載の濃縮デバイス。
（４） 上記高吸水性ポリマーの膨潤率が、０．２ｇ／ｇ超８００ｇ／ｇ未満である、上記（１）～（３）のいずれかに記載の濃縮デバイス。
（５） 上記高吸水性ポリマーが、ポリアクリル酸系、ポリアクリルアミド系、セルロース系、又は、ポリエチレンオキシド系のポリマーである、上記（１）～（４）のいずれかに記載の濃縮デバイス。
（６） 上記生体液中に含まれる高分子が、抗原である、上記（１）～（５）のいずれかに記載の濃縮デバイス。
（７） 上記検体液が、尿である、上記（１）～（６）のいずれかに記載の濃縮デバイス。
（８） 上記検体液濃縮液中の尿素の濃度が、上記検体液中の尿素の濃度の５倍以下である、上記（７）に記載の濃縮デバイス。
（９） 上記（１）～（８）のいずれかに記載の濃縮デバイスを用いて、生体液中に含まれる高分子を含む水溶液である検体液を濃縮する、検体液の濃縮方法であって、
上記第１の容器に上記検体液を注入する、検体液注入工程と、
上記第１の容器に注入された検体液に含まれる溶液が上記第１の容器に収容された高吸水性ポリマーによって吸収されて、上記第１の容器中に上記検体液の濃縮液である検体液濃縮液が生成する、吸水工程と、
上記検体液濃縮液に対して外力を加えることで、上記検体液濃縮液を上記排出部から排出する、排出工程と、
上記排出部から排出された上記検体液濃縮液を上記第２の容器に回収する、回収工程とをこの順に備える、検体液の濃縮方法。
（１０） 上記外力が、遠心力である、上記（９）に記載の検体液の濃縮方法。
（１１） 上記遠心力が、４，０００～１０，０００回転／分の条件で加えられたものである、上記（１０）に記載の検体液の濃縮方法。
（１２） 生体液中に含まれる高分子を含む水溶液である検体液中の生体液中に含まれる高分子を検出する、検体液の検査方法であって、
上記（９）～（１１）のいずれかに記載の検体液の濃縮方法を用いて、上記検体液濃縮液を得る、濃縮工程と、
得られた上記検体液濃縮液中の生体液中に含まれる高分子を検出する、検出工程とをこの順に備える、検査方法。
（１３） 上記検体液が、抗原を含み得る水溶液であり、
上記濃縮工程が、上記（９）～（１１）のいずれかに記載の検体液の濃縮方法を用いて、上記抗原を含み得る水溶液を濃縮して、抗原濃縮液を得る工程であり、
上記検出工程が、抗原抗体反応を用いたイムノクロマトグラフィーによって上記抗原濃縮液中の抗原を検出する工程である、上記（１２）に記載の検査方法。
（１４） 生体液中に含まれる高分子を含む水溶液である検体液中の生体液中に含まれる高分子を検出するための検査キットであって、
上記（１）～（８）のいずれかに記載の濃縮デバイスと、
上記生体液中に含まれる高分子を検出するための検査領域を有する検査用ストリップと、上記検査領域における検査信号を増幅するための第１の増幅液及び第２の増幅液がそれぞれ封入された第１のポット及び第２のポットと、上記検査用ストリップ、上記第１のポット及び上記第２のポットを内包するハウジングケースとを備える、検出デバイスと、
を備える、検査キット。
以下に示すように、本発明によれば、短時間で検体液を濃縮することができる濃縮デバイス、上記濃縮デバイスを用いて検体液を濃縮する検体液の濃縮方法、上記検体液の濃縮方法を用いた検体液の検査方法、及び、上記濃縮デバイスと検出デバイスとを備える検査キットを提供することができる。
以下に、本発明の濃縮デバイス、本発明の検体液の濃縮方法、本発明の検体液の検査方法、及び、本発明の検査キットについて説明する。
なお、本明細書において「～」を用いて表される数値範囲は、「～」の前後に記載される数値を下限値及び上限値として含む範囲を意味する。
また、本明細書において各成分は、１種を単独で用いても、２種以上を併用して用いてもよい。ここで、各成分について２種以上を併用する場合、その成分について含有量とは、特段の断りが無い限り、合計の含有量を指す。
また、本明細書において、濃縮時間が短くなること、濃縮率が上がること、検出感度が上がること、及び、Ｓ／Ｎ比（信号／ノイズ比）が上がることを、単に、本発明の効果等が優れる、とも言う。
なお、本明細書において「～」を用いて表される数値範囲は、「～」の前後に記載される数値を下限値及び上限値として含む範囲を意味する。
また、本明細書において各成分は、１種を単独で用いても、２種以上を併用して用いてもよい。ここで、各成分について２種以上を併用する場合、その成分について含有量とは、特段の断りが無い限り、合計の含有量を指す。
また、本明細書において、濃縮時間が短くなること、濃縮率が上がること、検出感度が上がること、及び、Ｓ／Ｎ比（信号／ノイズ比）が上がることを、単に、本発明の効果等が優れる、とも言う。
［１］濃縮デバイス
本発明の濃縮デバイスは、
生体液中に含まれる高分子を含む水溶液である検体液を濃縮するための濃縮デバイスであって、
高吸水性ポリマーが収容された第１の容器と、第２の容器とを備え、
上記第１の容器は、その一部が、孔径が０．０５μｍ以上１０μｍ以下の多孔質膜からなる排出部によって構成され、
上記高吸水性ポリマーが、上記第１の容器の注入された上記検体液に含まれる溶液（水、低分子）を吸収し、上記第１の容器中に上記検体液の濃縮液である検体液濃縮液を生成し、
上記第２の容器が、上記排出部から排出された上記検体液濃縮液を回収する、濃縮デバイスである。
本発明の濃縮デバイスは、
生体液中に含まれる高分子を含む水溶液である検体液を濃縮するための濃縮デバイスであって、
高吸水性ポリマーが収容された第１の容器と、第２の容器とを備え、
上記第１の容器は、その一部が、孔径が０．０５μｍ以上１０μｍ以下の多孔質膜からなる排出部によって構成され、
上記高吸水性ポリマーが、上記第１の容器の注入された上記検体液に含まれる溶液（水、低分子）を吸収し、上記第１の容器中に上記検体液の濃縮液である検体液濃縮液を生成し、
上記第２の容器が、上記排出部から排出された上記検体液濃縮液を回収する、濃縮デバイスである。
最初に図面を用いて、本発明の濃縮デバイスの好適な態様について説明する。
図１は、本発明の濃縮デバイスの好適な態様の模式的断面図である。
図１に示されるように、濃縮デバイス２００は、高吸水性ポリマー２３０が収容された第１の容器２１０と、第２の容器２２０とを備える。第１の容器２１０は、その底部が、孔径が０．０５μｍ以上１０μｍ以下の多孔質膜からなる排出部２１２によって構成されている。第１の容器２１０は開口部２１１を有する。また、第２の容器２２０は開口部２２１を有する。また、第１の容器２１０は第２の容器２２０の中に収容され、第１の容器２１０は、第１の容器２１０の底部である排出部２１２と第２の容器の底面との間に空間が生じるように、第２の容器２２０の中に固定されている。
図１は、本発明の濃縮デバイスの好適な態様の模式的断面図である。
図１に示されるように、濃縮デバイス２００は、高吸水性ポリマー２３０が収容された第１の容器２１０と、第２の容器２２０とを備える。第１の容器２１０は、その底部が、孔径が０．０５μｍ以上１０μｍ以下の多孔質膜からなる排出部２１２によって構成されている。第１の容器２１０は開口部２１１を有する。また、第２の容器２２０は開口部２２１を有する。また、第１の容器２１０は第２の容器２２０の中に収容され、第１の容器２１０は、第１の容器２１０の底部である排出部２１２と第２の容器の底面との間に空間が生じるように、第２の容器２２０の中に固定されている。
以下、本発明の濃縮デバイスを構成する各部材について説明する。
なお、検体液等については後述する本発明の検体液の濃縮方法において説明する。
なお、検体液等については後述する本発明の検体液の濃縮方法において説明する。
［第１の容器］
上述のとおり、第１の容器は、その一部が、孔径が０．０５μｍ以上１０μｍ以下の多孔質膜からなる排出部によって構成されている。また、上述のとおり、第１の容器には、高吸水性ポリマーが収容されている。
上述のとおり、第１の容器は、その一部が、孔径が０．０５μｍ以上１０μｍ以下の多孔質膜からなる排出部によって構成されている。また、上述のとおり、第１の容器には、高吸水性ポリマーが収容されている。
第１の容器の形状は特に制限されないが、筒状（シリンダー）であることが好ましく、円筒状であることがより好ましい。
第１の容器の材質は特に制限されないが、射出成型可能で安価で大量に生産できることから、熱可塑性樹脂であることが好ましい。ある程度の硬度を有することから、具体的には、ポリプロピレン、アクリル、ポリアセタール、ポリアミド、ポリエチレン、ポリエチレンテレフタレート、ポリカーボネート、ポリスチレン、ポリフェニレンサルファイド、ポリブチレンテレフタレート、ポリ塩化ビニル、ＡＢＳ樹脂（アクリロニトリル－ブタジエン－スチレン共重合樹脂）、ＡＳ樹脂（アクリロニトリル－スチレン共重合樹脂）が好ましい。
〔排出部〕
上述のとおり、第１の容器は、その一部が、孔径が０．０５μｍ以上１０μｍ以下の多孔質膜からなる排出部によって構成されている。
排出部の位置は特に制限されないが、第１の容器は、その底部が、上記排出部によって構成されているのが好ましい。
上述のとおり、第１の容器は、その一部が、孔径が０．０５μｍ以上１０μｍ以下の多孔質膜からなる排出部によって構成されている。
排出部の位置は特に制限されないが、第１の容器は、その底部が、上記排出部によって構成されているのが好ましい。
＜多孔質膜＞
上記排出部を構成する多孔質膜は、孔径が０．０５μｍ以上１０μｍ以下の多孔質膜である。上記多孔質膜の孔径が１０μｍ以下であるため、第１の容器に検体液が注入された場合、注入された検体液は大気圧下では検体液が排出部から排出されることなく第１の容器に保持される。
上記排出部を構成する多孔質膜は、孔径が０．０５μｍ以上１０μｍ以下の多孔質膜である。上記多孔質膜の孔径が１０μｍ以下であるため、第１の容器に検体液が注入された場合、注入された検体液は大気圧下では検体液が排出部から排出されることなく第１の容器に保持される。
（孔径）
上記多孔質膜の孔径の上限は、本発明の効果等がより優れる理由から、５以下であることが好ましく、３μｍ以下であることがより好ましく、１μｍ以下であることがさらに好ましい。
上記多孔質膜の孔径の下限は、本発明の効果等がより優れる理由から、０．１μｍ以上であることが好ましく、０．３μｍ以上であることがより好ましく、０．５μｍ以上であることがさらに好ましい。
上記孔径の測定は、光学顕微鏡法、水銀圧入法、ＢＥＴ法等の公知の方法で行うことが可能であるが、本発明では、パームポロメーター（ＰＭＩ社製）を用いたバブルポイント法（ＪＩＳ Ｋ ３８３２に準拠）にて孔径の測定を行うものとする。
上記多孔質膜の孔径の上限は、本発明の効果等がより優れる理由から、５以下であることが好ましく、３μｍ以下であることがより好ましく、１μｍ以下であることがさらに好ましい。
上記多孔質膜の孔径の下限は、本発明の効果等がより優れる理由から、０．１μｍ以上であることが好ましく、０．３μｍ以上であることがより好ましく、０．５μｍ以上であることがさらに好ましい。
上記孔径の測定は、光学顕微鏡法、水銀圧入法、ＢＥＴ法等の公知の方法で行うことが可能であるが、本発明では、パームポロメーター（ＰＭＩ社製）を用いたバブルポイント法（ＪＩＳ Ｋ ３８３２に準拠）にて孔径の測定を行うものとする。
（材質）
上記多孔質膜の材質は特に制限されないが、本発明の効果等がより優れる理由から、セルロースアセテート（ＣＡ）、ポリエーテルスルホン（ＰＥＳ）、ポリテトラフルオロエチレン（ＰＴＦＥ）、ガラスファイバー（ＧＦ）、ナイロン、ポリフッ化ビニリデン（ＰＶＤＦ）、及び、ポリオレフィンからなる群より選択される少なくとも１種であることが好ましく、セルロースアセテート（ＣＡ）、ポリエーテルスルホン（ＰＥＳ）、親水性ポリテトラフルオロエチレン（親水性ＰＴＦＥ）、ガラスファイバー（ＧＦ）、ナイロン、ポリフッ化ビニリデン（ＰＶＤＦ）、及び、ポリオレフィンからなる群より選択される少なくとも１種であることがより好ましく、セルロースアセテート（ＣＡ）、ポリエーテルスルホン（ＰＥＳ）、ガラスファイバー（ＧＦ）、ナイロン、ポリフッ化ビニリデン（ＰＶＤＦ）、及び、ポリオレフィンからなる群より選択される少なくとも１種であることがさらに好ましく、セルロースアセテート（ＣＡ）、ポリエーテルスルホン（ＰＥＳ）、及び、ガラスファイバー（ＧＦ）からなる群より選択される少なくとも１種であることが特に好ましい。
なお、本明細書において、親水性ＰＴＦＥは、後述する表面エネルギーが２５ｄｙｎｅｓ／ｃｍ以上のＰＴＦＥであり、疎水性ＰＴＦＥは、後述する表面エネルギーが２５ｄｙｎｅｓ／ｃｍ未満のＰＴＦＥである。
上記多孔質膜の材質は特に制限されないが、本発明の効果等がより優れる理由から、セルロースアセテート（ＣＡ）、ポリエーテルスルホン（ＰＥＳ）、ポリテトラフルオロエチレン（ＰＴＦＥ）、ガラスファイバー（ＧＦ）、ナイロン、ポリフッ化ビニリデン（ＰＶＤＦ）、及び、ポリオレフィンからなる群より選択される少なくとも１種であることが好ましく、セルロースアセテート（ＣＡ）、ポリエーテルスルホン（ＰＥＳ）、親水性ポリテトラフルオロエチレン（親水性ＰＴＦＥ）、ガラスファイバー（ＧＦ）、ナイロン、ポリフッ化ビニリデン（ＰＶＤＦ）、及び、ポリオレフィンからなる群より選択される少なくとも１種であることがより好ましく、セルロースアセテート（ＣＡ）、ポリエーテルスルホン（ＰＥＳ）、ガラスファイバー（ＧＦ）、ナイロン、ポリフッ化ビニリデン（ＰＶＤＦ）、及び、ポリオレフィンからなる群より選択される少なくとも１種であることがさらに好ましく、セルロースアセテート（ＣＡ）、ポリエーテルスルホン（ＰＥＳ）、及び、ガラスファイバー（ＧＦ）からなる群より選択される少なくとも１種であることが特に好ましい。
なお、本明細書において、親水性ＰＴＦＥは、後述する表面エネルギーが２５ｄｙｎｅｓ／ｃｍ以上のＰＴＦＥであり、疎水性ＰＴＦＥは、後述する表面エネルギーが２５ｄｙｎｅｓ／ｃｍ未満のＰＴＦＥである。
（表面エネルギー）
上記多孔質膜は、本発明の効果等がより優れる理由から、２４ｄｙｎｅｓ／ｃｍ以上７５ｄｙｎｅｓ／ｃｍ以下の表面エネルギーを有する材料からなるのが好ましく、４０ｄｙｎｅｓ／ｃｍ以上７５ｄｙｎｅｓ／ｃｍ以下の表面エネルギーを有する材料からなるのがより好ましい。
上記表面エネルギーの測定は、２０℃５０％ＲＨの環境下で、ポリマー素材のフィルム上に、水、ジヨードメタン（ヨウ化メチレン）、ｎ－ヘキサデカン、を落とした時にできる液滴の接触角をそれぞれ測定し、参考文献１に記載された以下の方法により算出した値を用いるのもとする。
表面エネルギーは、分散成分γd、極性成分γp、水素結合性成分γhからなるとすると、表面エネルギーは、γ＝γd＋γp＋γh（…式（１））と表せる。
液体の表面エネルギーをγＬ、固体の表面エネルギーをγＳ、測定した接触角をθとし、水、ジヨードメタン、ｎ－ヘキサデカンのγd、γp、γh値として、参考文献１のＴable１～３に記載された数値を用いることとし、以下の式（２）を利用して、γＳ d、γＳ p、γＳ hの連立方程式を解くことにより表面エネルギーを算出する。
γＬ（１＋cosθ）＝２（γＳ dγＬ d）1/2＋２（γＳ pγＬ p）1/2＋２（γＳ hγＬ h）1/2（…式（２））
（参考文献１ 北崎寧昭他、日本接着協会誌、Vol.8, No.3, 1972, pp.131-141）
上記多孔質膜は、本発明の効果等がより優れる理由から、２４ｄｙｎｅｓ／ｃｍ以上７５ｄｙｎｅｓ／ｃｍ以下の表面エネルギーを有する材料からなるのが好ましく、４０ｄｙｎｅｓ／ｃｍ以上７５ｄｙｎｅｓ／ｃｍ以下の表面エネルギーを有する材料からなるのがより好ましい。
上記表面エネルギーの測定は、２０℃５０％ＲＨの環境下で、ポリマー素材のフィルム上に、水、ジヨードメタン（ヨウ化メチレン）、ｎ－ヘキサデカン、を落とした時にできる液滴の接触角をそれぞれ測定し、参考文献１に記載された以下の方法により算出した値を用いるのもとする。
表面エネルギーは、分散成分γd、極性成分γp、水素結合性成分γhからなるとすると、表面エネルギーは、γ＝γd＋γp＋γh（…式（１））と表せる。
液体の表面エネルギーをγＬ、固体の表面エネルギーをγＳ、測定した接触角をθとし、水、ジヨードメタン、ｎ－ヘキサデカンのγd、γp、γh値として、参考文献１のＴable１～３に記載された数値を用いることとし、以下の式（２）を利用して、γＳ d、γＳ p、γＳ hの連立方程式を解くことにより表面エネルギーを算出する。
γＬ（１＋cosθ）＝２（γＳ dγＬ d）1/2＋２（γＳ pγＬ p）1/2＋２（γＳ hγＬ h）1/2（…式（２））
（参考文献１ 北崎寧昭他、日本接着協会誌、Vol.8, No.3, 1972, pp.131-141）
〔高吸水性ポリマー〕
上記高吸水性ポリマー（ＳＡＰ）は特に制限されないが、本発明の効果等がより優れる理由から、ポリアクリル酸系、ポリアクリルアミド系、セルロース系、又は、ポリエチレンオキシド系のポリマーであることが好ましい。
上記高吸水性ポリマー（ＳＡＰ）は特に制限されないが、本発明の効果等がより優れる理由から、ポリアクリル酸系、ポリアクリルアミド系、セルロース系、又は、ポリエチレンオキシド系のポリマーであることが好ましい。
＜膨潤率＞
上記高吸水性ポリマーの膨潤率は特に制限されないが、本発明の効果等がより優れる理由から、０．２ｇ／ｇ超８００ｇ／ｇ未満であることが好ましく、１．０ｇ／ｇ以上６００ｇ／ｇ以下であることがより好ましく、１０ｇ／ｇ以上５００ｇ／ｇ以下であることがさらに好ましく、２０ｇ／ｇ以上１００ｇ／ｇ以下であることが特に好ましい。
ここで、膨潤率とは、「高吸水性ポリマー１ｇが保持する水の質量（ｇ）」として定義される値である。
上記高吸水性ポリマーの膨潤率は特に制限されないが、本発明の効果等がより優れる理由から、０．２ｇ／ｇ超８００ｇ／ｇ未満であることが好ましく、１．０ｇ／ｇ以上６００ｇ／ｇ以下であることがより好ましく、１０ｇ／ｇ以上５００ｇ／ｇ以下であることがさらに好ましく、２０ｇ／ｇ以上１００ｇ／ｇ以下であることが特に好ましい。
ここで、膨潤率とは、「高吸水性ポリマー１ｇが保持する水の質量（ｇ）」として定義される値である。
（膨潤率の測定方法）
２５℃５％ＲＨ（相対湿度）で１０日間保管した高吸水性ポリマーの質量を測定し、その後すぐに、多量の蒸留水の中に浸漬させる。１２０分後、高吸水性ポリマーを取り出し、表面の水を除去して、再度質量を測定し、以下の計算式を用いて膨潤率を測定する。
{（吸水後の質量（ｇ）－吸水前の初期質量（ｇ））／吸水前の初期質量（ｇ）}
２５℃５％ＲＨ（相対湿度）で１０日間保管した高吸水性ポリマーの質量を測定し、その後すぐに、多量の蒸留水の中に浸漬させる。１２０分後、高吸水性ポリマーを取り出し、表面の水を除去して、再度質量を測定し、以下の計算式を用いて膨潤率を測定する。
{（吸水後の質量（ｇ）－吸水前の初期質量（ｇ））／吸水前の初期質量（ｇ）}
膨潤率を上述した特定の範囲に調整する方法は特に制限されないが、ポリマーの種類を変更する、ポリマーの分子量を変更する、架橋度を変更する、粒子径を変更する等の方法が挙げられる。
＜吸水速度＞
上記高吸水性ポリマーの吸水速度は特に制限されないが、本発明の効果等がより優れる理由から、高吸水性ポリマー１ｇ当たり０．０１ｇ／分以上４０ｇ／分以下であることが好ましく、高吸水性ポリマー１ｇ当たり０．０２ｇ／分以上４０ｇ／分以下であることがより好ましい。
上記高吸水性ポリマーの吸水速度は特に制限されないが、本発明の効果等がより優れる理由から、高吸水性ポリマー１ｇ当たり０．０１ｇ／分以上４０ｇ／分以下であることが好ましく、高吸水性ポリマー１ｇ当たり０．０２ｇ／分以上４０ｇ／分以下であることがより好ましい。
上記吸水速度は以下のように測定する。
２５℃５％ＲＨ（相対湿度）で１０日間保管した高吸水性ポリマーの質量を測定し（重量Ｍ０、単位ｇ）、その後すぐに、多量の蒸留水の中に浸漬させる。１０分後、高吸水性ポリマーを取り出し、表面の水を除去して、質量を測定する（質量Ｍ１０）。質量測定後ただちに、多量の蒸留水の中に再び浸漬させる。１０分後、高吸水性ポリマーを取り出し、表面の水を除去して、再度質量を測定する（質量Ｍ２０）。質量Ｍ２０の測定後ただちに、多量の蒸留水の中に再び浸漬させる。１０分後、高吸水性ポリマーを取り出し、表面の水を除去して、再度重量を測定する（質量Ｍ３０）。
２５℃５％ＲＨ（相対湿度）で１０日間保管した高吸水性ポリマーの質量を測定し（重量Ｍ０、単位ｇ）、その後すぐに、多量の蒸留水の中に浸漬させる。１０分後、高吸水性ポリマーを取り出し、表面の水を除去して、質量を測定する（質量Ｍ１０）。質量測定後ただちに、多量の蒸留水の中に再び浸漬させる。１０分後、高吸水性ポリマーを取り出し、表面の水を除去して、再度質量を測定する（質量Ｍ２０）。質量Ｍ２０の測定後ただちに、多量の蒸留水の中に再び浸漬させる。１０分後、高吸水性ポリマーを取り出し、表面の水を除去して、再度重量を測定する（質量Ｍ３０）。
以下のように吸水量を定義する。
１０分間の吸水量： ΔＭ１０ ＝ （Ｍ１０－Ｍ０）／Ｍ０２０分間の吸水量： ΔＭ２０ ＝ （Ｍ２０－Ｍ０）／Ｍ０３０分間の吸水量： ΔＭ３０ ＝ （Ｍ３０－Ｍ０）／Ｍ０
上記のように定義した吸水量を用いて、以下のように吸水速度を求める。
横軸時間（ｘ＝１０，２０，３０；単位 分）と縦軸吸水量（ｙ＝ΔＭ１０、ΔＭ２０、ΔＭ３０；単位 ｇ水／ｇポリマー量）としてＸ－Ｙ平面に３点をプロットし、最小二乗法を用いた時間に対する吸水量の直線近似式の傾きを、単位時間（分）あたりの吸水速度とする。
１０分間の吸水量： ΔＭ１０ ＝ （Ｍ１０－Ｍ０）／Ｍ０２０分間の吸水量： ΔＭ２０ ＝ （Ｍ２０－Ｍ０）／Ｍ０３０分間の吸水量： ΔＭ３０ ＝ （Ｍ３０－Ｍ０）／Ｍ０
上記のように定義した吸水量を用いて、以下のように吸水速度を求める。
横軸時間（ｘ＝１０，２０，３０；単位 分）と縦軸吸水量（ｙ＝ΔＭ１０、ΔＭ２０、ΔＭ３０；単位 ｇ水／ｇポリマー量）としてＸ－Ｙ平面に３点をプロットし、最小二乗法を用いた時間に対する吸水量の直線近似式の傾きを、単位時間（分）あたりの吸水速度とする。
＜粒子径＞
上記高吸水性ポリマーは粒子状であることが好ましく、その場合の粒子径は、本発明の効果等がより優れる理由から、１０ｍｍ以下であることが好ましく、８ｍｍ以下であることがより好ましく、５ｍｍ以下であることがさらに好ましい。上記高吸水性ポリマーの粒子径の下限は、本発明の効果等がより優れる理由から、０．００１ｍｍ以上であることが好ましく、０．００５ｍｍ以上であることがより好ましく、０．０１ｍｍ以上であることがさらに好ましい。
また、上述した多孔質膜の孔径に対する上記粒子径の割合（粒子径／孔径）は、本発明の効果等がより優れる理由から、１～１０００であることが好ましく、１０～１００であることがより好ましい。
ここで、上記粒子径は、光学顕微鏡により５０個の粒子状のポリマーの直径を測定し、その算術平均値として求めることができる。
上記高吸水性ポリマーは粒子状であることが好ましく、その場合の粒子径は、本発明の効果等がより優れる理由から、１０ｍｍ以下であることが好ましく、８ｍｍ以下であることがより好ましく、５ｍｍ以下であることがさらに好ましい。上記高吸水性ポリマーの粒子径の下限は、本発明の効果等がより優れる理由から、０．００１ｍｍ以上であることが好ましく、０．００５ｍｍ以上であることがより好ましく、０．０１ｍｍ以上であることがさらに好ましい。
また、上述した多孔質膜の孔径に対する上記粒子径の割合（粒子径／孔径）は、本発明の効果等がより優れる理由から、１～１０００であることが好ましく、１０～１００であることがより好ましい。
ここで、上記粒子径は、光学顕微鏡により５０個の粒子状のポリマーの直径を測定し、その算術平均値として求めることができる。
［第２の容器］
上記第２の容器は、上述した第１の容器の排出部から排出された検体液濃縮液を回収するための容器である。
上記第２の容器は、上述した第１の容器の少なくとも排出部を内包するものであることが好ましく、上述した第１の容器の全てを内包するものであることが好ましい。
上記第２の容器の形状及び材質の好適な態様は、上述した第１の容器と同じである。
上記第２の容器は、上述した第１の容器の排出部から排出された検体液濃縮液を回収するための容器である。
上記第２の容器は、上述した第１の容器の少なくとも排出部を内包するものであることが好ましく、上述した第１の容器の全てを内包するものであることが好ましい。
上記第２の容器の形状及び材質の好適な態様は、上述した第１の容器と同じである。
［２］検体液の濃縮方法
本発明の検体液の濃縮方法（以下、「本発明の濃縮方法」とも言う）は、
上述した本発明の濃縮デバイスを用いて、生体液中に含まれる高分子を含む水溶液である検体液を濃縮する、検体液の濃縮方法であって、
上記第１の容器に上記検体液を注入する、検体液注入工程と、
上記第１の容器に注入された検体液に含まれる溶液（水、低分子）が上記第１の容器に収容された高吸水性ポリマーによって吸収されて、上記第１の容器中に上記検体液の濃縮液である検体液濃縮液が生成する、吸水工程と、
上記検体液濃縮液に対して外力を加えることで、上記検体液濃縮液を上記排出部から排出する、排出工程と、
上記排出部から排出された上記検体液濃縮液を上記第２の容器に回収する、回収工程とをこの順に備える、検体液の濃縮方法である。
本発明の検体液の濃縮方法（以下、「本発明の濃縮方法」とも言う）は、
上述した本発明の濃縮デバイスを用いて、生体液中に含まれる高分子を含む水溶液である検体液を濃縮する、検体液の濃縮方法であって、
上記第１の容器に上記検体液を注入する、検体液注入工程と、
上記第１の容器に注入された検体液に含まれる溶液（水、低分子）が上記第１の容器に収容された高吸水性ポリマーによって吸収されて、上記第１の容器中に上記検体液の濃縮液である検体液濃縮液が生成する、吸水工程と、
上記検体液濃縮液に対して外力を加えることで、上記検体液濃縮液を上記排出部から排出する、排出工程と、
上記排出部から排出された上記検体液濃縮液を上記第２の容器に回収する、回収工程とをこの順に備える、検体液の濃縮方法である。
最初に図面を用いて、本発明の濃縮方法の好適な態様について説明する。
図３（図３Ａ～図３Ｄ）は、本発明の濃縮方法の好適な態様を工程順に示す模式的断面図である。
図３（図３Ａ～図３Ｄ）は、本発明の濃縮方法の好適な態様を工程順に示す模式的断面図である。
まず、検体液注入工程において、上述した図１の濃縮デバイス２００の第２の容器２２０の開口部２２１及び第１の容器２１０の開口部２１１から第１の容器２１０に検体液２４０を注入する（図３Ａ）。濃縮デバイス２００については上述のとおりである。ここで、第１の容器２１０は、その底部が、孔径が０．０５μｍ以上１０μｍ以下の多孔質膜からなる排出部２１２によって構成されているが、上述のとおり、多孔質膜の孔径が１０μｍ以下であるため、注入された検体液２４０は、排出部２１２から排出されることなく、第１の容器２１０に保持される。
その後、吸水工程において、検体液２４０に含まれる溶液（水、低分子）が高吸水性ポリマー２３０によって吸収されて、第１の容器２１０中に検体液２４０の濃縮液である検体液濃縮液２４２が生成する（高吸水性ポリマー２３０は膨潤した高吸水性ポリマー２３２となる）（図３Ｂ）。
次いで、排出工程において、吸水工程後の濃縮デバイス２０２を小型卓上遠心機に入れ、検体液濃縮液２４２に対して図３Ｃの上から下の方向（排出部の方向）に遠心力を加えることで、検体液濃縮液２４２を排出部２１２から排出する（図３Ｃ）。なお、上述のとおり、多孔質膜の孔径が０．０５μｍ以上であるため、小型卓上遠心機（例えば、４，０００～１０，０００回転／分（ｒｐｍ））でも排出することが可能である（特許文献１に記載されるような限外濾過器具の場合、大型の遠心機が必要となる）。また、遠心回数が１回で済む（特許文献１に記載されるような限外濾過器具の場合、後述する比較例Ａ４や比較例Ｂ４に示されるように、遠心回数が２回必要である）。このように、特許文献１に記載されるような限外濾過器具と比較して、上記方法は極めて簡便である（小型卓上遠心機を利用できる、遠心回数が１回で済む）。
そして、回収工程において、排出部２１２から排出された検体液濃縮液２４２を第２の容器２２０に回収する（図３Ｄ）。このようにして、検体液濃縮液を得ることができる。
以下、各工程について説明する。
［検体液注入工程］
検体液注入工程は、上述した本発明の濃縮デバイスの第１の容器に検体液を注入する工程である。検体液注入工程によって、第１の容器に検体液が注入され、検体液は、第１の容器に収容された高吸水性ポリマーと混合される。ここで、第１の容器は、その一部が、孔径が０．０５μｍ以上１０μｍ以下の多孔質膜からなる排出部によって構成されているが、上述のとおり、多孔質膜の孔径が１０μｍ以下であるため、注入された検体液は、排出部から排出されることなく、第１の容器に保持される。
検体液注入工程は、上述した本発明の濃縮デバイスの第１の容器に検体液を注入する工程である。検体液注入工程によって、第１の容器に検体液が注入され、検体液は、第１の容器に収容された高吸水性ポリマーと混合される。ここで、第１の容器は、その一部が、孔径が０．０５μｍ以上１０μｍ以下の多孔質膜からなる排出部によって構成されているが、上述のとおり、多孔質膜の孔径が１０μｍ以下であるため、注入された検体液は、排出部から排出されることなく、第１の容器に保持される。
〔濃縮デバイス〕
本発明の濃縮デバイスについては上述のとおりである。
本発明の濃縮デバイスについては上述のとおりである。
〔検体液〕
上記検体液は、生体液中に含まれる高分子を含む水溶液である。
上記検体液の具体例としては、動物（特にヒト）の体液（例えば、血液、血清、血漿、髄液、涙液、汗、尿、膿、鼻水、又は喀痰）、うがい液等を挙げることができる。
上記検体液は、本発明の効果等がより優れる理由から、尿であることが好ましい。
上記検体液は、生体液中に含まれる高分子を含む水溶液である。
上記検体液の具体例としては、動物（特にヒト）の体液（例えば、血液、血清、血漿、髄液、涙液、汗、尿、膿、鼻水、又は喀痰）、うがい液等を挙げることができる。
上記検体液は、本発明の効果等がより優れる理由から、尿であることが好ましい。
＜生体液中に含まれる高分子＞
上記生体液中に含まれる高分子（特に抗原）としては、例えば、主として疾病の判断に有用な高分子であり、生体液中から検出される、菌、細菌（例えば、結核菌、結核菌に含まれるリポアラビノマンナン（ＬＡＭ））、バクテリア、ウイルス（例えば、インフルエンザウイルス）や、それらの核タンパク質等が挙げられる。なお、ＬＡＭは、結核における主要な抗原であり、細胞膜および細胞壁の主要構成成分である糖脂質である。
上記生体液中に含まれる高分子は、本発明の効果等がより優れる理由から、抗原であることが好ましく、ウイルス（特に、インフルエンザウイルス）又はＬＡＭであることがより好ましく、ＬＡＭであることがさらに好ましい。
上記生体液中に含まれる高分子（特に抗原）としては、例えば、主として疾病の判断に有用な高分子であり、生体液中から検出される、菌、細菌（例えば、結核菌、結核菌に含まれるリポアラビノマンナン（ＬＡＭ））、バクテリア、ウイルス（例えば、インフルエンザウイルス）や、それらの核タンパク質等が挙げられる。なお、ＬＡＭは、結核における主要な抗原であり、細胞膜および細胞壁の主要構成成分である糖脂質である。
上記生体液中に含まれる高分子は、本発明の効果等がより優れる理由から、抗原であることが好ましく、ウイルス（特に、インフルエンザウイルス）又はＬＡＭであることがより好ましく、ＬＡＭであることがさらに好ましい。
上記検体液中の生体液中に含まれる高分子の濃度は特に制限されないが、本発明の効果等がより優れる理由から、０．０００１ｎｇ／ｍＬ以上１ｍｇ／ｍＬ以下であることが好ましく、０．００１ｎｇ／ｍＬ以上１μｇ／ｍＬ以下であることがより好ましく、０．０１ｎｇ／ｍＬ以上１ｎｇ／ｍＬ以下であることがさらに好ましい。
＜検体液の前処理＞
上記検体液は、検体液をそのままで、又は、抗原を適当な抽出用溶媒を用いて抽出して得られる抽出液の形で、更には、抽出液を適当な希釈剤で希釈して得られる希釈液の形、若しくは抽出液を適当な方法で濃縮した形で、用いることができる。
上記抽出用溶媒としては、通常の免疫学的分析法で用いられる溶媒（例えば、水、生理食塩液、又は緩衝液等）、あるいは、かかる溶媒で希釈することにより直接抗原抗体反応を実施することができる水混和性有機溶媒を用いることもできる。
上記検体液は、検体液をそのままで、又は、抗原を適当な抽出用溶媒を用いて抽出して得られる抽出液の形で、更には、抽出液を適当な希釈剤で希釈して得られる希釈液の形、若しくは抽出液を適当な方法で濃縮した形で、用いることができる。
上記抽出用溶媒としては、通常の免疫学的分析法で用いられる溶媒（例えば、水、生理食塩液、又は緩衝液等）、あるいは、かかる溶媒で希釈することにより直接抗原抗体反応を実施することができる水混和性有機溶媒を用いることもできる。
〔検体液に対する高吸水性ポリマーの割合〕
検体液に対する高吸水性ポリマーの割合は特に制限されないが、本発明の効果等がより優れる理由から、検体液１ｍＬに対して、０．０１～１００ｇであることが好ましく、０．１～５０ｇであることがより好ましい。
検体液に対する高吸水性ポリマーの割合は特に制限されないが、本発明の効果等がより優れる理由から、検体液１ｍＬに対して、０．０１～１００ｇであることが好ましく、０．１～５０ｇであることがより好ましい。
［吸水工程］
吸水工程は、第１の容器に注入された検体液に含まれる溶液（水、低分子）が第１の容器に収容された高吸水性ポリマーによって吸収されて、第１の容器中に検体液の濃縮液である検体液濃縮液が生成する工程である。
検体液と高吸水性ポリマーとを混合した場合、検体液中の溶液（水、低分子）は高吸水性ポリマーに取り込まれるのに対して、検体液中の生体液中に含まれる高分子（例えば、抗原）は、ある程度の流体力学半径を有するため、高吸水性ポリマーの表面の網目構造がふるい効果を生み出し、高吸水性ポリマーに取り込まれ難い。結果として、検体液中の生体液中に含まれる高分子（例えば、抗原）が濃縮される。
吸水工程は、第１の容器に注入された検体液に含まれる溶液（水、低分子）が第１の容器に収容された高吸水性ポリマーによって吸収されて、第１の容器中に検体液の濃縮液である検体液濃縮液が生成する工程である。
検体液と高吸水性ポリマーとを混合した場合、検体液中の溶液（水、低分子）は高吸水性ポリマーに取り込まれるのに対して、検体液中の生体液中に含まれる高分子（例えば、抗原）は、ある程度の流体力学半径を有するため、高吸水性ポリマーの表面の網目構造がふるい効果を生み出し、高吸水性ポリマーに取り込まれ難い。結果として、検体液中の生体液中に含まれる高分子（例えば、抗原）が濃縮される。
上記検体液が尿である場合、検体液濃縮液中の尿素の濃度は、本発明の効果等がより優れる理由から、検体液中の尿素の濃度の５倍以下であることが好ましい。
吸水工程は、例えば、上述した検体液注入工程後の本発明のデバイスを静置する方法等が挙げられる。静置時間は特に制限されないが、本発明の効果等がより優れる理由から、１～３０分であることが好ましく、１～１０分であることがより好ましい。
［排出工程］
排出工程は、検体液濃縮液に対して外力を加えることで、検体液濃縮液を排出部から排出する工程である。
検体液濃縮液に対して外力を加えることで、検体液濃縮液が排出部に対して押し付けられて、検体液濃縮液が排出部から排出される。
外力は、本発明の効果等がより優れる理由から、遠心力であることが好ましい。
上記遠心力は、本発明の効果等がより優れる理由から、小型（例えば、５０ｃｍ立方以下の大きさ）の卓上の遠心機（小型卓上遠心機）を用いて加えられたものであることが好ましい。
上記遠心力は、本発明の効果等がより優れる理由から、４，０００～１０，０００回転／分の条件（回転数）で加えられたものであることが好ましい。
排出工程は、検体液濃縮液に対して外力を加えることで、検体液濃縮液を排出部から排出する工程である。
検体液濃縮液に対して外力を加えることで、検体液濃縮液が排出部に対して押し付けられて、検体液濃縮液が排出部から排出される。
外力は、本発明の効果等がより優れる理由から、遠心力であることが好ましい。
上記遠心力は、本発明の効果等がより優れる理由から、小型（例えば、５０ｃｍ立方以下の大きさ）の卓上の遠心機（小型卓上遠心機）を用いて加えられたものであることが好ましい。
上記遠心力は、本発明の効果等がより優れる理由から、４，０００～１０，０００回転／分の条件（回転数）で加えられたものであることが好ましい。
［回収工程］
回収工程は、排出部から排出された検体液濃縮液を第２の容器に回収する工程である。
このようにして、検体液濃縮液を得ることができる。
回収工程は、排出部から排出された検体液濃縮液を第２の容器に回収する工程である。
このようにして、検体液濃縮液を得ることができる。
［３］検体液の検査方法
本発明の検体液の検査方法（以下、「本発明の検査方法」とも言う）は、
生体液中に含まれる高分子を含む水溶液である検体液中の生体液中に含まれる高分子を検出する、検体液の検査方法であって、
上述した本発明の検体液の濃縮方法（上述した本発明の濃縮方法）を用いて、上記検体液濃縮液を得る、濃縮工程と、
得られた上記検体液濃縮液中の生体液中に含まれる高分子を検出する、検出工程とをこの順に備える、検査方法である。
本発明の検体液の検査方法（以下、「本発明の検査方法」とも言う）は、
生体液中に含まれる高分子を含む水溶液である検体液中の生体液中に含まれる高分子を検出する、検体液の検査方法であって、
上述した本発明の検体液の濃縮方法（上述した本発明の濃縮方法）を用いて、上記検体液濃縮液を得る、濃縮工程と、
得られた上記検体液濃縮液中の生体液中に含まれる高分子を検出する、検出工程とをこの順に備える、検査方法である。
本発明の検査方法では、上述した本発明の濃縮方法で得られた検体液濃縮液を用いて生体液中に含まれる高分子の検出を行うため、高い検出感度が得られる。
［濃縮工程］
本発明の濃縮方法を用いて検体液濃縮液を得る方法については上述のとおりである。
本発明の濃縮方法を用いて検体液濃縮液を得る方法については上述のとおりである。
［検出工程］
検出工程は、検体液濃縮液中の生体液中に含まれる高分子を検出する工程である。
検出工程は、本発明の効果等がより優れる理由から、抗原抗体反応を用いる方法であることが好ましく、そのような方法としては、例えば、酵素免疫測定法（ＥＩＡ）、固相酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）、放射線免疫測定法（ＲＩＡ）、蛍光免疫測定法（ＦＩＡ）、ウエスタンブロット法、イムノクロマトグラフィー等が挙げられる。なかでも、本発明の効果等がより優れる理由から、イムノクロマトグラフィーが好ましい。
検出工程は、検体液濃縮液中の生体液中に含まれる高分子を検出する工程である。
検出工程は、本発明の効果等がより優れる理由から、抗原抗体反応を用いる方法であることが好ましく、そのような方法としては、例えば、酵素免疫測定法（ＥＩＡ）、固相酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）、放射線免疫測定法（ＲＩＡ）、蛍光免疫測定法（ＦＩＡ）、ウエスタンブロット法、イムノクロマトグラフィー等が挙げられる。なかでも、本発明の効果等がより優れる理由から、イムノクロマトグラフィーが好ましい。
［好適な態様］
本発明の検査方法は、本発明の効果等がより優れる理由から、
上記検体液が、抗原（生体液中に含まれる高分子）を含み得る水溶液であり、
上記濃縮工程が、上述した本発明の濃縮方法を用いて、上記抗原を含み得る水溶液を濃縮して、抗原濃縮液（検体液濃縮液）を得る工程であり、
上記検出工程が、抗原抗体反応を用いたイムノクロマトグラフィーによって上記抗原濃縮液中の抗原を検出する工程である、検査方法であるのが好ましい。
本発明の検査方法は、本発明の効果等がより優れる理由から、
上記検体液が、抗原（生体液中に含まれる高分子）を含み得る水溶液であり、
上記濃縮工程が、上述した本発明の濃縮方法を用いて、上記抗原を含み得る水溶液を濃縮して、抗原濃縮液（検体液濃縮液）を得る工程であり、
上記検出工程が、抗原抗体反応を用いたイムノクロマトグラフィーによって上記抗原濃縮液中の抗原を検出する工程である、検査方法であるのが好ましい。
ここで、上記検出工程は、本発明の効果等がより優れる理由から、
上記抗原濃縮液中の抗原と、上記抗原と結合し得る第１の結合物質で修飾された金粒子である修飾金粒子との複合体である金粒子複合体を形成させた状態で、上記抗原と結合し得る第２の結合物質が固定化された反応部位を有する不溶性担体に展開する、展開工程と、
上記不溶性担体の反応部位において、上記金粒子複合体を捕捉する、捕捉工程とを備えるのが好ましい。
上記検出工程は、本発明の効果等がより優れる理由から、
さらに、上記捕捉工程で捕捉された金粒子複合体を銀増幅する、銀増幅工程を備えるのが好ましい。
ここで、本発明の効果等がより優れる理由から、上記第１の結合物質及び上記第２の結合物質の少なくとも一方はモノクローナル抗体であることが好ましく、上記第１の結合物質及び上記第２の結合物質の両方がモノクローナル抗体であることがより好ましい。
上記抗原濃縮液中の抗原と、上記抗原と結合し得る第１の結合物質で修飾された金粒子である修飾金粒子との複合体である金粒子複合体を形成させた状態で、上記抗原と結合し得る第２の結合物質が固定化された反応部位を有する不溶性担体に展開する、展開工程と、
上記不溶性担体の反応部位において、上記金粒子複合体を捕捉する、捕捉工程とを備えるのが好ましい。
上記検出工程は、本発明の効果等がより優れる理由から、
さらに、上記捕捉工程で捕捉された金粒子複合体を銀増幅する、銀増幅工程を備えるのが好ましい。
ここで、本発明の効果等がより優れる理由から、上記第１の結合物質及び上記第２の結合物質の少なくとも一方はモノクローナル抗体であることが好ましく、上記第１の結合物質及び上記第２の結合物質の両方がモノクローナル抗体であることがより好ましい。
なお、検体液中には、低分子成分や塩等の夾雑物が含まれる場合がある。例えば、検体液が尿である場合、尿素等の夾雑物が含まれる。本発明者らの検討から、生体液中に含まれる高分子と一緒にこれらの夾雑物が濃縮された場合、抗原抗体反応が阻害され、検出感度が低下してしまう場合があることが知見されている。すなわち、濃縮による検出感度の向上効果が十分に得られない場合があることが分かっている。
そのため、上述した濃縮工程で用いられる上述した本発明の濃縮デバイスにおいて、高吸水性ポリマーの膨潤率は上述した好適な範囲であることが好ましい。上記範囲であると、これらの夾雑物は水と一緒に高吸水性ポリマーに取り込まれ、上述したような検出感度の低下は生じ難く、結果として、極めて高い検出感度が達成されるものと考えられる。
そのため、上述した濃縮工程で用いられる上述した本発明の濃縮デバイスにおいて、高吸水性ポリマーの膨潤率は上述した好適な範囲であることが好ましい。上記範囲であると、これらの夾雑物は水と一緒に高吸水性ポリマーに取り込まれ、上述したような検出感度の低下は生じ難く、結果として、極めて高い検出感度が達成されるものと考えられる。
以下、上記好適な態様（以下、「本発明の方法」とも言う）が備える各工程について説明する。
〔展開工程〕
展開工程は、上述した濃縮工程で得られた抗原濃縮液中の抗原と、上記抗原と結合し得る第１の結合物質で修飾された金粒子である修飾金粒子との複合体である金粒子複合体を形成させた状態で、上記抗原と結合し得る第２の結合物質が固定化された反応部位を有する不溶性担体に展開する工程である。
展開工程は、上述した濃縮工程で得られた抗原濃縮液中の抗原と、上記抗原と結合し得る第１の結合物質で修飾された金粒子である修飾金粒子との複合体である金粒子複合体を形成させた状態で、上記抗原と結合し得る第２の結合物質が固定化された反応部位を有する不溶性担体に展開する工程である。
＜金粒子複合体＞
上述のとおり、展開工程では、まず、上述した濃縮工程で得られた抗原濃縮液中の抗原と、上記抗原と結合し得る第１の結合物質で修飾された金粒子である修飾金粒子との複合体である金粒子複合体を形成させる。
上述のとおり、展開工程では、まず、上述した濃縮工程で得られた抗原濃縮液中の抗原と、上記抗原と結合し得る第１の結合物質で修飾された金粒子である修飾金粒子との複合体である金粒子複合体を形成させる。
（修飾金粒子）
修飾金粒子は、上記抗原と結合し得る第１の結合物質で修飾された金粒子である。
修飾金粒子は、上記抗原と結合し得る第１の結合物質で修飾された金粒子である。
（１）金粒子
金粒子は特に制限されないが、本発明の効果等がより優れる理由から、金コロイド粒子であることが好ましい。
金粒子は、本発明の方法が後述する銀増幅工程を備える場合、銀増幅工程において銀イオンを還元する触媒として働く。
金粒子は特に制限されないが、本発明の効果等がより優れる理由から、金コロイド粒子であることが好ましい。
金粒子は、本発明の方法が後述する銀増幅工程を備える場合、銀増幅工程において銀イオンを還元する触媒として働く。
上記金粒子の粒子径は、本発明の効果等がより優れる理由から、５００ｎｍ以下であることが好ましく、３００ｎｍ以下であることがより好ましく、２００ｎｍ以下であることがさらに好ましく、１００ｎｍ以下であることが特に好ましい。
上記金粒子の粒子径の下限は特に制限されないが、本発明の効果等がより優れる理由から、１ｎｍ以上であることが好ましく、２ｎｍ以上であることがより好ましく、５ｎｍ以上であることがさらに好ましい。
上記金粒子の粒子径の下限は特に制限されないが、本発明の効果等がより優れる理由から、１ｎｍ以上であることが好ましく、２ｎｍ以上であることがより好ましく、５ｎｍ以上であることがさらに好ましい。
なお、粒子径は、市販の粒度分布計等で計測することができる。粒度分布の測定法としては、光学顕微鏡法、共焦点レーザー顕微鏡法、電子顕微鏡法、原子間力顕微鏡法、静的光散乱法、レーザー回折法、動的光散乱法、遠心沈降法、電気パルス計測法、クロマトグラフィー法、超音波減衰法等が知られており、それぞれの原理に対応した装置が市販されている。粒子径の測定方法としては、粒子径範囲および測定の容易さから、動的光散乱法を好ましく用いることができる。動的光散乱を用いた市販の測定装置としては、ナノトラックＵＰＡ（日機装（株））、動的光散乱式粒径分布測定装置ＬＢ－５５０（（株）堀場製作所）、濃厚系粒径アナライザーＦＰＡＲ－１０００（大塚電子（株））等が挙げられ、本発明においては、２５℃の測定温度で測定したメジアン径（ｄ＝５０）の値として求める。
（２）第１の結合物質
第１の結合物質は上記抗原と結合し得るものであれば特に制限されないが、本発明の効果等がより優れる理由から、タンパク質であることが好ましく、抗体（例えば、ポリクローナル抗体、あるいはモノクローナル抗体）であることがより好ましく、モノクローナル抗体であることがより高い検出感度を実現する観点でさらに好ましい。
上記抗体は特に制限されないが、例えば、抗原によって免疫された動物の血清から調製する抗血清や、抗血清から精製された免疫グロブリン画分を用いることが可能であり、また、抗原によって免疫された動物の脾臓細胞を用いる細胞融合によって得られるモノクローナル抗体、あるいは、それらの断片［例えば、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、又はＦｖ］を用いることができる。これらの抗体の調製は、常法により行うことができる。
第１の結合物質は上記抗原と結合し得るものであれば特に制限されないが、本発明の効果等がより優れる理由から、タンパク質であることが好ましく、抗体（例えば、ポリクローナル抗体、あるいはモノクローナル抗体）であることがより好ましく、モノクローナル抗体であることがより高い検出感度を実現する観点でさらに好ましい。
上記抗体は特に制限されないが、例えば、抗原によって免疫された動物の血清から調製する抗血清や、抗血清から精製された免疫グロブリン画分を用いることが可能であり、また、抗原によって免疫された動物の脾臓細胞を用いる細胞融合によって得られるモノクローナル抗体、あるいは、それらの断片［例えば、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、又はＦｖ］を用いることができる。これらの抗体の調製は、常法により行うことができる。
抗原がＬＡＭである場合の、第１の結合物質の一例としては、国際公開２０１７／１３９１５３号に記載のＡ１９４－０１抗体が挙げられる。Ａ１９４－０１抗体に関する国際公開２０１７／１３９１５３号に記載の内容はすべて本明細書の開示の一部として本明細書中に援用される。
抗原がＬＡＭである場合の、第１の結合物質の別の一例としては、国際公開２０１３／１２９６３４号の段落番号［００８０］においてＭｏＡｂ１として記載される配列を有する抗体を挙げることができる。ＭｏＡｂ１抗体に関する国際公開２０１３／１２９６３４号に記載の内容はすべて本明細書の開示の一部として本明細書中に援用される。
抗原がＬＡＭである場合の、第１の結合物質の別の一例としては、国際公開２０１３／１２９６３４号の段落番号［００８０］においてＭｏＡｂ１として記載される配列を有する抗体を挙げることができる。ＭｏＡｂ１抗体に関する国際公開２０１３／１２９６３４号に記載の内容はすべて本明細書の開示の一部として本明細書中に援用される。
（３）修飾金粒子の製造方法
上記修飾金粒子を製造する方法は特に制限されず、公知の方法を用いることができる。例えば、金とＳＨ基とが化学結合することを利用し、抗体にＳＨ基を導入後、金粒子と接近するときにＳＨ結合が開裂してＡｕ表面上に生成するＡｕ－Ｓ結合で固定化させる等の化学的な結合方法が挙げられる。
上記修飾金粒子を製造する方法は特に制限されず、公知の方法を用いることができる。例えば、金とＳＨ基とが化学結合することを利用し、抗体にＳＨ基を導入後、金粒子と接近するときにＳＨ結合が開裂してＡｕ表面上に生成するＡｕ－Ｓ結合で固定化させる等の化学的な結合方法が挙げられる。
＜不溶性担体＞
上記不溶性担体は、上記抗原と結合し得る第２の結合物質が固定化された反応部位（テストライン）を有する不溶性担体である。不溶性担体は、抗原の種類に合わせて複数のテストラインを有していてもよい（例えば、インフルエンザＡ型ウイルス用のテストラインとインフルエンザＢ型用のテストライン）。また、不溶性担体は、上記金粒子複合体の展開を確認するために、テストラインより下流側にコントロールラインを有していてもよい。また、後述する銀増幅工程において還元剤液を用いる場合には、還元剤液を検出するために、テストラインより下流側に発色試薬固定化ラインを有していてもよい。
上記不溶性担体の具体的な態様としては、例えば、図４に示されるような、上流側から、金コロイド保持パッド３０１、テストライン３０２、コントロールライン３０３、発色試薬固定化ライン３０４を有するニトロセルロースメンブレン３００が挙げられる。ここで、金コロイド保持パッド３０１は第１の結合物質で修飾された金粒子（修飾金粒子）を保持するパッドであり、テストライン３０２は第２の結合物質が固定化されたラインであり、コントロールライン３０３は展開を確認するためのラインであり、発色試薬固定化ライン３０４は後述する還元剤液を検出するためのラインである。ここで上流側、下流側とは、金粒子複合体が展開する際、上流側から下流側に向けて展開することを意図した記載を意味する。
上記不溶性担体（又はこれを有するイムノクロマトグラフキット）のより具体的な態様としては、例えば、特許第５７２８４５３号公報に記載の不溶性担体及びイムノクロマトグラフキットが挙げられ、不溶性担体及びイムノクロマトグラフキットに関する特許第５７２８４５３号公報に記載の内容はすべて本明細書の開示の一部として本明細書中に援用される。
上記不溶性担体は、上記抗原と結合し得る第２の結合物質が固定化された反応部位（テストライン）を有する不溶性担体である。不溶性担体は、抗原の種類に合わせて複数のテストラインを有していてもよい（例えば、インフルエンザＡ型ウイルス用のテストラインとインフルエンザＢ型用のテストライン）。また、不溶性担体は、上記金粒子複合体の展開を確認するために、テストラインより下流側にコントロールラインを有していてもよい。また、後述する銀増幅工程において還元剤液を用いる場合には、還元剤液を検出するために、テストラインより下流側に発色試薬固定化ラインを有していてもよい。
上記不溶性担体の具体的な態様としては、例えば、図４に示されるような、上流側から、金コロイド保持パッド３０１、テストライン３０２、コントロールライン３０３、発色試薬固定化ライン３０４を有するニトロセルロースメンブレン３００が挙げられる。ここで、金コロイド保持パッド３０１は第１の結合物質で修飾された金粒子（修飾金粒子）を保持するパッドであり、テストライン３０２は第２の結合物質が固定化されたラインであり、コントロールライン３０３は展開を確認するためのラインであり、発色試薬固定化ライン３０４は後述する還元剤液を検出するためのラインである。ここで上流側、下流側とは、金粒子複合体が展開する際、上流側から下流側に向けて展開することを意図した記載を意味する。
上記不溶性担体（又はこれを有するイムノクロマトグラフキット）のより具体的な態様としては、例えば、特許第５７２８４５３号公報に記載の不溶性担体及びイムノクロマトグラフキットが挙げられ、不溶性担体及びイムノクロマトグラフキットに関する特許第５７２８４５３号公報に記載の内容はすべて本明細書の開示の一部として本明細書中に援用される。
（不溶性担体）
不溶性担体は、多孔性担体が好ましい。特に、本発明の効果等がより優れる理由から、ニトロセルロース膜（ニトロセルロースメンブレン）、セルロース膜、アセチルセルロース膜、ポリスルホン膜、ポリエーテルスルホン膜、ナイロン膜、ガラス繊維、不織布、布、または糸等が好ましく、ニトロセルロース膜がより好ましい。
不溶性担体は、多孔性担体が好ましい。特に、本発明の効果等がより優れる理由から、ニトロセルロース膜（ニトロセルロースメンブレン）、セルロース膜、アセチルセルロース膜、ポリスルホン膜、ポリエーテルスルホン膜、ナイロン膜、ガラス繊維、不織布、布、または糸等が好ましく、ニトロセルロース膜がより好ましい。
（第２の結合物質）
第２の結合物質は上記抗原と結合し得るものであれば特に制限されない。
第２の結合物質の具体例及び好適な態様は、上述した第１の結合物質と同じである。
第２の結合物質は上記抗原と結合し得るものであれば特に制限されない。
第２の結合物質の具体例及び好適な態様は、上述した第１の結合物質と同じである。
なお、上記第２の結合物質は上述した第１の結合物質と同じであっても異なってもよいが、本発明の効果等がより優れる理由から、異なる物質である態様が好ましい。
また、第１の結合物質及び第２の結合物質が抗体である場合、第１の結合物質である抗体と第２の結合物質である抗体は、本発明の効果等がより優れる理由から、異なる態様が好ましい。
また、第１の結合物質及び第２の結合物質が抗体である場合、第１の結合物質のエピトープ（第１の結合物質が認識する抗原の一部）と第２の結合物質のエピトープ（第２の結合物質が認識する抗原の一部）は、本発明の効果等がより優れる理由から、異なる態様が好ましい。抗体のエピトープが異なることは、例えば、ＥＬＩＳＡ（Ｅｎｚｙｍｅ－Ｌｉｎｋｅｄ Ｉｍｍｕｎｏ Ｓｏｒｂｅｎｔ Ａｓｓａｙ）によって確認することができる。
また、第１の結合物質及び第２の結合物質が抗体である場合、第１の結合物質である抗体と第２の結合物質である抗体は、本発明の効果等がより優れる理由から、異なる態様が好ましい。
また、第１の結合物質及び第２の結合物質が抗体である場合、第１の結合物質のエピトープ（第１の結合物質が認識する抗原の一部）と第２の結合物質のエピトープ（第２の結合物質が認識する抗原の一部）は、本発明の効果等がより優れる理由から、異なる態様が好ましい。抗体のエピトープが異なることは、例えば、ＥＬＩＳＡ（Ｅｎｚｙｍｅ－Ｌｉｎｋｅｄ Ｉｍｍｕｎｏ Ｓｏｒｂｅｎｔ Ａｓｓａｙ）によって確認することができる。
＜展開＞
金粒子複合体を形成させた状態でテストラインを有する不溶性担体に展開する方法は特に制限されないが、例えば、上述した図４に示されるようなニトロセルロースメンブレン３００（又はこれを有するイムノクロマトグラフキット）を準備して、上述した濃縮工程で得られた抗原濃縮液を金コロイド保持パッドに滴下し、図４に示されるように上流側から下流側に毛細管現象を利用して移動させる方法等が挙げられる。
金粒子複合体を形成させた状態でテストラインを有する不溶性担体に展開する方法は特に制限されないが、例えば、上述した図４に示されるようなニトロセルロースメンブレン３００（又はこれを有するイムノクロマトグラフキット）を準備して、上述した濃縮工程で得られた抗原濃縮液を金コロイド保持パッドに滴下し、図４に示されるように上流側から下流側に毛細管現象を利用して移動させる方法等が挙げられる。
〔捕捉工程〕
捕捉工程は、上記不溶性担体の反応部位において、上記金粒子複合体を捕捉する工程である。
上述のとおり、不溶性担体の反応部位には抗原と結合し得る第２の結合物質が固定化されているため、上記展開工程で不溶性担体に展開された金粒子複合体（抗原と修飾金粒子との複合体）は、不溶性担体の反応部位（テストライン）で捕捉される。
捕捉された金粒子複合体は金粒子の表面プラズモン等により着色するため、視認できる。また、画像解析装置等を用いて、捕捉された複合体の濃度を見積もることもできる。このようにして、試料中の抗原を検出することができる。
なお、試料が抗原を含まない場合には上記金粒子複合体が形成されないため、不溶性担体の反応部位で捕捉されず、着色しない。
捕捉工程は、上記不溶性担体の反応部位において、上記金粒子複合体を捕捉する工程である。
上述のとおり、不溶性担体の反応部位には抗原と結合し得る第２の結合物質が固定化されているため、上記展開工程で不溶性担体に展開された金粒子複合体（抗原と修飾金粒子との複合体）は、不溶性担体の反応部位（テストライン）で捕捉される。
捕捉された金粒子複合体は金粒子の表面プラズモン等により着色するため、視認できる。また、画像解析装置等を用いて、捕捉された複合体の濃度を見積もることもできる。このようにして、試料中の抗原を検出することができる。
なお、試料が抗原を含まない場合には上記金粒子複合体が形成されないため、不溶性担体の反応部位で捕捉されず、着色しない。
〔銀増幅工程〕
銀増幅工程は、上記捕捉工程で捕捉された金粒子複合体を銀増幅する工程である。
銀増幅工程は、上記捕捉工程後の不溶性担体に銀イオンを付与することで、不溶性担体の反応部位で捕捉された金粒子複合体に大きな銀粒子を形成する工程である。より詳細には、上記金粒子複合体の金粒子を触媒として銀イオンが還元され、銀粒子（例えば、直径１０μｍ以上）が形成される工程である。
これにより、捕捉された金粒子複合体の検出感度が著しく向上する。
なお、展開工程とともに銀増幅工程を行ってもよく、銀増幅工程が展開工程を兼ねていてもよい。
銀増幅工程は、上記捕捉工程で捕捉された金粒子複合体を銀増幅する工程である。
銀増幅工程は、上記捕捉工程後の不溶性担体に銀イオンを付与することで、不溶性担体の反応部位で捕捉された金粒子複合体に大きな銀粒子を形成する工程である。より詳細には、上記金粒子複合体の金粒子を触媒として銀イオンが還元され、銀粒子（例えば、直径１０μｍ以上）が形成される工程である。
これにより、捕捉された金粒子複合体の検出感度が著しく向上する。
なお、展開工程とともに銀増幅工程を行ってもよく、銀増幅工程が展開工程を兼ねていてもよい。
＜好適な態様＞
上記捕捉工程後の不溶性担体に銀イオンを付与する方法は特に制限されないが、本発明の効果等がより優れる理由から、下記還元剤液及び下記銀増幅液を使用する方法が好ましい。
また、還元剤液及び銀増幅液に加えて、特異的な結合反応以外で不溶性担体に残存している複合体を洗浄するために洗浄液を使用してもよい。上記還元液は洗浄液を兼ねていてもよい。
上記捕捉工程後の不溶性担体に銀イオンを付与する方法は特に制限されないが、本発明の効果等がより優れる理由から、下記還元剤液及び下記銀増幅液を使用する方法が好ましい。
また、還元剤液及び銀増幅液に加えて、特異的な結合反応以外で不溶性担体に残存している複合体を洗浄するために洗浄液を使用してもよい。上記還元液は洗浄液を兼ねていてもよい。
（還元剤液）
上記還元剤液は、銀イオンを還元し得る還元剤を含有する。銀イオンを還元し得る還元剤は、銀イオンを銀に還元することができれば、無機・有機のいかなる材料、またはその混合物でも用いることができる。無機還元剤としては、Ｆｅ２＋、Ｖ２＋、Ｔｉ３＋、などの金属イオンで原子価の変化し得る還元性金属塩、還元性金属錯塩を好ましく挙げることができる。無機還元剤を用いる際には、酸化されたイオンを錯形成するか還元して、除去するか無害化する必要がある。例えば、Ｆｅ２＋を還元剤として用いる系では、クエン酸やエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）を用いて酸化物であるＦｅ３＋の錯体を形成し、無害化することができる。本発明ではこのような無機還元剤を用いることが好ましく、本発明のより好ましい態様としては、Ｆｅ２＋の金属塩を還元剤として用いることが好ましい。
上記還元剤液は、銀イオンを還元し得る還元剤を含有する。銀イオンを還元し得る還元剤は、銀イオンを銀に還元することができれば、無機・有機のいかなる材料、またはその混合物でも用いることができる。無機還元剤としては、Ｆｅ２＋、Ｖ２＋、Ｔｉ３＋、などの金属イオンで原子価の変化し得る還元性金属塩、還元性金属錯塩を好ましく挙げることができる。無機還元剤を用いる際には、酸化されたイオンを錯形成するか還元して、除去するか無害化する必要がある。例えば、Ｆｅ２＋を還元剤として用いる系では、クエン酸やエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）を用いて酸化物であるＦｅ３＋の錯体を形成し、無害化することができる。本発明ではこのような無機還元剤を用いることが好ましく、本発明のより好ましい態様としては、Ｆｅ２＋の金属塩を還元剤として用いることが好ましい。
なお、湿式のハロゲン化銀写真感光材料に用いられる現像主薬（例えばメチル没食子酸塩、ヒドロキノン、置換ヒドロキノン、３－ピラゾリドン類、ｐ－アミノフェノール類、ｐ－フェニレンジアミン類、ヒンダードフェノール類、アミドキシム類、アジン類、カテコール類、ピロガロール類、アスコルビン酸（またはその誘導体）、およびロイコ色素類）、および本分野での技術に熟練しているものにとって明らかなその他の材料、例えば米国特許第６，０２０，１１７号に記載されている材料も還元剤として用いることができる。
還元剤としては、アスコルビン酸還元剤も好ましい。有用なアスコルビン酸還元剤は、アスコルビン酸とその類縁体、異性体とその誘導体を含み、例えば、Ｄ－またはＬ－アスコルビン酸とその糖誘導体（例えばγ－ラクトアスコルビン酸、グルコアスコルビン酸、フコアスコルビン酸、グルコヘプトアスコルビン酸、マルトアスコルビン酸）、アスコルビン酸のナトリウム塩、アスコルビン酸のカリウム塩、イソアスコルビン酸（又はＬ－エリスロアスコルビン酸）、その塩（例えばアルカリ金属塩、アンモニウム塩又は当技術分野において知られている塩）、エンジオールタイプのアスコルビン酸、エナミノールタイプのアスコルビン酸、チオエノ－ルタイプのアスコルビン酸等を好ましく挙げることができ、特にはＤ、ＬまたはＤ，Ｌ－アスコルビン酸（そして、そのアルカリ金属塩）若しくはイソアスコルビン酸（またはそのアルカリ金属塩）が好ましく、ナトリウム塩が好ましい塩である。必要に応じてこれらの還元剤の混合物を用いることができる。
還元剤液は、本発明の効果等がより優れる理由から、展開工程における展開方向と還元剤液の展開方向との間の角度が０度～１５０度になるように流すのが好ましく、展開工程における展開方向と還元剤液の展開方向との間の角度が０度～１３５度になるように流すのがより好ましい。
なお、展開工程における展開方向と還元剤液の展開方向との間の角度を調節する方法としては、例えば、特開２００９－１５０８６９号公報の実施例に記載の方法等が挙げられる。
なお、展開工程における展開方向と還元剤液の展開方向との間の角度を調節する方法としては、例えば、特開２００９－１５０８６９号公報の実施例に記載の方法等が挙げられる。
（銀増幅液）
上記銀増幅液は、銀イオンを含む化合物を含有する液である。銀イオンを含む化合物としては、例えば、有機銀塩、無機銀塩、もしくは銀錯体を用いることができる。好ましくは、水などの溶媒に対して溶解度の高い銀イオン含有化合物である、硝酸銀、酢酸銀、乳酸銀、酪酸銀、チオ硫酸銀などが挙げられる。特に好ましくは硝酸銀である。銀錯体としては、水酸基やスルホン基など水溶性基を有する配位子に配位された銀錯体が好ましく、ヒドロキシチオエーテル銀等が挙げられる。
上記銀増幅液は、銀イオンを含む化合物を含有する液である。銀イオンを含む化合物としては、例えば、有機銀塩、無機銀塩、もしくは銀錯体を用いることができる。好ましくは、水などの溶媒に対して溶解度の高い銀イオン含有化合物である、硝酸銀、酢酸銀、乳酸銀、酪酸銀、チオ硫酸銀などが挙げられる。特に好ましくは硝酸銀である。銀錯体としては、水酸基やスルホン基など水溶性基を有する配位子に配位された銀錯体が好ましく、ヒドロキシチオエーテル銀等が挙げられる。
有機銀塩、無機銀塩、もしくは銀錯体は、銀として銀増幅液に０．００１ｍｏｌ／Ｌ～５ｍｏｌ／Ｌ、好ましくは０．００５ｍｏｌ／Ｌ～３ｍｏｌ／Ｌ、更には０．０１ｍｏｌ／Ｌ～１ｍｏｌ／Ｌの濃度で含有されることが好ましい。
銀増幅液の助剤としては、緩衝剤、防腐剤、例えば酸化防止剤または有機安定剤、速度調節剤等が挙げられる。緩衝剤としては、例えば、酢酸、クエン酸、水酸化ナトリウムまたはこれらの塩のうちの一つ、又はトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンを用いた緩衝剤、その他一般的化学実験に用いられる緩衝剤を用いることができる。これら緩衝剤を適宜用いて、その増幅溶液に最適なｐＨに調整することができる。また、カブリ防止剤としてアルキルアミンを助剤として用いることができ、特に好ましくはドデシルアミンである。またこれら助剤の溶解性向上のため、界面活性剤を用いることができ、特に好ましくはＣ９Ｈ１９－Ｃ６Ｈ４－Ｏ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）５０Ｈである。
銀増幅液は、本発明の効果等がより優れる理由から、上述した展開工程と逆方向から流すのが好ましく、展開工程における展開方向と還元剤液の展開方向との間の角度が４５度～１８０度になるように流すのがより好ましい。
なお、展開工程における展開方向と銀増幅液の展開方向との間の角度を調節する方法としては、例えば、特開２００９－１５０８６９号公報の実施例に記載の方法等が挙げられる。
なお、展開工程における展開方向と銀増幅液の展開方向との間の角度を調節する方法としては、例えば、特開２００９－１５０８６９号公報の実施例に記載の方法等が挙げられる。
［４］検査キット
本発明の検査キットは、
生体液中に含まれる高分子を含む水溶液である検体液中の生体液中に含まれる高分子を検出するための検査キットであって、
上述した本発明の濃縮デバイスと、
上記生体液中に含まれる高分子を検出するための検査領域を有する検査用ストリップと、上記検査領域における検査信号を増幅するための第１の増幅液及び第２の増幅液がそれぞれ封入された第１のポット及び第２のポットと、上記検査用ストリップ、上記第１のポット及び上記第２のポットを内包するハウジングケースとを備える、検出デバイスと、
を備える、検査キットである。
本発明の検査キットは、
生体液中に含まれる高分子を含む水溶液である検体液中の生体液中に含まれる高分子を検出するための検査キットであって、
上述した本発明の濃縮デバイスと、
上記生体液中に含まれる高分子を検出するための検査領域を有する検査用ストリップと、上記検査領域における検査信号を増幅するための第１の増幅液及び第２の増幅液がそれぞれ封入された第１のポット及び第２のポットと、上記検査用ストリップ、上記第１のポット及び上記第２のポットを内包するハウジングケースとを備える、検出デバイスと、
を備える、検査キットである。
［濃縮デバイス］
本発明の濃縮デバイスについては上述のとおりである。
本発明の濃縮デバイスについては上述のとおりである。
［検出デバイス］
上記検出デバイスは、
上記生体液中に含まれる高分子を検出するための検査領域を有する検査用ストリップと、上記検査領域における検査信号を増幅するための第１の増幅液及び第２の増幅液がそれぞれ封入された第１のポット及び第２のポットと、上記検査用ストリップ、上記第１のポット及び上記第２のポットを内包するハウジングケースとを備える、検出デバイスである。
上記検出デバイスは、
上記生体液中に含まれる高分子を検出するための検査領域を有する検査用ストリップと、上記検査領域における検査信号を増幅するための第１の増幅液及び第２の増幅液がそれぞれ封入された第１のポット及び第２のポットと、上記検査用ストリップ、上記第１のポット及び上記第２のポットを内包するハウジングケースとを備える、検出デバイスである。
〔好適な態様〕
以下、上記検出デバイスの好適な態様について説明する。
以下、上記検出デバイスの好適な態様について説明する。
上記検出デバイスは、本発明の効果等がより優れる理由から、
試料液（検体液）中の被検物質（生体液中に含まれる高分子）を検出するイムノクロマトグラフキットであって、
試料液を展開させる、被検物質の検査領域を有する不溶性担体を含む検査用ストリップと、
検査領域における検出信号を増幅するための、第１の増幅液および第２の増幅液がそれぞれ封入された、シート部材を備えた一面を有する第１のポットおよび第２のポットと、
検査用ストリップ、第１のポットおよび第２のポットを内包するハウジングケースとを備え、
ハウジングケースが、検査用ストリップが配置される収容部を備えた下部ケースと、下部ケースと周縁で接合された上部ケースと、上部ケースと下部ケースとの間に配置された中間部材とを備えてなり、
中間部材が、第１のポットのシート部材を破断する破断部を、第１のポットのシート部材に面して備え、
上部ケースが、第１のポットに対向する部分に、外部から押圧力が加えられることにより、第１のポット側に変形して、第１のポットのシート部材を中間部材の破断部により破断する第１の凸状変形部と、第２のポットに対向する部分に、外部から押圧力を加えることにより、第２のポット側に変形して第２のポットのシート部材を破断する第２の凸状変形部とを備えてなるイムノクロマトグラフキット（以下、「本発明のイムノクロマトグラフキット」又は単に「イムノクロマトグラフキット」とも言う）であることが好ましい。
試料液（検体液）中の被検物質（生体液中に含まれる高分子）を検出するイムノクロマトグラフキットであって、
試料液を展開させる、被検物質の検査領域を有する不溶性担体を含む検査用ストリップと、
検査領域における検出信号を増幅するための、第１の増幅液および第２の増幅液がそれぞれ封入された、シート部材を備えた一面を有する第１のポットおよび第２のポットと、
検査用ストリップ、第１のポットおよび第２のポットを内包するハウジングケースとを備え、
ハウジングケースが、検査用ストリップが配置される収容部を備えた下部ケースと、下部ケースと周縁で接合された上部ケースと、上部ケースと下部ケースとの間に配置された中間部材とを備えてなり、
中間部材が、第１のポットのシート部材を破断する破断部を、第１のポットのシート部材に面して備え、
上部ケースが、第１のポットに対向する部分に、外部から押圧力が加えられることにより、第１のポット側に変形して、第１のポットのシート部材を中間部材の破断部により破断する第１の凸状変形部と、第２のポットに対向する部分に、外部から押圧力を加えることにより、第２のポット側に変形して第２のポットのシート部材を破断する第２の凸状変形部とを備えてなるイムノクロマトグラフキット（以下、「本発明のイムノクロマトグラフキット」又は単に「イムノクロマトグラフキット」とも言う）であることが好ましい。
本発明のイムノクロマトグラフキットにおいては、第１の凸状変形部が、押圧力が加えられることにより、第１のポットを、シート部材が中間部材の破断部により破断される位置まで移動させるものであることが好ましい。
このとき、上部ケースが、第１の凸状変形部に押圧力を加えた際に第１のポットに当接して移動させる、第１のポット側に向かって立設された２つの突起部を備えることが好ましい。
このとき、上部ケースが、第１の凸状変形部に押圧力を加えた際に第１のポットに当接して移動させる、第１のポット側に向かって立設された２つの突起部を備えることが好ましい。
本発明のイムノクロマトグラフキットにおいては、第１の凸状変形部が中央対称な山型形状を有していることが好ましい。
また、このとき、２つの突起部が、山型形状の頂上に対して対称に配置されていることが好ましい。
また、２つの突起部が、山型形状の頂上を挟む斜面に互いに独立して形成されていることも好ましい。
また、このとき、２つの突起部が、山型形状の頂上に対して対称に配置されていることが好ましい。
また、２つの突起部が、山型形状の頂上を挟む斜面に互いに独立して形成されていることも好ましい。
本発明のイムノクロマトグラフキットにおいては、第１の凸状変形部が上述の２つの突起部を備えているとき、この２つの突起部が、第１のポットの当接面の中央に対して対称に配置されていることが好ましい。
また、２つの突起部が、第１のポットの当接面の中央から端部までの距離の半分よりも端部側に配置されていることが好ましい。
また、２つの突起部が、第１のポットの当接面の中央から端部までの距離の半分よりも端部側に配置されていることが好ましい。
なお、本明細書において凸状変形部は、イムノクロマトグラフキットの外部から見た場合に凸状であることを意味する、また、山型形状も同様に、外部から見て山型であることを意味する。
本発明のイムノクロマトグラフキットにおいては、第１の凸状変形部が上述の２つの突起部を備えているとき、この２つの突起部のそれぞれの先端が第１のポットに当接し、徐々に端部側に変位しつつ第１のポットを移動させるように構成することができる。
本発明のイムノクロマトグラフキットにおいては、第１の凸状変形部を構成する材質の曲げ弾性率が５０ＭＰａ～３５０ＭＰａであることが好ましい。
また、上部ケースを構成する材質の曲げ弾性率が５０ＭＰａ～３５０ＭＰａであり、下部ケースを構成する材質の曲げ弾性率が５００ＭＰａ～９００ＭＰａであることが好ましい。
また、上部ケースを構成する材質の曲げ弾性率が５０ＭＰａ～３５０ＭＰａであり、下部ケースを構成する材質の曲げ弾性率が５００ＭＰａ～９００ＭＰａであることが好ましい。
本発明のイムノクロマトグラフキットにおいては、上部ケースが、射出成形により第１の凸状変形部および第２の凸状変形部を一体的に形成されてなるものであることが好ましい。
本発明のイムノクロマトグラフキットは、上部ケースが、第１のポットに対向する部分に、外部から押圧力が加えられることにより、第１のポット側に変形して、第１のポットのシート部材を中間部材の破断部により破断する第１の凸状変形部と、第２のポットに対向する部分に、外部から押圧力を加えることにより、第２のポット側に変形して第２のポットのシート部材を破断する第２の凸状変形部とを備え、２つの凸状変形部にヒトが指等で押圧力を加えることで、変形させて、ポットのシート部材を破断させることができ、増幅液を検査用ストリップに供給することができるため、電源を要する専用の分析装置がなくても、増幅反応を正常に行うことができる。従って本発明のイムノクロマトグラフキットは専用の分析装置を備えていない、あるいは分析装置が使用できない非常時、災害時等において特に有用である。
以下、本発明のイムノクロマトグラフキットの実施形態について図面を用いて説明するが、本発明のイムノクロマトグラフキットはこれに限られるものではない。なお、視認しやすくするため、図面中の各構成要素の縮尺等は実際のものとは適宜変化させてある。
図５は、本発明の実施形態にかかるイムノクロマトグラフキット１００の概略斜視図であり、図６は、図５のイムノクロマトグラフキット１００の分解概略斜視図である。
図５および図６に示すように、本実施形態のイムノクロマトグラフキット１００は、試料液を展開させる、被検物質の検査領域を有する不溶性担体２を含む検査用ストリップ１と、検査領域における検出信号を増幅するための、第１の増幅液４１および第２の増幅液４６がそれぞれ封入された、シート部材を備えた一面を有する第１のポット４０および第２のポット４５とがハウジングケース９に内包されてなる。ハウジングケース９は、検査用ストリップ１が配置される収容部２１を備えた下部ケース２０と、下部ケース２０と周縁で接合された上部ケース１０と、上部ケース１０と下部ケース２０との間に配置された中間部材３０とを備えてなる。なお、本イムノクロマトグラフキット１００を説明するに当たっては、上部ケース１０側を上、下部ケース２０側を下と定義する。
図５および図６に示すように、本実施形態のイムノクロマトグラフキット１００は、試料液を展開させる、被検物質の検査領域を有する不溶性担体２を含む検査用ストリップ１と、検査領域における検出信号を増幅するための、第１の増幅液４１および第２の増幅液４６がそれぞれ封入された、シート部材を備えた一面を有する第１のポット４０および第２のポット４５とがハウジングケース９に内包されてなる。ハウジングケース９は、検査用ストリップ１が配置される収容部２１を備えた下部ケース２０と、下部ケース２０と周縁で接合された上部ケース１０と、上部ケース１０と下部ケース２０との間に配置された中間部材３０とを備えてなる。なお、本イムノクロマトグラフキット１００を説明するに当たっては、上部ケース１０側を上、下部ケース２０側を下と定義する。
中間部材３０は、第１のポット４０を受容し、第１の増幅液４１を不溶性担体２上に滴下させるための増幅液充填孔を底面に備えたポット収容部３２を有している。また、ポット収容部３２内の第１のポット４０のシート部材４３に面する位置にシート部材４３を破断する突起状の破断部３４が設けられている。本例においては、ポット収容部３２の上方に第１のポット４０が、そのシート部材４３を有する面が下面となるように配置されており、そのシート部材４３に対向するポット収容部３２の底面に破断部３４が設けられている（図７参照）。
また中間部材３０のポット収容部３２の底面の下流側に延在する流路形成部３５を備えている。流路形成部３５は、検査領域Ｌ１、確認領域Ｌ２および増幅指標領域Ｌ３の上方位置に一致して配置され、これらの領域Ｌ１～Ｌ３を視認可能とするために透明な材料で形成されている。
また中間部材３０のポット収容部３２の底面の下流側に延在する流路形成部３５を備えている。流路形成部３５は、検査領域Ｌ１、確認領域Ｌ２および増幅指標領域Ｌ３の上方位置に一致して配置され、これらの領域Ｌ１～Ｌ３を視認可能とするために透明な材料で形成されている。
上部ケース１０は、第１のポット４０に対向する部分に、外部から押圧力が加えられることにより、第１のポット４０側に変形してその第１のポット４０のシート部材４３を中間部材３０の破断部３４により破断させる第１の凸状変形部１２を備えている。また、上部ケース１０は、第２のポット４５に対向する部分に、外部から押圧力を加えることにより、第２のポット４５側に変形して第２のポット４５のシート部材４８を破断する第２の凸状変形部１４を備えている。
また、上部ケース１０には、試料液滴下用開孔１６が設けられており、この開孔１６から検査用ストリップ１の標識保持パッド３上に試料液が滴下される。開孔１６と標識保持パッド３との位置が一致するように、標識保持パッド３の位置を調整することで、標識保持パッド３上に確実に試料液を点着することが可能となる。また、上部ケース１０は、中間部材３０の流路形成部３５に対応する位置に３つの領域Ｌ１～Ｌ３を視認するための観察窓１８を備えている。
また、上部ケース１０には、試料液滴下用開孔１６が設けられており、この開孔１６から検査用ストリップ１の標識保持パッド３上に試料液が滴下される。開孔１６と標識保持パッド３との位置が一致するように、標識保持パッド３の位置を調整することで、標識保持パッド３上に確実に試料液を点着することが可能となる。また、上部ケース１０は、中間部材３０の流路形成部３５に対応する位置に３つの領域Ｌ１～Ｌ３を視認するための観察窓１８を備えている。
下部ケース２０には、検査用ストリップ１が配置される収容部として、不溶性担体２が載置される不溶性担体収容部２１およびその下流側に吸収パッド６が載置される吸収パッド収容部２２が設けられている。また、不溶性担体収容部２１の上流側には第２のポット４５が収容される第２のポット収容部２４が設けられている。
図７は、検査用ストリップ１、中間部材３０および２つのポット４０、４５の位置関係を示す模式的断面図である。検査用ストリップ１は、図７に示すように、試料液を展開させる不溶性担体２と、不溶性担体２上に固定された被検物質に結合可能な第１の物質で修飾された標識物質を含む標識保持パッド３と、不溶性担体２の一端に接触して配置された第２の増幅液４６を不溶性担体２に送液する送液用パッド４と、不溶性担体２の他端に接触して配置された吸収パッド６とを備えている。不溶性担体２はバック粘着シート７上に固定されて支持されている。そして、不溶性担体２は、標識保持パッド３と吸収パッド６との間に、被検物質に結合する第２の物質を含む検査領域Ｌ１、第１の物質に結合可能な物質を含む確認領域Ｌ２、第２の増幅液と反応する物質を含む増幅指標領域Ｌ３を標識保持パッド３側から順に有する。
なお、本明細書において検査領域Ｌ１、確認領域Ｌ２および増幅指標領域Ｌ３が形成されてなる不溶性担体２をクロマトグラフ担体と称する場合がある。また、本明細書においては、図７に記載のように送液用パッド４側を上流、吸収パッド６側を下流として定義する。
中間部材３０は検査用ストリップ１の下流端側の上部に位置されており、第１のポット４０はシート部材４３を下にして、中間部材３０のポット収容部３２中に配置されている。第２のポット４５はシート部材４８を上にして、下部ケース２０の検査用ストリップ１の上流端の下方に収容されている。
図７に示されているように、中間部材３０の流路形成部３５の裏面３６と、検査用ストリップ１の不溶性担体２との間には、隙間（クリアランス）Ｄが形成される。この隙間Ｄは０．０１ｍｍ～１ｍｍの範囲にあることが好ましい。０．０１ｍｍ以上であれば増幅液等を充分浸潤させることができ、１ｍｍ以下であれば毛細管力が発揮され、第１の増幅液４１により不溶性担体２と中間部材３０の隙間を均一に満たすことが可能である。
第１の増幅液４１が封入された第１のポット４０は、例えば樹脂材料から構成された一面に開口を有する容器４２に第１の増幅液４１が充填され、その容器４２の開口が破断可能なシート部材４３により覆われ封止されている。
第２の増幅液４６が封入された第２のポット４５も同様に、例えば樹脂材料から構成された一面に開口を有する容器４７に第２の増幅液４６が充填され、その容器４７の開口が破断可能なシート部材４８により覆われ封止されている。
第１のポット４０および第２のポット４５における破断可能なシート部材４３、４８としては、アルミ箔やアルミラミシートなどのラミネートフィルムが好適に使用される。ここで、破断とは、破れた後に再生しない状態をいう。
第２の増幅液４６が封入された第２のポット４５も同様に、例えば樹脂材料から構成された一面に開口を有する容器４７に第２の増幅液４６が充填され、その容器４７の開口が破断可能なシート部材４８により覆われ封止されている。
第１のポット４０および第２のポット４５における破断可能なシート部材４３、４８としては、アルミ箔やアルミラミシートなどのラミネートフィルムが好適に使用される。ここで、破断とは、破れた後に再生しない状態をいう。
上部ケースの２か所の凸状変形部１２、１４について詳細に説明する。
図８は、第１の凸状変形部１２を示す斜視図であり、図９は図８のＶ－Ｖ’線切断端面図であって、図９のＡは第１の凸状変形部１２の変形前、図９のＢは変形後を表し、第１のポット４０との位置関係を示す図である。
図８は、第１の凸状変形部１２を示す斜視図であり、図９は図８のＶ－Ｖ’線切断端面図であって、図９のＡは第１の凸状変形部１２の変形前、図９のＢは変形後を表し、第１のポット４０との位置関係を示す図である。
第１の凸状変形部１２は、押圧力が加えられることにより、第１のポット４０を、シート部材４３が中間部材３０の破断部３４により破断される位置まで移動させるものである。具体的には、第１の凸状変形部１２は、指等により押下することによって、下方に押し込むことができるように構成されており、第１の凸状変形部１２を下に凸となるように（外部からみると凹部状に）変形させることによって、中間部材３０のポット収容部３２内の破断部３４により第１のポット４０のシート部材４３が破断される位置まで、第１のポット４０を破断部３４に向けて移動させる。これにより、破断部３４が第１のポット４０のシート部材４３を突き破り、第１の増幅液４１を外部に供給することが可能となる。中間部材３０のポット収容部３２の底面に設けられている増幅液充填孔から不溶性担体２の上部に第１の増幅液４１が滴下されて不溶性担体上の検査領域Ｌ１、確認領域Ｌ２および増幅指標領域Ｌ３に第１の増幅液４１を供給することが可能となる。なお、この際、増幅液充填孔から不溶性担体２の上部に滴下された第１の増幅液４１は、中間部材３０と不溶性担体２との隙間に充填されていき、隙間を通って検査領域Ｌ１、確認領域Ｌ２および増幅指標領域Ｌ３の上方に供給されて、徐々に不溶性担体２に浸透する。
図９に示すように、第１の凸状変形部１２は、第１のポット４０に対向する位置に第１のポット４０側に向かって立設された２つの突起部１２ｂを備えている。第１の凸状変形部１２に押圧力が加えられて変形する際に、この２つの突起部１２ｂが第１のポット４０に当接して第１のポット４０を移動させるように構成されている。
第１の凸状変形部１２は、中央対称な山型形状を有しており、２つの突起部１２ｂが、山型形状の頂上１２ａに対して対称に配置されており、頂上１２ａを挟む斜面１２ｃの下方（裏面）に互いに独立して形成されている。
第１の凸状変形部１２は、中央対称な山型形状を有しており、２つの突起部１２ｂが、山型形状の頂上１２ａに対して対称に配置されており、頂上１２ａを挟む斜面１２ｃの下方（裏面）に互いに独立して形成されている。
また、図９のＡに示すように、第１の凸状変形部１２は、変形前において、２つの突起部１２ｂが第１のポット４０の当接面の中央に対して対称な位置となるように上部ケース１０に形成されている。そして、中間部材３０の破断部３４が図９中に破線で示すように、第１のポット４０のシート部材４３の下方に位置している。第１の凸状変形部１２に押圧力が付与されて変形する際には、２つの突起部１２ｂが、２つの突起部１２ｂのそれぞれの先端が第１のポット４０に当接し、徐々に端部側に変位しつつ第１のポット４０を移動させる。そして、図９のＢに示すように、第１の凸状変形部１２の変形後には、２つの突起部１２ｂの間隔が拡がり、２つの突起部１２ｂの先端は、互いに第１のポット４０の当接面の中央から端部までの距離の半分よりも端部側に位置することとなる。本実施形態においては、２つの突起部１２ｂが独立して設けられて、その突起部１２ｂの間（頂上１２ａ裏面）に隙間を有しており、第１の凸状変形部１２が柔軟な素材で形成されていることにより、２つの突起部１２ｂ間を大きく拡げつつ、第１のポット４０を押下させている。
突起部１２ｂの形状や配置は上記形態に限らず、例えば、変形前において、２つの突起部１２ｂが、第１のポット４０の当接面の中央から端部までの距離の半分よりも端部側となる位置に設けられていてもよい。
第１のポット４０を移動させる第１の凸状変形部１２としては、突起部１２ｂが２本あることにより、第１のポット４０を２か所で均等に押すことができるので、第１のポット４０を平行に移動させることができる。
第１の凸状変形部１２は指等で押すことにより、容易に変形し、第１の凸状変形部１２は下に凸状（凹部状）になる。この押圧後には凹部状が戻らず、第１のポット４０を押し付けた状態を維持できる構成となっていることが好ましい。第１の凸状変形部１２は頂上１２ａを押圧するように構成されているが、山型形状の斜面を押さえることによっても、第１の凸状変形部１２の弾性により同様に変形可能である。
第１の凸状変形部１２は指等で押すことにより、容易に変形し、第１の凸状変形部１２は下に凸状（凹部状）になる。この押圧後には凹部状が戻らず、第１のポット４０を押し付けた状態を維持できる構成となっていることが好ましい。第１の凸状変形部１２は頂上１２ａを押圧するように構成されているが、山型形状の斜面を押さえることによっても、第１の凸状変形部１２の弾性により同様に変形可能である。
図１０は、第２の凸状変形部１４を示す斜視図であり、図１１は図１０のＶＩＩ－ＶＩＩ’線切断端面図であって、図１１のＡは第２の凸状変形部１４の変形前、図１１のＢは変形後を表し、第２のポット４５との位置関係を併せて示す図である。
第２の凸状変形部１４は、押圧力が加えられることにより、第２のポット４５のシート部材４８を破断させるものである。図１１のＡに示すように、第２の凸状変形部１４は、第２のポット４５に対向する位置に第２のポット４５に向かって立設された１本の突起部１４ｂを備えている。また、第２のポット４５との間に検査用ストリップ１の送液用パッド４が配置されている。第２の凸状変形部１４に押圧力が加えられて第２のポット４５側に凸、すなわち、外部から見て凹部状に変形し、図１１のＢに示すように、突起部１４ｂが送液用パッド４の表面に当接して、第２のポット４５のシート部材４８を突き破り、送液用パッド４を第２のポット４５中に押し込む。この第２の凸状変形部１４は、図１１に示すように、上下流方向に沿った断面において、やや上流側に頂上１４ａを有する山型形状を有しており、変形時には、突起部１４ｂが下流側に向かって傾いてシート部材４８を突き破るように構成されている。
第２の凸状変形部１４は、押圧力が加えられることにより、第２のポット４５のシート部材４８を破断させるものである。図１１のＡに示すように、第２の凸状変形部１４は、第２のポット４５に対向する位置に第２のポット４５に向かって立設された１本の突起部１４ｂを備えている。また、第２のポット４５との間に検査用ストリップ１の送液用パッド４が配置されている。第２の凸状変形部１４に押圧力が加えられて第２のポット４５側に凸、すなわち、外部から見て凹部状に変形し、図１１のＢに示すように、突起部１４ｂが送液用パッド４の表面に当接して、第２のポット４５のシート部材４８を突き破り、送液用パッド４を第２のポット４５中に押し込む。この第２の凸状変形部１４は、図１１に示すように、上下流方向に沿った断面において、やや上流側に頂上１４ａを有する山型形状を有しており、変形時には、突起部１４ｂが下流側に向かって傾いてシート部材４８を突き破るように構成されている。
この操作により、送液用パッド４が第２のポット４５中の増幅液４６に浸漬され、第２の増幅液４６が毛細管現象により送液用パッド４内を浸透して不溶性担体２に供給可能となる。
第２の凸状変形部１４も、指等で押すことにより、容易に変形して凹部状となる。この押圧後には凹部状が戻らず、送液用パッド４を第２のポット４５中に押し込んだ状態を維持できる構成となっていることが好ましい。
第２の凸状変形部１４も、指等で押すことにより、容易に変形して凹部状となる。この押圧後には凹部状が戻らず、送液用パッド４を第２のポット４５中に押し込んだ状態を維持できる構成となっていることが好ましい。
本発明は、電源につながった装置を使用せずに、第１および第２の凸状変形部を変形させて増幅液を供給し高感度な分析を実現するもので、一つの態様として、人が手で変形させる態様が想定される。従って、増幅液が誤って外部に漏れない設計とすることが好ましく、上部ケース１０に設けられている第１および第２の凸状変形部１２、１４は、上部ケース１０の他の部分と隙間なく一体的に形成されていることが好ましい。凸状変形部１２、１４は伸縮可能な材質で作製されていて上部ケース１０の他の部分と密閉された状態で接合されていることが好ましい。上部ケース１０の第１および第２の凸状変形部１２、１４とそれ以外の部分とを個別に作製した後、互いに接合したものであってもよいが、第１および第２の凸状変形部１２、１４を上部ケース１０の一部として、射出成形により、途中に接合箇所がない連続的な１つの部材として一体的に成形されていることが好ましい。
第１および第２の凸状変形部１２、１４はヒトの指等で容易に変形させることができる程度の柔軟性を有するものであることが必要である。凸状変形部１２、１４を構成する材質の曲げ弾性率は、５０ＭＰａ以上３５０ＭＰａ以下が好ましく、７０ＭＰａ以上１５０ＭＰａ以下がより好ましい。
また、上部ケース１０と下部ケース２０とを組み合わせる際に嵌め合うだけの場合には、隙間から液が漏れだすことがあるため、上部ケース１０と下部ケース２０の嵌合部についても、密閉状態で接着されていることが好ましい。
上部ケース１０と下部ケース２０との接着方法としては、超音波溶着法を用いることが好ましい。一般的に超音波溶着は溶着する部材が同素材でなければ溶着しづらいことが知られており、上部ケース／下部ケースの組み合わせは、ポリエチレン／ポリエチレン、ポリプロピレン／ポリプロピレンあるいはＡＢＳ（アクリロニトリル－ブタジエン－スチレン共重合体）／ＡＢＳが良い。
上部ケース１０と下部ケース２０との接着方法としては、超音波溶着法を用いることが好ましい。一般的に超音波溶着は溶着する部材が同素材でなければ溶着しづらいことが知られており、上部ケース／下部ケースの組み合わせは、ポリエチレン／ポリエチレン、ポリプロピレン／ポリプロピレンあるいはＡＢＳ（アクリロニトリル－ブタジエン－スチレン共重合体）／ＡＢＳが良い。
一方で、凸状変形部１２、１４を上部ケース１０に一体的に成形する場合には、上部ケース１０を構成する材質が柔軟性を有するものであることを要する。他方、下部ケース２０は検査用ストリップ１や第２のポット４５を固定するために剛直であることが好ましい。具体的には、上部ケース１０を構成する材質の曲げ弾性率は５０ＭＰａ以上３５０ＭＰａ以下であることが好ましく、７０ＭＰａ以上１５０ＭＰａ以下であることがより好ましい。下部ケース２０を構成する材質の曲げ弾性率は５００ＭＰａ以上９００ＭＰａが好ましく、６５０ＭＰａ以上７５０ＭＰａ以下が特に好ましい。
なお、曲げ弾性率は、ＩＳＯ１７８規格の測定方法に従い、温度２０℃の環境において、以下のように式（１）より算出した値とする。
曲げ弾性率を測定する材質について、幅ｂ（ｍｍ）、厚さｈ（ｍｍ）の板状の試験片を作成し、支点間距離をＬ（ｍｍ）とした２つの支点で試験片を支える。支点間の中心にＦ（Ｎ）の荷重をかけ、荷重をかけた方向へのたわみ量（ｍｍ）を測定する。横軸にたわみＳ（ｍｍ）、縦軸に荷重Ｆ（Ｎ）とした、たわみ－荷重曲線を作成する。この曲線の原点での接線を求め、その傾き（荷重の変化量ΔＦ（Ｎ）、たわみの変化量ΔＳ（ｍｍ）とした場合、（ΔＦ／ΔＳ））を算出し、以下の式を用いて曲げ弾性率Ｅ（ＭＰａ）が算出できる。
曲げ弾性率Ｅ＝（Ｌ３／（４ｂｈ３））×（ΔＦ／ΔＳ） 式（１）
曲げ弾性率を測定する材質について、幅ｂ（ｍｍ）、厚さｈ（ｍｍ）の板状の試験片を作成し、支点間距離をＬ（ｍｍ）とした２つの支点で試験片を支える。支点間の中心にＦ（Ｎ）の荷重をかけ、荷重をかけた方向へのたわみ量（ｍｍ）を測定する。横軸にたわみＳ（ｍｍ）、縦軸に荷重Ｆ（Ｎ）とした、たわみ－荷重曲線を作成する。この曲線の原点での接線を求め、その傾き（荷重の変化量ΔＦ（Ｎ）、たわみの変化量ΔＳ（ｍｍ）とした場合、（ΔＦ／ΔＳ））を算出し、以下の式を用いて曲げ弾性率Ｅ（ＭＰａ）が算出できる。
曲げ弾性率Ｅ＝（Ｌ３／（４ｂｈ３））×（ΔＦ／ΔＳ） 式（１）
従って、上部ケース／下部ケースの組み合わせは、軟化剤入りポリプロピレン／ポリプロピレンの組み合わせがもっとも好ましい。ここで、軟化剤入りポリプロピレンに使用する軟化剤はオレフィン系エラストマーが好ましく、ポリプロピレンに対するオレフィン系エラストマーの濃度は２０質量％以上６０質量％以下が好ましく、４０質量％以上５５質量％以下が特に好ましい。具体的な軟化剤としては、住友化学（株）社製のタフセレン（登録商標）が挙げられる。
なお、本発明のイムノクロマトグラフキットは、２つ以上の凸状変形部を有していればよく、検査ストリップに対して供給すべき溶液が３種以上ある場合には、それに応じて凸状変形部も３つ以上備えていてもよい。
不溶性担体２としては、例えば、ニトロセルロースメンブレンなどを使用することができる。また、不溶性担体２が固定されるバック粘着シート７とは、不溶性担体２が貼り付けられる面が粘着面であるシート状基材である。
標識保持パッド３は、不溶性担体２の長手方向中央部に固定されている。標識物質は、例えば、直径５０ｎｍの金コロイド（ＥＭ．ＧＣ５０、ＢＢＩ社製）を用いることが可能である。標識物質の表面は、被検物質と結合する物質で修飾することにより、被検物質との結合体を形成することが可能である。
標識物質は上記に限るものではなく、通常のクロマトグラフ法に用いることができる金属硫化物、免疫凝集反応に用いられる着色粒子などを使用することができ、特には、金属コロイドが好ましい。金属コロイドとしては、金コロイド、銀コロイド、白金コロイド、鉄コロイド、水酸化アルミニウムコロイド、およびこれらの複合コロイドなどが挙げられ、特に、適当な粒径において、金コロイドは赤色、銀コロイドは黄色を示す点でこのましく、その中でも金コロイドが最も好ましい。
標識物質は上記に限るものではなく、通常のクロマトグラフ法に用いることができる金属硫化物、免疫凝集反応に用いられる着色粒子などを使用することができ、特には、金属コロイドが好ましい。金属コロイドとしては、金コロイド、銀コロイド、白金コロイド、鉄コロイド、水酸化アルミニウムコロイド、およびこれらの複合コロイドなどが挙げられ、特に、適当な粒径において、金コロイドは赤色、銀コロイドは黄色を示す点でこのましく、その中でも金コロイドが最も好ましい。
なお、検査用ストリップ１は、上部ケース１０の試料液滴下用開孔１６と標識保持パッド３の位置が一致するように位置されている。
検査領域Ｌ１は、被検物質に結合する第２の物質を含み、被検物質と結合した標識物質が被検物質を介して補足される標識物質補足領域である。例えば、インフルエンザＡ型ウイルスあるいはそのバイオマーカーを被検物質として検出したい場合には、例えば、抗インフルエンザＡ型モノクローナル抗体（Ａｎｔｉ－Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ａ ＳＰＴＮ－５ ７３０７、Ｍｅｄｉｘ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａ社製）が物理吸着によりライン状に固定化されている抗体固定化ラインにより検査領域Ｌ１を構成する態様が好ましい。
この検査領域Ｌ１に被検物質と第１の物質を介して標識物質が結合した複合体が到達すると第２の物質と被検物質が特異的に結合し、被検物質と第１の物質を介して標識物質が補足されることとなる。一方、被検物質との複合体を構成していない標識物質は、検査領域Ｌ１に補足されることなく通過する。
この検査領域Ｌ１に被検物質と第１の物質を介して標識物質が結合した複合体が到達すると第２の物質と被検物質が特異的に結合し、被検物質と第１の物質を介して標識物質が補足されることとなる。一方、被検物質との複合体を構成していない標識物質は、検査領域Ｌ１に補足されることなく通過する。
確認領域Ｌ２は、第１の物質に結合可能な物質を含み、標識保持パッド３から試料液と共に不溶性担体２中を展開され、検査領域Ｌ１を通過した標識物質が第１の物質を介して補足され、試料液の展開の完了を確認するための領域である。例えば、インフルエンザＡ型ウイルスあるいはそのバイオマーカーを被検物質として検出したい場合には、例えば、抗マウスＩｇＧ抗体（抗マウスＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）、ウサギＦ（ａｂ’）２、品番５６６－７０６２１、富士フイルム和光純薬（株）社製）が物理吸着によりライン状に固定化されている態様が好ましい。
増幅指標領域Ｌ３は、第２の増幅液４６と反応する物質を含み、第２の増幅液４６と反応して発色もしくは色が変化することにより、第２の増幅液４６がその領域まで展開されたことを示し、第１の増幅液４１の滴下のタイミングの指標となる領域である。例えば、第２の増幅液として、硝酸鉄水溶液とクエン酸（富士フイルム和光純薬（株）社製、０３８－０６９２５）の混合水溶液を使用する場合には、ブロモクレゾールグリーン（富士フイルム和光純薬（株）社製）がライン状に固定化された発色試薬固定化ラインにより増幅指標領域Ｌ３を構成する態様が好ましい。このとき第２の増幅液４６が増幅指標領域Ｌ３に到達すると、領域Ｌ３は緑色からオレンジ色へと変化する。この変色は、検査領域Ｌ１および確認領域Ｌ２が第２の増幅液４６により十分に満たされたことの指標として捕えることができる。
金属コロイドなどの金属系標識物質のシグナルを増幅させる方法としては、標識物質に銀イオンおよび銀イオンのための還元剤を接触させ、還元剤によって銀イオンを還元して銀粒子を生成させ、その銀粒子が標識物質を核として標識物質上に沈着することにより標識物質によるシグナルを増幅させる方法（以下において、銀増幅）を用いることが好ましい。
銀増幅を実現させるために、第１の増幅液４１として銀イオンを含む溶液を、第２の増幅液４６として銀イオンのための還元剤を含む還元剤液を用いればよい。
銀増幅を実現させるために、第１の増幅液４１として銀イオンを含む溶液を、第２の増幅液４６として銀イオンのための還元剤を含む還元剤液を用いればよい。
（第１の増幅液）
第１の増幅液４１として用いられる銀イオンを含む溶液としては、溶媒中に銀イオン含有化合物が溶解されているものが好ましい。銀イオン含有化合物としては有機銀塩、無機銀塩、もしくは銀錯体を用いることができる。好ましくは、無機銀塩もしくは銀錯体である。無機銀塩としては、水などの溶媒に対して溶解度の高い銀イオン含有化合物を使用することが可能であり、硝酸銀、酢酸銀、乳酸銀、酪酸銀、チオ硫酸銀などが挙げられる。特に好ましくは硝酸銀である。銀錯体としては、水酸基やスルホン基など水溶性基を有する配位子に配位された銀錯体が好ましく、ヒドロキシチオエーテル銀などが挙げられる。
第１の増幅液４１として用いられる銀イオンを含む溶液としては、溶媒中に銀イオン含有化合物が溶解されているものが好ましい。銀イオン含有化合物としては有機銀塩、無機銀塩、もしくは銀錯体を用いることができる。好ましくは、無機銀塩もしくは銀錯体である。無機銀塩としては、水などの溶媒に対して溶解度の高い銀イオン含有化合物を使用することが可能であり、硝酸銀、酢酸銀、乳酸銀、酪酸銀、チオ硫酸銀などが挙げられる。特に好ましくは硝酸銀である。銀錯体としては、水酸基やスルホン基など水溶性基を有する配位子に配位された銀錯体が好ましく、ヒドロキシチオエーテル銀などが挙げられる。
（第２の増幅液）
第２の増幅液４６として用いられる銀イオンを還元し得る還元剤を含有する還元剤液中に用いられる還元剤としては、銀イオンを銀に還元することができるものであれば、無機・有機のいかなる材料、またはその混合物でも用いることができる。無機還元剤としては、Ｆｅ２＋、Ｖ２＋あるいはＴｉ３＋などの金属イオンで原子価の変化し得る還元性金属塩、還元性金属錯塩を好ましく挙げることができる。無機還元剤を用いる際には、酸化されたイオンを錯形成するか還元して、除去するか無害化する必要がある。例えば、Ｆｅ２＋を還元剤として用いる系では、クエン酸やＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）を用いて酸化物であるＦｅ３＋の錯体を形成し、無害化することができる。本系ではこのような無機還元剤を用いることが好ましく、より好ましくはＦｅ２＋の金属塩が好ましい。
第２の増幅液４６として用いられる銀イオンを還元し得る還元剤を含有する還元剤液中に用いられる還元剤としては、銀イオンを銀に還元することができるものであれば、無機・有機のいかなる材料、またはその混合物でも用いることができる。無機還元剤としては、Ｆｅ２＋、Ｖ２＋あるいはＴｉ３＋などの金属イオンで原子価の変化し得る還元性金属塩、還元性金属錯塩を好ましく挙げることができる。無機還元剤を用いる際には、酸化されたイオンを錯形成するか還元して、除去するか無害化する必要がある。例えば、Ｆｅ２＋を還元剤として用いる系では、クエン酸やＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）を用いて酸化物であるＦｅ３＋の錯体を形成し、無害化することができる。本系ではこのような無機還元剤を用いることが好ましく、より好ましくはＦｅ２＋の金属塩が好ましい。
なお、湿式のハロゲン化銀写真感光材料に用いられる現像主薬（例えばメチル没食子酸塩、ヒドロキノン、置換ヒドロキノン、３－ピラゾリドン類、ｐ－アミノフェノール類、ｐ－フェニレンジアミン類、ヒンダードフェノール類、アミドキシム類、アジン類、カテコール類、ピロガロール類、アスコルビン酸（またはその誘導体）、およびロイコ色素類）、および本分野の当業者にとって明らかなその他の材料、例えば米国特許第６，０２０，１１７号に記載されている材料も用いることができる。
還元剤としては、アスコルビン酸還元剤も好ましい。有用なアスコルビン酸還元剤は、アスコルビン酸と類似物、異性体とその誘導体を含み、例えば、Ｄ－またはＬ－アスコルビン酸とその糖誘導体（例えばγ－ラクトアスコルビン酸、グルコアスコルビン酸、フコアスコルビン酸、グルコヘプトアスコルビン酸、マルトアスコルビン酸）、アスコルビン酸のナトリウム塩、アスコルビン酸のカリウム塩、イソアスコルビン酸（またはＬ－エリスロアスコルビン酸）、その塩（例えばアルカリ金属塩、アンモニウム塩または当技術分野において知られている塩）、エンジオールタイプのアスコルビン酸、エナミノールタイプのアスコルビン酸、チオエノ－ルタイプのアスコルビン酸等を好ましく挙げることができ、特にはＤ、ＬまたはＤ，Ｌ－アスコルビン酸（そして、そのアルカリ金属塩）若しくはイソアスコルビン酸（またはそのアルカリ金属塩）が好ましく、ナトリウム塩が好ましい塩である。必要に応じてこれらの還元剤の混合物を用いることができる。
なお、本実施形態において、第１の凸状変形部１２は、第１のポット４０を中間部材３０に設けられている破断部３４に向けて移動させるものとしたが、第１の凸状変形部１２は、その変形に伴い、第１のポット４０のシート部材４３を破断部３４により破断させることができる構成であればよい。
第１のポット４０のシート部材４３が破断されて第１のポット４０から流出する第１の増幅液４１を収容部３２の底面の増幅液充填孔から不溶性担体２上に滴下させることができる構成であれば、第１のポット４０および第１のポット４０を収容する収容部３２の構成も本実施形態の構成に限らない。
また、第１の凸状変形部の突起部は２つ以上あることが、第１のポット４０を傾けず平行に移動させることができ、好ましい。ただし、第１の凸状部材は上記実施形態の第２の凸状変形部と同様の形状の突起部が１つの形態であっても構わない。第２の凸状部変形部と同一形状の凸状変形部を第１のポット４０を移動させる第１の凸状変形部としても用いてもよい。
図１２は、第２の凸状変形部と同一形状の変形部１１４を、第１のポット４０を移動させるために使用する場合の形態を示す図１１と同様の切断端面図である。
図１２のＡに示すように、変形前において、凸状変形部１１４の突起部１１４ｂの下方に第１のポット４０が位置するように配置される。また、第１のポット４０の下方には中間部材３０の破断部３４が位置している。凸状変形部１１４の頂上１１４ａを押下することにより突起部１１４ｂが第１のポット４０の上面に押しあたり、第１のポット４０を押し下げる。それにより第１のポット４０のシート部材４３を破断部３４が突き破り、第１のポット４０に封入されていた第１の増幅液４１が第１のポットから流出して検査用ストリップ１に供給される。
このように、凸状変形部１１４に設けられている突起部が１つであってもポットを移動させることができる。
図１２のＡに示すように、変形前において、凸状変形部１１４の突起部１１４ｂの下方に第１のポット４０が位置するように配置される。また、第１のポット４０の下方には中間部材３０の破断部３４が位置している。凸状変形部１１４の頂上１１４ａを押下することにより突起部１１４ｂが第１のポット４０の上面に押しあたり、第１のポット４０を押し下げる。それにより第１のポット４０のシート部材４３を破断部３４が突き破り、第１のポット４０に封入されていた第１の増幅液４１が第１のポットから流出して検査用ストリップ１に供給される。
このように、凸状変形部１１４に設けられている突起部が１つであってもポットを移動させることができる。
なお、本発明のイムノクロマトグラフキットには、検体の抽出を補助する補助薬品などを含む検体抽出液を内包するポットや検体希釈液を内包するポット、キットの保存を助ける乾燥剤や脱酸素剤、取扱い説明書などの添付文書、および、綿棒などの検体採取器具などの検査に必要な器材一式もしくはその一部を含んでも良い。
本イムノクロマトグラフキットを用いれば、専用の分析装置などを用いることなく、このキット単体で精度よく検査を行うことができる。
＜イムノクロマトグラフ検査方法＞
上記イムノクロマトグラフキット１００を用いたイムノクロマトグラフ検査方法について簡単に説明する。
試料液滴下用開孔１６から試料液を標識保持パッド３上に滴下する。試料液中に被検物質が含まれている場合には、標識保持パッド３において、被検物質と第１の物質が結合することにより、第１の物質を介する被検物質と標識物質との複合体が形成され、この複合体が試料液と共に吸収パッド６の吸引力により毛細管現象で吸収パッド６側に向かって展開される。この試料液を滴下すると同時もしくはその後、第２の凸状変形部１４を押下し、送液用パッド４を変位させて第２のポット４５のシート部材４８を破断させ、送液用パッド４を第２の増幅液４６に浸して第２の増幅液４６を不溶性担体２に送液する。なお、第２の凸状変形部１４を押下するタイミングは試料液の滴下時から３０秒以内とすることが好ましく試料液の滴下の直後が特に好ましい。
上記イムノクロマトグラフキット１００を用いたイムノクロマトグラフ検査方法について簡単に説明する。
試料液滴下用開孔１６から試料液を標識保持パッド３上に滴下する。試料液中に被検物質が含まれている場合には、標識保持パッド３において、被検物質と第１の物質が結合することにより、第１の物質を介する被検物質と標識物質との複合体が形成され、この複合体が試料液と共に吸収パッド６の吸引力により毛細管現象で吸収パッド６側に向かって展開される。この試料液を滴下すると同時もしくはその後、第２の凸状変形部１４を押下し、送液用パッド４を変位させて第２のポット４５のシート部材４８を破断させ、送液用パッド４を第２の増幅液４６に浸して第２の増幅液４６を不溶性担体２に送液する。なお、第２の凸状変形部１４を押下するタイミングは試料液の滴下時から３０秒以内とすることが好ましく試料液の滴下の直後が特に好ましい。
検査領域Ｌ１に到達した複合体は、検査領域Ｌ１の第２の物質と結合し捕捉される。また、被検物質と結合していない第１の物質は検査領域Ｌ１を通過して確認領域Ｌ２に到達し、確認領域Ｌ２の第１の物質と結合する物質と結合し捕捉される。
第２の増幅液４６は検査領域Ｌ１、確認領域Ｌ２を経て増幅指標領域Ｌ３へ到達する。このとき、増幅指標領域Ｌ３が変色することにより、第２の増幅液４６の増幅指標領域Ｌ３への到達を視覚的に認識することができる。増幅指標領域Ｌ３の変色を確認後、第１の凸状変形部１２を押下して第１の増幅液４１を不溶性担体２上に供給する。
第１の増幅液４１を不溶性担体２に供給してから反応終了を待ち、観察窓１８から、検査領域Ｌ１および確認領域Ｌ２の発色を確認する。検査領域Ｌ１の発色により被検物質の有無およびその濃度の高低を確認することが可能であり、確認領域Ｌ２の発色により被検物質を測定する検査が成功したかどうかを確認することができる。検査領域Ｌ１および確認領域Ｌ２における発色は標識のシグナルを増幅して得られたものであり、高感度な検査を実現することができる。
以下、実施例により、本発明についてさらに詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
［Ａ］抗原がＬＡＭである場合
［Ａ］抗原がＬＡＭである場合
［検体液の調製］
健常人の尿検体（ＢｉｏｒｅｃｌａｍａｔｉｏｎＩＶＴ社）をプールした尿検体に、結核菌より抽出されたリポアラビノマンナン（ＬＡＭ）（０２２４９－６１、ナカライテスク社）（抗原）を添加し、ＬＡＭ濃度が０．１ｎｇ／ｍＬの検体液（抗原を含み得る液）を調製した。
健常人の尿検体（ＢｉｏｒｅｃｌａｍａｔｉｏｎＩＶＴ社）をプールした尿検体に、結核菌より抽出されたリポアラビノマンナン（ＬＡＭ）（０２２４９－６１、ナカライテスク社）（抗原）を添加し、ＬＡＭ濃度が０．１ｎｇ／ｍＬの検体液（抗原を含み得る液）を調製した。
［実施例Ａ１］
〔濃縮デバイスの作製〕
以下のとおり、実施例Ａ１の濃縮デバイスを作製した。
まず、ミニ遠心ろ過フィルター（ＶＩＶＡＣＬＥＡＲ ＭＩＮＩ ０．８μｍ、多孔質膜の材質：ポリエーテルスルホン（ＰＥＳ）、多孔質膜の孔径：０．８μｍザルトリウス社製）を準備した。上記遠心ろ過フィルターは、図２に示されるように、第１の容器２１０と第２の容器２２０とを備え、第１の容器２１０の底部は多孔質膜からなる排出部２１２によって構成されている。多孔質膜の材料であるＰＥＳの表面エネルギーは４６ｄｙｎｅｓ／ｃｍである。
次に、上記ミニ遠心ろ過フィルターの第１の容器に市販のＳＡＰ粒子（日本触媒社製アクアリックＣＡ、膨潤率：３０ｇ／ｇ、粒子径：３００μｍ）１００ｍｇを入れた。
このようにして、図１に示されるような濃縮デバイスを得た。
以下のとおり、実施例Ａ１の濃縮デバイスを作製した。
まず、ミニ遠心ろ過フィルター（ＶＩＶＡＣＬＥＡＲ ＭＩＮＩ ０．８μｍ、多孔質膜の材質：ポリエーテルスルホン（ＰＥＳ）、多孔質膜の孔径：０．８μｍザルトリウス社製）を準備した。上記遠心ろ過フィルターは、図２に示されるように、第１の容器２１０と第２の容器２２０とを備え、第１の容器２１０の底部は多孔質膜からなる排出部２１２によって構成されている。多孔質膜の材料であるＰＥＳの表面エネルギーは４６ｄｙｎｅｓ／ｃｍである。
次に、上記ミニ遠心ろ過フィルターの第１の容器に市販のＳＡＰ粒子（日本触媒社製アクアリックＣＡ、膨潤率：３０ｇ／ｇ、粒子径：３００μｍ）１００ｍｇを入れた。
このようにして、図１に示されるような濃縮デバイスを得た。
〔検体液の濃縮〕
得られた濃縮デバイスを用いて、以下のとおり、上述した検体液を濃縮した。
得られた濃縮デバイスを用いて、以下のとおり、上述した検体液を濃縮した。
＜検体液注入工程＞
得られた濃縮デバイスの第１の容器に上述した検体液（ＬＡＭ濃度が０．１ｎｇ／ｍＬの検体液）を７００μＬ注入し、ＳＡＰ粒子と混合した（図３Ａ）。なお、注入された検体液は、排出部から排出されることなく、第１の容器に保持されていた。
得られた濃縮デバイスの第１の容器に上述した検体液（ＬＡＭ濃度が０．１ｎｇ／ｍＬの検体液）を７００μＬ注入し、ＳＡＰ粒子と混合した（図３Ａ）。なお、注入された検体液は、排出部から排出されることなく、第１の容器に保持されていた。
＜吸水工程＞
その後５分間静置した。この間、検体液に含まれる溶液（水、低分子）がＳＡＰ粒子によって吸収されて、第１の容器中に検体液の濃縮液である検体液濃縮液が生成した（図３Ｂ）。
その後５分間静置した。この間、検体液に含まれる溶液（水、低分子）がＳＡＰ粒子によって吸収されて、第１の容器中に検体液の濃縮液である検体液濃縮液が生成した（図３Ｂ）。
＜排出工程＞
次いで、濃縮デバイスを小型微量遠心機（株式会社トミー精工社製Ｍｕｌｔｉ－Ｓｐｉｎ）に入れ、検体液濃縮液に対して上から下の方向（排出部の方向）に遠心力を加え（回転数：６０００ｒｐｍ）、時間：数十秒）、検体液濃縮液を多孔質膜（排出部）から排出した（図３Ｃ）。
次いで、濃縮デバイスを小型微量遠心機（株式会社トミー精工社製Ｍｕｌｔｉ－Ｓｐｉｎ）に入れ、検体液濃縮液に対して上から下の方向（排出部の方向）に遠心力を加え（回転数：６０００ｒｐｍ）、時間：数十秒）、検体液濃縮液を多孔質膜（排出部）から排出した（図３Ｃ）。
＜回収工程＞
排出された検体液濃縮液を第２の容器に回収した（図３Ｄ）。得られた検体液濃縮液の量は１００μＬであった。濃縮時間（検体液注入工程から回収工程までにかかった時間（分））は７分であった。
排出された検体液濃縮液を第２の容器に回収した（図３Ｄ）。得られた検体液濃縮液の量は１００μＬであった。濃縮時間（検体液注入工程から回収工程までにかかった時間（分））は７分であった。
〔ＬＡＭの検出〕
得られた検体液濃縮液（６０μＬ）について、市販のＬＡＭキット（Ａｌｅｒｅ社製Ａｌｅｒｅ ＤｅｔｅｒｍｉｎｅＴＭ ＴＢ ＬＡＭ Ａｇ）を用いてＬＡＭを検出し、次いで、富士フイルム社製ＬＡＳ４０００を用いて光学濃度を測定した。
また、ＬＡＭ濃度が０．１ｎｇ／ｍＬ、０．２ｎｇ／ｍＬ、０．３ｎｇ／ｍＬ、０．４ｎｇ／ｍＬの水溶液を調製し、同様に光学濃度を測定し、検量線を作成した。そして、上述した検体液濃縮液について、検量線を用いて、その光学濃度からＬＡＭ濃度（濃縮後）を求め、ＬＡＭ濃縮率（＝ＬＡＭ濃度（濃縮後）／ＬＡＭ濃度（濃縮前）を算出した。ＬＡＭ濃縮率を表１に示す。ＬＡＭ濃縮率が１超である場合、検体液が濃縮されたことを意味する。ＬＡＭ濃縮率が高い方が好ましい。
得られた検体液濃縮液（６０μＬ）について、市販のＬＡＭキット（Ａｌｅｒｅ社製Ａｌｅｒｅ ＤｅｔｅｒｍｉｎｅＴＭ ＴＢ ＬＡＭ Ａｇ）を用いてＬＡＭを検出し、次いで、富士フイルム社製ＬＡＳ４０００を用いて光学濃度を測定した。
また、ＬＡＭ濃度が０．１ｎｇ／ｍＬ、０．２ｎｇ／ｍＬ、０．３ｎｇ／ｍＬ、０．４ｎｇ／ｍＬの水溶液を調製し、同様に光学濃度を測定し、検量線を作成した。そして、上述した検体液濃縮液について、検量線を用いて、その光学濃度からＬＡＭ濃度（濃縮後）を求め、ＬＡＭ濃縮率（＝ＬＡＭ濃度（濃縮後）／ＬＡＭ濃度（濃縮前）を算出した。ＬＡＭ濃縮率を表１に示す。ＬＡＭ濃縮率が１超である場合、検体液が濃縮されたことを意味する。ＬＡＭ濃縮率が高い方が好ましい。
［実施例Ａ２］
実施例Ａ１で用いたミニ遠心ろ過フィルターから多孔質膜（材質：ＰＥＳ）を取り出して、代わりに、多孔質膜（材質：セルロースアセテート（ＣＡ）、孔径：５μｍ）（アドバンテック社製ミニザルト ＣＡ ５μｍから取り出したＣＡ膜）を取り付けた。多孔質膜交換後のミニ遠心ろ過フィルターは、図２に示されるように、第１の容器と第２の容器とを備え、第１の容器の底部は多孔質膜（排出部）によって構成されている。多孔質膜の材料であるＣＡの表面エネルギーは５０ｄｙｎｅｓ／ｃｍである。
次に、多孔質膜交換後のミニ遠心ろ過フィルターの第１の容器に市販のＳＡＰ粒子（日本触媒社製アクアリックＣＡ：膨潤率３０ｇ／ｇ）１００ｍｇを入れた。
このようにして、図１に示されるような濃縮デバイスを得た。
得られた濃縮デバイスを用いて、実施例Ａ１と同様に、検体液の濃縮、及び、ＬＡＭの検出を行った。ＬＡＭ濃縮率を表１に示す。
なお、得られた検体液濃縮液の量は１００μＬ、濃縮時間は７分であった。
実施例Ａ１で用いたミニ遠心ろ過フィルターから多孔質膜（材質：ＰＥＳ）を取り出して、代わりに、多孔質膜（材質：セルロースアセテート（ＣＡ）、孔径：５μｍ）（アドバンテック社製ミニザルト ＣＡ ５μｍから取り出したＣＡ膜）を取り付けた。多孔質膜交換後のミニ遠心ろ過フィルターは、図２に示されるように、第１の容器と第２の容器とを備え、第１の容器の底部は多孔質膜（排出部）によって構成されている。多孔質膜の材料であるＣＡの表面エネルギーは５０ｄｙｎｅｓ／ｃｍである。
次に、多孔質膜交換後のミニ遠心ろ過フィルターの第１の容器に市販のＳＡＰ粒子（日本触媒社製アクアリックＣＡ：膨潤率３０ｇ／ｇ）１００ｍｇを入れた。
このようにして、図１に示されるような濃縮デバイスを得た。
得られた濃縮デバイスを用いて、実施例Ａ１と同様に、検体液の濃縮、及び、ＬＡＭの検出を行った。ＬＡＭ濃縮率を表１に示す。
なお、得られた検体液濃縮液の量は１００μＬ、濃縮時間は７分であった。
［実施例Ａ３］
実施例Ａ１で用いたミニ遠心ろ過フィルターから多孔質膜（材質：ＰＥＳ）を取り出して、代わりに、多孔質膜（材質：セルロースアセテート（ＣＡ）、孔径：０．２μｍ）（アドバンテック社製ミニザルト ＣＡ ０．２μｍから取り出したＣＡ膜）を取り付けた。多孔質膜交換後のミニ遠心ろ過フィルターは、図２に示されるように、第１の容器と第２の容器とを備え、第１の容器の底部は多孔質膜（排出部）によって構成されている。多孔質膜の材料であるＣＡの表面エネルギーは５０ｄｙｎｅｓ／ｃｍである。
次に、多孔質膜交換後のミニ遠心ろ過フィルターの第１の容器に市販のＳＡＰ粒子（日本触媒社製アクアリックＣＡ：膨潤率３０ｇ／ｇ）１００ｍｇを入れた。
このようにして、図１に示されるような濃縮デバイスを得た。
得られた濃縮デバイスを用いて、実施例Ａ１と同様に、検体液の濃縮、及び、ＬＡＭの検出を行った。ＬＡＭ濃縮率を表１に示す。
なお、得られた検体液濃縮液の量は１００μＬ、濃縮時間は７分であった。
実施例Ａ１で用いたミニ遠心ろ過フィルターから多孔質膜（材質：ＰＥＳ）を取り出して、代わりに、多孔質膜（材質：セルロースアセテート（ＣＡ）、孔径：０．２μｍ）（アドバンテック社製ミニザルト ＣＡ ０．２μｍから取り出したＣＡ膜）を取り付けた。多孔質膜交換後のミニ遠心ろ過フィルターは、図２に示されるように、第１の容器と第２の容器とを備え、第１の容器の底部は多孔質膜（排出部）によって構成されている。多孔質膜の材料であるＣＡの表面エネルギーは５０ｄｙｎｅｓ／ｃｍである。
次に、多孔質膜交換後のミニ遠心ろ過フィルターの第１の容器に市販のＳＡＰ粒子（日本触媒社製アクアリックＣＡ：膨潤率３０ｇ／ｇ）１００ｍｇを入れた。
このようにして、図１に示されるような濃縮デバイスを得た。
得られた濃縮デバイスを用いて、実施例Ａ１と同様に、検体液の濃縮、及び、ＬＡＭの検出を行った。ＬＡＭ濃縮率を表１に示す。
なお、得られた検体液濃縮液の量は１００μＬ、濃縮時間は７分であった。
［実施例Ａ４］
実施例Ａ１で用いたミニ遠心ろ過フィルターから多孔質膜（材質：ＰＥＳ）を取り出して、代わりに、多孔質膜（材質：ガラスファイバー（ＧＦ）、孔径：０．４５μｍ）（Ｃｙｔｉｖａ社製プラディスク１３から取り出したＧＦ膜）を取り付けた。多孔質膜交換後のミニ遠心ろ過フィルターは、図２に示されるように、第１の容器と第２の容器とを備え、第１の容器の底部は多孔質膜（排出部）によって構成されている。多孔質膜の材料であるＧＦの表面エネルギーは７３ｄｙｎｅｓ／ｃｍである。
次に、多孔質膜交換後のミニ遠心ろ過フィルターの第１の容器に市販のＳＡＰ粒子（日本触媒社製アクアリックＣＡ：膨潤率３０ｇ／ｇ）１００ｍｇを入れた。
このようにして、図１に示されるような濃縮デバイスを得た。
得られた濃縮デバイスを用いて、実施例Ａ１と同様に、検体液の濃縮、及び、ＬＡＭの検出を行った。ＬＡＭ濃縮率を表１に示す。
なお、得られた検体液濃縮液の量は１００μＬ、濃縮時間は７分であった。
実施例Ａ１で用いたミニ遠心ろ過フィルターから多孔質膜（材質：ＰＥＳ）を取り出して、代わりに、多孔質膜（材質：ガラスファイバー（ＧＦ）、孔径：０．４５μｍ）（Ｃｙｔｉｖａ社製プラディスク１３から取り出したＧＦ膜）を取り付けた。多孔質膜交換後のミニ遠心ろ過フィルターは、図２に示されるように、第１の容器と第２の容器とを備え、第１の容器の底部は多孔質膜（排出部）によって構成されている。多孔質膜の材料であるＧＦの表面エネルギーは７３ｄｙｎｅｓ／ｃｍである。
次に、多孔質膜交換後のミニ遠心ろ過フィルターの第１の容器に市販のＳＡＰ粒子（日本触媒社製アクアリックＣＡ：膨潤率３０ｇ／ｇ）１００ｍｇを入れた。
このようにして、図１に示されるような濃縮デバイスを得た。
得られた濃縮デバイスを用いて、実施例Ａ１と同様に、検体液の濃縮、及び、ＬＡＭの検出を行った。ＬＡＭ濃縮率を表１に示す。
なお、得られた検体液濃縮液の量は１００μＬ、濃縮時間は７分であった。
［実施例Ａ５］
実施例Ａ１で用いたミニ遠心ろ過フィルターから多孔質膜（材質：ＰＥＳ）を取り出して、代わりに、多孔質膜（材質：親水性ＰＴＦＥ、孔径：０．０５μｍ）（アドバンテック社製ＰＴＦＥ膜）を取り付けた。多孔質膜交換後のミニ遠心ろ過フィルターは、図２に示されるように、第１の容器と第２の容器とを備え、第１の容器の底部は多孔質膜（排出部）によって構成されている。多孔質膜の材料である親水性ＰＴＦＥの表面エネルギーは３５ｄｙｎｅｓ／ｃｍである。
次に、多孔質膜交換後のミニ遠心ろ過フィルターの第１の容器に市販のＳＡＰ粒子（日本触媒社製アクアリックＣＡ：膨潤率３０ｇ／ｇ）１００ｍｇを入れた。
このようにして、図１に示されるような濃縮デバイスを得た。
得られた濃縮デバイスを用いて、実施例Ａ１と同様に、検体液の濃縮、及び、ＬＡＭの検出を行った。ＬＡＭ濃縮率を表１に示す。
なお、得られた検体液濃縮液の量は１００μＬ、濃縮時間は７分であった。
実施例Ａ１で用いたミニ遠心ろ過フィルターから多孔質膜（材質：ＰＥＳ）を取り出して、代わりに、多孔質膜（材質：親水性ＰＴＦＥ、孔径：０．０５μｍ）（アドバンテック社製ＰＴＦＥ膜）を取り付けた。多孔質膜交換後のミニ遠心ろ過フィルターは、図２に示されるように、第１の容器と第２の容器とを備え、第１の容器の底部は多孔質膜（排出部）によって構成されている。多孔質膜の材料である親水性ＰＴＦＥの表面エネルギーは３５ｄｙｎｅｓ／ｃｍである。
次に、多孔質膜交換後のミニ遠心ろ過フィルターの第１の容器に市販のＳＡＰ粒子（日本触媒社製アクアリックＣＡ：膨潤率３０ｇ／ｇ）１００ｍｇを入れた。
このようにして、図１に示されるような濃縮デバイスを得た。
得られた濃縮デバイスを用いて、実施例Ａ１と同様に、検体液の濃縮、及び、ＬＡＭの検出を行った。ＬＡＭ濃縮率を表１に示す。
なお、得られた検体液濃縮液の量は１００μＬ、濃縮時間は７分であった。
［実施例Ａ６］
実施例Ａ１で用いたミニ遠心ろ過フィルターから多孔質膜（材質：ＰＥＳ）を取り出して、代わりに、多孔質膜（材質：疎水性ＰＴＦＥ、孔径：０．０５μｍ）（アドバンテック社製ＰＴＦＥ膜）を取り付けた。多孔質膜交換後のミニ遠心ろ過フィルターは、図２に示されるように、第１の容器と第２の容器とを備え、第１の容器の底部は多孔質膜（排出部）によって構成されている。多孔質膜の材料である疎水性ＰＴＦＥの表面エネルギーは２３ｄｙｎｅｓ／ｃｍである。
次に、多孔質膜交換後のミニ遠心ろ過フィルターの第１の容器に市販のＳＡＰ粒子（日本触媒社製アクアリックＣＡ：膨潤率３０ｇ／ｇ）１００ｍｇを入れた。
このようにして、図１に示されるような濃縮デバイスを得た。
得られた濃縮デバイスを用いて、実施例Ａ１と同様に、検体液の濃縮、及び、ＬＡＭの検出を行った。ＬＡＭ濃縮率を表１に示す。
なお、得られた検体液濃縮液の量は６０μＬ、濃縮時間は７分であった。得られた検体液濃縮液の量が少ない理由として、多孔質膜の孔径が小さいことが考えられる。
実施例Ａ１で用いたミニ遠心ろ過フィルターから多孔質膜（材質：ＰＥＳ）を取り出して、代わりに、多孔質膜（材質：疎水性ＰＴＦＥ、孔径：０．０５μｍ）（アドバンテック社製ＰＴＦＥ膜）を取り付けた。多孔質膜交換後のミニ遠心ろ過フィルターは、図２に示されるように、第１の容器と第２の容器とを備え、第１の容器の底部は多孔質膜（排出部）によって構成されている。多孔質膜の材料である疎水性ＰＴＦＥの表面エネルギーは２３ｄｙｎｅｓ／ｃｍである。
次に、多孔質膜交換後のミニ遠心ろ過フィルターの第１の容器に市販のＳＡＰ粒子（日本触媒社製アクアリックＣＡ：膨潤率３０ｇ／ｇ）１００ｍｇを入れた。
このようにして、図１に示されるような濃縮デバイスを得た。
得られた濃縮デバイスを用いて、実施例Ａ１と同様に、検体液の濃縮、及び、ＬＡＭの検出を行った。ＬＡＭ濃縮率を表１に示す。
なお、得られた検体液濃縮液の量は６０μＬ、濃縮時間は７分であった。得られた検体液濃縮液の量が少ない理由として、多孔質膜の孔径が小さいことが考えられる。
［実施例Ａ７］
実施例Ａ１と同様の手順に従って、濃縮デバイスを作製した。
上述した検体液をプールした尿検体で４倍に希釈して、ＬＡＭ濃度が０．０２５ｎｇ／ｍＬの検体液（抗原を含み得る液）を調製し、この検体液を用いた点以外は実施例Ａ１と同様に、検体液の濃縮、及び、ＬＡＭの検出を行った。ＬＡＭ濃縮率を表１に示す。
実施例Ａ１と同様の手順に従って、濃縮デバイスを作製した。
上述した検体液をプールした尿検体で４倍に希釈して、ＬＡＭ濃度が０．０２５ｎｇ／ｍＬの検体液（抗原を含み得る液）を調製し、この検体液を用いた点以外は実施例Ａ１と同様に、検体液の濃縮、及び、ＬＡＭの検出を行った。ＬＡＭ濃縮率を表１に示す。
［比較例Ａ１］
実施例Ａ１で用いたミニ遠心ろ過フィルターから多孔質膜（材質：ＰＥＳ）を取り出して、代わりに、多孔質膜（材質：ガラスファイバー（ＧＦ）、孔径：１００μｍ）（メルク社製ＧＦ膜）を取り付けた。多孔質膜交換後のミニ遠心ろ過フィルターは、図２に示されるように、第１の容器と第２の容器とを備え、第１の容器の底部は多孔質膜（排出部）によって構成されている。多孔質膜の材料であるＧＦの表面エネルギーは７３ｄｙｎｅｓ／ｃｍである。
次に、多孔質膜交換後のミニ遠心ろ過フィルターの第１の容器に市販のＳＡＰ粒子（日本触媒社製アクアリックＣＡ：膨潤率３０ｇ／ｇ）１００ｍｇを入れた。
このようにして、図１に示されるような濃縮デバイスを得た。
得られた濃縮デバイスを用いて実施例Ａ１と同様に検体液の濃縮を行おうとしたところ、第１の容器に注入された検体液は第１の容器に保持されずに排出部から全て排出されて第２の容器に回収された。回収された検体液は７００μＬであった。第２の容器に回収された検体液について、実施例Ａ１と同様にＬＡＭの検出を行った。ＬＡＭ濃縮率を表１に示す。
実施例Ａ１で用いたミニ遠心ろ過フィルターから多孔質膜（材質：ＰＥＳ）を取り出して、代わりに、多孔質膜（材質：ガラスファイバー（ＧＦ）、孔径：１００μｍ）（メルク社製ＧＦ膜）を取り付けた。多孔質膜交換後のミニ遠心ろ過フィルターは、図２に示されるように、第１の容器と第２の容器とを備え、第１の容器の底部は多孔質膜（排出部）によって構成されている。多孔質膜の材料であるＧＦの表面エネルギーは７３ｄｙｎｅｓ／ｃｍである。
次に、多孔質膜交換後のミニ遠心ろ過フィルターの第１の容器に市販のＳＡＰ粒子（日本触媒社製アクアリックＣＡ：膨潤率３０ｇ／ｇ）１００ｍｇを入れた。
このようにして、図１に示されるような濃縮デバイスを得た。
得られた濃縮デバイスを用いて実施例Ａ１と同様に検体液の濃縮を行おうとしたところ、第１の容器に注入された検体液は第１の容器に保持されずに排出部から全て排出されて第２の容器に回収された。回収された検体液は７００μＬであった。第２の容器に回収された検体液について、実施例Ａ１と同様にＬＡＭの検出を行った。ＬＡＭ濃縮率を表１に示す。
［比較例Ａ２］
実施例Ａ１で用いたミニ遠心ろ過フィルターから多孔質膜（材質：ＰＥＳ）を取り出して、代わりに、多孔質膜（材質：セルロース、孔径：０．０１μｍ未満）（メルク社製アミコンウルトラ３ｋＤａ、０．５ｍＬから取り出した膜）を取り付けた。多孔質膜交換後のミニ遠心ろ過フィルターは、図２に示されるように、第１の容器と第２の容器とを備え、第１の容器の底部は多孔質膜（排出部）によって構成されている。多孔質膜の材料であるＧＦの表面エネルギーは７３ｄｙｎｅｓ／ｃｍである。
次に、多孔質膜交換後のミニ遠心ろ過フィルターの第１の容器に市販のＳＡＰ粒子（日本触媒社製アクアリックＣＡ：膨潤率３０ｇ／ｇ）１００ｍｇを入れた。
このようにして、図１に示されるような濃縮デバイスを得た。
得られた濃縮デバイスを用いて実施例Ａ１と同様に検体液の濃縮を行おうとしたところ、排出工程において短時間の遠心では検体液濃縮液が多孔質膜から排出されず、検体液濃縮液を回収することができなかった。そのため、ＬＡＭの検出を行わなかった。
実施例Ａ１で用いたミニ遠心ろ過フィルターから多孔質膜（材質：ＰＥＳ）を取り出して、代わりに、多孔質膜（材質：セルロース、孔径：０．０１μｍ未満）（メルク社製アミコンウルトラ３ｋＤａ、０．５ｍＬから取り出した膜）を取り付けた。多孔質膜交換後のミニ遠心ろ過フィルターは、図２に示されるように、第１の容器と第２の容器とを備え、第１の容器の底部は多孔質膜（排出部）によって構成されている。多孔質膜の材料であるＧＦの表面エネルギーは７３ｄｙｎｅｓ／ｃｍである。
次に、多孔質膜交換後のミニ遠心ろ過フィルターの第１の容器に市販のＳＡＰ粒子（日本触媒社製アクアリックＣＡ：膨潤率３０ｇ／ｇ）１００ｍｇを入れた。
このようにして、図１に示されるような濃縮デバイスを得た。
得られた濃縮デバイスを用いて実施例Ａ１と同様に検体液の濃縮を行おうとしたところ、排出工程において短時間の遠心では検体液濃縮液が多孔質膜から排出されず、検体液濃縮液を回収することができなかった。そのため、ＬＡＭの検出を行わなかった。
［比較例Ａ３］
実施例Ａ１の濃縮デバイスの代わりに、ミニ遠心ろ過フィルター（ＶＩＶＡＣＬＥＡＲ ＭＩＮＩ ０．８μｍ、多孔質膜の材質：ポリエーテルスルホン（ＰＥＳ）、多孔質膜の孔径：０．８μｍザルトリウス社製）（ＳＡＰ粒子を入れていないもの）を使用して、実施例Ａ１と同様に検体液注入工程、排出工程及び回収工程を行った。第１の容器に注入した検体液全てが第２の容器に回収された。回収された検体液の量は７００μＬであった。回収された検体液について、実施例Ａ１と同様にＬＡＭの検出を行った。ＬＡＭ濃縮率を表１に示す。
実施例Ａ１の濃縮デバイスの代わりに、ミニ遠心ろ過フィルター（ＶＩＶＡＣＬＥＡＲ ＭＩＮＩ ０．８μｍ、多孔質膜の材質：ポリエーテルスルホン（ＰＥＳ）、多孔質膜の孔径：０．８μｍザルトリウス社製）（ＳＡＰ粒子を入れていないもの）を使用して、実施例Ａ１と同様に検体液注入工程、排出工程及び回収工程を行った。第１の容器に注入した検体液全てが第２の容器に回収された。回収された検体液の量は７００μＬであった。回収された検体液について、実施例Ａ１と同様にＬＡＭの検出を行った。ＬＡＭ濃縮率を表１に示す。
［比較例Ａ４］
アミコンウルトラ（３ｋ（３ｋは、３ＫＤａで、分画分子量））（メルク社製；ＵＦＣ５００３ＢＫ）を用いて、上述した検体液を濃縮した。該製品は、図１３に示すとおり、ろ過膜ユニットと通液回収容器からなる。ろ過膜ユニットを通液回収容器（ろ過膜はない）に差し込んだ状態で遠心を行い、ろ過膜ユニットから濃縮液を回収する製品である。ろ過膜ユニットに残った濃縮液を回収する手法は、最初の遠心時に対して回収容器に差し込む向きを逆向きにしてろ過膜ユニットを通液回収容器に差し込んで、低回転数で遠心を行うことで濃縮液を回収する事が出来る。
ろ過膜ユニットに使われている濾過膜は、ミリポア社製で、低吸着再生セルロース膜を利用しており、孔径は、未記載だが、分画分子量が３ＫＤａであることから、０．０５μｍ以下であると推定される膜である。通液回収容器は、２つ存在していて、一方はろ過膜ユニットから通過した液を回収・廃棄する容器である。他方は、ろ過膜ユニットの残った濃縮液を回収するための容器である。
このような製品のろ過膜ユニットにＬＡＭ濃度が０．１ｎｇ／ｍＬの検体液を７００μＬ入れた。通液回収容器１に差し込んだ状態で２０分間、４℃、８０００ｒｐｍの回転数で遠心した。この際、通液回収容器側に３７０μＬの液が移動して、ろ過膜ユニットには少量の液が残った。通液回収容器を新しい容器（通液回収容器２）に入れ替えて、限外ろ過ユニットを最初の遠心の時に対して回収容器に差し込む向きを逆向きに回収容器に差し込んで、２０００ｒｐｍ２分間で遠心を行った（逆スピン遠心という）。結果得られた検体液濃縮液の量は１３０μＬだった。この時、濃縮に要した時間は、２６分だった。得られた検体液濃縮液について、実施例Ａ１と同様にＬＡＭの検出を行った。ＬＡＭ濃縮率を表１に示す。
アミコンウルトラ（３ｋ（３ｋは、３ＫＤａで、分画分子量））（メルク社製；ＵＦＣ５００３ＢＫ）を用いて、上述した検体液を濃縮した。該製品は、図１３に示すとおり、ろ過膜ユニットと通液回収容器からなる。ろ過膜ユニットを通液回収容器（ろ過膜はない）に差し込んだ状態で遠心を行い、ろ過膜ユニットから濃縮液を回収する製品である。ろ過膜ユニットに残った濃縮液を回収する手法は、最初の遠心時に対して回収容器に差し込む向きを逆向きにしてろ過膜ユニットを通液回収容器に差し込んで、低回転数で遠心を行うことで濃縮液を回収する事が出来る。
ろ過膜ユニットに使われている濾過膜は、ミリポア社製で、低吸着再生セルロース膜を利用しており、孔径は、未記載だが、分画分子量が３ＫＤａであることから、０．０５μｍ以下であると推定される膜である。通液回収容器は、２つ存在していて、一方はろ過膜ユニットから通過した液を回収・廃棄する容器である。他方は、ろ過膜ユニットの残った濃縮液を回収するための容器である。
このような製品のろ過膜ユニットにＬＡＭ濃度が０．１ｎｇ／ｍＬの検体液を７００μＬ入れた。通液回収容器１に差し込んだ状態で２０分間、４℃、８０００ｒｐｍの回転数で遠心した。この際、通液回収容器側に３７０μＬの液が移動して、ろ過膜ユニットには少量の液が残った。通液回収容器を新しい容器（通液回収容器２）に入れ替えて、限外ろ過ユニットを最初の遠心の時に対して回収容器に差し込む向きを逆向きに回収容器に差し込んで、２０００ｒｐｍ２分間で遠心を行った（逆スピン遠心という）。結果得られた検体液濃縮液の量は１３０μＬだった。この時、濃縮に要した時間は、２６分だった。得られた検体液濃縮液について、実施例Ａ１と同様にＬＡＭの検出を行った。ＬＡＭ濃縮率を表１に示す。
［比較例Ａ５］
実施例Ａ１で用いたミニ遠心ろ過フィルターから多孔質膜（材質：ＰＥＳ）を取り出して、代わりに、多孔質膜（材質：ポリプロピレン（ＰＰ）、孔径：５０μｍ）（アズワン社製精細ポリプロピレンメッシュ）を取り付けた。多孔質膜交換後のミニ遠心ろ過フィルターは、図２に示されるように、第１の容器と第２の容器とを備え、第１の容器の底部は多孔質膜（排出部）によって構成されている。多孔質膜の材料であるＧＦの表面エネルギーは７３ｄｙｎｅｓ／ｃｍである。
次に、多孔質膜交換後のミニ遠心ろ過フィルターの第１の容器に市販のＳＡＰ粒子（日本触媒社製アクアリックＣＡ：膨潤率３０ｇ／ｇ）１００ｍｇを入れた。
このようにして、図１に示されるような濃縮デバイスを得た。
得られた濃縮デバイスを用いて実施例Ａ１と同様に検体液の濃縮を行おうとしたところ、第１の容器に注入された検体液は第１の容器に保持されずに排出部から排出されて第２の容器に回収された。第２の容器に回収された検体液について、実施例Ａ１と同様にＬＡＭの検出を行った。ＬＡＭ濃縮率を表１に示す。
実施例Ａ１で用いたミニ遠心ろ過フィルターから多孔質膜（材質：ＰＥＳ）を取り出して、代わりに、多孔質膜（材質：ポリプロピレン（ＰＰ）、孔径：５０μｍ）（アズワン社製精細ポリプロピレンメッシュ）を取り付けた。多孔質膜交換後のミニ遠心ろ過フィルターは、図２に示されるように、第１の容器と第２の容器とを備え、第１の容器の底部は多孔質膜（排出部）によって構成されている。多孔質膜の材料であるＧＦの表面エネルギーは７３ｄｙｎｅｓ／ｃｍである。
次に、多孔質膜交換後のミニ遠心ろ過フィルターの第１の容器に市販のＳＡＰ粒子（日本触媒社製アクアリックＣＡ：膨潤率３０ｇ／ｇ）１００ｍｇを入れた。
このようにして、図１に示されるような濃縮デバイスを得た。
得られた濃縮デバイスを用いて実施例Ａ１と同様に検体液の濃縮を行おうとしたところ、第１の容器に注入された検体液は第１の容器に保持されずに排出部から排出されて第２の容器に回収された。第２の容器に回収された検体液について、実施例Ａ１と同様にＬＡＭの検出を行った。ＬＡＭ濃縮率を表１に示す。
［参考例Ａ６］
比較例Ａ３と同様の手順に従って、濃縮デバイスを作製した。
上述した検体液をプールした尿検体で４倍に希釈して、ＬＡＭ濃度が０．０２５ｎｇ／ｍＬの検体液（抗原を含み得る液）を調製し、この検体液を用いた点以外は比較例Ａ３と同様に検体液注入工程、排出工程及び回収工程を行った。第１の容器に注入した検体液全てが第２の容器に回収された。回収された検体液の量は７００μＬであった。回収された検体液について、実施例Ａ１と同様にＬＡＭの検出を行ったが検出限界以下で濃度が確認されなかった。ＬＡＭ濃縮はされていないので表１に１倍として表記した。
比較例Ａ３と同様の手順に従って、濃縮デバイスを作製した。
上述した検体液をプールした尿検体で４倍に希釈して、ＬＡＭ濃度が０．０２５ｎｇ／ｍＬの検体液（抗原を含み得る液）を調製し、この検体液を用いた点以外は比較例Ａ３と同様に検体液注入工程、排出工程及び回収工程を行った。第１の容器に注入した検体液全てが第２の容器に回収された。回収された検体液の量は７００μＬであった。回収された検体液について、実施例Ａ１と同様にＬＡＭの検出を行ったが検出限界以下で濃度が確認されなかった。ＬＡＭ濃縮はされていないので表１に１倍として表記した。
表１中、「ＳＡＰ膨潤率」は、使用された高吸水性ポリマーの膨潤率［ｇ／ｇ］を表す。膨潤率の測定方法は上述のとおりである。
表１中、「多孔質膜材質」は、使用された多孔質膜の材質を表し、ＰＥＳはポリエーテルスルホン、ＣＡはセルロースアセテート、ＧＦはガラスファイバー、親水性ＰＴＦＥは親水性ポリテトラフルオロエチレン、疎水性ＰＴＦＥは疎水性ポリテトラフルオロエチレン、ＰＰはポリプロピレンを表す。
表１中、「孔径」は、使用された多孔質膜の孔径［μｍ］を表す。
表１中、「表面エネルギー」は、使用された多孔質膜の材料の表面エネルギー［ｄｙｎｅｓ／ｃｍ］を表す。表面エネルギーの測定方法は上述のとおりである。
表１中、「濃縮時間」は、検体液注入工程から回収工程までにかかった時間（分）を表す。濃縮時間は、実用上、２０分以下であることが好ましい。
表１中、「多孔質膜材質」は、使用された多孔質膜の材質を表し、ＰＥＳはポリエーテルスルホン、ＣＡはセルロースアセテート、ＧＦはガラスファイバー、親水性ＰＴＦＥは親水性ポリテトラフルオロエチレン、疎水性ＰＴＦＥは疎水性ポリテトラフルオロエチレン、ＰＰはポリプロピレンを表す。
表１中、「孔径」は、使用された多孔質膜の孔径［μｍ］を表す。
表１中、「表面エネルギー」は、使用された多孔質膜の材料の表面エネルギー［ｄｙｎｅｓ／ｃｍ］を表す。表面エネルギーの測定方法は上述のとおりである。
表１中、「濃縮時間」は、検体液注入工程から回収工程までにかかった時間（分）を表す。濃縮時間は、実用上、２０分以下であることが好ましい。
表１から分かるように、本発明の濃縮デバイスである実施例Ａ１～Ａ７を用いた場合、短時間（２０分以下）で検体液を濃縮することができた。なかでも、多孔質膜が２４ｄｙｎｅｓ／ｃｍ以上７５ｄｙｎｅｓ／ｃｍ以下の表面エネルギーを有する材料からなる実施例Ａ１～Ａ５及び実施例Ａ７は、より高い濃縮率を示した。そのなかでも、多孔質膜が４０ｄｙｎｅｓ／ｃｍ以上７５ｄｙｎｅｓ／ｃｍ以下の表面エネルギーを有する材料からなる実施例Ａ１～Ａ４は、さらに高い濃縮率を示した。
一方、多孔質膜の孔径が１０μｍを超える比較例Ａ１及び比較例Ａ５は、上述のとおり、注入された検体液が第１の容器に保持されず、検体液を濃縮することができなかった。
また、多孔質膜の孔径が０．０５μｍ未満の比較例Ａ２は、上述のとおり、検体液濃縮液を回収することができなかった。また、高吸水性ポリマーを有さない比較例Ａ３及び比較例Ａ６は、検体液を濃縮することができなかった。
また、多孔質膜の孔径が０．０５μｍ未満の比較例Ａ２は、上述のとおり、検体液濃縮液を回収することができなかった。また、高吸水性ポリマーを有さない比較例Ａ３及び比較例Ａ６は、検体液を濃縮することができなかった。
実施例Ａ１～Ａ５は、逆スピン遠心が必要なく遠心回数１回で、かつ、７分という短時間で濃縮倍率が４倍出来ているのに対して、比較例Ａ４では、同程度の濃縮率を得るのに、遠心回数が２回で濃縮時間も３倍以上かかることが分かった。
ＬＡＭキットを用いて得られた光学濃度は、実施例Ａ１～Ａ５、比較例Ａ４の濃度が同じ程度であり、その１／４程度の濃度が、比較例Ａ１と実施例Ａ７の測定で得られた。比較例Ａ６の濃度は更に低い濃度であった。本発明の構成を有するキットを用いることにより、短時間で操作可能な濃縮手段で、４倍の検出感度が達成できることがわかった。
ＬＡＭキットを用いて得られた光学濃度は、実施例Ａ１～Ａ５、比較例Ａ４の濃度が同じ程度であり、その１／４程度の濃度が、比較例Ａ１と実施例Ａ７の測定で得られた。比較例Ａ６の濃度は更に低い濃度であった。本発明の構成を有するキットを用いることにより、短時間で操作可能な濃縮手段で、４倍の検出感度が達成できることがわかった。
［Ｂ］抗原がインフルエンザウイルスである場合
［検体液の調製］
クイックＳ－インフルＡ・Ｂ「生研」陰性／陽性コントロール液（品番；３２２９６８、デンカ生研社製）を用いて検体液（抗原を含み得る液）を調製した。
具体的には、上記コントロール液を、０．１質量％ＢＳＡ（Ｂｏｖｉｎｅ Ｓｅｒｕｍ Ａｌｂｕｍｉｎ）を含むＰＢＳ（Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｂｕｆｆｅｒｅｄ ｓａｌｔｓ）バッファーで希釈し、各濃度の検体液（抗原を含み得る液）とした。ここで、濃度（倍）とは、コントロール液／（コントロール液＋バッファー）であり、例えば、コントロール液をバッファーで１００倍に希釈した場合、濃度は０．０１倍である。
クイックＳ－インフルＡ・Ｂ「生研」陰性／陽性コントロール液（品番；３２２９６８、デンカ生研社製）を用いて検体液（抗原を含み得る液）を調製した。
具体的には、上記コントロール液を、０．１質量％ＢＳＡ（Ｂｏｖｉｎｅ Ｓｅｒｕｍ Ａｌｂｕｍｉｎ）を含むＰＢＳ（Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｂｕｆｆｅｒｅｄ ｓａｌｔｓ）バッファーで希釈し、各濃度の検体液（抗原を含み得る液）とした。ここで、濃度（倍）とは、コントロール液／（コントロール液＋バッファー）であり、例えば、コントロール液をバッファーで１００倍に希釈した場合、濃度は０．０１倍である。
［インフルエンザウイルス検出用イムノクロマトグラフキットの作製］
以下のとおり、被検物質（生体液中に含まれる高分子）としてインフルエンザウイルスを検出するためのインフルエンザウイルス検出用イムノクロマトグラフキット（検出デバイス）を作製した。
以下のとおり、被検物質（生体液中に含まれる高分子）としてインフルエンザウイルスを検出するためのインフルエンザウイルス検出用イムノクロマトグラフキット（検出デバイス）を作製した。
（１－１）被検物質に結合可能な第１の物質が修飾された標識物質としての抗インフルエンザＡ型抗体修飾金コロイドの作製
直径５０ｎｍの金コロイドを含有する溶液（品番：ＥＭ．ＧＣ５０、ＢＢＩ社製）９ｍＬに５０ｍｍｏｌ／ＬのＫＨ２ＰＯ４バッファー（ｐＨ７．５）を１ｍＬ加えてｐＨの調整を行い、その後、１６０μｇ／ｍＬの抗インフルエンザＡ型モノクローナル抗体（Ａｎｔｉ－Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ａ ＳＰＴＮ－５ ７３０７、Ｍｅｄｉｘ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａ社製）含有溶液１ｍＬを加えて１０分間攪拌した。その後、１０分間静置した後に、１質量％のポリエチレングリコール（ＰＥＧ（ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ）；重量平均分子量（Ｍｗ．）：２００００、品番：１６８－１１２８５、富士フイルム和光純薬（株）社製）含有水溶液を５５０μＬ加えて１０分間攪拌し、続いて１０質量％牛血清アルブミン（ＢＳＡ（Ｂｏｖｉｎｅ ｓｅｒｕｍ ａｌｂｕｍｉｎ）；ＦｒａｃｔｉｏｎＶ、品番：Ａ－７９０６、ＳＩＧＭＡ社製）の水溶液を１．１ｍＬ加えて１０分間攪拌した。この溶液を遠心分離装置（ｈｉｍａｃＣＦ１６ＲＸ、日立（株）社製）を用いて、８０００×ｇ、４℃の条件で３０分間遠心分離した。容器の底に１ｍＬを残して上澄み液を取り除き、超音波洗浄機により容器の底に残った１ｍＬ液中に含まれる金コロイドを再分散した。この後、２０ｍＬの金コロイド保存液（２０ｍｍｏｌ／Ｌ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ（トリス塩酸）バッファー（ｐＨ８．２）、０．０５％ＰＥＧ（Ｍｗ．２００００）、１５０ｍｍｏｌ／Ｌ ＮａＣｌ、１％ＢＳＡ）に分散し、再び同じ遠心分離装置を用いて同様の条件で遠心分離を行い、上澄み液を取り除き、超音波分散後、金コロイド保存液に分散し、抗インフルエンザＡ型抗体修飾金コロイド（５０ｎｍ）溶液を得た。
直径５０ｎｍの金コロイドを含有する溶液（品番：ＥＭ．ＧＣ５０、ＢＢＩ社製）９ｍＬに５０ｍｍｏｌ／ＬのＫＨ２ＰＯ４バッファー（ｐＨ７．５）を１ｍＬ加えてｐＨの調整を行い、その後、１６０μｇ／ｍＬの抗インフルエンザＡ型モノクローナル抗体（Ａｎｔｉ－Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ａ ＳＰＴＮ－５ ７３０７、Ｍｅｄｉｘ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａ社製）含有溶液１ｍＬを加えて１０分間攪拌した。その後、１０分間静置した後に、１質量％のポリエチレングリコール（ＰＥＧ（ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ）；重量平均分子量（Ｍｗ．）：２００００、品番：１６８－１１２８５、富士フイルム和光純薬（株）社製）含有水溶液を５５０μＬ加えて１０分間攪拌し、続いて１０質量％牛血清アルブミン（ＢＳＡ（Ｂｏｖｉｎｅ ｓｅｒｕｍ ａｌｂｕｍｉｎ）；ＦｒａｃｔｉｏｎＶ、品番：Ａ－７９０６、ＳＩＧＭＡ社製）の水溶液を１．１ｍＬ加えて１０分間攪拌した。この溶液を遠心分離装置（ｈｉｍａｃＣＦ１６ＲＸ、日立（株）社製）を用いて、８０００×ｇ、４℃の条件で３０分間遠心分離した。容器の底に１ｍＬを残して上澄み液を取り除き、超音波洗浄機により容器の底に残った１ｍＬ液中に含まれる金コロイドを再分散した。この後、２０ｍＬの金コロイド保存液（２０ｍｍｏｌ／Ｌ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ（トリス塩酸）バッファー（ｐＨ８．２）、０．０５％ＰＥＧ（Ｍｗ．２００００）、１５０ｍｍｏｌ／Ｌ ＮａＣｌ、１％ＢＳＡ）に分散し、再び同じ遠心分離装置を用いて同様の条件で遠心分離を行い、上澄み液を取り除き、超音波分散後、金コロイド保存液に分散し、抗インフルエンザＡ型抗体修飾金コロイド（５０ｎｍ）溶液を得た。
（１－２）標識保持パッドとしての抗インフルエンザＡ型抗体修飾金コロイド保持パッドの作製
（１－１）で作成した抗インフルエンザＡ型抗体修飾金コロイドを、Ｔｒｉｓ－ＨＣｌバッファー（ｐＨ８．２）の濃度が２０ｍｍｏｌ／Ｌ、ＰＥＧ（Ｍｗ．２００００）の濃度が０．０５質量％、スクロースの濃度が５質量％、そして光路長１０ｍｍとしたときの金コロイドの５２０ｎｍの光学濃度が０．１となるように水で希釈し、金コロイド塗布液とした。この塗布液を、１２ｍｍ×３００ｍｍに切ったグラスファイバーパッド（ＧｌａｓｓＦｉｂｅｒ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｐａｄ、ミリポア社製）１枚あたり０．８ｍＬずつ均一に塗布し、２４時間減圧乾燥することで抗インフルエンザＡ型抗体修飾金コロイド保持パッド（金コロイド保持パッド）を得た。
（１－１）で作成した抗インフルエンザＡ型抗体修飾金コロイドを、Ｔｒｉｓ－ＨＣｌバッファー（ｐＨ８．２）の濃度が２０ｍｍｏｌ／Ｌ、ＰＥＧ（Ｍｗ．２００００）の濃度が０．０５質量％、スクロースの濃度が５質量％、そして光路長１０ｍｍとしたときの金コロイドの５２０ｎｍの光学濃度が０．１となるように水で希釈し、金コロイド塗布液とした。この塗布液を、１２ｍｍ×３００ｍｍに切ったグラスファイバーパッド（ＧｌａｓｓＦｉｂｅｒ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｐａｄ、ミリポア社製）１枚あたり０．８ｍＬずつ均一に塗布し、２４時間減圧乾燥することで抗インフルエンザＡ型抗体修飾金コロイド保持パッド（金コロイド保持パッド）を得た。
（１－３）クロマトグラフ担体の作製
不溶性担体として、６０ｍｍ×３００ｍｍに切断したニトロセルロースメンブレン（プラスチックの裏打ちあり、ＨｉＦｌｏｗ Ｐｌｕｓ ＨＦ１３５（キャピラリーフローレート＝１３５秒／ｃｍ）、ミリポア社製）を用い、このメンブレン上に以下のような方法により、検査領域、確認領域および増幅指標領域を形成してクロマトグラフ担体を作製した。
不溶性担体として、６０ｍｍ×３００ｍｍに切断したニトロセルロースメンブレン（プラスチックの裏打ちあり、ＨｉＦｌｏｗ Ｐｌｕｓ ＨＦ１３５（キャピラリーフローレート＝１３５秒／ｃｍ）、ミリポア社製）を用い、このメンブレン上に以下のような方法により、検査領域、確認領域および増幅指標領域を形成してクロマトグラフ担体を作製した。
ニトロセルロースメンブレンの６０ｍｍの短辺のうちの下流側から１５ｍｍの位置に、１．５ｍｇ／ｍＬとなるように調製した抗インフルエンザＡ型モノクローナル抗体（Ａｎｔｉ－Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ａ ＳＰＴＮ－５ ７３０７、Ｍｅｄｉｘ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａ社製）溶液をライン状に塗布し検査領域とした。さらに６０ｍｍの短辺のうちの下流側から１１ｍｍの位置に、０．２ｍｇ／ｍＬとなるように調製した抗マウスＩｇＧ抗体（抗マウスＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）、ウサギＦ（ａｂ’）２、品番５６６－７０６２１、富士フイルム和光純薬（株）社製）溶液をライン状に塗布し確認領域とした。さらに６０ｍｍの短辺のうちの下流側から９ｍｍの位置に、３０ｍｍｏｌ／Ｌに調製したブロモクレゾールグリーン（富士フイルム和光純薬（株）社製）をライン状に塗布し増幅指標領域とした。それぞれの塗布の後にニトロセルロースメンブレンを、温風式乾燥機で５０℃、３０分間乾燥した。乾燥が終了した後、ブロッキング液（０．５質量％カゼイン（乳由来、品番０３０－０１５０５、富士フイルム和光純薬（株）社製）を含有する５０ｍｍｏｌ／Ｌのホウ酸バッファー（ｐＨ８．５））５００ｍＬを入れたバットに、上記のように乾燥したニトロースメンブレンを浸漬させてそのまま３０分間静置した。その後ニトロセルロースメンブレンを取り出して、別のバットに準備した洗浄・安定化液（０．５質量％スクロースおよび０．０５質量％コール酸ナトリウムを含む５０ｍｍｏｌ／Ｌ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ７．５）バッファー）５００ｍＬ中にニトロセルロースメンブレンを浸し、そのまま３０分間静置した。その後、ニトロセルロースメンブレンを液から取り出し、２５℃の環境で２４時間乾燥させた。
抗インフルエンザＡ型抗体を固定化した部分が、被検物質に結合する第２の物質を含む検査領域、抗マウスＩｇＧ抗体固定化した部分が、第１の物質に結合可能な物質を含む確認領域、ブロモクレゾールグリーンを固定した部分が、下記に記載した、第２のポットに封入する還元剤溶液である第２の増幅液と反応する物質を含む増幅指標領域にそれぞれ相当する。
（１－４）検査用ストリップの作製
バック粘着シート（６０ｍｍ×３００ｍｍ（ニップンテクノクラスタ社製））に、（１－３）で作製したクロマトグラフ担体を貼り付けた。次に、クロマトグラフ担体の短辺のうちの下流側から２６ｍｍの位置に幅３ｍｍの両面テープ（日東電工）を固定した。その後、両面テープの下流端と（１－２）で作製した金コロイド保持パッドの下流端が重なるようにして金コロイド保持パッドをクロマトグラフ担体に固定した。送液用パッド（２５ｍｍ×３００ｍｍに切ったグラスファイバーパッド（Ｇｌａｓｓ Ｆｉｂｅｒ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｐａｄ、ミリポア社製））をクロマトグラフ担体の上流側に、送液用パッドとクロマトグラフ担体が７ｍｍ重なるように貼り付けた。こうして作製した部材を、３００ｍｍの長辺と垂直な方向に対して平行に、幅が５ｍｍとなるようにギロチン式カッター（ＣＭ４０００、ニップンテクノクラスタ社製）で切断し、６０本の検査用ストリップ（但し、吸収パッドを含まない。）を作製した。
バック粘着シート（６０ｍｍ×３００ｍｍ（ニップンテクノクラスタ社製））に、（１－３）で作製したクロマトグラフ担体を貼り付けた。次に、クロマトグラフ担体の短辺のうちの下流側から２６ｍｍの位置に幅３ｍｍの両面テープ（日東電工）を固定した。その後、両面テープの下流端と（１－２）で作製した金コロイド保持パッドの下流端が重なるようにして金コロイド保持パッドをクロマトグラフ担体に固定した。送液用パッド（２５ｍｍ×３００ｍｍに切ったグラスファイバーパッド（Ｇｌａｓｓ Ｆｉｂｅｒ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｐａｄ、ミリポア社製））をクロマトグラフ担体の上流側に、送液用パッドとクロマトグラフ担体が７ｍｍ重なるように貼り付けた。こうして作製した部材を、３００ｍｍの長辺と垂直な方向に対して平行に、幅が５ｍｍとなるようにギロチン式カッター（ＣＭ４０００、ニップンテクノクラスタ社製）で切断し、６０本の検査用ストリップ（但し、吸収パッドを含まない。）を作製した。
（１－５）増幅液の作製
（１－５－１）第２のポットに封入する増幅液（還元剤溶液）の作製
水２９０ｇに、硝酸鉄（ＩＩＩ）九水和物（富士フイルム和光純薬（株）社製、０９５－００９９５）を水に溶解して作製した１ｍｏｌ／Ｌの硝酸鉄水溶液２３．６ｍＬ、クエン酸（富士フイルム和光純薬（株）社製、０３８－０６９２５）１３．１ｇを溶解させた。全て溶解してから、スターラーで攪拌しながら硝酸（１０重量％）溶液を３６ｍＬ加え、硫酸アンモニウム鉄（ＩＩ）六水和物（富士フイルム和光純薬（株）社製、０９１－００８５５）を６０．８ｇ加えた。このように調製した溶液を第２のポットに封入する第２の増幅液である還元剤溶液とした。
（１－５－１）第２のポットに封入する増幅液（還元剤溶液）の作製
水２９０ｇに、硝酸鉄（ＩＩＩ）九水和物（富士フイルム和光純薬（株）社製、０９５－００９９５）を水に溶解して作製した１ｍｏｌ／Ｌの硝酸鉄水溶液２３．６ｍＬ、クエン酸（富士フイルム和光純薬（株）社製、０３８－０６９２５）１３．１ｇを溶解させた。全て溶解してから、スターラーで攪拌しながら硝酸（１０重量％）溶液を３６ｍＬ加え、硫酸アンモニウム鉄（ＩＩ）六水和物（富士フイルム和光純薬（株）社製、０９１－００８５５）を６０．８ｇ加えた。このように調製した溶液を第２のポットに封入する第２の増幅液である還元剤溶液とした。
（１－５－２）第１のポットに封入する増幅液（銀イオン溶液）の作製
水６６ｇに、硝酸銀溶液８ｍＬ（１０ｇの硝酸銀を含む）と１ｍｏｌ／Ｌの硝酸鉄水溶液２４ｍＬを加えた。さらに、この溶液と、硝酸（１０重量％）５．９ｍＬ、ドデシルアミン（富士フイルム和光純薬（株）社製、１２３－００２４６）０．１ｇ、界面活性剤Ｃ１２Ｈ２５－Ｃ６Ｈ４－Ｏ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）５０Ｈ ０．１ｇをあらかじめ４７．６ｇの水に溶解した溶液を混合し、これを第１のポットに封入する第１の増幅液である銀イオン溶液とした。
水６６ｇに、硝酸銀溶液８ｍＬ（１０ｇの硝酸銀を含む）と１ｍｏｌ／Ｌの硝酸鉄水溶液２４ｍＬを加えた。さらに、この溶液と、硝酸（１０重量％）５．９ｍＬ、ドデシルアミン（富士フイルム和光純薬（株）社製、１２３－００２４６）０．１ｇ、界面活性剤Ｃ１２Ｈ２５－Ｃ６Ｈ４－Ｏ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）５０Ｈ ０．１ｇをあらかじめ４７．６ｇの水に溶解した溶液を混合し、これを第１のポットに封入する第１の増幅液である銀イオン溶液とした。
（１－６）吸収パッドの作製
１２ｍｍ×１０ｍｍに切ったグラスファイバーパッド（ガラス濾紙、アドバンテック社製）を６０枚準備し、吸収パッドとした。
１２ｍｍ×１０ｍｍに切ったグラスファイバーパッド（ガラス濾紙、アドバンテック社製）を６０枚準備し、吸収パッドとした。
（１－７）イムノクロマトグラフキットの部品の作製
図５および図６等に示すようなイムノクロマトグラフキット１００を構成する下部ケース２０、上部ケース１０、中間部材３０、および第１のポット４０、第２のポット４５を、ポリプロピレンを材料として射出成形によりそれぞれ作製した。上部ケースは住友化学
（株）社製オレフィン系エラストマーであるタフセレン（登録商標）を５０質量％含有するポリプロピレンを材料として射出成形により作製した。なお、上部ケース１０は、２つの変形可能な部位（第１の凸状変形部と第２の凸状変形部と）を備え、この２つの変形部は上部ケース１０と分離する部分はなく、すべての境界部で上部ケース１０の一部として射出成形で作製した。
なお、上部ケースは、図５および図６等に示す第１の凸状変形部１２が２本の突起部を有し、第２の凸状変形部１４が１本の突起部を有する構成とした。上部ケースと下部ケースの材質の曲げ弾性率は、それぞれ９０（ＭＰａ）、７００（ＭＰａ）であった。
図５および図６等に示すようなイムノクロマトグラフキット１００を構成する下部ケース２０、上部ケース１０、中間部材３０、および第１のポット４０、第２のポット４５を、ポリプロピレンを材料として射出成形によりそれぞれ作製した。上部ケースは住友化学
（株）社製オレフィン系エラストマーであるタフセレン（登録商標）を５０質量％含有するポリプロピレンを材料として射出成形により作製した。なお、上部ケース１０は、２つの変形可能な部位（第１の凸状変形部と第２の凸状変形部と）を備え、この２つの変形部は上部ケース１０と分離する部分はなく、すべての境界部で上部ケース１０の一部として射出成形で作製した。
なお、上部ケースは、図５および図６等に示す第１の凸状変形部１２が２本の突起部を有し、第２の凸状変形部１４が１本の突起部を有する構成とした。上部ケースと下部ケースの材質の曲げ弾性率は、それぞれ９０（ＭＰａ）、７００（ＭＰａ）であった。
（１－８）イムノクロマトグラフキットの作製
下部ケース２０、（１－４）で作製した検査用ストリップ１と（１－６）で作製した吸収パッド６を、図５、および図６に示すように固定した。次に、第１のポット４０、第２のポット４５に、それぞれ、（１－５－２）、（１－５－１）で作製した第１のポット４０に封入する第１の増幅液４１、第２のポット４５に封入する第２の増幅液４６を充填し、シート部材４８としてのアルミ箔で第２のポット４５を、シート部材４３としてのアルミ箔で第１のポット４０をそれぞれ封止し、図５、および図６に示すように、第２のポット４５を、シート部材４８を上にして下部ケース２０に、第１のポット４０を、シート部材４３を下にして中間部材３０に装着した。そして、上部ケース１０と下部ケース２０とを外周同士が接触するように嵌め合わせた状態で、上部ケースと下部ケースとの接触部を超音波溶着により接合させた。このとき、溶着部位は密閉状態で均一にすべての部位で溶着されていることを確認した。このようにしてインフルエンザウイルス検出用イムノクロマトグラフキットを作製した。
下部ケース２０、（１－４）で作製した検査用ストリップ１と（１－６）で作製した吸収パッド６を、図５、および図６に示すように固定した。次に、第１のポット４０、第２のポット４５に、それぞれ、（１－５－２）、（１－５－１）で作製した第１のポット４０に封入する第１の増幅液４１、第２のポット４５に封入する第２の増幅液４６を充填し、シート部材４８としてのアルミ箔で第２のポット４５を、シート部材４３としてのアルミ箔で第１のポット４０をそれぞれ封止し、図５、および図６に示すように、第２のポット４５を、シート部材４８を上にして下部ケース２０に、第１のポット４０を、シート部材４３を下にして中間部材３０に装着した。そして、上部ケース１０と下部ケース２０とを外周同士が接触するように嵌め合わせた状態で、上部ケースと下部ケースとの接触部を超音波溶着により接合させた。このとき、溶着部位は密閉状態で均一にすべての部位で溶着されていることを確認した。このようにしてインフルエンザウイルス検出用イムノクロマトグラフキットを作製した。
［実施例Ｂ１］
〔濃縮デバイスの作製〕
実施例Ａ１と同様の手順に従って、濃縮デバイスを作製した。
実施例Ａ１と同様の手順に従って、濃縮デバイスを作製した。
〔検体液の濃縮〕
得られた濃縮デバイスを用いて、上述した実施例Ａ１と同様の手順に従って、上述した検体液（インフルエンザウイルスを含有する検体液）を濃縮した。具体的には、検体液注入工程において、検体液（ＬＡＭを含有する検体液）７００μＬの代わりに、検体液（インフルエンザウイルスを含有する検体液）７００μＬを使用した点以外は、上述した実施例Ａ１と同様の手順に従って、検体液（インフルエンザウイルスを含有する検体液）を濃縮した。
得られた検体液濃縮液の量は１００μＬであった。濃縮時間（検体液注入工程から回収工程までにかかった時間（分））は７分であった。
得られた濃縮デバイスを用いて、上述した実施例Ａ１と同様の手順に従って、上述した検体液（インフルエンザウイルスを含有する検体液）を濃縮した。具体的には、検体液注入工程において、検体液（ＬＡＭを含有する検体液）７００μＬの代わりに、検体液（インフルエンザウイルスを含有する検体液）７００μＬを使用した点以外は、上述した実施例Ａ１と同様の手順に従って、検体液（インフルエンザウイルスを含有する検体液）を濃縮した。
得られた検体液濃縮液の量は１００μＬであった。濃縮時間（検体液注入工程から回収工程までにかかった時間（分））は７分であった。
〔インフルエンザウイルスの検出〕
得られた検体液濃縮液について、以下のとおり、インフルエンザウイルスの検出を行った。
得られた検体液濃縮液について、以下のとおり、インフルエンザウイルスの検出を行った。
（２－１）滴下
得られた検体液濃縮液（４０μＬ）を、上述のとおり作製したインフルエンザウイルス検出用イムノクロマトグラフキットの金コロイド保持パッドに滴下した。これにより、検体液中のインフルエンザＡ型ウイルスと金コロイド保持パッド中のインフルエンザＡ型モノクローナル抗体で修飾された金コロイド粒子（修飾金粒子）との複合体である金粒子複合体が形成された。この状態で、上記ニトロセルロースメンブレンの下流側に展開した。
得られた検体液濃縮液（４０μＬ）を、上述のとおり作製したインフルエンザウイルス検出用イムノクロマトグラフキットの金コロイド保持パッドに滴下した。これにより、検体液中のインフルエンザＡ型ウイルスと金コロイド保持パッド中のインフルエンザＡ型モノクローナル抗体で修飾された金コロイド粒子（修飾金粒子）との複合体である金粒子複合体が形成された。この状態で、上記ニトロセルロースメンブレンの下流側に展開した。
（２－２）第２のポットに封入する増幅液（還元剤溶液）の展開
（２－１）の検体液濃縮液の滴下直後に、第２の凸状変形部１４を押下することで、第２のポット４５に封入した第２の増幅液４６を封止しているシート部材４８であるアルミ箔を破り、第２のポット４５の中に送液用パッド４を浸すことにより、毛細管現象を利用して第２の増幅液４６を不溶性担体２に供給した。
（２－１）の検体液濃縮液の滴下直後に、第２の凸状変形部１４を押下することで、第２のポット４５に封入した第２の増幅液４６を封止しているシート部材４８であるアルミ箔を破り、第２のポット４５の中に送液用パッド４を浸すことにより、毛細管現象を利用して第２の増幅液４６を不溶性担体２に供給した。
（２－３）銀増幅
増幅指標領域Ｌ３が緑からオレンジに変色した後、第１の凸状変形部１２（実施例２では第１の凸状変形部１１４）を押下して第１のポット４０を中間部材３０のポット収容部３２の破断部３４に向けて移動させることにより、第１のポット４０を封止しているシート部材４３であるアルミ箔を破断部３４により押し破り、第１の増幅液４１である銀イオン溶液を中間部材３０の開口部から不溶性担体２に供給して、銀増幅反応を行った。銀増幅反応は数十秒で完了する。
増幅指標領域Ｌ３が緑からオレンジに変色した後、第１の凸状変形部１２（実施例２では第１の凸状変形部１１４）を押下して第１のポット４０を中間部材３０のポット収容部３２の破断部３４に向けて移動させることにより、第１のポット４０を封止しているシート部材４３であるアルミ箔を破断部３４により押し破り、第１の増幅液４１である銀イオン溶液を中間部材３０の開口部から不溶性担体２に供給して、銀増幅反応を行った。銀増幅反応は数十秒で完了する。
（２－４）濃縮率の評価
検査領域Ｌ１の着色を目視により確認し、着色が確認された最も小さい濃度（Ｃ１）を調べたところ、０．０１倍であった。また、検体液を濃縮せずに、同様にインフルエンザウイルスの検出を行い、着色が確認された最も小さい濃度（Ｃ０）を調べたところ、０．０４倍であった。ここで、濃度（Ｃ１）の逆数は濃縮率におよそ比例するため、Ｃ１の逆数をＣ０の逆数で除したものを濃縮率として算出した。結果を表２に示す。濃縮率が１超である場合、検体液が濃縮されたことを意味する。濃縮率が高い方が好ましい。
検査領域Ｌ１の着色を目視により確認し、着色が確認された最も小さい濃度（Ｃ１）を調べたところ、０．０１倍であった。また、検体液を濃縮せずに、同様にインフルエンザウイルスの検出を行い、着色が確認された最も小さい濃度（Ｃ０）を調べたところ、０．０４倍であった。ここで、濃度（Ｃ１）の逆数は濃縮率におよそ比例するため、Ｃ１の逆数をＣ０の逆数で除したものを濃縮率として算出した。結果を表２に示す。濃縮率が１超である場合、検体液が濃縮されたことを意味する。濃縮率が高い方が好ましい。
［実施例Ｂ２］
ＳＡＰ粒子として、ＳＡＰ Ｓｐｈｅｒｅｓ（Ｍ２ ｐｏｌｙｍｅｒ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｓ社製、膨潤率：２０ｇ／ｇ）を使用した点以外は、実施例Ａ１と同様の手順に従って、濃縮デバイスを作製した。
得られた濃縮デバイスを用いて、実施例Ｂ１と同様に、検体液の濃縮、及び、インフルエンザウイルスの検出を行った。着色が確認された最も小さい濃度（Ｃ１）は、０．０１倍であった。濃縮率を表２に示す。
なお、得られた検体液濃縮液の量は４０μＬ、濃縮時間は４分であった。
ＳＡＰ粒子として、ＳＡＰ Ｓｐｈｅｒｅｓ（Ｍ２ ｐｏｌｙｍｅｒ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｓ社製、膨潤率：２０ｇ／ｇ）を使用した点以外は、実施例Ａ１と同様の手順に従って、濃縮デバイスを作製した。
得られた濃縮デバイスを用いて、実施例Ｂ１と同様に、検体液の濃縮、及び、インフルエンザウイルスの検出を行った。着色が確認された最も小さい濃度（Ｃ１）は、０．０１倍であった。濃縮率を表２に示す。
なお、得られた検体液濃縮液の量は４０μＬ、濃縮時間は４分であった。
［実施例Ｂ３］
実施例Ａ３と同様の手順に従って、濃縮デバイスを作製した。
得られた濃縮デバイスを用いて、実施例Ｂ１と同様に、検体液の濃縮、及び、インフルエンザウイルスの検出を行った。着色が確認された最も小さい濃度（Ｃ１）は、０．０１倍であった。濃縮率を表２に示す。
実施例Ａ３と同様の手順に従って、濃縮デバイスを作製した。
得られた濃縮デバイスを用いて、実施例Ｂ１と同様に、検体液の濃縮、及び、インフルエンザウイルスの検出を行った。着色が確認された最も小さい濃度（Ｃ１）は、０．０１倍であった。濃縮率を表２に示す。
［実施例Ｂ４］
実施例Ａ４と同様の手順に従って、濃縮デバイスを作製した。
得られた濃縮デバイスを用いて、実施例Ｂ１と同様に、検体液の濃縮、及び、インフルエンザウイルスの検出を行った。着色が確認された最も小さい濃度（Ｃ１）は、０．０１倍であった。濃縮率を表２に示す。
実施例Ａ４と同様の手順に従って、濃縮デバイスを作製した。
得られた濃縮デバイスを用いて、実施例Ｂ１と同様に、検体液の濃縮、及び、インフルエンザウイルスの検出を行った。着色が確認された最も小さい濃度（Ｃ１）は、０．０１倍であった。濃縮率を表２に示す。
［実施例Ｂ５］
実施例Ａ５と同様の手順に従って、濃縮デバイスを作製した。
得られた濃縮デバイスを用いて、実施例Ｂ１と同様に、検体液の濃縮、及び、インフルエンザウイルスの検出を行った。着色が確認された最も小さい濃度（Ｃ１）は、０．０１２倍であった。濃縮率を表２に示す。
実施例Ａ５と同様の手順に従って、濃縮デバイスを作製した。
得られた濃縮デバイスを用いて、実施例Ｂ１と同様に、検体液の濃縮、及び、インフルエンザウイルスの検出を行った。着色が確認された最も小さい濃度（Ｃ１）は、０．０１２倍であった。濃縮率を表２に示す。
［実施例Ｂ６］
実施例Ａ６と同様の手順に従って、濃縮デバイスを作製した。
得られた濃縮デバイスを用いて、実施例Ｂ１と同様に、検体液の濃縮、及び、インフルエンザウイルスの検出を行った。着色が確認された最も小さい濃度（Ｃ１）は、０．０１倍であった。濃縮率を表２に示す。
実施例Ａ６と同様の手順に従って、濃縮デバイスを作製した。
得られた濃縮デバイスを用いて、実施例Ｂ１と同様に、検体液の濃縮、及び、インフルエンザウイルスの検出を行った。着色が確認された最も小さい濃度（Ｃ１）は、０．０１倍であった。濃縮率を表２に示す。
［実施例Ｂ７］
ＳＡＰ粒子として、市販のＳＡＰ（高吸水性ポリマー）粒子（型番１９７－１２４５１：富士フイルム和光純薬（株）社製）を分粒したもの（粒子径：０．０５ｍｍ、膨潤率：６００ｇ／ｇ、吸水速度：２０ｇ／分）を使用した点以外は、実施例Ａ１と同様の手順に従って、濃縮デバイスを作製した。
得られた濃縮デバイスを用いて、実施例Ｂ１と同様に、検体液の濃縮、及び、インフルエンザウイルスの検出を行った。着色が確認された最も小さい濃度（Ｃ１）は、０．０２倍であった。濃縮率を表２に示す。
ＳＡＰ粒子として、市販のＳＡＰ（高吸水性ポリマー）粒子（型番１９７－１２４５１：富士フイルム和光純薬（株）社製）を分粒したもの（粒子径：０．０５ｍｍ、膨潤率：６００ｇ／ｇ、吸水速度：２０ｇ／分）を使用した点以外は、実施例Ａ１と同様の手順に従って、濃縮デバイスを作製した。
得られた濃縮デバイスを用いて、実施例Ｂ１と同様に、検体液の濃縮、及び、インフルエンザウイルスの検出を行った。着色が確認された最も小さい濃度（Ｃ１）は、０．０２倍であった。濃縮率を表２に示す。
［実施例Ｂ８］
ＳＡＰ粒子として、市販のＳＡＰ（高吸水性ポリマー）粒子（Ｍ２ Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．社製；ＳＡＰ Ｓｐｈｅｒｅ ２．５ｍｍ）を分粒したもの（粒子径：２．５ｍｍ、膨潤率：１３ｇ／ｇ、吸水速度：０．５ｇ／分）を使用した点以外は、実施例Ａ１と同様の手順に従って、濃縮デバイスを作製した。
得られた濃縮デバイスを用いて、実施例Ｂ１と同様に、検体液の濃縮、及び、インフルエンザウイルスの検出を行った。着色が確認された最も小さい濃度（Ｃ１）は、０．０１倍であった。濃縮率を表２に示す。
ＳＡＰ粒子として、市販のＳＡＰ（高吸水性ポリマー）粒子（Ｍ２ Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．社製；ＳＡＰ Ｓｐｈｅｒｅ ２．５ｍｍ）を分粒したもの（粒子径：２．５ｍｍ、膨潤率：１３ｇ／ｇ、吸水速度：０．５ｇ／分）を使用した点以外は、実施例Ａ１と同様の手順に従って、濃縮デバイスを作製した。
得られた濃縮デバイスを用いて、実施例Ｂ１と同様に、検体液の濃縮、及び、インフルエンザウイルスの検出を行った。着色が確認された最も小さい濃度（Ｃ１）は、０．０１倍であった。濃縮率を表２に示す。
［比較例Ｂ１］
比較例Ａ１と同様の手順に従って、濃縮デバイスを作製した。
得られた濃縮デバイスを用いて実施例Ｂ１と同様に検体液の濃縮を行おうとしたところ、第１の容器に注入された検体液は第１の容器に保持されずに排出部から全て排出されて第２の容器に回収された。回収された検体液は７００μＬであった。第２の容器に回収された検体液について、実施例Ｂ１と同様にインフルエンザウイルスの検出を行った。着色が確認された最も小さい濃度（Ｃ１）は、０．０４倍であった。濃縮率を表２に示す。
比較例Ａ１と同様の手順に従って、濃縮デバイスを作製した。
得られた濃縮デバイスを用いて実施例Ｂ１と同様に検体液の濃縮を行おうとしたところ、第１の容器に注入された検体液は第１の容器に保持されずに排出部から全て排出されて第２の容器に回収された。回収された検体液は７００μＬであった。第２の容器に回収された検体液について、実施例Ｂ１と同様にインフルエンザウイルスの検出を行った。着色が確認された最も小さい濃度（Ｃ１）は、０．０４倍であった。濃縮率を表２に示す。
［比較例Ｂ２］
比較例Ａ２と同様の手順に従って、濃縮デバイスを作製した。
得られた濃縮デバイスを用いて実施例Ｂ１と同様に検体液の濃縮を行おうとしたところ、排出工程において短時間の遠心では検体液濃縮液が多孔質膜から排出されず、検体液濃縮液を回収することができなかった。そのため、インフルエンザウイルスの検出を行わなかった。
比較例Ａ２と同様の手順に従って、濃縮デバイスを作製した。
得られた濃縮デバイスを用いて実施例Ｂ１と同様に検体液の濃縮を行おうとしたところ、排出工程において短時間の遠心では検体液濃縮液が多孔質膜から排出されず、検体液濃縮液を回収することができなかった。そのため、インフルエンザウイルスの検出を行わなかった。
［比較例Ｂ３］
実施例Ｂ１の濃縮デバイスの代わりに、ミニ遠心ろ過フィルター（ＶＩＶＡＣＬＥＡＲ ＭＩＮＩ ０．８μｍ、多孔質膜の材質：ポリエーテルスルホン（ＰＥＳ）、多孔質膜の孔径：０．８μｍザルトリウス社製）（ＳＡＰ粒子を入れていないもの）を使用して、実施例Ｂ１と同様に検体液注入工程、排出工程及び回収工程を行った。第１の容器に注入した検体液全てが第２の容器に回収された。回収された検体液の量は７００μＬであった。回収された検体液について、実施例Ｂ１と同様にインフルエンザウイルスの検出を行った。着色が確認された最も小さい濃度（Ｃ１）は、０．０４倍であった。濃縮率を表２に示す。
実施例Ｂ１の濃縮デバイスの代わりに、ミニ遠心ろ過フィルター（ＶＩＶＡＣＬＥＡＲ ＭＩＮＩ ０．８μｍ、多孔質膜の材質：ポリエーテルスルホン（ＰＥＳ）、多孔質膜の孔径：０．８μｍザルトリウス社製）（ＳＡＰ粒子を入れていないもの）を使用して、実施例Ｂ１と同様に検体液注入工程、排出工程及び回収工程を行った。第１の容器に注入した検体液全てが第２の容器に回収された。回収された検体液の量は７００μＬであった。回収された検体液について、実施例Ｂ１と同様にインフルエンザウイルスの検出を行った。着色が確認された最も小さい濃度（Ｃ１）は、０．０４倍であった。濃縮率を表２に示す。
［比較例Ｂ４］
アミコンウルトラ（３ｋ（３ｋは、３ＫＤａで、分画分子量））（メルク社製；ＵＦＣ５００３ＢＫ）を用いて、上述した検体液を濃縮した。該製品は、図１３に示すとおり、ろ過膜ユニットと通液回収容器からなる。ろ過膜ユニットを通液回収容器（ろ過膜はない）に差し込んだ状態で遠心を行い、ろ過膜ユニットから濃縮液を回収する製品である。ろ過膜ユニットに残った濃縮液を回収する手法は、最初の遠心時に対して回収容器に差し込む向きを逆向きにしてろ過膜ユニットを通液回収容器に差し込んで、低回転数で遠心を行うことで濃縮液を回収する事が出来る。
ろ過膜ユニットに使われている濾過膜は、ミリポア社製で、低吸着再生セルロース膜を利用しており、孔径は、未記載だが、分画分子量が３ＫＤａであることから、０．０５μｍ以下であると推定される膜である。通液回収容器は、２つ存在していて、一方はろ過膜ユニットから通過した液を回収・廃棄する容器である。他方は、ろ過膜ユニットの残った濃縮液を回収するための容器である。
このような製品のろ過膜ユニットに検体液を７００μＬ入れた。通液回収容器１に差し込んだ状態で２０分間、４℃、８０００ｒｐｍの回転数で遠心した。この際、通液回収容器側に３７０μＬの液が移動して、ろ過膜ユニットには少量の液が残った。通液回収容器を新しい容器（通液回収容器２）に入れ替えて、限外ろ過ユニットを最初の遠心の時に対して回収容器に差し込む向きを逆向きに回収容器に差し込んで、２０００ｒｐｍ２分間で遠心を行った（逆スピン遠心という）。結果得られた検体液濃縮液の量は１３０μＬだった。この時、濃縮に要した時間は、２６分だった。得られた検体液濃縮液について、実施例Ｂ１と同様にインフルエンザウイルスの検出を行った。着色が確認された最も小さい濃度（Ｃ１）は、０．０１５倍であった。濃縮率を表２に示す。
アミコンウルトラ（３ｋ（３ｋは、３ＫＤａで、分画分子量））（メルク社製；ＵＦＣ５００３ＢＫ）を用いて、上述した検体液を濃縮した。該製品は、図１３に示すとおり、ろ過膜ユニットと通液回収容器からなる。ろ過膜ユニットを通液回収容器（ろ過膜はない）に差し込んだ状態で遠心を行い、ろ過膜ユニットから濃縮液を回収する製品である。ろ過膜ユニットに残った濃縮液を回収する手法は、最初の遠心時に対して回収容器に差し込む向きを逆向きにしてろ過膜ユニットを通液回収容器に差し込んで、低回転数で遠心を行うことで濃縮液を回収する事が出来る。
ろ過膜ユニットに使われている濾過膜は、ミリポア社製で、低吸着再生セルロース膜を利用しており、孔径は、未記載だが、分画分子量が３ＫＤａであることから、０．０５μｍ以下であると推定される膜である。通液回収容器は、２つ存在していて、一方はろ過膜ユニットから通過した液を回収・廃棄する容器である。他方は、ろ過膜ユニットの残った濃縮液を回収するための容器である。
このような製品のろ過膜ユニットに検体液を７００μＬ入れた。通液回収容器１に差し込んだ状態で２０分間、４℃、８０００ｒｐｍの回転数で遠心した。この際、通液回収容器側に３７０μＬの液が移動して、ろ過膜ユニットには少量の液が残った。通液回収容器を新しい容器（通液回収容器２）に入れ替えて、限外ろ過ユニットを最初の遠心の時に対して回収容器に差し込む向きを逆向きに回収容器に差し込んで、２０００ｒｐｍ２分間で遠心を行った（逆スピン遠心という）。結果得られた検体液濃縮液の量は１３０μＬだった。この時、濃縮に要した時間は、２６分だった。得られた検体液濃縮液について、実施例Ｂ１と同様にインフルエンザウイルスの検出を行った。着色が確認された最も小さい濃度（Ｃ１）は、０．０１５倍であった。濃縮率を表２に示す。
［比較例Ｂ５］
比較例Ａ５と同様の手順に従って、濃縮デバイスを作製した。
得られた濃縮デバイスを用いて実施例Ｂ１と同様に検体液の濃縮を行おうとしたところ、第１の容器に注入された検体液は第１の容器に保持されずに排出部から全て排出されて第２の容器に回収された。回収された検体液は７００μＬであった。第２の容器に回収された検体液について、実施例Ｂ１と同様にインフルエンザウイルスの検出を行った。着色が確認された最も小さい濃度（Ｃ１）は、０．０４倍であった。濃縮率を表２に示す。
比較例Ａ５と同様の手順に従って、濃縮デバイスを作製した。
得られた濃縮デバイスを用いて実施例Ｂ１と同様に検体液の濃縮を行おうとしたところ、第１の容器に注入された検体液は第１の容器に保持されずに排出部から全て排出されて第２の容器に回収された。回収された検体液は７００μＬであった。第２の容器に回収された検体液について、実施例Ｂ１と同様にインフルエンザウイルスの検出を行った。着色が確認された最も小さい濃度（Ｃ１）は、０．０４倍であった。濃縮率を表２に示す。
表２中、「ＳＡＰ膨潤率」は、使用された高吸水性ポリマーの膨潤率［ｇ／ｇ］を表す。膨潤率の測定方法は上述のとおりである。
表２中、「多孔質膜材質」は、使用された多孔質膜の材質を表し、ＰＥＳはポリエーテルスルホン、ＣＡはセルロースアセテート、ＧＦはガラスファイバー、親水性ＰＴＦＥは親水性ポリテトラフルオロエチレン、疎水性ＰＴＦＥは疎水性ポリテトラフルオロエチレン、ＰＰはポリプロピレンを表す。
表２中、「孔径」は、使用された多孔質膜の孔径［μｍ］を表す。
表２中、「表面エネルギー」は、使用された多孔質膜の材料の表面エネルギー［ｄｙｎｅｓ／ｃｍ］を表す。表面エネルギーの測定方法は上述のとおりである。
表２中、「濃縮時間」は、検体液注入工程から回収工程までにかかった時間（分）を表す。濃縮時間は、実用上、２０分以下であることが好ましい。
表２中、「最低検出感度となる検体濃度」とは、上述した「着色が確認された最も小さい濃度」を表す。
表２中、「多孔質膜材質」は、使用された多孔質膜の材質を表し、ＰＥＳはポリエーテルスルホン、ＣＡはセルロースアセテート、ＧＦはガラスファイバー、親水性ＰＴＦＥは親水性ポリテトラフルオロエチレン、疎水性ＰＴＦＥは疎水性ポリテトラフルオロエチレン、ＰＰはポリプロピレンを表す。
表２中、「孔径」は、使用された多孔質膜の孔径［μｍ］を表す。
表２中、「表面エネルギー」は、使用された多孔質膜の材料の表面エネルギー［ｄｙｎｅｓ／ｃｍ］を表す。表面エネルギーの測定方法は上述のとおりである。
表２中、「濃縮時間」は、検体液注入工程から回収工程までにかかった時間（分）を表す。濃縮時間は、実用上、２０分以下であることが好ましい。
表２中、「最低検出感度となる検体濃度」とは、上述した「着色が確認された最も小さい濃度」を表す。
表２から分かるように、本発明の濃縮デバイスである実施例Ｂ１～Ｂ８を用いた場合、短時間（２０分以下）で検体液を濃縮することができた。
実施例Ｂ１～Ｂ６の対比（多孔質膜のみが異なる態様同士の対比）から、多孔質膜が２４ｄｙｎｅｓ／ｃｍ以上７５ｄｙｎｅｓ／ｃｍ以下の表面エネルギーを有する材料からなる実施例Ｂ１～Ｂ５は、より高い濃縮率を示した。なかでも、多孔質膜が４０ｄｙｎｅｓ／ｃｍ以上７５ｄｙｎｅｓ／ｃｍ以下の表面エネルギーを有する材料からなる実施例Ｂ１～Ｂ４は、さらに高い濃縮率を示した。
また、実施例Ｂ１及びＢ７～Ｂ８の対比（高吸水性ポリマーのみが異なる態様同士の対比）から、高吸水性ポリマーの膨潤率が５００ｇ／ｇ以下である実施例Ｂ１及びＢ８は、より高い濃縮率を示した。
実施例Ｂ１～Ｂ６の対比（多孔質膜のみが異なる態様同士の対比）から、多孔質膜が２４ｄｙｎｅｓ／ｃｍ以上７５ｄｙｎｅｓ／ｃｍ以下の表面エネルギーを有する材料からなる実施例Ｂ１～Ｂ５は、より高い濃縮率を示した。なかでも、多孔質膜が４０ｄｙｎｅｓ／ｃｍ以上７５ｄｙｎｅｓ／ｃｍ以下の表面エネルギーを有する材料からなる実施例Ｂ１～Ｂ４は、さらに高い濃縮率を示した。
また、実施例Ｂ１及びＢ７～Ｂ８の対比（高吸水性ポリマーのみが異なる態様同士の対比）から、高吸水性ポリマーの膨潤率が５００ｇ／ｇ以下である実施例Ｂ１及びＢ８は、より高い濃縮率を示した。
一方、多孔質膜の孔径が１０μｍを超える比較例Ｂ１及び比較例Ｂ５は、上述のとおり、注入された検体液が第１の容器に保持されず、検体液を濃縮することができなかった。また、多孔質膜の孔径が０．０５μｍ未満の比較例Ｂ２は、上述のとおり、検体液濃縮液を回収することができなかった。また、高吸水性ポリマーを有さない比較例Ｂ３は、検体液を濃縮することができなかった。
１ 検査用ストリップ
２ 不溶性担体
３ 標識保持パッド
４ 送液用パッド
６ 吸収パッド
７ バック粘着シート
９ ハウジングケース
１０ 上部ケース
１２ 第１の凸状変形部
１２ａ 第１の凸状変形部の頂上
１２ｂ 第１の凸状変形部の突起部
１２ｃ 第１の凸状変形部の斜面
１４ 第２の凸状変形部
１４ａ 第２の凸状変形部の頂上
１４ｂ 第２の凸状変形部の突起部
１６ 試料液滴下用開孔
１８ 観察窓
２０ 下部ケース
２１ 不溶性担体収容部
２２ 吸収パッド収容部
２４ 第２のポット収容部
３０ 中間部材
３２ 第１のポット収容部
３４ 破断部
３５ 流路形成部
３６ 流路形成部３５の裏面
４０ １の増幅液用の第１のポット
４１ 第１の増幅液
４２ ポット容器
４３ シート部材
４５ 第２の増幅液用の第２のポット
４６ 第２の増幅液
４７ ポット容器
４８ シート部材
１００ イムノクロマトグラフキット
１１４ 凸状変形部
１１４ａ 凸状変形部１１４の頂上
１１４ｂ 凸状変形部１１４の突起部
２００、２０１、２０２、２０３、２０４ 濃縮デバイス
２００ａ ミニ遠心ろ過フィルター
２１０ 第１の容器
２１１ 開口部
２１２ 排出部
２２０ 第２の容器
２２１ 開口部
２３０ 高吸水性ポリマー
２３２ 膨潤した高吸水性ポリマー
２４０ 検体液
２４２ 検体液濃縮液
３００ ニトロセルロースメンブレン
３０１ 金コロイド保持パッド
３０２ テストライン
３０３ コントロールライン
３０４ 発色試薬固定化ライン
２ 不溶性担体
３ 標識保持パッド
４ 送液用パッド
６ 吸収パッド
７ バック粘着シート
９ ハウジングケース
１０ 上部ケース
１２ 第１の凸状変形部
１２ａ 第１の凸状変形部の頂上
１２ｂ 第１の凸状変形部の突起部
１２ｃ 第１の凸状変形部の斜面
１４ 第２の凸状変形部
１４ａ 第２の凸状変形部の頂上
１４ｂ 第２の凸状変形部の突起部
１６ 試料液滴下用開孔
１８ 観察窓
２０ 下部ケース
２１ 不溶性担体収容部
２２ 吸収パッド収容部
２４ 第２のポット収容部
３０ 中間部材
３２ 第１のポット収容部
３４ 破断部
３５ 流路形成部
３６ 流路形成部３５の裏面
４０ １の増幅液用の第１のポット
４１ 第１の増幅液
４２ ポット容器
４３ シート部材
４５ 第２の増幅液用の第２のポット
４６ 第２の増幅液
４７ ポット容器
４８ シート部材
１００ イムノクロマトグラフキット
１１４ 凸状変形部
１１４ａ 凸状変形部１１４の頂上
１１４ｂ 凸状変形部１１４の突起部
２００、２０１、２０２、２０３、２０４ 濃縮デバイス
２００ａ ミニ遠心ろ過フィルター
２１０ 第１の容器
２１１ 開口部
２１２ 排出部
２２０ 第２の容器
２２１ 開口部
２３０ 高吸水性ポリマー
２３２ 膨潤した高吸水性ポリマー
２４０ 検体液
２４２ 検体液濃縮液
３００ ニトロセルロースメンブレン
３０１ 金コロイド保持パッド
３０２ テストライン
３０３ コントロールライン
３０４ 発色試薬固定化ライン
Claims (13)
- 生体液中に含まれる高分子を含む水溶液である検体液を濃縮し、遠心力を用いて回収するための濃縮デバイスであって、
高吸水性ポリマーが収容された第１の容器と、第２の容器とを備え、
前記第１の容器は、その一部が、孔径が０．０５μｍ以上１０μｍ以下の多孔質膜からなる排出部によって構成され、前記多孔質膜が、２４ｄｙｎｅｓ／ｃｍ以上７５ｄｙｎｅｓ／ｃｍ以下の表面エネルギーを有する材料からなり、
前記高吸水性ポリマーが、前記第１の容器の注入された前記検体液に含まれる溶液を吸収し、前記第１の容器中に前記検体液の濃縮液である検体液濃縮液を生成し、
前記第２の容器が、遠心力によって前記排出部から排出された前記検体液濃縮液を回収する、濃縮デバイス。 - 前記多孔質膜の材質が、セルロースアセテート、ポリエーテルスルホン、及び、ガラスファイバーからなる群より選択される少なくとも１種である、請求項１に記載の濃縮デバイス。
- 前記多孔質膜が、４０ｄｙｎｅｓ／ｃｍ以上７５ｄｙｎｅｓ／ｃｍ以下の表面エネルギーを有する材料からなる、請求項１又は２に記載の濃縮デバイス。
- 前記高吸水性ポリマーの膨潤率が、２０ｇ／ｇ以上８００ｇ／ｇ未満である、請求項１～３のいずれか１項に記載の濃縮デバイス。
- 前記高吸水性ポリマーが、ポリアクリル酸系、ポリアクリルアミド系、セルロース系、又は、ポリエチレンオキシド系のポリマーである、請求項１～４のいずれか１項に記載の濃縮デバイス。
- 前記生体液中に含まれる高分子が、抗原である、請求項１～５のいずれか１項に記載の濃縮デバイス。
- 前記検体液が、尿である、請求項１～６のいずれか１項に記載の濃縮デバイス。
- 前記検体液濃縮液中の尿素の濃度が、前記検体液中の尿素の濃度の５倍以下である、請求項７に記載の濃縮デバイス。
- 請求項１～８のいずれか１項に記載の濃縮デバイスを用いて、生体液中に含まれる高分子を含む水溶液である検体液を濃縮する、検体液の濃縮方法であって、
前記第１の容器に前記検体液を注入する、検体液注入工程と、
前記第１の容器に注入された検体液に含まれる溶液が前記第１の容器に収容された高吸水性ポリマーによって吸収されて、前記第１の容器中に前記検体液の濃縮液である検体液濃縮液が生成する、吸水工程と、
前記検体液濃縮液に対して遠心力を加えることで、前記検体液濃縮液を前記排出部から排出する、排出工程と、
前記排出部から排出された前記検体液濃縮液を前記第２の容器に回収する、回収工程とをこの順に備える、検体液の濃縮方法。 - 前記遠心力が、４，０００～１０，０００回転／分の条件で加えられたものである、請求項９に記載の検体液の濃縮方法。
- 生体液中に含まれる高分子を含む水溶液である検体液中の生体液中に含まれる高分子を検出する、検体液の検査方法であって、
請求項９又は１０に記載の検体液の濃縮方法を用いて、前記検体液濃縮液を得る、濃縮工程と、
得られた前記検体液濃縮液中の生体液中に含まれる高分子を検出する、検出工程とをこの順に備える、検査方法。 - 前記検体液が、抗原を含み得る水溶液であり、
前記濃縮工程が、請求項９又は１０に記載の検体液の濃縮方法を用いて、前記抗原を含み得る水溶液を濃縮して、抗原濃縮液を得る工程であり、
前記検出工程が、抗原抗体反応を用いたイムノクロマトグラフィーによって前記抗原濃縮液中の抗原を検出する工程である、請求項１１に記載の検査方法。 - 生体液中に含まれる高分子を含む水溶液である検体液中の生体液中に含まれる高分子を検出するための検査キットであって、
請求項１～８のいずれか１項に記載の濃縮デバイスと、
前記生体液中に含まれる高分子を検出するための検査領域を有する検査用ストリップと、前記検査領域における検査信号を増幅するための第１の増幅液及び第２の増幅液がそれぞれ封入された第１のポット及び第２のポットと、前記検査用ストリップ、前記第１のポット及び前記第２のポットを内包するハウジングケースとを備える、検出デバイスと、
を備える、検査キット。
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