CN116057378A - 浓缩器件、被检体液的浓缩方法、被检体液的检查方法、及检查试剂盒 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种能够在短时间内浓缩被检体液的浓缩器件、使用上述浓缩器件来浓缩被检体液的被检体液的浓缩方法、使用了上述被检体液的浓缩方法的被检体液的检查方法、及具备上述浓缩器件和检测器件的检查试剂盒。一种浓缩器件，其用于浓缩作为含有生物体液中所含的高分子的水溶液的被检体液，所述浓缩器件具备容纳有高吸水性聚合物的第1容器和第2容器，上述第1容器的一部分由排出部构成，上述排出部由孔径为0.05μm以上且10μm以下的多孔膜形成，上述高吸水性聚合物吸收注入到上述第1容器中的上述被检体液中所含的溶液，在上述第1容器中生成作为上述被检体液的浓缩液的被检体液浓缩液，上述第2容器回收从上述排出部排出的上述被检体液浓缩液。

Description

浓缩器件、被检体液的浓缩方法、被检体液的检查方法、及检查试剂盒
技术领域
本发明涉及一种浓缩器件、被检体液的浓缩方法、被检体液的检查方法、及检查试剂盒。
背景技术
以往，已知有一种利用超滤器具浓缩含有抗原等生物体液中所含的高分子的水溶液(以下，也称为“被检体液”)的技术(例如，专利文献1)。
以往技术文献
专利文献
专利文献1：日本特表2013-527225号公报
发明内容
发明要解决的技术课题
近年来，在免疫层析法等免疫检查方法中，要求更高灵敏度的方法。在这样的情况下，本发明人等对使用超滤器具浓缩被检体液，使用所浓缩的被检体液进行免疫检查的方法进行了研究。其结果发现，的确通过这样的方法提高了灵敏度，但另一方面，使用了超滤器具的被检体液的浓缩耗费时间，不适合现场诊断(POCT)。
因此，鉴于上述情况，本发明的目的在于，提供一种能够在短时间内浓缩被检体液的浓缩器件、使用上述浓缩器件来浓缩被检体液的被检体液的浓缩方法、使用了上述被检体液的浓缩方法的被检体液的检查方法、及具备上述浓缩器件和检测器件的检查试剂盒。
用于解决技术课题的手段
本发明人等对上述课题进行了深入研究，结果发现，通过以下结构能够解决上述课题。
(1)一种浓缩器件，其用于浓缩作为含有生物体液中所含的高分子的水溶液的被检体液，
上述浓缩器件具备容纳有高吸水性聚合物的第1容器和第2容器，
上述第1容器的一部分由排出部构成，上述排出部由孔径为0.05μm以上且10μm以下的多孔膜形成，
上述高吸水性聚合物吸收注入到上述第1容器中的上述被检体液中所含的溶液，在上述第1容器中生成作为上述被检体液的浓缩液的被检体液浓缩液，
上述第2容器回收从上述排出部排出的上述被检体液浓缩液。
(2)根据上述(1)所述的浓缩器件，其中，上述多孔膜的材质为选自由乙酸纤维素、聚醚砜、亲水性聚四氟乙烯、玻璃纤维、尼龙、聚偏二氟乙烯及聚烯烃组成的组中的至少1种。
(3)根据上述(1)或(2)所述的浓缩器件，其中，上述多孔膜由具有24达因/厘米以上且75达因/厘米以下的表面能的材料形成。
(4)根据上述(1)至(3)中任一项所述的浓缩器件，其中，上述高吸水性聚合物的溶胀率大于0.2g/g且小于800g/g。
(5)根据上述(1)至(4)中任一项所述的浓缩器件，其中，上述高吸水性聚合物是聚丙烯酸系、聚丙烯酰胺系、纤维素系或聚环氧乙烷系的聚合物。
(6)根据上述(1)至(5)中任一项所述的浓缩器件，其中，上述生物体液中所含的高分子为抗原。
(7)根据上述(1)至(6)中任一项所述的浓缩器件，其中，上述被检体液为尿。
(8)根据上述(7)所述的浓缩器件，其中，上述被检体液浓缩液中的尿素的浓度为上述被检体液中的尿素的浓度的5倍以下。
(9)一种被检体液的浓缩方法，其使用上述(1)至(8)中任一项所述的浓缩器件来浓缩作为含有生物体液中所含的高分子的水溶液的被检体液，所述被检体液的浓缩方法依次包括：
被检体液注入工序，其向上述第1容器中注入上述被检体液；
吸水工序，其中，注入到上述第1容器中的被检体液中所含的溶液被容纳于上述第1容器中的高吸水性聚合物吸收，在上述第1容器中生成作为上述被检体液的浓缩液的被检体液浓缩液；
排出工序，其通过对上述被检体液浓缩液施加外力，将上述被检体液浓缩液从上述排出部排出；及
回收工序，其将从上述排出部排出的上述被检体液浓缩液回收到上述第2容器中。
(10)根据上述(9)所述的被检体液的浓缩方法，其中，上述外力为离心力。
(11)根据上述(10)所述的被检体液的浓缩方法，其中，上述离心力为在4000～10000转/分钟的条件下施加的力。
(12)一种被检体液的检查方法，其检测作为含有生物体液中所含的高分子的水溶液的被检体液中的生物体液中所含的高分子，上述被检体液的检查方法依次包括：
浓缩工序，其使用上述(9)至(11)中任一项所述的被检体液的浓缩方法获得上述被检体液浓缩液；及
检测工序，其检测所获得的上述被检体液浓缩液中的生物体液中所含的高分子。
(13)根据上述(12)所述的检查方法，其中，
上述被检体液是能够含有抗原的水溶液，
上述浓缩工序是使用上述(9)至(11)中任一项所述的被检体液的浓缩方法来浓缩能够含有上述抗原的水溶液而获得抗原浓缩液的工序，
上述检测工序是通过使用了抗原抗体反应的免疫层析法检测上述抗原浓缩液中的抗原的工序。
(14)一种检查试剂盒，其用于检测作为含有生物体液中所含的高分子的水溶液的被检体液中的生物体液中所含的高分子，上述检查试剂盒具备：
上述(1)至(8)中任一项所述的浓缩器件；及
检测器件，其具备：检查用试纸条，其具有用于检测上述生物体液中所含的高分子的检查区域；第1罐及第2罐，其分别封入有用于扩增上述检查区域中的检查信号的第1扩增液及第2扩增液；及外壳，其内含上述检查用试纸条、上述第1罐及上述第2罐。
发明效果
如下所述，根据本发明，能够提供一种能够在短时间内浓缩被检体液的浓缩器件、使用上述浓缩器件来浓缩被检体液的被检体液的浓缩方法、使用了上述被检体液的浓缩方法的被检体液的检查方法、及具备上述浓缩器件和检测器件的检查试剂盒。
附图说明
图1是本发明的浓缩器件的优选的方式的示意剖视图。
图2是实施例中使用的微型离心过滤器的示意剖视图。
图3A是表示按照工序顺序表示本发明的浓缩方法的优选的方式的示意剖视图中的被检体液注入工序的图。
图3B是表示按照工序顺序表示本发明的浓缩方法的优选的方式的示意剖视图中的吸水工序的图。
图3C是表示按照工序顺序表示本发明的浓缩方法的优选的方式的示意剖视图中的排出工序的图。
图3D是表示按照工序顺序表示本发明的浓缩方法的优选的方式的示意剖视图中的回收工序的图。
图4是在本发明的检查方法的检测工序中使用的不溶性载体的一个方式的模式图。
图5是表示免疫层析试剂盒的一个实施方式的形态的立体图。
图6是表示免疫层析试剂盒的一个实施方式的形态的分解概略立体图。
图7是表示检查用试纸条、第1及第2罐的位置关系的示意侧视图。
图8是设置于图5所示的免疫层析试剂盒的上部壳体上的第1凸状变形部的立体图。
图9是图8所示的第1凸状变形部的变形前后的V-V’线切割部端面图。
图10是设置于图5所示的免疫层析试剂盒的上部壳体上的第2凸状变形部的立体图。
图11是图10所示的第2凸状变形部的变形前后的VII-VII’线切割部端面图。
图12是设计变更例的凸状变形部的变形前后的切割部端面图。
图13是比较例A4及比较例B4中使用的Amicon Ultra的立体图。
具体实施方式
以下，对本发明的浓缩器件、本发明的被检体液的浓缩方法、本发明的被检体液的检查方法、及本发明的检查试剂盒进行说明。
另外，在本说明书中，使用“～”表示的数值范围是指将记载于“～”的前后的数值作为下限值及上限值而包含的范围。
并且，在本说明书中，各成分可以单独使用1种，也可以同时使用2种以上。在此，在对各成分同时使用2种以上的情况下，只要没有特别说明，该成分的含量是指合计含量。
并且，在本说明书中，将浓缩时间缩短的情况、浓缩率提高的情况、检测灵敏度提高的情况、及S/N比(信号/噪声比)提高的情况也简称为本发明的效果等优异。
[1]浓缩器件
本发明的浓缩器件用于浓缩作为含有生物体液中所含的高分子的水溶液的被检体液，
所述浓缩器件具备容纳有高吸水性聚合物的第1容器和第2容器，
上述第1容器的一部分由排出部构成，上述排出部由孔径为0.05μm以上且10μm以下的多孔膜形成，
上述高吸水性聚合物吸收注入到上述第1容器中的上述被检体液中所含的溶液(水、低分子)，在上述第1容器中生成作为上述被检体液的浓缩液的被检体液浓缩液，
上述第2容器回收从上述排出部排出的上述被检体液浓缩液。
首先，使用附图，对本发明的浓缩器件的优选的方式进行说明。
图1是本发明的浓缩器件的优选的方式的示意剖视图。
如图1所示，浓缩器件200具备容纳有高吸水性聚合物230的第1容器210、第2容器220。第1容器210的底部由排出部212构成，该排出部212由孔径为0.05μm以上且10μm以下的多孔膜形成。第1容器210具有开口部211。并且，第2容器220具有开口部221。并且，第1容器210容纳于第2容器220中，第1容器210以在作为第1容器210的底部的排出部212与第2容器的底面之间产生空间的方式固定于第2容器220中。
以下，对构成本发明的浓缩器件的各部件进行说明。
另外，关于被检体液等，在后述的本发明的被检体液的浓缩方法中进行说明。
[第1容器]
如上所述，第1容器的一部分由排出部构成，该排出部由孔径为0.05μm以上且10μm以下的多孔膜形成。并且，如上所述，在第1容器中容纳有高吸水性聚合物。
第1容器的形状没有特别限制，优选为筒状(缸体)，更优选为圆筒状。
第1容器的材质没有特别限制，但从能够射出成型、能够廉价且大量生产的方面考虑，优选为热塑性树脂。从具有某种程度的硬度的方面考虑，具体而言，优选为聚丙烯、丙烯酸、聚缩醛、聚酰胺、聚乙烯、聚对苯二甲酸乙二酯、聚碳酸酯、聚苯乙烯、聚苯硫醚、聚丁烯对苯二酸酯、聚氯乙烯、ABS树脂(丙烯腈-丁二烯-苯乙烯共聚树脂)、AS树脂(丙烯腈-苯乙烯共聚树脂)。
〔排出部〕
如上所述，第1容器的一部分由排出部构成，该排出部由孔径为0.05μm以上且10μm以下的多孔膜形成。
排出部的位置没有特别限制，但第1容器优选其底部由上述排出部构成。
＜多孔膜＞
构成上述排出部的多孔膜是孔径为0.05μm以上且10μm以下的多孔膜。由于上述多孔膜的孔径为10μm以下，因此在向第1容器中注入了被检体液的情况下，所注入的被检体液在大气压下不会从排出部排出被检体液而保持在第1容器中。
(孔径)
从本发明的效果等更优异的理由考虑，上述多孔膜的孔径的上限优选为5μm以下，更优选为3μm以下，进一步优选为1μm以下。
从本发明的效果等更优异的理由考虑，上述多孔膜的孔径的下限优选为0.1μm以上，更优选为0.3μm以上，进一步优选为0.5μm以上。
上述孔径的测定能够通过光学显微镜法、水银压入法、BET法等公知的方法进行，但在本发明中，通过使用了掌上气孔计(PMI公司制造)的泡点法(按照JIS K 3832)进行孔径的测定。
(材质)
上述多孔膜的材质没有特别限制，从本发明的效果等更优异的理由考虑，优选为选自由乙酸纤维素(CA)、聚醚砜(PES)、聚四氟乙烯(PTFE)、玻璃纤维(GF)、尼龙、聚偏二氟乙烯(PVDF)及聚烯烃组成的组中的至少1种，更优选为选自由乙酸纤维素(CA)、聚醚砜(PES)、亲水性聚四氟乙烯(亲水性PTFE)、玻璃纤维(GF)、尼龙、聚偏二氟乙烯(PVDF)及聚烯烃组成的组中的至少1种，进一步优选为选自由乙酸纤维素(CA)、聚醚砜(PES)、玻璃纤维(GF)、尼龙、聚偏二氟乙烯(PVDF)及聚烯烃组成的组中的至少1种，尤其优选为选自由乙酸纤维素(CA)、聚醚砜(PES)及玻璃纤维(GF)组成的组中的至少1种。
另外，在本说明书中，亲水性PTFE是后述的表面能为25达因/厘米以上的PTFE，疏水性PTFE是后述的表面能小于25达因/厘米的PTFE。
(表面能)
从本发明的效果等更优异的理由考虑，上述多孔膜优选由具有24达因/厘米以上且75达因/厘米以下的表面能的材料形成，更优选由具有40达因/厘米以上且75达因/厘米以下的表面能的材料形成。
上述表面能的测定是在20℃50％RH的环境下，分别测定在聚合物材料的薄膜上滴落水、二碘甲烷(碘化亚甲基)、正十六烷时形成的液滴的接触角，使用参考文献1中记载的通过以下方法计算出的值。
当表面能由分散成分γd、极性成分γp、氢键性成分γh构成时，表面能由γ＝γd+γp+γh(…式(1))表示。
将液体的表面能设为γL，将固体的表面能设为γS，将测定的接触角设为θ，作为水、二碘甲烷、正十六烷的γd、γp、γh值，使用参考文献1的Table1～3中记载的数值，利用以下式(2)，求解γS d、γS p、γS h的联立方程式，由此计算表面能。
γL(1+cosθ)＝2(γS dγL d)1/2+2(γS pγL p)1/2+2(γS hγL h)1/2(…式(2))
(参考文献1北崎宁昭等，日本粘接协会志，Vol.8,No.3,1972,pp.131-141)
〔高吸水性聚合物〕
上述高吸水性聚合物(SAP)没有特别限制，但从本发明的效果等更优异的理由考虑，优选为聚丙烯酸系、聚丙烯酰胺系、纤维素系或聚环氧乙烷系的聚合物。
＜溶胀率＞
上述高吸水性聚合物的溶胀率没有特别限制，从本发明的效果等更优异的理由考虑，优选大于0.2g/g且小于800g/g，更优选1.0g/g以上且600g/g以下，进一步优选10g/g以上且500g/g以下，尤其优选20g/g以上且100g/g以下。
在此，溶胀率是定义为“1g高吸水性聚合物所保持的水的质量(g)”的值。
(溶胀率的测定方法)
测定在25℃5％RH(相对湿度)下保管10天的高吸水性聚合物的质量，然后立即浸渍在大量蒸馏水中。120分钟后，取出高吸水性聚合物，去除表面的水，再次测定质量，使用以下计算式测定溶胀率。
{(吸水后的质量(g)-吸水前的初始质量(g))/吸水前的初始质量(g)}
将溶胀率调整到上述特定的范围的方法没有特别限制，可举出变更聚合物的种类、变更聚合物的分子量、变更交联度、变更粒径等方法。
＜吸水速度＞
上述高吸水性聚合物的吸水速度没有特别限制，但从本发明的效果等更优异的理由考虑，优选为每1g高吸水性聚合物0.01g/分钟以上且40g/分钟以下，更优选为每1g高吸水性聚合物0.02g/分钟以上且40g/分钟以下。
上述吸水速度如下测定。
测定在25℃5％RH(相对湿度)下保管10天的高吸水性聚合物的质量(质量M0、单位g)，然后立即浸渍在大量蒸馏水中。10分钟后，取出高吸水性聚合物，去除表面的水，测定质量(质量M10)。测定质量后，立即再次浸渍在大量蒸馏水中。10分钟后，取出高吸水性聚合物，去除表面的水，再次测定质量(质量M20)。测定质量M20后，立即再次浸渍在大量蒸馏水中。10分钟后，取出高吸水性聚合物，去除表面的水，再次测定质量(质量M30)。
如下定义吸水量。
10分钟的吸水量：ΔM10＝(M10-M0)/M020分钟的吸水量：ΔM20＝(M20-M0)/M030分钟的吸水量：ΔM30＝(M30-M0)/M0
使用如上所述定义的吸水量，如下求出吸水速度。
在X-Y平面上绘制3点作为横轴时间(x＝10，20，30；单位分钟)和纵轴吸水量(y＝ΔM10、ΔM20、ΔM30；单位g水/g聚合物量)，将吸水量相对于使用了最小二乘法的时间的直线近似式的斜率作为每单位时间(分钟)的吸水速度。
＜粒径＞
上述高吸水性聚合物优选为粒子状，从本发明的效果等更优异的理由考虑，此时的粒径优选为10mm以下，更优选为8mm以下，进一步优选为5mm以下。从本发明的效果等更优异的理由考虑，上述高吸水性聚合物的粒径的下限优选为0.001mm以上，更优选为0.005mm以上，进一步优选为0.01mm以上。
并且，从本发明的效果等更优异的理由考虑，上述粒径相对于上述多孔膜的孔径的比例(粒径/孔径)优选为1～1000，更优选为10～100。
在此，上述粒径能够利用光学显微镜测定50个粒子状的聚合物的直径，作为其算术平均值求出。
[第2容器]
上述第2容器是用于回收从上述第1容器的排出部排出的被检体液浓缩液的容器。
上述第2容器优选内含上述第1容器的至少排出部，优选内含上述第1容器整体。
上述第2容器的形状及材质的优选的方式与上述第1容器相同。
[2]被检体液的浓缩方法
本发明的被检体液的浓缩方法(以下，也称为“本发明的浓缩方法”)使用上述本发明的浓缩器件来浓缩作为含有生物体液中所含的高分子的水溶液的被检体液，其依次包括：
被检体液注入工序，向上述第1容器中注入上述被检体液；
吸水工序，注入到上述第1容器中的被检体液中所含的溶液(水、低分子)被容纳于上述第1容器中的高吸水性聚合物吸收，在上述第1容器中生成作为上述被检体液的浓缩液的被检体液浓缩液；
排出工序，通过对上述被检体液浓缩液施加外力，将上述被检体液浓缩液从上述排出部排出；及
回收工序，将从上述排出部排出的上述被检体液浓缩液回收到上述第2容器中。
首先，使用附图，对本发明的浓缩方法的优选的方式进行说明。
图3(图3A～图3D)是按照工序顺序表示本发明的浓缩方法的优选的方式的示意剖视图。
首先，在被检体液注入工序中，从上述图1的浓缩器件200的第2容器220的开口部221及第1容器210的开口部211向第1容器210中注入被检体液240(图3A)。浓缩器件200如上所述。在此，第1容器210的底部由排出部212构成，该排出部212由孔径为0.05μm以上且10μm以下的多孔膜形成，但如上所述，多孔膜的孔径为10μm以下，因此所注入的被检体液240不会从排出部212排出而保持在第1容器210中。
然后，在吸水工序中，被检体液240中所含的溶液(水、低分子)被高吸水性聚合物230吸收，在第1容器210中生成作为被检体液240的浓缩液的被检体液浓缩液242(高吸水性聚合物230成为溶胀的高吸水性聚合物232)(图3B)。
接着，在排出工序中，将吸水工序后的浓缩器件202放入小型台式离心机中，对被检体液浓缩液242沿图3C的从上向下的方向(排出部的方向)施加离心力，由此将被检体液浓缩液242从排出部212排出(图3C)。另外，如上所述，由于多孔膜的孔径为0.05μm以上，因此即使是小型台式离心机(例如，4000～10000转/分钟(rpm))也能够排出(在专利文献1中记载的超滤器具的情况下，需要大型离心机)。并且，离心次数为1次即可(在专利文献1中记载的超滤器具的情况下，如后述的比较例A4或比较例B4所示，离心次数需要2次)。如此，与专利文献1中记载的超滤器具相比，上述方法极其简便(能够利用小型台式离心机，离心次数为1次即可)。
并且，在回收工序中，将从排出部212排出的被检体液浓缩液242回收到第2容器220中(图3D)。如此，能够获得被检体液浓缩液。
以下，对各工序进行说明。
[被检体液注入工序]
被检体液注入工序是向上述本发明的浓缩器件的第1容器中注入被检体液的工序。通过被检体液注入工序，向第1容器中注入被检体液，被检体液与容纳于第1容器中的高吸水性聚合物混合。在此，第1容器的一部分由排出部构成，该排出部由孔径为0.05μm以上且10μm以下的多孔膜形成，但如上所述，多孔膜的孔径为10μm以下，因此所注入的被检体液不会从排出部排出而保持在第1容器中。
〔浓缩器件〕
本发明的浓缩器件如上所述。
〔被检体液〕
上述被检体液是作为含有生物体液中所含的高分子的水溶液。
作为上述被检体液的具体例，能够举出动物(尤其是人)的体液(例如，血液、血清、血浆、脑脊液、泪液、汗、尿、脓、鼻涕或痰液)、漱口液等。
从本发明的效果等更优异的理由考虑，上述被检体液优选为尿。
＜生物体液中所含的高分子＞
作为上述生物体液中所含的高分子(尤其是抗原)，例如主要是对疾病的判断有用的高分子，可举出从生物体液中检测出的菌、细菌(例如，结核菌、结核菌中所含的脂阿拉伯甘露聚糖(LAM))、细菌(Bacteria)、病毒(例如，流感病毒)或它们的核蛋白质等。另外，LAM是结核中的主要抗原，是细胞膜及细胞壁的主要构成成分即糖脂。
从本发明的效果等更优异的理由考虑，上述生物体液中所含的高分子优选为抗原，更优选为病毒(尤其是流感病毒)或LAM，进一步优选为LAM。
上述被检体液中的生物体液中所含的高分子的浓度没有特别限制，从本发明的效果等更优异的理由考虑，优选为0.0001ng/mL以上且1mg/mL以下，更优选为0.001ng/mL以上且1μg/mL以下，进一步优选为0.01ng/mL以上且1ng/mL以下。
＜被检体液的预处理＞
上述被检体液能够直接使用被检体液，或以使用适当的提取用溶剂提取抗原而获得的提取液的形态，进而以将提取液用适当的稀释剂稀释而获得的稀释液的形态、或以将提取液用适当的方法浓缩的形态使用。
作为上述提取用溶剂，也能够使用通常的免疫学分析法中使用的溶剂(例如，水、生理食盐水或缓冲液等)，或通过利用该溶剂稀释而能够直接实施抗原抗体反应的水混和性有机溶剂。
〔高吸水性聚合物相对于被检体液的比例〕
高吸水性聚合物相对于被检体液的比例没有特别限制，但从本发明的效果等更优异的理由考虑，相对于被检体液1mL，优选为0.01～100g，更优选为0.1～50g。
[吸水工序]
吸水工序是注入到第1容器中的被检体液中所含的溶液(水、低分子)被容纳于第1容器中的高吸水性聚合物吸收，在第1容器中生成作为被检体液的浓缩液的被检体液浓缩液的工序。
在将被检体液和高吸水性聚合物混合的情况下，被检体液中的溶液(水、低分子)被高吸水性聚合物吸入，与此相对，被检体液中的生物体液中所含的高分子(例如，抗原)具有某种程度的流体力学半径，因此高吸水性聚合物的表面的网眼结构产生筛子效果，难以被高吸水性聚合物吸入。结果，被检体液中的生物体液中所含的高分子(例如，抗原)被浓缩。
在上述被检体液是尿的情况下，从本发明的效果等更优异的理由考虑，被检体液浓缩液中的尿素的浓度优选为被检体液中的尿素的浓度的5倍以下。
吸水工序例如可举出将上述被检体液注入工序后的本发明的器件静置的方法等。静置时间没有特别限制，从本发明的效果等更优异的理由考虑，优选为1～30分钟，更优选为1～10分钟。
[排出工序]
排出工序是通过对被检体液浓缩液施加外力，将被检体液浓缩液从排出部排出的工序。
通过对被检体液浓缩液施加外力，被检体液浓缩液被按压到排出部，被检体液浓缩液从排出部排出。
从本发明的效果等更优异的理由考虑，外力优选为离心力。
从本发明的效果等更优异的理由考虑，上述离心力优选使用小型(例如，50cm立方以下的大小)的台式离心机(小型台式离心机)来施加。
从本发明的效果等更优异的理由考虑，上述离心力优选为在4000～10000转/分钟的条件(转速)下施加的力。
[回收工序]
回收工序是将从排出部排出的被检体液浓缩液回收到第2容器中的工序。
如此，能够获得被检体液浓缩液。
[3]被检体液的检查方法
本发明的被检体液的检查方法(以下，也称为“本发明的检查方法”)检测作为含有生物体液中所含的高分子的水溶液的被检体液中的生物体液中所含的高分子，其依次包括：
浓缩工序，使用上述本发明的被检体液的浓缩方法(上述本发明的浓缩方法)获得上述被检体液浓缩液；及
检测工序，检测所获得的上述被检体液浓缩液中的生物体液中所含的高分子。
在本发明的检查方法中，由于使用通过上述本发明的浓缩方法获得的被检体液浓缩液进行生物体液中所含的高分子的检测，因此可获得高检测灵敏度。
[浓缩工序]
使用本发明的浓缩方法获得被检体液浓缩液的方法如上所述。
[检测工序]
检测工序是检测被检体液浓缩液中的生物体液中所含的高分子的工序。
从本发明的效果等更优异的理由考虑，检测工序优选为使用抗原抗体反应的方法，作为这样的方法，例如可举出酶免疫测定法(EIA)、固相酶免疫测定法(ELISA)、放射线免疫测定法(RIA)、荧光免疫测定法(FIA)、蛋白质印迹法、免疫层析法等。其中，从本发明的效果等更优异的理由考虑，优选为免疫层析法。
[优选的方式]
从本发明的效果等更优异的理由考虑，本发明的检查方法优选为如下检查方法：
上述被检体液是能够含有抗原(生物体液中所含的高分子)的水溶液，
上述浓缩工序是使用上述本发明的浓缩方法来浓缩能够含有上述抗原的水溶液而获得抗原浓缩液(被检体液浓缩液)的工序，
上述检测工序是通过使用了抗原抗体反应的免疫层析法检测上述抗原浓缩液中的抗原的工序。
在此，从本发明的效果等更优异的理由考虑，上述检测工序优选包括：
展开工序，在形成作为上述抗原浓缩液中的抗原和用能够与上述抗原结合的第1结合物质修饰的金粒子即修饰金粒子的复合体的金粒子复合体的状态下，在具有固定有能够与上述抗原结合的第2结合物质的反应部位的不溶性载体上展开；及
捕捉工序，在上述不溶性载体的反应部位捕捉上述金粒子复合体。
从本发明的效果等更优异的理由考虑，上述检测工序优选还包括银扩增工序，该银扩增工序对在上述捕捉工序中捕捉到的金粒子复合体进行银扩增。
在此，从本发明的效果等更优异的理由考虑，优选上述第1结合物质及上述第2结合物质中的至少一者为单克隆抗体，更优选上述第1结合物质及上述第2结合物质这两者为单克隆抗体。
另外，在被检体液中有时含有低分子成分或盐等混杂物。例如，在被检体液为尿的情况下，含有尿素等混杂物。根据本发明人等的研究发现，在这些混杂物与生物体液中所含的高分子一起被浓缩的情况下，有时抗原抗体反应受到阻碍，导致检测灵敏度下降。即，可知有时不能充分获得通过浓缩的检测灵敏度的提高效果。
因此，在上述浓缩工序中使用的上述本发明的浓缩器件中，高吸水性聚合物的溶胀率优选在上述优选的范围内。若在上述范围内，则这些混杂物与水一起被高吸水性聚合物吸入，难以发生如上所述的检测灵敏度的降低，结果，认为能够实现极其高的检测灵敏度。
以下，对上述优选的方式(以下，也称为“本发明的方法”)所具备的各工序进行说明。
〔展开工序〕
展开工序是在形成作为在上述浓缩工序中获得的抗原浓缩液中的抗原和用能够与上述抗原结合的第1结合物质修饰的金粒子即修饰金粒子的复合体的金粒子复合体的状态下，在具有固定有能够与上述抗原结合的第2结合物质的反应部位的不溶性载体上展开的工序。
＜金粒子复合体＞
如上所述，在展开工序中，首先，形成作为在上述浓缩工序中获得的抗原浓缩液中的抗原和用能够与上述抗原结合的第1结合物质修饰的金粒子即修饰金粒子的复合体的金粒子复合体。
(修饰金粒子)
修饰金粒子是用能够与上述抗原结合的第1结合物质修饰的金粒子。
(1)(金粒子)
金粒子没有特别限制，从本发明的效果等更优异的理由考虑，优选为金胶体粒子。
在本发明的方法包括后述的银扩增工序的情况下，金粒子在银扩增工序中作为还原银离子的催化剂发挥作用。
从本发明的效果等更优异的理由考虑，上述金粒子的粒径优选为500nm以下，更优选为300nm以下，进一步优选为200nm以下，尤其优选为100nm以下。
上述金粒子的粒径的下限没有特别限制，但从本发明的效果等更优异的理由考虑，优选为1nm以上，更优选为2nm以上，进一步优选为5nm以上。
另外，粒径能够用市售的粒度分布计等进行测量。作为粒度分布的测定法，已知有光学显微镜法、共焦激光显微镜法、电子显微镜法、原子间力显微镜法、静态光散射法、激光衍射法、动态光散射法、离心沉降法、电脉冲测量法、层析法、超声波衰减法等，与各个原理对应的装置已有市售。作为粒径的测定方法，从粒径范围及测定的容易度考虑，能够优选使用动态光散射法。作为使用了动态光散射的市售的测定装置，可举出NANOTRAC UPA(NikkisoCo.,Ltd.)、动态光散射式粒径分布测定装置LB-550(HORIBA,Ltd.)、浓厚系粒径分析仪FPAR-1000(OTSUKAELECTRONICSCo.,LTD)等，在本发明中，作为在25℃的测定温度下测定的中值粒径(d＝50)的值求出。
(2)第1结合物质
第1结合物质只要能够与上述抗原结合，则没有特别限制，但从本发明的效果等更优异的理由考虑，优选为蛋白质，更优选为抗体(例如，多克隆抗体、或单克隆抗体)，从实现更高的检测灵敏度的观点出发，进一步优选为单克隆抗体。
上述抗体没有特别限制，例如能够使用由被抗原免疫的动物的血清制备的抗血清或由抗血清提纯的免疫球蛋白组分，并且能够使用通过使用被抗原免疫的动物的脾脏细胞的细胞融合而获得的单克隆抗体、或它们的片段[例如，F(ab’)2、Fab、Fab’、或Fv]。这些抗体的制备能够通过常规方法进行。
作为抗原为LAM时的第1结合物质的一例，可举出国际公开2017/139153号中记载的A194-01抗体。关于A194-01抗体的国际公开2017/139153号中记载的内容全部作为本说明书的公开的一部分引用于本说明书中。
作为抗原为LAM时的第1结合物质的另一例，能够举出具有在国际公开2013/129634号的[0080]段中记载为MoAb1的序列的抗体。关于MoAb1抗体的国际公开2013/129634号中记载的内容全部作为本说明书的公开的一部分引用于本说明书中。
(3)修饰金粒子的制造方法
制造上述修饰金粒子的方法没有特别限制，能够使用公知的方法。例如，可举出通过利用金与SH基化学键合，将SH基导入到抗体后，用在与金粒子接近时SH键断裂而在Au表面上生成的Au-S键进行固定等化学键合方法。
＜不溶性载体＞
上述不溶性载体是具有反应部位(测试线)的不溶性载体，该反应部位(测试线)上固定有能够与上述抗原结合的第2结合物质。不溶性载体可以根据抗原的种类具有多个测试线(例如，流感A型病毒用测试线和流感B型用测试线)。并且，为了确认上述金粒子复合体的展开，不溶性载体可以在比测试线更靠下游侧具有控制线。并且，在后述的银扩增工序中使用还原剂液的情况下，为了检测还原剂液，可以在比测试线更靠下游侧具有显色试剂固定化线。
作为上述不溶性载体的具体的方式，例如，可举出如图4所示的从上游侧起具有金胶体保持垫301、测试线302、控制线303、显色试剂固定化线304的硝酸纤维素膜300。在此，金胶体保持垫301是保持用第1结合物质修饰的金粒子(修饰金粒子)的垫片，测试线302是固定有第2结合物质的线，控制线303是用于确认展开的线，显色试剂固定化线304是用于检测后述的还原剂液的线。在此，上游侧、下游侧是指在金粒子复合体展开时，表示从上游侧向下游侧展开的记载。
作为上述不溶性载体(或具有该不溶性载体的免疫层析试剂盒)的更具体的方式，例如可举出日本专利第5728453号公报中记载的不溶性载体及免疫层析试剂盒，关于不溶性载体及免疫层析试剂盒的日本专利第5728453号公报中记载的内容全部作为本说明书的公开的一部分引用于本说明书中。
(不溶性载体)
不溶性载体优选为多孔性载体。尤其，从本发明的效果等更优异的理由考虑，优选为硝化纤维素膜(硝酸纤维素膜)、纤维素膜、乙酰纤维素膜、聚砜膜、聚醚砜膜、尼龙膜、玻璃纤维、无纺布、布、或丝等，更优选为硝化纤维素膜。
(第2结合物质)
第2结合物质只要能够与上述抗原结合，则没有特别限制。
第2结合物质的具体例及优选的方式与上述第1结合物质相同。
另外，上述第2结合物质可以与上述第1结合物质相同或不同，但从本发明的效果等更优异的理由考虑，优选为不同的物质的方式。
并且，在第1结合物质及第2结合物质为抗体的情况下，从本发明的效果等更优异的理由考虑，作为第1结合物质的抗体和作为第2结合物质的抗体优选为不同的方式。
并且，在第1结合物质及第2结合物质为抗体的情况下，从本发明的效果等更优异的理由考虑，第1结合物质的表位(第1结合物质识别的抗原的一部分)和第2结合物质的表位(第2结合物质识别的抗原的一部分)优选为不同的方式。抗体的表位不同能够通过例如ELISA(Enzyme-Linked Immuno Sorbe nt Assay：酶联免疫物质分析)来确认。
＜展开＞
在形成金粒子复合体的状态下在具有测试线的不溶性载体上展开的方法没有特别限制，例如可举出准备如上述图4所示的硝酸纤维素膜300(或具有该硝酸纤维素膜300的免疫层析试剂盒)，将在上述浓缩工序中获得的抗原浓缩液滴加到金胶体保持垫上，如图4所示利用毛细管现象使其从上游侧向下游侧移动的方法等。
〔捕捉工序〕
捕捉工序是在上述不溶性载体的反应部位捕捉上述金粒子复合体的工序。
如上所述，由于在不溶性载体的反应部位固定有能够与抗原结合的第2结合物质，因此在上述展开工序中在不溶性载体上展开的金粒子复合体(抗原和修饰金粒子的复合体)在不溶性载体的反应部位(测试线)被捕捉。
由于捕捉到的金粒子复合体被金粒子的表面等离激元等着色，因此能够视觉辨认。并且，也能够使用图像分析装置等来估算所捕捉到的复合体的浓度。如此，能够检测试样中的抗原。
另外，在试样不含有抗原的情况下，不形成上述金粒子复合体，因此在不溶性载体的反应部位不会被捕捉，且不着色。
〔银扩增工序〕
银扩增工序是对在上述捕捉工序中捕捉到的金粒子复合体进行银扩增的工序。
银扩增工序是通过对上述捕捉工序后的不溶性载体赋予银离子，在不溶性载体的反应部位捕捉到的金粒子复合体中形成大的银粒子的工序。更详细而言，是将上述金粒子复合体的金粒子作为催化剂还原银离子，形成银粒子(例如，直径10μm以上)的工序。
由此，所捕捉到的金粒子复合体的检测灵敏度显著提高。
另外，也可以与展开工序一起进行银扩增工序，银扩增工序也可以兼作展开工序。
＜优选的方式＞
对上述捕捉工序后的不溶性载体赋予银离子的方法没有特别限制，但从本发明的效果等更优异的理由考虑，优选使用下述还原剂液及下述银扩增液的方法。
并且，除了还原剂液及银扩增液以外，为了通过特异性的结合反应以外清洗残留在不溶性载体中的复合体，也可以使用清洗液。上述还原剂液也可以兼作清洗液。
(还原剂液)
上述还原剂液含有能够还原银离子的还原剂。能够还原银离子的还原剂只要能够将银离子还原为银，则能够使用无机·有机的任何材料或其混合物。作为无机还原剂，能够优选举出通过Fe2+、V2+及Ti3+等金属离子能够改变化合价的还原性金属盐、还原性金属络合物盐。在使用无机还原剂时，需要将被氧化的离子进行络合形成或进行还原而去除或使之无害。例如，在使用Fe2+作为还原剂的体系中，能够使用柠檬酸或乙二胺四乙酸(EDTA)形成作为氧化物的Fe3+的络合物，使其无害。在本发明中，优选使用这样的无机还原剂，作为本发明的更优选的方式，优选使用Fe2+的金属盐作为还原剂。
另外，在湿式卤化银照片感光材料中使用的显影主剂(例如没食子酸甲酯盐、氢醌、取代氢醌、3-吡唑烷酮类、对氨基苯酚类、对苯二胺类、受阻酚类、偕胺肟类、吖嗪类、儿茶酚类、连苯三酚类、抗坏血酸(或其衍生物)及无色染料类)及对于本领域的技术熟练者而言很明显的其他材料，例如在美国专利第6,020,117号中记载的材料与能够作为还原剂使用。
作为还原剂，也优选为抗坏血酸还原剂。有用的抗坏血酸还原剂含有抗坏血酸及其类似物、异构体及其衍生物，能够优选举出例如D-或L-抗坏血酸及其糖衍生物(例如γ-乳糖酸抗坏血酸、葡糖酸抗坏血酸、藻酸抗坏血酸、葡庚糖酸抗坏血酸、麦芽糖酸抗坏血酸)、抗坏血酸的钠盐、抗坏血酸的钾盐、异抗坏血酸(或L-红霉素抗坏血酸)及其盐(例如碱金属盐、铵盐或该技术领域中已知的盐)、烯二醇型抗坏血酸、烯胺醇型抗坏血酸、硫醇烯醇型抗坏血酸等，尤其优选D、L或D，L-抗坏血酸(及其碱金属盐)或异抗坏血酸(或其碱金属盐)，钠盐为优选的盐。根据需要，能够使用这些还原剂的混合物。
从本发明的效果等更优异的理由考虑，还原剂液优选以展开工序中的展开方向与还原剂液的展开方向之间的角度成为0度～150度的方式流动，更优选以展开工序中的展开方向与还原剂液的展开方向之间的角度成为0度～135度的方式流动。
另外，作为调节展开工序中的展开方向与还原剂液的展开方向之间的角度的方法，例如可举出日本特开2009-150869号公报的实施例中记载的方法等。
(银扩增液)
上述银扩增液是含有包含银离子的化合物的液体。作为含有银的化合物，例如能够使用有机银盐、无机银盐或银络合物。优选可举出作为在水等溶剂中溶解度高的含银离子的化合物的硝酸银、乙酸银、乳酸银、丁酸银及硫代硫酸银等。尤其优选为硝酸银。作为银络合物，优选在具有羟基和砜基等水溶性基团的配体上配位的银络合物，可举出羟基硫醚银等。
有机银盐、无机银盐或银络合物作为银在银扩增液中以0.001mol/L～5mol/L的浓度含有，优选为以0.005mol/L～3mol/L的浓度含有，更优选为以0.01mo l/L～1mol/L的浓度含有。
作为银扩增液的助剂，可举出缓冲剂、防腐剂，例如抗氧化剂或有机稳定剂、速度调节剂等。作为缓冲剂，例如能够使用乙酸、柠檬酸、氢氧化钠或这些盐中的一种、或使用了三(羟甲基)氨基甲烷的缓冲剂、其他通常的化学实验中使用的缓冲剂。适当使用这些缓冲剂，能够将其调节至最适合其扩增溶液的pH。并且，作为防雾剂，能够使用烷基胺作为助剂，尤其优选为十二烷基胺。并且，为了提高这些助剂的溶解性，能够使用表面活性剂，尤其优选为C9H19-C6H4-O-(CH2CH2O)50H。
从本发明的效果等更优异的理由考虑，银扩增液优选从与上述展开工序中的展开方向相反的方向流动，更优选以展开工序中的展开方向与银扩增液的展开方向之间的角度成为45度～180度的方式流动。
另外，作为调节展开工序中的展开方向与银扩增液的展开方向之间的角度的方法，例如可举出日本特开2009-150869号公报的实施例中记载的方法等。
[4]检查试剂盒
本发明的检查试剂盒用于检测作为含有生物体液中所含的高分子的水溶液的被检体液中的生物体液中所含的高分子，其具备：
上述本发明的浓缩器件；及
检测器件，其具备：检查用试纸条，具有用于检测上述生物体液中所含的高分子的检查区域；第1罐及第2罐，分别封入有用于扩增上述检查区域中的检查信号的第1扩增液及第2扩增液；及外壳，内含上述检查用试纸条、上述第1罐及上述第2罐。
[浓缩器件]
本发明的浓缩器件如上所述。
[检测器件]
上述检测器件具备：检查用试纸条，具有用于检测上述生物体液中所含的高分子的检查区域；第1罐及第2罐，分别封入有用于扩增上述检查区域中的检查信号的第1扩增液及第2扩增液；及外壳，内含上述检查用试纸条、上述第1罐及上述第2罐。
〔优选的方式〕
以下，对上述检测器件的优选的方式进行说明。
从本发明的效果等更优异的理由考虑，上述检测器件优选为如下免疫层析试剂盒(以下，也称为“本发明的免疫层析试剂盒”或简称为“免疫层析试剂盒”)：
一种免疫层析试剂盒，检测试样液(被检体液)中的被检物质(生物体液中所含的高分子)，其具备：
检查用试纸条，包含使试样液展开且具有被检物质的检查区域的不溶性载体；
第1罐及第2罐，分别封入有用于扩增检查区域中的检测信号的第1扩增液及第2扩增液，并具有具备片材部件的一面；及
外壳，内含检查用试纸条、第1罐及第2罐，
外壳具备以下部件而成：下部壳体，具备配置检查用试纸条的容纳部；上部壳体，在周缘与下部壳体接合；及中间部件，配置于上部壳体与下部壳体之间，
中间部件具备使第1罐的片材部件断裂的断裂部，上述断裂部面向第1罐的片材部件，
上部壳体具备以下部件而成：第1凸状变形部，通过从外部对与第1罐对置的部分施加按压力而第1罐侧变形，利用中间部件的断裂部使第1罐的片材部件断裂；及第2凸状变形部，通过从外部对与第2罐对置的部分施加按压力而向第2罐侧变形，使第2罐的片材部件断裂。
在本发明的免疫层析试剂盒中，优选第1凸状变形部通过被施加按压力使第1罐移动到片材部件被中间部件的断裂部断裂的位置。
此时，优选上部壳体具备在对第1凸状变形部施加按压力时与第1罐抵接并使其移动的朝向第1罐侧立设的2个突起部。
在本发明的免疫层析试剂盒中，优选第1凸状变形部具有中央对称的山型形状。
并且，此时，优选2个突起部相对于山型形状的顶部对称地配置。
并且，也优选2个突起部在夹着山型形状的顶部的斜面相互独立地形成。
在本发明的免疫层析试剂盒中，在第1凸状变形部具备上述2个突起部时，优选该2个突起部相对于第1罐的抵接面的中央对称地配置。
并且，优选2个突起部配置于比从第1罐的抵接面的中央到端部的距离的一半更靠端部侧。
另外，在本说明书中，凸状变形部是指从免疫层析试剂盒的外部观察时为凸状，并且同样地，山型形状是指从外部观察时为山型。
在本发明的免疫层析试剂盒中，在第1凸状变形部具备上述2个突起部时，能够构成为，该2个突起部各自的前端与第1罐抵接，缓慢向端部侧位移并使第1罐移动。
在本发明的免疫层析试剂盒中，优选构成第1凸状变形部的材质的弯曲弹性模量为50MPa～350MPa。
并且，优选构成上部壳体的材质的弯曲弹性模量为50MPa～350MPa，构成下部壳体的材质的弯曲弹性模量为500MPa～900MPa。
在本发明的免疫层析试剂盒中，优选上部壳体通过射出成型一体形成第1凸状变形部及第2凸状变形部而成。
在本发明的免疫层析试剂盒中，上部壳体具备：第1凸状变形部，通过从外部对与第1罐对置的部分施加按压力而第1罐侧变形，利用中间部件的断裂部使第1罐的片材部件断裂；及第2凸状变形部，通过从外部对与第2罐对置的部分施加按压力而向第2罐侧变形，使第2罐的片材部件断裂，并且通过人用手指等对2个凸状变形部施加按压力，使其变形，能够使罐的片材部件断裂，能够将扩增液供给到检查用试纸条，因此即使没有需要电源的专用分析装置，也能够正常进行扩增反应。因此，本发明的免疫层析试剂盒在不具备专用分析装置、或无法使用分析装置的紧急时、灾害时等尤其有用。
以下，使用附图，对本发明的免疫层析试剂盒的实施方式进行说明，但本发明的免疫层析试剂盒并不限于此。另外，为了容易视觉辨认，使附图中的各构成要件的缩尺等与实际情况适当变化。
图5是本发明的实施方式所涉及的免疫层析试剂盒100的概略立体图，图6是图5的免疫层析试剂盒100的分解概略立体图。
如图5及图6所示，本实施方式的免疫层析试剂盒100在外壳9中内含以下部件而成：检查用试纸条1，包含使试样液展开且具有被检物质的检查区域的不溶性载体2；以及第1罐40及第2罐45，分别封入有用于扩增检查区域中的检测信号的第1扩增液41及第2扩增液46，并具有具备片材部件的一面。外壳9具备以下部件而成：下部壳体20，具备配置检查用试纸条1的容纳部21；上部壳体10，在周缘与下部壳体20接合；及中间部件30，配置于上部壳体10与下部壳体20之间。另外，在对本免疫层析试剂盒100进行说明时，将上部壳体10侧定义为上侧，将下部壳体20侧定义为下侧。
中间部件30具有罐容纳部32，该罐容纳部32容纳第1罐40且在底面具备用于使第1扩增液41滴加到不溶性载体2上的扩增液填充孔。并且，罐容纳部32内的面向第1罐40的片材部件43的位置上设置有使片材部件43断裂的突起状断裂部34。在本例中，第1罐40以具有其片材部件43的面成为下表面的方式配置于罐容纳部32的上方，在与该片材部件43对置的罐容纳部32的底面设置有断裂部34(参考图7)。
并且，具备向中间部件30的罐容纳部32的底面的下游侧延伸的流路形成部35。流路形成部35配置成与检查区域L1、确认区域L2及扩增指标区域L3的上方位置一致，为了能够视觉辨认这些区域L1～L3，其由透明的材料形成。
上部壳体10具备第1凸状变形部12，该第1凸状变形部12通过从外部对与第1罐40对置的部分施加按压力而向第1罐40侧变形，利用中间部件30的断裂部34使该第1罐40的片材部件43断裂。并且，上部壳体10在与第2罐45对置的部分具备第2凸状变形部14，该第2凸状变形部14通过从外部施加按压力而向第2罐45侧变形，从而使第2罐45的片材部件48断裂。
并且，在上部壳体10上设置有试样液滴加用开孔16，试样液从该开孔16滴加到检查用试纸条1的标记保持垫3上。以开孔16和标记保持垫3的位置一致的方式调整标记保持垫3的位置，由此能够可靠地将试样液点加于标记保持垫3上。并且，上部壳体10在与中间部件30的流路形成部35对应的位置具备用于视觉辨认3个区域L1～L3的观察窗18。
在下部壳体20上，作为配置检查用试纸条1的容纳部而设置有载置不溶性载体2的不溶性载体容纳部21及在其下游侧载置吸收垫6的吸收垫容纳部22。并且，在不溶性载体容纳部21的上游侧设置有容纳第2罐45的第2罐容纳部24。
图7是表示检查用试纸条1、中间部件30及两个罐40、45的位置关系的示意剖视图。如图7所示，检查用试纸条1具备：不溶性载体2，使试样液展开；标记保持垫3，含有用能够与固定于不溶性载体2上的被检物质结合的第1物质修饰的标记物质；送液用垫4，将与不溶性载体2的一端接触地配置的第2扩增液46输送到不溶性载体2；及吸收垫6，与不溶性载体2的另一端接触地配置。不溶性载体2固定并支撑在背面粘合片7上。并且，不溶性载体2在标记保持垫3与吸收垫6之间从标记保持垫3侧依次具有包含与被检物质结合的第2物质的检查区域L1、包含能够与第1物质结合的物质的确认区域L2、包含与第2扩增液反应的物质的扩增指标区域L3。
另外，在本说明书中，有时将形成检查区域L1、确认区域L2及扩增指标区域L3而成的不溶性载体2称为层析载体。并且，在本说明书中，如图7中所记载，将送液用垫4侧定义为上游，将吸收垫6侧定义为下游。
中间部件30位于检查用试纸条1的下游端侧的上部，第1罐40以片材部件43朝下的方式配置于中间部件30的罐容纳部32中。第2罐45以片材部件48朝上的方式容纳于下部壳体20的检查用试纸条1的上游端的下方。
如图7所示，在中间部件30的流路形成部35的背面36与检查用试纸条1的不溶性载体2之间形成有间隙(空隙)D。该间隙D优选在0.01mm～1mm的范围内。若为0.01mm以上，则能够使扩增液等充分地浸润，若为1mm以下，则发挥毛细管力，通过第1扩增液41能够均匀地填满不溶性载体2与中间部件30的间隙。
封入有第1扩增液41的第1罐40例如在由树脂材料构成且一面具有开口的容器42中填充有第1扩增液41，该容器42的开口被能够断裂的片材部件43覆盖并密封。
封入有第2扩增液46的第2罐45也同样，例如在由树脂材料构成且一面具有开口的容器47中填充有第2扩增液46，该容器47的开口被能够断裂的片材部件48覆盖并密封。
作为第1罐40及第2罐45中的能够断裂的片材部件43、48，优选使用铝箔或铝层压片等层压薄膜。在此，断裂是指断裂后不再生的状态。
对上部壳体的2处的凸状变形部12、14详细地进行说明。
图8是表示第1凸状变形部12的立体图，图9是图8的V-V’线切割端面图，图9的A表示第1凸状变形部12的变形前，图9的B表示变形后，是表示与第1罐40的位置关系的图。
第1凸状变形部12通过被施加按压力使第1罐40移动到片材部件43被中间部件30的断裂部34断裂的位置。具体而言，第1凸状变形部12构成为能够通过用手指等按压而向下方压入，通过使第1凸状变形部12以向下凸的方式(从外部观察时为凹部状)变形，使第1罐40朝向断裂部34移动，直到第1罐40的片材部件43被中间部件30的罐容纳部32内的断裂部34断裂的位置。由此，断裂部34扎破第1罐40的片材部件43，能够将第1扩增液41供给到外部。第1扩增液41从设置于中间部件30的罐容纳部32的底面的扩增液填充孔滴加到不溶性载体2的上部，能够向不溶性载体上的检查区域L1、确认区域L2及扩增指标区域L3供给第1扩增液41。另外，此时，从扩增液填充孔滴加到不溶性载体2的上部的第1扩增液41填充到中间部件30与不溶性载体2的间隙，通过间隙供给到检查区域L1、确认区域L2及扩增指标区域L3的上方，缓慢浸透到不溶性载体2中。
如图9所示，第1凸状变形部12具备在与第1罐40对置的位置朝向第1罐40侧立设的2个突起部12b。构成为，在第1凸状变形部12被施加按压力而变形时，该2个突起部12b与第1罐40抵接而使第1罐40移动。
第1凸状变形部12具有中央对称的山型形状，2个突起部12b相对于山型形状的顶部12a对称地配置，在夹着顶部12a的斜面12c的下方(背面)相互独立地形成。
并且，如图9的A所示，第1凸状变形部12在变形前以2个突起部12b相对于第1罐40的抵接面的中央位于对称的位置的方式形成于上部壳体10上。并且，如图9中用虚线所示，中间部件30的断裂部34位于第1罐40的片材部件43的下方。在第1凸状变形部12被赋予按压力而变形时，2个突起部12b(2个突起部12b各自的前端)与第1罐40抵接，缓慢向端部侧位移并使第1罐40移动。并且，如图9的B所示，在第1凸状变形部12的变形后，2个突起部12b的间隔扩大，2个突起部12b的前端相互位于比从第1罐40的抵接面的中央到端部的距离的一半更靠端部侧。在本实施方式中，2个突起部12b独立地设置，在该突起部12b之间(顶部12a背面)具有间隙，第1凸状变形部12由柔软的材料形成，由此使2个突起部12b之间较大地扩大，并且按压第1罐40。
突起部12b的形状或配置并不限于上述形态，例如，在变形前，2个突起部12b也可以设置于比从第1罐40的抵接面的中央到端部的距离的一半更靠端部侧的位置。
作为使第1罐40移动的第1凸状变形部12，具有2个突起部12b，由此能够在2处均等地按压第1罐40，因此能够使第1罐40平行地移动。
第1凸状变形部12通过用手指等按压，容易变形，第1凸状变形部12成为向下凸状(凹部状)。优选构成为在该按压后凹部状不恢复，能够维持按压第1罐40的状态。第1凸状变形部12构成为按压顶部12a，但通过按压山型形状的斜面也能够利用第1凸状变形部12的弹性同样地变形。
图10是表示第2凸状变形部14的立体图，图11是图10的VII-VII’线切割端面图，图11的A表示第2凸状变形部14的变形前，图11的B表示变形后，是一并表示与第2罐45的位置关系的图。
第2凸状变形部14通过被施加按压力使第2罐45的片材部件48断裂。如图11的A所示，第2凸状变形部14具备在与第2罐45对置的位置朝向第2罐45立设的1个突起部14b。并且，在与第2罐45之间配置有检查用试纸条1的送液用垫4。第2凸状变形部14被施加按压力而向第2罐45侧凸出，即从外部观察时变形为凹部状，如图11的B所示，突起部14b与送液用垫4的表面抵接，扎破第2罐45的片材部件48，将送液用垫4压入第2罐45中。如图11所示，该第2凸状变形部14构成为在沿着上下游方向的截面中，具有在稍微靠上游侧具有顶部14a的山型形状，在变形时，突起部14b朝向下游侧倾斜而扎破片材部件48。
通过该操作，送液用垫4浸渍在第2罐45中的第2扩增液46中，第2扩增液46能够利用毛细管现象浸透到送液用垫4内并供给到不溶性载体2。
第2凸状变形部14也通过手指等按压，容易变形而成为凹部状。优选构成为在该按压后凹部状不恢复，能够维持将送液用垫4压入第2罐45中的状态。
本发明不使用与电源连接的装置，使第1及第2凸状变形部变形，供给扩增液以实现高灵敏度的分析，作为一个方式，设想人用手使其变形的方式。因此，优选设计成扩增液不会误泄漏到外部，优选设置于上部壳体10上的第1及第2凸状变形部12、14与上部壳体10的其他部分无间隙地一体形成。优选凸状变形部12、14由能够伸缩的材质制作，以密闭的状态与上部壳体10的其他部分接合。也可以在分别制作出上部壳体10的第1及第2凸状变形部12、14和除此以外的部分后使其相互接合，但优选将第1及第2凸状变形部12、14作为上部壳体10的一部分，通过射出成型，作为在中途没有接合部位的连续的1个部件一体成型。
第1及第2凸状变形部12、14需要具有能够用人的手指等容易变形的程度的柔软性。构成凸状变形部12、14的材质的弯曲弹性模量优选为50MPa以上且350MPa以下，更优选为70MPa以上且150MPa以下。
并且，在将上部壳体10和下部壳体20组合时仅嵌合的情况下，有时液体从间隙露出，因此优选对上部壳体10与下部壳体20的嵌合部也以密闭状态粘接。
作为上部壳体10与下部壳体20的粘接方法，优选使用超声波熔接法。已知，通常作为超声波熔接，若熔接的部件不是相同材料则不易熔接，上部壳体/下部壳体的组合优选为聚乙烯/聚乙烯、聚丙烯/聚丙烯或ABS(丙烯腈-丁二烯-苯乙烯共聚物)/ABS。
一方面，在将凸状变形部12、14一体成型在上部壳体10上的情况下，构成上部壳体10的材质需要具有柔软性。另一方面，为了固定检查用试纸条1或第2罐45，下部壳体20优选具有刚性。具体而言，构成上部壳体10的材质的弯曲弹性模量优选为50MPa以上且350MPa以下，更优选为70MPa以上且150MPa以下。构成下部壳体20的材质的弯曲弹性模量优选为500MPa以上且900MPa，尤其优选为650MPa以上且750MPa以下。
另外，弯曲弹性模量是按照ISO178标准的测定方法，在温度20℃的环境下，如下通过式(1)计算出的值。
对于测定弯曲弹性模量的材质，制作宽度b(mm)、厚度h(mm)的板状的试验片，以将支点间距离设为L(mm)的2个支点支承试验片。在支点间的中心施加F(N)的载荷，测定向施加载荷的方向的挠曲量(mm)。制作以横轴为挠曲S(mm)，以纵轴为载荷F(N)的挠曲-载荷曲线。求出该曲线的原点处的切线，计算其斜率(设为载荷的变化量ΔF(N)、挠曲的变化量ΔS(mm)时，(ΔF/ΔS))，使用以下式能够计算出弯曲弹性模量E(MPa)。
弯曲弹性模量E＝(L3/(4bh3))×(ΔF/ΔS)式(1)
因此，上部壳体/下部壳体的组合最优选为加入软化剂的聚丙烯/聚丙烯的组合。在此，加入软化剂的聚丙烯中使用的软化剂优选烯烃系弹性体，烯烃系弹性体相对于聚丙烯的浓度优选20质量％以上且60质量％以下，尤其优选40质量％以上且55质量％以下。作为具体的软化剂，可举出Sumitomo ChemicalCo.,Ltd.制造的TAFSELEN(注册商标)。
另外，本发明的免疫层析试剂盒只要具有2个以上的凸状变形部即可，在应向检查用试纸条供给的溶液为3种以上的情况下，也可以与其对应地具备3个以上的凸状变形部。
作为不溶性载体2，例如能够使用硝酸纤维素膜等。并且，固定不溶性载体2的背面粘合片7是粘贴不溶性载体2的面为粘合面的片状基材。
标记保持垫3固定于不溶性载体2的长度方向中央部。标记物质例如能够使用直径50nm的金胶体(EM.GC50，BBI公司制造)。通过用与被检物质结合的物质修饰标记物质的表面，能够形成与被检物质的结合体。
标记物质并不限于上述，能够使用通常的色谱法中能够使用的金属硫化物、免疫凝集反应中使用的着色粒子等，尤其优选金属胶体。作为金属胶体，可举出金胶体、银胶体、白金胶体、铁胶体、氢氧化铝胶体、及它们的复合胶体等，尤其在适当的粒径中，在金胶体显示红色，银胶体显示黄色方面优选，其中，最优选金胶体。
另外，检查用试纸条1位于使上部壳体10的试样液滴加用开孔16与标记保持垫3的位置一致的位置。
检查区域L1包含与被检物质结合的第2物质，是经由被检物质捕捉与被检物质结合的标记物质的标记物质捕捉区域。例如，在想要将流感A型病毒或其生物标记物作为被检物质进行检测的情况下，优选例如由通过物理吸附将抗流感A型单克隆抗体(Anti-Influenza A SPTN-5 7307，Medix Biochemica公司制造)以线状固定的抗体固定化线构成检查区域L1的方式。
当标记物质经由被检物质和第1物质结合的复合体到达该检查区域L1时，第2物质与被检物质特异性地结合，标记物质经由被检物质和第1物质被捕捉。另一方面，未构成与被检物质的复合体的标记物质不被捕捉而通过检查区域L1。
确认区域L2包含能够与第1物质结合的物质，是与试样液一起从标记保持垫3在不溶性载体2中展开，通过检查区域L1的标记物质经由第1物质被捕捉，用于确认试样液的展开完成的区域。例如，在想要将流感A型病毒或其生物标记物作为被检物质进行检测的情况下，优选例如通过物理吸附将抗小鼠Ig G抗体(抗小鼠IgG(H+L)，兔F(ab’)2，产品编号566-70621，FUJIFILMWako Pure Chemical Corporation制造)以线状固定的方式。
扩增指标区域L3包含与第2扩增液46反应的物质，是通过与第2扩增液46反应而显色或颜色变化，表示第2扩增液46展开到该区域，成为第1扩增液41的滴加时刻的指标的区域。例如，在使用硝酸铁水溶液和柠檬酸(FUJIFI LM Wako Pure Chemical Corporation制造，038-06925)的混合水溶液作为第2扩增液的情况下，优选由将溴甲酚绿(FUJIFILM WakoPure Chemical Corp oration制造)以线状固定的显色试剂固定化线构成扩增指标区域L3的方式。此时，当第2扩增液46到达扩增指标区域L3时，区域L3从绿色变化为橙色。该变色能够作为检查区域L1及确认区域L2被第2扩增液46充分充满的指标来捕捉。
作为扩增金属胶体等金属系标记物质的信号的方法，优选使用使银离子及用于银离子的还原剂与标记物质接触，利用还原剂还原银离子而生成银粒子，该银粒子以标记物质为核而沉积在标记物质上，由此扩增标记物质的信号的方法(以下，称为银扩增)。
为了实现银扩增，作为第1扩增液41使用含有银离子的溶液，作为第2扩增液46使用含有用于银离子的还原剂的还原剂液即可。
(第1扩增液)
作为用作第1扩增液41的含有银离子的溶液，优选在溶剂中溶解有含银离子的化合物的溶液。作为含银离子的化合物，能够使用有机银盐、无机银盐或银络合物。优选为无机银盐或银络合物。作为无机银盐，能够使用在水等溶剂中溶解度高的含银离子的化合物，可举出硝酸银、乙酸银、乳酸银、丁酸银、硫代硫酸银等。尤其优选为硝酸银。作为银络合物，优选在具有羟基和砜基等水溶性基团的配体上配位的银络合物，可举出羟基硫醚银等。
(第2扩增液)
作为在用作第2扩增液46的含有能够还原银离子的还原剂的还原剂液中使用的还原剂，只要是能够将银离子还原成银的物质，则能够使用无机·有机的任何材料或其混合物。作为无机还原剂，能够优选举出通过Fe2+、V2+或Ti3+等金属离子能够改变化合价的还原性金属盐、还原性金属络合物盐。在使用无机还原剂时，需要将被氧化的离子进行络合形成或进行还原而去除或使之无害。例如，在使用Fe2+作为还原剂的体系中，能够使用柠檬酸或EDTA(乙二胺四乙酸)形成作为氧化物的Fe3+的络合物，使其无害。在本体系中，优选使用这样的无机还原剂，更优选为Fe2+的金属盐。
另外，也能够使用湿式卤化银照片感光材料中使用的显影主剂(例如没食子酸甲酯盐、氢醌、取代氢醌、3-吡唑烷酮类、对氨基苯酚类、对苯二胺类、受阻酚类、偕胺肟类、吖嗪类、儿茶酚类、连苯三酚类、抗坏血酸(或其衍生物)及无色染料类)及对于本领域的技术人员而言很明显的其他材料，例如在美国专利第6,020,117号中记载的材料。
作为还原剂，也优选为抗坏血酸还原剂。有用的抗坏血酸还原剂含有抗坏血酸和类似物、异构体及其衍生物，能够优选举出例如D-或L-抗坏血酸及其糖衍生物(例如γ-乳糖酸抗坏血酸、葡糖酸抗坏血酸、藻酸抗坏血酸、葡庚糖酸抗坏血酸、麦芽糖酸抗坏血酸)、抗坏血酸的钠盐、抗坏血酸的钾盐、异抗坏血酸(或L-红霉素抗坏血酸)及其盐(例如碱金属盐、铵盐或该技术领域中已知的盐)、烯二醇型抗坏血酸、烯胺醇型抗坏血酸、硫醇烯醇型抗坏血酸等，尤其优选D、L或D，L-抗坏血酸(及其碱金属盐)或异抗坏血酸(或其碱金属盐)，钠盐为优选的盐。根据需要，能够使用这些还原剂的混合物。
另外，在本实施方式中，第1凸状变形部12使第1罐40朝向设置于中间部件30的断裂部34移动，但第1凸状变形部12只要是能够伴随其变形而利用断裂部34使第1罐40的片材部件43断裂的结构即可。
只要是能够将第1罐40的片材部件43断裂而从第1罐40流出的第1扩增液41从罐容纳部32的底面的扩增液填充孔滴加到不溶性载体2上的结构，则第1罐40及容纳第1罐40的罐容纳部32的结构也并不限于本实施方式的结构。
并且，第1凸状变形部的突起部具有2个以上，能够使第1罐40不倾斜且平行地移动，因此优选。但是，第1凸状部件也可以具有与上述实施方式的第2凸状变形部相同的形状的突起部为1个形态。也可以将与第2凸状变形部相同形状的凸状变形部用作使第1罐40移动的第1凸状变形部。
图12是与图11相同的切割端面图，表示使用与第2凸状变形部相同形状的凸状变形部114使第1罐40移动时的形态。
如图12的A所示，在变形前，第1罐40配置成位于凸状变形部114的突起部114b的下方。并且，中间部件30的断裂部34位于第1罐40的下方。通过按压凸状变形部114的顶部114a，突起部114b压靠第1罐40的上表面，将第1罐40向下按压。由此，断裂部34扎破第1罐40的片材部件43，封入在第1罐40中的第1扩增液41从第1罐流出并供给到检查用试纸条1。
如此，即使设置于凸状变形部114的突起部为1个，也能够使罐移动。
另外，本发明的免疫层析试剂盒也可以包含如下：内含含有辅助被检体的提取的辅助药品等的被检体提取液的罐或内含被检体稀释液的罐、有助于试剂盒的保存的干燥剂或脱氧剂、使用说明书等包装说明书、及棉签等被检体采集器具等检查所需的一套或一部分器材。
若使用本免疫层析试剂盒，则无需使用专用分析装置等，能够仅使用该试剂盒单体高精度地进行检查。
＜免疫层析检查方法＞
对使用了上述免疫层析试剂盒100的免疫层析检查方法简单进行说明。
从试样液滴加用开孔16将试样液滴加到标记保持垫3上。在试样液中含有被检物质的情况下，在标记保持垫3中，通过被检物质与第1物质结合，形成经由第1物质的被检物质与标记物质的复合体，该复合体与试样液一起通过吸收垫6的吸引力利用毛细管现象朝向吸收垫6侧展开。在滴加该试样液的同时或之后，按压第2凸状变形部14，使送液用垫4位移并使第2罐45的片材部件48断裂，将送液用垫4浸入第2扩增液46中，将第2扩增液46输送到不溶性载体2。另外，按压第2凸状变形部14的时刻优选为从滴加试样液时起30秒以内，尤其优选在刚滴加试样液之后。
到达检查区域L1的复合体与检查区域L1的第2物质结合而被捕捉。并且，未与被检物质结合的第1物质通过检查区域L1到达确认区域L2，与确认区域L2的与第1物质结合的物质结合而被捕捉。
第2扩增液46经过检查区域L1、确认区域L2到达扩增指标区域L3。此时，通过扩增指标区域L3变色，能够视觉上识别第2扩增液46到达扩增指标区域L3。确认扩增指标区域L3的变色后，按压第1凸状变形部12将第1扩增液41供给到不溶性载体2上。
将第1扩增液41供给到不溶性载体2后等待反应结束，从观察窗18确认检查区域L1及确认区域L2的显色。通过检查区域L1的显色能够确认被检物质的有无及其浓度的高低，通过确认区域L2的显色能够确认测定被检物质的检查是否成功。检查区域L1及确认区域L2中的显色是通过扩增标记的信号而获得的，能够实现高灵敏度的检查。
实施例
以下，通过实施例对本发明进一步详细地进行说明，但本发明并不限定于此。
[A]抗原为LAM的情况
[被检体液的制备]
将从结核菌提取到的脂阿拉伯甘露聚糖(LAM)(02249-61，Nacalai Tes queInc.)(抗原)添加到贮存了健康人的尿检体(BioreclamationIVT公司)的尿检体中，制备出LAM浓度为0.1ng/mL的被检体液(可含有抗原的液体)。
[实施例A1]
〔浓缩器件的制作〕
如下制作出实施例A1的浓缩器件。
首先，准备了微型离心过滤器(VIVACLEAR MINI 0.8μm，多孔膜的材质：聚醚砜(PES)，多孔膜的孔径：0.8μm，Sartorius公司制造)。如图2所示，上述离心过滤器具备第1容器210和第2容器220，第1容器210的底部由排出部212构成，该排出部212由多孔膜形成。作为多孔膜材料的PES的表面能为46达因/厘米。
接着，向上述微型离心过滤器的第1容器中加入市售的SAP粒子(NipponShokubaiCo.,Ltd.制造的AQUALIC CA，溶胀率：30g/g，粒径：300μm)100mg。
如此，获得了如图1所示的浓缩器件。
〔被检体液的浓缩〕
使用所获得的浓缩器件，如下浓缩了上述被检体液。
＜被检体液注入工序＞
向所获得的浓缩器件的第1容器中注入700μL上述被检体液(LAM浓度为0.1ng/mL的被检体液)，与SAP粒子混合(图3A)。另外，所注入的被检体液不会从排出部排出而保持在第1容器中。
＜吸水工序＞
然后，静置5分钟。在此期间，被检体液中所含的溶液(水、低分子)被SAP粒子吸收，在第1容器中生成了作为被检体液的浓缩液的被检体液浓缩液(图3B)。
＜排出工序＞
接着，将浓缩器件放入小型微量离心机(TOMY SEIKO CO.,LTD.制造的Multi-Spin)中，对被检体液浓缩液沿从上向下的方向(排出部的方向)施加离心力(转速：6000rpm，时间：几十秒)，将被检体液浓缩液从多孔膜(排出部)排出(图3C)。
＜回收工序＞
将所排出的被检体液浓缩液回收到第2容器中(图3D)。所获得的被检体液浓缩液的量为100μL。浓缩时间(从被检体液注入工序到回收工序所耗费的时间(分))为7分钟。
〔LAM的检测〕
对于所获得的被检体液浓缩液(60μL)，使用市售的LAM试剂盒(Alere社制造的Alere DetermineTM TB LAM Ag)来检测LAM，接着，使用FujifilmCorporation制造的LAS4000来测定光学浓度。
并且，制备LAM浓度为0.1ng/mL、0.2ng/mL、0.3ng/mL、0.4ng/mL的水溶液，同样地测定光学浓度，制作出校准曲线。并且，对于上述被检体液浓缩液，使用校准曲线，由该光学浓度求出LAM浓度(浓缩后)，计算出LAM浓缩率(＝LAM浓度(浓缩后)/LAM浓度(浓缩前)。将LAM浓缩率示于表1。当LAM浓缩率大于1时，表示被检体液被浓缩。优选LAM浓缩率高。
[实施例A2]
从实施例A1中使用的微型离心过滤器取出多孔膜(材质：PES)，取而代之安装了多孔膜(材质：乙酸纤维素(CA)，孔径：5μm)(从AdvantechCo.,Ltd.制造的Minisalt CA 5μm取出的CA膜)。如图2所示，更换多孔膜后的微型离心过滤器具备第1容器和第2容器，第1容器的底部由多孔膜(排出部)构成。作为多孔膜材料的CA的表面能为50达因/厘米。
接着，向更换多孔膜后的微型离心过滤器的第1容器中加入市售的SAP粒子(Nippon Shokubai Co.,Ltd.制造的AQUALIC CA：溶胀率30g/g)100mg。
如此，获得了如图1所示的浓缩器件。
使用所获得的浓缩器件，与实施例A1同样地进行了被检体液的浓缩及LA M的检测。将LAM浓缩率示于表1。
另外，所获得的被检体液浓缩液的量为100μL，浓缩时间为7分钟。
[实施例A3]
从实施例A1中使用的微型离心过滤器取出多孔膜(材质：PES)，取而代之安装了多孔膜(材质：乙酸纤维素(CA)，孔径：0.2μm)(从Advantec h Co.,Ltd.制造的Minisalt CA0.2μm取出的CA膜)。如图2所示，更换多孔膜后的微型离心过滤器具备第1容器和第2容器，第1容器的底部由多孔膜(排出部)构成。作为多孔膜材料的CA的表面能为50达因/厘米。
接着，向更换多孔膜后的微型离心过滤器的第1容器中加入市售的SAP粒子(Nippon Shokubai Co.,Ltd.制造的AQUALIC CA：溶胀率30g/g)100mg。
如此，获得了如图1所示的浓缩器件。
使用所获得的浓缩器件，与实施例A1同样地进行了被检体液的浓缩及LA M的检测。将LAM浓缩率示于表1。
另外，所获得的被检体液浓缩液的量为100μL，浓缩时间为7分钟。
[实施例A4]
从实施例A1中使用的微型离心过滤器取出多孔膜(材质：PES)，取而代之安装了多孔膜(材质：玻璃纤维(GF)，孔径：0.45μm)(从Cytiva公司制造的塑料盘13取出的GF膜)。如图2所示，更换多孔膜后的微型离心过滤器具备第1容器和第2容器，第1容器的底部由多孔膜(排出部)构成。作为多孔膜材料的GF的表面能为73达因/厘米。
接着，向更换多孔膜后的微型离心过滤器的第1容器中加入市售的SAP粒子(Nippon Shokubai Co.,Ltd.制造的AQUALIC CA：溶胀率30g/g)100mg。
如此，获得了如图1所示的浓缩器件。
使用所获得的浓缩器件，与实施例A1同样地进行了被检体液的浓缩及LA M的检测。将LAM浓缩率示于表1。
另外，所获得的被检体液浓缩液的量为100μL，浓缩时间为7分钟。
[实施例A5]
从实施例A1中使用的微型离心过滤器取出多孔膜(材质：PES)，取而代之安装了多孔膜(材质：亲水性PTFE，孔径：0.05μm)(Advantech Co.,Lt d.制造的PTFE膜)。如图2所示，更换多孔膜后的微型离心过滤器具备第1容器和第2容器，第1容器的底部由多孔膜(排出部)构成。作为多孔膜材料的亲水性PTFE的表面能为35达因/厘米。
接着，向更换多孔膜后的微型离心过滤器的第1容器中加入市售的SAP粒子(Nippon Shokubai Co.,Ltd.制造的AQUALIC CA：溶胀率30g/g)100mg。
如此，获得了如图1所示的浓缩器件。
使用所获得的浓缩器件，与实施例A1同样地进行了被检体液的浓缩及LA M的检测。将LAM浓缩率示于表1。
另外，所获得的被检体液浓缩液的量为100μL，浓缩时间为7分钟。
[实施例A6]
从实施例A1中使用的微型离心过滤器取出多孔膜(材质：PES)，取而代之安装了多孔膜(材质：疏水性PTFE，孔径：0.05μm)(Advantech Co.,Lt d.制造的PTFE膜)。如图2所示，更换多孔膜后的微型离心过滤器具备第1容器和第2容器，第1容器的底部由多孔膜(排出部)构成。作为多孔膜材料的疏水性PTFE的表面能为23达因/厘米。
接着，向更换多孔膜后的微型离心过滤器的第1容器中加入市售的SAP粒子(Nippon Shokubai Co.,Ltd.制造的AQUALIC CA：溶胀率30g/g)100mg。
如此，获得了如图1所示的浓缩器件。
使用所获得的浓缩器件，与实施例A1同样地进行了被检体液的浓缩及LA M的检测。将LAM浓缩率示于表1。
另外，所获得的被检体液浓缩液的量为60μL，浓缩时间为7分钟。作为所获得的被检体液浓缩液的量少的理由，认为是多孔膜的孔径小。
[实施例A7]
按照与实施例A1相同的步骤，制作出浓缩器件。
用贮存的尿检体将上述被检体液稀释成4倍，制备LAM浓度为0.025ng/mL的被检体液(能够含有抗原的液体)，使用了该被检体液，除此以外，与实施例A1同样地进行了被检体液的浓缩及LAM的检测。将LAM浓缩率示于表1。
[比较例A1]
从实施例A1中使用的微型离心过滤器取出多孔膜(材质：PES)，取而代之安装了多孔膜(材质：玻璃纤维(GF)，孔径：100μm)(Merck公司制造的GF膜)。如图2所示，更换多孔膜后的微型离心过滤器具备第1容器和第2容器，第1容器的底部由多孔膜(排出部)构成。作为多孔膜材料的GF的表面能为73达因/厘米。
接着，向更换多孔膜后的微型离心过滤器的第1容器中加入市售的SAP粒子(Nippon Shokubai Co.,Ltd.制造的AQUALIC CA：溶胀率30g/g)100mg。
如此，获得了如图1所示的浓缩器件。
使用所获得的浓缩器件，与实施例A1同样地进行被检体液的浓缩时，注入到第1容器中的被检体液未保持在第1容器中，从排出部全部排出，回收到第2容器中。回收的被检体液为700μL。对于回收到第2容器中的被检体液，与实施例A1同样地进行了LAM的检测。将LAM浓缩率示于表1。
[比较例A2]
从实施例A1中使用的微型离心过滤器取出多孔膜(材质：PES)，取而代之安装了多孔膜(材质：纤维素，孔径：小于0.01μm)(从Merck公司制造的Amicon Ultra3kDa、0.5mL取出的膜)。如图2所示，更换多孔膜后的微型离心过滤器具备第1容器和第2容器，第1容器的底部由多孔膜(排出部)构成。作为多孔膜材料的GF的表面能为73达因/厘米。
接着，向更换多孔膜后的微型离心过滤器的第1容器中加入市售的SAP粒子(Nippon Shokubai Co.,Ltd.制造的AQUALIC CA：溶胀率30g/g)100mg。
如此，获得了如图1所示的浓缩器件。
使用所获得的浓缩器件，与实施例A1同样地进行被检体液的浓缩时，在排出工序中，通过短时间的离心，被检体液浓缩液无法从多孔膜排出，无法回收被检体液浓缩液。因此，未进行LAM的检测。
[比较例A3]
代替实施例A1的浓缩器件，使用微型离心过滤器(VIVACLEAR MINI 0.8μm，多孔膜的材质：聚醚砜(PES)，多孔膜的孔径：0.8μm，Sartorius公司制造)(未加入SAP粒子)，与实施例A1同样地进行了被检体液注入工序、排出工序及回收工序。注入到第1容器中的被检体液全部回收到第2容器中。回收的被检体液的量为700μL。对于回收的被检体液，与实施例A1同样地进行了LAM的检测。将LAM浓缩率示于表1。
[比较例A4]
使用Amicon Ultra(3k(3k为3KDa，截留分子量))(Merck公司制造；UFC5003BK)浓缩了上述被检体液。如图13所示，该产品由过滤膜单元和通液回收容器构成。是在将过滤膜单元插入通液回收容器(没有过滤膜)的状态下进行离心，从过滤膜单元回收浓缩液的产品。作为回收残留在过滤膜单元中的浓缩液的方法，相对于最初的离心时，使插入回收容器的方向反向，将过滤膜单元插入通液回收容器，以低转速进行离心，由此能够回收浓缩液。
过滤膜单元中使用的过滤膜为Millipore公司制，利用低吸附再生纤维素膜，孔径虽然未记载，但由于截留分子量为3KDa，因此推测为0.05μm以下。通液回收容器存在2个，一个是回收/废弃从过滤膜单元通过的液体的容器。另一个是用于回收过滤膜单元的残留的浓缩液的容器。
向这样的产品的过滤膜单元中加入700μL的LAM浓度为0.1ng/mL的被检体液。在插入通液回收容器1中的状态下，以20分钟、4℃、8000rpm的转速进行离心。此时，370μL的液体向通液回收容器侧移动，在过滤膜单元中残留少量的液体。将通液回收容器替换为新的容器(通液回收容器2)，将超滤单元相对于最初的离心时，以插入回收容器的方向为反向插入回收容器，以2000rpm2分钟进行了离心(称为反向旋转离心)。结果，所获得的被检体液浓缩液的量为130μL。此时，浓缩所需的时间为26分钟。对于所获得的被检体液浓缩液，与实施例A1同样地进行了LAM的检测。将LAM浓缩率示于表1。
[比较例A5]
从实施例A1中使用的微型离心过滤器取出多孔膜(材质：PES)，取而代之安装了多孔膜(材质：聚丙烯(PP)，孔径：50μm)(AS ONE Corporat ion制造的精细聚丙烯网)。如图2所示，更换多孔膜后的微型离心过滤器具备第1容器和第2容器，第1容器的底部由多孔膜(排出部)构成。作为多孔膜材料的GF的表面能为73达因/厘米。
接着，向更换多孔膜后的微型离心过滤器的第1容器中加入市售的SAP粒子(Nippon Shokubai Co.,Ltd.制造的AQUALIC CA：溶胀率30g/g)100mg。
如此，获得了如图1所示的浓缩器件。
使用所获得的浓缩器件，与实施例A1同样地进行被检体液的浓缩时，注入到第1容器中的被检体液未保持在第1容器中，从排出部排出，回收到第2容器中。对于回收到第2容器中的被检体液，与实施例A1同样地进行了LAM的检测。将LAM浓缩率示于表1。
[参考例A6]
按照与比较例A3相同的步骤，制作出浓缩器件。
用贮存的尿检体将上述被检体液稀释成4倍，制备LAM浓度为0.025ng/mL的被检体液(能够含有抗原的液体)，使用了该被检体液，除此以外，与比较例A3同样地进行了被检体液注入工序、排出工序及回收工序。注入到第1容器中的被检体液全部回收到第2容器中。回收的被检体液的量为700μL。对于回收的被检体液，与实施例A1同样地进行了LAM的检测，但由于是检测极限以下，未确认到浓度。由于未进行LAM浓缩，因此在表1中表述为1倍。
[表1]
Figure BDA0004118768230000401
表1中，“SAP溶胀率”表示所使用的高吸水性聚合物的溶胀率[g/g]。溶胀率的测定方法如上所述。
表1中，“多孔膜材质”表示所使用的多孔膜的材质，PES表示聚醚砜，CA表示乙酸纤维素，GF表示玻璃纤维，亲水性PTFE表示亲水性聚四氟乙烯，疏水性PTFE表示疏水性聚四氟乙烯，PP表示聚丙烯。
表1中，“孔径”表示所使用的多孔膜的孔径[μm]。
表1中，“表面能”表示所使用的多孔膜材料的表面能[达因/厘米]。表面能的测定方法如上所述。
表1中，“浓缩时间”表示从被检体液注入工序到回收工序所耗费的时间(分钟)。实用上，浓缩时间优选为20分钟以下。
由表1可知，在使用了作为本发明的浓缩器件的实施例A1～A7的情况下，能够在短时间(20分钟以下)内浓缩被检体液。其中，多孔膜由具有24达因/厘米以上且75达因/厘米以下的表面能的材料形成的实施例A1～A5及实施例A7显示高浓缩率。其中，多孔膜由具有40达因/厘米以上且75达因/厘米以下的表面能的材料形成的实施例A1～A4显示进一步高的浓缩率。
另一方面，多孔膜的孔径超过10μm的比较例A1及比较例A5中，如上所述，注入的被检体液未保持在第1容器中，无法浓缩被检体液。
并且，多孔膜的孔径小于0.05μm的比较例A2中，如上所述，无法回收被检体液浓缩液。并且，不具有高吸水性聚合物的比较例A3及比较例A6中，无法浓缩被检体液。
可知在实施例A1～A5中，不需要反向旋转离心，离心次数为1次，且在7分钟这样的短时间内浓缩倍率为4倍，与此相对，在比较例A4中，为了获得相同程度的浓缩率，离心次数为2次，浓缩时间也耗费3倍以上。
使用LAM试剂盒而获得的光学浓度与实施例A1～A5、比较例A4的浓度为相同程度，其1/4左右的浓度通过比较例A1和实施例A7的测定获得。比较例A6的浓度更低。可知通过使用具有本发明的结构的试剂盒，能够以可在短时间内操作的浓缩构件，实现4倍的检测灵敏度。
[B]抗原为流感病毒的情况
[被检体液的制备]
使用Quick S-Influ A·B“生研”阴性/阳性对照液(产品编号；322968，DE NKASEIKEN Co.,Ltd.制造)制备出被检体液(可含有抗原的液体)。
具体而言，将上述对照液用含有0.1质量％BSA(Bovine Serum Albumi n)的PBS(Phosphate buffered salts：磷酸盐)缓冲液稀释，制成各浓度的被检体液(可含有抗原的液体)。在此，浓度(倍)是指对照液/(对照液+缓冲液)，例如用缓冲液将对照液稀释至100倍的情况下，浓度为0.01倍。
[流感病毒检测用免疫层析试剂盒的制作]
如下，制作出用于检测流感病毒的流感病毒检测用免疫层析试剂盒(检测器件)作为被检物质(生物体液中所含的高分子)。
(1-1)作为修饰了能够与被检物质结合的第1物质的标记物质的抗流感A型抗体修饰金胶体的制作
向含有直径50nm的金胶体的溶液(产品编号：EM.GC50，BBI公司制造)9mL中添加50mmol/L的KH2PO4缓冲液(pH7.5)1mL，进行pH调节，然后添加160μg/mL的含抗流感A型单克隆抗体(Anti-Influenza A SPTN-5 7307，Medix Biochemica公司制造)的溶液1mL，搅拌了10分钟。然后，静置10分钟后，添加1质量％的含聚乙二醇(PEG(polyethylene glycol)；重均分子量(Mw：20000，产品编号：168-11285，FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation制造)的水溶液550μL搅拌10分钟，接着添加10质量％牛血清白蛋白(BSA(Bovine serumalbumin)；FractionV，产品编号：A-7906，SigmaCorporation制造)的水溶液1.1mL，搅拌了10分钟。使用离心分离装置(hi macCF16RX，Hitachi,Ltd.制造)，在8000×g、4℃的条件下，经30分钟对该溶液进行了离心分离。在容器的底部残留1mL并去除上清液，利用超声波清洗机将残留在容器底部的1mL液体中所含的金胶体再分散。然后，将其分散在20mL的金胶体保存液(20mmol/L Tris-HCl(三羟甲基氨基甲烷盐酸)缓冲液(pH8.2)，0.05％PEG(Mw.20000)，150mmol/L NaCl，1％BSA)中，再次使用相同的离心分离装置在相同的条件下进行离心分离，去除上清液，进行超声波分散后，分散在金胶体保存液中，获得了抗流感A型抗体修饰金胶体(50nm)溶液。
(1-2)作为标记保持垫的抗流感A型抗体修饰金胶体保持垫的制作
用水稀释在(1-1)中制作的抗流感A型抗体修饰金胶体，以使Tris-HCl缓冲液(pH8.2)的浓度成为20mmol/L，PEG(Mw.20000)的浓度成为0.05质量％，蔗糖的浓度成为5质量％，而且光路长度为10mm时的金胶体的520nm的光学浓度成为0.1，制成金胶体涂布液。将该涂布液对每1片切割成12mm×300mm的玻璃纤维垫(GlassFiber Conjugate Pad，Millipore公司制造)均匀地涂布0.8mL，并减压干燥24小时，由此获得了抗流感A型抗体修饰金胶体保持垫(金胶体保持垫)。
(1-3)层析载体的制作
作为不溶性载体使用切割成60mm×300mm的硝酸纤维素膜(存在塑料内衬，HiFlowPlus HF135(毛细管流速＝135秒/cm)，Millipore公司制造)，通过如下方法而在该膜上形成检查区域、确认区域及扩增指标区域，从而制作出层析载体。
在硝酸纤维素膜的60mm的短边中的距下游侧15mm的位置，以线状涂布制备成1.5mg/mL的抗流感A型单克隆抗体(Anti-Influenza A SPTN-5 7307，Medix Biochemica公司制造)溶液，作为检查区域。而且，在60mm的短边中的距下游侧11mm的位置，以线状涂布制备成0.2mg/mL的抗小鼠IgG抗体(抗小鼠IgG(H+L)，兔F(ab’)2，产品编号566-70621，FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation制造)溶液，作为确认区域。而且，在距60mm的短边中的距下游侧9mm的位置，以线状涂布制备成30mmol/L的溴甲酚绿(FUJIFILM WakoPure Chemical Corporation制造)，作为扩增指标区域。在分别进行涂布后，用暖风式干燥机在50℃下经30分钟对硝酸纤维素膜进行了干燥。在干燥结束后，在加入500mL的粘连液(含有0.5质量％酪蛋白(源自乳，产品编号030-01505，FUJIFILM Wako Pure ChemicalCorporation制造)的50mmol/L的硼酸缓冲液(pH8.5))的槽中浸渍如上述那样进行干燥的硝酸纤维素膜，并以该状态静置了30分钟。然后，取出硝酸纤维素膜，在另一槽中准备的清洗/稳定液(含有0.5质量％蔗糖及0.05质量％胆酸钠的50mmol/L Tris-HCl(pH7.5)缓冲液)500mL中浸渍硝酸纤维素膜，并以该状态静置了30分钟。然后，从溶液中取出硝酸纤维素膜，在25℃的环境下干燥了24小时。
固定了抗流感A型抗体的部分相当于包含与被检物质结合的第2物质的检查区域，固定了抗小鼠IgG抗体的部分相当于包含能够与第1物质结合的物质的确认区域，固定了溴甲酚绿的部分相当于下述包含与作为封入第2罐中的还原剂溶液的第2扩增液反应的物质的扩增指标区域。
(1-4)检查用试纸条的制作
将(1-3)中制作出的层析载体粘贴到背面粘合片(60mm×300mm(NIPPNTechnoCluster,Inc.制造))上。接着，在层析载体的短边中的距下游侧26mm的位置固定了宽度为3mm的双面胶带(Nitto Denko Corporation)。然后，使双面胶带的下游端与(1-2)中制作出的金胶体保持垫的下游端重叠，将金胶体保持垫固定于层析载体上。将送液用垫(切割成25mm×300mm的玻璃纤维垫(Glass Fiber Conjugate Pad，Millipore公司制造))粘贴于层析载体的上游侧，以使送液用垫和层析载体重叠7mm。将如此制作的部件以相对于与300mm的长边垂直的方向平行且宽度成为5mm的方式，利用铡刀式切割机(CM4000，NIPPNTechnoCluster,Inc.制造)进行切割，制作出60条检查用试纸条(但不包含吸收垫。)。
(1-5)扩增液的制作
(1-5-1)封入第2罐中的扩增液(还原剂溶液)的制作
在290g水中溶解了通过将硝酸铁(III)九水合物(FUJIFILM Wako PureChemicalCorporation制造，095-00995)溶解于水中而制作的1mol/L硝酸铁水溶液23.6mL、柠檬酸(FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation制造，038-06925)13.1g。在完全溶解后，利用搅拌器一边搅拌，一边添加硝酸(10重量％)溶液36mL，并添加了硫酸铵铁(II)六水合物(FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation制造，091-00855)60.8g。将如此制备的溶液作为封入第2罐中的第2扩增液即还原剂溶液。
(1-5-2)封入第1罐中的扩增液(银离子溶液)的制作
在水66g中添加了硝酸银溶液8mL(含有10g硝酸银)和1mol/L硝酸铁水溶液24mL。而且，将该溶液和预先将硝酸(10重量％)5.9mL、十二烷胺(FUJIFILM Wako Pure ChemicalCorporation制造，123-00246)0.1g、表面活性剂C12H25-C6H4-O-(CH2CH2O)50H 0.1g溶解于47.6g的水中而成的溶液进行混合，将该混合液作为封入第1罐中的第1扩增液即银离子溶液。
(1-6)吸收垫的制作
准备60片切割成12mm×10mm的玻璃纤维垫(玻璃滤纸，Advantech Co.,Ltd.制造)而作为吸收垫。
(1-7)免疫层析试剂盒组件的制作
将聚丙烯作为材料，通过注射成型分别制作出如图5～图6等所示的构成免疫层析试剂盒100的下部壳体20、上部壳体10、中间部件30及第1罐40、第2罐45。将含有50质量％Sumitomo Chemical Co.,Ltd.制造的烯烃系弹性体即TAFSELEN(注册商标)的聚丙烯作为材料，并通过注射成型制作出上部壳体。
另外，上部壳体10具备两个能够变形的部位(第1凸状变形部和第2凸状变形部)，该两个变形部没有与上部壳体10分离的部分，在所有边界部作为上部壳体10的一部分通过注射成型而制作。
另外，上部壳体设为如下结构，即，图5及图6等所示的第1凸状变形部12具有两个突起部，第2凸状变形部14具有1个突起部。上部壳体和下部壳体的材质的弯曲弹性模量分别为90(MPa)、700(MPa)。
(1-8)免疫层析试剂盒的制作
如图5及图6所示固定了下部壳体20、在(1-4)中制作出的检查用试纸条1和在(1-6)中制作出的吸收垫6。接着，在第1罐40及第2罐45中分别填充在(1-5-2)、(1-5-1)中制作出的封入第1罐40中的第1扩增液41、封入第2罐45中的第2扩增液46，用作为片材部件48的铝箔来密封第2罐45，用作为片材部件43的铝箔来密封第1罐40，如图5及图6所示，将第2罐45以片材部件48设于上方的方式安装于下部壳体20，将第1罐40以片材部件43设于下方的方式安装于中间部件30。并且，在将上部壳体10和下部壳体20以外周彼此接触的方式嵌合的状态下，通过超声波熔接将上部壳体与下部壳体的接触部接合。此时，确认到熔接部位以密闭状态均匀地熔接在所有部位。如此制作出流感病毒检测用免疫层析试剂盒。
[实施例B1]
〔浓缩器件的制作〕
按照与实施例A1相同的步骤，制作出浓缩器件。
〔被检体液的浓缩〕
使用所获得的浓缩器件，按照与上述实施例A1相同的步骤，浓缩了上述被检体液(含有流感病毒的被检体液)。具体而言，在被检体液注入工序中，代替被检体液(含有LAM的被检体液)700μL，使用了被检体液(含有流感病毒的被检体液)700μL，除此以外，按照与上述实施例A1相同的步骤，浓缩了被检体液(含有流感病毒的被检体液)。
所获得的被检体液浓缩液的量为100μL。浓缩时间(从被检体液注入工序到回收工序所耗费的时间(分))为7分钟。
〔流感病毒的检测〕
对于所获得的被检体液浓缩液，如下进行了流感病毒的检测。
(2-1)滴加
将所获得的被检体液浓缩液(40μL)滴加到如上所述制作出的流感病毒检测用免疫层析试剂盒的金胶体保持垫上。由此，形成了作为被检体液中的流感A型病毒和金胶体保持垫中的用抗流感A型单克隆抗体修饰的金胶体粒子(修饰金粒子)的复合体的金粒子复合体。在该状态下，向上述硝酸纤维素膜的下游侧展开。
(2-2)封入第2罐中的扩增液(还原剂溶液)的展开
在刚滴加(2-1)的被检体液浓缩液后按压第2凸状变形部14，由此使对封入第2罐45中的第2扩增液46进行密封的片材部件48即铝箔断裂，将送液用垫4浸渍于第2罐45中，由此利用毛细管现象将第2扩增液46供给到不溶性载体2。
(2-3)银扩增
扩增指标区域L3从绿色变成橙色后，按压第1凸状变形部12(实施例2中为第1凸状变形部114)，使第1罐40朝向中间部件30的罐容纳部32的断裂部34移动，由此通过断裂部34压破密封第1罐40的片材部件43即铝箔，从中间部件30的开口部将第1扩增液41即银离子溶液供给到不溶性载体2，并进行了银扩增反应。银扩增反应在几十秒内结束。
(2-4)浓缩率的评价
通过目视确认检查区域L1的着色，调查确认到着色的最小的浓度(C1)，结果为0.01倍。并且，不浓缩被检体液，同样地进行流感病毒的检测，调查确认到着色的最小的浓度(C0)，结果为0.04倍。在此，浓度(C1)的倒数与浓缩率大致成比例，因此将C1的倒数除以C0的倒数而得的值作为浓缩率计算。将结果示于表2。当浓缩率大于1时，表示被检体液被浓缩。优选浓缩率高。
[实施例B2]
作为SAP粒子使用了SAP Spheres(M2 Polymer Technologies公司制造，溶胀率：20g/g)，除此以外，按照与实施例A1相同的步骤制作出浓缩器件。
使用所获得的浓缩器件，与实施例B1同样地进行了被检体液的浓缩及流感病毒的检测。确认到着色的最小的浓度(C1)为0.01倍。将浓缩率示于表2。
另外，所获得的被检体液浓缩液的量为40μL，浓缩时间为4分钟。
[实施例B3]
按照与实施例A3相同的步骤，制作出浓缩器件。
使用所获得的浓缩器件，与实施例B1同样地进行了被检体液的浓缩及流感病毒的检测。确认到着色的最小的浓度(C1)为0.01倍。将浓缩率示于表2。
[实施例B4]
按照与实施例A4相同的步骤，制作出浓缩器件。
使用所获得的浓缩器件，与实施例B1同样地进行了被检体液的浓缩及流感病毒的检测。确认到着色的最小的浓度(C1)为0.01倍。将浓缩率示于表2。
[实施例B5]
按照与实施例A5相同的步骤，制作出浓缩器件。
使用所获得的浓缩器件，与实施例B1同样地进行了被检体液的浓缩及流感病毒的检测。确认到着色的最小的浓度(C1)为0.012倍。将浓缩率示于表2。
[实施例B6]
按照与实施例A6相同的步骤，制作出浓缩器件。
使用所获得的浓缩器件，与实施例B1同样地进行了被检体液的浓缩及流感病毒的检测。确认到着色的最小的浓度(C1)为0.01倍。将浓缩率示于表2。
[实施例B7]
作为SAP粒子使用了将市售的SAP(高吸水性聚合物)粒子(型号197-12451：FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation制造)进行分粒的粒子(粒径：0.05mm，溶胀率：600g/g，吸水速度：20g/分钟)，除此以外，按照与实施例A1相同的步骤制作出浓缩器件。
使用所获得的浓缩器件，与实施例B1同样地进行了被检体液的浓缩及流感病毒的检测。确认到着色的最小的浓度(C1)为0.02倍。将浓缩率示于表2。
[实施例B8]
作为SAP粒子使用了将市售的SAP(高吸水性聚合物)粒子(M2 Polyme rTechnologies Inc.制造；SAP Sphere 2.5mm)进行分粒的粒子(粒径：2.5mm，溶胀率：13g/g，吸水速度：0.5g/分钟)，除此以外，按照与实施例A1相同的步骤制作出浓缩器件。
使用所获得的浓缩器件，与实施例B1同样地进行了被检体液的浓缩及流感病毒的检测。确认到着色的最小的浓度(C1)为0.01倍。将浓缩率示于表2。
[比较例B1]
按照与比较例A1相同的步骤，制作出浓缩器件。
使用所获得的浓缩器件，与实施例B1同样地进行被检体液的浓缩时，注入到第1容器中的被检体液未保持在第1容器中，从排出部全部排出，回收到第2容器中。回收的被检体液为700μL。对于回收到第2容器中的被检体液，与实施例B1同样地进行了流感病毒的检测。确认到着色的最小的浓度(C1)为0.04倍。将浓缩率示于表2。
[比较例B2]
按照与比较例A2相同的步骤，制作出浓缩器件。
使用所获得的浓缩器件，与实施例B1同样地进行被检体液的浓缩时，在排出工序中，通过短时间的离心，被检体液浓缩液无法从多孔膜排出，无法回收被检体液浓缩液。因此，未进行流感病毒的检测。
[比较例B3]
代替实施例B1的浓缩器件，使用微型离心过滤器(VIVACLEAR MINI 0.8μm，多孔膜的材质：聚醚砜(PES)，多孔膜的孔径：0.8μm，Sartorius公司制造)(未加入SAP粒子)，与实施例B1同样地进行了被检体液注入工序、排出工序及回收工序。注入到第1容器中的被检体液全部回收到第2容器中。回收的被检体液的量为700μL。对于回收的被检体液，与实施例B1同样地进行了流感病毒的检测。确认到着色的最小的浓度(C1)为0.04倍。将浓缩率示于表2。
[比较例B4]
使用Amicon Ultra(3k(3k为3KDa，截留分子量))(Merck公司制造；UFC5003BK)浓缩了上述被检体液。如图13所示，该产品由过滤膜单元和通液回收容器构成。是在将过滤膜单元插入通液回收容器(没有过滤膜)的状态下进行离心，从过滤膜单元回收浓缩液的产品。作为回收残留在过滤膜单元中的浓缩液的方法，相对于最初的离心时，使插入回收容器的方向反向，将过滤膜单元插入通液回收容器，以低转速进行离心，由此能够回收浓缩液。
过滤膜单元中使用的过滤膜为Millipore公司制，利用低吸附再生纤维素膜，孔径虽然未记载，但由于截留分子量为3KDa，因此推测为0.05μm以下。通液回收容器存在2个，一个是回收/废弃从过滤膜单元通过的液体的容器。另一个是用于回收过滤膜单元的残留的浓缩液的容器。
向这样的产品的过滤膜单元中加入700μL的被检体液。在插入通液回收容器1中的状态下，以20分钟、4℃、8000rpm的转速进行离心。此时，370μL的液体向通液回收容器侧移动，在过滤膜单元中残留少量的液体。将通液回收容器替换为新的容器(通液回收容器2)，将超滤单元相对于最初的离心时，以插入回收容器的方向为反向插入回收容器，以2000rpm2分钟进行了离心(称为反向旋转离心)。结果，所获得的被检体液浓缩液的量为130μL。此时，浓缩所需的时间为26分钟。对于所获得的被检体液浓缩液，与实施例B1同样地进行了流感病毒的检测。确认到着色的最小的浓度(C1)为0.015倍。将浓缩率示于表2。
[比较例B5]
按照与比较例A5相同的步骤，制作出浓缩器件。
使用所获得的浓缩器件，与实施例B1同样地进行被检体液的浓缩时，注入到第1容器中的被检体液未保持在第1容器中，从排出部全部排出，回收到第2容器中。回收的被检体液为700μL。对于回收到第2容器中的被检体液，与实施例B1同样地进行了流感病毒的检测。确认到着色的最小的浓度(C1)为0.04倍。将浓缩率示于表2。
[表2]
Figure BDA0004118768230000501
表2中，“SAP溶胀率”表示所使用的高吸水性聚合物的溶胀率[g/g]。溶胀率的测定方法如上所述。
表2中，“多孔膜材质”表示所使用的多孔膜的材质，PES表示聚醚砜，CA表示乙酸纤维素，GF表示玻璃纤维，亲水性PTFE表示亲水性聚四氟乙烯，疏水性PTFE表示疏水性聚四氟乙烯，PP表示聚丙烯。
表2中，“孔径”表示所使用的多孔膜的孔径[μm]。
表2中，“表面能”表示所使用的多孔膜材料的表面能[达因/厘米]。表面能的测定方法如上所述。
表2中，“浓缩时间”表示从被检体液注入工序到回收工序所耗费的时间(分钟)。实用上，浓缩时间优选为20分钟以下。
表2中，“成为最低检测灵敏度的被检体浓度”表示上述“确认到着色的最小的浓度”。
由表2可知，在使用了作为本发明的浓缩器件的实施例B1～B8的情况下，能够在短时间(20分钟以下)内浓缩被检体液。
从实施例B1～B6的对比(仅多孔膜不同的方式彼此的对比)可知，多孔膜由具有24达因/厘米以上且75达因/厘米以下的表面能的材料形成的实施例B1～B5显示更高的浓缩率。其中，多孔膜由具有40达因/厘米以上且75达因/厘米以下的表面能的材料形成的实施例B1～B4显示进一步高的浓缩率。
并且，从实施例B1及B7～B8的对比(仅高吸水性聚合物不同的方式彼此的对比)可知，高吸水性聚合物的溶胀率为500g/g以下的实施例B1及B8显示更高的浓缩率。
另一方面，多孔膜的孔径超过10μm的比较例B1及比较例B5中，如上所述，注入的被检体液未保持在第1容器中，无法浓缩被检体液。并且，多孔膜的孔径小于0.05μm的比较例B2中，如上所述，无法回收被检体液浓缩液。并且，不具有高吸水性聚合物的比较例B3中，无法浓缩被检体液。
符号说明
1-检查用试纸条，2-不溶性载体，3-标记保持垫，4-送液用垫，6-吸收垫，7-背面粘合片，9-外壳，10-上部壳体，12-第1凸状变形部，12a-第1凸状变形部的顶部，12b-第1凸状变形部的突起部，12c-第1凸状变形部的斜面，14-第2凸状变形部，14a-第2凸状变形部的顶部，14b-第2凸状变形部的突起部，16-试样液滴加用开孔，18-观察窗，20-下部壳体，21-不溶性载体容纳部，22-吸收垫容纳部，24-第2罐容纳部，30-中间部件，32-第1罐容纳部，34-断裂部，35-流路形成部，36-流路形成部35的背面，40-第1扩增液用第1罐，41-第1扩增液，42-罐容器，43-片材部件，45-第2扩增液用第2罐，46-第2扩增液，47-罐容器，48-片材部件，100-免疫层析试剂盒，114-凸状变形部，114a-凸状变形部114的顶部，114b-凸状变形部114的突起部，200、201、202、203、204-浓缩器件，200a-微型离心过滤器，210-第1容器，211-开口部，212-排出部，220-第2容器，221-开口部，230-高吸水性聚合物，232-溶胀的高吸水性聚合物，240-被检体液，242-被检体液浓缩液，300-硝酸纤维素膜，301-金胶体保持垫，302-测试线，303-控制线，304-显色试剂固定化线。

Claims (14)

1.一种浓缩器件，其用于浓缩作为含有生物体液中所含的高分子的水溶液的被检体液，
所述浓缩器件具备容纳有高吸水性聚合物的第1容器和第2容器，
所述第1容器的一部分由排出部构成，所述排出部由孔径为0.05μm以上且10μm以下的多孔膜形成，
所述高吸水性聚合物吸收注入到所述第1容器中的所述被检体液中所含的溶液，在所述第1容器中生成作为所述被检体液的浓缩液的被检体液浓缩液，
所述第2容器回收从所述排出部排出的所述被检体液浓缩液。
2.根据权利要求1所述的浓缩器件，其中，
所述多孔膜的材质为选自由乙酸纤维素、聚醚砜、亲水性聚四氟乙烯、玻璃纤维、尼龙、聚偏二氟乙烯及聚烯烃组成的组中的至少1种。
3.根据权利要求1或2所述的浓缩器件，其中，
所述多孔膜由具有24达因/厘米以上且75达因/厘米以下的表面能的材料形成。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的浓缩器件，其中，
所述高吸水性聚合物的溶胀率大于0.2g/g且小于800g/g。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的浓缩器件，其中，
所述高吸水性聚合物是聚丙烯酸系、聚丙烯酰胺系、纤维素系或聚环氧乙烷系的聚合物。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的浓缩器件，其中，
所述生物体液中所含的高分子为抗原。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的浓缩器件，其中，
所述被检体液为尿。
8.根据权利要求7所述的浓缩器件，其中，
所述被检体液浓缩液中的尿素的浓度为所述被检体液中的尿素的浓度的5倍以下。
9.一种被检体液的浓缩方法，其使用权利要求1至8中任一项所述的浓缩器件来浓缩作为含有生物体液中所含的高分子的水溶液的被检体液，所述被检体液的浓缩方法依次包括：
被检体液注入工序，其向所述第1容器中注入所述被检体液；
吸水工序，其中，注入到所述第1容器中的被检体液中所含的溶液被容纳于所述第1容器中的高吸水性聚合物吸收，在所述第1容器中生成作为所述被检体液的浓缩液的被检体液浓缩液；
排出工序，其通过对所述被检体液浓缩液施加外力，将所述被检体液浓缩液从所述排出部排出；及
回收工序，其将从所述排出部排出的所述被检体液浓缩液回收到所述第2容器中。
10.根据权利要求9所述的被检体液的浓缩方法，其中，
所述外力为离心力。
11.根据权利要求10所述的被检体液的浓缩方法，其中，
所述离心力为在4000～10000转/分钟的条件下施加的力。
12.一种被检体液的检查方法，其检测作为含有生物体液中所含的高分子的水溶液的被检体液中的生物体液中所含的高分子，所述被检体液的检查方法依次包括：
浓缩工序，其使用权利要求9至11中任一项所述的被检体液的浓缩方法获得所述被检体液浓缩液；及
检测工序，其检测所获得的所述被检体液浓缩液中的生物体液中所含的高分子。
13.根据权利要求12所述的检查方法，其中，
所述被检体液是能够含有抗原的水溶液，
所述浓缩工序是使用权利要求9至11中任一项所述的被检体液的浓缩方法来浓缩能够含有所述抗原的水溶液而获得抗原浓缩液的工序，
所述检测工序是通过使用了抗原抗体反应的免疫层析法检测所述抗原浓缩液中的抗原的工序。
14.一种检查试剂盒，其用于检测作为含有生物体液中所含的高分子的水溶液的被检体液中的生物体液中所含的高分子，所述检查试剂盒具备：
权利要求1至8中任一项所述的浓缩器件；及
检测器件，其具备：检查用试纸条，其具有用于检测所述生物体液中所含的高分子的检查区域；第1罐及第2罐，其分别封入有用于扩增所述检查区域中的检查信号的第1扩增液及第2扩增液；及外壳，其内含所述检查用试纸条、所述第1罐及所述第2罐。
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