JP7473331B2 - 評価方法及び製造方法 - Google Patents
評価方法及び製造方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP7473331B2 JP7473331B2 JP2019226454A JP2019226454A JP7473331B2 JP 7473331 B2 JP7473331 B2 JP 7473331B2 JP 2019226454 A JP2019226454 A JP 2019226454A JP 2019226454 A JP2019226454 A JP 2019226454A JP 7473331 B2 JP7473331 B2 JP 7473331B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- gene
- hair
- component
- melanin
- expression level
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 title claims description 50
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 26
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 134
- XUMBMVFBXHLACL-UHFFFAOYSA-N Melanin Chemical compound O=C1C(=O)C(C2=CNC3=C(C(C(=O)C4=C32)=O)C)=C2C4=CNC2=C1C XUMBMVFBXHLACL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 132
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 123
- 210000004209 hair Anatomy 0.000 claims description 101
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 59
- 230000008099 melanin synthesis Effects 0.000 claims description 50
- 210000004761 scalp Anatomy 0.000 claims description 48
- 101800004490 Endothelin-1 Proteins 0.000 claims description 30
- 101150047326 mlpH gene Proteins 0.000 claims description 24
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 23
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 claims description 21
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 claims description 14
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 10
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 claims description 10
- 230000037308 hair color Effects 0.000 claims description 9
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 69
- 210000002752 melanocyte Anatomy 0.000 description 21
- 101150087532 mitF gene Proteins 0.000 description 20
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 17
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 14
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 12
- 210000002780 melanosome Anatomy 0.000 description 11
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 9
- 102100033902 Endothelin-1 Human genes 0.000 description 8
- 101000620359 Homo sapiens Melanocyte protein PMEL Proteins 0.000 description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 101150050916 DCT gene Proteins 0.000 description 7
- 101150003475 TYRP1 gene Proteins 0.000 description 7
- 210000004919 hair shaft Anatomy 0.000 description 7
- 101150022728 tyr gene Proteins 0.000 description 7
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 6
- 230000003724 hair brightness Effects 0.000 description 6
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 6
- 230000001953 sensory effect Effects 0.000 description 6
- 108700039887 Essential Genes Proteins 0.000 description 5
- 101150090249 Myo5a gene Proteins 0.000 description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 5
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000003425 Tyrosinase Human genes 0.000 description 4
- 108060008724 Tyrosinase Proteins 0.000 description 4
- 102100030310 5,6-dihydroxyindole-2-carboxylic acid oxidase Human genes 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 102100022430 Melanocyte protein PMEL Human genes 0.000 description 3
- 101710158003 Melanophilin Proteins 0.000 description 3
- 102100026158 Melanophilin Human genes 0.000 description 3
- 108010050345 Microphthalmia-Associated Transcription Factor Proteins 0.000 description 3
- 102000013760 Microphthalmia-Associated Transcription Factor Human genes 0.000 description 3
- 102000003505 Myosin Human genes 0.000 description 3
- 108060008487 Myosin Proteins 0.000 description 3
- 241000543810 Sasa veitchii Species 0.000 description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 3
- 210000002510 keratinocyte Anatomy 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 3
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 3
- 108010014402 tyrosinase-related protein-1 Proteins 0.000 description 3
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 2
- 235000021513 Cinchona Nutrition 0.000 description 2
- 241000157855 Cinchona Species 0.000 description 2
- 244000077995 Coix lacryma jobi Species 0.000 description 2
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100031413 L-dopachrome tautomerase Human genes 0.000 description 2
- 241000234435 Lilium Species 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 241000246358 Thymus Species 0.000 description 2
- 235000007303 Thymus vulgaris Nutrition 0.000 description 2
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 2
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 2
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 2
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 2
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 108010051081 dopachrome isomerase Proteins 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 2
- 239000001585 thymus vulgaris Substances 0.000 description 2
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 2
- 239000001993 wax Substances 0.000 description 2
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- 208000001382 Experimental Melanoma Diseases 0.000 description 1
- 108091006027 G proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000030782 GTP binding Human genes 0.000 description 1
- 108091000058 GTP-Binding Proteins 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101001055386 Homo sapiens Melanophilin Proteins 0.000 description 1
- 101000583031 Homo sapiens Unconventional myosin-Va Proteins 0.000 description 1
- 241001648859 Lilium candidum Species 0.000 description 1
- ACFIXJIJDZMPPO-NNYOXOHSSA-N NADPH Chemical compound C1=CCC(C(=O)N)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](O2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)O)O1 ACFIXJIJDZMPPO-NNYOXOHSSA-N 0.000 description 1
- -1 Rab27A Proteins 0.000 description 1
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 1
- 235000005158 Thymus praecox ssp. arcticus Nutrition 0.000 description 1
- 244000238515 Thymus pulegioides Species 0.000 description 1
- 235000004054 Thymus serpyllum Nutrition 0.000 description 1
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 1
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 1
- 102100030409 Unconventional myosin-Va Human genes 0.000 description 1
- 239000006096 absorbing agent Substances 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000002280 amphoteric surfactant Substances 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000003945 anionic surfactant Substances 0.000 description 1
- HZZGDPLAJHVHSP-GKHTVLBPSA-N big endothelin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O)NC(=O)[C@H]1NC(=O)[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC(=O)[C@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H]2CSSC[C@@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N2)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CSSC1)C1=CN=CN1 HZZGDPLAJHVHSP-GKHTVLBPSA-N 0.000 description 1
- 230000006315 carbonylation Effects 0.000 description 1
- 238000005810 carbonylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003093 cationic surfactant Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 229940117171 cinchona bark extract Drugs 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 239000010696 ester oil Substances 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 1
- 239000003205 fragrance Substances 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 150000002484 inorganic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 229910010272 inorganic material Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 239000006210 lotion Substances 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 239000003595 mist Substances 0.000 description 1
- 229930027945 nicotinamide-adenine dinucleotide Natural products 0.000 description 1
- 235000014593 oils and fats Nutrition 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 210000004694 pigment cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000419 plant extract Substances 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920001296 polysiloxane Polymers 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 239000003352 sequestering agent Substances 0.000 description 1
- 239000002453 shampoo Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000005846 sugar alcohols Polymers 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 238000012353 t test Methods 0.000 description 1
- 235000015961 tonic Nutrition 0.000 description 1
- 230000001256 tonic effect Effects 0.000 description 1
- 229960000716 tonics Drugs 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 1
- 239000009538 yokuinin Substances 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By Optical Means (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Cosmetics (AREA)
Description
毛髪用及び/又は頭皮用組成物に配合される成分の効能は、官能的に評価されるのが通常であるが、官能評価を用いた効能の評価が困難な場合があるため、官能評価によらない成分の評価方法が必要となる。
毛髪用及び/又は頭皮用組成物に配合される成分の評価方法であって、
評価対象の成分を添加した細胞におけるメラニン合成遺伝子及び/又はメラニン輸送遺伝子の発現量(A)、並びに、比較対象の成分を添加した細胞又は成分を添加しない細胞におけるメラニン合成遺伝子及び/又はメラニン輸送遺伝子の発現量(B)を測定し、
前記発現量(A)と前記発現量(B)とを比較することを特徴とする、
毛髪用及び/又は頭皮用組成物に配合される成分の評価方法である。
以下の記載において、本実施形態の評価方法及び製造方法を示す。
本実施形態に係る評価方法は、
毛髪用及び/又は頭皮用組成物に配合される成分の評価方法であって、
評価対象の成分を添加した細胞におけるメラニン合成遺伝子及び/又はメラニン輸送遺伝子の発現量(A)、並びに、比較対象の成分を添加した細胞又は成分を添加しない細胞におけるメラニン合成遺伝子及び/又はメラニン輸送遺伝子の発現量(B)を測定し、
前記発現量(A)と前記発現量(B)とを比較することを特徴とするものである。
なお、用語「及び/又は」は、両方又はいずれか一方を指す(以下の記載においても同様)。
本実施形態の評価方法に係る毛髪用及び/又は頭皮用組成物に配合される成分は、毛髪用及び/又は頭皮用組成物に配合可能な成分であれば、特に限定されない。そのため、上記成分として、例えば、毛髪用及び/又は頭皮用の化粧品、医薬部外品に配合可能な成分を用いることができる。
本実施形態の評価方法では、「評価対象の成分」を必須に用いるが、「比較対象の成分」は用いても良く、用いなくても良い。
「評価対象の成分」は、毛髪用及び/又は頭皮用組成物に配合可能な成分から適宜選定すればよい。「比較対象の成分」を用いる場合には、同様に毛髪用及び/又は頭皮用組成物に配合可能な成分から「比較対象の成分」を適宜選定すればよい。「評価対象の成分」又は「比較対象の成分」としては、単一の成分でもよく、2種以上の成分を含む混合物を用いても良い。
なお、後述する細胞への成分の添加を容易とする観点から、評価対象の成分及び/又は比較対象の成分を溶媒(例えば、水、有機溶媒、又はこれらの混合物等)に溶解して希釈して用いても良い。
本実施形態の評価方法では、評価対象の成分を添加した細胞におけるメラニン合成遺伝子及び/又はメラニン輸送遺伝子の発現量(A)、並びに、比較対象の成分を添加した細胞又は成分を添加しない細胞におけるメラニン合成遺伝子及び/又はメラニン輸送遺伝子の発現量(B)を測定する。
本実施形態の評価方法に係る細胞は、細胞培養が可能なメラニン合成遺伝子及び/又はメラニン輸送遺伝子を発現する細胞であれば特に限定されない。
本実施形態の評価方法に係る細胞としては、例えば、メラノサイト(色素細胞)が挙げられる。メラノサイトは、ヒト由来やその他の動物由来のものを用いることができ、入手が容易な市販のメラノサイト細胞(例えば、正常ヒト表皮メラノサイト細胞、マウスB16メラノーマ細胞等)を用いることができる。
本実施形態の評価方法に係る「比較対象の成分を添加した細胞」とは、選定した比較対象の成分を添加した細胞を意味する。添加方法は、適宜設定すればよく、培養細胞の培養液に比較対象の成分を所定濃度となるように添加してから数時間(例えば、3~48時間)経過させたものとしても良い。
本実施形態の評価方法に係る「成分を添加しない細胞」とは、成分(評価対象の成分及び比較対象の成分を含む)を添加しない細胞を意味する。
本実施形態の評価方法に係る細胞におけるメラニン合成遺伝子及び/又はメラニン輸送遺伝子の発現量は、細胞におけるメラニン合成遺伝子及び/又はメラニン輸送遺伝子の発現量が測定可能な公知の方法により、適宜測定すればよい。
細胞におけるメラニン合成遺伝子及び/又はメラニン輸送遺伝子の発現量を測定する方法の具体例としては、例えば、評価対象の成分を添加した細胞、及び比較対象の成分を添加した細胞又は成分を添加しない細胞を、それぞれ、5%CO2下の37℃で約3~48時間培養する。その後、各細胞からmRNAを抽出し、メラニン合成遺伝子及び/又はメラニン輸送遺伝子、及び内部標準とするハウスキーピング遺伝子(例えば、β-Actin遺伝子、NADPH遺伝子等)の発現量を、各遺伝子を特異的に検出するプライマーを用いたq-PCRにより、定量的に測定を行う。なお、メラニン合成遺伝子及び/又はメラニン輸送遺伝子の発現量としては、PCR産物間での各遺伝子発現量を標準化する観点から、ハウスキーピング遺伝子の発現量に対するメラニン合成遺伝子及び/又はメラニン輸送遺伝子の発現量の比を算出した値(ハウスキーピング遺伝子の比(例えば、β-Actin比等))を採用すると良い。
当該測定の結果から、評価対象の成分を添加した細胞におけるメラニン合成遺伝子及び/又はメラニン輸送遺伝子の発現量(A)と、比較対象の成分を添加した細胞又は成分を添加しない細胞におけるメラニン合成遺伝子及び/又はメラニン輸送遺伝子の発現量(B)を得ることができる。
なお、「評価対象の成分を添加した細胞」と、「比較対象の成分を添加した細胞」又は「成分を添加しない細胞」との、後述するメラニン合成遺伝子及び/又はメラニン輸送遺伝子の発現量の比較をより適切なものとする観点から、添加条件(例えば、添加方法及び添加後の細胞培養時間等)は、同様の条件で行うことが好ましい。
本実施形態の評価方法に係るメラニン合成遺伝子は、細胞においてメラニンの合成に関与する遺伝子を意味する。メラニン合成遺伝子としては、例えば、TYR遺伝子、DCT遺伝子、TYRP1遺伝子、MITF遺伝子、Pmel17遺伝子、及びpreproendothelin1遺伝子等が挙げられる。
本実施形態の評価方法におけるメラニン合成遺伝子は、TYR遺伝子、DCT遺伝子、TYRP1遺伝子、MITF遺伝子、Pmel17遺伝子、及びpreproendothelin1遺伝子から選ばれる1種又は2種以上とすることができる。
DCT遺伝子は、ドーパクロムトートメラーゼ(dopachrome tautomerase)をコードする遺伝子である。ドーパクロムトートメラーゼは、メラニン色素産生に関わる酵素である。
TYRP1遺伝子は、チロシナーゼの活性をサポートする役割があるチロシナーゼ関連タンパク質1(TYROSINASE related protein 1)をコードする遺伝子である。チロシナーゼ関連タンパク質1は、チロシナーゼの活性をサポートする役割があり、メラニン色素産生に関わるものである。
毛根部に存在するメラノサイトにおいて、TYR遺伝子、DCT遺伝子、又はTYRP1遺伝子の発現量が増加すれば、細胞内のメラニン色素産生を促進するチロシナーゼ、ドーパクロムトートメラーゼ、又はチロシナーゼ関連タンパク質1が増加することで、メラノサイトにおけるメラニン色素の産生が促進されて、毛幹に供給されるメラニン量が増加するため、毛髪の明度低下に寄与すると考えられる。
毛根部に存在するメラノサイトにおいて、MITF遺伝子の発現量が増加すれば、TYR遺伝子、DCT遺伝子、TYRP1遺伝子の発現量が増加する結果、メラノサイトにおけるメラニン色素の産生が促進されて、毛幹に供給されるメラニン量が増加するため、毛髪の明度低下に寄与すると考えられる。
毛根部に存在するメラノサイトにおいて、Pmel17遺伝子の発現量が増加すれば、Pmel17の発現が増加する結果、メラノソームの成熟が促進されてメラノソームにおけるメラニン色素の貯蔵量が増加することで、毛幹に供給されるメラニン量が増加し、毛髪の明度低下に寄与すると考えられる。
毛根部に存在するケラチノサイトにおいて、preproendothelin1遺伝子の発現量が増加すれば、プレプロエンドセリン1の発現が増加する結果、メラノサイトの増殖が促進され、毛幹に供給されるメラニン量が増加するため、毛髪の明度低下に寄与すると考えられる。
本実施形態の評価方法におけるメラニン輸送遺伝子は、細胞においてメラニンの輸送に関与する遺伝子を意味する。メラニン輸送遺伝子としては、例えば、Rab27A遺伝子、MYO5A遺伝子、MLPH遺伝子、及びSlp2-a遺伝子等が挙げられる。
本実施形態の評価方法におけるメラニン輸送遺伝子は、Rab27A遺伝子、MYO5A遺伝子、MLPH遺伝子、及びSlp2-a遺伝子から選ばれる1種又は2種以上とすることができる。
MYO5A遺伝子は、ミオシンVa(myosin VA)をコードする遺伝子である。ミオシンVaは、アクチン依存性のモータータンパク質である。
MLPH遺伝子は、メラノフィリン(Melanophilin)をコードする遺伝子である。メラノフィリンは、Rabタンパク質のエフェクタータンパク質であり、メラノフィリン、Rab27A、及びミオシンVaと三者複合体を形成することで、メラノソームの輸送を促進する。
毛根部に存在するメラノサイトにおいて、Rab27A遺伝子、MYO5A遺伝子、又はMLPH遺伝子の発現量が増加すれば、Rab27A、ミオシンVa、又はメラノフィリンの発現が増加するため、メラノサイトにおけるメラソームの輸送が促進されることで、毛幹に供給されるメラニン量が増加し、毛髪の明度低下に寄与すると考えられる。
人の毛根部に存在するメラノサイトにおいてSlp2-a遺伝子の発現量が増加すれば、ケラチノサイトや毛母細胞へのメラノソームの受け渡しが促進されて、毛幹に供給されるメラニン量が増加するため、毛髪の明度低下に寄与すると考えられる。
「前記発現量(A)と前記発現量(B)とを比較する」とは、比較対象の成分を添加した細胞又は成分を添加しない細胞におけるメラニン合成遺伝子及び/又はメラニン輸送遺伝子の発現量(B)を基準として、評価対象の成分を添加した細胞におけるメラニン合成遺伝子及び/又はメラニン輸送遺伝子の発現量(A)を比較することを意味する。
また、上記比較において、発現量(A)が発現量(B)に比べて増加していた場合には、評価対象の成分は、メラニン合成遺伝子及び/又はメラニン輸送遺伝子の発現を促進する作用を有すると評価可能である。なお、発現量(A)が、比較対象の成分を添加した細胞の発現量(B)に比べて増加していた場合には、評価対象の成分は比較成分よりも、メラニン合成遺伝子及び/又はメラニン輸送遺伝子の発現を促進する作用を有すると評価可能である。
上記比較において、例えば、発現量(B)に対する発現量(A)の割合(%)が105%以上(より好ましくは110%以上)であれば、評価対象の成分は、メラニン合成遺伝子及び/又はメラニン輸送遺伝子の発現を促進する作用を有すると評価できる。なお、発現量(A)が、比較対象の成分を添加した細胞の発現量(B)に比べて増加していた場合には、評価対象の成分は比較成分よりも、メラニン合成遺伝子及び/又はメラニン輸送遺伝子の発現を促進する作用を有すると評価可能である。
本実施形態の製造方法は、本実施形態の評価方法によって評価された成分を配合する毛髪用及び/又は頭皮用組成物の製造方法である。
本実施形態の製造方法に係る毛髪用及び/又は頭皮用組成物は、毛髪用組成物、頭皮用組成物、又は、毛髪及び頭皮に用いる組成物を意味する。毛髪用組成物とは、毛髪に用いられる組成物を意味する。頭皮用組成物とは、頭皮に用いられる組成物を意味する。
本実施形態の製造方法に係る毛髪用及び/又は頭皮用組成物の具体例としては、例えば、毛髪用及び頭皮用として使用可能なヘアトニック、ヘアクリーム、シャンプー、リンス、コンディショナー、ヘアトリートメント、整髪料等が挙げられる。
本実施形態の製造方法に係る毛髪用及び/又は頭皮用組成物の剤型は、特に限定されず、例えば、液状、乳液状、ローション状、クリーム状、ワックス状、ゲル状、固形状、フォーム状(泡状)、霧状、粉末状等が挙げられる。
本実施形態の製造方法に係る毛髪用及び/又は頭皮用組成物は、例えば、次の<1>、<2>工程により製造できる。
<1>本実施形態の評価方法を用いて、成分の評価を行う工程。
<2>上記<1>によって評価された成分及び必要に応じてその他の任意成分を配合して、毛髪用及び/又は頭皮用組成物における公知の製造方法を適宜採用して、毛髪用及び/又は頭皮用組成物を製造する工程。
本実施形態に係る製造方法で製造された毛髪用及び/又は頭皮用組成物は、公知の毛髪用及び/又は頭皮用組成物の使用方法で使用することができる。
ヘルシンキ宣言に則り、倫理委員会の承認を得た同意書に同意した25~64歳の日本人女性の29名(20歳代:1名、30歳代:5名、40歳代:13名、50歳代:9名、60代歳:1名、29名の平均年齢45.1歳)から、5本ずつ白髪の毛髪を抜去した。抜去した毛髪の根元から約0.2~0.4mmまでの長さの毛根部を、光学顕微鏡を用いて400倍に拡大して観察した後、拡大した毛根部の観察像を写真撮影し、毛根部の画像データを得た。続いて、画像解析ソフトウェア(WinROOF2015)を用いて、上記画像データから、根元から約0.2~0.4mmまでの長さの毛根部の平均明度を画像解析した。そして、抜去した毛髪のうち、毛根部の平均明度が75以上100未満のものを「色調が濃い群」、毛根部の平均明度が100以上のものを「色調が薄い群」として選別した。
なお、MITF遺伝子、preproendothelin1遺伝子、及びMLPH遺伝子の各発現量は、次の計算式に従い、β-Actin遺伝子の発現量を1とした場合の各遺伝子の発現量の比によって求めた。
各遺伝子の発現量(β-Actin比)=(各遺伝子の発現量)/(β-Actin遺伝子の発現量)
・MITF遺伝子の発現量測定に用いたプライマー
フォワード:5'-CAGGTGCCGATGGAAGTC-3' (配列番号1)
リバース :5'-TGCTAAAGTGGTAGAAAGGTACTGC-3' (配列番号2)
・preproendothelin1遺伝子の発現量測定に用いたプライマー
フォワード:5'-TCTCTGCTGTTTGTGGCTTG-3' (配列番号3)
リバース :5'-GAGCTCAGCGCCTAAGACTG-3' (配列番号4)
・MLPH遺伝子の発現量測定に用いたプライマー
フォワード:5'-GATGGAGAACCTGGCTCAGA-3' (配列番号5)
リバース :5'-GGAGAGGAGGCGCTTTTT-3' (配列番号6)
・β-Actin遺伝子の発現量測定に用いたプライマー
フォワード:5'-TGGCACCCAGCACAATGAA-3' (配列番号7)
リバース :5'-CTAAGTCATAGTCCGCCTAGAAGCA-3' (配列番号8)
なお、表1中の色調が濃い群と色調が薄い群の1段目の数字は各遺伝子の発現量(β-actin比)の平均値を表し、2段目のNの数字は測定数を表す。
図1中における、**はp<0.01、*はp<0.05であることを表す(t検定)。
このことから、色調が濃い群の毛髪と色調が薄い群の毛髪とは、メラニン合成又はメラニン輸送に関与する遺伝子の発現に違いがあり、色調が濃い群の毛髪は色調が薄い群の毛髪に比べて、メラニン合成又はメラニン輸送に関与する遺伝子(MITF遺伝子、preproendothelin1遺伝子、MLPH遺伝子)の発現が高くなっていることが理解できる。
次に、表1及び図1の結果から、色調が濃い群の毛髪と色調が薄い群の毛髪で違いがあったメラニン合成遺伝子又はメラニン輸送遺伝子の発現について、メラノサイトを用いた評価方法を行った。当該評価方法は、次に示す[1]~[4]の手順により行った。
[2]培養開始から24時間経過後、試験品1としてクマザサエキス(クマザサ葉エキス1質量%、エタノール49.5質量%、水49.5質量%)を50ppm、試験品2としてキナエキス(キナノキ樹皮エキス1.6質量%、BG48.5質量%、水48.5質量%)を50ppm、試験品3としてタイムエキス(ワイルドタイムエキス0.5質量%、BG49.75質量%、水49.75質量%)を25ppm、試験品4としてヨクイニンエキス(ハトムギ種子エキス0.3質量%、BG49.85質量%、水49.85質量%)を50ppm、又は試験品5としてユリエキス(マドンナリリー根エキス1.36質量%、BG49.32質量%、水49.32質量%)を100ppmの濃度(各培養液におけるppm濃度)となるように、各試験品を各ウェルの培地中に添加した。また、各試験品1~5のコントロールとして、エタノール25%、BG25%、水50%の水溶液を25ppm(比較品1)、50ppm(比較品2)、又は100ppm(比較品3)の濃度となるように別々のウェルの培地中に添加した。各試料の添加後、37℃、5%CO2下で24時間培養した。なお、試験品1、2、4のコントロールは比較品2、試験品3のコントロールは比較品1、試験品5のコントロールは比較品3をそれぞれ用いた。
[3]試料添加から24時間経過後、D-PBS(-)を用いて各ウェルを洗浄し、トリプシン/EDTA水溶液(トリプシン 0.025質量%、EDTA 0.01質量%の水溶液)で各々の試料で処理した細胞を回収した。回収した細胞から、Maxwell RSC simplyRNA Cells Kit(プロメガ社製)を用いて、各細胞のTotal RNAの抽出を行った。
[4]抽出したTotal RNAを、GoScript Reverse Transcription System(プロメガ社製)を用いて、cDNAに逆転写した。得られた各cDNAを用いてリアルタイムPCR(Roche社製のLightCycler96)により、MITF、preproendothelin1、及びMLPHの各遺伝子、並びにハウスキーピング遺伝子のβ-Actin遺伝子を内部標準として、各mRNAの発現量を測定した。測定に用いたプライマーは、上記の「毛根部の遺伝子発現」の解析と同じものを用いた(発現量測定に用いたプライマー:MITF遺伝子(配列番号1、2)、preproendothelin1遺伝子(配列番号3、4)、MLPH遺伝子(配列番号5、6)、β-Actin遺伝子(配列番号7、8))。
なお、試験品1~5、比較品1~3におけるMITF遺伝子、preproendothelin1遺伝子、及びMLPH遺伝子の各発現量は、β-Actin遺伝子の発現量を1とした場合の各遺伝子の発現量の比を求めた後、下記計算式によって算出した。
発現量(%)=(発現量(A):試験品1~5のいずれかを添加したものの各遺伝子の発現量(β-Actin比))/(発現量(B):コントロールの比較品1~3のいずれかを添加した場合の各遺伝子の発現量(β-Actin比))×100
成分の評価結果を表2に示す。
また、試験品4(ヨクイニンエキス)を細胞に添加したものは、比較品2を添加したものに比べて、MITF遺伝子の発現量は減少するものの、preproendothelin1遺伝子、及びMLPH遺伝子の発現量が増加した。試験品5(ユリエキス)は、比較品3を添加したものに比べて、MITF遺伝子、preproendothelin1遺伝子、及びMLPH遺伝子の発現量が減少した。
これらの結果から、メラニン合成遺伝子及び/又はメラニン輸送遺伝子の発現量を用いて、成分の評価が可能であることがわかる。
Claims (4)
- 毛髪用組成物、又は毛髪及び頭皮用組成物に配合される評価対象の成分の評価方法であって、
評価対象の成分を添加した細胞におけるメラニン合成遺伝子及び/又はメラニン輸送遺伝子の発現量(A)、並びに、比較対象の成分を添加した細胞におけるメラニン合成遺伝子及び/又はメラニン輸送遺伝子の発現量(B)を測定し、
前記メラニン合成遺伝子が、preproendothelin1遺伝子であり、
前記メラニン輸送遺伝子が、MLPH遺伝子であり、
前記発現量(A)と前記発現量(B)とを比較し、
前記発現量(A)が前記発現量(B)に比べて増加していた場合には、評価対象の成分は比較対象の成分よりも、preproendothelin1遺伝子及び/又はMLPH遺伝子の発現を促進する作用を有すると評価することを特徴とする、
毛髪用組成物、又は毛髪及び頭皮用組成物に配合される評価対象の成分の評価方法。 - 毛髪用組成物、又は毛髪及び頭皮用組成物に配合される評価対象の成分の評価方法であって、
評価対象の成分を添加した細胞におけるメラニン合成遺伝子及び/又はメラニン輸送遺伝子の発現量(A)、並びに、比較対象の成分を添加しない細胞におけるメラニン合成遺伝子及び/又はメラニン輸送遺伝子の発現量(B)を測定し、
前記メラニン合成遺伝子が、preproendothelin1遺伝子であり、
前記メラニン輸送遺伝子が、MLPH遺伝子であり、
前記発現量(A)と前記発現量(B)とを比較し、
前記発現量(A)が前記発現量(B)に比べて増加していた場合には、評価対象の成分は、preproendothelin1遺伝子及び/又はMLPH遺伝子の発現を促進する作用を有すると評価することを特徴とする、
毛髪用組成物、又は毛髪及び頭皮用組成物に配合される評価対象の成分の評価方法。 - 前記評価方法が、毛髪の色調変化を抑制する成分を判別するための評価方法である請求項1又は2に記載の評価方法。
- 請求項1~3のいずれか1項に記載の評価方法により評価対象の成分を評価する工程と、
前記工程により評価された評価対象の成分を配合し、毛髪用組成物、又は毛髪及び頭皮用組成物を製造する工程とを備える、
毛髪用組成物、又は毛髪及び頭皮用組成物の製造方法。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2019128825 | 2019-07-10 | ||
JP2019128825 | 2019-07-10 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2021013372A JP2021013372A (ja) | 2021-02-12 |
JP7473331B2 true JP7473331B2 (ja) | 2024-04-23 |
Family
ID=74530874
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2019226454A Active JP7473331B2 (ja) | 2019-07-10 | 2019-12-16 | 評価方法及び製造方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP7473331B2 (ja) |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2012060323A1 (ja) | 2010-11-01 | 2012-05-10 | 花王株式会社 | 皮膚及び毛髪色制御因子 |
JP2013010693A (ja) | 2011-06-28 | 2013-01-17 | Nicca Chemical Co Ltd | Mitf−m産生促進剤、及び該mitf−m産生促進剤を含有する毛髪用化粧料組成物並びに皮膚用化粧料組成物 |
JP2019031482A (ja) | 2017-08-04 | 2019-02-28 | 大正製薬株式会社 | 色素細胞活性化剤、scf産生促進剤及びvegf産生促進剤 |
-
2019
- 2019-12-16 JP JP2019226454A patent/JP7473331B2/ja active Active
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2012060323A1 (ja) | 2010-11-01 | 2012-05-10 | 花王株式会社 | 皮膚及び毛髪色制御因子 |
JP2013010693A (ja) | 2011-06-28 | 2013-01-17 | Nicca Chemical Co Ltd | Mitf−m産生促進剤、及び該mitf−m産生促進剤を含有する毛髪用化粧料組成物並びに皮膚用化粧料組成物 |
JP2019031482A (ja) | 2017-08-04 | 2019-02-28 | 大正製薬株式会社 | 色素細胞活性化剤、scf産生促進剤及びvegf産生促進剤 |
Non-Patent Citations (8)
Title |
---|
Adila Tuerxuntayi et al.,Kaliziri extract upregulates tyrosinase, TRP-1, TRP-2 and MITF expression in murine B16 melanoma cells,BMC Complementary and Alternative Medicine,2014年,Vol.14,p.1-9 |
HIDA T. et al.,Rab7 is a critical mediator in vesicular transport of tyrosinase-related protein 1 in melanocytes,Journal of Dematology,2011年,Vol.38,p.432-441 |
Nguyen Dinh Thang et al.,Polygonum multiflorum root extract as a potential candidate for treatment of early graying hair,Journal of Advanced Pharmaceutical Technology & Research,2017年,Vol.8, Issue 1,p.8-13 |
Susumu TAKEKOSHI et al.,Flavonoids Enhance Melanogenesis in Human Melanoma Cells,Tokai J Exp Clin Med,2014年,Vol.39, No.3,p.116-121 |
Tomohiro ITOH et al.,Hot-Water Extracts from Adzuki Beans (Vigna angularis) Stimulate Not Only Melanogenesis in Cultured Mouse B16 Melanoma Cells but Also Pigmentation of Hair Color in C3H Mice,Biosci. Biotechnol. Biochem.,2005年,Vol.69, No.5,p.873-882 |
YAMAGUCHI Y. et al,Physiological factors that regulate skin pigmentation,Biofactors. Author manuscript,2010年03月01日,Vol.35, No.2,p.193-199 |
武田俊祐、出田立郎,白髪化のメカニズムとその制御成分の開発,FRAGRANCE JOURNAL,2004年,p.40-45 |
田口暢彦、畑俊宏,白髪改善・白髪防止剤の開発,FRAGRANCE JOURNAL,2017年,p.38-45 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP2021013372A (ja) | 2021-02-12 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
KR101873440B1 (ko) | 표피 분화 마이크로rna 표지 및 이의 용도 | |
JP6584494B2 (ja) | メラニン産生細胞のhmgb1活性化を阻害する方法、そのような阻害に好適な薬剤を特定する方法 | |
Zauner et al. | Differential regulation of msx genes in the development of the gonopodium, an intromittent organ, and of the “sword,” a sexually selected trait of swordtail fishes (Xiphophorus) | |
US11241469B2 (en) | Active ingredient obtained from Calendula officinalis and use in the prevention and treatment of cutaneous manifestations due to an imbalance in the epigenome in skin cells | |
JP7473331B2 (ja) | 評価方法及び製造方法 | |
JP2012531185A (ja) | Aff‐4を指標とした抗白髪剤のスクリーニング方法 | |
JP2014207874A (ja) | 肌の色調改善剤のスクリーニング法 | |
JP6833193B2 (ja) | 色素幹細胞の分化抑制剤、白髪予防剤、及び白髪評価方法 | |
JP2005110505A (ja) | しみ部位亢進遺伝子群を指標とした皮膚しみ形成予知方法、皮膚しみ形成抑制剤のスクリーニング方法 | |
WO2011154402A1 (en) | Inhibitors of micro-rnas for use for preventing and/or attenuating skin ageing and/or for hydrating skin | |
JP2010081913A (ja) | シミ改善効果及び/または美白効果を発揮する有効成分のスクリーニング方法 | |
JP5847090B2 (ja) | 皮膚のバリア機能を改善するためのcertの発現を刺激する活性薬剤をスクリーニングするための方法 | |
DE102006042244A1 (de) | Verfahren zur molekularen Charakterisierung von Altershaar | |
EP3302716B1 (en) | Methods for identifying circadian rhythm-dependent cosmetic agents for skin care compositions | |
WO2008074595A1 (de) | Verfahren zur molekularen charakterisierung von ergrautem und pigmentiertem haar | |
US20220146497A1 (en) | Method of Modulating a Fibrotic Condition | |
EP3455370B1 (en) | Method of identifying cosmetic agents for moisturizing skin | |
JP5654808B2 (ja) | 毛成長制御剤の評価又は選択方法 | |
JP2006223144A (ja) | プロスタグランジンfシンターゼ及び/又はカルボニルリダクターゼ−1を指標とした育毛剤のスクリーニング方法 | |
JP2023522061A (ja) | 毛包の表現型を決定する方法 | |
JP6678231B2 (ja) | 皮膚バリア機能を改善するため、ならびに/または皮膚の老化を予防および/もしくは軽減するため、ならびに/または皮膚を保湿するのに使用するためのuc.291の活性化因子 | |
EP3763355A1 (fr) | Composition comprenant des polyphénols de graines de passiflore, des peptides d'avocat et un extrait d'hamamélis et utilisation pour traiter et/ou prévenir les vergetures | |
JP2006262841A (ja) | ケミカルピーリング剤の評価方法 | |
WO2010043718A1 (fr) | Signature génique représentative de l'effet de la dhea sur la peau | |
Class et al. | Patent application title: INHIBITORS OF MICRO-RNAS FOR USE FOR PREVENTING AND/OR ATTENUATING SKIN AGEING AND/OR FOR HYDRATING SKIN Inventors: Eleonora Candi (Rome, IT) Gennaro Melino (Rome, IT) Gaelle Saintigny (Paris, FR) Gaelle Saintigny (Paris, FR) Christian Mahe (Neuilly Sur Seine, FR) Assignees: CHANEL PARFUMS BEAUTE |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20221214 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20231020 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20231107 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20231225 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20240116 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20240315 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20240402 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20240411 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7473331 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |