JP7448831B2 - アルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の診断を補助する方法、バイオマーカー、試薬キット及び装置 - Google Patents
アルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の診断を補助する方法、バイオマーカー、試薬キット及び装置 Download PDFInfo
- Publication number
- JP7448831B2 JP7448831B2 JP2021561585A JP2021561585A JP7448831B2 JP 7448831 B2 JP7448831 B2 JP 7448831B2 JP 2021561585 A JP2021561585 A JP 2021561585A JP 2021561585 A JP2021561585 A JP 2021561585A JP 7448831 B2 JP7448831 B2 JP 7448831B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- amount
- extracellular vesicles
- complex
- tetraspanin
- antibody
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 title claims description 552
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 429
- 208000010877 cognitive disease Diseases 0.000 title claims description 355
- 208000027061 mild cognitive impairment Diseases 0.000 title claims description 354
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 title claims description 152
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 title claims description 146
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 title claims description 40
- 108700031126 Tetraspanins Proteins 0.000 claims description 469
- 102000043977 Tetraspanins Human genes 0.000 claims description 469
- TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoserine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@H](N)C(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 0.000 claims description 423
- ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylserin Natural products OC(=O)C(N)COP(O)(=O)OCC(O)CO ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 421
- 206010012289 Dementia Diseases 0.000 claims description 340
- 102100037904 CD9 antigen Human genes 0.000 claims description 319
- 101000738354 Homo sapiens CD9 antigen Proteins 0.000 claims description 297
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims description 210
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 claims description 183
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 89
- 230000009918 complex formation Effects 0.000 claims description 40
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 claims description 39
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 claims description 35
- 101100369802 Caenorhabditis elegans tim-1 gene Proteins 0.000 claims description 34
- 102100025222 CD63 antigen Human genes 0.000 claims description 23
- 101000934368 Homo sapiens CD63 antigen Proteins 0.000 claims description 23
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 17
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 17
- 101000914479 Homo sapiens CD81 antigen Proteins 0.000 claims description 11
- 102100027221 CD81 antigen Human genes 0.000 claims description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 606
- XVKFXTJLVSDWCE-UHFFFAOYSA-N 5-[(6-chloro-2-oxo-3h-indol-1-yl)methyl]-1,3-benzodioxole-4-carboxylic acid Chemical compound O=C1CC2=CC=C(Cl)C=C2N1CC1=CC=C2OCOC2=C1C(=O)O XVKFXTJLVSDWCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 296
- 108010064539 amyloid beta-protein (1-42) Proteins 0.000 description 156
- 108010064397 amyloid beta-protein (1-40) Proteins 0.000 description 154
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 151
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 90
- 210000001808 exosome Anatomy 0.000 description 85
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 76
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 74
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 74
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 69
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 58
- 108010090849 Amyloid beta-Peptides Proteins 0.000 description 54
- 102000013455 Amyloid beta-Peptides Human genes 0.000 description 54
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 54
- 210000004897 n-terminal region Anatomy 0.000 description 48
- 230000008859 change Effects 0.000 description 46
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 45
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 45
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 45
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 41
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 41
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 38
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 34
- 239000000047 product Substances 0.000 description 32
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 30
- 238000003118 sandwich ELISA Methods 0.000 description 30
- 150000001615 biotins Chemical class 0.000 description 29
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 29
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 28
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 28
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 25
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 25
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 22
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 21
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 20
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 19
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 19
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 19
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 17
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 14
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 14
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 13
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 13
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 13
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 12
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 12
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 12
- 238000012767 chemiluminescent enzyme immunoassay Methods 0.000 description 11
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 10
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 10
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 10
- -1 oxyl groups Chemical group 0.000 description 10
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 9
- 238000005251 capillar electrophoresis Methods 0.000 description 9
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 9
- 239000012898 sample dilution Substances 0.000 description 9
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 8
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 8
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 8
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 7
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 7
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 7
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 7
- 238000011984 electrochemiluminescence immunoassay Methods 0.000 description 7
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 7
- 229940126619 mouse monoclonal antibody Drugs 0.000 description 7
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 7
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 7
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 7
- 108010026424 tau Proteins Proteins 0.000 description 7
- 102000013498 tau Proteins Human genes 0.000 description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 7
- 101001033280 Homo sapiens Cytokine receptor common subunit beta Proteins 0.000 description 6
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102000055647 human CSF2RB Human genes 0.000 description 6
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 6
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 6
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 6
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 6
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 5
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 5
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 5
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 5
- 230000009878 intermolecular interaction Effects 0.000 description 5
- 238000002493 microarray Methods 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 5
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 5
- 239000011535 reaction buffer Substances 0.000 description 5
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 5
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 5
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 5
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 5
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 5
- HSHNITRMYYLLCV-UHFFFAOYSA-N 4-methylumbelliferone Chemical compound C1=C(O)C=CC2=C1OC(=O)C=C2C HSHNITRMYYLLCV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 4
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 4
- MWPLVEDNUUSJAV-UHFFFAOYSA-N anthracene Chemical compound C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3C=C21 MWPLVEDNUUSJAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 4
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 4
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 4
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 4
- 125000001095 phosphatidyl group Chemical group 0.000 description 4
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 4
- UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine Chemical compound CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1 UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000232 Lipid Bilayer Substances 0.000 description 3
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 3
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 3
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 3
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 3
- 238000011325 biochemical measurement Methods 0.000 description 3
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 3
- 238000001085 differential centrifugation Methods 0.000 description 3
- 239000012470 diluted sample Substances 0.000 description 3
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 3
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 3
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 3
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 3
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 3
- 239000013610 patient sample Substances 0.000 description 3
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 239000012089 stop solution Substances 0.000 description 3
- 239000003656 tris buffered saline Substances 0.000 description 3
- KJCVRFUGPWSIIH-UHFFFAOYSA-N 1-naphthol Chemical compound C1=CC=C2C(O)=CC=CC2=C1 KJCVRFUGPWSIIH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KZMAWJRXKGLWGS-UHFFFAOYSA-N 2-chloro-n-[4-(4-methoxyphenyl)-1,3-thiazol-2-yl]-n-(3-methoxypropyl)acetamide Chemical compound S1C(N(C(=O)CCl)CCCOC)=NC(C=2C=CC(OC)=CC=2)=C1 KZMAWJRXKGLWGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XUXUHDYTLNCYQQ-UHFFFAOYSA-N 4-amino-TEMPO Chemical group CC1(C)CC(N)CC(C)(C)N1[O] XUXUHDYTLNCYQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 2
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 2
- 102100035893 CD151 antigen Human genes 0.000 description 2
- IGXWBGJHJZYPQS-SSDOTTSWSA-N D-Luciferin Chemical compound OC(=O)[C@H]1CSC(C=2SC3=CC=C(O)C=C3N=2)=N1 IGXWBGJHJZYPQS-SSDOTTSWSA-N 0.000 description 2
- CYCGRDQQIOGCKX-UHFFFAOYSA-N Dehydro-luciferin Natural products OC(=O)C1=CSC(C=2SC3=CC(O)=CC=C3N=2)=N1 CYCGRDQQIOGCKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010067889 Dementia with Lewy bodies Diseases 0.000 description 2
- 241001203952 Feia Species 0.000 description 2
- BJGNCJDXODQBOB-UHFFFAOYSA-N Fivefly Luciferin Natural products OC(=O)C1CSC(C=2SC3=CC(O)=CC=C3N=2)=N1 BJGNCJDXODQBOB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000002339 Frontotemporal Lobar Degeneration Diseases 0.000 description 2
- 201000011240 Frontotemporal dementia Diseases 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 101000946874 Homo sapiens CD151 antigen Proteins 0.000 description 2
- 201000002832 Lewy body dementia Diseases 0.000 description 2
- DDWFXDSYGUXRAY-UHFFFAOYSA-N Luciferin Natural products CCc1c(C)c(CC2NC(=O)C(=C2C=C)C)[nH]c1Cc3[nH]c4C(=C5/NC(CC(=O)O)C(C)C5CC(=O)O)CC(=O)c4c3C DDWFXDSYGUXRAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NIPNSKYNPDTRPC-UHFFFAOYSA-N N-[2-oxo-2-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)ethyl]-2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidine-5-carboxamide Chemical compound O=C(CNC(=O)C=1C=NC(=NC=1)NCC1=CC(=CC=C1)OC(F)(F)F)N1CC2=C(CC1)NN=N2 NIPNSKYNPDTRPC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920002845 Poly(methacrylic acid) Polymers 0.000 description 2
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 2
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920002125 Sokalan® Polymers 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- ZMZDMBWJUHKJPS-UHFFFAOYSA-M Thiocyanate anion Chemical compound [S-]C#N ZMZDMBWJUHKJPS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 201000004810 Vascular dementia Diseases 0.000 description 2
- 235000010724 Wisteria floribunda Nutrition 0.000 description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 2
- PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N aluminium oxide Inorganic materials [O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3] PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FEWOUVRMGWFWIH-ILZZQXMPSA-N amyloid-beta polypeptide 40 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O)[C@@H](C)CC)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C(C)C)C(C)C)C1=CC=CC=C1 FEWOUVRMGWFWIH-ILZZQXMPSA-N 0.000 description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 2
- 239000000919 ceramic Substances 0.000 description 2
- 230000005465 channeling Effects 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 230000003920 cognitive function Effects 0.000 description 2
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000005337 ground glass Substances 0.000 description 2
- ZMZDMBWJUHKJPS-UHFFFAOYSA-N hydrogen thiocyanate Natural products SC#N ZMZDMBWJUHKJPS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000003317 immunochromatography Methods 0.000 description 2
- 229910010272 inorganic material Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011147 inorganic material Substances 0.000 description 2
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 2
- HWYHZTIRURJOHG-UHFFFAOYSA-N luminol Chemical compound O=C1NNC(=O)C2=C1C(N)=CC=C2 HWYHZTIRURJOHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002826 magnetic-activated cell sorting Methods 0.000 description 2
- 229910044991 metal oxide Inorganic materials 0.000 description 2
- 150000004706 metal oxides Chemical class 0.000 description 2
- 108010029942 microperoxidase Proteins 0.000 description 2
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 2
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 229920002454 poly(glycidyl methacrylate) polymer Polymers 0.000 description 2
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 2
- 239000004584 polyacrylic acid Substances 0.000 description 2
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 2
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 2
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 2
- 229920000915 polyvinyl chloride Polymers 0.000 description 2
- 239000004800 polyvinyl chloride Substances 0.000 description 2
- 239000005373 porous glass Substances 0.000 description 2
- 239000002096 quantum dot Substances 0.000 description 2
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000003303 ruthenium Chemical class 0.000 description 2
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 2
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 2
- 229920002050 silicone resin Polymers 0.000 description 2
- 229920002379 silicone rubber Polymers 0.000 description 2
- 239000004945 silicone rubber Substances 0.000 description 2
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 229920001059 synthetic polymer Polymers 0.000 description 2
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 2
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 2
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 2
- AUTOLBMXDDTRRT-JGVFFNPUSA-N (4R,5S)-dethiobiotin Chemical compound C[C@@H]1NC(=O)N[C@@H]1CCCCCC(O)=O AUTOLBMXDDTRRT-JGVFFNPUSA-N 0.000 description 1
- DEQPBRIACBATHE-FXQIFTODSA-N 5-[(3as,4s,6ar)-2-oxo-1,3,3a,4,6,6a-hexahydrothieno[3,4-d]imidazol-4-yl]-2-iminopentanoic acid Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCC(=N)C(=O)O)SC[C@@H]21 DEQPBRIACBATHE-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- 208000037259 Amyloid Plaque Diseases 0.000 description 1
- 108090000672 Annexin A5 Proteins 0.000 description 1
- 102000004121 Annexin A5 Human genes 0.000 description 1
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 1
- 101150046249 Havcr2 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100034458 Hepatitis A virus cellular receptor 2 Human genes 0.000 description 1
- 238000012313 Kruskal-Wallis test Methods 0.000 description 1
- 101710191666 Lactadherin Proteins 0.000 description 1
- 102100039648 Lactadherin Human genes 0.000 description 1
- 239000007993 MOPS buffer Substances 0.000 description 1
- BAQMYDQNMFBZNA-UHFFFAOYSA-N N-biotinyl-L-lysine Natural products N1C(=O)NC2C(CCCCC(=O)NCCCCC(N)C(O)=O)SCC21 BAQMYDQNMFBZNA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 description 1
- 206010036790 Productive cough Diseases 0.000 description 1
- 108700028909 Serum Amyloid A Proteins 0.000 description 1
- 102000054727 Serum Amyloid A Human genes 0.000 description 1
- 101150074789 Timd2 gene Proteins 0.000 description 1
- 238000001793 Wilcoxon signed-rank test Methods 0.000 description 1
- OIPILFWXSMYKGL-UHFFFAOYSA-N acetylcholine Chemical compound CC(=O)OCC[N+](C)(C)C OIPILFWXSMYKGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004373 acetylcholine Drugs 0.000 description 1
- 238000001261 affinity purification Methods 0.000 description 1
- 210000004381 amniotic fluid Anatomy 0.000 description 1
- 238000013103 analytical ultracentrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 description 1
- AFYNADDZULBEJA-UHFFFAOYSA-N bicinchoninic acid Chemical compound C1=CC=CC2=NC(C=3C=C(C4=CC=CC=C4N=3)C(=O)O)=CC(C(O)=O)=C21 AFYNADDZULBEJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BAQMYDQNMFBZNA-MNXVOIDGSA-N biocytin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)NCCCC[C@H](N)C(O)=O)SC[C@@H]21 BAQMYDQNMFBZNA-MNXVOIDGSA-N 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- KCSKCIQYNAOBNQ-YBSFLMRUSA-N biotin sulfoxide Chemical compound N1C(=O)N[C@H]2CS(=O)[C@@H](CCCCC(=O)O)[C@H]21 KCSKCIQYNAOBNQ-YBSFLMRUSA-N 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 230000006931 brain damage Effects 0.000 description 1
- 231100000874 brain damage Toxicity 0.000 description 1
- 208000029028 brain injury Diseases 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 210000002583 cell-derived microparticle Anatomy 0.000 description 1
- 210000003710 cerebral cortex Anatomy 0.000 description 1
- 239000000544 cholinesterase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 239000012459 cleaning agent Substances 0.000 description 1
- 230000019771 cognition Effects 0.000 description 1
- 238000000432 density-gradient centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 239000000104 diagnostic biomarker Substances 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 210000001163 endosome Anatomy 0.000 description 1
- 210000000416 exudates and transudate Anatomy 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 1
- 210000001320 hippocampus Anatomy 0.000 description 1
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000007477 logistic regression Methods 0.000 description 1
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 description 1
- 238000007885 magnetic separation Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 description 1
- 210000002682 neurofibrillary tangle Anatomy 0.000 description 1
- 230000016273 neuron death Effects 0.000 description 1
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 description 1
- 210000003463 organelle Anatomy 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 210000004910 pleural fluid Anatomy 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 1
- 238000002731 protein assay Methods 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 1
- 210000000582 semen Anatomy 0.000 description 1
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 1
- 210000003802 sputum Anatomy 0.000 description 1
- 208000024794 sputum Diseases 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 210000000225 synapse Anatomy 0.000 description 1
- 210000001138 tear Anatomy 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 210000000115 thoracic cavity Anatomy 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 210000003932 urinary bladder Anatomy 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
- G01N33/6896—Neurological disorders, e.g. Alzheimer's disease
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/92—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving lipids, e.g. cholesterol, lipoproteins, or their receptors
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
- G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
- G01N33/5082—Supracellular entities, e.g. tissue, organisms
- G01N33/5088—Supracellular entities, e.g. tissue, organisms of vertebrates
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- G01N2333/70596—Molecules with a "CD"-designation not provided for elsewhere in G01N2333/705
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/28—Neurological disorders
- G01N2800/2814—Dementia; Cognitive disorders
- G01N2800/2821—Alzheimer
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Pathology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Neurology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Description
本発明は、アルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の診断を補助する方法、バイオマーカー、試薬キット及び装置に関する。
認知症とは、正常に発達した記憶、学習、判断、計画といった脳の認知機能が、後天的な脳の器質的障害によって持続的に低下し、日常、社会生活に支障をきたす疾患の総称である。認知症の原因疾患としては、アルツハイマー型認知症（ＡＤ）、レビー小体型認知症（ＤＬＢ）、前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）、血管性認知症（ＶａＤ）等が知られている。
アルツハイマー型認知症は、最も多くみられる認知症の原因疾患であり、高齢化に伴い急速に患者数が増加している。アルツハイマー型認知症患者の脳には、大脳皮質や海馬を中心にアミロイドβ（Ａβ）タンパク質が蓄積してできた老人斑やリン酸化タウタンパク質が蓄積してできた神経原線維変化が多数みられる特徴があり、神経細胞死、シナプス減少、アセチルコリン低下が起こることにより、認知症を発症すると考えられている。
アルツハイマー型認知症の診断方法としては、抗ＮＣＡＭ抗体や抗Ｌ１ＣＡＭ抗体を用いて血液中の神経由来細胞外小胞を濃縮し、当該神経由来細胞外小胞に含まれるＡβ４２、Ｔａｕ、リン酸化Ｔａｕ等を指標として、アルツハイマー型認知症を判定する方法が報告されている（特許文献１、特許文献２、非特許文献１、非特許文献２）。
軽度認知障害とは、認知機能の一部に障害がみられるものの、日常生活には支障がでていない、健常と認知症の境界の状態をいう。軽度認知障害の診断方法としては、ミニメンタルステート検査（ＭＭＳＥ）が挙げられ、ＭＭＳＥにおいて３０点満点中２７点以下の場合に被験者が軽度認知障害であると疑われる。また、ＭＭＳＥにおいて２３点以下の場合に被験者が認知症であると疑われる。
Ｃ．Ｎ． Ｗｉｎｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ． ／ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ ＆ Ｄｅｍｅｎｔｉａ： Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ， Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ＆ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ （２０１６） ３ ：６３－７２
Ｍｕｓｔａｐｉｃ Ｍ ｅｔ ａｌ． Ｆｒｏｎｔ． Ｎｅｕｒｏｓｃｉ． （２０１７） １１：２７８
しかし、血液中の神経由来細胞外小胞を指標としてアルツハイマー型認知症を診断する方法は、検体から神経由来細胞外小胞をアフィニティー濃縮する操作が必要であり、操作が煩雑である。また、検体を直接測定することができない為、アッセイ間での誤差が生じやすく、多検体測定への適用は困難である。
また、軽度認知症を診断する為の有用なバイオマーカーは存在していない。
また、軽度認知症を診断する為の有用なバイオマーカーは存在していない。
前述の状況に鑑み、本発明は、簡便にアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の診断を補助する方法、バイオマーカー、試薬キット及び装置の提供を課題とする。
本発明者らは、特定の細胞外小胞がアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の診断を補助する為のバイオマーカーとなり得るかについて検討した。
その結果、本発明者らは、細胞外小胞のうち、ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する特定の細胞外小胞がアルツハイマー型認知症の診断補助用バイオマーカーとなることを新たに見出した。
更に、本発明者らは、ＣＤ９を有する細胞外小胞の量に対するホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の割合が、アルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の診断を補助する為の指標となることを見出し、発明を完成するに至った。
その結果、本発明者らは、細胞外小胞のうち、ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する特定の細胞外小胞がアルツハイマー型認知症の診断補助用バイオマーカーとなることを新たに見出した。
更に、本発明者らは、ＣＤ９を有する細胞外小胞の量に対するホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の割合が、アルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の診断を補助する為の指標となることを見出し、発明を完成するに至った。
本発明は、以下のアルツハイマー型認知症の診断を補助する方法、バイオマーカー、試薬キット及び装置に関する（本発明における第１発明）。
更に、本発明は、以下のアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の診断を補助する方法、バイオマーカー、試薬キット及び装置に関する（本発明における第２発明）。
更に、本発明は、以下のアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の診断を補助する方法、バイオマーカー、試薬キット及び装置に関する（本発明における第２発明）。
［１］被験者に由来する生体試料中の、
ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量、又は
ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量、並びにテトラスパニンを有する細胞外小胞の量を測定すること、
前記ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量、又は
前記テトラスパニンを有する細胞外小胞の量に対する前記ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の割合を指標として、被験者がアルツハイマー型認知症であると判定することを含む、
アルツハイマー型認知症の診断を補助する方法。
［２］前記アルツハイマー型認知症の判定が、前記ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量、又は前記テトラスパニンを有する細胞外小胞の量に対する前記ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の割合が基準値以下の場合に、被験者がアルツハイマー型認知症であると判定することである、［１］に記載のアルツハイマー型認知症の診断を補助する方法。
［３］前記細胞外小胞の量の測定が、前記ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量を測定することであり、
前記アルツハイマー型認知症の判定が、前記ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量を指標として、被験者がアルツハイマー型認知症であると判定することであり、
前記テトラスパニンが、ＣＤ９、ＣＤ６３、及びＣＤ８１から選ばれるものである、［１］又は［２］に記載のアルツハイマー型認知症の診断を補助する方法。
［４］前記細胞外小胞の量の測定が、前記ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量を測定することであり、
前記ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量を測定すること、テトラスパニンに対して親和性を有する物質、及びホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質を用いて前記ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量を測定することであり、
前記アルツハイマー型認知症の判定が、前記ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量を指標として、被験者がアルツハイマー型認知症であると判定することである、［１］～［３］から選ばれるいずれか一つに記載のアルツハイマー型認知症の診断を補助する方法。
［５］前記ホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質が、Ｔ細胞免疫グロブリン・ムチン含有タンパク質である、［４］に記載のアルツハイマー型認知症の診断を補助する方法。
［６］前記細胞外小胞の量の測定が、前記ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量を測定することであり、
前記アルツハイマー型認知症の判定が、前記ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量を指標として、被験者がアルツハイマー型認知症であると判定することであり、
前記生体試料が、血液試料又は脳脊髄液である、［１］～［５］から選ばれるいずれか一つに記載のアルツハイマー型認知症の診断を補助する方法。
［７］前記細胞外小胞の量の測定が、前記ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量、並びにテトラスパニンを有する細胞外小胞の量を測定することであり、
前記アルツハイマー型認知症の判定が、前記テトラスパニンを有する細胞外小胞の量に対するホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の割合を指標として、被験者がアルツハイマー型認知症であると判定することであり、
前記テトラスパニンが、ＣＤ９又はＣＤ６３である、［１］又は［２］に記載のアルツハイマー型認知症の診断を補助する方法。
［８］前記細胞外小胞の量の測定が、前記ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量、並びにテトラスパニンを有する細胞外小胞の量を測定することであり、
前記ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量を測定することが、テトラスパニンに対して親和性を有する物質、及びホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質を用いて前記ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量を測定することであり、
前記テトラスパニンを有する細胞外小胞の量を測定することが、前記テトラスパニンに対して親和性を有する物質を用いて前記テトラスパニンを有する細胞外小胞の量を測定することであり、
前記アルツハイマー型認知症の判定が、前記テトラスパニンを有する細胞外小胞の量に対するホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の割合を指標として、被験者がアルツハイマー型認知症であると判定することである、［１］、［２］及び［７］から選ばれるいずれか一つに記載のアルツハイマー型認知症の診断を補助する方法。
［９］前記ホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質が、Ｔ細胞免疫グロブリン・ムチン含有タンパク質である、［８］に記載のアルツハイマー型認知症の診断を補助する方法。
［１０］前記細胞外小胞の量の測定が、前記ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量、並びにテトラスパニンを有する細胞外小胞の量を測定することであり、
前記アルツハイマー型認知症の判定が、前記テトラスパニンを有する細胞外小胞の量に対するホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の割合を指標として、被験者がアルツハイマー型認知症であると判定することであり、
前記生体試料が、血液試料又は脳脊髄液である、［１］、［２］、及び［７］～［９］から選ばれるいずれか一つに記載のアルツハイマー型認知症の診断を補助する方法。
［１１］被験者に由来する生体試料中の、
ホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量、並びにＣＤ９を有する細胞外小胞の量を測定すること、
前記ＣＤ９を有する細胞外小胞の量に対する前記ホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の割合を指標として、被験者がアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害であると判定することを含む、
アルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の診断を補助する方法。
［１２］前記アルツハイマー型認知症の判定が、前記ＣＤ９を有する細胞外小胞の量に対する前記ホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の割合が基準値以下の場合に、被験者がアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害であると判定することである、［１１］に記載のアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の診断を補助する方法。
［１３］前記ホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の測定が、ＣＤ９に対して親和性を有する物質、及びホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質を用いて前記ホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量を測定することであり、
前記ＣＤ９を有する細胞外小胞の量の測定が、前記ＣＤ９に対して親和性を有する物質を用いて前記ＣＤ９を有する細胞外小胞の量を測定することである、［１１］又は［１２］に記載のアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の診断を補助する方法。
［１４］前記ホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質が、Ｔ細胞免疫グロブリン・ムチン含有タンパク質である、［１３］に記載のアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の診断を補助する方法。
［１５］前記生体試料が、血液試料又は脳脊髄液である、［１１］～［１４］から選ばれるいずれか一つに記載のアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の診断を補助する方法。
［１６］テトラスパニンに対して親和性を有する物質、及びホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質を含む、アルツハイマー型認知症の診断補助用試薬キット。
［１７］ＣＤ９に対して親和性を有する物質、及びホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質を含む、アルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の診断補助用試薬キット。
［１８］ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞を含む、アルツハイマー型認知症の診断補助用バイオマーカー。
［１９］ホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞、並びにＣＤ９を有する細胞外小胞を含む、アルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の診断補助用バイオマーカーセット。
［２０］被験者に由来する生体試料中のホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量を測定する測定部、及び
前記ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量を指標として被験者がアルツハイマー型認知症であると判定する判定部を有する、アルツハイマー型認知症の診断補助用装置。
［２１］被験者に由来する生体試料中の、ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量、並びにテトラスパニンを有する細胞外小胞の量を測定する測定部、
前記テトラスパニンを有する細胞外小胞の量に対する前記ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の割合を算出する演算部、及び
前記テトラスパニンを有する細胞外小胞の量に対するホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の割合を指標として被験者がアルツハイマー型認知症であると判定する判定部を有する、アルツハイマー型認知症の診断補助用装置。
［２２］被験者に由来する生体試料中の、ホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量、並びにＣＤ９を有する細胞外小胞の量を測定する測定部、
前記ＣＤ９を有する細胞外小胞の量に対する前記ホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の割合を算出する演算部、及び
前記生体試料中のＣＤ９を有する細胞外小胞の量に対する生体試料中のホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の割合を指標として、被験者がアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害であると判定する判定部を有する、アルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の診断補助用装置。
［２３］被験者に由来する生体試料中の、
ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量、並びにテトラスパニンを有する細胞外小胞の量を測定すること、
前記テトラスパニンを有する細胞外小胞の量に対する前記ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の割合に、アミロイドβ（１－４０）の量に対するアミロイドβ（１－４２）の量の割合を乗じた値を指標として、被験者がアルツハイマー型認知症であると判定することを含む、
アルツハイマー型認知症の診断を補助する方法。
［２４］前記ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量を測定することが、テトラスパニンに対して親和性を有する物質、及びホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質を用いて前記ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量を測定することであり、
前記テトラスパニンを有する細胞外小胞の量を測定することが、前期テトラスパニンに対して親和性を有する物質を用いて前記テトラスパニンを有する細胞外小胞の量を測定することである、［２３］に記載のアルツハイマー型認知症の診断を補助する方法。
［２５］前記ホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質が、Ｔ細胞免疫グロブリン・ムチン含有タンパク質である、［２４］に記載のアルツハイマー型認知症の診断を補助する方法。
［２６］前記生体試料が、血液試料又は脳脊髄液である、［２３］～［２５］から選ばれるいずれか一つに記載のアルツハイマー型認知症の診断を補助する方法。
［２７］被験者に由来する生体試料中の、
ホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量、並びにＣＤ９を有する細胞外小胞の量を測定すること、
前記ＣＤ９を有する細胞外小胞の量に対する前記ホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の割合に、アミロイドβ（１－４０）の量に対するアミロイドβ（１－４２）の量の割合を乗じた値を指標として、被験者がアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害であると判定することを含む、
アルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の診断を補助する方法。
［２８］前記アルツハイマー型認知症の判定が、前記ＣＤ９を有する細胞外小胞の量に対する前記ホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の割合に、アミロイドβ（１－４０）の量に対するアミロイドβ（１－４２）の量の割合を乗じた値が基準値以下の場合に、被験者がアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害であると判定することである、［２７］に記載のアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の診断を補助する方法。
［２９］前記ホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の測定が、ＣＤ９に対して親和性を有する物質、及びホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質を用いて前記ホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量を測定することであり、
前記ＣＤ９を有する細胞外小胞の量の測定が、前記ＣＤ９に対して親和性を有する物質を用いて前記ＣＤ９を有する細胞外小胞の量を測定することである、［２７］又は［２８］に記載のアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の診断を補助する方法。
［３０］前記ホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質が、Ｔ細胞免疫グロブリン・ムチン含有タンパク質である、［２９］に記載のアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の診断を補助する方法。
［３１］前記生体試料が、血液試料又は脳脊髄液である、［２７］～［３０］から選ばれるいずれか一つに記載のアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の診断を補助する方法。
［３２］テトラスパニンに対して親和性を有する物質、ホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質、アミロイドβ（１－４０）に対して親和性を有する物質、及びアミロイドβ（１－４２）に対して親和性を有する物質を含む、アルツハイマー型認知症の診断補助用試薬キット。
［３３］ＣＤ９に対して親和性を有する物質、ホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質、アミロイドβ（１－４０）に対して親和性を有する物質、及びアミロイドβ（１－４２）に対して親和性を有する物質を含む、アルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の診断補助用試薬キット。
［３４］ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞、並びにテトラスパニンを有する細胞外小胞を含む、アルツハイマー型認知症の診断補助用バイオマーカーセット。
［３５］ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞、テトラスパニンを有する細胞外小胞、アミロイドβ（１－４０）、並びにアミロイドβ（１－４２）を含む、アルツハイマー型認知症の診断補助用バイオマーカーセット。
［３６］ホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞、ＣＤ９を有する細胞外小胞、アミロイドβ（１－４０）、並びにアミロイドβ（１－４２）を含む、アルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の診断補助用バイオマーカーセット。
［３７］被験者に由来する生体試料中の、ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量、並びにテトラスパニンを有する細胞外小胞の量を測定する測定部、
前記テトラスパニンを有する細胞外小胞の量に対する前記ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の割合に、アミロイドβ（１－４０）の量に対するアミロイドβ（１－４２）の量の割合を乗じた値を算出する演算部、及び
前記テトラスパニンを有する細胞外小胞の量に対するホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の割合に、アミロイドβ（１－４０）の量に対するアミロイドβ（１－４２）の量の割合を乗じた値を指標として被験者がアルツハイマー型認知症であると判定する判定部を有する、アルツハイマー型認知症の診断補助用装置。
［３８］被験者に由来する生体試料中の、ホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量、並びにＣＤ９を有する細胞外小胞の量を測定する測定部、
前記ＣＤ９を有する細胞外小胞の量に対する前記ホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の割合に、アミロイドβ（１－４０）の量に対するアミロイドβ（１－４２）の量の割合を乗じた値を算出する演算部、及び
前記生体試料中のＣＤ９を有する細胞外小胞の量に対する生体試料中のホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の割合に、アミロイドβ（１－４０）の量に対するアミロイドβ（１－４２）の量の割合を乗じた値を指標として、被験者がアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害であると判定する判定部を有する、アルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の診断補助用装置。
ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量、又は
ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量、並びにテトラスパニンを有する細胞外小胞の量を測定すること、
前記ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量、又は
前記テトラスパニンを有する細胞外小胞の量に対する前記ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の割合を指標として、被験者がアルツハイマー型認知症であると判定することを含む、
アルツハイマー型認知症の診断を補助する方法。
［２］前記アルツハイマー型認知症の判定が、前記ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量、又は前記テトラスパニンを有する細胞外小胞の量に対する前記ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の割合が基準値以下の場合に、被験者がアルツハイマー型認知症であると判定することである、［１］に記載のアルツハイマー型認知症の診断を補助する方法。
［３］前記細胞外小胞の量の測定が、前記ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量を測定することであり、
前記アルツハイマー型認知症の判定が、前記ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量を指標として、被験者がアルツハイマー型認知症であると判定することであり、
前記テトラスパニンが、ＣＤ９、ＣＤ６３、及びＣＤ８１から選ばれるものである、［１］又は［２］に記載のアルツハイマー型認知症の診断を補助する方法。
［４］前記細胞外小胞の量の測定が、前記ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量を測定することであり、
前記ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量を測定すること、テトラスパニンに対して親和性を有する物質、及びホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質を用いて前記ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量を測定することであり、
前記アルツハイマー型認知症の判定が、前記ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量を指標として、被験者がアルツハイマー型認知症であると判定することである、［１］～［３］から選ばれるいずれか一つに記載のアルツハイマー型認知症の診断を補助する方法。
［５］前記ホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質が、Ｔ細胞免疫グロブリン・ムチン含有タンパク質である、［４］に記載のアルツハイマー型認知症の診断を補助する方法。
［６］前記細胞外小胞の量の測定が、前記ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量を測定することであり、
前記アルツハイマー型認知症の判定が、前記ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量を指標として、被験者がアルツハイマー型認知症であると判定することであり、
前記生体試料が、血液試料又は脳脊髄液である、［１］～［５］から選ばれるいずれか一つに記載のアルツハイマー型認知症の診断を補助する方法。
［７］前記細胞外小胞の量の測定が、前記ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量、並びにテトラスパニンを有する細胞外小胞の量を測定することであり、
前記アルツハイマー型認知症の判定が、前記テトラスパニンを有する細胞外小胞の量に対するホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の割合を指標として、被験者がアルツハイマー型認知症であると判定することであり、
前記テトラスパニンが、ＣＤ９又はＣＤ６３である、［１］又は［２］に記載のアルツハイマー型認知症の診断を補助する方法。
［８］前記細胞外小胞の量の測定が、前記ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量、並びにテトラスパニンを有する細胞外小胞の量を測定することであり、
前記ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量を測定することが、テトラスパニンに対して親和性を有する物質、及びホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質を用いて前記ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量を測定することであり、
前記テトラスパニンを有する細胞外小胞の量を測定することが、前記テトラスパニンに対して親和性を有する物質を用いて前記テトラスパニンを有する細胞外小胞の量を測定することであり、
前記アルツハイマー型認知症の判定が、前記テトラスパニンを有する細胞外小胞の量に対するホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の割合を指標として、被験者がアルツハイマー型認知症であると判定することである、［１］、［２］及び［７］から選ばれるいずれか一つに記載のアルツハイマー型認知症の診断を補助する方法。
［９］前記ホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質が、Ｔ細胞免疫グロブリン・ムチン含有タンパク質である、［８］に記載のアルツハイマー型認知症の診断を補助する方法。
［１０］前記細胞外小胞の量の測定が、前記ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量、並びにテトラスパニンを有する細胞外小胞の量を測定することであり、
前記アルツハイマー型認知症の判定が、前記テトラスパニンを有する細胞外小胞の量に対するホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の割合を指標として、被験者がアルツハイマー型認知症であると判定することであり、
前記生体試料が、血液試料又は脳脊髄液である、［１］、［２］、及び［７］～［９］から選ばれるいずれか一つに記載のアルツハイマー型認知症の診断を補助する方法。
［１１］被験者に由来する生体試料中の、
ホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量、並びにＣＤ９を有する細胞外小胞の量を測定すること、
前記ＣＤ９を有する細胞外小胞の量に対する前記ホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の割合を指標として、被験者がアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害であると判定することを含む、
アルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の診断を補助する方法。
［１２］前記アルツハイマー型認知症の判定が、前記ＣＤ９を有する細胞外小胞の量に対する前記ホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の割合が基準値以下の場合に、被験者がアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害であると判定することである、［１１］に記載のアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の診断を補助する方法。
［１３］前記ホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の測定が、ＣＤ９に対して親和性を有する物質、及びホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質を用いて前記ホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量を測定することであり、
前記ＣＤ９を有する細胞外小胞の量の測定が、前記ＣＤ９に対して親和性を有する物質を用いて前記ＣＤ９を有する細胞外小胞の量を測定することである、［１１］又は［１２］に記載のアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の診断を補助する方法。
［１４］前記ホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質が、Ｔ細胞免疫グロブリン・ムチン含有タンパク質である、［１３］に記載のアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の診断を補助する方法。
［１５］前記生体試料が、血液試料又は脳脊髄液である、［１１］～［１４］から選ばれるいずれか一つに記載のアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の診断を補助する方法。
［１６］テトラスパニンに対して親和性を有する物質、及びホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質を含む、アルツハイマー型認知症の診断補助用試薬キット。
［１７］ＣＤ９に対して親和性を有する物質、及びホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質を含む、アルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の診断補助用試薬キット。
［１８］ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞を含む、アルツハイマー型認知症の診断補助用バイオマーカー。
［１９］ホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞、並びにＣＤ９を有する細胞外小胞を含む、アルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の診断補助用バイオマーカーセット。
［２０］被験者に由来する生体試料中のホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量を測定する測定部、及び
前記ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量を指標として被験者がアルツハイマー型認知症であると判定する判定部を有する、アルツハイマー型認知症の診断補助用装置。
［２１］被験者に由来する生体試料中の、ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量、並びにテトラスパニンを有する細胞外小胞の量を測定する測定部、
前記テトラスパニンを有する細胞外小胞の量に対する前記ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の割合を算出する演算部、及び
前記テトラスパニンを有する細胞外小胞の量に対するホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の割合を指標として被験者がアルツハイマー型認知症であると判定する判定部を有する、アルツハイマー型認知症の診断補助用装置。
［２２］被験者に由来する生体試料中の、ホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量、並びにＣＤ９を有する細胞外小胞の量を測定する測定部、
前記ＣＤ９を有する細胞外小胞の量に対する前記ホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の割合を算出する演算部、及び
前記生体試料中のＣＤ９を有する細胞外小胞の量に対する生体試料中のホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の割合を指標として、被験者がアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害であると判定する判定部を有する、アルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の診断補助用装置。
［２３］被験者に由来する生体試料中の、
ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量、並びにテトラスパニンを有する細胞外小胞の量を測定すること、
前記テトラスパニンを有する細胞外小胞の量に対する前記ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の割合に、アミロイドβ（１－４０）の量に対するアミロイドβ（１－４２）の量の割合を乗じた値を指標として、被験者がアルツハイマー型認知症であると判定することを含む、
アルツハイマー型認知症の診断を補助する方法。
［２４］前記ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量を測定することが、テトラスパニンに対して親和性を有する物質、及びホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質を用いて前記ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量を測定することであり、
前記テトラスパニンを有する細胞外小胞の量を測定することが、前期テトラスパニンに対して親和性を有する物質を用いて前記テトラスパニンを有する細胞外小胞の量を測定することである、［２３］に記載のアルツハイマー型認知症の診断を補助する方法。
［２５］前記ホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質が、Ｔ細胞免疫グロブリン・ムチン含有タンパク質である、［２４］に記載のアルツハイマー型認知症の診断を補助する方法。
［２６］前記生体試料が、血液試料又は脳脊髄液である、［２３］～［２５］から選ばれるいずれか一つに記載のアルツハイマー型認知症の診断を補助する方法。
［２７］被験者に由来する生体試料中の、
ホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量、並びにＣＤ９を有する細胞外小胞の量を測定すること、
前記ＣＤ９を有する細胞外小胞の量に対する前記ホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の割合に、アミロイドβ（１－４０）の量に対するアミロイドβ（１－４２）の量の割合を乗じた値を指標として、被験者がアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害であると判定することを含む、
アルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の診断を補助する方法。
［２８］前記アルツハイマー型認知症の判定が、前記ＣＤ９を有する細胞外小胞の量に対する前記ホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の割合に、アミロイドβ（１－４０）の量に対するアミロイドβ（１－４２）の量の割合を乗じた値が基準値以下の場合に、被験者がアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害であると判定することである、［２７］に記載のアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の診断を補助する方法。
［２９］前記ホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の測定が、ＣＤ９に対して親和性を有する物質、及びホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質を用いて前記ホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量を測定することであり、
前記ＣＤ９を有する細胞外小胞の量の測定が、前記ＣＤ９に対して親和性を有する物質を用いて前記ＣＤ９を有する細胞外小胞の量を測定することである、［２７］又は［２８］に記載のアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の診断を補助する方法。
［３０］前記ホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質が、Ｔ細胞免疫グロブリン・ムチン含有タンパク質である、［２９］に記載のアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の診断を補助する方法。
［３１］前記生体試料が、血液試料又は脳脊髄液である、［２７］～［３０］から選ばれるいずれか一つに記載のアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の診断を補助する方法。
［３２］テトラスパニンに対して親和性を有する物質、ホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質、アミロイドβ（１－４０）に対して親和性を有する物質、及びアミロイドβ（１－４２）に対して親和性を有する物質を含む、アルツハイマー型認知症の診断補助用試薬キット。
［３３］ＣＤ９に対して親和性を有する物質、ホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質、アミロイドβ（１－４０）に対して親和性を有する物質、及びアミロイドβ（１－４２）に対して親和性を有する物質を含む、アルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の診断補助用試薬キット。
［３４］ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞、並びにテトラスパニンを有する細胞外小胞を含む、アルツハイマー型認知症の診断補助用バイオマーカーセット。
［３５］ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞、テトラスパニンを有する細胞外小胞、アミロイドβ（１－４０）、並びにアミロイドβ（１－４２）を含む、アルツハイマー型認知症の診断補助用バイオマーカーセット。
［３６］ホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞、ＣＤ９を有する細胞外小胞、アミロイドβ（１－４０）、並びにアミロイドβ（１－４２）を含む、アルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の診断補助用バイオマーカーセット。
［３７］被験者に由来する生体試料中の、ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量、並びにテトラスパニンを有する細胞外小胞の量を測定する測定部、
前記テトラスパニンを有する細胞外小胞の量に対する前記ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の割合に、アミロイドβ（１－４０）の量に対するアミロイドβ（１－４２）の量の割合を乗じた値を算出する演算部、及び
前記テトラスパニンを有する細胞外小胞の量に対するホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の割合に、アミロイドβ（１－４０）の量に対するアミロイドβ（１－４２）の量の割合を乗じた値を指標として被験者がアルツハイマー型認知症であると判定する判定部を有する、アルツハイマー型認知症の診断補助用装置。
［３８］被験者に由来する生体試料中の、ホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量、並びにＣＤ９を有する細胞外小胞の量を測定する測定部、
前記ＣＤ９を有する細胞外小胞の量に対する前記ホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の割合に、アミロイドβ（１－４０）の量に対するアミロイドβ（１－４２）の量の割合を乗じた値を算出する演算部、及び
前記生体試料中のＣＤ９を有する細胞外小胞の量に対する生体試料中のホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の割合に、アミロイドβ（１－４０）の量に対するアミロイドβ（１－４２）の量の割合を乗じた値を指標として、被験者がアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害であると判定する判定部を有する、アルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の診断補助用装置。
本発明によれば、簡便に、アルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の診断を補助することができる。
本明細書において、範囲の上限と下限を示す場合、特別に記載した場合を除き、Ａ～ＢはＡ以上Ｂ以下であることを示す。
細胞外小胞は、細胞に由来する、脂質二重膜で構成される小型膜小胞である。当該細胞外小胞は、通常２０ｎｍ～１０００ｎｍの直径を有するものが挙げられ、５０ｎｍ～８００ｎｍのものが好ましく、５０ｎｍ～５００ｎｍのものがより好ましく、５０ｎｍ～２００ｎｍのものが特に好ましい。前記細胞外小胞としては、例えば、Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ９， ５８１－５９３ （Ａｕｇｕｓｔ ２００９）、「肥満研究」Ｖｏｌ．１３ Ｎｏ．２ ２００７ トピックス 青木直人等に記載の通り、その発生起源や小型膜小胞の大きさ等により様々に分類されるものが挙げられる。具体的には、エクソソーム、微小胞、エクトソーム、膜粒子、エクソソーム様小胞、アポトーシス小体、アディポソーム等が挙げられ、エクソソーム及び微小胞が好ましく、エクソソームがより好ましい。
前記エクソソームは、細胞に由来する、脂質二重膜で構成された小型膜小胞であり、例えば、５０ｎｍ～２００ｎｍの直径を有するものが挙げられ、５０ｎｍ～１５０ｎｍのものが好ましく、５０ｎｍ～１００ｎｍのものがより好ましい。なお、エクソソームは、後期エンドソームに由来すると考えられている。
前記微小胞は、細胞に由来する、脂質二重膜で構成された小型膜小胞であり、例えば、１００ｎｍ～１０００ｎｍの直径を有するものが挙げられ、１００ｎｍ～８００ｎｍのものが好ましく、１００ｎｍ～５００ｎｍのものがより好ましい。なお、微小胞は、細胞膜に由来すると考えられている。
前記細胞外小胞は、被験者に由来する生体試料に含有されるものであっても、被験者に由来する生体試料から単離されたものであってもよく、被験者に由来する生体試料から単離されたものが好ましい。
前記被験者に由来する生体試料としては、細胞外小胞を含みうるものであれば何れでもよく、例えば血清、血漿、全血、バフィーコート等の血液由来試料、脳脊髄液、尿、唾液、精液、胸部滲出液、涙液、痰、粘液、リンパ液、腹水、胸水、羊水、膀胱洗浄液、気管支肺胞洗浄液等の体液試料が挙げられ、血液由来試料、脳脊髄液が好ましく、血清、血漿、脳脊髄液がより好ましく、血清、血漿が更に好ましく、血漿が特に好ましい。また、被験者への試料採取の負担が軽いことから血液由来試料がより有用である。
前記被験者に由来する生体試料は、例えば、被験者から直接採取されたものであっても、回収、濃縮、精製、単離、緩衝液等による希釈、ろ過滅菌等の前処理を行ったものであってもよい。これら前処理は、常法に従い適宜行えばよい。以下、前記被験者に由来する生体試料を「生体試料」と略記する場合がある。
前記被験者に由来する生体試料は、例えば、被験者から直接採取されたものであっても、回収、濃縮、精製、単離、緩衝液等による希釈、ろ過滅菌等の前処理を行ったものであってもよい。これら前処理は、常法に従い適宜行えばよい。以下、前記被験者に由来する生体試料を「生体試料」と略記する場合がある。
前記生体試料から細胞外小胞を単離する方法としては、常法に従い行えばよく、特に限定されない。前記生体試料から細胞外小胞を単離する方法としては、例えば、アフィニティー法（例えば、ＰＳアフィニティー法）、分画遠心分離法（例えば、ペレットダウン法、スクロースクッション法、密度勾配遠心法等の超遠心法）、免疫沈降法、クロマトグラフィー法（例えば、イオン交換クロマトグラフィー法、ゲル浸透クロマトグラフィー法）、密度勾配法（例えば、ショ糖密度勾配法）、電気泳動法（例えば、オルガネラ電気泳動法）、磁気分離法（例えば、磁気活性化細胞選別（ＭＡＣＳ）法）、限外濾過濃縮法（例えば、ナノ膜限外濾過濃縮法）、パーコール勾配単離法、マイクロ流体デバイスを利用した方法、ＰＥＧ沈殿法等が挙げられ、高い精製度の細胞外小胞を得られることからアフィニティー法、又は理論的に偏りの無い回収が可能であることから分画遠心分離法が好ましく、アフィニティー法又は超遠心法がより好ましく、アフィニティー法が特に好ましい。アフィニティー法の中でも、ホスファチジルセリンに対するアフィニティー精製であるＰＳアフィニティー法が好ましい。アフィニティー法及び分画遠心分離法は、例えば、ＷＯ２０１６／０８８６８９に記載の方法に準じておこなえばよい。
これらの単離方法は、１種のみを用いても、２種以上を組み合わせてもよい。また、１種の単離方法による単離を２回以上繰り返してもよい。
これらの単離方法は、１種のみを用いても、２種以上を組み合わせてもよい。また、１種の単離方法による単離を２回以上繰り返してもよい。
前記被験者としては、特に限定されず、例えば、診断基準に基づいてアルツハイマー型認知症と診断されたヒト、又は軽度認知障害と診断されたヒト、或いは診断基準に基づいてアルツハイマー型認知症を発症するリスクがあると診断されたヒト、又は軽度認知障害を発症するリスクがあると診断されたヒト、アルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の診断を受けていないヒト、診断基準に基づいてアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害であると診断されなかったヒト、或いは診断基準に基づいてアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害を発症するリスクがあると診断されなかったヒトが挙げられ、診断基準に基づいてアルツハイマー型認知症と診断されたヒト、又は軽度認知障害と診断されたヒト、或いは診断基準に基づいてアルツハイマー型認知症を発症するリスクがあると診断されたヒト、又は軽度認知障害を発症するリスクがあると診断されたヒト、アルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の診断を受けていないヒトが好ましい。
前記診断基準としては、例えば、問診、アミロイドＰＥＴ診断等の撮像装置を用いた検査、ＭＭＳＥテスト、脳脊髄液中のＡβ４２の減少、Ｔａｕ又はリン酸化Ｔａｕの上昇等の認知症疾患治療ガイドラインで推奨されているアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害のバイオマーカー等に関する検査、アルツハイマー型認知症又は軽度認知障害のバイオマーカーの候補物質に関する検査等の結果に基づいて、アルツハイマー型認知症又は軽度認知障害であると診断する際に用いられる診断基準等が挙げられる。
前記診断基準としては、例えば、問診、アミロイドＰＥＴ診断等の撮像装置を用いた検査、ＭＭＳＥテスト、脳脊髄液中のＡβ４２の減少、Ｔａｕ又はリン酸化Ｔａｕの上昇等の認知症疾患治療ガイドラインで推奨されているアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害のバイオマーカー等に関する検査、アルツハイマー型認知症又は軽度認知障害のバイオマーカーの候補物質に関する検査等の結果に基づいて、アルツハイマー型認知症又は軽度認知障害であると診断する際に用いられる診断基準等が挙げられる。
１．アルツハイマー型認知症の診断補助
本発明における第１の発明は、アルツハイマー型認知症の診断を補助する方法、バイオマーカー、試薬キット及び装置に関する。
本発明における第１の発明には、ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞を含むバイオマーカーを使用し、前記ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量を指標として、被験者がアルツハイマー型認知症であると判定する場合（以下、「第１発明－１」と略記する場合がある）と、ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞、テトラスパニンを有する細胞外小胞を含むバイオマーカーを組み合わせて使用し、前記テトラスパニンを有する細胞外小胞の量に対する前記ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の割合を指標として、被験者がアルツハイマー型認知症であると判定する場合（以下、「第１発明－２」と略記する場合がある）と、ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞、テトラスパニンを有する細胞外小胞、アミロイドβ（１－４０）、アミロイドβ（１－４２）を含むバイオマーカーを組み合わせて使用し、前記テトラスパニンを有する細胞外小胞の量に対する前記ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の割合に、前記アミロイドβ（１－４０）の量に対する前記アミロイドβ（１－４２）の量の割合（Ａβ（１－４２）／Ａβ（１－４０））を乗じた値を指標として、被験者がアルツハイマー型認知症であると判定する場合（以下、「第１発明－３」と略記する場合がある）が含まれる。
本発明における第１の発明は、アルツハイマー型認知症の診断を補助する方法、バイオマーカー、試薬キット及び装置に関する。
本発明における第１の発明には、ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞を含むバイオマーカーを使用し、前記ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量を指標として、被験者がアルツハイマー型認知症であると判定する場合（以下、「第１発明－１」と略記する場合がある）と、ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞、テトラスパニンを有する細胞外小胞を含むバイオマーカーを組み合わせて使用し、前記テトラスパニンを有する細胞外小胞の量に対する前記ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の割合を指標として、被験者がアルツハイマー型認知症であると判定する場合（以下、「第１発明－２」と略記する場合がある）と、ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞、テトラスパニンを有する細胞外小胞、アミロイドβ（１－４０）、アミロイドβ（１－４２）を含むバイオマーカーを組み合わせて使用し、前記テトラスパニンを有する細胞外小胞の量に対する前記ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の割合に、前記アミロイドβ（１－４０）の量に対する前記アミロイドβ（１－４２）の量の割合（Ａβ（１－４２）／Ａβ（１－４０））を乗じた値を指標として、被験者がアルツハイマー型認知症であると判定する場合（以下、「第１発明－３」と略記する場合がある）が含まれる。
１－１．第１発明－１
＜アルツハイマー型認知症の症診断補助用バイオマーカー＞
第１発明－１におけるアルツハイマー型認知症の診断補助用バイオマーカー（以下「ＡＤマーカー」と略記する場合がある）は、ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞を含む。
＜アルツハイマー型認知症の症診断補助用バイオマーカー＞
第１発明－１におけるアルツハイマー型認知症の診断補助用バイオマーカー（以下「ＡＤマーカー」と略記する場合がある）は、ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞を含む。
ＡＤマーカーにおける細胞外小胞は、前記のものと同様であり、好ましいものも同様である。
ＡＤマーカーにおけるホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞は、ＣＤ９、ＣＤ６３、ＣＤ８１、ＣＤ１５１等の少なくとも一つのテトラスパニン及びリン脂質であるホスファチジルセリンを膜表面に有しており、ＣＤ９、ＣＤ６３、及びＣＤ８１から選ばれる少なくとも一つのテトラスパニン並びにホスファチジルセリンを有するものが好ましく、ＣＤ９及びＣＤ６３から選ばれる少なくとも一つのテトラスパニン並びにホスファチジルセリンを有するものがより好ましく、ＣＤ９及びホスファチジルセリンを有するものが特に好ましい。
ＡＤマーカーにおけるホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞は、ＣＤ９、ＣＤ６３、ＣＤ８１、ＣＤ１５１等の少なくとも一つのテトラスパニン及びリン脂質であるホスファチジルセリンを膜表面に有しており、ＣＤ９、ＣＤ６３、及びＣＤ８１から選ばれる少なくとも一つのテトラスパニン並びにホスファチジルセリンを有するものが好ましく、ＣＤ９及びＣＤ６３から選ばれる少なくとも一つのテトラスパニン並びにホスファチジルセリンを有するものがより好ましく、ＣＤ９及びホスファチジルセリンを有するものが特に好ましい。
＜アルツハイマー型認知症の診断を補助する方法＞
第１発明－１におけるアルツハイマー型認知症の診断を補助する方法（以下「ＡＤ診断補助方法」と略記する場合がある）は、生体試料中のホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量を測定すること、当該生体試料中のホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量を指標として、被験者がアルツハイマー型認知症であると判定することを含む。
第１発明－１におけるアルツハイマー型認知症の診断を補助する方法（以下「ＡＤ診断補助方法」と略記する場合がある）は、生体試料中のホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量を測定すること、当該生体試料中のホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量を指標として、被験者がアルツハイマー型認知症であると判定することを含む。
ＡＤ診断補助方法における、生体試料、被験者、細胞外小胞は、それぞれ前記のものと同様であり、好ましいものも同様である。
ＡＤ診断補助方法におけるホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞は、ＡＤマーカーにおいて前述したものと同様であり、好ましいものも同様である。
ＡＤ診断補助方法における「量」としては、質量や濃度が挙げられる。また、前記「量」には、質量や濃度と相関関係を有する実測値（例えば、吸光度、吸光度変化量、透過光、透過光変化量、蛍光強度、蛍光強度変化量、発光量、発光量変化量、濁度、濁度変化率、散乱光、散乱光変化率、反射率、反射率変化量、屈折率、屈折率変化量等）も含まれる。
ＡＤ診断補助方法におけるホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の測定は、１種のテトラスパニン及びホスファチジルセリンを有する細胞外小胞の量のみ（例えば、ＣＤ９及びホスファチジルセリンを有する細胞外小胞のみ）を測定対象としても、２種以上のテトラスパニン及びホスファチジルセリンを有する細胞外小胞の量（例えば、ＣＤ９及びホスファチジルセリンを有する細胞外小胞、並びにＣＤ６３及びホスファチジルセリンを有する細胞外小胞）を測定対象としてもよく、１種のテトラスパニン及びホスファチジルセリンを有する細胞外小胞の量のみを測定対象とするのが好ましい。
ＡＤ診断補助方法におけるホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の測定は、通常この分野でなされる方法であれば、特に限定されない。当該測定は、例えば、テトラスパニンに対して親和性を有する物質及びホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質を用いた免疫学的測定方法、質量分析法、これらを組み合わせた方法等を用いればよく、中でも免疫学的測定方法が好ましい。なお、当該免疫学的測定方法には、免疫反応（抗原抗体反応）を利用する方法の他、例えば抗原抗体反応以外の２分子間における結合力を利用する方法（免疫学的測定方法に準じた方法）も含まれる。
前記テトラスパニンに対して親和性を有する物質としては、テトラスパニンに対して特異的に結合する物質であればよく、例えば、テトラスパニンに対して特異的に結合する抗体やテトラスパニンが有する糖鎖に対して特異的に結合するレクチン等のテトラスパニンに対して特異的に結合するタンパク質、テトラスパニンに対して特異的に結合する核酸等が挙げられ、テトラスパニンに対して特異的に結合するタンパク質が好ましく、テトラスパニンに対して特異的に結合する抗体がより好ましい。テトラスパニンに対して特異的に結合する抗体としては、例えば、抗ＣＤ９抗体、抗ＣＤ６３抗体、抗ＣＤ８１抗体、抗ＣＤ１５１抗体等が挙げられ、抗ＣＤ９抗体、抗ＣＤ６３抗体、抗ＣＤ８１抗体が好ましく、抗ＣＤ９抗体、抗ＣＤ６３抗体がより好ましく、抗ＣＤ９抗体が特に好ましい。前記テトラスパニンに対して親和性を有する物質は、１種のみを用いても、２種以上を用いても何れでもよく、１種のみを用いるのが好ましい。
前記ホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質としては、ホスファチジルセリンに対して特異的に結合する物質であればよく、例えば、ホスファチジルセリンに対して特異的に結合するタンパク質、ホスファチジルセリンに対して特異的に結合する核酸等が挙げられ、ホスファチジルセリンに対して特異的に結合するタンパク質が好ましい。ホスファチジルセリンに対して特異的に結合するタンパク質としては、例えば、ホスファチジルセリンに対して特異的に結合する抗体やホスファチジルセリン親和性タンパク質が挙げられ、ホスファチジルセリン親和性タンパク質が好ましい。ホスファチジルセリンに対して特異的に結合する抗体としては、例えば抗ホスファチジルセリン抗体１Ｈ６（メルク（株））等が挙げられる。ホスファチジルセリン親和性タンパク質としては、例えば、Ｔｉｍ１（Ｔ細胞免疫グロブリン・ムチンドメイン含有分子１、Ｔ－ｃｅｌｌ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ－ｍｕｃｉｎ－ｄｏｍａｉｎ １）、Ｔｉｍ２（Ｔ細胞免疫グロブリン・ムチンドメイン含有分子２、Ｔ－ｃｅｌｌ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ－ｍｕｃｉｎ－ｄｏｍａｉｎ ２）、Ｔｉｍ３（Ｔ細胞免疫グロブリン・ムチンドメイン含有分子３、Ｔ－ｃｅｌｌ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ－ｍｕｃｉｎ－ｄｏｍａｉｎ ３）、Ｔｉｍ４（Ｔ細胞免疫グロブリン・ムチンドメイン含有分子４、Ｔ－ｃｅｌｌ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ－ｍｕｃｉｎ－ｄｏｍａｉｎ ４）等のＴｉｍタンパク質；Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ；ＭＦＧ－Ｅ８等が挙げられ、Ｔｉｍタンパク質、抗ホスファチジルセリン抗体が好ましく、Ｔｉｍタンパク質がより好ましい。また、Ｔｉｍタンパク質としては、Ｔｉｍ１、Ｔｉｍ４が好ましく、Ｔｉｍ４がより好ましい。
前記ホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質は、１種類のみを用いても、２種類以上を用いてもよく、１種類のみを用いるのが好ましい。
前記ホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質は、１種類のみを用いても、２種類以上を用いてもよく、１種類のみを用いるのが好ましい。
前記テトラスパニンに対して親和性を有する物質及び前記ホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質は、市販品でも常法により適宜調製されたものでもよい。また、前記テトラスパニンに対して特異的に結合する抗体や前記ホスファチジルセリンに対して特異的に結合する抗体は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体の何れであってもよく、これらを単独であるいはこれらを適宜組み合わせて用いてもよい。また、前記テトラスパニンに対して特異的に結合する抗体や前記ホスファチジルセリンに対して特異的に結合する抗体は、免疫グロブリン分子そのもの（ｉｎｔａｃｔ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ）のみならず、その断片であって抗原への結合能を有する断片であるＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ’）等のフラグメント抗体や一本鎖抗体（ｓｉｎｇｌｅ ｃｈａｉｎ Ｆｖ）、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ等の合成抗体等を用いてもよい。また、これらの抗体を調製する場合は、例えば「免疫測定法」（生物化学的測定研究会編集、講談社、２０１４）等に記載の方法に従っておこなえばよい。
前記テトラスパニンに対して親和性を有する物質又は／及び前記ホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質は、標識物質により標識されたものであってもよい。当該標識物質としては、例えば、ペルオキシダーゼ、マイクロペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ等の酵素類、９９ｍＴｃ、１３１Ｉ、１２５Ｉ、１４Ｃ、３Ｈ、３２Ｐ、３５Ｓ等の放射性同位元素、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）、４－メチルウンベリフェロン、ＨｉＬｙｔｅ、Ａｌｅｘａ、ＣｙＤｙｅ又はローダミン、或いはこれらの誘導体等の蛍光性物質、ルシフェリン、ルミノール、ルテニウム錯体等の発光性物質、フェノール、ナフトール、又はアントラセン、或いはこれらの誘導体等の紫外部に吸収を有する物質、４－アミノ－２，２，６，６－テトラメチルピペリジン－１－オキシル等のオキシル基を有する化合物に代表されるスピンラベル化剤としての性質を有する物質、金コロイド、量子ドット等のナノ粒子等が挙げられ、酵素類、蛍光性物質が好ましい。当該標識物質で前記テトラスパニンに対して親和性を有する物質又は／及び前記ホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質を標識する方法は、特に制限されず、自体公知の標識方法に従って行えばよい。これらの標識物質の測定は、標識物質に応じた自体公知の測定方法に従って行えばよい。
前記テトラスパニンに対して親和性を有する物質及び前記ホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質は、これら又はいずれか一方を一次親和性物質とし、当該一次親和性物質に対して特異的に結合する２次親和性物質（例えば、２次抗体）をさらに用いてもよい。当該２次親和性物質は、標識物質により標識されたものであってもよく、標識されたものが好ましく、標識物質により標識された２次抗体がより好ましい。また、当該標識物質や標識方法は前記したものと同様であり、好ましいものも同様である。
また、標識物質による標識は、前記テトラスパニンに対して親和性を有する物質又は／及び前記ホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質にアビジン類及びビオチン類の一方を結合させたもの、並びに標識物質にアビジン類及びビオチン類の残りの一方を結合させたものを用いて、アビジン類とビオチン類の結合を利用してもよい。ビオチン類としては、ビオチン、イミノビオチン、デスチオビオチン、ビオシチン、ビオチンスルホキド等が挙げられ、ビオチンが好ましい。アビジン類としては、アビジン、タマビジン、タマビジン２、ストレプトアビジン等が挙げられ、ストレプトアビジンが好ましい。前記テトラスパニンに対して親和性を有する物質又は／及び前記ホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質にアビジン類及びビオチン類の一方を結合させる方法、標識物質にアビジン類及びビオチン類の残りの一方を結合させる方法は、常法に従って行えばよい。
前記テトラスパニンに対して親和性を有する物質及び前記ホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質は、これら又はいずれか一方を一次親和性物質とし、当該一次親和性物質に対して特異的に結合する２次親和性物質（例えば、２次抗体）をさらに用いてもよい。当該２次親和性物質は、標識物質により標識されたものであってもよく、標識されたものが好ましく、標識物質により標識された２次抗体がより好ましい。また、当該標識物質や標識方法は前記したものと同様であり、好ましいものも同様である。
また、標識物質による標識は、前記テトラスパニンに対して親和性を有する物質又は／及び前記ホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質にアビジン類及びビオチン類の一方を結合させたもの、並びに標識物質にアビジン類及びビオチン類の残りの一方を結合させたものを用いて、アビジン類とビオチン類の結合を利用してもよい。ビオチン類としては、ビオチン、イミノビオチン、デスチオビオチン、ビオシチン、ビオチンスルホキド等が挙げられ、ビオチンが好ましい。アビジン類としては、アビジン、タマビジン、タマビジン２、ストレプトアビジン等が挙げられ、ストレプトアビジンが好ましい。前記テトラスパニンに対して親和性を有する物質又は／及び前記ホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質にアビジン類及びビオチン類の一方を結合させる方法、標識物質にアビジン類及びビオチン類の残りの一方を結合させる方法は、常法に従って行えばよい。
前記テトラスパニンに対して親和性を有する物質又は／及び前記ホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質は固相に固定化されていてもよく、ホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質が固相に固定化されているのが好ましい。
前記固相としては、例えばラテックス、ポリスチレン、ポリプロピレン、ポリアクリル酸、ポリメタクリル酸、ポリアクリルアミド、ポリグリシジルメタクリレート、ポリ塩化ビニール、ポリエチレン、ポリクロロカーボネート、シリコーン樹脂、シリコーンラバー等の合成高分子化合物、例えば多孔性ガラス、スリガラス、セラミックス、アルミナ、シリカゲル、活性炭、金属酸化物等の無機物質等が挙げられる。また、これらのうちの２種以上を組み合わせて用いてもよい。
前記固相の形状は特に限定されず、例えば、マイクロタイタープレート（ＥＬＩＳＡプレート）、ビーズ、チューブ（マイクロチューブ）、粒子、多数のチューブが一体成形された専用のトレイ、ディスク状片、試験管等が挙げられる。
前記固相にテトラスパニンに対して親和性を有する物質又は／及び前記ホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質を固定化する方法としては、通常この分野で用いられる方法であれば特に限定されず、常法に従って行えばよい。
ＡＤ診断補助方法において、前記テトラスパニンに対して親和性を有する物質及び前記ホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質の組み合わせは特に限定されないが、前記テトラスパニンに対して特異的に結合するタンパク質と前記ホスファチジルセリンに対して特異的に結合するタンパク質の組み合わせが好ましく、前記テトラスパニンに対して特異的に結合する抗体と前記ホスファチジルセリンに対して特異的に結合する抗体又は前記ホスファチジルセリン親和性タンパク質の組み合わせがより好ましい。
当該テトラスパニンに対して特異的に結合する抗体とホスファチジルセリンに対して特異的に結合する抗体又はホスファチジルセリン親和性タンパク質の組み合わせとしては、例えば、テトラスパニンに対して特異的に結合する抗体とＴｉｍタンパク質又はホスファチジルセリンに対して特異的に結合する抗体の組み合わせが挙げられ、抗ＣＤ９抗体、抗ＣＤ６３抗体、又は抗ＣＤ８１抗体とＴｉｍタンパク質の組み合わせが好ましく、抗ＣＤ９抗体又は抗ＣＤ６３抗体とＴｉｍタンパク質の組み合わせがより好ましく、抗ＣＤ９抗体又は抗ＣＤ６３抗体とＴｉｍ１又はＴｉｍ４の組み合わせが更に好ましく、抗ＣＤ９抗体又は抗ＣＤ６３抗体とＴｉｍ４の組み合わせが特に好ましく、抗ＣＤ９抗体とＴｉｍ４の組み合わせが最も好ましい。
当該テトラスパニンに対して特異的に結合する抗体とホスファチジルセリンに対して特異的に結合する抗体又はホスファチジルセリン親和性タンパク質の組み合わせとしては、例えば、テトラスパニンに対して特異的に結合する抗体とＴｉｍタンパク質又はホスファチジルセリンに対して特異的に結合する抗体の組み合わせが挙げられ、抗ＣＤ９抗体、抗ＣＤ６３抗体、又は抗ＣＤ８１抗体とＴｉｍタンパク質の組み合わせが好ましく、抗ＣＤ９抗体又は抗ＣＤ６３抗体とＴｉｍタンパク質の組み合わせがより好ましく、抗ＣＤ９抗体又は抗ＣＤ６３抗体とＴｉｍ１又はＴｉｍ４の組み合わせが更に好ましく、抗ＣＤ９抗体又は抗ＣＤ６３抗体とＴｉｍ４の組み合わせが特に好ましく、抗ＣＤ９抗体とＴｉｍ４の組み合わせが最も好ましい。
前記ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の測定は、具体的には、例えば、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ法）、酵素免疫測定法（ＥＩＡ法）、放射免疫測定法（ＲＩＡ法）、蛍光酵素免疫法（ＦＥＩＡ法）、蛍光免疫測定法（ＦＩＡ法）、化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ法）、化学発光免疫測定法（ＣＬＩＡ法）、電気化学発光免疫測定法（ＥＣＬＩＡ法）、イムノクロマトグラフィー法（ＩＣＡ法）、Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ Ｏｘｙｇｅｎ Ｃｈａｎｎｅｌｉｎｇ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ（ＬＯＣＩ法）、Ｌｉｑｕｉｄ－ｐｈａｓｅ Ｂｉｎｄｉｎｇ Ａｓｓａｙ－ＥｌｅｃｔｒｏＫｉｎｅｔｉｃ Ａｎａｌｙｔｅ Ｔｒａｎｓｐｏｒｔ Ａｓｓａｙ（ＬＢＡ－ＥＡＴＡ法）、レクチン電気泳動法等のキャピラリー電気泳動法、ウエスタンブロット法、ラテックス免疫比ろう法等の免疫比ろう法（ＮＩＡ法）、ラテックス免疫比濁法等の免疫比濁法（ＴＩＡ法）、微粒子計数免疫凝集測定法（ＰＣＩＡ法）等の免疫凝集法、表面プラズモン共鳴法（ＳＰＲ法）等の自体公知の免疫学的測定法や質量分析法が挙げられ、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ法）、化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ法）、化学発光免疫測定法（ＣＬＩＡ法）、電気化学発光免疫測定法（ＥＣＬＩＡ法）、キャピラリー電気泳動法が好ましく、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ法）、化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ法）、ＬＢＡ－ＥＡＴＡ法がより好ましく、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ法）が特に好ましい。
前記ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の測定原理は特に限定されず、例えば、サンドイッチ法、競合法等が挙げられ、サンドイッチ法が好ましい。また、当該測定原理として、ホモジアニス法、ヘテロジニアス法等を用いてもよく、ヘテロジニアス法が好ましい。
前記免疫学的測定法に準じた方法としては、例えば、前記テトラスパニンに対して特異的に結合する抗体や前記ホスファチジルセリンに対して特異的に結合する抗体以外の前記テトラスパニンに対して親和性を有する物質や前記ホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質を用いて、前記免疫学的測定法を行う方法等が挙げられ、好ましい方法も同様のものが挙げられる。
前記ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の測定原理は特に限定されず、例えば、サンドイッチ法、競合法等が挙げられ、サンドイッチ法が好ましい。また、当該測定原理として、ホモジアニス法、ヘテロジニアス法等を用いてもよく、ヘテロジニアス法が好ましい。
前記免疫学的測定法に準じた方法としては、例えば、前記テトラスパニンに対して特異的に結合する抗体や前記ホスファチジルセリンに対して特異的に結合する抗体以外の前記テトラスパニンに対して親和性を有する物質や前記ホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質を用いて、前記免疫学的測定法を行う方法等が挙げられ、好ましい方法も同様のものが挙げられる。
前記ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の測定は、具体的には、ＷＯ２０１６／０８８６８９に記載の方法に準じておこなえばよく、当該公報のすべての記載は本明細書に組み込まれる。
ＡＤ診断補助方法におけるホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の測定は、具体的には、例えば、（１）生体試料中のホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞と、テトラスパニンに対して親和性を有する物質と、ホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質とを接触させ、生体試料中のホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞と、テトラスパニンに対して親和性を有する物質と、ホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質とを含む複合体を形成させる工程（以下、「複合体形成工程」と略記する場合がある）、及び（２）当該複合体の量を測定する工程（以下、「複合体量測定工程」と略記する場合がある）を含む方法が好ましい方法として挙げられる。
テトラスパニンに対して親和性を有する物質、ホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質及びその組み合わせ等の具体例、好ましい例は前記のものと同様である。
複合体形成工程におけるテトラスパニンに対して親和性を有する物質とホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質と生体試料とを接触させる順序は特に限定されないが、生体試料とホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質とを接触させた後にテトラスパニンに対して親和性を有する物質を接触させるのが好ましい。
すなわち、複合体形成工程は、生体試料とホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質とを接触させて生体試料中の細胞外小胞とホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質とから構成される第１の複合体を形成させる第１手順と、当該第１の複合体とテトラスパニンに対して親和性を有する物質とを接触させて、当該第１の複合体とテトラスパニンに対して親和性を有する物質とから構成される第２の複合体を形成させる第２手順を含むのが好ましい。
すなわち、複合体形成工程は、生体試料とホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質とを接触させて生体試料中の細胞外小胞とホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質とから構成される第１の複合体を形成させる第１手順と、当該第１の複合体とテトラスパニンに対して親和性を有する物質とを接触させて、当該第１の複合体とテトラスパニンに対して親和性を有する物質とから構成される第２の複合体を形成させる第２手順を含むのが好ましい。
複合体形成工程は、具体的には、例えば、固相に固定化したホスファチジルセリンに対して特異的に結合する抗体又はＴｉｍタンパク質（Ｔｉｍ１又はＴｉｍ４が好ましく、Ｔｉｍ４がより好ましい）と生体試料とを接触させて、ホスファチジルセリンに対して特異的に結合する抗体又はＴｉｍタンパク質と生体試料中のホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞との第１の複合体を形成させ、当該第１の複合体とテトラスパニンに対して特異的に結合する抗体とを接触させ、当該第１の複合体とテトラスパニンに対して特異的に結合する抗体との第２の複合体を形成させる。
複合体を形成させた後、少なくとも複合体量測定工程の前に洗浄操作（Ｂ／Ｆ分離）を行うのが好ましい。
具体的には、例えば、上記方法において第１の複合体を形成させた後又は／及び第２の複合体を形成させた後に洗浄操作を行えばよく、第１の複合体を形成させた後に洗浄操作（Ｂ／Ｆ分離）を行い、更に第２の複合体を形成させた後に洗浄操作（Ｂ／Ｆ分離）を行うのが好ましい。
具体的には、例えば、上記方法において第１の複合体を形成させた後又は／及び第２の複合体を形成させた後に洗浄操作を行えばよく、第１の複合体を形成させた後に洗浄操作（Ｂ／Ｆ分離）を行い、更に第２の複合体を形成させた後に洗浄操作（Ｂ／Ｆ分離）を行うのが好ましい。
複合体量測定工程は、複合体形成工程で得られた、ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞と、テトラスパニンに対して親和性を有する物質と、ホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質を含む複合体の量を測定する工程であり、当該複合体の量が測定できる方法であれば、いずれの方法であってもよい。
複合体量測定工程は、より具体的には、例えば、（１）標識物質により標識されたテトラスパニンに対して特異的に結合する抗体を用いるか、（２）「テトラスパニンに対して特異的に結合する抗体」に対して特異的に結合する、標識物質により標識された標識２次抗体を用いるか、（３）アビジン類及びビオチン類の一方を結合させたテトラスパニンに対して特異的に結合する抗体とアビジン類及びビオチン類の残りの一方を結合させた標識物質を用いるか等して、前述の複合体形成工程で得られた、固相に固定化したホスファチジルセリンに対して特異的に結合する抗体又はＴｉｍタンパク質（Ｔｉｍ１又はＴｉｍ４が好ましく、Ｔｉｍ４がより好ましい）と生体試料中のホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞とテトラスパニンに対して特異的に結合する抗体と標識物質（酵素類、蛍光性物質が好ましい）を含む複合体における標識物質を検出すればよい。
複合体量測定工程は、より具体的には、例えば、（１）標識物質により標識されたテトラスパニンに対して特異的に結合する抗体を用いるか、（２）「テトラスパニンに対して特異的に結合する抗体」に対して特異的に結合する、標識物質により標識された標識２次抗体を用いるか、（３）アビジン類及びビオチン類の一方を結合させたテトラスパニンに対して特異的に結合する抗体とアビジン類及びビオチン類の残りの一方を結合させた標識物質を用いるか等して、前述の複合体形成工程で得られた、固相に固定化したホスファチジルセリンに対して特異的に結合する抗体又はＴｉｍタンパク質（Ｔｉｍ１又はＴｉｍ４が好ましく、Ｔｉｍ４がより好ましい）と生体試料中のホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞とテトラスパニンに対して特異的に結合する抗体と標識物質（酵素類、蛍光性物質が好ましい）を含む複合体における標識物質を検出すればよい。
複合体量測定工程において、標識物質を検出する前に洗浄操作（Ｂ／Ｆ分離）を行うのが好ましい。
ＡＤ診断補助方法におけるホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の測定は、より具体的には、例えば、固相プレートに固定化したホスファチジルセリンに対して特異的に結合する抗体又はＴｉｍタンパク質（Ｔｉ１又はＴｉｍ４が好ましく、Ｔｉｍ４がより好ましい）と生体試料とを接触させて、ホスファチジルセリンに対して特異的に結合する抗体又はＴｉｍタンパク質と生体試料中のホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞との第１の複合体を形成させ、要すればＢ／Ｆ分離後、（１）当該第１の複合体と標識物質により標識されたテトラスパニンに対して特異的に結合する抗体とを接触させ、当該第１の複合体と標識物質により標識されたテトラスパニンに対して特異的に結合する抗体との第２の複合体を形成させる、（２）前記第１の複合体とテトラスパニンに対して特異的に結合する抗体とを接触させ、当該第１の複合体とテトラスパニンに対して特異的に結合する抗体との第２の複合体を形成させ、要すればＢ／Ｆ分離後、当該第２の複合体と「当該テトラスパニンに対して特異的に結合する抗体」に対して特異的に結合する、標識物質により標識された標識２次抗体とを接触させ、当該第２の複合体と当該標識２次抗体との第３の複合体を形成させる、或いは（３）前記第１の複合体とアビジン類及びビオチン類の一方を結合させたテトラスパニンに対して特異的に結合する抗体とを接触させ、当該第１の複合体とアビジン類及びビオチン類の一方を結合させたテトラスパニンに対して特異的に結合する抗体との第２の複合体を形成させ、要すればＢ／Ｆ分離後、当該第２の複合体とアビジン類及びビオチン類の残りの一方を結合させた標識物質（酵素類、蛍光性物質が好ましい）の第３の複合体を形成させ、Ｂ／Ｆ分離の後、得られる第２の複合体又は第３の複合体の標識物質を検出すればよい。
生体試料の量や生体試料中のタンパク質の量（濃度）、生体試料中のホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量（濃度）や粒子数、これらと反応させるテトラスパニンに対して親和性を有する物質及びホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質の量（濃度）、標識物質や標識方法等は、生体試料の種類、要求される測定感度、用いる測定方法や測定装置などに応じて適宜設定すればよい。
また、生体試料中のホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量（濃度）等は、標準品を用いて検量線を作成することにより算出してもよい。当該標準品としては、例えば、ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞等が挙げられる。
また、生体試料中のホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量（濃度）等は、標準品を用いて検量線を作成することにより算出してもよい。当該標準品としては、例えば、ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞等が挙げられる。
ＡＤ診断補助方法におけるアルツハイマー型認知症の判定は、ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量を指標として、アルツハイマー型認知症を判定することを含む。
当該アルツハイマー型認知症の判定としては、例えば、被験者がアルツハイマー型認知症に罹患している可能性が高いか否かの判定、被験者がアルツハイマー型認知症に罹患している可能性の有無の判定、被験者がアルツハイマー型認知症を発症するリスクが高いか否かの判定、被験者がアルツハイマー型認知症を発症するリスクの有無の判定が挙げられ、被験者がアルツハイマー型認知症に罹患している可能性が高いか否かの判定、被験者がアルツハイマー型認知症に罹患している可能性の有無の判定が好ましい。
当該アルツハイマー型認知症の判定としては、例えば、被験者がアルツハイマー型認知症に罹患している可能性が高いか否かの判定、被験者がアルツハイマー型認知症に罹患している可能性の有無の判定、被験者がアルツハイマー型認知症を発症するリスクが高いか否かの判定、被験者がアルツハイマー型認知症を発症するリスクの有無の判定が挙げられ、被験者がアルツハイマー型認知症に罹患している可能性が高いか否かの判定、被験者がアルツハイマー型認知症に罹患している可能性の有無の判定が好ましい。
ＡＤ診断補助方法におけるアルツハイマー型認知症の判定は、例えば、前述のホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の測定により得られた、被験者に由来する生体試料中のホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量を、予め定めた基準値（カットオフ値）と比較することによりなされる。
具体的には、ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量が予め定めた基準値以下の場合は、被験者がアルツハイマー型認知症に罹患している可能性が高い、又は被験者がアルツハイマー型認知症に罹患している可能性がある、或いは被験者がアルツハイマー型認知症を発症するリスクが高い、又は被験者がアルツハイマー型認知症を発症するリスクがあると判定できる。
また、ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量が予め定めた基準値より大きい場合は、被検者がアルツハイマー型認知症に罹患している可能性が低い又は被検者がアルツハイマー型認知症に罹患している可能性がない、或いは被験者がアルツハイマー型認知症を発症するリスクが低い、又は被験者がアルツハイマー型認知症を発症するリスクがないと判定できる。
具体的には、ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量が予め定めた基準値以下の場合は、被験者がアルツハイマー型認知症に罹患している可能性が高い、又は被験者がアルツハイマー型認知症に罹患している可能性がある、或いは被験者がアルツハイマー型認知症を発症するリスクが高い、又は被験者がアルツハイマー型認知症を発症するリスクがあると判定できる。
また、ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量が予め定めた基準値より大きい場合は、被検者がアルツハイマー型認知症に罹患している可能性が低い又は被検者がアルツハイマー型認知症に罹患している可能性がない、或いは被験者がアルツハイマー型認知症を発症するリスクが低い、又は被験者がアルツハイマー型認知症を発症するリスクがないと判定できる。
前記予め定めた基準値（カットオフ値）は、アルツハイマー型認知症患者と健常者とを区別するために予め設定される、生体試料中のホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量である。
前記予め定めた基準値の決定方法は、特に限定されず、例えば、アルツハイマー型認知症に罹患している患者及び健常者から取得した生体試料に含まれるホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量を測定し、得られたホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量を用いて、ＲＯＣ解析（Ｒｅｃｅｉｖｅｒ Ｏｐｅｒａｔｉｎｇ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ）等の統計解析により定めることができる。前記予め定めた基準値の設定においては、感度、特異度、陽性的中率、陰性的中率などを考慮することが好ましい。前記予め定めた基準値は、例えば、感度が６０％以上となるように定めることができ、７０％以上となるものが好ましく、８０％以上となるものがより好ましく、９０％以上となるものが更に好ましく、例えば、特異度が６０％以上となるように定めることができ、７０％以上となるものが好ましく、８０％以上となるものがより好ましく、９０％以上となるものが更に好ましい。
前記予め定めた基準値の決定方法は、特に限定されず、例えば、アルツハイマー型認知症に罹患している患者及び健常者から取得した生体試料に含まれるホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量を測定し、得られたホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量を用いて、ＲＯＣ解析（Ｒｅｃｅｉｖｅｒ Ｏｐｅｒａｔｉｎｇ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ）等の統計解析により定めることができる。前記予め定めた基準値の設定においては、感度、特異度、陽性的中率、陰性的中率などを考慮することが好ましい。前記予め定めた基準値は、例えば、感度が６０％以上となるように定めることができ、７０％以上となるものが好ましく、８０％以上となるものがより好ましく、９０％以上となるものが更に好ましく、例えば、特異度が６０％以上となるように定めることができ、７０％以上となるものが好ましく、８０％以上となるものがより好ましく、９０％以上となるものが更に好ましい。
＜アルツハイマー型認知症の診断補助用試薬キット＞
第１発明－１におけるアルツハイマー型認知症の診断補助用試薬キット（以下、「ＡＤ診断補助用試薬キット」と略記する場合がある）は、テトラスパニンに対して親和性を有する物質、及びホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質を含む。
第１発明－１におけるアルツハイマー型認知症の診断補助用試薬キット（以下、「ＡＤ診断補助用試薬キット」と略記する場合がある）は、テトラスパニンに対して親和性を有する物質、及びホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質を含む。
ＡＤ診断補助用試薬キットにおける、テトラスパニンに対して親和性を有する物質、ホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質は、それぞれＡＤ診断補助方法において前述したものと同様であり、好ましいものも同様である。
当該テトラスパニンに対して親和性を有する物質及び当該ホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質は、それぞれ溶液状態であっても、凍結状態や乾燥状態、凍結乾燥状態であってもよい。また、当該テトラスパニンに対して親和性を有する物質、及び当該ホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質は、一つの試薬としてキットに含まれていても別々の試薬としてキットに含まれていてもよい。
当該テトラスパニンに対して親和性を有する物質及び当該ホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質は、それぞれ溶液状態であっても、凍結状態や乾燥状態、凍結乾燥状態であってもよい。また、当該テトラスパニンに対して親和性を有する物質、及び当該ホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質は、一つの試薬としてキットに含まれていても別々の試薬としてキットに含まれていてもよい。
ＡＤ診断補助用試薬キットにおけるテトラスパニンに対して親和性を有する物質とホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質の組み合わせは、ＡＤ診断補助方法において前述したものと同様の組み合わせが挙げられ、好ましい組み合わせも同様である。
ＡＤ診断補助用試薬キットにおけるテトラスパニンに対して親和性を有する物質又は／及びホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質は、固相に固定化されていてもよく、また標識物質により標識されていてもよい。当該固相や固相への固定化方法、当該標識物質や標識方法としては、ＡＤ診断補助方法において前述したものと同様であり、好ましいものも同様である。
ＡＤ診断補助用試薬キットは、前記テトラスパニンに対して親和性を有する物質又は／及び前記ホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質に対して特異的に結合する２次親和性物質（例えば、２次抗体）をさらに含んでいてもよい。ＡＤ診断補助用試薬キットにおける当該２次親和性物質は、ＡＤ診断補助方法において前述したものと同様であり、好ましいものも同様である。また、ＡＤ診断補助用試薬キットにおける２次親和性物質は、標識物質により標識されたものであってもよく、当該標識物質や標識方法はＡＤ診断補助方法において前述したものと同様であり、好ましいものも同様である。
ＡＤ診断補助用試薬キットにおける前記テトラスパニンに対して親和性を有する物質又は／及び前記ホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質は、アビジン類及びビオチン類の一方が結合したものでもよく、当該アビジン類及びビオチン類としては、ＡＤ診断補助方法において前述したものと同様であり、好ましいものも同様である。
ＡＤ診断補助用試薬キットは、さらにアビジン類及びビオチン類の一方が結合した標識物質を含んでいてもよく、当該標識物質や標識方法としては、ＡＤ診断補助方法において前述したものと同様であり、好ましいものも同様である。
ＡＤ診断補助用試薬キットは、さらにアビジン類及びビオチン類の一方が結合した標識物質を含んでいてもよく、当該標識物質や標識方法としては、ＡＤ診断補助方法において前述したものと同様であり、好ましいものも同様である。
ＡＤ診断補助用試薬キットにおけるテトラスパニンに対して親和性を有する物質及びホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質の濃度（量）は、測定方法に応じて、通常この分野で用いられている範囲で適宜設定されればよい。テトラスパニンに対して親和性を有する物質は、例えば、使用時の濃度として、固相に固定化する場合は、通常１０～２００００ｎｇ／ｍＬ、１００～１００００ｎｇ／ｍＬとなる量が含まれるものが好ましく、検出に用いる場合は、通常１０～５０００ｎｇ／ｍＬ、１００～５００ｎｇ／ｍＬとなる量が含まれるものが好ましい。また、ホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質は、例えば、使用時の濃度として、固相に固定化する場合は、通常１０～２００００ｎｇ／ｍＬ、１００～１００００ｎｇ／ｍＬとなる量が含まれるものが好ましく、検出に用いる場合は、通常１０～５０００ｎｇ／ｍＬ、１００～５００ｎｇ／ｍＬとなる量が含まれるものが好ましい。
また、通常この分野で用いられる試薬類、例えば、緩衝剤、反応促進剤、糖類、タンパク質、塩類、界面活性剤等の安定化剤、防腐剤等を、テトラスパニンに対して親和性を有する物質又は／及びホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質と共存させてもよい。これらの濃度、ｐＨも通常この分野で用いられている範囲から適宜選択すればよい。
さらに、ＡＤ診断補助用試薬キットは、テトラスパニンに対して親和性を有する物質及びホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質の他に、これらの親和性物質を用いたテトラスパニン及びホスファチジルセリンを有する細胞外小胞の量を測定する為に必要な試薬を備えていてもよい。このような試薬としては、例えば、洗浄剤、試料希釈液（試料を希釈する為の試薬）、標識物質を検出する為の試薬、これらの親和性物質に標識物質を結合させる為の試薬、これらの親和性物質を固相に固定化する為の試薬、これらの親和性物質や標識物質にアビジン類又はビオチン類を結合させるための試薬等が挙げられる。これらの試薬の濃度、ｐＨ等も通常この分野で用いられている範囲から適宜選択すればよい。
ＡＤ診断補助用試薬キットは、ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞について検量線を作成するために用いられる標準品を含んでいてもよい。当該標準品としては、例えば、ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞が挙げられる。当該標準品は、溶液状態であっても、凍結状態や乾燥状態、凍結乾燥状態であってもよい。また、通常この分野で用いられる試薬類、例えば、緩衝剤、反応促進剤、糖類、タンパク質、塩類、界面活性剤等の安定化剤、防腐剤等を、当該標準品と共存させてもよい。これらの濃度、ｐＨも通常この分野で用いられている範囲から適宜選択すればよい。
ＡＤ診断補助用試薬キットには、添付文書や取扱説明書が含まれていてもよい。当該添付文書や取扱説明書としては、例えば、被験者に由来する生体試料中のホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量を測定すること又は／及びホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量を指標として、被験者がアルツハイマー型認知症であると判定することが記載された添付文書や取扱説明書等が挙げられる。これらの添付文書や取扱説明書は、複数のものに分かれて記載されたものであっても、一つのものに纏めて記載されたものであってもよい。
ＡＤ診断補助用試薬キットは、具体的には、例えば、テトラスパニンに対して親和性を有する物質及びホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質のいずれか一方が固相に固定化されたものとテトラスパニンに対して親和性を有する物質及びホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質の残りの一方が、標識物質と結合しているもの又は当該残りの一方の親和性物質とこれを間接的に標識物質と結合させる為の成分を含むキットが挙げられる。
ＡＤ診断補助用試薬キットは、テトラスパニンに対して親和性を有する物質及びホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質のいずれか一方が固相に固定化されたものと下記（１）～（３）から選ばれるいずれか１つを含むキットが好ましいものとして挙げられる。
（１）テトラスパニンに対して親和性を有する物質及びホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質の残りの一方が標識物質と結合したもの、（２）テトラスパニンに対して親和性を有する物質及びホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質の残りの一方、並びに当該親和性物質に対して特異的に結合する２次親和性物質が標識物質と結合したもの、（３）テトラスパニンに対して親和性を有する物質及びホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質の残りの一方がアビジン類及びビオチン類の一方と結合したもの、並びにアビジン類及びビオチン類の残りの一方が標識物質と結合したもの
ＡＤ診断補助用試薬キットは、テトラスパニンに対して親和性を有する物質及びホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質のいずれか一方が固相に固定化されたものと下記（１）～（３）から選ばれるいずれか１つを含むキットが好ましいものとして挙げられる。
（１）テトラスパニンに対して親和性を有する物質及びホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質の残りの一方が標識物質と結合したもの、（２）テトラスパニンに対して親和性を有する物質及びホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質の残りの一方、並びに当該親和性物質に対して特異的に結合する２次親和性物質が標識物質と結合したもの、（３）テトラスパニンに対して親和性を有する物質及びホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質の残りの一方がアビジン類及びビオチン類の一方と結合したもの、並びにアビジン類及びビオチン類の残りの一方が標識物質と結合したもの
ＡＤ診断補助用試薬キットの好ましい具体例としては、例えば、ホスファチジルセリンに対して特異的に結合する抗体（抗ＣＤ９抗体又は抗ＣＤ６３抗体がより好ましく、抗ＣＤ９抗体が特に好ましい）又はＴｉｍタンパク質（Ｔｉｍ４又はＴｉｍ１がより好ましく、Ｔｉｍ４が特に好ましい）が固定化された固相プレートと下記（１）～（３）から選ばれるいずれか１つを含むキットが挙げられる。
（１）ホスファチジルセリンに対して特異的に結合する抗体又はＴｉｍタンパク質の残りの一方が標識物質と結合したものを含む溶液（通常１０～５０００ｎｇ／ｍＬ、１００～５００ｎｇ／ｍＬが好ましい）、（２）ホスファチジルセリンに対して特異的に結合する抗体又はＴｉｍタンパク質の残りの一方を含む溶液（通常１０～５０００ｎｇ／ｍＬ、１００～５００ｎｇ／ｍＬが好ましい）、並びに当該親和性物質に対して特異的に結合する２次親和性物質が標識物質と結合したものを含む溶液（通常１０～５０００ｎｇ／ｍＬ、１００～５００ｎｇ／ｍＬが好ましい）、（３）アビジン類及びビオチン類の一方が結合したテトラスパニンに対して特異的に結合する抗体（抗ＣＤ９抗体又は抗ＣＤ６３抗体がより好ましく、抗ＣＤ９抗体が特に好ましい）を含む溶液（通常１０～５０００ｎｇ／ｍＬ、１００～５００ｎｇ／ｍＬが好ましい）、並びにアビジン類及びビオチン類の残りの一方が結合した標識物質を含む溶液（通常１０～５０００ｎｇ／ｍＬ、１００～５００ｎｇ／ｍＬが好ましい）。
（１）ホスファチジルセリンに対して特異的に結合する抗体又はＴｉｍタンパク質の残りの一方が標識物質と結合したものを含む溶液（通常１０～５０００ｎｇ／ｍＬ、１００～５００ｎｇ／ｍＬが好ましい）、（２）ホスファチジルセリンに対して特異的に結合する抗体又はＴｉｍタンパク質の残りの一方を含む溶液（通常１０～５０００ｎｇ／ｍＬ、１００～５００ｎｇ／ｍＬが好ましい）、並びに当該親和性物質に対して特異的に結合する２次親和性物質が標識物質と結合したものを含む溶液（通常１０～５０００ｎｇ／ｍＬ、１００～５００ｎｇ／ｍＬが好ましい）、（３）アビジン類及びビオチン類の一方が結合したテトラスパニンに対して特異的に結合する抗体（抗ＣＤ９抗体又は抗ＣＤ６３抗体がより好ましく、抗ＣＤ９抗体が特に好ましい）を含む溶液（通常１０～５０００ｎｇ／ｍＬ、１００～５００ｎｇ／ｍＬが好ましい）、並びにアビジン類及びビオチン類の残りの一方が結合した標識物質を含む溶液（通常１０～５０００ｎｇ／ｍＬ、１００～５００ｎｇ／ｍＬが好ましい）。
＜アルツハイマー型認知症診断補助用装置＞
第１発明－１におけるアルツハイマー型認知症の診断補助用装置（以下、「ＡＤ診断補助用装置」と略記する場合がある）は、被験者に由来する生体試料中のホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量を測定する測定部、及び前記ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量を指標として被験者がアルツハイマー型認知症であると判定する判定部を有する。
第１発明－１におけるアルツハイマー型認知症の診断補助用装置（以下、「ＡＤ診断補助用装置」と略記する場合がある）は、被験者に由来する生体試料中のホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量を測定する測定部、及び前記ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量を指標として被験者がアルツハイマー型認知症であると判定する判定部を有する。
ＡＤ診断補助用装置における、生体試料、被験者、細胞外小胞は、それぞれ前記のものと同様であり、好ましいものも同様である。
ＡＤ診断補助用装置を構成する測定部、判定部等は同一の装置内に配置されていても、それぞれ別体となっていてもよい。
ＡＤ診断補助用装置における測定部は、装置に導入された生体試料中のホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量を測定する部位である。当該測定部の大きさや構成は特に限定されない。当該測定部としては、例えば、ＥＬＩＳＡ法に用いられるマイクロプレートリーダー又はＣＣＤを用いて撮像するイメージング装置、ウエスタンブロット法又はマイクロアレイ（マイクロチップ）を利用した方法に用いられるイメージング装置、質量分析法に用いられる質量分析装置、分子間相互作用解析装置、及びフローサイトメトリーに用いられるフローサイトメーター、ＨＰＬＣ法やキャピラリー電気泳動法に用いられる紫外可視光検出器や蛍光検出器等が挙げられる。
ＡＤ診断補助用装置における、ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞、量、ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の測定方法の測定対象、ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の測定や当該測定に用いられる物質は、ＡＤ診断補助方法のものと同様であり、好ましいものや具体例も同様である。
ＡＤ診断補助用装置は、演算部を備えていてもよい。ＡＤ診断補助用装置における演算部は、前記測定部で得られた生体試料中のホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の質量や濃度と相関関係を有する実測値（例えば、吸光度、吸光度変化量、透過光、透過光変化量、蛍光強度、蛍光強度変化量、発光量、発光量変化量、濁度、濁度変化率、散乱光、散乱光変化率、反射率、反射率変化量、屈折率、屈折率変化量等）を、質量や濃度等に換算する部位である。
なお、当該実測値、演算部により換算された質量や濃度等は、メモリやハードディスクなど装置に備えられた記憶装置等に記憶されてもよい。
なお、当該実測値、演算部により換算された質量や濃度等は、メモリやハードディスクなど装置に備えられた記憶装置等に記憶されてもよい。
ＡＤ診断補助用装置における判定部は、前記測定部又は前記演算部で得られたホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量を指標として、アルツハイマー型認知症を判定する部位である。
ＡＤ診断補助用装置におけるアルツハイマー型認知症の判定や当該判定に用いられる予め定められた基準値、予め定められた基準値の決定方法は、ＡＤ診断補助方法において前述したものと同様であり、好ましいものや具体例も同様である。
ＡＤ診断補助用装置おける予め定められた基準値は、ＡＤ診断補助用装置に予め記憶されていてもよいし、判定の際にＡＤ診断補助用装置の入力部位から入力されてもよい。
ＡＤ診断補助用装置は、出力部を備えていてもよい。出力部では、判定の結果をディスプレイなどの表示装置やプリンターなどの印刷装置に表示又は出力させるなどの処理が行われる。
１－２．第１発明－２
＜アルツハイマー型認知症の症診断補助用バイオマーカーセット＞
第１発明－２におけるアルツハイマー型認知症の症診断補助用バイオマーカーセット（以下、「ＡＤマーカーセット」と略記する場合がある）は、ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞とテトラスパニンを有する細胞外小胞を含むバイオマーカーの組み合わせである。
ＡＤマーカーセットによれば、例えば、前記テトラスパニンを有する細胞外小胞の量に対するホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の割合（以下「ＡＤマーカー（ＩＩ）」と略記する場合がある）を求めることができ、当該割合は、被験者がアルツハイマー型認知症であると判定する為の指標として用いることができる。
＜アルツハイマー型認知症の症診断補助用バイオマーカーセット＞
第１発明－２におけるアルツハイマー型認知症の症診断補助用バイオマーカーセット（以下、「ＡＤマーカーセット」と略記する場合がある）は、ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞とテトラスパニンを有する細胞外小胞を含むバイオマーカーの組み合わせである。
ＡＤマーカーセットによれば、例えば、前記テトラスパニンを有する細胞外小胞の量に対するホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の割合（以下「ＡＤマーカー（ＩＩ）」と略記する場合がある）を求めることができ、当該割合は、被験者がアルツハイマー型認知症であると判定する為の指標として用いることができる。
ＡＤマーカーセットにおける細胞外小胞は、前記細胞外小胞と同様であり、好ましいものも同様である。
ＡＤマーカーセットにおけるホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞は、ＡＤマーカーのものと同様であり、好ましいものも同様である。
ＡＤマーカーセットのテトラスパニンを有する細胞外小胞は、ＣＤ９、ＣＤ６３、ＣＤ８１、ＣＤ１５１等の少なくとも一つのテトラスパニンを膜表面に有しており、ＣＤ９、ＣＤ６３、及びＣＤ８１から選ばれる少なくとも一つのテトラスパニンを有するものが好ましく、ＣＤ９及びＣＤ６３から選ばれる少なくとも一つのテトラスパニンを有するものがより好ましく、ＣＤ９を有するものが特に好ましい。
ＡＤマーカーセットのホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞におけるテトラスパニンは、前記テトラスパニンを有する細胞外小胞におけるテトラスパニンと同一のものであっても異なるものであってもよく、同一のものが好ましい。
＜アルツハイマー型認知症の診断を補助する方法（ＩＩ）＞
第１発明－２におけるアルツハイマー型認知症の診断を補助する方法（以下、「ＡＤ診断補助方法（ＩＩ）」と略記する場合がある）は、生体試料中のホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量、及び生体試料中のテトラスパニンを有する細胞外小胞の量を測定すること、テトラスパニンを有する細胞外小胞の量に対するホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の割合（ＡＤマーカー（ＩＩ））を算出すること、テトラスパニンを有する細胞外小胞の量に対する、ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の割合を指標として、被験者がアルツハイマー型認知症であると判定することを含む。
第１発明－２におけるアルツハイマー型認知症の診断を補助する方法（以下、「ＡＤ診断補助方法（ＩＩ）」と略記する場合がある）は、生体試料中のホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量、及び生体試料中のテトラスパニンを有する細胞外小胞の量を測定すること、テトラスパニンを有する細胞外小胞の量に対するホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の割合（ＡＤマーカー（ＩＩ））を算出すること、テトラスパニンを有する細胞外小胞の量に対する、ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の割合を指標として、被験者がアルツハイマー型認知症であると判定することを含む。
ＡＤ診断補助方法（ＩＩ）における生体試料、被験者、細胞外小胞は、それぞれ前記のものと同様であり、好ましいものも同様である。
ＡＤ診断補助方法（ＩＩ）における、ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞、量、ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の測定対象、ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の測定や当該測定に用いられる物質は、ＡＤ診断補助方法のものと同様であり、好ましいものや具体例も同様である。
ＡＤ診断補助方法（ＩＩ）におけるテトラスパニンを有する細胞外小胞は、ＡＤマーカーセットにおいて前述したものと同様であり、好ましいものも同様である。
ＡＤ診断補助方法（ＩＩ）における前記ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞におけるテトラスパニンと前記テトラスパニンを有する細胞外小胞におけるテトラスパニンは同一のものであっても異なるものであってもよく、同一のものが好ましい。
ＡＤ診断補助方法（ＩＩ）におけるテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の測定は、１種のテトラスパニンを有する細胞外小胞の量（例えば、ＣＤ９を有する細胞外小胞のみ）を測定対象としても、２種以上のテトラスパニン細胞外小胞の量（例えば、ＣＤ９を有する細胞外小胞、及びＣＤ６３を有する細胞外小胞）を測定対象としてもよく、１種のテトラスパニンを有する細胞外小胞の量のみを測定対象とするのが好ましい。
当該テトラスパニンを有する細胞外小胞の量の測定は、通常この分野で用いられる方法であれば、特に限定されず、例えば、テトラスパニンに対して親和性を有する物質を用いる免疫学的測定方法、質量分析法、これらを組み合わせた方法が挙げられ、テトラスパニンに対して親和性を有する物質を用いる免疫学的測定方法が好ましい。なお、当該免疫学的測定方法には、免疫反応（抗原抗体反応）を利用する方法の他、抗原抗体反応以外の２分子間における結合力を利用する方法（免疫学的測定方法に準じた方法）も含まれる。
前記テトラスパニンに対して親和性を有する物質としては、ＡＤ診断補助方法において前述したものと同様のものが挙げられ、テトラスパニンに対して特異的に結合するタンパク質が好ましく、テトラスパニンに対して特異的に結合する抗体がより好ましい。当該テトラスパニンに対して特異的に結合する抗体としては、例えば、抗ＣＤ９抗体、抗ＣＤ６３抗体、抗ＣＤ８１抗体、抗ＣＤ１５１抗体等が挙げられ、抗ＣＤ９抗体、抗ＣＤ６３抗体が好ましく、抗ＣＤ９抗体がより好ましい。前記テトラスパニンに対して親和性を有する物質は、１種のみを用いても、２種以上を用いてもよく、１種のみを用いるのが好ましい。
当該テトラスパニンを有する細胞外小胞の量の測定は、通常この分野で用いられる方法であれば、特に限定されず、例えば、テトラスパニンに対して親和性を有する物質を用いる免疫学的測定方法、質量分析法、これらを組み合わせた方法が挙げられ、テトラスパニンに対して親和性を有する物質を用いる免疫学的測定方法が好ましい。なお、当該免疫学的測定方法には、免疫反応（抗原抗体反応）を利用する方法の他、抗原抗体反応以外の２分子間における結合力を利用する方法（免疫学的測定方法に準じた方法）も含まれる。
前記テトラスパニンに対して親和性を有する物質としては、ＡＤ診断補助方法において前述したものと同様のものが挙げられ、テトラスパニンに対して特異的に結合するタンパク質が好ましく、テトラスパニンに対して特異的に結合する抗体がより好ましい。当該テトラスパニンに対して特異的に結合する抗体としては、例えば、抗ＣＤ９抗体、抗ＣＤ６３抗体、抗ＣＤ８１抗体、抗ＣＤ１５１抗体等が挙げられ、抗ＣＤ９抗体、抗ＣＤ６３抗体が好ましく、抗ＣＤ９抗体がより好ましい。前記テトラスパニンに対して親和性を有する物質は、１種のみを用いても、２種以上を用いてもよく、１種のみを用いるのが好ましい。
前記テトラスパニンに対して親和性を有する物質は、市販品でも常法により適宜調製されたものでもよい。また、前記テトラスパニンに対して特異的に結合する抗体は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体の何れであってもよく、これらを単独であるいはこれらを適宜組み合わせて用いてもよい。また、前記テトラスパニンに対して特異的に結合する抗体は、免疫グロブリン分子そのもの（ｉｎｔａｃｔ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ）のみならず、その断片であって抗原への結合能を有する断片であるＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ’）等のフラグメント抗体や一本鎖抗体（ｓｉｎｇｌｅ ｃｈａｉｎ Ｆｖ）、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ等の合成抗体等を用いてもよい。また、これらの抗体を調製する場合は、例えば「免疫測定法」（生物化学的測定研究会編集、講談社、２０１４）等に記載の方法に従っておこなえばよい。
ＡＤ診断補助方法（ＩＩ）におけるテトラスパニンに対して親和性を有する物質は、標識物質によって標識されたものであってもよく、標識物質や標識方法は、ＡＤ診断補助方法と同様であり、好ましいものや具体例も同様である。
また、ＡＤ診断補助方法と同様、テトラスパニンに対して親和性を有する物質を一次親和性物質とし、当該一次親和性物質に対して特異的に結合する２次親和性物質（例えば、２次抗体）をさらに用いてもよい。当該２次親和性物質は、標識物質により標識されたものであってもよく、当該標識物質や標識方法はＡＤ診断補助方法において前述したものと同様であり、好ましいものも同様である。
さらに、標識物質による標識は、前記テトラスパニンに対して親和性を有する物質にアビジン類及びビオチン類の一方を結合させたもの、並びに標識物質にアビジン類及びビオチン類の残りの一方を結合させたものを用いて、アビジン類とビオチン類の結合を利用してもよい。当該アビジン類や当該ビオチン類、テトラスパニンに対して親和性を有する物質にアビジン類やビオチン類を結合させる方法は、ＡＤ診断補助方法において前述したものと同様であり、好ましいものや具体例も同様である。
また、ＡＤ診断補助方法と同様、テトラスパニンに対して親和性を有する物質を一次親和性物質とし、当該一次親和性物質に対して特異的に結合する２次親和性物質（例えば、２次抗体）をさらに用いてもよい。当該２次親和性物質は、標識物質により標識されたものであってもよく、当該標識物質や標識方法はＡＤ診断補助方法において前述したものと同様であり、好ましいものも同様である。
さらに、標識物質による標識は、前記テトラスパニンに対して親和性を有する物質にアビジン類及びビオチン類の一方を結合させたもの、並びに標識物質にアビジン類及びビオチン類の残りの一方を結合させたものを用いて、アビジン類とビオチン類の結合を利用してもよい。当該アビジン類や当該ビオチン類、テトラスパニンに対して親和性を有する物質にアビジン類やビオチン類を結合させる方法は、ＡＤ診断補助方法において前述したものと同様であり、好ましいものや具体例も同様である。
ＡＤ診断補助方法（ＩＩ）におけるテトラスパニンに対して親和性を有する物質は、固相に固定化されていてもよく、当該固相や固相に前記テトラスパニンに対して親和性を有する物質を固定化する方法は、ＡＤ診断補助方法において前述したものと同様であり、好ましいものや具体例も同様である。
ＡＤ診断補助方法（ＩＩ）における前記ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞を測定する為に用いられるテトラスパニンに対して親和性を有する物質と、前記テトラスパニンを有する細胞外小胞を測定する為に用いられるテトラスパニンに対して親和性を有する物質は、少なくとも一つの同一のテトラスパニンに対して親和性を有する物質（例えば、両者の測定に少なくともＣＤ９に対して親和性を有する物質を使用する）を用いても、異なる種類のテトラスパニンに対して親和性を有する物質（例えば、一方の測定にＣＤ９に対して親和性を有する物質を使用し、残りの一方の測定にＣＤ６３に対して親和性を有する物質を使用する）を用いてもよく、少なくとも一つの同一のテトラスパニンに対して親和性を有する物質を使用するのが好ましく、同一のテトラスパニンに対して親和性を有する物質のみ（例えば、両者の測定にＣＤ９に対して親和性を有する物質のみを使用する）を使用するのがより好ましく、同一のテトラスパニンに対して親和性を有する物質を一種類のみ（例えば、両者の測定に抗ＣＤ９抗体のみを使用する）使用するのが特に好ましい。
ＡＤ診断補助方法（ＩＩ）におけるテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の測定、測定原理は、ＡＤ診断補助方法のものと同様であり、好ましいものも同様である。
ＡＤ診断補助方法（ＩＩ）におけるテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の測定は、具体的には、例えば、（１）生体試料中のテトラスパニンを有する細胞外小胞と、テトラスパニンに対して親和性を有する物質とを接触させ、生体試料中のテトラスパニンを有する細胞外小胞と、テトラスパニンに対して親和性を有する物質を含む複合体を形成させる工程（複合体形成工程）、及び（２）当該複合体の量を測定する工程（複合体量測定工程）を含む方法が好ましい方法として挙げられる。
ＡＤ診断補助方法（ＩＩ）のテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の測定における複合体形成工程は、生体試料とテトラスパニンに対して親和性を有する物質とを接触させて生体試料中の細胞外小胞とテトラスパニンに対して親和性を有する物質とから構成される第１の複合体を形成させる第１手順と、当該第１の複合体とテトラスパニンに対して親和性を有する物質とを接触させて、当該第１の複合体とテトラスパニンに対して親和性を有する物質とから構成される第２の複合体を形成させる第２手順を含むのが好ましい。
当該第１の複合体を形成させる際に使用するテトラスパニンに対して親和性を有する物質と当該第２の複合体を形成させる際に使用するテトラスパニンに対して親和性を有する物質とは、同一のものが好ましい。
当該第１の複合体を形成させる際に使用するテトラスパニンに対して親和性を有する物質と当該第２の複合体を形成させる際に使用するテトラスパニンに対して親和性を有する物質とは、同一のものが好ましい。
ＡＤ診断補助方法（ＩＩ）のテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の測定における複合体形成工程は、具体的には、例えば、固相に固定化したテトラスパニンに対して特異的に結合する抗体（抗ＣＤ９抗体、抗ＣＤ６３抗体が好ましく、抗ＣＤ９抗体がより好ましい）と生体試料とを接触させて、テトラスパニンに対して特異的に結合する抗体と生体試料中のホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞との第１の複合体を形成させ、当該第１の複合体とテトラスパニンに対して特異的に結合する抗体（抗ＣＤ９抗体、抗ＣＤ６３抗体が好ましく、抗ＣＤ９抗体がより好ましい）を接触させ、当該第１の複合体とテトラスパニンに対して特異的に結合する抗体との第２の複合体を形成させる。
複合体を形成させた後、少なくとも複合体量測定工程の前に洗浄操作（Ｂ／Ｆ分離）を行うのが好ましい。
具体的には、例えば、上記方法において第１の複合体を形成させた後又は／及び第２の複合体を形成させた後に洗浄操作を行えばよく、第１の複合体を形成させた後に洗浄操作（Ｂ／Ｆ分離）を行い、更に第２の複合体を形成させた後に洗浄操作（Ｂ／Ｆ分離）を行うのが好ましい。
具体的には、例えば、上記方法において第１の複合体を形成させた後又は／及び第２の複合体を形成させた後に洗浄操作を行えばよく、第１の複合体を形成させた後に洗浄操作（Ｂ／Ｆ分離）を行い、更に第２の複合体を形成させた後に洗浄操作（Ｂ／Ｆ分離）を行うのが好ましい。
ＡＤ診断補助方法（ＩＩ）のテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の測定における複合体量測定工程は、複合体形成工程で得られた、テトラスパニンを有する細胞外小胞と、テトラスパニンに対して親和性を有する物質を含む複合体の量を測定する工程であり、当該複合体の量が測定できる方法であれば、いずれの方法であってもよい。
当該複合体量測定工程は、より具体的には、例えば、（１）標識物質により標識されたテトラスパニンに対して特異的に結合する抗体を用いるか、（２）「テトラスパニンに対して特異的に結合する抗体」に対して特異的に結合する、標識物質により標識された標識２次抗体を用いるか、（３）アビジン類及びビオチン類の一方を結合させたテトラスパニンに対して特異的に結合する抗体とアビジン類及びビオチン類の残りの一方を結合させた標識物質を用いるか等して、前述の複合体形成工程で得られた、固相プレートに固定化したテトラスパニンに対して特異的に結合する抗体（抗ＣＤ９抗体、抗ＣＤ６３抗体が好ましく、抗ＣＤ９抗体がより好ましい）と生体試料中のテトラスパニンを有する細胞外小胞とテトラスパニンに対して特異的に結合する抗体（抗ＣＤ９抗体、抗ＣＤ６３抗体が好ましく、抗ＣＤ９抗体がより好ましい）と標識物質（酵素類、蛍光性物質が好ましい）を含む複合体における標識物質を検出すればよい。
当該複合体量測定工程は、より具体的には、例えば、（１）標識物質により標識されたテトラスパニンに対して特異的に結合する抗体を用いるか、（２）「テトラスパニンに対して特異的に結合する抗体」に対して特異的に結合する、標識物質により標識された標識２次抗体を用いるか、（３）アビジン類及びビオチン類の一方を結合させたテトラスパニンに対して特異的に結合する抗体とアビジン類及びビオチン類の残りの一方を結合させた標識物質を用いるか等して、前述の複合体形成工程で得られた、固相プレートに固定化したテトラスパニンに対して特異的に結合する抗体（抗ＣＤ９抗体、抗ＣＤ６３抗体が好ましく、抗ＣＤ９抗体がより好ましい）と生体試料中のテトラスパニンを有する細胞外小胞とテトラスパニンに対して特異的に結合する抗体（抗ＣＤ９抗体、抗ＣＤ６３抗体が好ましく、抗ＣＤ９抗体がより好ましい）と標識物質（酵素類、蛍光性物質が好ましい）を含む複合体における標識物質を検出すればよい。
複合体量測定工程において、標識物質を検出する前に洗浄操作（Ｂ／Ｆ分離）を行うのが好ましい。
ＡＤ診断補助方法（ＩＩ）における前記テトラスパニンを有する細胞外小胞の量の測定は、より具体的には、例えば、固相プレートに固定化したテトラスパニンに対して特異的に結合する抗体（抗ＣＤ９抗体、抗ＣＤ６３抗体が好ましく、抗ＣＤ９抗体がより好ましい）と生体試料とを接触させて、テトラスパニンに対して特異的に結合する抗体と生体試料中のテトラスパニンを有する細胞外小胞との第１の複合体を形成させ、要すればＢ／Ｆ分離の後、（１）当該第１の複合体と標識物質により標識されたテトラスパニンに対して特異的に結合する抗体（抗ＣＤ９抗体、抗ＣＤ６３抗体が好ましく、抗ＣＤ９抗体がより好ましい）とを接触させ、当該第１の複合体と標識物質により標識されたテトラスパニンに対して特異的に結合する抗体との第２の複合体を形成させる、（２）前記第１の複合体とテトラスパニンに対して特異的に結合する抗体（抗ＣＤ９抗体、抗ＣＤ６３抗体が好ましく抗ＣＤ９抗体がより好ましい）とを接触させ、当該第１の複合体とテトラスパニンに対して特異的に結合する抗体との第２の複合体を形成させ、要すればＢ／Ｆ分離後、当該第２の複合体と「当該テトラスパニンに対して特異的に結合する抗体」に対して特異的に結合する、標識物質により標識された標識２次抗体とを接触させ、当該第２の複合体と当該標識２次抗体との第３の複合体を形成させる、或いは（３）前記第１の複合体とアビジン類及びビオチン類の一方を結合させたテトラスパニンに対して特異的に結合する抗体（抗ＣＤ９抗体、抗ＣＤ６３抗体が好ましく、抗ＣＤ９抗体がより好ましい）とを接触させ、当該第１の複合体とアビジン類及びビオチン類の一方を結合させたテトラスパニンに対して特異的に結合する抗体との第２の複合体を形成させ、要すればＢ／Ｆ分離後、当該第２の複合体とアビジン類及びビオチン類の残りの一方を結合させた標識物質（酵素類、蛍光性物質が好ましい）の第３の複合体を形成させ、Ｂ／Ｆ分離の後、得られる第２の複合体又は第３の複合体の標識物質（酵素類、蛍光性物質が好ましい）を検出すればよい。
生体試料の量や生体試料中のタンパク質の量（濃度）、生体試料中のテトラスパニンを有する細胞外小胞の量（濃度）や粒子数、これらと反応させるテトラスパニンに対して親和性を有する物質の量（濃度）、標識物質や標識方法等は、生体試料の種類、要求される測定感度、用いる測定方法や測定装置などに応じて適宜設定すればよい。
また、生体試料中のテトラスパニンを有する細胞外小胞の量（濃度）等は、標準品を用いて検量線を作成することにより算出してもよい。当該標準品としては、例えば、テトラスパニンを有する細胞外小胞等が挙げられる。
また、生体試料中のテトラスパニンを有する細胞外小胞の量（濃度）等は、標準品を用いて検量線を作成することにより算出してもよい。当該標準品としては、例えば、テトラスパニンを有する細胞外小胞等が挙げられる。
前記テトラスパニンを有する細胞外小胞の量に対するホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の割合は、前記ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量（Ａ）を、前記テトラスパニンを有する細胞外小胞の量（Ｂ）により除すること（（Ａ）／（Ｂ））により算出すればよい。
ＡＤ診断補助方法（ＩＩ）におけるアルツハイマー型認知症の判定は、前記テトラスパニンを有する細胞外小胞の量（Ａ）に対する前記ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量（Ｂ）の割合（（Ａ）／（Ｂ））を指標として、アルツハイマー型認知症を判定することを含む。
当該アルツハイマー型認知症の判定としては、例えば、被験者がアルツハイマー型認知症に罹患している可能性が高いか否かの判定、被験者がアルツハイマー型認知症に罹患している可能性の有無の判定、被験者がアルツハイマー型認知症を発症するリスクが高いか否かの判定、被験者がアルツハイマー型認知症を発症するリスクの有無の判定が挙げられ、被験者がアルツハイマー型認知症に罹患している可能性が高いか否かの判定、被験者がアルツハイマー型認知症に罹患している可能性の有無の判定が好ましい。
当該アルツハイマー型認知症の判定としては、例えば、被験者がアルツハイマー型認知症に罹患している可能性が高いか否かの判定、被験者がアルツハイマー型認知症に罹患している可能性の有無の判定、被験者がアルツハイマー型認知症を発症するリスクが高いか否かの判定、被験者がアルツハイマー型認知症を発症するリスクの有無の判定が挙げられ、被験者がアルツハイマー型認知症に罹患している可能性が高いか否かの判定、被験者がアルツハイマー型認知症に罹患している可能性の有無の判定が好ましい。
ＡＤ診断補助方法におけるアルツハイマー型認知症の判定は、例えば、前述のテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の測定、前述のホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の測定により得られた、前記テトラスパニンを有する細胞外小胞の量（Ａ）に対するホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量（Ｂ）の割合（（Ａ）／（Ｂ））を、予め定めた基準値（カットオフ値）と比較することによりなされる。
具体的には、前記テトラスパニンを有する細胞外小胞の量（Ａ）に対するホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量（Ｂ）の割合（（Ａ）／（Ｂ））が予め定めた基準値以下の場合は、被験者がアルツハイマー型認知症に罹患している可能性が高い、又は被験者がアルツハイマー型認知症に罹患している可能性がある、或いは被験者がアルツハイマー型認知症を発症するリスクが高い、又は被験者がアルツハイマー型認知症を発症するリスクがあると判定できる。
また、前記テトラスパニンを有する細胞外小胞の量（Ａ）に対するホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量（Ｂ）の割合（（Ａ）／（Ｂ））が予め定めた基準値より大きい場合は、被検者がアルツハイマー型認知症に罹患している可能性が低い又は被検者がアルツハイマー型認知症に罹患している可能性がない、或いは被験者がアルツハイマー型認知症を発症するリスクが低い、又は被験者がアルツハイマー型認知症を発症するリスクがないと判定できる。
ＡＤ診断補助方法（ＩＩ）における予め定めた基準値（カットオフ値）は、アルツハイマー型認知症患者と健常者とを区別するために予め設定される、生体試料中のテトラスパニンを有する細胞外小胞の量（Ａ）に対するホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量（Ｂ）の割合（（Ａ）／（Ｂ））である。
具体的には、前記テトラスパニンを有する細胞外小胞の量（Ａ）に対するホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量（Ｂ）の割合（（Ａ）／（Ｂ））が予め定めた基準値以下の場合は、被験者がアルツハイマー型認知症に罹患している可能性が高い、又は被験者がアルツハイマー型認知症に罹患している可能性がある、或いは被験者がアルツハイマー型認知症を発症するリスクが高い、又は被験者がアルツハイマー型認知症を発症するリスクがあると判定できる。
また、前記テトラスパニンを有する細胞外小胞の量（Ａ）に対するホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量（Ｂ）の割合（（Ａ）／（Ｂ））が予め定めた基準値より大きい場合は、被検者がアルツハイマー型認知症に罹患している可能性が低い又は被検者がアルツハイマー型認知症に罹患している可能性がない、或いは被験者がアルツハイマー型認知症を発症するリスクが低い、又は被験者がアルツハイマー型認知症を発症するリスクがないと判定できる。
ＡＤ診断補助方法（ＩＩ）における予め定めた基準値（カットオフ値）は、アルツハイマー型認知症患者と健常者とを区別するために予め設定される、生体試料中のテトラスパニンを有する細胞外小胞の量（Ａ）に対するホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量（Ｂ）の割合（（Ａ）／（Ｂ））である。
ＡＤ診断補助方法（ＩＩ）における予め定めた基準値の決定方法は、特に限定されず、例えば、アルツハイマー型認知症に罹患している患者及び健常者から取得した生体試料に含まれるテトラスパニンを有する細胞外小胞の量（Ａ）に対するホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量（Ｂ）を測定し、テトラスパニンを有する細胞外小胞の量（Ａ）に対するホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量（Ｂ）の割合（（Ａ）／（Ｂ））をそれぞれ算出し、得られたテトラスパニンを有する細胞外小胞の量（Ａ）に対するホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量（Ｂ）の割合（（Ａ）／（Ｂ））を用いて、ＲＯＣ解析（Ｒｅｃｅｉｖｅｒ Ｏｐｅｒａｔｉｎｇ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ）等の統計解析により定めることができる。当該予め定めた基準値の設定においては、感度、特異度、陽性的中率、陰性的中率などを考慮することが好ましい。前記予め定めた基準値は、例えば、感度が６０％以上となるように定めることができ、７０％以上となるものが好ましく、８０％以上となるものがより好ましく、９０％以上となるものが更に好ましく、例えば、特異度が６０％以上となるように定めることができ、７０％以上となるものが好ましく、８０％以上となるものがより好ましく、９０％以上となるものが更に好ましい。
＜アルツハイマー型認知症の診断補助用試薬キット（ＩＩ）＞
第１発明－２におけるアルツハイマー型認知症の診断補助用試薬キット（以下、「ＡＤ診断補助用試薬キット（ＩＩ）」と略記する場合がある）は、テトラスパニンに対して親和性を有する物質、及びホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質を含む。
第１発明－２におけるアルツハイマー型認知症の診断補助用試薬キット（以下、「ＡＤ診断補助用試薬キット（ＩＩ）」と略記する場合がある）は、テトラスパニンに対して親和性を有する物質、及びホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質を含む。
ＡＤ診断補助用試薬キット（ＩＩ）におけるテトラスパニンに対して親和性を有する物質、ホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質は、それぞれＡＤ診断補助方法（ＩＩ）のものと同様であり、好ましいものも同様である。
当該テトラスパニンに対して親和性を有する物質、及び当該ホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質は、それぞれ溶液状態であっても、凍結状態や乾燥状態、凍結乾燥状態であってもよい。また、当該テトラスパニンに対して親和性を有する物質、及び当該ホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質は、一つの試薬としてキットに含まれていても別々の試薬としてキットに含まれていてもよい。
当該テトラスパニンに対して親和性を有する物質、及び当該ホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質は、それぞれ溶液状態であっても、凍結状態や乾燥状態、凍結乾燥状態であってもよい。また、当該テトラスパニンに対して親和性を有する物質、及び当該ホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質は、一つの試薬としてキットに含まれていても別々の試薬としてキットに含まれていてもよい。
ＡＤ診断補助用試薬キット（ＩＩ）におけるテトラスパニンに対して親和性を有する物質とホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質の組み合わせは、ＡＤ診断補助方法において前述した組み合わせと同様の組み合わせが挙げられ、好ましい組み合わせも同様である。
ＡＤ診断補助用試薬キット（ＩＩ）におけるテトラスパニンに対して親和性を有する物質又は／及びホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質は、固相に固定化されていてもよく、また標識物質により標識されていてもよい。当該固相や固相への固定化方法、当該標識物質や標識方法は、ＡＤ診断補助方法において前述したものと同様であり、好ましいものも同様である。
ＡＤ診断補助用試薬キット（ＩＩ）は、前記テトラスパニンに対して親和性を有する物質又は／及び前記ホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質に対して特異的に結合する２次親和性物質（例えば、２次抗体）をさらに含んでいてもよい。ＡＤ診断補助用試薬キット（ＩＩ）における当該２次親和性物質は、ＡＤ診断補助方法において前述したものと同様であり、好ましいものも同様である。また、ＡＤ診断補助用試薬キット（ＩＩ）における２次親和性物質は、標識物質により標識されたものであってもよく、当該標識物質や標識方法はＡＤ診断補助方法において前述したものと同様であり、好ましいものも同様である。
ＡＤ診断補助用試薬キット（ＩＩ）におけるテトラスパニンに対して親和性を有する物質又は／及びホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質は、アビジン類及びビオチン類の一方が結合したものでもよく、当該アビジン類及びビオチン類としては、ＡＤ診断補助方法において前述したものと同様であり、好ましいものも同様である。
ＡＤ診断補助用試薬キット（ＩＩ）は、アビジン類及びビオチン類の一方が結合した標識物質を含んでいてもよく、当該標識物質や標識方法としては、それぞれＡＤ診断補助方法において前述したものと同様のものが挙げられ、好ましいものも同様である。
ＡＤ診断補助用試薬キット（ＩＩ）は、アビジン類及びビオチン類の一方が結合した標識物質を含んでいてもよく、当該標識物質や標識方法としては、それぞれＡＤ診断補助方法において前述したものと同様のものが挙げられ、好ましいものも同様である。
ＡＤ診断補助用試薬キット（ＩＩ）におけるテトラスパニンに対して親和性を有する物質及びホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質の濃度（量）は、測定方法に応じて、通常この分野で用いられている範囲で適宜設定されればよい。テトラスパニンに対して親和性を有する物質は、例えば、使用時の濃度として、固相に固定化する場合は、通常１０～２００００ｎｇ／ｍＬ、１００～１００００ｎｇ／ｍＬとなる量が含まれるものが好ましく、検出に用いる場合は、通常１０～５０００ｎｇ／ｍＬ、１００～５００ｎｇ／ｍＬとなる量が含まれるものが好ましい。また、ホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質は、例えば、使用時の濃度として、固相に固定化する場合は、通常１０～２００００ｎｇ／ｍＬ、１００～１００００ｎｇ／ｍＬとなる量が含まれるものが好ましく、検出に用いる場合は、通常１０～５０００ｎｇ／ｍＬ、１００～５００ｎｇ／ｍＬとなる量が含まれるものが好ましい。
また、ＡＤ診断補助用試薬キット（ＩＩ）におけるテトラスパニンに対して親和性を有する物質及びホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質は、通常この分野で用いられる試薬類と共存させてもよく、当該試薬としてはＡＤ診断補助用試薬キットと同様である。
また、ＡＤ診断補助用試薬キット（ＩＩ）におけるテトラスパニンに対して親和性を有する物質及びホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質は、通常この分野で用いられる試薬類と共存させてもよく、当該試薬としてはＡＤ診断補助用試薬キットと同様である。
さらに、ＡＤ診断補助用試薬キット（ＩＩ）は、テトラスパニンに対して親和性を有する物質及びホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質の他に、これらの親和性物質を用いたテトラスパニン及びホスファチジルセリンを有する細胞外小胞の量又は／及びホスファチジルセリンを有する細胞外小胞の量を測定する為に必要な試薬を備えていてもよい。このような試薬としては、ＡＤ診断補助用試薬キットのものと同様である。
ＡＤ診断補助用試薬キット（ＩＩ）は、ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞について検量線を作成するために用いられる標準品を含んでいてもよく、当該標準品としては、ＡＤ診断補助用試薬キットと同様である。
また、ＡＤ診断補助用試薬キット（ＩＩ）は、テトラスパニンを有する細胞外小胞について検量線を作成するために用いられる標準品を含んでいてもよく、当該標準品としては、テトラスパニンを有する細胞外小胞が挙げられる。当該標準品は、溶液状態であっても、凍結状態や乾燥状態、凍結乾燥状態であってもよい。また、通常この分野で用いられる試薬類、例えば、緩衝剤、反応促進剤、糖類、タンパク質、塩類、界面活性剤等の安定化剤、防腐剤等を、当該標準品と共存させてもよい。これらの濃度、ｐＨも通常この分野で用いられている範囲から適宜選択すればよい。
また、ＡＤ診断補助用試薬キット（ＩＩ）は、テトラスパニンを有する細胞外小胞について検量線を作成するために用いられる標準品を含んでいてもよく、当該標準品としては、テトラスパニンを有する細胞外小胞が挙げられる。当該標準品は、溶液状態であっても、凍結状態や乾燥状態、凍結乾燥状態であってもよい。また、通常この分野で用いられる試薬類、例えば、緩衝剤、反応促進剤、糖類、タンパク質、塩類、界面活性剤等の安定化剤、防腐剤等を、当該標準品と共存させてもよい。これらの濃度、ｐＨも通常この分野で用いられている範囲から適宜選択すればよい。
ＡＤ診断補助用試薬キット（ＩＩ）には、添付文書や取扱説明書が含まれていてもよい。当該添付文書や取扱説明書としては、例えば、被験者に由来する生体試料中のテトラスパニンを有する細胞外小胞の量、並びにホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量を測定すること又は／及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量に対するホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の割合を指標として、被験者がアルツハイマー型認知症であると判定することが記載された添付文書や取扱説明書等が挙げられる。これらの添付文書や取扱説明書は、複数のものに分かれて記載されたものであっても、一つのものに纏めて記載されたものであってもよい。
ＡＤ診断補助用試薬キット（ＩＩ）は、具体的には、例えば、下記（Ａ）及び（Ｂ）を含むキットが挙げられる。
（Ａ）テトラスパニンに対して親和性を有する物質及びホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質のいずれか一方が固相に固定化されたものとテトラスパニンに対して親和性を有する物質及びホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質の残りの一方が標識物質と結合しているもの又は当該残りの一方の親和性物質とこれを間接的に標識物質と結合させる成分
（Ｂ）テトラスパニンに対して親和性を有する物質が固相に固定化されたものとテトラスパニンに対して親和性を有する物質が標識物質と結合しているもの又は当該親和性物質とこれを間接的に標識物質と結合させる成分
（Ａ）テトラスパニンに対して親和性を有する物質及びホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質のいずれか一方が固相に固定化されたものとテトラスパニンに対して親和性を有する物質及びホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質の残りの一方が標識物質と結合しているもの又は当該残りの一方の親和性物質とこれを間接的に標識物質と結合させる成分
（Ｂ）テトラスパニンに対して親和性を有する物質が固相に固定化されたものとテトラスパニンに対して親和性を有する物質が標識物質と結合しているもの又は当該親和性物質とこれを間接的に標識物質と結合させる成分
ＡＤ診断補助用試薬キット（ＩＩ）は、例えば下記（Ｃ）及び（Ｄ）を含むキットが好ましいものとして挙げられる。
（Ｃ）テトラスパニンに対して親和性を有する物質及びホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質のいずれか一方が固相に固定化されたものと下記（１）～（３）から選ばれるいずれか一つ
（１）テトラスパニンに対して親和性を有する物質及びホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質の残りの一方が標識物質と結合したもの、（２）テトラスパニンに対して親和性を有する物質及びホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質の残りの一方、並びに当該親和性物質に対して特異的に結合する２次親和性物質が標識物質と結合したもの、（３）テトラスパニンに対して親和性を有する物質及びホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質の残りの一方がアビジン類及びビオチン類の一方と結合したもの、並びにアビジン類及びビオチン類の残りの一方が標識物質と結合したもの
（Ｄ）テトラスパニンに対して親和性を有する物質が固相に固定化されたものと下記（４）～（６）から選ばれるいずれか一つ
（４）テトラスパニンに対して親和性を有する物質が標識物質と結合したもの、（５）テトラスパニンに対して親和性を有する物質、及びテトラスパニンに対して親和性を有する物質に対して特異的に結合する２次親和性物質が標識物質と結合したもの、（６）テトラスパニンに対して親和性を有する物質がアビジン類及びビオチン類の一方と結合したもの、並びにアビジン類及びビオチン類の残りの一方が標識物質と結合したものから選ばれるいずれか一つ
（Ｃ）テトラスパニンに対して親和性を有する物質及びホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質のいずれか一方が固相に固定化されたものと下記（１）～（３）から選ばれるいずれか一つ
（１）テトラスパニンに対して親和性を有する物質及びホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質の残りの一方が標識物質と結合したもの、（２）テトラスパニンに対して親和性を有する物質及びホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質の残りの一方、並びに当該親和性物質に対して特異的に結合する２次親和性物質が標識物質と結合したもの、（３）テトラスパニンに対して親和性を有する物質及びホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質の残りの一方がアビジン類及びビオチン類の一方と結合したもの、並びにアビジン類及びビオチン類の残りの一方が標識物質と結合したもの
（Ｄ）テトラスパニンに対して親和性を有する物質が固相に固定化されたものと下記（４）～（６）から選ばれるいずれか一つ
（４）テトラスパニンに対して親和性を有する物質が標識物質と結合したもの、（５）テトラスパニンに対して親和性を有する物質、及びテトラスパニンに対して親和性を有する物質に対して特異的に結合する２次親和性物質が標識物質と結合したもの、（６）テトラスパニンに対して親和性を有する物質がアビジン類及びビオチン類の一方と結合したもの、並びにアビジン類及びビオチン類の残りの一方が標識物質と結合したものから選ばれるいずれか一つ
ＡＤ診断補助用試薬キット（ＩＩ）の好ましい例として、例えば以下のものが挙げられる。
例えば、ホスファチジルセリンに対して特異的に結合する抗体又はＴｉｍタンパク質（Ｔｉｍ４又はＴｉｍ１がより好ましく、Ｔｉｍ４が特に好ましい）が固定化された固相プレート、テトラスパニン抗体（抗ＣＤ９抗体又は抗ＣＤ６３抗体がより好ましく、抗ＣＤ９抗体が特に好ましい）が固定化された固相プレートと下記（１）～（３）から選ばれるいずれか１つを含むキットが挙げられる。
（１）テトラスパニン抗体（抗ＣＤ９抗体又は抗ＣＤ６３抗体がより好ましく、抗ＣＤ９抗体が特に好ましい）が標識物質と結合したものを含む溶液（通常１０～５０００ｎｇ／ｍＬ、１００～５００ｎｇ／ｍＬが好ましい）、（２）テトラスパニン抗体（抗ＣＤ９抗体又は抗ＣＤ６３抗体がより好ましく、抗ＣＤ９抗体が特に好ましい）を含む溶液（通常１０～５０００ｎｇ／ｍＬ、１００～５００ｎｇ／ｍＬが好ましい）、並びに当該テトラスパニン抗体に対して特異的に結合する２次親和性物質が標識物質と結合したものを含む溶液（通常１０～５０００ｎｇ／ｍＬ、１００～５００ｎｇ／ｍＬが好ましい）、（３）アビジン類及びビオチン類の一方が結合したテトラスパニンに対して特異的に結合する抗体（抗ＣＤ９抗体又は抗ＣＤ６３抗体がより好ましく、抗ＣＤ９抗体が特に好ましい）を含む溶液（通常１０～５０００ｎｇ／ｍＬ、１００～５００ｎｇ／ｍＬが好ましい）、並びにアビジン類及びビオチン類の残りの一方が結合した標識物質を含む溶液（通常１０～５０００ｎｇ／ｍＬ、１００～５００ｎｇ／ｍＬが好ましい）。
例えば、ホスファチジルセリンに対して特異的に結合する抗体又はＴｉｍタンパク質（Ｔｉｍ４又はＴｉｍ１がより好ましく、Ｔｉｍ４が特に好ましい）が固定化された固相プレート、テトラスパニン抗体（抗ＣＤ９抗体又は抗ＣＤ６３抗体がより好ましく、抗ＣＤ９抗体が特に好ましい）が固定化された固相プレートと下記（１）～（３）から選ばれるいずれか１つを含むキットが挙げられる。
（１）テトラスパニン抗体（抗ＣＤ９抗体又は抗ＣＤ６３抗体がより好ましく、抗ＣＤ９抗体が特に好ましい）が標識物質と結合したものを含む溶液（通常１０～５０００ｎｇ／ｍＬ、１００～５００ｎｇ／ｍＬが好ましい）、（２）テトラスパニン抗体（抗ＣＤ９抗体又は抗ＣＤ６３抗体がより好ましく、抗ＣＤ９抗体が特に好ましい）を含む溶液（通常１０～５０００ｎｇ／ｍＬ、１００～５００ｎｇ／ｍＬが好ましい）、並びに当該テトラスパニン抗体に対して特異的に結合する２次親和性物質が標識物質と結合したものを含む溶液（通常１０～５０００ｎｇ／ｍＬ、１００～５００ｎｇ／ｍＬが好ましい）、（３）アビジン類及びビオチン類の一方が結合したテトラスパニンに対して特異的に結合する抗体（抗ＣＤ９抗体又は抗ＣＤ６３抗体がより好ましく、抗ＣＤ９抗体が特に好ましい）を含む溶液（通常１０～５０００ｎｇ／ｍＬ、１００～５００ｎｇ／ｍＬが好ましい）、並びにアビジン類及びビオチン類の残りの一方が結合した標識物質を含む溶液（通常１０～５０００ｎｇ／ｍＬ、１００～５００ｎｇ／ｍＬが好ましい）。
＜アルツハイマー型認知症の診断補助用装置（ＩＩ）＞
第１発明―２におけるアルツハイマー型認知症の診断補助用装置（以下、「ＡＤ診断補助用装置（ＩＩ）」と略記する場合がある）は、被験者に由来する生体試料中の、ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量、並びにテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の測定を測定する測定部、前記テトラスパニンを有する細胞外小胞の量に対する前記ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の割合を算出する演算部、及び前記生体試料中のテトラスパニンを有する細胞外小胞の量に対する生体試料中のホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の割合を指標として、被験者がアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害であると判定する判定部を有する。
第１発明―２におけるアルツハイマー型認知症の診断補助用装置（以下、「ＡＤ診断補助用装置（ＩＩ）」と略記する場合がある）は、被験者に由来する生体試料中の、ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量、並びにテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の測定を測定する測定部、前記テトラスパニンを有する細胞外小胞の量に対する前記ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の割合を算出する演算部、及び前記生体試料中のテトラスパニンを有する細胞外小胞の量に対する生体試料中のホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の割合を指標として、被験者がアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害であると判定する判定部を有する。
ＡＤ診断補助用装置（ＩＩ）を構成する測定部、演算部、判定部等は同一の装置内に配置されていても、それぞれ別体となっていてもよい。
ＡＤ診断補助用装置（ＩＩ）における前記測定部は、装置に導入された生体試料中のホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量、並びにテトラスパニンを有する細胞外小胞の量を測定する部位である。当該測定部の大きさや構成は特に限定されない。
当該測定部としては、例えば、ＥＬＩＳＡ法に用いられるマイクロプレートリーダー又はＣＣＤを用いて撮像するイメージング装置、ウエスタンブロット法又はマイクロアレイ（マイクロチップ）を利用した方法に用いられるイメージング装置、質量分析法に用いられる質量分析装置、分子間相互作用解析装置、及びフローサイトメトリーに用いられるフローサイトメーター、ＨＰＬＣ法やキャピラリー電気泳動法に用いられる紫外可視光検出器や蛍光検出器等が挙げられる。
当該測定部としては、例えば、ＥＬＩＳＡ法に用いられるマイクロプレートリーダー又はＣＣＤを用いて撮像するイメージング装置、ウエスタンブロット法又はマイクロアレイ（マイクロチップ）を利用した方法に用いられるイメージング装置、質量分析法に用いられる質量分析装置、分子間相互作用解析装置、及びフローサイトメトリーに用いられるフローサイトメーター、ＨＰＬＣ法やキャピラリー電気泳動法に用いられる紫外可視光検出器や蛍光検出器等が挙げられる。
ＡＤ診断補助用装置（ＩＩ）における、被験者、生体試料、細胞外小胞は、それぞれ前記のものと同様であり、好ましいものも同様である。
ＡＤ診断補助用装置（ＩＩ）における、ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞、量、ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の測定対象は、ＡＤ診断補助方法において前述したものと同様であり、好ましいものも同様である。
ＡＤ診断補助用装置（ＩＩ）における、ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の測定や当該測定に用いられる物質は、ＡＤ診断補助方法において前述したものと同様であり、好ましいものや具体例も同様である。
ＡＤ診断補助用装置（ＩＩ）における、ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の測定や当該測定に用いられる物質は、ＡＤ診断補助方法において前述したものと同様であり、好ましいものや具体例も同様である。
また、ＡＤ診断補助用装置（ＩＩ）におけるテトラスパニンを有する細胞外小胞、テトラスパニンを有する細胞外小胞の量の測定対象は、ＡＤ診断補助方法（ＩＩ）において前述したものと同様であり、好ましいものも同様である。
ＡＤ診断補助用装置（ＩＩ）におけるテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の測定や当該測定に用いられる物質は、ＡＤ診断補助方法（ＩＩ）において前述したものと同様であり、好ましいものや具体例も同様である。
ＡＤ診断補助用装置（ＩＩ）におけるテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の測定や当該測定に用いられる物質は、ＡＤ診断補助方法（ＩＩ）において前述したものと同様であり、好ましいものや具体例も同様である。
ＡＤ診断補助用装置（ＩＩ）における演算部は、測定部で得られたテトラスパニンを有する細胞外小胞の量、及びホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量に基づき、テトラスパニンを有する細胞外小胞の量に対するホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の割合を算出する部位である。当該測定部の大きさや構成は特に限定されない。
ＡＤ診断補助用装置（ＩＩ）における演算部は、ＡＤ診断補助用装置における測定部で得られた生体試料中のホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞、並びにテトラスパニンを有する細胞外小胞の質量や濃度と相関関係を有する実測値（例えば、吸光度、吸光度変化量、透過光、透過光変化量、蛍光強度、蛍光強度変化量、発光量、発光量変化量、濁度、濁度変化率、散乱光、散乱光変化率、反射率、反射率変化量、屈折率、屈折率変化量等）を質量や濃度等に換算した後、前記テトラスパニンを有する細胞外小胞の量に対するホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の割合を算出してもよい。
なお、当該実測値、演算部により換算された質量や濃度等、前記テトラスパニンを有する細胞外小胞の量に対するホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の割合は、メモリやハードディスクなど装置に備えられた記憶装置等に記憶されてもよい。
ＡＤ診断補助用装置（ＩＩ）における演算部は、ＡＤ診断補助用装置における測定部で得られた生体試料中のホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞、並びにテトラスパニンを有する細胞外小胞の質量や濃度と相関関係を有する実測値（例えば、吸光度、吸光度変化量、透過光、透過光変化量、蛍光強度、蛍光強度変化量、発光量、発光量変化量、濁度、濁度変化率、散乱光、散乱光変化率、反射率、反射率変化量、屈折率、屈折率変化量等）を質量や濃度等に換算した後、前記テトラスパニンを有する細胞外小胞の量に対するホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の割合を算出してもよい。
なお、当該実測値、演算部により換算された質量や濃度等、前記テトラスパニンを有する細胞外小胞の量に対するホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の割合は、メモリやハードディスクなど装置に備えられた記憶装置等に記憶されてもよい。
ＡＤ診断補助用装置（ＩＩ）における判定部は、演算部で算出したテトラスパニンを有する細胞外小胞の量に対するホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の割合を指標として、アルツハイマー型認知症を判定する部位である。
ＡＤ診断補助用装置（ＩＩ）におけるアルツハイマー型認知症の判定や当該判定に用いられる予め定められた基準値、予め定められた基準値の決定方法は、ＡＤ診断補助方法（ＩＩ）において前述したものと同様であり、好ましいものや具体例も同様である。
ＡＤ診断補助用装置（ＩＩ）における予め定めた基準値は、ＡＤ診断補助用装置（ＩＩ）に予め記憶されていてもよいし、判定の際にＡＤ診断補助用装置（ＩＩ）の入力部位から入力されてもよい。
ＡＤ診断補助用装置（ＩＩ）における予め定めた基準値は、ＡＤ診断補助用装置（ＩＩ）に予め記憶されていてもよいし、判定の際にＡＤ診断補助用装置（ＩＩ）の入力部位から入力されてもよい。
ＡＤ診断補助用装置（ＩＩ）は、出力部を備えていてもよい。出力部では、前記した判定の結果をディスプレイなどの表示装置やプリンターなどの印刷装置に表示又は出力させるなどの処理が行われる。
１－３．第１発明－３
＜アルツハイマー型認知症の症診断補助用バイオマーカーセット＞
第１発明－３におけるアルツハイマー型認知症の症診断補助用バイオマーカーセット（以下、「ＡＤマーカーセット（ＩＩＩ）」と略記する場合がある）は、ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞、テトラスパニンを有する細胞外小胞、アミロイドβ（１－４０）、アミロイドβ（１－４２）を含むバイオマーカーの組み合わせである。すなわち、ＡＤマーカーセット（ＩＩＩ）は、ＡＤマーカーセット（ＩＩ）、アミロイドβ（１－４０）及びアミロイドβ（１－４２）を含むバイオマーカーの組み合わせである。
ＡＤマーカーセット（ＩＩＩ）によれば、例えば、前記テトラスパニンを有する細胞外小胞の量に対するホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の割合（「ＡＤマーカー（ＩＩ）」）に、アミロイドβ（１－４０）の量に対するアミロイドβ（１－４２）の量の割合（以下、「Ａβ（１－４２）／Ａβ（１－４０）」と略記する場合がある）を乗じて得られる値（以下、「ＡＤマーカー（ＩＩＩ）」と略記する場合がある）を求めることができ、ＡＤマーカー（ＩＩＩ）は、被験者がアルツハイマー型認知症であると判定する為の指標として用いることができる。
＜アルツハイマー型認知症の症診断補助用バイオマーカーセット＞
第１発明－３におけるアルツハイマー型認知症の症診断補助用バイオマーカーセット（以下、「ＡＤマーカーセット（ＩＩＩ）」と略記する場合がある）は、ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞、テトラスパニンを有する細胞外小胞、アミロイドβ（１－４０）、アミロイドβ（１－４２）を含むバイオマーカーの組み合わせである。すなわち、ＡＤマーカーセット（ＩＩＩ）は、ＡＤマーカーセット（ＩＩ）、アミロイドβ（１－４０）及びアミロイドβ（１－４２）を含むバイオマーカーの組み合わせである。
ＡＤマーカーセット（ＩＩＩ）によれば、例えば、前記テトラスパニンを有する細胞外小胞の量に対するホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の割合（「ＡＤマーカー（ＩＩ）」）に、アミロイドβ（１－４０）の量に対するアミロイドβ（１－４２）の量の割合（以下、「Ａβ（１－４２）／Ａβ（１－４０）」と略記する場合がある）を乗じて得られる値（以下、「ＡＤマーカー（ＩＩＩ）」と略記する場合がある）を求めることができ、ＡＤマーカー（ＩＩＩ）は、被験者がアルツハイマー型認知症であると判定する為の指標として用いることができる。
ＡＤマーカーセット（ＩＩＩ）における、ＡＤマーカーセット（ＩＩ）に関する全ての記載は、前記の第１発明－２におけるＡＤマーカーセット（ＩＩ）と同様であり、好ましいものや具体例も同様である。
＜アルツハイマー型認知症の診断を補助する方法（ＩＩＩ）＞
第１発明－３におけるアルツハイマー型認知症の診断を補助する方法（以下、「ＡＤ診断補助方法（ＩＩＩ）」と略記する場合がある）は、生体試料中のホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量、及び生体試料中のテトラスパニンを有する細胞外小胞の量を測定すること、テトラスパニンを有する細胞外小胞の量に対するホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の割合（ＡＤマーカー（ＩＩ））を算出すること、アミロイドβ（１－４０）の量に対するアミロイドβ（１－４２）の量の割合（Ａβ（１－４２）／Ａβ（１－４０））にＡＤマーカー（ＩＩ）を乗じて、ＡＤマーカー（ＩＩＩ）を算出すること、ＡＤマーカー（ＩＩＩ）を指標として、被験者がアルツハイマー型認知症であると判定することを含む。
第１発明－３におけるアルツハイマー型認知症の診断を補助する方法（以下、「ＡＤ診断補助方法（ＩＩＩ）」と略記する場合がある）は、生体試料中のホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量、及び生体試料中のテトラスパニンを有する細胞外小胞の量を測定すること、テトラスパニンを有する細胞外小胞の量に対するホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の割合（ＡＤマーカー（ＩＩ））を算出すること、アミロイドβ（１－４０）の量に対するアミロイドβ（１－４２）の量の割合（Ａβ（１－４２）／Ａβ（１－４０））にＡＤマーカー（ＩＩ）を乗じて、ＡＤマーカー（ＩＩＩ）を算出すること、ＡＤマーカー（ＩＩＩ）を指標として、被験者がアルツハイマー型認知症であると判定することを含む。
ＡＤ診断補助方法（ＩＩＩ）における、ＡＤマーカー（ＩＩ）に関する全ての記載は、前記の第１発明－２におけるＡＤマーカー（ＩＩ）と同様であり、好ましいものや具体例も同様である。
ＡＤ診断補助方法（ＩＩＩ）は、さらにアミロイドβ（１－４０）の量又は／及びアミロイドβ（１－４２）の量を測定することを含んでいてもよい。
アミロイドβ（１－４０）の量又は／及びアミロイドβ（１－４２）の量の測定は、通常この分野で行われる方法であれば、特に限定されない。アミロイドβ（１－４０）の量又は／及びアミロイドβ（１－４２）の量の測定は、前記ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の測定や前記テトラスパニンを有する細胞外小胞の量の測定に準じて行えばよく、例えば、例えばアミロイドβ（１－４０）に対して親和性を有する物質やアミロイドβ（１－４２）に対して親和性を有する物質を用いた免疫学的測定方法、質量分析方法、これらを組み合わせた方法等を用いればよく、中でも免疫学的測定方法が好ましい。なお、当該免疫学的測定方法には、免疫反応（抗原抗体反応）を利用する方法の他、例えば抗原抗体反応外の２成分間における結合力を利用する方法（免疫学的測定方法に準じた方法）も含まれる。
アミロイドβ（１－４０）に対して親和性を有する物質としては、例えば、アミロイドβ（１－４０）に対して特異的に結合する抗体が挙げられ、アミロイドβ（１－４０）のＣ末端領域に対して特異的に結合する抗体が好ましく、具体的には、ＢＡ２７（富士フイルム和光純薬（株）製）等が挙げられる。当該アミロイドβ（１－４０）のＣ末端領域としては、例えば、アミロイドβ（１－４０）の４０番目のＣ末端アミノ酸を含むＣ末端の領域等が挙げられ、アミロイドβ（１－４０）の４０番目のＣ末端アミノ酸及び３９番目のアミノ酸残基、アミロイドβ（１－４０）の４０番目のＣ末端アミノ酸及び３８番目～３９番目のアミノ酸残基、アミロイドβ（１－４０）の４０番目のＣ末端アミノ酸及び３７番目～３９番目のアミノ酸残基、アミロイドβ（１－４０）の４０番目のＣ末端アミノ酸及び３６番目～３９番目のアミノ酸残基が好ましい。また、アミロイドβ（１－４０）に対して親和性を有する物質は、アミロイドβ（１－４２）に結合しないものが好ましい。
アミロイドβ（１－４２）に対して親和性を有する物質としては、例えば、アミロイドβ（１－４２）に対して特異的に結合する抗体が挙げられ、アミロイドβ（１－４２）のＣ末端領域に対して特異的に結合する抗体が好ましく、具体的には、ＢＣ０５（富士フイルム和光純薬（株）製）等が挙げられる。当該アミロイドβ（１－４２）のＣ末端領域としては、例えば、アミロイドβ（１－４２）の４２番目のＣ末端アミノ酸を含むＣ末端の領域等が挙げられ、アミロイドβ（１－４２）の４２番目のＣ末端アミノ酸、アミロイドβ（１－４２）の４２番目のＣ末端アミノ酸および４１番目のアミノ酸残基等が好ましい。また、アミロイドβ（１－４２）に対して親和性を有する物質は、アミロイドβ（１－４０）に結合しないものが好ましい。
アミロイドβ（１－４０）の量及びアミロイドβ（１－４２）の量の測定は、それぞれアミロイドβ（１－４０）に対して親和性を有する物質又はアミロイドβ（１－４２）に対して親和性を有する物質のみを用いても、さらにアミロイドβのＮ末端領域に対して親和性を有する物質と組み合わせて用いてもよく、組み合わせて用いるのが好ましい。当該アミロイドβのＮ末端領域としては、例えば、アミロイドβの１番目から２８番目のアミノ酸残基が挙げられ、１番目から１６番目のアミノ酸残基が好ましい。アミロイドβのＮ末端領域に対して親和性を有する物質としては、当該アミロイドβのＮ末端領域に対して特異的に結合する抗体が好ましく、具体的には、ＢＡＮ５０（富士フイルム和光純薬（株）製）、ＢＮＴ７７（富士フイルム和光純薬（株）製）が挙げられる。
アミロイドβ（１－４０）に対して親和性を有する物質及びアミロイドβ（１－４２）に対して親和性を有する物質とアミロイドβのＮ末端領域に対して親和性を有する物質との組み合わせとしては、例えば、アミロイドβ（１－４０）に対して特異的に結合する抗体又はアミロイドβ（１－４２）に対して特異的に結合する抗体とアミロイドβのＮ末端領域に対して親和性を有する抗体の組み合わせが挙げられ、具体的には、ＢＡ２７又はＢＣ０５とＢＡＮ５０又はＢＮＴ７７の組み合わせが好ましい。
アミロイドβ（１－４０）の量の測定は、市販のキットを用いてもよく、例えば、「Ｈｕｍａｎ βＡｍｙｒｏｉｄ（１－４０）ＥＬＩＳＡ Ｋｉｔ ＷａｋｏＩＩ」（富士フイルム和光純薬（株）製）等が挙げられる。
アミロイドβ（１－４２）の量の測定は、市販のキットを用いてもよく、例えば、「Ｈｕｍａｎ βＡｍｙｒｏｉｄ（１－４２）ＥＬＩＳＡ Ｋｉｔ Ｗａｋｏ，Ｈｉｇｈ－Ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ」（富士フイルム和光純薬（株）製）等が挙げられる。
アミロイドβ（１－４０）の量又は／及びアミロイドβ（１－４２）の量の測定は、通常この分野で行われる方法であれば、特に限定されない。アミロイドβ（１－４０）の量又は／及びアミロイドβ（１－４２）の量の測定は、前記ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の測定や前記テトラスパニンを有する細胞外小胞の量の測定に準じて行えばよく、例えば、例えばアミロイドβ（１－４０）に対して親和性を有する物質やアミロイドβ（１－４２）に対して親和性を有する物質を用いた免疫学的測定方法、質量分析方法、これらを組み合わせた方法等を用いればよく、中でも免疫学的測定方法が好ましい。なお、当該免疫学的測定方法には、免疫反応（抗原抗体反応）を利用する方法の他、例えば抗原抗体反応外の２成分間における結合力を利用する方法（免疫学的測定方法に準じた方法）も含まれる。
アミロイドβ（１－４０）に対して親和性を有する物質としては、例えば、アミロイドβ（１－４０）に対して特異的に結合する抗体が挙げられ、アミロイドβ（１－４０）のＣ末端領域に対して特異的に結合する抗体が好ましく、具体的には、ＢＡ２７（富士フイルム和光純薬（株）製）等が挙げられる。当該アミロイドβ（１－４０）のＣ末端領域としては、例えば、アミロイドβ（１－４０）の４０番目のＣ末端アミノ酸を含むＣ末端の領域等が挙げられ、アミロイドβ（１－４０）の４０番目のＣ末端アミノ酸及び３９番目のアミノ酸残基、アミロイドβ（１－４０）の４０番目のＣ末端アミノ酸及び３８番目～３９番目のアミノ酸残基、アミロイドβ（１－４０）の４０番目のＣ末端アミノ酸及び３７番目～３９番目のアミノ酸残基、アミロイドβ（１－４０）の４０番目のＣ末端アミノ酸及び３６番目～３９番目のアミノ酸残基が好ましい。また、アミロイドβ（１－４０）に対して親和性を有する物質は、アミロイドβ（１－４２）に結合しないものが好ましい。
アミロイドβ（１－４２）に対して親和性を有する物質としては、例えば、アミロイドβ（１－４２）に対して特異的に結合する抗体が挙げられ、アミロイドβ（１－４２）のＣ末端領域に対して特異的に結合する抗体が好ましく、具体的には、ＢＣ０５（富士フイルム和光純薬（株）製）等が挙げられる。当該アミロイドβ（１－４２）のＣ末端領域としては、例えば、アミロイドβ（１－４２）の４２番目のＣ末端アミノ酸を含むＣ末端の領域等が挙げられ、アミロイドβ（１－４２）の４２番目のＣ末端アミノ酸、アミロイドβ（１－４２）の４２番目のＣ末端アミノ酸および４１番目のアミノ酸残基等が好ましい。また、アミロイドβ（１－４２）に対して親和性を有する物質は、アミロイドβ（１－４０）に結合しないものが好ましい。
アミロイドβ（１－４０）の量及びアミロイドβ（１－４２）の量の測定は、それぞれアミロイドβ（１－４０）に対して親和性を有する物質又はアミロイドβ（１－４２）に対して親和性を有する物質のみを用いても、さらにアミロイドβのＮ末端領域に対して親和性を有する物質と組み合わせて用いてもよく、組み合わせて用いるのが好ましい。当該アミロイドβのＮ末端領域としては、例えば、アミロイドβの１番目から２８番目のアミノ酸残基が挙げられ、１番目から１６番目のアミノ酸残基が好ましい。アミロイドβのＮ末端領域に対して親和性を有する物質としては、当該アミロイドβのＮ末端領域に対して特異的に結合する抗体が好ましく、具体的には、ＢＡＮ５０（富士フイルム和光純薬（株）製）、ＢＮＴ７７（富士フイルム和光純薬（株）製）が挙げられる。
アミロイドβ（１－４０）に対して親和性を有する物質及びアミロイドβ（１－４２）に対して親和性を有する物質とアミロイドβのＮ末端領域に対して親和性を有する物質との組み合わせとしては、例えば、アミロイドβ（１－４０）に対して特異的に結合する抗体又はアミロイドβ（１－４２）に対して特異的に結合する抗体とアミロイドβのＮ末端領域に対して親和性を有する抗体の組み合わせが挙げられ、具体的には、ＢＡ２７又はＢＣ０５とＢＡＮ５０又はＢＮＴ７７の組み合わせが好ましい。
アミロイドβ（１－４０）の量の測定は、市販のキットを用いてもよく、例えば、「Ｈｕｍａｎ βＡｍｙｒｏｉｄ（１－４０）ＥＬＩＳＡ Ｋｉｔ ＷａｋｏＩＩ」（富士フイルム和光純薬（株）製）等が挙げられる。
アミロイドβ（１－４２）の量の測定は、市販のキットを用いてもよく、例えば、「Ｈｕｍａｎ βＡｍｙｒｏｉｄ（１－４２）ＥＬＩＳＡ Ｋｉｔ Ｗａｋｏ，Ｈｉｇｈ－Ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ」（富士フイルム和光純薬（株）製）等が挙げられる。
前記アミロイドβ（１－４０）に対して親和性を有する物質、アミロイドβ（１－４２）に対して親和性を有する物質、アミロイドβのＮ末端領域に対して親和性を有する物質は、市販品でも常法により適宜調製されたものでもよい。また、アミロイドβ（１－４０）に対して特異的に結合する抗体、アミロイドβ（１－４２）に対して特異的に結合する抗体、アミロイドβのＮ末端領域に対して親和性を有する抗体は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体の何れであってもよく、これらを単独であるいはこれらを適宜組み合わせて用いてもよく、免疫グロブリン分子そのもの（ｉｎｔａｃｔ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ）のみならず、その断片であって抗原への結合能を有する断片であるＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ’）等のフラグメント抗体や一本鎖抗体（ｓｉｎｇｌｅ ｃｈａｉｎ Ｆｖ）、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ等の合成抗体等を用いてもよい。また、これらの抗体を調製する場合は、例えば「免疫測定法」（生物化学的測定研究会編集、講談社、２０１４）等に記載の方法に従っておこなえばよい。
前記アミロイドβ（１－４０）に対して親和性を有する物質、アミロイドβ（１－４２）に対して親和性を有する物質、アミロイドβのＮ末端領域に対して親和性を有する物質は、標識物質により標識されたものであってもよい。当該標識物質としては、例えば、ペルオキシダーゼ、マイクロペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ等の酵素類、９９ｍＴｃ、１３１Ｉ、１２５Ｉ、１４Ｃ、３Ｈ、３２Ｐ、３５Ｓ等の放射性同位元素、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）、４－メチルウンベリフェロン、ＨｉＬｙｔｅ、Ａｌｅｘａ、ＣｙＤｙｅ又はローダミン、或いはこれらの誘導体等の蛍光性物質、ルシフェリン、ルミノール、ルテニウム錯体等の発光性物質、フェノール、ナフトール、又はアントラセン、或いはこれらの誘導体等の紫外部に吸収を有する物質、４－アミノ－２，２，６，６－テトラメチルピペリジン－１－オキシル等のオキシル基を有する化合物に代表されるスピンラベル化剤としての性質を有する物質、金コロイド、量子ドット等のナノ粒子等が挙げられ、酵素類、蛍光性物質が好ましい。当該標識物質で前記アミロイドβ（１－４０）に対して親和性を有する物質、アミロイドβ（１－４２）に対して親和性を有する物質又は／及びアミロイドβのＮ末端領域に対して親和性を有する物質を標識する方法は、特に制限されず、自体公知の標識方法に従って行えばよい。これらの標識物質の測定は、標識物質に応じた自体公知の測定方法に従って行えばよい。
前記アミロイドβ（１－４０）に対して親和性を有する物質、アミロイドβ（１－４２）に対して親和性を有する物質、又は／及びアミロイドβのＮ末端領域に対して親和性を有する物質は固相に固定化されていてもよく、アミロイドβのＮ末端領域に対して親和性を有する物質が固相に固定化されているのが好ましい。
前記固相としては、例えばラテックス、ポリスチレン、ポリプロピレン、ポリアクリル酸、ポリメタクリル酸、ポリアクリルアミド、ポリグリシジルメタクリレート、ポリ塩化ビニール、ポリエチレン、ポリクロロカーボネート、シリコーン樹脂、シリコーンラバー等の合成高分子化合物、例えば多孔性ガラス、スリガラス、セラミックス、アルミナ、シリカゲル、活性炭、金属酸化物等の無機物質等が挙げられる。また、これらのうちの２種以上を組み合わせて用いてもよい。
前記固相の形状は特に限定されず、例えば、マイクロタイタープレート（ＥＬＩＳＡプレート）、ビーズ、チューブ（マイクロチューブ）、粒子、多数のチューブが一体成形された専用のトレイ、ディスク状片、試験管等が挙げられる。
前記固相に前記アミロイドβ（１－４０）に対して親和性を有する物質、アミロイドβ（１－４２）に対して親和性を有する物質、又は／及びアミロイドβのＮ末端領域に対して親和性を有する物質を固定化する方法としては、通常この分野で用いられる方法であれば特に限定されず、常法に従って行えばよい。
前記アミロイドβ（１－４０）の量又は／及びアミロイドβ（１－４２）の量の測定は、具体的には、例えば、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ法）、酵素免疫測定法（ＥＩＡ法）、放射免疫測定法（ＲＩＡ法）、蛍光酵素免疫法（ＦＥＩＡ法）、蛍光免疫測定法（ＦＩＡ法）、化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ法）、化学発光免疫測定法（ＣＬＩＡ法）、電気化学発光免疫測定法（ＥＣＬＩＡ法）、イムノクロマトグラフィー法（ＩＣＡ法）、Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ Ｏｘｙｇｅｎ Ｃｈａｎｎｅｌｉｎｇ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ（ＬＯＣＩ法）、Ｌｉｑｕｉｄ－ｐｈａｓｅ Ｂｉｎｄｉｎｇ Ａｓｓａｙ－ＥｌｅｃｔｒｏＫｉｎｅｔｉｃ Ａｎａｌｙｔｅ Ｔｒａｎｓｐｏｒｔ Ａｓｓａｙ（ＬＢＡ－ＥＡＴＡ法）、レクチン電気泳動法等のキャピラリー電気泳動法、ウエスタンブロット法、ラテックス免疫比ろう法等の免疫比ろう法（ＮＩＡ法）、ラテックス免疫比濁法等の免疫比濁法（ＴＩＡ法）、微粒子計数免疫凝集測定法（ＰＣＩＡ法）等の免疫凝集法、表面プラズモン共鳴法（ＳＰＲ法）等の自体公知の免疫学的測定法や質量分析法が挙げられ、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ法）、化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ法）、化学発光免疫測定法（ＣＬＩＡ法）、電気化学発光免疫測定法（ＥＣＬＩＡ法）、キャピラリー電気泳動法が好ましく、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ法）、化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ法）、ＬＢＡ－ＥＡＴＡ法がより好ましく、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ法）が特に好ましい。
前記アミロイドβ（１－４０）の量又は／及びアミロイドβ（１－４２）の量の測定原理は特に限定されず、例えば、サンドイッチ法、競合法等が挙げられ、サンドイッチ法が好ましい。また、当該測定原理として、ホモジアニス法、ヘテロジニアス法等を用いてもよく、ヘテロジニアス法が好ましい。
前記免疫学的測定法に準じた方法としては、例えば、前記アミロイドβ（１－４０）に対して特異的に結合する抗体以外の前記アミロイドβ（１－４０）に対して親和性を有する物質、アミロイドβ（１－４２）に対して特異的に結合する抗体以外の前記アミロイドβ（１－４２）に対して親和性を有する物質、又は／及びアミロイドβのＮ末端領域に対して特異的に結合する抗体以外のアミロイドβのＮ末端領域に対して親和性を有する物質を用いて、前記免疫学的測定法を行う方法等が挙げられ、好ましい方法も同様のものが挙げられる。
前記アミロイドβ（１－４０）の量又は／及びアミロイドβ（１－４２）の量の測定原理は特に限定されず、例えば、サンドイッチ法、競合法等が挙げられ、サンドイッチ法が好ましい。また、当該測定原理として、ホモジアニス法、ヘテロジニアス法等を用いてもよく、ヘテロジニアス法が好ましい。
前記免疫学的測定法に準じた方法としては、例えば、前記アミロイドβ（１－４０）に対して特異的に結合する抗体以外の前記アミロイドβ（１－４０）に対して親和性を有する物質、アミロイドβ（１－４２）に対して特異的に結合する抗体以外の前記アミロイドβ（１－４２）に対して親和性を有する物質、又は／及びアミロイドβのＮ末端領域に対して特異的に結合する抗体以外のアミロイドβのＮ末端領域に対して親和性を有する物質を用いて、前記免疫学的測定法を行う方法等が挙げられ、好ましい方法も同様のものが挙げられる。
前記アミロイドβ（１－４０）の量又は／及びアミロイドβ（１－４２）の量の測定は、具体的には、例えば、（１）生体試料中のアミロイドβ（１－４０）又は／及びアミロイドβ（１－４２）と、前記アミロイドβ（１－４０）に対して親和性を有する物質又はアミロイドβ（１－４２）に対して親和性を有する物質との複合体を形成させる工程（あるいは、生体試料中のアミロイドβ（１－４０）又はアミロイドβ（１－４２）と、前記アミロイドβ（１－４０）に対して親和性を有する物質又はアミロイドβ（１－４２）に対して親和性を有する物質とアミロイドβのＮ末端領域に対して親和性を有する物質との複合体を形成させる工程）、及び（２）（１）で形成させた複合体の量を測定する工程を含む方法が好ましい方法として挙げられる。
ＡＤ診断補助方法（ＩＩＩ）におけるアミロイドβ（１－４０）の量又はアミロイドβ（１－４２）の量の測定は、具体的には、例えば、（１）生体試料中のアミロイドβ（１－４０）又はアミロイドβ（１－４２）と、アミロイドβ（１－４０）に対して親和性を有する物質又はアミロイドβ（１－４２）に対して親和性を有する物質とアミロイドβのＮ末端領域に対して親和性を有する物質とを接触させ、アミロイドβのＮ末端領域に対して親和性を有する物質と、生体試料中のアミロイドβ（１－４０）又はアミロイドβ（１－４２）と、アミロイドβ（１－４０）に対して親和性を有する物質又はアミロイドβ（１－４２）に対して親和性を有する物質を含む複合体を形成させる工程（複合体形成工程）、及び（２）当該複合体の量を測定する工程（複合体量測定工程）を含む方法が好ましい方法として挙げられる。
ＡＤ診断補助方法（ＩＩＩ）のアミロイドβ（１－４０）の量又はアミロイドβ（１－４２）の量の測定における複合体形成工程は、生体試料とアミロイドβのＮ末端領域に対して親和性を有する物質とを接触させて、アミロイドβ（１－４０）又はアミロイドβ（１－４２）とアミロイドβのＮ末端領域に対して親和性を有する物質とから構成される第１の複合体を形成させる第１手順と、当該第１の複合体とアミロイドβ（１－４０）に対して親和性を有する物質又はアミロイドβ（１－４２）に対して親和性を有する物質とを接触させて、当該第１の複合体とアミロイドβ（１－４０）に対して親和性を有する物質又はアミロイドβ（１－４２）に対して親和性を有する物質とから構成される第２の複合体を形成させる第２手順を含むのが好ましい。
ＡＤ診断補助方法（ＩＩＩ）のアミロイドβ（１－４０）の量又はアミロイドβ（１－４２）の量の測定における複合体形成工程は、具体的には、例えば、固相に固定化したアミロイドβのＮ末端領域に対して特異的に結合する抗体と生体試料とを接触させて、アミロイドβのＮ末端領域に対して特異的に結合する抗体と生体試料中のアミロイドβ（１－４０）又はアミロイドβ（１－４２）との第１の複合体を形成させ、当該第１の複合体とアミロイドβ（１－４０）に対して特異的に結合する抗体又はアミロイドβ（１－４２）に対して特異的に結合する抗体を接触させ、当該第１の複合体とアミロイドβ（１－４０）に対して特異的に結合する抗体又はアミロイドβ（１－４２）に対して特異的に結合する抗体との第２の複合体を形成させる。
複合体を形成させた後、少なくとも複合体量測定工程の前に洗浄操作（Ｂ／Ｆ分離）を行うのが好ましい。
具体的には、例えば、上記方法において第１の複合体を形成させた後又は／及び第２の複合体を形成させた後に洗浄操作を行えばよく、第１の複合体を形成させた後に洗浄操作（Ｂ／Ｆ分離）を行い、更に第２の複合体を形成させた後に洗浄操作（Ｂ／Ｆ分離）を行うのが好ましい。
具体的には、例えば、上記方法において第１の複合体を形成させた後又は／及び第２の複合体を形成させた後に洗浄操作を行えばよく、第１の複合体を形成させた後に洗浄操作（Ｂ／Ｆ分離）を行い、更に第２の複合体を形成させた後に洗浄操作（Ｂ／Ｆ分離）を行うのが好ましい。
ＡＤ診断補助方法（ＩＩＩ）のアミロイドβ（１－４０）の量又はアミロイドβ（１－４２）の量の測定における複合体量測定工程は、複合体形成工程で得られた、生体試料中のアミロイドβ（１－４０）又はアミロイドβ（１－４２）と、アミロイドβ（１－４０）に対して親和性を有する物質又はアミロイドβ（１－４２）に対して親和性を有する物質とアミロイドβのＮ末端領域に対して親和性を有する物質を含む複合体の量を測定する工程であり、当該複合体の量が測定できる方法であれば、いずれの方法であってもよい。
当該複合体量測定工程は、より具体的には、例えば、（１）標識物質により標識されたアミロイドβ（１－４０）に対して特異的に結合する抗体又はアミロイドβ（１－４２）に対して特異的に結合する抗体を用いるか、（２）「アミロイドβ（１－４０）に対して特異的に結合する抗体又はアミロイドβ（１－４２）に対して特異的に結合する抗体」に対して特異的に結合する、標識物質により標識された標識２次抗体を用いるか、（３）アビジン類及びビオチン類の一方を結合させた「アミロイドβ（１－４０）に対して特異的に結合する抗体又はアミロイドβ（１－４２）に対して特異的に結合する抗体」とアビジン類及びビオチン類の残りの一方を結合させた標識物質を用いるか等して、前述の複合体形成工程で得られた、固相プレートに固定化したアミロイドβのＮ末端領域に対して親和性を有する抗体と生体試料中のアミロイドβ（１－４０）又はアミロイドβ（１－４２）とアミロイドβ（１－４０）に対して特異的に結合する抗体又はアミロイドβ（１－４２）に対して特異的に結合する抗体と標識物質（酵素類、蛍光性物質が好ましい）を含む複合体における標識物質を検出すればよい。
当該複合体量測定工程は、より具体的には、例えば、（１）標識物質により標識されたアミロイドβ（１－４０）に対して特異的に結合する抗体又はアミロイドβ（１－４２）に対して特異的に結合する抗体を用いるか、（２）「アミロイドβ（１－４０）に対して特異的に結合する抗体又はアミロイドβ（１－４２）に対して特異的に結合する抗体」に対して特異的に結合する、標識物質により標識された標識２次抗体を用いるか、（３）アビジン類及びビオチン類の一方を結合させた「アミロイドβ（１－４０）に対して特異的に結合する抗体又はアミロイドβ（１－４２）に対して特異的に結合する抗体」とアビジン類及びビオチン類の残りの一方を結合させた標識物質を用いるか等して、前述の複合体形成工程で得られた、固相プレートに固定化したアミロイドβのＮ末端領域に対して親和性を有する抗体と生体試料中のアミロイドβ（１－４０）又はアミロイドβ（１－４２）とアミロイドβ（１－４０）に対して特異的に結合する抗体又はアミロイドβ（１－４２）に対して特異的に結合する抗体と標識物質（酵素類、蛍光性物質が好ましい）を含む複合体における標識物質を検出すればよい。
複合体量測定工程において、標識物質を検出する前に洗浄操作（Ｂ／Ｆ分離）を行うのが好ましい。
生体試料の量や生体試料中のタンパク質の量（濃度）、生体試料中のアミロイドβ（１－４０）の量又は／及びアミロイドβ（１－４２）の量（濃度）、これらと反応させるアミロイドβ（１－４０）に対して親和性を有する物質、アミロイドβ（１－４２）に対して親和性を有する物質、及びアミロイドβのＮ末端領域に対して親和性を有する物質の量（濃度）、標識物質や標識方法等は、生体試料の種類、要求される測定感度、用いる測定方法や測定装置などに応じて適宜設定すればよい。
また、生体試料中のアミロイドβ（１－４０）の量又は／及びアミロイドβ（１－４２）の量等は、標準品を用いて検量線を作成することにより算出してもよい。当該標準品としては、例えば、アミロイドβ（１－４０）、アミロイドβ（１－４２）等が挙げられる。
また、生体試料中のアミロイドβ（１－４０）の量又は／及びアミロイドβ（１－４２）の量等は、標準品を用いて検量線を作成することにより算出してもよい。当該標準品としては、例えば、アミロイドβ（１－４０）、アミロイドβ（１－４２）等が挙げられる。
ＡＤ診断補助方法（ＩＩＩ）におけるアルツハイマー型認知症の判定は、ＡＤマーカー（ＩＩＩ）を指標として、アルツハイマー型認知症を判定することを含む。
当該アルツハイマー型認知症の判定としては、例えば、被験者がアルツハイマー型認知症に罹患している可能性が高いか否かの判定、被験者がアルツハイマー型認知症に罹患している可能性の有無の判定、被験者がアルツハイマー型認知症を発症するリスクが高いか否かの判定、被験者がアルツハイマー型認知症を発症するリスクの有無の判定が挙げられ、被験者がアルツハイマー型認知症に罹患している可能性が高いか否かの判定、被験者がアルツハイマー型認知症に罹患している可能性の有無の判定が好ましい。
当該アルツハイマー型認知症の判定としては、例えば、被験者がアルツハイマー型認知症に罹患している可能性が高いか否かの判定、被験者がアルツハイマー型認知症に罹患している可能性の有無の判定、被験者がアルツハイマー型認知症を発症するリスクが高いか否かの判定、被験者がアルツハイマー型認知症を発症するリスクの有無の判定が挙げられ、被験者がアルツハイマー型認知症に罹患している可能性が高いか否かの判定、被験者がアルツハイマー型認知症に罹患している可能性の有無の判定が好ましい。
ＡＤ診断補助方法（ＩＩＩ）におけるアルツハイマー型認知症の判定は、例えば、前記の方法により算出されたＡＤマーカー（ＩＩＩ）を、予め定めた基準値（カットオフ値）と比較することによりなされる。
具体的には、ＡＤマーカー（ＩＩＩ）が予め定めた基準値以下の場合は、被験者がアルツハイマー型認知症に罹患している可能性が高い、又は被験者がアルツハイマー型認知症に罹患している可能性がある、或いは被験者がアルツハイマー型認知症を発症するリスクが高い、又は被験者がアルツハイマー型認知症を発症するリスクがあると判定できる。
また、ＡＤマーカー（ＩＩＩ）が予め定めた基準値より大きい場合は、被検者がアルツハイマー型認知症に罹患している可能性が低い又は被検者がアルツハイマー型認知症に罹患している可能性がない、或いは被験者がアルツハイマー型認知症を発症するリスクが低い、又は被験者がアルツハイマー型認知症を発症するリスクがないと判定できる。
具体的には、ＡＤマーカー（ＩＩＩ）が予め定めた基準値以下の場合は、被験者がアルツハイマー型認知症に罹患している可能性が高い、又は被験者がアルツハイマー型認知症に罹患している可能性がある、或いは被験者がアルツハイマー型認知症を発症するリスクが高い、又は被験者がアルツハイマー型認知症を発症するリスクがあると判定できる。
また、ＡＤマーカー（ＩＩＩ）が予め定めた基準値より大きい場合は、被検者がアルツハイマー型認知症に罹患している可能性が低い又は被検者がアルツハイマー型認知症に罹患している可能性がない、或いは被験者がアルツハイマー型認知症を発症するリスクが低い、又は被験者がアルツハイマー型認知症を発症するリスクがないと判定できる。
ＡＤ診断補助方法（ＩＩＩ）における予め定めた基準値の決定方法は、特に限定されず、例えば、アルツハイマー型認知症に罹患している患者及び健常者から取得した生体試料をもとにＡＤマーカー（ＩＩＩ）を算出し、得られたＡＤマーカー（ＩＩＩ）を用いて、ＲＯＣ解析（Ｒｅｃｅｉｖｅｒ Ｏｐｅｒａｔｉｎｇ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ）等の統計解析により定めることができる。当該予め定めた基準値の設定においては、感度、特異度、陽性的中率、陰性的中率などを考慮することが好ましい。前記予め定めた基準値は、例えば、感度が６０％以上となるように定めることができ、７０％以上となるものが好ましく、８０％以上となるものがより好ましく、９０％以上となるものが更に好ましく、例えば、特異度が６０％以上となるように定めることができ、７０％以上となるものが好ましく、８０％以上となるものがより好ましく、９０％以上となるものが更に好ましい。
＜アルツハイマー型認知症の診断補助用試薬キット（ＩＩＩ）＞
第１発明－３におけるアルツハイマー型認知症の診断補助用試薬キット（以下、「ＡＤ診断補助用試薬キット（ＩＩＩ）」と略記する場合がある）は、テトラスパニンに対して親和性を有する物質、ホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質、アミロイドβ（１－４０）に対して親和性を有する物質、及びアミロイドβ（１－４２）に対して親和性を有する物質、要すれば、さらにアミロイドβのＮ末端領域に対して親和性を有する物質を含む。
すなわち、ＡＤ診断補助用試薬キット（ＩＩＩ）は、ＡＤ診断補助用試薬キット（ＩＩ）とアミロイドβ（１－４０）に対して親和性を有する物質、及びアミロイドβ（１－４２）に対して親和性を有する物質、要すれば、さらにアミロイドβのＮ末端領域に対して親和性を有する物質を含む試薬キットである。
第１発明－３におけるアルツハイマー型認知症の診断補助用試薬キット（以下、「ＡＤ診断補助用試薬キット（ＩＩＩ）」と略記する場合がある）は、テトラスパニンに対して親和性を有する物質、ホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質、アミロイドβ（１－４０）に対して親和性を有する物質、及びアミロイドβ（１－４２）に対して親和性を有する物質、要すれば、さらにアミロイドβのＮ末端領域に対して親和性を有する物質を含む。
すなわち、ＡＤ診断補助用試薬キット（ＩＩＩ）は、ＡＤ診断補助用試薬キット（ＩＩ）とアミロイドβ（１－４０）に対して親和性を有する物質、及びアミロイドβ（１－４２）に対して親和性を有する物質、要すれば、さらにアミロイドβのＮ末端領域に対して親和性を有する物質を含む試薬キットである。
ＡＤ診断補助用試薬キット（ＩＩＩ）における、ＡＤ診断補助用試薬キット（ＩＩ）に関する全ての記載は、前記の第１発明－２におけるＡＤ診断補助用試薬キット（ＩＩ）と同様であり、好ましいものや具体例も同様である。
ＡＤ診断補助用試薬キット（ＩＩＩ）におけるアミロイドβ（１－４０）に対して親和性を有する物質、アミロイドβ（１－４２）に対して親和性を有する物質、アミロイドβのＮ末端領域に対して親和性を有する物質は、それぞれＡＤ診断補助方法（ＩＩＩ）のものと同様であり、好ましいものも同様である。
当該アミロイドβ（１－４０）に対して親和性を有する物質、アミロイドβ（１－４２）に対して親和性を有する物質、アミロイドβのＮ末端領域に対して親和性を有する物質は、それぞれ溶液状態であっても、凍結状態や乾燥状態、凍結乾燥状態であってもよい。また、当該アミロイドβ（１－４０）に対して親和性を有する物質、アミロイドβ（１－４２）に対して親和性を有する物質、及びアミロイドβのＮ末端領域に対して親和性を有する物質は、一つの試薬としてキットに含まれていても別々の試薬としてキットに含まれていてもよい。
当該アミロイドβ（１－４０）に対して親和性を有する物質、アミロイドβ（１－４２）に対して親和性を有する物質、アミロイドβのＮ末端領域に対して親和性を有する物質は、それぞれ溶液状態であっても、凍結状態や乾燥状態、凍結乾燥状態であってもよい。また、当該アミロイドβ（１－４０）に対して親和性を有する物質、アミロイドβ（１－４２）に対して親和性を有する物質、及びアミロイドβのＮ末端領域に対して親和性を有する物質は、一つの試薬としてキットに含まれていても別々の試薬としてキットに含まれていてもよい。
ＡＤ診断補助用試薬キット（ＩＩＩ）におけるアミロイドβ（１－４０）に対して親和性を有する物質又はアミロイドβ（１－４２）に対して親和性を有する物質、及びアミロイドβのＮ末端領域に対して親和性を有する物質の組み合わせは、ＡＤ診断補助方法（ＩＩＩ）における組み合わせと同様の組み合わせが挙げられ、好ましい組み合わせも同様である。
ＡＤ診断補助用試薬キット（ＩＩＩ）におけるアミロイドβ（１－４０）に対して親和性を有する物質、アミロイドβ（１－４２）に対して親和性を有する物質、又は／及びアミロイドβのＮ末端領域に対して親和性を有する物質は、固相に固定化されていてもよく、また標識物質により標識されていてもよい。当該固相や固相への固定化方法、当該標識物質や標識方法は、ＡＤ診断補助方法（ＩＩＩ）におけるものと同様であり、好ましいものも同様である。
ＡＤ診断補助用試薬キット（ＩＩＩ）におけるアミロイドβ（１－４０）に対して親和性を有する物質、又はアミロイドβ（１－４２）に対して親和性を有する物質の濃度（量）は、測定方法に応じて、通常この分野で用いられている範囲で適宜設定されればよい。アミロイドβ（１－４０）に対して親和性を有する物質、又はアミロイドβ（１－４２）に対して親和性を有する物質は、例えば、使用時の濃度として、固相に固定化する場合は、通常１０～２００００ｎｇ／ｍＬ、１００～１００００ｎｇ／ｍＬとなる量が含まれるものが好ましく、検出に用いる場合は、通常１０～５０００ｎｇ／ｍＬ、１００～５００ｎｇ／ｍＬとなる量が含まれるものが好ましい。
また、アミロイドβのＮ末端領域に対して親和性を有する物質は、例えば、使用時の濃度として、固相に固定化する場合は、通常１０～２００００ｎｇ／ｍＬ、１００～１００００ｎｇ／ｍＬとなる量が含まれるものが好ましく、検出に用いる場合は、通常１０～５０００ｎｇ／ｍＬ、１００～５００ｎｇ／ｍＬとなる量が含まれるものが好ましい。
また、ＡＤ診断補助用試薬キット（ＩＩＩ）におけるテトラスパニンに対して親和性を有する物質及びホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質は、通常この分野で用いられる試薬類と共存させてもよく、当該試薬としてはＡＤ診断補助用試薬キットと同様である。
また、アミロイドβのＮ末端領域に対して親和性を有する物質は、例えば、使用時の濃度として、固相に固定化する場合は、通常１０～２００００ｎｇ／ｍＬ、１００～１００００ｎｇ／ｍＬとなる量が含まれるものが好ましく、検出に用いる場合は、通常１０～５０００ｎｇ／ｍＬ、１００～５００ｎｇ／ｍＬとなる量が含まれるものが好ましい。
また、ＡＤ診断補助用試薬キット（ＩＩＩ）におけるテトラスパニンに対して親和性を有する物質及びホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質は、通常この分野で用いられる試薬類と共存させてもよく、当該試薬としてはＡＤ診断補助用試薬キットと同様である。
さらに、ＡＤ診断補助用試薬キット（ＩＩＩ）は、アミロイドβ（１－４０）に対して親和性を有する物質、アミロイドβ（１－４２）に対して親和性を有する物質、又は／及びアミロイドβのＮ末端領域に対して親和性を有する物質の他に、アミロイドβ（１－４０）の量又は／及びアミロイドβ（１－４２）の量を測定する為に必要な試薬を備えていてもよい。このような試薬としては、ＡＤ診断補助用試薬キットのものと同様である。
ＡＤ診断補助用試薬キット（ＩＩＩ）は、アミロイドβ（１－４０）又は／及びアミロイドβ（１－４２）について検量線を作成するために用いられる標準品を含んでいてもよく、当該標準品としては、例えば、アミロイドβ（１－４０）、アミロイドβ（１－４２）等が挙げられる。当該標準品は、溶液状態であっても、凍結状態や乾燥状態、凍結乾燥状態であってもよい。また、通常この分野で用いられる試薬類、例えば、緩衝剤、反応促進剤、糖類、タンパク質、塩類、界面活性剤等の安定化剤、防腐剤等を、当該標準品と共存させてもよい。これらの濃度、ｐＨも通常この分野で用いられている範囲から適宜選択すればよい。
ＡＤ診断補助用試薬キット（ＩＩＩ）には、添付文書や取扱説明書が含まれていてもよい。当該添付文書や取扱説明書としては、例えば、被験者に由来する生体試料中のアミロイドβ（１－４０）の量又は／及びアミロイドβ（１－４２）の量を測定すること、ＡＤマーカー（ＩＩＩ）を算出すること、ＡＤマーカー（ＩＩＩ）を指標として、被験者がアルツハイマー型認知症であると判定することが記載された添付文書や取扱説明書等が挙げられる。これらの添付文書や取扱説明書は、複数のものに分かれて記載されたものであっても、一つのものに纏めて記載されたものであってもよい。
ＡＤ診断補助用試薬キット（ＩＩＩ）は、具体的には、例えば、「アミロイドβ（１－４０）に対して親和性を有する物質、又はアミロイドβ（１－４２）に対して親和性を有する物質」とアミロイドβのＮ末端領域に対して親和性を有する物質のいずれか一方が固相に固定化されたものと「アミロイドβ（１－４０）に対して親和性を有する物質、又はアミロイドβ（１－４２）に対して親和性を有する物質」とアミロイドβのＮ末端領域に対して親和性を有する物質の残りの一方が、標識物質と結合しているもの又は当該残りの一方の親和性物質とこれを間接的に標識物質と結合させる為の成分を含むキットが挙げられる。
ＡＤ診断補助用試薬キット（ＩＩＩ）は、「アミロイドβ（１－４０）に対して親和性を有する物質、又はアミロイドβ（１－４２）に対して親和性を有する物質」とアミロイドβのＮ末端領域に対して親和性を有する物質のいずれか一方が固相に固定化されたものと下記（１）～（３）から選ばれるいずれか１つを含むキットが好ましいものとして挙げられる。
（１）「アミロイドβ（１－４０）に対して親和性を有する物質、又はアミロイドβ（１－４２）に対して親和性を有する物質」とアミロイドβのＮ末端領域に対して親和性を有する物質の残りの一方が標識物質と結合したもの、
（２）「アミロイドβ（１－４０）に対して親和性を有する物質、又はアミロイドβ（１－４２）に対して親和性を有する物質」とアミロイドβのＮ末端領域に対して親和性を有する物質の残りの一方、並びに当該親和性物質に対して特異的に結合する２次親和性物質が標識物質と結合したもの、
（３）「アミロイドβ（１－４０）に対して親和性を有する物質、又はアミロイドβ（１－４２）に対して親和性を有する物質」とアミロイドβのＮ末端領域に対して親和性を有する物質の残りの一方がアビジン類及びビオチン類の一方と結合したもの、並びにアビジン類及びビオチン類の残りの一方が標識物質と結合したもの
ＡＤ診断補助用試薬キット（ＩＩＩ）は、「アミロイドβ（１－４０）に対して親和性を有する物質、又はアミロイドβ（１－４２）に対して親和性を有する物質」とアミロイドβのＮ末端領域に対して親和性を有する物質のいずれか一方が固相に固定化されたものと下記（１）～（３）から選ばれるいずれか１つを含むキットが好ましいものとして挙げられる。
（１）「アミロイドβ（１－４０）に対して親和性を有する物質、又はアミロイドβ（１－４２）に対して親和性を有する物質」とアミロイドβのＮ末端領域に対して親和性を有する物質の残りの一方が標識物質と結合したもの、
（２）「アミロイドβ（１－４０）に対して親和性を有する物質、又はアミロイドβ（１－４２）に対して親和性を有する物質」とアミロイドβのＮ末端領域に対して親和性を有する物質の残りの一方、並びに当該親和性物質に対して特異的に結合する２次親和性物質が標識物質と結合したもの、
（３）「アミロイドβ（１－４０）に対して親和性を有する物質、又はアミロイドβ（１－４２）に対して親和性を有する物質」とアミロイドβのＮ末端領域に対して親和性を有する物質の残りの一方がアビジン類及びビオチン類の一方と結合したもの、並びにアビジン類及びビオチン類の残りの一方が標識物質と結合したもの
＜アルツハイマー型認知症の診断補助用装置（ＩＩＩ）＞
第１発明―３におけるアルツハイマー型認知症の診断補助用装置（以下、「ＡＤ診断補助用装置（ＩＩＩ）」と略記する場合がある）は、被験者に由来する生体試料中の、ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量、並びにテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の測定を測定する測定部、テトラスパニンを有する細胞外小胞の量に対するホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の割合（ＡＤマーカー（ＩＩ））にアミロイドβ（１－４０）の量に対するアミロイドβ（１－４２）の量の割合（Ａβ（１－４２）／Ａβ（１－４０））を乗じてＡＤマーカー（ＩＩＩ）を算出する演算部、ＡＤマーカー（ＩＩＩ）を指標として、被験者がアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害であると判定する判定部を有する。
第１発明―３におけるアルツハイマー型認知症の診断補助用装置（以下、「ＡＤ診断補助用装置（ＩＩＩ）」と略記する場合がある）は、被験者に由来する生体試料中の、ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量、並びにテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の測定を測定する測定部、テトラスパニンを有する細胞外小胞の量に対するホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の割合（ＡＤマーカー（ＩＩ））にアミロイドβ（１－４０）の量に対するアミロイドβ（１－４２）の量の割合（Ａβ（１－４２）／Ａβ（１－４０））を乗じてＡＤマーカー（ＩＩＩ）を算出する演算部、ＡＤマーカー（ＩＩＩ）を指標として、被験者がアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害であると判定する判定部を有する。
ＡＤ診断補助用装置（ＩＩＩ）は、要すれば、アミロイドβ（１－４０）の量又は／及びアミロイドβ（１－４２）の量を測定する測定部、アミロイドβ（１－４０）の量又は／及びアミロイドβ（１－４２）の量或いはアミロイドβ（１－４０）の量に対するアミロイドβ（１－４２）の量の割合（Ａβ（１－４２）／Ａβ（１－４０））を外部から入力する入力部、アミロイドβ（１－４０）の量に対するアミロイドβ（１－４２）の量の割合（Ａβ（１－４２）／Ａβ（１－４０））を算出するための演算部を有していてもよい。
ＡＤ診断補助用装置（ＩＩＩ）を構成する測定部、演算部、入力部、判定部等は同一の装置内に配置されていても、それぞれ別体となっていてもよい。
ＡＤ診断補助用装置（ＩＩＩ）における前記測定部は、装置に導入された生体試料中のホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量、並びにテトラスパニンを有する細胞外小胞の量を測定する部位である。要すれば、前記測定部は、装置に導入された生体試料中のアミロイドβ（１－４０）の量又は／及びアミロイドβ（１－４２）の量をさらに測定する部位でもある。
前記測定部の大きさや構成は特に限定されない。
前記測定部としては、例えば、ＥＬＩＳＡ法に用いられるマイクロプレートリーダー又はＣＣＤを用いて撮像するイメージング装置、ウエスタンブロット法又はマイクロアレイ（マイクロチップ）を利用した方法に用いられるイメージング装置、質量分析法に用いられる質量分析装置、分子間相互作用解析装置、及びフローサイトメトリーに用いられるフローサイトメーター、ＨＰＬＣ法やキャピラリー電気泳動法に用いられる紫外可視光検出器や蛍光検出器等が挙げられる。
前記測定部の大きさや構成は特に限定されない。
前記測定部としては、例えば、ＥＬＩＳＡ法に用いられるマイクロプレートリーダー又はＣＣＤを用いて撮像するイメージング装置、ウエスタンブロット法又はマイクロアレイ（マイクロチップ）を利用した方法に用いられるイメージング装置、質量分析法に用いられる質量分析装置、分子間相互作用解析装置、及びフローサイトメトリーに用いられるフローサイトメーター、ＨＰＬＣ法やキャピラリー電気泳動法に用いられる紫外可視光検出器や蛍光検出器等が挙げられる。
ＡＤ診断補助用装置（ＩＩＩ）における、被験者、生体試料、細胞外小胞は、それぞれ前記のものと同様であり、好ましいものも同様である。
ＡＤ診断補助用装置（ＩＩＩ）における、ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞、量、ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の測定対象、ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の測定や当該測定に用いられる物質、テトラスパニンを有する細胞外小胞、テトラスパニンを有する細胞外小胞の量の測定対象、テトラスパニンを有する細胞外小胞の量の測定や当該測定に用いられる物質は、ＡＤ診断補助方法（ＩＩ）のものと同様であり、好ましいものや具体例も同様である。
ＡＤ診断補助用装置（ＩＩＩ）における演算部は、測定部で得られたテトラスパニンを有する細胞外小胞の量、及びホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量、並びに測定部で得られたアミロイドβ（１－４０）の量又は／及びアミロイドβ（１－４２）の量、或いは入力部より外部から入力されたアミロイドβ（１－４０）の量又は／及びアミロイドβ（１－４２）の量、若しくはアミロイドβ（１－４０）の量に対するアミロイドβ（１－４２）の量の割合（Ａβ（１－４２）／Ａβ（１－４０））に基づき、テトラスパニンを有する細胞外小胞の量に対するホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の割合（ＡＤマーカー（ＩＩ））にアミロイドβ（１－４０）の量に対するアミロイドβ（１－４２）の量の割合（Ａβ（１－４２）／Ａβ（１－４０））を乗じたＡＤマーカー（ＩＩＩ）を算出する部位である。
前記演算部の大きさや構成は特に限定されない。
ＡＤ診断補助用装置（ＩＩＩ）における演算部は、測定又は入力された質量や濃度と相関関係を有する実測値（例えば、吸光度、吸光度変化量、透過光、透過光変化量、蛍光強度、蛍光強度変化量、発光量、発光量変化量、濁度、濁度変化率、散乱光、散乱光変化率、反射率、反射率変化量、屈折率、屈折率変化量等）を質量や濃度等に換算した後、ＡＤマーカー（ＩＩＩ）を算出してもよい。
なお、当該実測値、演算部により換算された質量や濃度等、ＡＤマーカー（ＩＩ）、アミロイドβ（１－４０）の量に対するアミロイドβ（１－４２）の量の割合（Ａβ（１－４２）／Ａβ（１－４０））、ＡＤマーカー（ＩＩＩ）は、メモリやハードディスクなど装置に備えられた記憶装置等に記憶されてもよい。
前記演算部の大きさや構成は特に限定されない。
ＡＤ診断補助用装置（ＩＩＩ）における演算部は、測定又は入力された質量や濃度と相関関係を有する実測値（例えば、吸光度、吸光度変化量、透過光、透過光変化量、蛍光強度、蛍光強度変化量、発光量、発光量変化量、濁度、濁度変化率、散乱光、散乱光変化率、反射率、反射率変化量、屈折率、屈折率変化量等）を質量や濃度等に換算した後、ＡＤマーカー（ＩＩＩ）を算出してもよい。
なお、当該実測値、演算部により換算された質量や濃度等、ＡＤマーカー（ＩＩ）、アミロイドβ（１－４０）の量に対するアミロイドβ（１－４２）の量の割合（Ａβ（１－４２）／Ａβ（１－４０））、ＡＤマーカー（ＩＩＩ）は、メモリやハードディスクなど装置に備えられた記憶装置等に記憶されてもよい。
ＡＤ診断補助用装置（ＩＩＩ）における判定部は、演算部で算出したＡＤマーカー（ＩＩＩ）を指標として、アルツハイマー型認知症を判定する部位である。
ＡＤ診断補助用装置（ＩＩＩ）におけるアルツハイマー型認知症の判定や当該判定に用いられる予め定められた基準値、予め定められた基準値の決定方法は、ＡＤ診断補助方法（ＩＩＩ）のものと同様であり、好ましいものや具体例も同様である。
ＡＤ診断補助用装置（ＩＩＩ）における予め定めた基準値は、ＡＤ診断補助用装置（ＩＩＩ）に予め記憶されていてもよいし、判定の際にＡＤ診断補助用装置（ＩＩＩ）の入力部位から入力されてもよい。
ＡＤ診断補助用装置（ＩＩＩ）における予め定めた基準値は、ＡＤ診断補助用装置（ＩＩＩ）に予め記憶されていてもよいし、判定の際にＡＤ診断補助用装置（ＩＩＩ）の入力部位から入力されてもよい。
ＡＤ診断補助用装置（ＩＩＩ）は、出力部を備えていてもよい。出力部では、前記した判定の結果をディスプレイなどの表示装置やプリンターなどの印刷装置に表示又は出力させるなどの処理が行われる。
２．アルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の診断補助
本発明における第２発明は、アルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の診断を補助する方法、バイオマーカー、試薬キット及び装置に関する。
本発明における第２発明には、ホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞、ＣＤ９を有する細胞外小胞を含むバイオマーカーを組み合わせて使用し、前記ＣＤ９を有する細胞外小胞の量に対する前記ホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の割合を指標として、被験者がアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害であると判定する場合（以下、「第２発明－１」と略記する場合がある）と、
ホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞、ＣＤ９を有する細胞外小胞、アミロイドβ（１－４０）、アミロイドβ（１－４２）を含むバイオマーカーを組み合わせて使用し、前記ＣＤ９を有する細胞外小胞の量に対する前記ホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の割合に、前記アミロイドβ（１－４０）の量に対する前記アミロイドβ（１－４２）の量の割合（Ａβ（１－４２）／Ａβ（１－４０））を乗じた値を指標として、被験者がアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害であると判定する場合（以下、「第２発明－２」と略記する場合がある）が含まれる。
本発明における第２発明は、アルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の診断を補助する方法、バイオマーカー、試薬キット及び装置に関する。
本発明における第２発明には、ホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞、ＣＤ９を有する細胞外小胞を含むバイオマーカーを組み合わせて使用し、前記ＣＤ９を有する細胞外小胞の量に対する前記ホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の割合を指標として、被験者がアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害であると判定する場合（以下、「第２発明－１」と略記する場合がある）と、
ホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞、ＣＤ９を有する細胞外小胞、アミロイドβ（１－４０）、アミロイドβ（１－４２）を含むバイオマーカーを組み合わせて使用し、前記ＣＤ９を有する細胞外小胞の量に対する前記ホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の割合に、前記アミロイドβ（１－４０）の量に対する前記アミロイドβ（１－４２）の量の割合（Ａβ（１－４２）／Ａβ（１－４０））を乗じた値を指標として、被験者がアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害であると判定する場合（以下、「第２発明－２」と略記する場合がある）が含まれる。
２－１．第２発明－１
＜アルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の診断補助用バイオマーカーセット＞
第２発明－１におけるアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の診断補助用バイオマーカーセット（以下、「ＡＤ／ＭＣＩマーカーセット」と略記する場合がある）は、ホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞、ＣＤ９を有する細胞外小胞を含むバイオマーカーの組み合わせである。
ＡＤ／ＭＣＩマーカーセットによれば、例えば、前記ＣＤ９を有する細胞外小胞の量に対する前記ホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の割合（以下「ＡＤ／ＭＣＩマーカー」と略記する場合がある）を求めることができ、当該割合は、被験者がアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害であると判定する為の指標として用いることができる。
＜アルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の診断補助用バイオマーカーセット＞
第２発明－１におけるアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の診断補助用バイオマーカーセット（以下、「ＡＤ／ＭＣＩマーカーセット」と略記する場合がある）は、ホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞、ＣＤ９を有する細胞外小胞を含むバイオマーカーの組み合わせである。
ＡＤ／ＭＣＩマーカーセットによれば、例えば、前記ＣＤ９を有する細胞外小胞の量に対する前記ホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の割合（以下「ＡＤ／ＭＣＩマーカー」と略記する場合がある）を求めることができ、当該割合は、被験者がアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害であると判定する為の指標として用いることができる。
ＡＤ／ＭＣＩマーカーセットにおける細胞外小胞は、前記細胞外小胞と同様であり、好ましいものも同様である。
ＡＤ／ＭＣＩマーカーセットにおけるホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞は、少なくともホスファチジルセリン及びＣＤ９を膜表面に有する。
また、ＡＤ／ＭＣＩマーカーセットにおけるＣＤ９を有する細胞外小胞は、少なくともＣＤ９を膜表面に有する。
また、ＡＤ／ＭＣＩマーカーセットにおけるＣＤ９を有する細胞外小胞は、少なくともＣＤ９を膜表面に有する。
＜アルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の診断を補助する方法＞
第２発明－１におけるアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の診断を補助する方法（以下、「ＡＤ／ＭＣＩ診断補助方法」と略記する場合がある）は、生体試料中のホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量、及び生体試料中のＣＤ９を有する細胞外小胞の量を測定すること、ＣＤ９を有する細胞外小胞の量に対するホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の割合を算出すること、ＣＤ９を有する細胞外小胞の量に対するホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の割合を指標として、被験者がアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害であると判定することを含む。
第２発明－１におけるアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の診断を補助する方法（以下、「ＡＤ／ＭＣＩ診断補助方法」と略記する場合がある）は、生体試料中のホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量、及び生体試料中のＣＤ９を有する細胞外小胞の量を測定すること、ＣＤ９を有する細胞外小胞の量に対するホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の割合を算出すること、ＣＤ９を有する細胞外小胞の量に対するホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の割合を指標として、被験者がアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害であると判定することを含む。
ＡＤ／ＭＣＩ診断補助方法における生体試料、被験者、細胞外小胞は、それぞれ前記のものと同様であり、好ましいものも同様である。
ＡＤ／ＭＣＩ診断補助方法におけるホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞、ＣＤ９を有する細胞外小胞は、ＡＤ／ＭＣＩマーカーセットにおいて前述したものと同様である。
ＡＤ／ＭＣＩ診断補助方法における「量」は、ＡＤ診断補助方法において前述したものと同様であり、具体例も同様である。
ＡＤ／ＭＣＩ診断補助方法におけるホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の測定は、通常この分野でなされる方法であれば、特に限定されない。当該測定は、例えば、テトラスパニンに対して親和性を有する物質としてＣＤ９に対して親和性を有する物質を用いて、ＡＤ診断補助方法におけるホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の測定と同様に行えばよい。
ＡＤ／ＭＣＩ診断補助方法におけるＣＤ９を有する細胞外小胞の量の測定は、通常この分野でなされる方法であれば、特に限定されない。当該測定は、例えば、テトラスパニンに対して親和性を有する物質としてＣＤ９に対して親和性を有する物質を用いて、ＡＤ診断補助方法（ＩＩ）におけるテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の測定と同様に行えばよい。
ＡＤ／ＭＣＩ診断補助方法におけるホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質としては、ＡＤ診断補助方法のものと同様であり、好ましいものも同様である。
ＡＤ／ＭＣＩ診断補助方法におけるＣＤ９に対して親和性を有する物質としては、ＣＤ９に対して特異的に結合する物質であればよく、例えば、ＣＤ９に対して特異的に結合する抗体やＣＤ９と結合する糖鎖に対して特異的に結合するレクチン等のＣＤ９に対して特異的に結合するタンパク質、ＣＤ９に対して特異的に結合する核酸が挙げられ、中でもＣＤ９に対して特異的に結合するタンパク質が好ましく、ＣＤ９に対して特異的に結合する抗体がより好ましい。ＣＤ９に対して特異的に結合する抗体は、モノクローナル抗体であっても、ポリクローナル抗体であってもよい。前記ＣＤ９に対して親和性を有する物質は、１種のみを用いても、２種以上を用いても何れでもよく、１種のみを用いるのが好ましい。
ＡＤ／ＭＣＩ診断補助方法におけるホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質及びＣＤ９に対して親和性を有する物質に関する、標識物質や標識方法、２次親和性物質、アビジン類とビオチン類の結合、固相、固定化方法は、テトラスパニンに対して親和性を有する物質としてＣＤ９に対して親和性を有する物質を用いて、ＡＤ診断補助方法（ＩＩ）と同様に行えばよい。
ＡＤ／ＭＣＩ診断補助方法における複合体形成工程、複合体量測定工程、洗浄操作（Ｂ／Ｆ分離）は、テトラスパニンに対して親和性を有する物質をＣＤ９に対して親和性を有する物質として、ＡＤ診断補助方法（ＩＩ）と同様に行えばよく、具体例や好ましい例もＡＤ診断補助方法（ＩＩ）と同じである。
ＡＤ／ＭＣＩ診断補助方法におけるホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の測定は、具体的には、例えば、固相に固定化したホスファチジルセリンに対して特異的に結合する抗体又はＴｉｍタンパク質（Ｔｉｍ又はＴｉｍ４が好ましく、Ｔｉｍ４がより好ましい）と生体試料とを接触させて、ホスファチジルセリンに対して特異的に結合する抗体又はＴｉｍタンパク質と生体試料中のホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞との第１の複合体を形成させ、当該第１の複合体とＣＤ９に対して特異的に結合する抗体とを接触させ、当該第１の複合体とＣＤ９に対して特異的に結合する抗体と標識物質の第２の複合体を形成させ、当該第２の複合体の標識物質（酵素類、蛍光性物質が好ましい）の標識物質を検出すればよい。
当該第１の複合体を形成させる際に使用するＣＤ９に対して親和性を有する物質と当該第２の複合体を形成させる際に使用するＣＤ９に対して親和性を有する物質とは、同一のものが好ましい。
当該第１の複合体を形成させる際に使用するＣＤ９に対して親和性を有する物質と当該第２の複合体を形成させる際に使用するＣＤ９に対して親和性を有する物質とは、同一のものが好ましい。
ＡＤ／ＭＣＩ診断補助方法におけるホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の測定は、より具体的には、例えば、固相プレートに固定化したホスファチジルセリンに対して特異的に結合する抗体又はＴｉｍタンパク質（Ｔｉｍ又はＴｉｍ４が好ましく、Ｔｉｍ４がより好ましい）と生体試料とを接触させて、ホスファチジルセリンに対して特異的に結合する抗体又はＴｉｍタンパク質と生体試料中のホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞との第１の複合体を形成させ、要すればＢ／Ｆ分離の後、（１）当該第１の複合体と標識物質により標識されたＣＤ９に対して特異的に結合する抗体とを接触させ、当該第１の複合体と標識物質により標識されたＣＤ９に対して特異的に結合する抗体との第２の複合体を形成させる、（２）前記第１の複合体とＣＤ９に対して特異的に結合する抗体とを接触させ、当該第１の複合体とＣＤ９に対して特異的に結合する抗体との第２の複合体を形成させ、要すればＢ／Ｆ分離後、当該第２の複合体と「当該ＣＤ９に対して特異的に結合する抗体」に対して特異的に結合する、標識物質により標識された標識２次抗体とを接触させ、当該第２の複合体と当該標識２次抗体との第３の複合体を形成させる、或いは（３）前記第１の複合体とアビジン類及びビオチン類の一方を結合させたＣＤ９に対して特異的に結合する抗体とを接触させ、当該第１の複合体とアビジン類及びビオチン類の一方を結合させたＣＤ９に対して特異的に結合する抗体との第２の複合体を形成させ、要すればＢ／Ｆ分離後、当該第１の複合体とアビジン類及びビオチン類の一方を結合させたＣＤ９に対して特異的に結合する抗体とを接触させ、当該第１の複合体とアビジン類及びビオチン類の一方を結合させたＣＤ９に対して特異的に結合する抗体との第２の複合体を形成させ、当該第２の複合体とアビジン類及びビオチン類の残りの一方を結合させた標識物質（酵素類、蛍光性物質が好ましい）の第３の複合体を形成させ、Ｂ／Ｆ分離の後、得られる第２の複合体又は第３の複合体の標識物質を検出すればよい。
ＡＤ／ＭＣＩ診断補助方法におけるＣＤ９を有する細胞外小胞の量の測定は、具体的には、例えば、固相に固定化したＣＤ９に対して特異的に結合する抗体と生体試料とを接触させて、ＣＤ９に対して特異的に結合する抗体と生体試料中のＣＤ９を有する細胞外小胞との第１の複合体を形成させ、当該第１の複合体とＣＤ９に対して特異的に結合する抗体とを接触させ、当該第１の複合体とＣＤ９に対して特異的に結合する抗体と標識物質の第２の複合体を形成させ、当該第２の複合体の標識物質（酵素類、蛍光性物質が好ましい）の標識物質を検出すればよい。
ＡＤ／ＭＣＩ診断補助方法におけるＣＤ９を有する細胞外小胞の量の測定は、より具体的には、例えば、固相プレートに固定化したＣＤ９に対して特異的に結合する抗体と生体試料とを接触させて、ＣＤ９に対して特異的に結合する抗体と生体試料中のＣＤ９を有する細胞外小胞との第１の複合体を形成させ、要すればＢ／Ｆ分離の後、（１）当該第１の複合体と標識物質により標識されたＣＤ９に対して特異的に結合する抗体とを接触させ、当該第１の複合体と標識物質により標識されたＣＤ９に対して特異的に結合する抗体との第２の複合体を形成させる、（２）前記第１の複合体とＣＤ９に対して特異的に結合する抗体とを接触させ、当該第１の複合体とＣＤ９に対して特異的に結合する抗体との第２の複合体を形成させ、要すればＢ／Ｆ分離後、当該第２の複合体と「当該ＣＤ９に対して特異的に結合する抗体」に対して特異的に結合する、標識物質により標識された標識２次抗体とを接触させ、当該第２の複合体と当該標識２次抗体との第３の複合体を形成させる、或いは（３）前記第１の複合体とアビジン類及びビオチン類の一方を結合させたＣＤ９に対して特異的に結合する抗体とを接触させ、当該第１の複合体とアビジン類及びビオチン類の一方を結合させたＣＤ９に対して特異的に結合する抗体との第２の複合体を形成させ、要すればＢ／Ｆ分離後、当該第１の複合体とアビジン類及びビオチン類の一方を結合させたＣＤ９に対して特異的に結合する抗体とを接触させ、当該第１の複合体とアビジン類及びビオチン類の一方を結合させたＣＤ９に対して特異的に結合する抗体との第２の複合体を形成させ、当該第２の複合体とアビジン類及びビオチン類の残りの一方を結合させた標識物質（酵素類、蛍光性物質が好ましい）の第３の複合体を形成させ、Ｂ／Ｆ分離の後、得られる第２の複合体又は第３の複合体の標識物質を検出すればよい。
生体試料の量や生体試料中のタンパク質の量（濃度）、生体試料中のホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量（濃度）や粒子数、これらと反応させるＣＤ９に対して親和性を有する物質及びホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質の量（濃度）、標識物質や標識方法等は、生体試料の種類、要求される測定感度、用いる測定方法や測定装置などに応じて適宜設定すればよい。
前記ＣＤ９を有する細胞外小胞の量に対するホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の割合は、前記ホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量（Ａ）を、前記ＣＤ９を有する細胞外小胞の量（Ｂ）により除すること（（Ａ）／（Ｂ））により算出すればよい。
ＡＤ／ＭＣＩ診断補助方法におけるアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の判定は、前記ＣＤ９を有する細胞外小胞の量（Ａ）に対するホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量（Ｂ）の割合（（Ａ）／（Ｂ））を指標として、アルツハイマー型認知症又は軽度認知障害を判定することを含む。
当該アルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の判定としては、例えば、被験者がアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害に罹患している可能性が高いか否かの判定、被験者がアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害に罹患している可能性の有無の判定、被験者がアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害を発症するリスクが高いか否かの判定、被験者がアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害を発症するリスクの有無の判定が挙げられ、被験者がアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害に罹患している可能性が高いか否かの判定、被験者がアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害に罹患している可能性の有無の判定が好ましい。
当該アルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の判定としては、例えば、被験者がアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害に罹患している可能性が高いか否かの判定、被験者がアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害に罹患している可能性の有無の判定、被験者がアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害を発症するリスクが高いか否かの判定、被験者がアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害を発症するリスクの有無の判定が挙げられ、被験者がアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害に罹患している可能性が高いか否かの判定、被験者がアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害に罹患している可能性の有無の判定が好ましい。
ＡＤ／ＭＣＩ診断補助方法におけるアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の判定は、例えば、前記ＣＤ９を有する細胞外小胞の量に対するホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の割合（（Ａ）／（Ｂ））を、予め定めた基準値（カットオフ値）と比較することによりなされる。
例えば、健常者とアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害とを区別する為に予め定めた基準値（カットオフ値、以下「健常／ＡＤ－ＭＣＩ基準値」と略記する場合がある）を用いれば、健常者とアルツハイマー型認知症患者又は軽度認知障害患者とを区別して判定できる。
例えば、健常者とアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害とを区別する為に予め定めた基準値（カットオフ値、以下「健常／ＡＤ－ＭＣＩ基準値」と略記する場合がある）を用いれば、健常者とアルツハイマー型認知症患者又は軽度認知障害患者とを区別して判定できる。
すなわち、例えば、診断基準に基づいてアルツハイマー型認知症と診断された被験者由来の生体試料又は診断基準に基づいてアルツハイマー型認知症を発症するリスクがあると診断された被験者由来の生体試料を用いて、前述のＡＤ／ＭＣＩ診断補助方法におけるＣＤ９を有する細胞外小胞の量の測定、前述のＡＤ／ＭＣＩ診断補助方法におけるホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の測定により得られた、被験者に由来する生体試料中のＣＤ９を有する細胞外小胞の量に対するホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の割合（（Ａ）／（Ｂ））を、予め定めた健常／ＡＤ－ＭＣＩ基準値と比較することにより、健常者とアルツハイマー型認知症患者とを区別して判定することが出来る。
具体的には、前記ＣＤ９を有する細胞外小胞の量に対するホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の割合（（Ａ）／（Ｂ））が予め定めた健常／ＡＤ－ＭＣＩ基準値以下の場合は、被験者がアルツハイマー型認知症に罹患している可能性が高い、又は被験者がアルツハイマー型認知症に罹患している可能性がある、或いは被験者がアルツハイマー型認知症を発症するリスクが高い、又は被験者がアルツハイマー型認知症を発症するリスクがあると判定できる。
一方、前記ＣＤ９を有する細胞外小胞の量に対するホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の割合（（Ａ）／（Ｂ））が予め定めた健常／ＡＤ－ＭＣＩ基準値より大きい場合は、被検者がアルツハイマー型認知症に罹患している可能性が低い又は被検者がアルツハイマー型認知症に罹患している可能性がない、或いは被験者がアルツハイマー型認知症を発症するリスクが低い、又は被験者がアルツハイマー型認知症を発症するリスクがないと判定できる。
一方、前記ＣＤ９を有する細胞外小胞の量に対するホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の割合（（Ａ）／（Ｂ））が予め定めた健常／ＡＤ－ＭＣＩ基準値より大きい場合は、被検者がアルツハイマー型認知症に罹患している可能性が低い又は被検者がアルツハイマー型認知症に罹患している可能性がない、或いは被験者がアルツハイマー型認知症を発症するリスクが低い、又は被験者がアルツハイマー型認知症を発症するリスクがないと判定できる。
また、例えば、診断基準に基づいて軽度認知障害と診断された被験者由来の生体試料又は診断基準に基づいて軽度認知障害を発症するリスクがあると診断された被験者由来の生体試料を用いて、前述のＡＤ／ＭＣＩ診断補助方法におけるＣＤ９を有する細胞外小胞の量の測定、前述のＡＤ／ＭＣＩ診断補助方法におけるホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の測定により得られた、被験者に由来する生体試料中のＣＤ９を有する細胞外小胞の量に対するホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の割合（（Ａ）／（Ｂ））を、予め定めた健常／ＡＤ－ＭＣＩ基準値と比較することにより、健常者と軽度認知障害患者とを区別して判定することが出来る。
具体的には、前記ＣＤ９を有する細胞外小胞の量に対するホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の割合（（Ａ）／（Ｂ））が予め定めた健常／ＡＤ－ＭＣＩ基準値以下の場合は、被験者が軽度認知障害に罹患している可能性が高い、又は被験者が軽度認知障害に罹患している可能性がある、或いは被験者が軽度認知障害を発症するリスクが高い、又は被験者が軽度認知障害を発症するリスクがあると判定できる。
一方、前記ＣＤ９を有する細胞外小胞の量に対するホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の割合（（Ａ）／（Ｂ））が予め定めた健常／ＡＤ－ＭＣＩ基準値より大きい場合は、被検者が軽度認知障害に罹患している可能性が低い又は被検者が軽度認知障害に罹患している可能性がない、或いは被験者が軽度認知障害を発症するリスクが低い、又は被験者が軽度認知障害を発症するリスクがないと判定できる。
一方、前記ＣＤ９を有する細胞外小胞の量に対するホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の割合（（Ａ）／（Ｂ））が予め定めた健常／ＡＤ－ＭＣＩ基準値より大きい場合は、被検者が軽度認知障害に罹患している可能性が低い又は被検者が軽度認知障害に罹患している可能性がない、或いは被験者が軽度認知障害を発症するリスクが低い、又は被験者が軽度認知障害を発症するリスクがないと判定できる。
また、例えば、アルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の診断を受けていない被験者由来の生体試料、診断基準に基づいてアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害であると診断されなかった被験者由来の生体試料、或いは診断基準に基づいてアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害を発症するリスクがあると診断されなかった被験者由来の生体試料を用いて、前述のＡＤ／ＭＣＩ診断補助方法におけるＣＤ９を有する細胞外小胞の量の測定、前述のＡＤ／ＭＣＩ診断補助方法におけるホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の測定により得られた、被験者に由来する生体試料中のＣＤ９を有する細胞外小胞の量に対するホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の割合（（Ａ）／（Ｂ））を、予め定めた健常／ＡＤ－ＭＣＩ基準値と比較することにより、健常者とアルツハイマー型認知症患者及び軽度認知障害患者とを区別して判定することが出来る。
具体的には、前記ＣＤ９を有する細胞外小胞の量に対するホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の割合（（Ａ）／（Ｂ））が予め定めた健常／ＡＤ－ＭＣＩ基準値以下の場合は、被験者がアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害に罹患している可能性が高い、又は被験者がアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害に罹患している可能性がある、或いは被験者がアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害を発症するリスクが高い、又は被験者がアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害を発症するリスクがあると判定できる。
一方、前記ＣＤ９を有する細胞外小胞の量に対するホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の割合（（Ａ）／（Ｂ））が予め定めた健常／ＡＤ－ＭＣＩ基準値より大きい場合は、被検者がアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害に罹患している可能性が低い、被検者がアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害に罹患している可能性がない、或いは被験者がアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害を発症するリスクが低い、又は被験者がアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害を発症するリスクがないと判定できる。
一方、前記ＣＤ９を有する細胞外小胞の量に対するホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の割合（（Ａ）／（Ｂ））が予め定めた健常／ＡＤ－ＭＣＩ基準値より大きい場合は、被検者がアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害に罹患している可能性が低い、被検者がアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害に罹患している可能性がない、或いは被験者がアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害を発症するリスクが低い、又は被験者がアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害を発症するリスクがないと判定できる。
ＡＤ／ＭＣＩ診断補助方法におけるアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の判定において、基準値（カットオフ値）は複数用いてもよい。
ＡＤ／ＭＣＩ診断補助方法におけるアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の判定において、複数の基準値（カットオフ値）を用いることにより、例えば、健常／ＡＤ－ＭＣＩ基準値と、ＡＤとＭＣＩを区別する為に予め定めた基準値（ＡＤ／ＭＣＩ基準値）とを用いることにより、被験者を健常者であるか、或いはアルツハイマー型認知症患者又は軽度認知障害患者であるか判定できるのみならず、さらに、被験者を健常者、アルツハイマー型認知症患者又は軽度認知障害患者の３つに区別して判定できる。
ＡＤ／ＭＣＩ診断補助方法におけるアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の判定において、複数の基準値（カットオフ値）を用いることにより、例えば、健常／ＡＤ－ＭＣＩ基準値と、ＡＤとＭＣＩを区別する為に予め定めた基準値（ＡＤ／ＭＣＩ基準値）とを用いることにより、被験者を健常者であるか、或いはアルツハイマー型認知症患者又は軽度認知障害患者であるか判定できるのみならず、さらに、被験者を健常者、アルツハイマー型認知症患者又は軽度認知障害患者の３つに区別して判定できる。
前記アルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の判定としては、被験者がアルツハイマー型認知症に罹患している可能性が高いか否かの判定、被験者がアルツハイマー型認知症に罹患している可能性の有無の判定、被験者が軽度認知障害に罹患している可能性が高いか否かの判定、被験者が軽度認知障害に罹患している可能性の有無の判定、被験者がアルツハイマー型認知症を発症するリスクが高いか否かの判定、被験者がアルツハイマー型認知症を発症するリスクの有無の判定、被験者が軽度認知障害を発症するリスクが高いか否かの判定、被験者が軽度認知障害を発症するリスクの有無の判定が挙げられ、被験者がアルツハイマー型認知症に罹患している可能性が高いか否かの判定、被験者がアルツハイマー型認知症に罹患している可能性可能性の有無の判定、被験者が軽度認知障害に罹患している可能性が高いか否かの判定、被験者が軽度認知障害に罹患している可能性の有無の判定が好ましい。
具体的には、前記ＣＤ９を有する細胞外小胞の量に対するホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の割合（（Ａ）／（Ｂ））が、ＡＤ／ＭＣＩ基準値以下の場合は、被験者がアルツハイマー型認知症に罹患している可能性が高い、又は被験者がアルツハイマー型認知症を発症するリスクが高い；ＡＤ／ＭＣＩ基準値より大きく、且つ健常／ＡＤ－ＭＣＩ基準値以下の場合は、被験者が軽度認知障害に罹患している可能性が高い、又は被験者が軽度認知障害を発症するリスクが高い；健常／ＡＤ－ＭＣＩ基準値より大きい場合は、被検者が健常者である可能性が高い（アルツハイマー型認知症及び軽度認知障害である可能性は低い）、又は被検者がアルツハイマー型認知症及び軽度認知障害を発症するリスクは低いと判定できる。
健常／ＡＤ－ＭＣＩ基準値は、アルツハイマー型認知症患者又は／及び軽度認知障害患者と健常者とを区別するために予め設定される、生体試料中のＣＤ９を有する細胞外小胞の量に対するホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の割合（（Ａ）／（Ｂ））である。
健常／ＡＤ－ＭＣＩ基準値の決定方法は、この分野で用いられる方法であれば特に限定されず、例えば、アルツハイマー型認知症患者又は／及び軽度認知障害患者、並びに健常者から取得した生体試料に含まれるＣＤ９を有する細胞外小胞の量、及びホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量を測定し、測定結果に基づきＣＤ９を有する細胞外小胞の量に対するホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の割合（（Ａ）／（Ｂ））を算出し、得られたＣＤ９を有する細胞外小胞の量に対するホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の割合（（Ａ）／（Ｂ））を用いて、ＲＯＣ解析（Ｒｅｃｅｉｖｅｒ Ｏｐｅｒａｔｉｎｇ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ）等の統計解析により定めることができる。健常／ＡＤ－ＭＣＩ基準値の設定においては、感度、特異度、陽性的中率、陰性的中率などを考慮することが好ましい。健常／ＡＤ－ＭＣＩ基準値は、例えば、感度が６０％以上となるように定めることができ、７０％以上となるものが好ましく、８０％以上となるものがより好ましく、９０％以上となるものが特に好ましく、例えば、特異度が６０％以上となるように定めることができ、７０％以上となるものが好ましく、８０％以上となるものがより好ましく、９０％以上となるものが更に好ましい。
健常／ＡＤ－ＭＣＩ基準値の決定方法は、この分野で用いられる方法であれば特に限定されず、例えば、アルツハイマー型認知症患者又は／及び軽度認知障害患者、並びに健常者から取得した生体試料に含まれるＣＤ９を有する細胞外小胞の量、及びホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量を測定し、測定結果に基づきＣＤ９を有する細胞外小胞の量に対するホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の割合（（Ａ）／（Ｂ））を算出し、得られたＣＤ９を有する細胞外小胞の量に対するホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の割合（（Ａ）／（Ｂ））を用いて、ＲＯＣ解析（Ｒｅｃｅｉｖｅｒ Ｏｐｅｒａｔｉｎｇ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ）等の統計解析により定めることができる。健常／ＡＤ－ＭＣＩ基準値の設定においては、感度、特異度、陽性的中率、陰性的中率などを考慮することが好ましい。健常／ＡＤ－ＭＣＩ基準値は、例えば、感度が６０％以上となるように定めることができ、７０％以上となるものが好ましく、８０％以上となるものがより好ましく、９０％以上となるものが特に好ましく、例えば、特異度が６０％以上となるように定めることができ、７０％以上となるものが好ましく、８０％以上となるものがより好ましく、９０％以上となるものが更に好ましい。
ＡＤ／ＭＣＩ基準値は、アルツハイマー型認知症患者と軽度認知障害患者とを区別するために予め設定される、生体試料中のＣＤ９を有する細胞外小胞の量に対するホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の割合（（Ａ）／（Ｂ））である。
ＡＤ／ＭＣＩ基準値の決定方法は、特に限定されず、例えば、アルツハイマー型認知症に罹患している患者及び軽度認知障害に罹患している患者から取得した生体試料に含まれるＣＤ９を有する細胞外小胞の量、及びホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量を測定し、測定結果に基づき被験者に由来する生体試料中のＣＤ９を有する細胞外小胞の量に対するホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の割合（（Ａ）／（Ｂ））を算出し、得られた被験者に由来する生体試料中のＣＤ９を有する細胞外小胞の量に対するホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の割合（（Ａ）／（Ｂ））を用いて、ＲＯＣ解析（Ｒｅｃｅｉｖｅｒ Ｏｐｅｒａｔｉｎｇ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ）等の統計解析により定めることができる。ＡＤ／ＭＣＩ基準値の設定においては、感度、特異度、陽性的中率、陰性的中率などを考慮することが好ましい。ＡＤ／ＭＣＩ基準値は、例えば、感度が６０％以上となるように定めることができ、７０％以上となるものが好ましく、８０％以上となるものがより好ましく、９０％以上となるものが特に好ましく、例えば、特異度が６０％以上となるように定めることができ、７０％以上となるものが好ましく、８０％以上となるものがより好ましく、９０％以上となるものが更に好ましい。
ＡＤ／ＭＣＩ基準値の決定方法は、特に限定されず、例えば、アルツハイマー型認知症に罹患している患者及び軽度認知障害に罹患している患者から取得した生体試料に含まれるＣＤ９を有する細胞外小胞の量、及びホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量を測定し、測定結果に基づき被験者に由来する生体試料中のＣＤ９を有する細胞外小胞の量に対するホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の割合（（Ａ）／（Ｂ））を算出し、得られた被験者に由来する生体試料中のＣＤ９を有する細胞外小胞の量に対するホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の割合（（Ａ）／（Ｂ））を用いて、ＲＯＣ解析（Ｒｅｃｅｉｖｅｒ Ｏｐｅｒａｔｉｎｇ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ）等の統計解析により定めることができる。ＡＤ／ＭＣＩ基準値の設定においては、感度、特異度、陽性的中率、陰性的中率などを考慮することが好ましい。ＡＤ／ＭＣＩ基準値は、例えば、感度が６０％以上となるように定めることができ、７０％以上となるものが好ましく、８０％以上となるものがより好ましく、９０％以上となるものが特に好ましく、例えば、特異度が６０％以上となるように定めることができ、７０％以上となるものが好ましく、８０％以上となるものがより好ましく、９０％以上となるものが更に好ましい。
＜アルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の診断補助用試薬キット＞
第２発明－１におけるアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の診断補助用試薬キット（以下、「ＡＤ／ＭＣＩ診断補助用試薬キット」と略記する場合がある）は、ＣＤ９に対して親和性を有する物質、及びホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質を含む。
第２発明－１におけるアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の診断補助用試薬キット（以下、「ＡＤ／ＭＣＩ診断補助用試薬キット」と略記する場合がある）は、ＣＤ９に対して親和性を有する物質、及びホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質を含む。
ＡＤ／ＭＣＩ診断補助用試薬キットは、例えば、テトラスパニンに対して親和性を有する物質としてＣＤ９に対して親和性を有する物質を用いる以外、ＡＤ診断補助用試薬キット（ＩＩ）と同様に構成されたものであればよい。
ＡＤ／ＭＣＩ診断補助用試薬キットにおけるＣＤ９に対して親和性を有する物質、ホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質は、それぞれＡＤ／ＭＣＩ診断補助方法において前述したものと同様であり、好ましいものも同様である。
ＡＤ／ＭＣＩ診断補助用試薬キットにおけるＣＤ９に対して親和性を有する物質、ホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質は、それぞれ溶液状態であっても、凍結状態や乾燥状態、凍結乾燥状態であってもよい。また、当該ＣＤ９に対して親和性を有する物質、当該ホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質は、一つの試薬としてキットに含まれていても別々の試薬としてキットに含まれていてもよい。
ＡＤ／ＭＣＩ診断補助用試薬キットにおけるＣＤ９に対して親和性を有する物質、ホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質は、それぞれ溶液状態であっても、凍結状態や乾燥状態、凍結乾燥状態であってもよい。また、当該ＣＤ９に対して親和性を有する物質、当該ホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質は、一つの試薬としてキットに含まれていても別々の試薬としてキットに含まれていてもよい。
ＡＤ／ＭＣＩ診断補助用試薬キットにおけるＣＤ９に対して親和性を有する物質、ホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質は、固相に固定化されていてもよく、また標識物質により標識されていてもよい。当該固相や固相への固定化方法、当該標識物質や標識方法としては、ＡＤ診断補助方法において前述したものと同様であり、好ましいものも同様である。
ＡＤ／ＭＣＩ診断補助用試薬キットは、前記ＣＤ９に対して親和性を有する物質又は／及び前記ホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質に対して特異的に結合する２次親和性物質をさらに含んでいてもよい。ＡＤ／ＭＣＩ診断補助用試薬キットにおける、当該２次親和性物質、標識物質、標識方法は、それぞれＡＤ診断補助方法において前述したものと同様のものが挙げられ、好ましいものも同様である。
ＡＤ／ＭＣＩ診断補助用試薬キットにおけるＣＤ９に対して親和性を有する物質又は／及びホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質は、アビジン類及びビオチン類の一方が結合したものでもよく、当該アビジン類及びビオチン類としては、ＡＤ診断補助方法において前述したものと同様であり、好ましいものも同様である。
ＡＤ／ＭＣＩ診断補助用試薬キットは、アビジン類及びビオチン類の一方が結合した標識物質が含まれていてもよく、標識物質や標識方法としては、ＡＤ診断補助方法において前述したものと同様であり、好ましいものも同様である。
ＡＤ／ＭＣＩ診断補助用試薬キットは、アビジン類及びビオチン類の一方が結合した標識物質が含まれていてもよく、標識物質や標識方法としては、ＡＤ診断補助方法において前述したものと同様であり、好ましいものも同様である。
ＡＤ／ＭＣＩ診断補助用試薬キットにおけるＣＤ９に対して親和性を有する物質、ホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質の濃度（量）は、測定方法に応じて、通常この分野で用いられている範囲で適宜設定されればよい。
ＣＤ９に対して親和性を有する物質は、例えば、使用時の濃度として、固相に固定化する場合は、通常１０～２００００ｎｇ／ｍＬ、１００～１００００ｎｇ／ｍＬとなる量が含まれるものが好ましく、検出に用いる場合は、通常１０～５０００ｎｇ／ｍＬ、１００～５００ｎｇ／ｍＬとなる量が含まれるものが好ましい。また、ホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質は、例えば、使用時の濃度として、固相に固定化する場合は、通常１０～２００００ｎｇ／ｍＬ、１００～１００００ｎｇ／ｍＬとなる量が含まれるものが好ましく、検出に用いる場合は、通常１０～５０００ｎｇ／ｍＬ、１００～５００ｎｇ／ｍＬとなる量が含まれるものが好ましい。
また、ＡＤ／ＭＣＩ診断補助用試薬キットにおけるＣＤ９に対して親和性を有する物質及びホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質は、通常この分野で用いられる試薬類と共存させてもよく、当該試薬としてはＡＤ診断補助用試薬キットにおいて前述したものと同様である。
ＣＤ９に対して親和性を有する物質は、例えば、使用時の濃度として、固相に固定化する場合は、通常１０～２００００ｎｇ／ｍＬ、１００～１００００ｎｇ／ｍＬとなる量が含まれるものが好ましく、検出に用いる場合は、通常１０～５０００ｎｇ／ｍＬ、１００～５００ｎｇ／ｍＬとなる量が含まれるものが好ましい。また、ホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質は、例えば、使用時の濃度として、固相に固定化する場合は、通常１０～２００００ｎｇ／ｍＬ、１００～１００００ｎｇ／ｍＬとなる量が含まれるものが好ましく、検出に用いる場合は、通常１０～５０００ｎｇ／ｍＬ、１００～５００ｎｇ／ｍＬとなる量が含まれるものが好ましい。
また、ＡＤ／ＭＣＩ診断補助用試薬キットにおけるＣＤ９に対して親和性を有する物質及びホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質は、通常この分野で用いられる試薬類と共存させてもよく、当該試薬としてはＡＤ診断補助用試薬キットにおいて前述したものと同様である。
さらに、ＡＤ／ＭＣＩ診断補助用試薬キットは、ＣＤ９に対して親和性を有する物質及びホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質の他に、これらの親和性物質を用いたＣＤ９及びホスファチジルセリンを有する細胞外小胞の量又は／及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量を測定する為に必要な試薬を備えていてもよい。このような試薬としては、ＡＤ診断補助用試薬キット（ＩＩ）において前述したものと同様である。
ＡＤ／ＭＣＩ診断補助用試薬キットは、ホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞について検量線を作成するために用いられる標準品を含んでいてもよく、当該標準品としては、ＡＤ診断補助用試薬キット（ＩＩ）において前述したものと同様のものが挙げられる。
ＡＤ／ＭＣＩ診断補助用試薬キットは、ＣＤ９を有する細胞外小胞について検量線を作成するために用いられる標準品を含んでいてもよく、当該標準品としては、ＣＤ９を有する細胞外小胞が挙げられ、状態や共存させてもよい試薬類は、ＡＤ診断補助用試薬キット（ＩＩ）において前述したものと同様である。
ＡＤ／ＭＣＩ診断補助用試薬キットには、添付文書や取扱説明書が含まれていてもよい。当該添付文書や取扱説明書としては、例えば、被験者に由来する生体試料中のＣＤ９を有する細胞外小胞の量、並びにホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量を測定すること又は／及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量に対するホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の割合を指標として、被験者がアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害であると判定することが記載された添付文書や取扱説明書等が挙げられる。これらの添付文書や取扱説明書は、複数のものに分かれて記載されたものであっても、一つのものに纏めて記載されたものであってもよい。
ＡＤ／ＭＣＩ診断補助用試薬キットの具体例は、テトラスパニンに対して親和性を有する物質としてＣＤ９に対して親和性を有する物質を用いる以外は、ＡＤ診断補助用試薬キット（ＩＩ）において前述したものと同様のものが挙げられ、好ましいものも同様である。
ＡＤ／ＭＣＩ診断補助用試薬キットは、例えば、ホスファチジルセリンに対して特異的に結合する抗体又はＴｉｍタンパク質（Ｔｉｍ４又はＴｉｍ１がより好ましく、Ｔｉｍ４が特に好ましい）が固定化された固相プレート、抗ＣＤ９抗体が固定化された固相プレートと下記（１）～（３）から選ばれるいずれか１つを含むキットが好ましいものとして挙げられる。
（１）抗ＣＤ９抗体が標識物質と結合したものを含む溶液（通常１０～５０００ｎｇ／ｍＬ、１００～５００ｎｇ／ｍＬが好ましい）、（２）抗ＣＤ９抗体を含む溶液（通常１０～５０００ｎｇ／ｍＬ、１００～５００ｎｇ／ｍＬが好ましい）、並びに当該抗ＣＤ９抗体に対して特異的に結合する２次親和性物質が標識物質と結合したものを含む溶液（通常１０～５０００ｎｇ／ｍＬ、１００～５００ｎｇ／ｍＬが好ましい）、（３）アビジン類及びビオチン類の一方が結合した抗ＣＤ９抗体を含む溶液（通常１０～５０００、１００～５００（ｎｇ／ｍＬ）がより好ましい）、並びにアビジン類及びビオチン類の残りの一方が結合した標識物質を含む溶液（通常１０～５０００ｎｇ／ｍＬ、１００～５００ｎｇ／ｍＬが好ましい）。
（１）抗ＣＤ９抗体が標識物質と結合したものを含む溶液（通常１０～５０００ｎｇ／ｍＬ、１００～５００ｎｇ／ｍＬが好ましい）、（２）抗ＣＤ９抗体を含む溶液（通常１０～５０００ｎｇ／ｍＬ、１００～５００ｎｇ／ｍＬが好ましい）、並びに当該抗ＣＤ９抗体に対して特異的に結合する２次親和性物質が標識物質と結合したものを含む溶液（通常１０～５０００ｎｇ／ｍＬ、１００～５００ｎｇ／ｍＬが好ましい）、（３）アビジン類及びビオチン類の一方が結合した抗ＣＤ９抗体を含む溶液（通常１０～５０００、１００～５００（ｎｇ／ｍＬ）がより好ましい）、並びにアビジン類及びビオチン類の残りの一方が結合した標識物質を含む溶液（通常１０～５０００ｎｇ／ｍＬ、１００～５００ｎｇ／ｍＬが好ましい）。
＜アルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の診断補助用装置＞
第２発明－１におけるアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の診断補助用装置（以下、「ＡＤ／ＭＣＩ診断補助用装置」と略記する場合がある）は、被験者に由来する生体試料中の、ホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量、並びにＣＤ９を有する細胞外小胞の量の測定を測定する測定部、前記被験者に由来する生体試料中のＣＤ９を有する細胞外小胞の量に対する前記被験者に由来する生体試料中のホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の割合を算出する演算部、及び前記被験者に由来する生体試料中の、ＣＤ９を有する細胞外小胞の量に対するホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の割合を指標として、被験者がアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害であると判定する判定部を有する。
第２発明－１におけるアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の診断補助用装置（以下、「ＡＤ／ＭＣＩ診断補助用装置」と略記する場合がある）は、被験者に由来する生体試料中の、ホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量、並びにＣＤ９を有する細胞外小胞の量の測定を測定する測定部、前記被験者に由来する生体試料中のＣＤ９を有する細胞外小胞の量に対する前記被験者に由来する生体試料中のホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の割合を算出する演算部、及び前記被験者に由来する生体試料中の、ＣＤ９を有する細胞外小胞の量に対するホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の割合を指標として、被験者がアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害であると判定する判定部を有する。
ＡＤ／ＭＣＩ診断補助用装置における、被験者、生体試料、細胞外小胞は、それぞれ前記したものと同様であり、好ましいものも同様である。ＡＤ／ＭＣＩ診断補助用装置における、ホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞、量、ＣＤ９を有する細胞外小胞は、ＡＤ／ＭＣＩ診断補助方法において前述したものと同様であり、好ましいものも同様である。
ＡＤ／ＭＣＩ診断補助用装置を構成する測定部、演算部、判定部等は同一の装置内に配置されていても、それぞれ別体となっていてもよい。
ＡＤ／ＭＣＩ診断補助用装置における前記測定部は、装置に導入された被験者に由来する生体試料中の、ホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量、並びにＣＤ９を有する細胞外小胞の量を測定する部位である。当該測定部の大きさや構成は特に限定されない。
当該測定部としては、例えば、ＥＬＩＳＡ法に用いられるマイクロプレートリーダー又はＣＣＤを用いて撮像するイメージング装置、ウエスタンブロット法又はマイクロアレイ（マイクロチップ）を利用した方法に用いられるイメージング装置、質量分析法に用いられる質量分析装置、分子間相互作用解析装置、及びフローサイトメトリーに用いられるフローサイトメーター、ＨＰＬＣ法やキャピラリー電気泳動法に用いられる紫外可視光検出器や蛍光検出器等が挙げられる。
当該測定部としては、例えば、ＥＬＩＳＡ法に用いられるマイクロプレートリーダー又はＣＣＤを用いて撮像するイメージング装置、ウエスタンブロット法又はマイクロアレイ（マイクロチップ）を利用した方法に用いられるイメージング装置、質量分析法に用いられる質量分析装置、分子間相互作用解析装置、及びフローサイトメトリーに用いられるフローサイトメーター、ＨＰＬＣ法やキャピラリー電気泳動法に用いられる紫外可視光検出器や蛍光検出器等が挙げられる。
ＡＤ／ＭＣＩ診断補助用装置における、ホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の測定、並びにＣＤ９を有する細胞外小胞の量の測定は、ＡＤ／ＭＣＩ診断補助方法において前述したものと同様であり、好ましいものや具体例も同様である。
ＡＤ／ＭＣＩ診断補助用装置における演算部は、被験者に由来する生体試料中のＣＤ９を有する細胞外小胞の量に対する被験者に由来する生体試料中のホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の割合を算出する部位である。当該測定部の大きさや構成は特に限定されない。
前記被験者に由来する生体試料中のＣＤ９を有する細胞外小胞の量、及び前記被験者に由来する生体試料中のホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量は、ＡＤ／ＭＣＩ診断補助用装置における測定部で得られた被験者に由来する生体試料中のＣＤ９を有する細胞外小胞、及び被験者に由来する生体試料中のホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の質量や濃度と相関関係を有する実測値（例えば、吸光度、吸光度変化量、透過光、透過光変化量、蛍光強度、蛍光強度変化量、発光量、発光量変化量、濁度、濁度変化率、散乱光、散乱光変化率、反射率、反射率変化量、屈折率、屈折率変化量等）を質量や濃度等に換算した後、前記ＣＤ９を有する細胞外小胞の量に対するホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の割合を算出してもよい。
なお、当該実測値、演算部により換算された質量や濃度等、前記ＣＤ９を有する細胞外小胞の量に対するホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の割合は、メモリやハードディスクなど装置に備えられた記憶装置等に記憶されてもよい。
前記被験者に由来する生体試料中のＣＤ９を有する細胞外小胞の量、及び前記被験者に由来する生体試料中のホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量は、ＡＤ／ＭＣＩ診断補助用装置における測定部で得られた被験者に由来する生体試料中のＣＤ９を有する細胞外小胞、及び被験者に由来する生体試料中のホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の質量や濃度と相関関係を有する実測値（例えば、吸光度、吸光度変化量、透過光、透過光変化量、蛍光強度、蛍光強度変化量、発光量、発光量変化量、濁度、濁度変化率、散乱光、散乱光変化率、反射率、反射率変化量、屈折率、屈折率変化量等）を質量や濃度等に換算した後、前記ＣＤ９を有する細胞外小胞の量に対するホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の割合を算出してもよい。
なお、当該実測値、演算部により換算された質量や濃度等、前記ＣＤ９を有する細胞外小胞の量に対するホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の割合は、メモリやハードディスクなど装置に備えられた記憶装置等に記憶されてもよい。
ＡＤ／ＭＣＩ診断補助用装置における判定部は、演算部で得られたＣＤ９を有する細胞外小胞の量に対するホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の割合を指標として、アルツハイマー型認知症又は軽度認知障害を判定する部位である。
ＡＤ／ＭＣＩ診断補助用装置におけるアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の判定は、ＡＤ／ＭＣＩ診断補助方法におけるアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の判定と同様であり、好ましいものや具体例も同様である。
ＡＤ／ＭＣＩ診断補助用装置におけるアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の判定は、例えば、前記演算部で得られた被験者に由来する生体試料中のＣＤ９を有する細胞外小胞の量に対するホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の割合（（Ａ）／（Ｂ））を、予め定めた基準値（カットオフ値、以下「健常／ＡＤ－ＭＣＩ基準値」と略記する場合がある）と比較することによりなされる。当該予め定めた基準値は、ＡＤ／ＭＣＩ診断補助用装置に予め記憶されていてもよいし、判定の際にＡＤ／ＭＣＩ診断補助用装置の入力部位から入力されてもよい。
ＡＤ／ＭＣＩ診断補助用装置におけるアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の判定は、例えば、前記演算部で得られた被験者に由来する生体試料中のＣＤ９を有する細胞外小胞の量に対するホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の割合（（Ａ）／（Ｂ））を、予め定めた基準値（カットオフ値、以下「健常／ＡＤ－ＭＣＩ基準値」と略記する場合がある）と比較することによりなされる。当該予め定めた基準値は、ＡＤ／ＭＣＩ診断補助用装置に予め記憶されていてもよいし、判定の際にＡＤ／ＭＣＩ診断補助用装置の入力部位から入力されてもよい。
ＡＤ／ＭＣＩ診断補助用装置におけるアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の判定において、基準値（カットオフ値）は複数用いてもよい。
ＡＤ／ＭＣＩ診断補助用装置におけるアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の判定において、複数の基準値（カットオフ値）を用いる場合の判定も、ＡＤ／ＭＣＩ診断補助方法における判定と同様であり、好ましいものや具体例も同様である。
ＡＤ／ＭＣＩ診断補助用装置におけるアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の判定において、複数の基準値（カットオフ値）を用いる場合の判定も、ＡＤ／ＭＣＩ診断補助方法における判定と同様であり、好ましいものや具体例も同様である。
ＡＤ／ＭＣＩ診断補助用装置における健常／ＡＤ－ＭＣＩ基準値、健常／ＡＤ－ＭＣＩ基準値の決定方法、ＡＤ／ＭＣＩ基準値、ＡＤ／ＭＣＩ基準値の決定方法もＡＤ／ＭＣＩ診断補助方法に記載のものと同様であり、好ましいものも同様である。
ＡＤ／ＭＣＩ診断補助用装置は、出力部を備えていてもよい。出力部では、前記した判定の結果をディスプレイなどの表示装置やプリンターなどの印刷装置に表示又は出力させるなどの処理が行われる。
２－２．第２発明－２
＜アルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の診断補助用バイオマーカーセット＞
第２発明－２におけるアルツハイマー型認知症の症診断補助用バイオマーカーセット（以下、「ＡＤ／ＭＣＩマーカーセット（ＩＩ）」と略記する場合がある）は、ホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞、ＣＤ９を有する細胞外小胞、アミロイドβ（１－４０）、アミロイドβ（１－４２）を含むバイオマーカーの組み合わせである。すなわち、ＡＤ／ＭＣＩマーカーセット（ＩＩ）はＡＤ／ＭＣＩマーカーセット、アミロイドβ（１－４０）、アミロイドβ（１－４２）を含むバイオマーカーの組み合わせである。
ＡＤ／ＭＣＩマーカーセット（ＩＩ）によれば、例えば、前記ＣＤ９を有する細胞外小胞の量に対する前記ホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の割合（ＡＤ／ＭＣＩマーカー）に、前記アミロイドβ（１－４０）の量に対する前記アミロイドβ（１－４２）の量の割合（以下、「Ａβ（１－４２）／Ａβ（１－４０）」と略記する場合がある）を乗じて得られる値（以下、「ＡＤ／ＭＣＩマーカー（ＩＩ）」と略記する場合がある）を求めることができ、ＡＤ／ＭＣＩマーカー（ＩＩ）は、被験者がアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害であると判定する為の指標として用いることができる。
＜アルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の診断補助用バイオマーカーセット＞
第２発明－２におけるアルツハイマー型認知症の症診断補助用バイオマーカーセット（以下、「ＡＤ／ＭＣＩマーカーセット（ＩＩ）」と略記する場合がある）は、ホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞、ＣＤ９を有する細胞外小胞、アミロイドβ（１－４０）、アミロイドβ（１－４２）を含むバイオマーカーの組み合わせである。すなわち、ＡＤ／ＭＣＩマーカーセット（ＩＩ）はＡＤ／ＭＣＩマーカーセット、アミロイドβ（１－４０）、アミロイドβ（１－４２）を含むバイオマーカーの組み合わせである。
ＡＤ／ＭＣＩマーカーセット（ＩＩ）によれば、例えば、前記ＣＤ９を有する細胞外小胞の量に対する前記ホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の割合（ＡＤ／ＭＣＩマーカー）に、前記アミロイドβ（１－４０）の量に対する前記アミロイドβ（１－４２）の量の割合（以下、「Ａβ（１－４２）／Ａβ（１－４０）」と略記する場合がある）を乗じて得られる値（以下、「ＡＤ／ＭＣＩマーカー（ＩＩ）」と略記する場合がある）を求めることができ、ＡＤ／ＭＣＩマーカー（ＩＩ）は、被験者がアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害であると判定する為の指標として用いることができる。
ＡＤ／ＭＣＩマーカーセット（ＩＩ）におけるＡＤ／ＭＣＩマーカーセットに関する全ての記載は、前記第２発明―１のＡＤ／ＭＣＩマーカーセットと同様であり、好ましいものや具体例も同様である。
＜アルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の診断を補助する方法＞
第２発明－２におけるアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の診断を補助する方法（以下、「ＡＤ／ＭＣＩ診断補助方法（ＩＩ）」と略記する場合がある）は、生体試料中のホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量、及び生体試料中のＣＤ９を有する細胞外小胞の量を測定すること、ＣＤ９を有する細胞外小胞の量に対するホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の割合（ＡＤ／ＭＣＩマーカー）を算出すること、ＣＤ９を有する細胞外小胞の量に対するホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の割合に、アミロイドβ（１－４０）の量に対するアミロイドβ（１－４２）の量の割合（Ａβ（１－４２）／Ａβ（１－４０））を乗じた値（ＡＤ／ＭＣＩマーカー（ＩＩ））を指標として、被験者がアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害であると判定することを含む。
第２発明－２におけるアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の診断を補助する方法（以下、「ＡＤ／ＭＣＩ診断補助方法（ＩＩ）」と略記する場合がある）は、生体試料中のホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量、及び生体試料中のＣＤ９を有する細胞外小胞の量を測定すること、ＣＤ９を有する細胞外小胞の量に対するホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の割合（ＡＤ／ＭＣＩマーカー）を算出すること、ＣＤ９を有する細胞外小胞の量に対するホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の割合に、アミロイドβ（１－４０）の量に対するアミロイドβ（１－４２）の量の割合（Ａβ（１－４２）／Ａβ（１－４０））を乗じた値（ＡＤ／ＭＣＩマーカー（ＩＩ））を指標として、被験者がアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害であると判定することを含む。
ＡＤ／ＭＣＩ診断補助方法（ＩＩ）における、ＡＤ／ＭＣＩマーカーに関する全ての記載は、前記の第２発明－１におけるＡＤ／ＭＣＩマーカーと同様であり、好ましいものや具体例も同様である。
ＡＤ／ＭＣＩ診断補助方法（ＩＩ）は、さらにアミロイドβ（１－４０）の量又は／及びアミロイドβ（１－４２）の量を測定することを含んでいてもよい。
アミロイドβ（１－４０）の量又は／及びアミロイドβ（１－４２）の量の測定に関する全ての記載は、前記の第１発明－３におけるアミロイドβ（１－４０）の量又は／及びアミロイドβ（１－４２）の量の測定と同様であり、好ましいものや具体例も同様である。
アミロイドβ（１－４０）の量又は／及びアミロイドβ（１－４２）の量の測定に関する全ての記載は、前記の第１発明－３におけるアミロイドβ（１－４０）の量又は／及びアミロイドβ（１－４２）の量の測定と同様であり、好ましいものや具体例も同様である。
ＡＤ／ＭＣＩ診断補助方法（ＩＩ）におけるアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の判定は、ＡＤ／ＭＣＩマーカー（ＩＩ）を指標として、アルツハイマー型認知症又は軽度認知障害を判定することを含む。
当該アルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の判定としては、ＡＤ／ＭＣＩマーカー（ＩＩ）を指標として、前記の第２発明－１におけるＡＤ／ＭＣＩ診断補助方法（ＡＤ／ＭＣＩマーカーを指標としたアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の判定）に準じて行えばよく、好ましいものや具体例も同様である。
当該アルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の判定としては、ＡＤ／ＭＣＩマーカー（ＩＩ）を指標として、前記の第２発明－１におけるＡＤ／ＭＣＩ診断補助方法（ＡＤ／ＭＣＩマーカーを指標としたアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の判定）に準じて行えばよく、好ましいものや具体例も同様である。
＜アルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の診断補助用試薬キット（ＩＩ）＞
第２発明－２におけるアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の診断補助用試薬キット（以下、「ＡＤ／ＭＣＩ診断補助用試薬キット（ＩＩ）」と略記する場合がある）は、ＣＤ９に対して親和性を有する物質、及びホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質、アミロイドβ（１－４０）に対して親和性を有する物質、アミロイドβ（１－４２）に対して親和性を有する物質、要すれば、さらにアミロイドβのＮ末端領域に対して親和性を有する物質を含む。
すなわち、ＡＤ／ＭＣＩ診断補助用試薬キット（ＩＩ）は、ＡＤ／ＭＣＩ診断補助用試薬キットとアミロイドβ（１－４０）に対して親和性を有する物質、アミロイドβ（１－４２）に対して親和性を有する物質、要すれば、さらにアミロイドβのＮ末端領域に対して親和性を有する物質を含む試薬キットである。
第２発明－２におけるアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の診断補助用試薬キット（以下、「ＡＤ／ＭＣＩ診断補助用試薬キット（ＩＩ）」と略記する場合がある）は、ＣＤ９に対して親和性を有する物質、及びホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質、アミロイドβ（１－４０）に対して親和性を有する物質、アミロイドβ（１－４２）に対して親和性を有する物質、要すれば、さらにアミロイドβのＮ末端領域に対して親和性を有する物質を含む。
すなわち、ＡＤ／ＭＣＩ診断補助用試薬キット（ＩＩ）は、ＡＤ／ＭＣＩ診断補助用試薬キットとアミロイドβ（１－４０）に対して親和性を有する物質、アミロイドβ（１－４２）に対して親和性を有する物質、要すれば、さらにアミロイドβのＮ末端領域に対して親和性を有する物質を含む試薬キットである。
ＡＤ／ＭＣＩ診断補助用試薬キット（ＩＩ）における、ＡＤ／ＭＣＩ診断補助用試薬キットに関する全ての記載は、前記の第２発明－１におけるＡＤ／ＭＣＩ診断補助用試薬キットと同様であり、好ましいものや具体例も同様である。
ＡＤ／ＭＣＩ診断補助用試薬キット（ＩＩ）における、アミロイドβ（１－４０）に対して親和性を有する物質、アミロイドβ（１－４２）に対して親和性を有する物質、アミロイドβのＮ末端領域に対して親和性を有する物質やこれらの親和性を有する物質の組み合わせ等は、それぞれＡＤ診断補助用キット（ＩＩＩ）のものと同様であり、好ましいものも同様である。
ＡＤ／ＭＣＩ診断補助用試薬キット（ＩＩ）におけるアミロイドβ（１－４０）に対して親和性を有する物質、又はアミロイドβ（１－４２）に対して親和性を有する物質の濃度（量）は、測定方法に応じて、通常この分野で用いられている範囲で適宜設定されればよい。アミロイドβ（１－４０）に対して親和性を有する物質、又はアミロイドβ（１－４２）に対して親和性を有する物質は、例えば、使用時の濃度として、固相に固定化する場合は、通常１０～２００００ｎｇ／ｍＬ、１００～１００００ｎｇ／ｍＬとなる量が含まれるものが好ましく、検出に用いる場合は、通常１０～５０００ｎｇ／ｍＬ、１００～５００ｎｇ／ｍＬとなる量が含まれるものが好ましい。
また、アミロイドβのＮ末端領域に対して親和性を有する物質は、例えば、使用時の濃度として、固相に固定化する場合は、通常１０～２００００ｎｇ／ｍＬ、１００～１００００ｎｇ／ｍＬとなる量が含まれるものが好ましく、検出に用いる場合は、通常１０～５０００ｎｇ／ｍＬ、１００～５００ｎｇ／ｍＬとなる量が含まれるものが好ましい。
また、アミロイドβのＮ末端領域に対して親和性を有する物質は、例えば、使用時の濃度として、固相に固定化する場合は、通常１０～２００００ｎｇ／ｍＬ、１００～１００００ｎｇ／ｍＬとなる量が含まれるものが好ましく、検出に用いる場合は、通常１０～５０００ｎｇ／ｍＬ、１００～５００ｎｇ／ｍＬとなる量が含まれるものが好ましい。
さらに、ＡＤ／ＭＣＩ診断補助用試薬キット（ＩＩ）は、ＡＤ／ＭＣＩ診断補助用試薬キット、アミロイドβ（１－４０）に対して親和性を有する物質、アミロイドβ（１－４２）に対して親和性を有する物質、又は／及びアミロイドβのＮ末端領域に対して親和性を有する物質の他に、アミロイドβ（１－４０）の量又は／及びアミロイドβ（１－４２）の量を測定する為に必要な試薬を備えていてもよい。このような試薬としては、ＡＤ診断補助用試薬キットのものと同様である。
ＡＤ／ＭＣＩ診断補助用試薬キット（ＩＩ）は、アミロイドβ（１－４０）又は／及びアミロイドβ（１－４２）について検量線を作成するために用いられる標準品を含んでいてもよく、当該標準品としては、例えば、アミロイドβ（１－４０）、アミロイドβ（１－４２）等が挙げられる。当該標準品は、溶液状態であっても、凍結状態や乾燥状態、凍結乾燥状態であってもよい。また、通常この分野で用いられる試薬類、例えば、緩衝剤、反応促進剤、糖類、タンパク質、塩類、界面活性剤等の安定化剤、防腐剤等を、当該標準品と共存させてもよい。これらの濃度、ｐＨも通常この分野で用いられている範囲から適宜選択すればよい。
ＡＤ／ＭＣＩ診断補助用試薬キット（ＩＩ）には、添付文書や取扱説明書が含まれていてもよい。当該添付文書や取扱説明書としては、例えば、被験者に由来する生体試料中のアミロイドβ（１－４０）の量又は／及びアミロイドβ（１－４２）の量を測定すること、ＡＤ／ＭＣＩマーカー（ＩＩ）を算出すること、ＡＤ／ＭＣＩマーカー（ＩＩ）を指標として、被験者がアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害であると判定することが記載された添付文書や取扱説明書等が挙げられる。これらの添付文書や取扱説明書は、複数のものに分かれて記載されたものであっても、一つのものに纏めて記載されたものであってもよい。
ＡＤ／ＭＣＩ診断補助用試薬キット（ＩＩ）は、具体的には、例えば、「アミロイドβ（１－４０）に対して親和性を有する物質、又はアミロイドβ（１－４２）に対して親和性を有する物質」とアミロイドβのＮ末端領域に対して親和性を有する物質のいずれか一方が固相に固定化されたものと「アミロイドβ（１－４０）に対して親和性を有する物質、又はアミロイドβ（１－４２）に対して親和性を有する物質」とアミロイドβのＮ末端領域に対して親和性を有する物質の残りの一方が、標識物質と結合しているもの又は当該残りの一方の親和性物質とこれを間接的に標識物質と結合させる為の成分を含むキットが挙げられる。
ＡＤ／ＭＣＩ診断補助用試薬キット（ＩＩ）は、「アミロイドβ（１－４０）に対して親和性を有する物質、又はアミロイドβ（１－４２）に対して親和性を有する物質」とアミロイドβのＮ末端領域に対して親和性を有する物質のいずれか一方が固相に固定化されたものと下記（１）～（３）から選ばれるいずれか１つを含むキットが好ましいものとして挙げられる。
（１）「アミロイドβ（１－４０）に対して親和性を有する物質、又はアミロイドβ（１－４２）に対して親和性を有する物質」とアミロイドβのＮ末端領域に対して親和性を有する物質の残りの一方が標識物質と結合したもの、
（２）「アミロイドβ（１－４０）に対して親和性を有する物質、又はアミロイドβ（１－４２）に対して親和性を有する物質」とアミロイドβのＮ末端領域に対して親和性を有する物質の残りの一方、並びに当該親和性物質に対して特異的に結合する２次親和性物質が標識物質と結合したもの、
（３）「アミロイドβ（１－４０）に対して親和性を有する物質、又はアミロイドβ（１－４２）に対して親和性を有する物質」とアミロイドβのＮ末端領域に対して親和性を有する物質の残りの一方がアビジン類及びビオチン類の一方と結合したもの、並びにアビジン類及びビオチン類の残りの一方が標識物質と結合したもの
ＡＤ／ＭＣＩ診断補助用試薬キット（ＩＩ）は、「アミロイドβ（１－４０）に対して親和性を有する物質、又はアミロイドβ（１－４２）に対して親和性を有する物質」とアミロイドβのＮ末端領域に対して親和性を有する物質のいずれか一方が固相に固定化されたものと下記（１）～（３）から選ばれるいずれか１つを含むキットが好ましいものとして挙げられる。
（１）「アミロイドβ（１－４０）に対して親和性を有する物質、又はアミロイドβ（１－４２）に対して親和性を有する物質」とアミロイドβのＮ末端領域に対して親和性を有する物質の残りの一方が標識物質と結合したもの、
（２）「アミロイドβ（１－４０）に対して親和性を有する物質、又はアミロイドβ（１－４２）に対して親和性を有する物質」とアミロイドβのＮ末端領域に対して親和性を有する物質の残りの一方、並びに当該親和性物質に対して特異的に結合する２次親和性物質が標識物質と結合したもの、
（３）「アミロイドβ（１－４０）に対して親和性を有する物質、又はアミロイドβ（１－４２）に対して親和性を有する物質」とアミロイドβのＮ末端領域に対して親和性を有する物質の残りの一方がアビジン類及びビオチン類の一方と結合したもの、並びにアビジン類及びビオチン類の残りの一方が標識物質と結合したもの
＜アルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の診断補助用装置（ＩＩ）＞
第２発明―２におけるアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の診断補助用装置（以下、「ＡＤ／ＭＣＩ診断補助用装置（ＩＩ）」と略記する場合がある）は、被験者に由来する生体試料中の、ホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量、並びにＣＤ９を有する細胞外小胞の量の測定を測定する測定部、ＣＤ９を有する細胞外小胞の量に対するホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の割合（ＡＤ／ＭＣＩマーカー）にアミロイドβ（１－４０）の量に対するアミロイドβ（１－４２）の量の割合（Ａβ（１－４２）／Ａβ（１－４０））を乗じてＡＤ／ＭＣＩマーカー（ＩＩ）を算出する演算部、ＡＤ／ＭＣＩマーカー（ＩＩ）を指標として、被験者がアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害であると判定する判定部を有する。
第２発明―２におけるアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の診断補助用装置（以下、「ＡＤ／ＭＣＩ診断補助用装置（ＩＩ）」と略記する場合がある）は、被験者に由来する生体試料中の、ホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量、並びにＣＤ９を有する細胞外小胞の量の測定を測定する測定部、ＣＤ９を有する細胞外小胞の量に対するホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の割合（ＡＤ／ＭＣＩマーカー）にアミロイドβ（１－４０）の量に対するアミロイドβ（１－４２）の量の割合（Ａβ（１－４２）／Ａβ（１－４０））を乗じてＡＤ／ＭＣＩマーカー（ＩＩ）を算出する演算部、ＡＤ／ＭＣＩマーカー（ＩＩ）を指標として、被験者がアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害であると判定する判定部を有する。
ＡＤ／ＭＣＩ診断補助用装置（ＩＩ）は、要すれば、アミロイドβ（１－４０）の量又は／及びアミロイドβ（１－４２）の量を測定する測定部やアミロイドβ（１－４０）の量又は／及びアミロイドβ（１－４２）の量、或いはアミロイドβ（１－４０）の量に対するアミロイドβ（１－４２）の量の割合（Ａβ（１－４２）／Ａβ（１－４０））を外部から入力する入力部、アミロイドβ（１－４０）の量に対するアミロイドβ（１－４２）の量の割合（Ａβ（１－４２）／Ａβ（１－４０））を算出するための演算部を有していてもよい。
ＡＤ／ＭＣＩ診断補助用装置（ＩＩ）を構成する測定部、演算部、入力部、判定部等は同一の装置内に配置されていても、それぞれ別体となっていてもよい。
ＡＤ／ＭＣＩ診断補助用装置（ＩＩ）における前記測定部は、装置に導入された生体試料中のホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量、並びにＣＤ９を有する細胞外小胞の量を測定する部位である。要すれば、前記測定部は、装置に導入された生体試料中のアミロイドβ（１－４０）の量又は／及びアミロイドβ（１－４２）の量をさらに測定する部位でもある。
前記測定部の大きさや構成は特に限定されない。
前記測定部としては、例えば、ＥＬＩＳＡ法に用いられるマイクロプレートリーダー又はＣＣＤを用いて撮像するイメージング装置、ウエスタンブロット法又はマイクロアレイ（マイクロチップ）を利用した方法に用いられるイメージング装置、質量分析法に用いられる質量分析装置、分子間相互作用解析装置、及びフローサイトメトリーに用いられるフローサイトメーター、ＨＰＬＣ法やキャピラリー電気泳動法に用いられる紫外可視光検出器や蛍光検出器等が挙げられる。
前記測定部の大きさや構成は特に限定されない。
前記測定部としては、例えば、ＥＬＩＳＡ法に用いられるマイクロプレートリーダー又はＣＣＤを用いて撮像するイメージング装置、ウエスタンブロット法又はマイクロアレイ（マイクロチップ）を利用した方法に用いられるイメージング装置、質量分析法に用いられる質量分析装置、分子間相互作用解析装置、及びフローサイトメトリーに用いられるフローサイトメーター、ＨＰＬＣ法やキャピラリー電気泳動法に用いられる紫外可視光検出器や蛍光検出器等が挙げられる。
ＡＤ／ＭＣＩ診断補助用装置（ＩＩ）における、被験者、生体試料、細胞外小胞は、それぞれ前記のものと同様であり、好ましいものも同様である。
ＡＤ／ＭＣＩ診断補助用装置（ＩＩ）における、ホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞、量、ホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の測定対象、ホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の測定や当該測定に用いられる物質、ＣＤ９を有する細胞外小胞、ＣＤ９を有する細胞外小胞の量の測定対象、ＣＤ９を有する細胞外小胞の量の測定や当該測定に用いられる物質は、ＡＤ／ＭＣＩ診断補助方法（ＩＩ）のものと同様であり、好ましいものや具体例も同様である。
ＡＤ／ＭＣＩ診断補助用装置（ＩＩ）における演算部は、測定部で得られたＣＤ９を有する細胞外小胞の量、及びホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量、並びに測定部により測定されたアミロイドβ（１－４０）の量又は／及びアミロイドβ（１－４２）の量、或いは入力部より外部から入力されたアミロイドβ（１－４０）の量又は／及びアミロイドβ（１－４２）の量、若しくはアミロイドβ（１－４０）の量に対するアミロイドβ（１－４２）の量の割合（Ａβ（１－４２）／Ａβ（１－４０））に基づき、ＣＤ９を有する細胞外小胞の量に対するホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の割合（ＡＤ／ＭＣＩマーカー）にアミロイドβ（１－４０）の量に対するアミロイドβ（１－４２）の量の割合（Ａβ（１－４２）／Ａβ（１－４０））を乗じたＡＤ／ＭＣＩマーカー（ＩＩ）を算出する部位である。
前記演算部の大きさや構成は特に限定されない。
ＡＤ／ＭＣＩ診断補助用装置（ＩＩ）における演算部は、測定又は入力された質量や濃度と相関関係を有する実測値（例えば、吸光度、吸光度変化量、透過光、透過光変化量、蛍光強度、蛍光強度変化量、発光量、発光量変化量、濁度、濁度変化率、散乱光、散乱光変化率、反射率、反射率変化量、屈折率、屈折率変化量等）を質量や濃度等に換算した後、ＡＤ／ＭＣＩマーカー（ＩＩ）を算出してもよい。
なお、当該実測値、演算部により換算された質量や濃度等、ＡＤ／ＭＣＩマーカー、アミロイドβ（１－４０）の量に対するアミロイドβ（１－４２）の量の割合（Ａβ（１－４２）／Ａβ（１－４０））、ＡＤ／ＭＣＩマーカー（ＩＩ）は、メモリやハードディスクなど装置に備えられた記憶装置等に記憶されてもよい。
前記演算部の大きさや構成は特に限定されない。
ＡＤ／ＭＣＩ診断補助用装置（ＩＩ）における演算部は、測定又は入力された質量や濃度と相関関係を有する実測値（例えば、吸光度、吸光度変化量、透過光、透過光変化量、蛍光強度、蛍光強度変化量、発光量、発光量変化量、濁度、濁度変化率、散乱光、散乱光変化率、反射率、反射率変化量、屈折率、屈折率変化量等）を質量や濃度等に換算した後、ＡＤ／ＭＣＩマーカー（ＩＩ）を算出してもよい。
なお、当該実測値、演算部により換算された質量や濃度等、ＡＤ／ＭＣＩマーカー、アミロイドβ（１－４０）の量に対するアミロイドβ（１－４２）の量の割合（Ａβ（１－４２）／Ａβ（１－４０））、ＡＤ／ＭＣＩマーカー（ＩＩ）は、メモリやハードディスクなど装置に備えられた記憶装置等に記憶されてもよい。
ＡＤ／ＭＣＩ診断補助用装置（ＩＩ）における判定部は、演算部で算出したＡＤ／ＭＣＩマーカー（ＩＩ）を指標として、アルツハイマー型認知症又は軽度認知障害を判定する部位である。
ＡＤ／ＭＣＩ診断補助用装置（ＩＩ）におけるアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の判定や当該判定に用いられる予め定められた基準値、予め定められた基準値の決定方法は、ＡＤ／ＭＣＩ診断補助用方法（ＩＩ）のものと同様であり、好ましいものや具体例も同様である。
ＡＤ／ＭＣＩ診断補助用装置（ＩＩ）における予め定めた基準値は、ＡＤ／ＭＣＩ診断補助用装置（ＩＩ）に予め記憶されていてもよいし、判定の際にＡＤ／ＭＣＩ診断補助用装置（ＩＩ）の入力部位から入力されてもよい。
ＡＤ／ＭＣＩ診断補助用装置（ＩＩ）における予め定めた基準値は、ＡＤ／ＭＣＩ診断補助用装置（ＩＩ）に予め記憶されていてもよいし、判定の際にＡＤ／ＭＣＩ診断補助用装置（ＩＩ）の入力部位から入力されてもよい。
ＡＤ／ＭＣＩ診断補助用装置（ＩＩ）は、出力部を備えていてもよい。出力部では、前記した判定の結果をディスプレイなどの表示装置やプリンターなどの印刷装置に表示又は出力させるなどの処理が行われる。
本発明によれば、医師による被験者のアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害に関する診断を補助する為のデータ（判定結果）が得られる。
医師は、本発明により被験者がアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害と判定された場合には、例えば、問診、アミロイドＰＥＴ診断等の撮像装置を用いた診断方法、ＭＭＳＥテスト、例えば、脳脊髄液中のＡβ４２の減少、Ｔａｕ又はリン酸化Ｔａｕの上昇等の認知症疾患治療ガイドラインで推奨されているアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害のバイオマーカー等に関する検査、アルツハイマー型認知症又は軽度認知障害のバイオマーカーの候補物質を用いた検査をさらに行ってもよく、これらの結果等を考慮し、被験者のアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害に関する診断をすることができる。
また、本発明により被験者がアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害と判定された場合には、コリンエステラーゼ阻害薬等のアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の進行を遅らせる薬や治療薬を投与したり、手術を行ったりしてもよい。
医師は、本発明により被験者がアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害と判定された場合には、例えば、問診、アミロイドＰＥＴ診断等の撮像装置を用いた診断方法、ＭＭＳＥテスト、例えば、脳脊髄液中のＡβ４２の減少、Ｔａｕ又はリン酸化Ｔａｕの上昇等の認知症疾患治療ガイドラインで推奨されているアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害のバイオマーカー等に関する検査、アルツハイマー型認知症又は軽度認知障害のバイオマーカーの候補物質を用いた検査をさらに行ってもよく、これらの結果等を考慮し、被験者のアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害に関する診断をすることができる。
また、本発明により被験者がアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害と判定された場合には、コリンエステラーゼ阻害薬等のアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の進行を遅らせる薬や治療薬を投与したり、手術を行ったりしてもよい。
本発明のアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の診断を補助する方法、バイオマーカー、試薬キット及び装置は、アルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の診断を補助することが可能であることから、臨床検査の分野において有用である。本発明によれば、高い正確度でアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の診断を補助することができる。
以下、実施例および比較例に基づいて本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらの例によって何ら限定されない。
実施例１．ＰＳ及びＣＤ９を有するエクソソームの量を指標とするアルツハイマー型認知症検体の評価
Ｔｉｍタンパク質－抗ＣＤ９抗体のサンドイッチＥＬＩＳＡ法によりエクソソームの測定を行い、ＡＵＣ及びｐ値を算出した。
（１）キャリブレーターの調製
ＭａｇＣａｐｔｕｒｅ（登録商標）Ｅｘｏｓｏｍｅ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ Ｋｉｔ ＰＳ（富士フイルム和光純薬（株）製、以下「Ａキット」とする）を用いて、当該キットに添付された取扱説明書に従って、ＣＯＬＯ２０１細胞培養上清からエクソソームを単離し、当該キットに付属の溶出液を用いてエクソソームを溶出した。プロテインアッセイＢＣＡキット（富士フイルム和光純薬（株）製）を用いて、得られたエクソソーム溶液中のタンパク質濃度をＢＣＡ法（ビシンコニン酸法）により測定した。
次いで、得られたエクソソーム溶液を、ＰＳ Ｃａｐｔｕｒｅ Ｅｘｏｓｏｍｅ ＥＬＩＳＡ Ｋｉｔ，Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ ＨＲＰ（富士フイルム和光純薬（株）製、以下「Ｂキット」とする）に付属のＲｅａｃｔｉｏｎ Ｂｕｆｆｅｒを用いて、ＢＣＡ法で測定したタンパク質濃度をもとに、０．１５６、０．３１３、０．６２５、１．２５、２．５０、５．００、１０．０、２０．０ ｎｇ／ｍＬとなるようにそれぞれ希釈し、８点の濃度からなるＣＯＬＯ２０１細胞培養上清由来エクソソーム希釈系列（以下、「キャリブレーター」とする）を得た。
（２）測定用検体の前処理
ＰｒｅｃｉｓｉｏｎＭｅｄ社より購入したアルツハイマー型認知症（ＡＤ）患者８検体、健常者７検体の脳脊髄液（ＣＳＦ）を、それぞれ１０，０００ｇで２０分間遠心分離した後、上清を回収した。得られた上清を、前記Ａキットに付属のＲｅａｃｔｉｏｎ Ｂｕｆｆｅｒを用いて、それぞれ１００倍希釈し、「測定用検体希釈液」とした。
（３）ＥＬＩＳＡ法による測定
（２）で調製した測定用検体希釈液を、Ｔｉｍ４タンパク質を固相に固定化し抗ＣＤ９抗体を検出用抗体としたＴｉｍ４タンパク質－抗ＣＤ９抗体のサンドイッチＥＬＩＳＡ法により測定した。具体的には、抗ＣＤ９マウスモノクローナル抗体（１Ｋ、富士フイルム和光純薬（株）製）を１．６ｍＭ ＤＴＴで還元後、Ｂｉｏｔｉｎ－ＰＥＡＣ５－ｍａｌｅｉｍｉｄｅ（（株）同仁化学研究所製）と３７℃で１．５時間反応させ、ビオチン標識抗ＣＤ９マウスモノクローナル抗体を作製した。検出用抗体以外は、前記Ｂキットに付属の試薬を用いた。
まず、Ｂキットに付属のＷａｓｈｉｎｇ Ｂｕｆｆｅｒ（１０×）を精製水（蒸留水）で１０倍に希釈した後、Ｂキットに付属のＥｘｏｓｏｍｅ Ｂｉｎｄｉｎｇ Ｅｎｈａｎｃｅｒ（１００×）を得られた希釈液に対して１／１００量添加した。得られた溶液を、「洗浄液（１×）」とする。次いで、Ｂキットに付属の「Ｔｉｍ４タンパク質が固相に固定化された９６ウェルプレート」の各ウェルを、洗浄液（１×）３００～３５０μＬでそれぞれ３回洗浄した。
次いで、（２）で調製した測定用検体希釈液（８検体 ｎ＝２、１６ウェル）、（２）で調製したキャリブレーター（８点分 ｎ＝２、１６ウェル）、及びブランクとしてＢキットに付属のＲｅａｃｔｉｏｎ Ｂｕｆｆｅｒ（ｎ＝２、２ウェル）をプレートの各ウェルに１００μＬずつ分注した。次いで、プレートにプレートシールを貼り、マイクロプレート振とう器を用いて約５００ｒｐｍで撹拌しながら室温で２時間反応させた。反応後、反応液を捨て、各ウェルを洗浄液（×１）３００～３５０μＬで３回洗浄した。
次いで、Ｂキットに付属のＲｅａｃｔｉｏｎ Ｂｕｆｆｅｒを用いて、ビオチン標識抗ＣＤ９マウスモノクローナル抗体を終濃度が２５０ｎｇ／ｍＬとなるように希釈し、ビオチン標識抗体反応液を得た。得られたビオチン標識抗体反応液を、各ウェルに１００μＬずつ分注し、プレートシールを貼り、マイクロプレート振とう器を用いて約５００ｒｐｍで撹拌しながら室温で１時間反応させた。反応後、反応液を捨て、各ウェルを洗浄液（×１）３００～３５０μＬで３回洗浄した。
Ｂキットに付属のＲｅａｃｔｉｏｎ Ｂｕｆｆｅｒに対して、１／１００量のＨＲＰ－ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ（１００×）を添加して、よく混合し、調製したＨＲＰ標識ストレプトアビジン反応液（１×）を各ウェルに１００μＬずつ分注し、プレートシールを貼り、マイクロプレート振とう器を用いて約５００ｒｐｍで撹拌しながら室温で２時間反応させた。反応終了後、反応液を捨て、各ウェルを洗浄液（１×）３００～３５０μＬで５回洗浄した。
次いで、室温に戻したＢキットに付属のＴＭＢ（３，３’，５，５’－テトラメチルベンジジン）Ｓｏｌｕｔｉｏｎを１００μＬずつ各ウェルに分注し、マイクロプレート振とう器を用いて約１分間撹拌した後、プレートシールを貼り、室温（２０～２５℃）で３０分間静置反応させた。その後、室温に戻したＢキットに付属のＳｔｏｐ Ｓｏｌｕｔｉｏｎを１００μＬずつ各ウェルに添加し、マイクロプレート振とう器を用いて約５秒間撹拌後、速やかに９６ウェルマイクロプレートリーダー（Ｔｅｃａｎ社、Ｓａｆｉｒｅ２）を用いて４５０ｎｍの吸光度と副波長６２０ｎｍの吸光度をそれぞれ測定した。４５０ｎｍ吸光度値から副波長６２０ｎｍ吸光度値を差し引いた値を「吸光度値」とし、測定用検体希釈液の吸光度値からブランクの吸光度値を差し引いた値を「補正後検体吸光度値」として、それぞれ算出した。そして、ＣＯＬＯ２０１細胞培養上清由来エクソソーム希釈系列（キャリブレーター）の吸光度値からブランクの吸光度値を差し引いた値とキャリブレーターのタンパク質濃度から標準曲線を作成した。標準曲線を用いて、補正後検体吸光度値をタンパク質濃度に換算し、得られた換算値に検体希釈率を乗じた値を「検体測定値」［ｎｇ／ｍＬ］とした。
（４）ＡＵＣの算出
（３）で得られた検体測定値を基に、ＪＭＰ（登録商標）１１（ＳＡＳ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｉｎｃ．，Ｃａｒｙ，ＮＣ， ＳＡ）を用いて、Ｗｉｌｃｏｘｏｎ／Ｋｒｕｓｋａｌ－Ｗａｌｌｉｓの検定（順位和）により、アルツハイマー型認知症患者と健常者の有意差検定を行い、ｐ値を算出した。また、（３）で得られた検体測定値を基に、ＪＭＰ（登録商標）１１（ＳＡＳ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｉｎｃ．，Ｃａｒｙ，ＮＣ，ＵＳＡ）を用いてロジスティック回帰分析をおこない、得られた受信者動作特性曲線（ＲＯＣ曲線）から、曲線下面積値（ＡＵＣ）を算出した。
得られた結果を下記表１に示す。また、検体測定値を基に作成した箱ひげグラフを図１に示す。図中、縦軸は検体測定値、横軸のＣｏｎｔｒｏｌは健常者の結果、ＡＤはアルツハイマー型認知症患者の結果をそれぞれ示す。
Ｔｉｍタンパク質－抗ＣＤ９抗体のサンドイッチＥＬＩＳＡ法によりエクソソームの測定を行い、ＡＵＣ及びｐ値を算出した。
（１）キャリブレーターの調製
ＭａｇＣａｐｔｕｒｅ（登録商標）Ｅｘｏｓｏｍｅ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ Ｋｉｔ ＰＳ（富士フイルム和光純薬（株）製、以下「Ａキット」とする）を用いて、当該キットに添付された取扱説明書に従って、ＣＯＬＯ２０１細胞培養上清からエクソソームを単離し、当該キットに付属の溶出液を用いてエクソソームを溶出した。プロテインアッセイＢＣＡキット（富士フイルム和光純薬（株）製）を用いて、得られたエクソソーム溶液中のタンパク質濃度をＢＣＡ法（ビシンコニン酸法）により測定した。
次いで、得られたエクソソーム溶液を、ＰＳ Ｃａｐｔｕｒｅ Ｅｘｏｓｏｍｅ ＥＬＩＳＡ Ｋｉｔ，Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ ＨＲＰ（富士フイルム和光純薬（株）製、以下「Ｂキット」とする）に付属のＲｅａｃｔｉｏｎ Ｂｕｆｆｅｒを用いて、ＢＣＡ法で測定したタンパク質濃度をもとに、０．１５６、０．３１３、０．６２５、１．２５、２．５０、５．００、１０．０、２０．０ ｎｇ／ｍＬとなるようにそれぞれ希釈し、８点の濃度からなるＣＯＬＯ２０１細胞培養上清由来エクソソーム希釈系列（以下、「キャリブレーター」とする）を得た。
（２）測定用検体の前処理
ＰｒｅｃｉｓｉｏｎＭｅｄ社より購入したアルツハイマー型認知症（ＡＤ）患者８検体、健常者７検体の脳脊髄液（ＣＳＦ）を、それぞれ１０，０００ｇで２０分間遠心分離した後、上清を回収した。得られた上清を、前記Ａキットに付属のＲｅａｃｔｉｏｎ Ｂｕｆｆｅｒを用いて、それぞれ１００倍希釈し、「測定用検体希釈液」とした。
（３）ＥＬＩＳＡ法による測定
（２）で調製した測定用検体希釈液を、Ｔｉｍ４タンパク質を固相に固定化し抗ＣＤ９抗体を検出用抗体としたＴｉｍ４タンパク質－抗ＣＤ９抗体のサンドイッチＥＬＩＳＡ法により測定した。具体的には、抗ＣＤ９マウスモノクローナル抗体（１Ｋ、富士フイルム和光純薬（株）製）を１．６ｍＭ ＤＴＴで還元後、Ｂｉｏｔｉｎ－ＰＥＡＣ５－ｍａｌｅｉｍｉｄｅ（（株）同仁化学研究所製）と３７℃で１．５時間反応させ、ビオチン標識抗ＣＤ９マウスモノクローナル抗体を作製した。検出用抗体以外は、前記Ｂキットに付属の試薬を用いた。
まず、Ｂキットに付属のＷａｓｈｉｎｇ Ｂｕｆｆｅｒ（１０×）を精製水（蒸留水）で１０倍に希釈した後、Ｂキットに付属のＥｘｏｓｏｍｅ Ｂｉｎｄｉｎｇ Ｅｎｈａｎｃｅｒ（１００×）を得られた希釈液に対して１／１００量添加した。得られた溶液を、「洗浄液（１×）」とする。次いで、Ｂキットに付属の「Ｔｉｍ４タンパク質が固相に固定化された９６ウェルプレート」の各ウェルを、洗浄液（１×）３００～３５０μＬでそれぞれ３回洗浄した。
次いで、（２）で調製した測定用検体希釈液（８検体 ｎ＝２、１６ウェル）、（２）で調製したキャリブレーター（８点分 ｎ＝２、１６ウェル）、及びブランクとしてＢキットに付属のＲｅａｃｔｉｏｎ Ｂｕｆｆｅｒ（ｎ＝２、２ウェル）をプレートの各ウェルに１００μＬずつ分注した。次いで、プレートにプレートシールを貼り、マイクロプレート振とう器を用いて約５００ｒｐｍで撹拌しながら室温で２時間反応させた。反応後、反応液を捨て、各ウェルを洗浄液（×１）３００～３５０μＬで３回洗浄した。
次いで、Ｂキットに付属のＲｅａｃｔｉｏｎ Ｂｕｆｆｅｒを用いて、ビオチン標識抗ＣＤ９マウスモノクローナル抗体を終濃度が２５０ｎｇ／ｍＬとなるように希釈し、ビオチン標識抗体反応液を得た。得られたビオチン標識抗体反応液を、各ウェルに１００μＬずつ分注し、プレートシールを貼り、マイクロプレート振とう器を用いて約５００ｒｐｍで撹拌しながら室温で１時間反応させた。反応後、反応液を捨て、各ウェルを洗浄液（×１）３００～３５０μＬで３回洗浄した。
Ｂキットに付属のＲｅａｃｔｉｏｎ Ｂｕｆｆｅｒに対して、１／１００量のＨＲＰ－ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ（１００×）を添加して、よく混合し、調製したＨＲＰ標識ストレプトアビジン反応液（１×）を各ウェルに１００μＬずつ分注し、プレートシールを貼り、マイクロプレート振とう器を用いて約５００ｒｐｍで撹拌しながら室温で２時間反応させた。反応終了後、反応液を捨て、各ウェルを洗浄液（１×）３００～３５０μＬで５回洗浄した。
次いで、室温に戻したＢキットに付属のＴＭＢ（３，３’，５，５’－テトラメチルベンジジン）Ｓｏｌｕｔｉｏｎを１００μＬずつ各ウェルに分注し、マイクロプレート振とう器を用いて約１分間撹拌した後、プレートシールを貼り、室温（２０～２５℃）で３０分間静置反応させた。その後、室温に戻したＢキットに付属のＳｔｏｐ Ｓｏｌｕｔｉｏｎを１００μＬずつ各ウェルに添加し、マイクロプレート振とう器を用いて約５秒間撹拌後、速やかに９６ウェルマイクロプレートリーダー（Ｔｅｃａｎ社、Ｓａｆｉｒｅ２）を用いて４５０ｎｍの吸光度と副波長６２０ｎｍの吸光度をそれぞれ測定した。４５０ｎｍ吸光度値から副波長６２０ｎｍ吸光度値を差し引いた値を「吸光度値」とし、測定用検体希釈液の吸光度値からブランクの吸光度値を差し引いた値を「補正後検体吸光度値」として、それぞれ算出した。そして、ＣＯＬＯ２０１細胞培養上清由来エクソソーム希釈系列（キャリブレーター）の吸光度値からブランクの吸光度値を差し引いた値とキャリブレーターのタンパク質濃度から標準曲線を作成した。標準曲線を用いて、補正後検体吸光度値をタンパク質濃度に換算し、得られた換算値に検体希釈率を乗じた値を「検体測定値」［ｎｇ／ｍＬ］とした。
（４）ＡＵＣの算出
（３）で得られた検体測定値を基に、ＪＭＰ（登録商標）１１（ＳＡＳ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｉｎｃ．，Ｃａｒｙ，ＮＣ， ＳＡ）を用いて、Ｗｉｌｃｏｘｏｎ／Ｋｒｕｓｋａｌ－Ｗａｌｌｉｓの検定（順位和）により、アルツハイマー型認知症患者と健常者の有意差検定を行い、ｐ値を算出した。また、（３）で得られた検体測定値を基に、ＪＭＰ（登録商標）１１（ＳＡＳ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｉｎｃ．，Ｃａｒｙ，ＮＣ，ＵＳＡ）を用いてロジスティック回帰分析をおこない、得られた受信者動作特性曲線（ＲＯＣ曲線）から、曲線下面積値（ＡＵＣ）を算出した。
得られた結果を下記表１に示す。また、検体測定値を基に作成した箱ひげグラフを図１に示す。図中、縦軸は検体測定値、横軸のＣｏｎｔｒｏｌは健常者の結果、ＡＤはアルツハイマー型認知症患者の結果をそれぞれ示す。
比較例１．ＣＤ９を有するエクソソームの量を指標とするアルツハイマー型認知症検体の評価
Ｔｉｍ４タンパク質の代わりに抗ＣＤ９抗体を固相に固定化した以外は、実施例１と同様の方法により、抗ＣＤ９抗体－抗ＣＤ９抗体のサンドイッチＥＬＩＳＡ法によりエクソソームを測定し、アルツハイマー型認知症患者と健常者の有意差検定を行い、ＡＵＣ及びｐ値を算出した。
抗ＣＤ９抗体を固相に固定したプレートは、以下の方法により調製した。抗ＣＤ９マウスモノクローナル抗体（１Ｋ）（富士フイルム和光純薬（株）製）を５０ｍＭ ＭＯＰＳ（ｐＨ７．５）で１０μｇ／ｍＬの濃度に希釈し、９６ウェルマイクロプレート（Ｎｕｎｃ社）のウェルに１００μＬ添加し、冷蔵で一晩インキュベーションした。ＴＢＳＴ（Ｔｒｉｓ Ｂｕｆｆｅｒｅｄ Ｓａｌｉｎｅ、ｐＨ７．４）でウェルを３回洗浄後、１０ｍｇ／ｍＬブロックエース含有ＴＢＳ（Ｔｒｉｓ Ｂｕｆｆｅｒｅｄ Ｓａｌｉｎｅ、ｐＨ７．４）を３００μＬ添加し、冷蔵で一晩インキュベーションしたものをそれぞれ抗体固相化プレートとして使用した。
検出抗体の抗ＣＤ９抗体は、実施例１と同様の方法によりビオチン標識したものを用いた。
得られた結果を下記表１に示す。
Ｔｉｍ４タンパク質の代わりに抗ＣＤ９抗体を固相に固定化した以外は、実施例１と同様の方法により、抗ＣＤ９抗体－抗ＣＤ９抗体のサンドイッチＥＬＩＳＡ法によりエクソソームを測定し、アルツハイマー型認知症患者と健常者の有意差検定を行い、ＡＵＣ及びｐ値を算出した。
抗ＣＤ９抗体を固相に固定したプレートは、以下の方法により調製した。抗ＣＤ９マウスモノクローナル抗体（１Ｋ）（富士フイルム和光純薬（株）製）を５０ｍＭ ＭＯＰＳ（ｐＨ７．５）で１０μｇ／ｍＬの濃度に希釈し、９６ウェルマイクロプレート（Ｎｕｎｃ社）のウェルに１００μＬ添加し、冷蔵で一晩インキュベーションした。ＴＢＳＴ（Ｔｒｉｓ Ｂｕｆｆｅｒｅｄ Ｓａｌｉｎｅ、ｐＨ７．４）でウェルを３回洗浄後、１０ｍｇ／ｍＬブロックエース含有ＴＢＳ（Ｔｒｉｓ Ｂｕｆｆｅｒｅｄ Ｓａｌｉｎｅ、ｐＨ７．４）を３００μＬ添加し、冷蔵で一晩インキュベーションしたものをそれぞれ抗体固相化プレートとして使用した。
検出抗体の抗ＣＤ９抗体は、実施例１と同様の方法によりビオチン標識したものを用いた。
得られた結果を下記表１に示す。
実施例２．ＰＳ及びＣＤ６３を有するエクソソームの量を指標とするアルツハイマー型認知症検体の評価
検出抗体として抗ＣＤ９抗体の代わりに抗ＣＤ６３抗体を使用した以外は、実施例１と同様の方法により、Ｔｉｍタンパク質－抗ＣＤ６３抗体のサンドイッチＥＬＩＳＡ法によりエクソソームを測定し、アルツハイマー型認知症患者と健常者の有意差検定を行い、ＡＵＣ及びｐ値を算出した。
検出抗体の抗ＣＤ６３抗体は、ＰＳ Ｃａｐｔｕｒｅ Ｅｘｏｓｏｍｅ ＥＬＩＳＡ Ｋｉｔ，Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ ＨＲＰ（富士フイルム和光純薬（株）製、上記「Ｂキット」）に付属のビオチン標識された抗ＣＤ６３抗体を用いた。
得られた結果を下記表１に示す。
検出抗体として抗ＣＤ９抗体の代わりに抗ＣＤ６３抗体を使用した以外は、実施例１と同様の方法により、Ｔｉｍタンパク質－抗ＣＤ６３抗体のサンドイッチＥＬＩＳＡ法によりエクソソームを測定し、アルツハイマー型認知症患者と健常者の有意差検定を行い、ＡＵＣ及びｐ値を算出した。
検出抗体の抗ＣＤ６３抗体は、ＰＳ Ｃａｐｔｕｒｅ Ｅｘｏｓｏｍｅ ＥＬＩＳＡ Ｋｉｔ，Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ ＨＲＰ（富士フイルム和光純薬（株）製、上記「Ｂキット」）に付属のビオチン標識された抗ＣＤ６３抗体を用いた。
得られた結果を下記表１に示す。
比較例２．ＣＤ６３を指標とするアルツハイマー型認知症検体の評価
抗ＣＤ９抗体の代わりに抗ＣＤ６３マウスモノクローナル抗体（３－１３）（富士フイルム和光純薬）を固相に固定化し、また検出抗体として用いた以外は、比較例１と同様の方法により、抗ＣＤ６３抗体－抗ＣＤ６３抗体のサンドイッチＥＬＩＳＡ法によりエクソソームを測定し、アルツハイマー型認知症患者と健常者の有意差検定を行い、ＡＵＣ及びｐ値を算出した。
抗ＣＤ６３抗体を固相に固定したプレートは、比較例１と同様の方法により調製した。検出抗体の抗ＣＤ６３抗体は、ＰＳ Ｃａｐｔｕｒｅ Ｅｘｏｓｏｍｅ ＥＬＩＳＡ Ｋｉｔ，Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ ＨＲＰ（富士フイルム和光純薬（株）製、上記「Ｂキット」）に付属のビオチン標識された抗ＣＤ６３抗体を用いた。
得られた結果を下記表１に示す。
抗ＣＤ９抗体の代わりに抗ＣＤ６３マウスモノクローナル抗体（３－１３）（富士フイルム和光純薬）を固相に固定化し、また検出抗体として用いた以外は、比較例１と同様の方法により、抗ＣＤ６３抗体－抗ＣＤ６３抗体のサンドイッチＥＬＩＳＡ法によりエクソソームを測定し、アルツハイマー型認知症患者と健常者の有意差検定を行い、ＡＵＣ及びｐ値を算出した。
抗ＣＤ６３抗体を固相に固定したプレートは、比較例１と同様の方法により調製した。検出抗体の抗ＣＤ６３抗体は、ＰＳ Ｃａｐｔｕｒｅ Ｅｘｏｓｏｍｅ ＥＬＩＳＡ Ｋｉｔ，Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ ＨＲＰ（富士フイルム和光純薬（株）製、上記「Ｂキット」）に付属のビオチン標識された抗ＣＤ６３抗体を用いた。
得られた結果を下記表１に示す。
実施例３．ＰＳ及びＣＤ８１を有するエクソソームの量を指標とするアルツハイマー型認知症検体の評価
検出抗体として抗ＣＤ９抗体の代わりに抗ＣＤ８１マウスモノクローナル抗体（１７Ｂ１）（富士フイルム和光純薬（株）製）を使用した以外は、実施例１と同様の方法により、Ｔｉｍタンパク質－抗ＣＤ８１抗体のサンドイッチＥＬＩＳＡ法によりエクソソームを測定し、アルツハイマー型認知症患者と健常者の有意差検定を行い、ＡＵＣ及びｐ値を算出した。
検出抗体の抗ＣＤ８１抗体は、実施例１と同様の方法によりビオチン標識したものを用いた。
得られた結果を下記表１に示す。
検出抗体として抗ＣＤ９抗体の代わりに抗ＣＤ８１マウスモノクローナル抗体（１７Ｂ１）（富士フイルム和光純薬（株）製）を使用した以外は、実施例１と同様の方法により、Ｔｉｍタンパク質－抗ＣＤ８１抗体のサンドイッチＥＬＩＳＡ法によりエクソソームを測定し、アルツハイマー型認知症患者と健常者の有意差検定を行い、ＡＵＣ及びｐ値を算出した。
検出抗体の抗ＣＤ８１抗体は、実施例１と同様の方法によりビオチン標識したものを用いた。
得られた結果を下記表１に示す。
比較例３．ＣＤ８１を有するエクソソームの量を指標とするアルツハイマー型認知症検体の評価
抗ＣＤ９抗体の代わりに抗ＣＤ８１マウスモノクローナル抗体（１７Ｂ１）（富士フイルム和光純薬（株）製）を固相に固定化し、また検出抗体として用いた以外は、実施例１と同様の方法により、抗ＣＤ８１抗体－抗ＣＤ８１抗体のサンドイッチＥＬＩＳＡ法によりエクソソームの測定を測定し、アルツハイマー型認知症患者と健常者の有意差検定を行い、ＡＵＣ及びｐ値を算出した。
抗ＣＤ８１抗体を固相に固定したプレートは、比較例１と同様の方法により調製した。
検出抗体の抗ＣＤ８１抗体は、実施例１と同様の方法によりビオチン標識したものを用いた。
得られた結果を下記表１に示す。
抗ＣＤ９抗体の代わりに抗ＣＤ８１マウスモノクローナル抗体（１７Ｂ１）（富士フイルム和光純薬（株）製）を固相に固定化し、また検出抗体として用いた以外は、実施例１と同様の方法により、抗ＣＤ８１抗体－抗ＣＤ８１抗体のサンドイッチＥＬＩＳＡ法によりエクソソームの測定を測定し、アルツハイマー型認知症患者と健常者の有意差検定を行い、ＡＵＣ及びｐ値を算出した。
抗ＣＤ８１抗体を固相に固定したプレートは、比較例１と同様の方法により調製した。
検出抗体の抗ＣＤ８１抗体は、実施例１と同様の方法によりビオチン標識したものを用いた。
得られた結果を下記表１に示す。
実施例４．ＣＤ９を有するエクソソームの量に対するＰＳ及びＣＤ９を有するエクソソームの量の割合を指標とするアルツハイマー型認知症検体の評価
実施例１（Ｔｉｍタンパク質－抗ＣＤ９抗体のサンドイッチＥＬＩＳＡ法）で得られた「検体測定値」（値（Ａ））を、比較例１（抗ＣＤ９抗体－抗ＣＤ９抗体のサンドイッチＥＬＩＳＡ法）で得られた「検体測定値」（値（Ｂ））で除することにより、（Ａ）／（Ｂ）（以下、「補正後検体測定値」とする）を得た。
得られた補正後検体測定値に基づいて、実施例１（４）と同様の方法により、アルツハイマー型認知症患者と健常者の有意差検定を行い、ＡＵＣ及びｐ値を算出した。
得られた結果を下記表１に示す。また、補正後検体測定値を基に作成した箱ひげグラフを実施例６及び実施例７の結果と合わせて図２に示す。図中、縦軸は補正後検体測定値（（Ａ）／（Ｂ））、横軸のＣｏｎｔｒｏｌは健常者の結果、ＭＣＩは軽度認知障害患者の結果、ＡＤはアルツハイマー型認知症患者の結果をそれぞれ示す。
実施例１（Ｔｉｍタンパク質－抗ＣＤ９抗体のサンドイッチＥＬＩＳＡ法）で得られた「検体測定値」（値（Ａ））を、比較例１（抗ＣＤ９抗体－抗ＣＤ９抗体のサンドイッチＥＬＩＳＡ法）で得られた「検体測定値」（値（Ｂ））で除することにより、（Ａ）／（Ｂ）（以下、「補正後検体測定値」とする）を得た。
得られた補正後検体測定値に基づいて、実施例１（４）と同様の方法により、アルツハイマー型認知症患者と健常者の有意差検定を行い、ＡＵＣ及びｐ値を算出した。
得られた結果を下記表１に示す。また、補正後検体測定値を基に作成した箱ひげグラフを実施例６及び実施例７の結果と合わせて図２に示す。図中、縦軸は補正後検体測定値（（Ａ）／（Ｂ））、横軸のＣｏｎｔｒｏｌは健常者の結果、ＭＣＩは軽度認知障害患者の結果、ＡＤはアルツハイマー型認知症患者の結果をそれぞれ示す。
実施例５．ＣＤ６３を有するエクソソームの量に対するＰＳ及びＣＤ６３を有するエクソソームの量の割合を指標とするアルツハイマー型認知症検体の評価
（Ａ）実施例２（Ｔｉｍタンパク質－抗ＣＤ６３抗体のサンドイッチＥＬＩＳＡ法）で得られた「検体測定値」を、（Ｂ）比較例２（抗ＣＤ６３抗体－抗ＣＤ６３抗体のサンドイッチＥＬＩＳＡ法）で得られた「検体測定値」で除することにより、（Ａ）／（Ｂ）（補正後検体測定値）を得た。
得られた補正後検体測定値に基づいて、実施例１（４）と同様の方法により、アルツハイマー型認知症患者と健常者の有意差検定を行い、ＡＵＣ及びｐ値を算出した。
得られた結果を下記表１に示す。
（Ａ）実施例２（Ｔｉｍタンパク質－抗ＣＤ６３抗体のサンドイッチＥＬＩＳＡ法）で得られた「検体測定値」を、（Ｂ）比較例２（抗ＣＤ６３抗体－抗ＣＤ６３抗体のサンドイッチＥＬＩＳＡ法）で得られた「検体測定値」で除することにより、（Ａ）／（Ｂ）（補正後検体測定値）を得た。
得られた補正後検体測定値に基づいて、実施例１（４）と同様の方法により、アルツハイマー型認知症患者と健常者の有意差検定を行い、ＡＵＣ及びｐ値を算出した。
得られた結果を下記表１に示す。
比較例４．ＰＳ及びＣＤ９を有するエクソソームの量を指標とする軽度認知障害検体の評価
アルツハイマー型認知症（ＡＤ）患者検体の代わりに、ＰｒｅｃｉｓｉｏｎＭｅｄ社より購入した軽度認知障害（ＭＣＩ）患者７検体の脳脊髄液を用いた以外は、実施例１と同様の方法により、Ｔｉｍタンパク質－抗ＣＤ９抗体のサンドイッチＥＬＩＳＡ法によりエクソソームを測定し、軽度認知障害患者と健常者の有意差検定を行い、ＡＵＣ及びｐ値を算出した。
得られた結果を下記表２に示す。
アルツハイマー型認知症（ＡＤ）患者検体の代わりに、ＰｒｅｃｉｓｉｏｎＭｅｄ社より購入した軽度認知障害（ＭＣＩ）患者７検体の脳脊髄液を用いた以外は、実施例１と同様の方法により、Ｔｉｍタンパク質－抗ＣＤ９抗体のサンドイッチＥＬＩＳＡ法によりエクソソームを測定し、軽度認知障害患者と健常者の有意差検定を行い、ＡＵＣ及びｐ値を算出した。
得られた結果を下記表２に示す。
比較例５．ＣＤ９を有するエクソソームの量を指標とする軽度認知障害検体の評価
アルツハイマー型認知症（ＡＤ）患者検体の代わりに、ＰｒｅｃｉｓｉｏｎＭｅｄ社より購入した軽度認知障害（ＭＣＩ）患者７検体の脳脊髄液を用いた以外は、比較例１と同様の方法により、抗ＣＤ９抗体－抗ＣＤ９抗体のサンドイッチＥＬＩＳＡ法によりエクソソームを測定し、軽度認知障害患者と健常者の有意差検定を行い、ＡＵＣ及びｐ値を算出した。
得られた結果を下記表２に示す。
アルツハイマー型認知症（ＡＤ）患者検体の代わりに、ＰｒｅｃｉｓｉｏｎＭｅｄ社より購入した軽度認知障害（ＭＣＩ）患者７検体の脳脊髄液を用いた以外は、比較例１と同様の方法により、抗ＣＤ９抗体－抗ＣＤ９抗体のサンドイッチＥＬＩＳＡ法によりエクソソームを測定し、軽度認知障害患者と健常者の有意差検定を行い、ＡＵＣ及びｐ値を算出した。
得られた結果を下記表２に示す。
実施例６．ＣＤ９を有するエクソソームの量に対するＰＳ及びＣＤ９を有するエクソソームの量の割合を指標とする軽度認知障害検体の評価
比較例４（Ｔｉｍタンパク質－抗ＣＤ９抗体のサンドイッチＥＬＩＳＡ法）で得られた「検体測定値」を、比較例５（抗ＣＤ９抗体－抗ＣＤ９抗体のサンドイッチＥＬＩＳＡ法）で得られた「検体測定値」で除することにより、（Ａ）／（Ｂ）（補正後検体測定値）を得た。
得られた補正後検体測定値に基づいて、実施例１（４）と同様の方法により、軽度認知障害患者と健常者の有意差検定を行い、ＡＵＣ及びｐ値を算出した。
得られた結果を下記表２に示す。また、補正後検体測定値を基に作成した箱ひげグラフを実施例４及び実施例７の結果と合わせて図２に示す。図中、縦軸は補正後検体測定値（（Ａ）／（Ｂ））、横軸のＣｏｎｔｒｏｌは健常者の結果、ＭＣＩは軽度認知障害患者の結果、ＡＤはアルツハイマー型認知症患者の結果をそれぞれ示す。
比較例４（Ｔｉｍタンパク質－抗ＣＤ９抗体のサンドイッチＥＬＩＳＡ法）で得られた「検体測定値」を、比較例５（抗ＣＤ９抗体－抗ＣＤ９抗体のサンドイッチＥＬＩＳＡ法）で得られた「検体測定値」で除することにより、（Ａ）／（Ｂ）（補正後検体測定値）を得た。
得られた補正後検体測定値に基づいて、実施例１（４）と同様の方法により、軽度認知障害患者と健常者の有意差検定を行い、ＡＵＣ及びｐ値を算出した。
得られた結果を下記表２に示す。また、補正後検体測定値を基に作成した箱ひげグラフを実施例４及び実施例７の結果と合わせて図２に示す。図中、縦軸は補正後検体測定値（（Ａ）／（Ｂ））、横軸のＣｏｎｔｒｏｌは健常者の結果、ＭＣＩは軽度認知障害患者の結果、ＡＤはアルツハイマー型認知症患者の結果をそれぞれ示す。
比較例６．ＰＳ及びＣＤ９を有するエクソソームの量を指標とするアルツハイマー型認知症検体及び軽度認知障害検体の評価
健常者検体の代わりに、ＰｒｅｃｉｓｉｏｎＭｅｄ社より購入した軽度認知障害（ＭＣＩ）患者７検体の脳脊髄液を用いた以外は、実施例１と同様の方法により、Ｔｉｍタンパク質－抗ＣＤ９抗体のサンドイッチＥＬＩＳＡ法によりエクソソームの測定を測定し、アルツハイマー型認知症患者と軽度認知障害患者の有意差検定を行い、ＡＵＣ及びｐ値を算出した。
得られた結果を下記表３に示す。
健常者検体の代わりに、ＰｒｅｃｉｓｉｏｎＭｅｄ社より購入した軽度認知障害（ＭＣＩ）患者７検体の脳脊髄液を用いた以外は、実施例１と同様の方法により、Ｔｉｍタンパク質－抗ＣＤ９抗体のサンドイッチＥＬＩＳＡ法によりエクソソームの測定を測定し、アルツハイマー型認知症患者と軽度認知障害患者の有意差検定を行い、ＡＵＣ及びｐ値を算出した。
得られた結果を下記表３に示す。
比較例７．ＣＤ９を有するエクソソームの量を指標とするアルツハイマー型認知症検体及び軽度認知障害検体の評価
健常者検体の代わりに、ＰｒｅｃｉｓｉｏｎＭｅｄ社より購入した軽度認知障害（ＭＣＩ）患者７検体の脳脊髄液を用いた以外は、比較例１と同様の方法により、抗ＣＤ９抗体－抗ＣＤ９抗体のサンドイッチＥＬＩＳＡ法によりエクソソームを測定し、アルツハイマー型認知症患者と軽度認知障害患者の有意差検定を行い、ＡＵＣ及びｐ値を算出した。
得られた結果を下記表３に示す。
健常者検体の代わりに、ＰｒｅｃｉｓｉｏｎＭｅｄ社より購入した軽度認知障害（ＭＣＩ）患者７検体の脳脊髄液を用いた以外は、比較例１と同様の方法により、抗ＣＤ９抗体－抗ＣＤ９抗体のサンドイッチＥＬＩＳＡ法によりエクソソームを測定し、アルツハイマー型認知症患者と軽度認知障害患者の有意差検定を行い、ＡＵＣ及びｐ値を算出した。
得られた結果を下記表３に示す。
実施例７．ＣＤ９を有するエクソソームの量に対するホスファチジルセリン及びＣＤ９を有するエクソソームの量の割合を指標とするアルツハイマー型認知症検体及び軽度認知障害検体の評価
（Ａ）比較例６（Ｔｉｍタンパク質－抗ＣＤ９抗体のサンドイッチＥＬＩＳＡ法）で得られた「検体測定値」を（Ｂ）比較例７（抗ＣＤ９抗体－抗ＣＤ９抗体のサンドイッチＥＬＩＳＡ法）で得られた「検体測定値」で除することにより、（Ａ）／（Ｂ）（補正後検体測定値）を得た。
得られた補正後検体測定値に基づいて、実施例１（４）と同様の方法により、アルツハイマー型認知症患者と軽度認知障害患者の有意差検定を行い、ＡＵＣ及びｐ値を算出した。
得られた結果を下記表３に示す。また、補正後検体測定値を基に作成した箱ひげグラフを実施例４及び実施例６の結果と合わせて図２に示す。図中、縦軸は補正後検体測定値（（Ａ）／（Ｂ））、横軸のＣｏｎｔｒｏｌは健常者の結果、ＭＣＩは軽度認知障害患者の結果、ＡＤはアルツハイマー型認知症患者の結果をそれぞれ示す。
（Ａ）比較例６（Ｔｉｍタンパク質－抗ＣＤ９抗体のサンドイッチＥＬＩＳＡ法）で得られた「検体測定値」を（Ｂ）比較例７（抗ＣＤ９抗体－抗ＣＤ９抗体のサンドイッチＥＬＩＳＡ法）で得られた「検体測定値」で除することにより、（Ａ）／（Ｂ）（補正後検体測定値）を得た。
得られた補正後検体測定値に基づいて、実施例１（４）と同様の方法により、アルツハイマー型認知症患者と軽度認知障害患者の有意差検定を行い、ＡＵＣ及びｐ値を算出した。
得られた結果を下記表３に示す。また、補正後検体測定値を基に作成した箱ひげグラフを実施例４及び実施例６の結果と合わせて図２に示す。図中、縦軸は補正後検体測定値（（Ａ）／（Ｂ））、横軸のＣｏｎｔｒｏｌは健常者の結果、ＭＣＩは軽度認知障害患者の結果、ＡＤはアルツハイマー型認知症患者の結果をそれぞれ示す。
表１より、アルツハイマー型認知症患者と健常者由来のＣＳＦをそれぞれ試料とし、ＣＤ９、ＣＤ６３、又はＣＤ８１のテトラスパニンを有するエクソソームの量を指標としてアルツハイマー型認知症を評価した場合、ＡＵＣはそれぞれ０．５８９、０．７４１、０．７１４であった。また、アルツハイマー型認知症の検査手法であるＭＭＳＥ（ミニメンタルステート検査）とＣＤ９を有するエクソソームの量との相関係数Ｒを算出したところ、得られた相関係数Ｒは、相関関係があると判断される０．２未満の０．０４８であり、相関関係もみられなかった。
他方、アルツハイマー型認知症患者と健常者由来のＣＳＦを試料とし、ＣＤ９、ＣＤ６３、又はＣＤ８１のテトラスパニン及びＴｉｍタンパク質が結合するホスファチジルセリンを有するエクソソームの量を指標としてアルツハイマー型認知症を評価した場合、ＡＵＣはそれぞれ０．８３９、０．８３９、０．８５７であり、いずれも高い正確度でアルツハイマー型認知症を検出できることが判った。また、ＭＭＳＥとホスファチジルセリン及びＣＤ９を有するエクソソームの量との相関係数Ｒを算出したところ、得られた相関係数Ｒは、相関関係があると判断される０．２を超えた０．３６３であり、相関関係がみられた。
また、ホスファチジルセリン及びＣＤ９を有するエクソソームの検体測定値（Ａ）を、ＣＤ９を有するエクソソームの検体測定値（Ｂ）で除することにより得られた補正後検体測定値（（Ａ）／（Ｂ））を指標としてアルツハイマー型認知症を評価した場合、ＡＵＣは０．９６４であり、極めて高い正確度でアルツハイマー型認知症を検出できることが判った。
さらに、表２より、軽度認知障害者と健常者由来のＣＳＦを試料とし、ホスファチジルセリン及びＣＤ９を有するエクソソームの検体測定値（Ａ）を、ＣＤ９を有するエクソソームの検体測定値（Ｂ）で除することにより得られた補正後検体測定値（（Ａ）／（Ｂ））を指標として軽度認知障害を評価した場合、ＡＵＣは０．８５７であり、高い正確度で軽度認知障害を検出できることが判った。また、表３よりアルツハイマー型認知症患者と軽度認知障害者のＣＳＦを試料とし、当該補正後検体測定値を指標としてアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害を評価した場合、ＡＵＣは０．８７５であり、高い正確度でアルツハイマー型認知症と軽度認知障害を区別して検出できることが判った。
また、ＭＭＳＥとホスファチジルセリン及びＣＤ９を有するエクソソームの検体測定値（Ａ）を、ＣＤ９を有するエクソソームの検体測定値（Ｂ）で除することにより得られた補正後検体測定値（（Ａ）／（Ｂ））との相関係数Ｒは、０．５６１であり、相関関係がみられた。
他方、アルツハイマー型認知症患者と健常者由来のＣＳＦを試料とし、ＣＤ９、ＣＤ６３、又はＣＤ８１のテトラスパニン及びＴｉｍタンパク質が結合するホスファチジルセリンを有するエクソソームの量を指標としてアルツハイマー型認知症を評価した場合、ＡＵＣはそれぞれ０．８３９、０．８３９、０．８５７であり、いずれも高い正確度でアルツハイマー型認知症を検出できることが判った。また、ＭＭＳＥとホスファチジルセリン及びＣＤ９を有するエクソソームの量との相関係数Ｒを算出したところ、得られた相関係数Ｒは、相関関係があると判断される０．２を超えた０．３６３であり、相関関係がみられた。
また、ホスファチジルセリン及びＣＤ９を有するエクソソームの検体測定値（Ａ）を、ＣＤ９を有するエクソソームの検体測定値（Ｂ）で除することにより得られた補正後検体測定値（（Ａ）／（Ｂ））を指標としてアルツハイマー型認知症を評価した場合、ＡＵＣは０．９６４であり、極めて高い正確度でアルツハイマー型認知症を検出できることが判った。
さらに、表２より、軽度認知障害者と健常者由来のＣＳＦを試料とし、ホスファチジルセリン及びＣＤ９を有するエクソソームの検体測定値（Ａ）を、ＣＤ９を有するエクソソームの検体測定値（Ｂ）で除することにより得られた補正後検体測定値（（Ａ）／（Ｂ））を指標として軽度認知障害を評価した場合、ＡＵＣは０．８５７であり、高い正確度で軽度認知障害を検出できることが判った。また、表３よりアルツハイマー型認知症患者と軽度認知障害者のＣＳＦを試料とし、当該補正後検体測定値を指標としてアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害を評価した場合、ＡＵＣは０．８７５であり、高い正確度でアルツハイマー型認知症と軽度認知障害を区別して検出できることが判った。
また、ＭＭＳＥとホスファチジルセリン及びＣＤ９を有するエクソソームの検体測定値（Ａ）を、ＣＤ９を有するエクソソームの検体測定値（Ｂ）で除することにより得られた補正後検体測定値（（Ａ）／（Ｂ））との相関係数Ｒは、０．５６１であり、相関関係がみられた。
実施例８－１０．ＰＳ及びテトラスパニンを有するエクソソームの量を指標とするアルツハイマー型認知症検体の評価
アルツハイマー型認知症患者脳脊髄液検体の代わりに、ＰｒｅｃｉｓｉｏｎＭｅｄ社より購入したアルツハイマー病（ＡＤ）患者ＥＤＴＡ血漿１８検体を使用し、健常者脳脊髄液検体の代わりに、ＰｒｅｃｉｓｉｏｎＭｅｄ社より購入した健常者ＥＤＴＡ血漿３７検体を用いた以外は、実施例１―３と同様の方法により、下記表４に記載のＴｉｍタンパク質－抗テトラスパニン抗体のサンドイッチＥＬＩＳＡ法によりそれぞれエクソソームを測定し、アルツハイマー型認知症患者と健常者の有意差検定を行い、ＡＵＣ及びｐ値を算出した。
得られた結果を下記表４に示す。また、検体測定値を基に作成した箱ひげグラフを図３に示す。図中、縦軸は検体測定値、横軸のＣｏｎｔｒｏｌは健常者の結果、ＡＤはアルツハイマー型認知症患者の結果をそれぞれ示す。
アルツハイマー型認知症患者脳脊髄液検体の代わりに、ＰｒｅｃｉｓｉｏｎＭｅｄ社より購入したアルツハイマー病（ＡＤ）患者ＥＤＴＡ血漿１８検体を使用し、健常者脳脊髄液検体の代わりに、ＰｒｅｃｉｓｉｏｎＭｅｄ社より購入した健常者ＥＤＴＡ血漿３７検体を用いた以外は、実施例１―３と同様の方法により、下記表４に記載のＴｉｍタンパク質－抗テトラスパニン抗体のサンドイッチＥＬＩＳＡ法によりそれぞれエクソソームを測定し、アルツハイマー型認知症患者と健常者の有意差検定を行い、ＡＵＣ及びｐ値を算出した。
得られた結果を下記表４に示す。また、検体測定値を基に作成した箱ひげグラフを図３に示す。図中、縦軸は検体測定値、横軸のＣｏｎｔｒｏｌは健常者の結果、ＡＤはアルツハイマー型認知症患者の結果をそれぞれ示す。
比較例８－１０．テトラスパニンを有するエクソソームの量を指標とするアルツハイマー型認知症検体の評価
アルツハイマー型認知症患者脳脊髄液検体の代わりに、ＰｒｅｃｉｓｉｏｎＭｅｄ社より購入したアルツハイマー病（ＡＤ）患者ＥＤＴＡ血漿１８検体を使用し、健常者脳脊髄液検体の代わりに、ＰｒｅｃｉｓｉｏｎＭｅｄ社より購入した健常者ＥＤＴＡ血漿３７検体を用いた以外は、比較例１－３と同様の方法により、抗ＣＤ９抗体－抗ＣＤ９抗体のサンドイッチＥＬＩＳＡ法、抗ＣＤ６３抗体－抗ＣＤ６３抗体のサンドイッチＥＬＩＳＡ法、抗ＣＤ８１抗体－抗ＣＤ８１抗体のサンドイッチＥＬＩＳＡ法によりそれぞれエクソソームを測定し、アルツハイマー型認知症患者と健常者の有意差検定を行い、ＡＵＣ及びｐ値を算出した。
得られた結果を下記表４に示す。
アルツハイマー型認知症患者脳脊髄液検体の代わりに、ＰｒｅｃｉｓｉｏｎＭｅｄ社より購入したアルツハイマー病（ＡＤ）患者ＥＤＴＡ血漿１８検体を使用し、健常者脳脊髄液検体の代わりに、ＰｒｅｃｉｓｉｏｎＭｅｄ社より購入した健常者ＥＤＴＡ血漿３７検体を用いた以外は、比較例１－３と同様の方法により、抗ＣＤ９抗体－抗ＣＤ９抗体のサンドイッチＥＬＩＳＡ法、抗ＣＤ６３抗体－抗ＣＤ６３抗体のサンドイッチＥＬＩＳＡ法、抗ＣＤ８１抗体－抗ＣＤ８１抗体のサンドイッチＥＬＩＳＡ法によりそれぞれエクソソームを測定し、アルツハイマー型認知症患者と健常者の有意差検定を行い、ＡＵＣ及びｐ値を算出した。
得られた結果を下記表４に示す。
実施例１１．ＣＤ９を有するエクソソームの量に対するＰＳ及びＣＤ９を有するエクソソームの量の割合を指標とするアルツハイマー型認知症検体の評価
実施例８（Ｔｉｍタンパク質－抗ＣＤ９抗体のサンドイッチＥＬＩＳＡ法）で得られた「検体測定値」（値（Ａ））を、比較例８（抗ＣＤ９抗体－抗ＣＤ９抗体のサンドイッチＥＬＩＳＡ法）で得られた「検体測定値」（値（Ｂ））で除することにより、（Ａ）／（Ｂ）（補正後検体測定値）を得た。
得られた補正後検体測定値に基づいて、実施例１（４）と同様の方法により、アルツハイマー型認知症患者と健常者の有意差検定を行い、ＡＵＣ及びｐ値を算出した。
得られた結果を下記表４に示す。また、補正後検体測定値を基に作成した箱ひげグラフを実施例１３及び実施例１４の結果と合わせて図４に示す。図中、縦軸は補正後検体測定値（（Ａ）／（Ｂ））、横軸のＣｏｎｔｒｏｌは健常者の結果、ＭＣＩは軽度認知障害患者の結果、ＡＤはアルツハイマー型認知症患者の結果をそれぞれ示す。
実施例８（Ｔｉｍタンパク質－抗ＣＤ９抗体のサンドイッチＥＬＩＳＡ法）で得られた「検体測定値」（値（Ａ））を、比較例８（抗ＣＤ９抗体－抗ＣＤ９抗体のサンドイッチＥＬＩＳＡ法）で得られた「検体測定値」（値（Ｂ））で除することにより、（Ａ）／（Ｂ）（補正後検体測定値）を得た。
得られた補正後検体測定値に基づいて、実施例１（４）と同様の方法により、アルツハイマー型認知症患者と健常者の有意差検定を行い、ＡＵＣ及びｐ値を算出した。
得られた結果を下記表４に示す。また、補正後検体測定値を基に作成した箱ひげグラフを実施例１３及び実施例１４の結果と合わせて図４に示す。図中、縦軸は補正後検体測定値（（Ａ）／（Ｂ））、横軸のＣｏｎｔｒｏｌは健常者の結果、ＭＣＩは軽度認知障害患者の結果、ＡＤはアルツハイマー型認知症患者の結果をそれぞれ示す。
実施例１２．ＣＤ６３を有するエクソソームの量に対するＰＳ及びＣＤ６３を有するエクソソームの量の割合を指標とするアルツハイマー型認知症検体及び軽度認知障害検体の評価
実施例９（Ｔｉｍタンパク質－抗ＣＤ６３抗体のサンドイッチＥＬＩＳＡ法）で得られた「検体測定値」（値（Ａ））を、比較例９（抗ＣＤ６３抗体－抗ＣＤ６３抗体のサンドイッチＥＬＩＳＡ法）で得られた「検体測定値」（値（Ｂ））で除することにより、（Ａ）／（Ｂ）（補正後検体測定値）を得た。
得られた補正後検体測定値に基づいて、実施例１（４）と同様の方法により、アルツハイマー型認知症患者と健常者の有意差検定を行い、ＡＵＣ及びｐ値を算出した。
得られた結果を下記表４に示す。
実施例９（Ｔｉｍタンパク質－抗ＣＤ６３抗体のサンドイッチＥＬＩＳＡ法）で得られた「検体測定値」（値（Ａ））を、比較例９（抗ＣＤ６３抗体－抗ＣＤ６３抗体のサンドイッチＥＬＩＳＡ法）で得られた「検体測定値」（値（Ｂ））で除することにより、（Ａ）／（Ｂ）（補正後検体測定値）を得た。
得られた補正後検体測定値に基づいて、実施例１（４）と同様の方法により、アルツハイマー型認知症患者と健常者の有意差検定を行い、ＡＵＣ及びｐ値を算出した。
得られた結果を下記表４に示す。
比較例１１－１２．ＰＳ及びテトラスパニンを有するエクソソームの量を指標とする軽度認知障害検体の評価
アルツハイマー型認知症（ＡＤ）患者脳脊髄液検体の代わりに、ＰｒｅｃｉｓｉｏｎＭｅｄ社より購入した軽度認知症（ＭＣＩ）患者ＥＤＴＡ血漿１８検体を使用し、健常者脳脊髄液検体として、ＰｒｅｃｉｓｉｏｎＭｅｄ社より購入した健常者ＥＤＴＡ血漿３７検体を用いた以外は、実施例１と同様の方法により、下記表５に記載のＴｉｍタンパク質－抗テトラスパニン抗体のサンドイッチＥＬＩＳＡ法によりエクソソームを測定し、軽度認知症患者と健常者の有意差検定を行い、ＡＵＣ及びｐ値を算出した。
得られた結果を下記表５に示す。
アルツハイマー型認知症（ＡＤ）患者脳脊髄液検体の代わりに、ＰｒｅｃｉｓｉｏｎＭｅｄ社より購入した軽度認知症（ＭＣＩ）患者ＥＤＴＡ血漿１８検体を使用し、健常者脳脊髄液検体として、ＰｒｅｃｉｓｉｏｎＭｅｄ社より購入した健常者ＥＤＴＡ血漿３７検体を用いた以外は、実施例１と同様の方法により、下記表５に記載のＴｉｍタンパク質－抗テトラスパニン抗体のサンドイッチＥＬＩＳＡ法によりエクソソームを測定し、軽度認知症患者と健常者の有意差検定を行い、ＡＵＣ及びｐ値を算出した。
得られた結果を下記表５に示す。
比較例１３－１４．テトラスパニンを有するエクソソームの量を指標とする軽度認知障害検体の評価
アルツハイマー型認知症（ＡＤ）患者脳脊髄液検体の代わりに、ＰｒｅｃｉｓｉｏｎＭｅｄ社より購入した軽度認知症（ＭＣＩ）患者ＥＤＴＡ血漿１８検体を使用し、健常者脳脊髄液検体として、ＰｒｅｃｉｓｉｏｎＭｅｄ社より購入した健常者ＥＤＴＡ血漿３７検体を用いた以外は、比較例１と同様の方法により、下記表５に記載の抗テトラスパニン抗体－抗テトラスパニン抗体のサンドイッチＥＬＩＳＡ法によりエクソソームの測定を行い、軽度認知症患者と健常者の有意差検定を行い、ＡＵＣ及びｐ値を算出した。
得られた結果を下記表５に示す。
アルツハイマー型認知症（ＡＤ）患者脳脊髄液検体の代わりに、ＰｒｅｃｉｓｉｏｎＭｅｄ社より購入した軽度認知症（ＭＣＩ）患者ＥＤＴＡ血漿１８検体を使用し、健常者脳脊髄液検体として、ＰｒｅｃｉｓｉｏｎＭｅｄ社より購入した健常者ＥＤＴＡ血漿３７検体を用いた以外は、比較例１と同様の方法により、下記表５に記載の抗テトラスパニン抗体－抗テトラスパニン抗体のサンドイッチＥＬＩＳＡ法によりエクソソームの測定を行い、軽度認知症患者と健常者の有意差検定を行い、ＡＵＣ及びｐ値を算出した。
得られた結果を下記表５に示す。
実施例１３．ＣＤ９を有するエクソソームの量に対するＰＳ及びＣＤ９を有するエクソソームの量の割合を指標とする軽度認知障害検体の評価
比較例１１（Ｔｉｍタンパク質－抗ＣＤ９抗体のサンドイッチＥＬＩＳＡ法）で得られた「検体測定値」（値（Ａ））を、比較例１３（抗ＣＤ９抗体－抗ＣＤ９抗体のサンドイッチＥＬＩＳＡ法）で得られた「検体測定値」（値（Ｂ））で除することにより、（Ａ）／（Ｂ）（補正後検体測定値）を得た。
得られた補正後検体測定値に基づいて、実施例１（４）と同様の方法により、軽度認知症患者と健常者の有意差検定を行い、ＡＵＣ及びｐ値を算出した。
得られた結果を下記表５に示す。また、補正後検体測定値を基に作成した箱ひげグラフを実施例１１及び実施例１４の結果と合わせて図４に示す。図中、縦軸は補正後検体測定値（（Ａ）／（Ｂ））、横軸のＣｏｎｔｒｏｌは健常者の結果、ＭＣＩは軽度認知障害患者の結果、ＡＤはアルツハイマー型認知症患者の結果をそれぞれ示す。
比較例１１（Ｔｉｍタンパク質－抗ＣＤ９抗体のサンドイッチＥＬＩＳＡ法）で得られた「検体測定値」（値（Ａ））を、比較例１３（抗ＣＤ９抗体－抗ＣＤ９抗体のサンドイッチＥＬＩＳＡ法）で得られた「検体測定値」（値（Ｂ））で除することにより、（Ａ）／（Ｂ）（補正後検体測定値）を得た。
得られた補正後検体測定値に基づいて、実施例１（４）と同様の方法により、軽度認知症患者と健常者の有意差検定を行い、ＡＵＣ及びｐ値を算出した。
得られた結果を下記表５に示す。また、補正後検体測定値を基に作成した箱ひげグラフを実施例１１及び実施例１４の結果と合わせて図４に示す。図中、縦軸は補正後検体測定値（（Ａ）／（Ｂ））、横軸のＣｏｎｔｒｏｌは健常者の結果、ＭＣＩは軽度認知障害患者の結果、ＡＤはアルツハイマー型認知症患者の結果をそれぞれ示す。
比較例１５－１６．ＰＳ及びテトラスパニンを有するエクソソームの量を指標とするアルツハイマー型認知症検体及び軽度認知障害検体の評価
アルツハイマー型認知症（ＡＤ）患者脳脊髄液検体の代わりに、ＰｒｅｃｉｓｉｏｎＭｅｄ社より購入したアルツハイマー病（ＡＤ）患者ＥＤＴＡ血漿１８検体を使用し、健常者検体の代わりに、ＰｒｅｃｉｓｉｏｎＭｅｄ社より購入した軽度認知障害（ＭＣＩ）患者ＥＤＴＡ血漿１８検体を用いた以外は、実施例１と同様の方法により、Ｔｉｍタンパク質－抗テトラスパニン抗体のサンドイッチＥＬＩＳＡ法によりエクソソームの測定を行い、アルツハイマー型認知症患者と軽度認知症患者の有意差検定を行い、ＡＵＣ及びｐ値を算出した。
得られた結果を下記表６に示す。
アルツハイマー型認知症（ＡＤ）患者脳脊髄液検体の代わりに、ＰｒｅｃｉｓｉｏｎＭｅｄ社より購入したアルツハイマー病（ＡＤ）患者ＥＤＴＡ血漿１８検体を使用し、健常者検体の代わりに、ＰｒｅｃｉｓｉｏｎＭｅｄ社より購入した軽度認知障害（ＭＣＩ）患者ＥＤＴＡ血漿１８検体を用いた以外は、実施例１と同様の方法により、Ｔｉｍタンパク質－抗テトラスパニン抗体のサンドイッチＥＬＩＳＡ法によりエクソソームの測定を行い、アルツハイマー型認知症患者と軽度認知症患者の有意差検定を行い、ＡＵＣ及びｐ値を算出した。
得られた結果を下記表６に示す。
比較例１７－１８．テトラスパニンを有するエクソソームの量を指標とする軽度認知障害検体の評価
アルツハイマー型認知症（ＡＤ）患者脳脊髄液検体の代わりに、ＰｒｅｃｉｓｉｏｎＭｅｄ社より購入したアルツハイマー病（ＡＤ）患者ＥＤＴＡ血漿１８検体を使用し、健常者検体の代わりに、ＰｒｅｃｉｓｉｏｎＭｅｄ社より購入した軽度認知障害（ＭＣＩ）患者１８検体の脳脊髄液を用いた以外は、比較例１と同様の方法により、下記表６に記載の抗テトラスパニン抗体－抗テトラスパニン抗体のサンドイッチＥＬＩＳＡ法によりエクソソームを測定し、アルツハイマー型認知症患者と軽度認知症患者の有意差検定を行い、ＡＵＣ及びｐ値を算出した。
得られた結果を下記表６に示す。
アルツハイマー型認知症（ＡＤ）患者脳脊髄液検体の代わりに、ＰｒｅｃｉｓｉｏｎＭｅｄ社より購入したアルツハイマー病（ＡＤ）患者ＥＤＴＡ血漿１８検体を使用し、健常者検体の代わりに、ＰｒｅｃｉｓｉｏｎＭｅｄ社より購入した軽度認知障害（ＭＣＩ）患者１８検体の脳脊髄液を用いた以外は、比較例１と同様の方法により、下記表６に記載の抗テトラスパニン抗体－抗テトラスパニン抗体のサンドイッチＥＬＩＳＡ法によりエクソソームを測定し、アルツハイマー型認知症患者と軽度認知症患者の有意差検定を行い、ＡＵＣ及びｐ値を算出した。
得られた結果を下記表６に示す。
実施例１４．ＣＤ９を有するエクソソームの量に対するＰＳ及びＣＤ９を有するエクソソームの量の割合を指標とするアルツハイマー型認知症検体及び軽度認知障害検体の評価
比較例１５（Ｔｉｍタンパク質－抗ＣＤ９抗体のサンドイッチＥＬＩＳＡ法）で得られたアルツハイマー型認知症患者の「検体測定値」（値（Ａ））を比較例１７（抗ＣＤ９抗体－抗ＣＤ９抗体のサンドイッチＥＬＩＳＡ法）で得られたアルツハイマー型認知症患者の「検体測定値」（値（Ｂ））で除することにより、（Ａ）／（Ｂ）（補正後検体測定値）を得た。
得られた補正後検体測定値に基づいて、実施例１（４）と同様の方法により、アルツハイマー型認知症患者と軽度認知症患者の有意差検定を行い、ＡＵＣ及びｐ値を算出した。
得られた結果を下記表６に示す。また、補正後検体測定値を基に作成した箱ひげグラフを実施例１１及び実施例１３の結果と合わせて図４に示す。図中、縦軸は補正後検体測定値（（Ａ）／（Ｂ））、横軸のＣｏｎｔｒｏｌは健常者の結果、ＭＣＩは軽度認知障害患者の結果、ＡＤはアルツハイマー型認知症患者の結果をそれぞれ示す。
比較例１５（Ｔｉｍタンパク質－抗ＣＤ９抗体のサンドイッチＥＬＩＳＡ法）で得られたアルツハイマー型認知症患者の「検体測定値」（値（Ａ））を比較例１７（抗ＣＤ９抗体－抗ＣＤ９抗体のサンドイッチＥＬＩＳＡ法）で得られたアルツハイマー型認知症患者の「検体測定値」（値（Ｂ））で除することにより、（Ａ）／（Ｂ）（補正後検体測定値）を得た。
得られた補正後検体測定値に基づいて、実施例１（４）と同様の方法により、アルツハイマー型認知症患者と軽度認知症患者の有意差検定を行い、ＡＵＣ及びｐ値を算出した。
得られた結果を下記表６に示す。また、補正後検体測定値を基に作成した箱ひげグラフを実施例１１及び実施例１３の結果と合わせて図４に示す。図中、縦軸は補正後検体測定値（（Ａ）／（Ｂ））、横軸のＣｏｎｔｒｏｌは健常者の結果、ＭＣＩは軽度認知障害患者の結果、ＡＤはアルツハイマー型認知症患者の結果をそれぞれ示す。
表４より、アルツハイマー型認知症患者と健常者由来の血漿をそれぞれ試料とし、ＣＤ９、ＣＤ６３、又はＣＤ８１のテトラスパニンを有するエクソソームの量を指標としてアルツハイマー型認知症を評価した場合、ＡＵＣがそれぞれ０．６７１、０．４８５、０．５５４であった。また、アルツハイマー型認知症の検査手法であるＭＭＳＥとＣＤ９を有するエクソソームの量との相関係数Ｒを算出したところ、得られた相関係数Ｒは０．２０６であり、相関関係はほぼみられなかった。
他方、アルツハイマー型認知症患者と健常者由来の血漿を試料とし、ＣＤ９、ＣＤ６３、又はＣＤ８１のテトラスパニン及びＴｉｍタンパク質が結合するホスファチジルセリンを有するエクソソームの量を指標としてアルツハイマー型認知症を評価した場合、ＡＵＣはそれぞれ０．７７５、０．７０４、０．７１１といずれも０．７を超え、アルツハイマー型認知症を検出できることが判った。また、ＭＭＳＥとホスファチジルセリン及びＣＤ９を有するエクソソームの量との相関係数Ｒを算出したところ、得られた相関係数Ｒは、相関関係があると判断される０．２を超えた０．３２６であり、相関関係がみられた。
また、ホスファチジルセリン及びＣＤ９を有するエクソソームの検体測定値（Ａ）を、ＣＤ９を有するエクソソームの検体測定値（Ｂ）で除することにより得られた補正後検体測定値（（Ａ）／（Ｂ））を用いると、ＡＵＣが０．８７１と高い正確度でアルツハイマー型認知症を検出できることが判った。
さらに、表５より、軽度認知障害者と健常者由来の血漿を試料とし、ホスファチジルセリン及びＣＤ９を有するエクソソームの検体測定値（Ａ）を、ＣＤ９を有するエクソソームの検体測定値（Ｂ）で除することにより得られた補正後検体測定値（（Ａ）／（Ｂ））を指標として軽度認知障害を評価した場合、ＡＵＣは０．７６６であり、軽度認知障害を検出できることが判った。また、表６より、アルツハイマー型認知症患者と軽度認知障害者の血漿を試料とし、当該補正後検体測定値を指標としてアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害を評価した場合、ＡＵＣは０．７４５であり、アルツハイマー型認知症と軽度認知障害を区別して検出できることが判った。
また、ＭＭＳＥとホスファチジルセリン及びＣＤ９を有するエクソソームの検体測定値（Ａ）を、ＣＤ９を有するエクソソームの検体測定値（Ｂ）で除することにより得られた補正後検体測定値との相関係数Ｒは、０．６３５であり、相関関係がみられた。
他方、アルツハイマー型認知症患者と健常者由来の血漿を試料とし、ＣＤ９、ＣＤ６３、又はＣＤ８１のテトラスパニン及びＴｉｍタンパク質が結合するホスファチジルセリンを有するエクソソームの量を指標としてアルツハイマー型認知症を評価した場合、ＡＵＣはそれぞれ０．７７５、０．７０４、０．７１１といずれも０．７を超え、アルツハイマー型認知症を検出できることが判った。また、ＭＭＳＥとホスファチジルセリン及びＣＤ９を有するエクソソームの量との相関係数Ｒを算出したところ、得られた相関係数Ｒは、相関関係があると判断される０．２を超えた０．３２６であり、相関関係がみられた。
また、ホスファチジルセリン及びＣＤ９を有するエクソソームの検体測定値（Ａ）を、ＣＤ９を有するエクソソームの検体測定値（Ｂ）で除することにより得られた補正後検体測定値（（Ａ）／（Ｂ））を用いると、ＡＵＣが０．８７１と高い正確度でアルツハイマー型認知症を検出できることが判った。
さらに、表５より、軽度認知障害者と健常者由来の血漿を試料とし、ホスファチジルセリン及びＣＤ９を有するエクソソームの検体測定値（Ａ）を、ＣＤ９を有するエクソソームの検体測定値（Ｂ）で除することにより得られた補正後検体測定値（（Ａ）／（Ｂ））を指標として軽度認知障害を評価した場合、ＡＵＣは０．７６６であり、軽度認知障害を検出できることが判った。また、表６より、アルツハイマー型認知症患者と軽度認知障害者の血漿を試料とし、当該補正後検体測定値を指標としてアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害を評価した場合、ＡＵＣは０．７４５であり、アルツハイマー型認知症と軽度認知障害を区別して検出できることが判った。
また、ＭＭＳＥとホスファチジルセリン及びＣＤ９を有するエクソソームの検体測定値（Ａ）を、ＣＤ９を有するエクソソームの検体測定値（Ｂ）で除することにより得られた補正後検体測定値との相関係数Ｒは、０．６３５であり、相関関係がみられた。
ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有するエクソソームであればいずれもアルツハイマー型認知症又は／及び軽度認知障害を検出することができるが、特にホスファチジルセリン及びＣＤ９を有するエクソソームによれば、試料の種類によらず高い正確度でアルツハイマー型認知症を検出できた。
比較例１９．アミロイドβ（１－４０）の量を指標とするアルツハイマー型認知症検体の評価
（１）キャリブレーターの調製
「Ｈｕｍａｎ βＡｍｙｒｏｉｄ（１－４０）ＥＬＩＳＡ Ｋｉｔ ＷａｋｏＩＩ」（富士フイルム和光純薬（株）製、以下「Ｃキット」とする）に付属のスタンダード溶液（ヒトβアミロイド（１－４０）、１００ｐｍｏｌ／Ｌ）をＣキット付属のスタンダード希釈液で１．０、２．５、５．０、１０．０、２５．０、５０．０、１００．０ ｐｍｏｌ／Ｌとなるようにそれぞれ希釈し、７点の濃度からなるスタンダード希釈系列（以下、「キャリブレーター」とする）を得た。
（２）測定用検体の調製
ＰｒｅｃｉｓｉｏｎＭｅｄ社より購入したアルツハイマー病（ＡＤ）患者ＥＤＴＡ血漿１８検体、軽度認知症（ＭＣＩ）患者ＥＤＴＡ血漿１８検体、健常者ＥＤＴＡ血漿３７検体をＣキット付属のスタンダード希釈液で４．４４倍希釈し、「測定用検体希釈液」とした。
（３）ＥＬＩＳＡ法による測定
（２）で調製した測定用検体希釈液を、Ｃキットを用いて測定した。具体的にはまず、Ｃキットに付属の洗浄液（２０×）を精製水（蒸留水）で２０倍に希釈した溶液を調製し、「洗浄液（１×）」とした。次いで、（１）で調製したキャリブレーター、（２）で調製した測定用検体希釈液及びブランクとしてＣキット付属のスタンダード希釈液を、Ｃキットに付属の抗体（ＢＡＮ５０）固相化マイクロプレートの各ウェルに９５μＬずつｎ＝２で分注した。次いで、プレートにプレートシールを貼り、冷蔵で一晩反応させた。反応後、反応液を捨て、各ウェルを洗浄液（１×）３００～３５０μＬで４回洗浄した。
次いで、Ｃキットに付属のＨＲＰ標識抗体（ＢＡ２７）溶液、各ウェルに１００μＬずつ分注し、プレートシールを貼り、冷蔵で２時間反応させた。反応後、反応液を捨て、各ウェルを洗浄液（１×）３００～３５０μＬで５回洗浄した。
次いで、室温に戻したＣキットに付属のＴＭＢ（３，３’，５，５’－テトラメチルベンジジン）溶液を１００μＬずつ各ウェルに分注し、マイクロプレート振とう器を用いて約１分間撹拌した後、プレートシールを貼り、室温（２０～２５℃）で３０分間静置反応させた。その後、室温に戻したＣキットに付属の停止液を１００μＬずつ各ウェルに添加し、マイクロプレート振とう器を用いて約５秒間撹拌後、速やかに９６ウェルマイクロプレートリーダー（Ｔｅｃａｎ社、ＳＰＡＲＫ）を用いて４５０ｎｍの吸光度と副波長６２０ｎｍの吸光度をそれぞれ測定した。４５０ｎｍ吸光度値から副波長６２０ｎｍ吸光度値を差し引いた値を「吸光度値」とし、測定用検体希釈液の吸光度値からブランクの吸光度値を差し引いた値を「補正後検体吸光度値」として、それぞれ算出した。そして、スタンダード希釈系列（キャリブレーター）の吸光度値からブランクの吸光度値を差し引いた値とキャリブレーターの濃度から標準曲線を作成した。標準曲線を用いて、補正後検体吸光度値をタンパク質濃度に換算し、得られた換算値に検体希釈率を乗じた値を「検体測定値」［ｐｍｏｌ／Ｌ］とした。
（４）ＡＵＣの算出
（３）で得られた検体測定値に基づいて、実施例１と同様の方法により、アルツハイマー型認知症患者と健常者、アルツハイマー型認知症患者と軽度認知症患者、軽度認知症患者と健常者の有意差検定を行い、ＡＵＣおよびｐ値を算出した。
得られた結果を下記表７に示す。
（１）キャリブレーターの調製
「Ｈｕｍａｎ βＡｍｙｒｏｉｄ（１－４０）ＥＬＩＳＡ Ｋｉｔ ＷａｋｏＩＩ」（富士フイルム和光純薬（株）製、以下「Ｃキット」とする）に付属のスタンダード溶液（ヒトβアミロイド（１－４０）、１００ｐｍｏｌ／Ｌ）をＣキット付属のスタンダード希釈液で１．０、２．５、５．０、１０．０、２５．０、５０．０、１００．０ ｐｍｏｌ／Ｌとなるようにそれぞれ希釈し、７点の濃度からなるスタンダード希釈系列（以下、「キャリブレーター」とする）を得た。
（２）測定用検体の調製
ＰｒｅｃｉｓｉｏｎＭｅｄ社より購入したアルツハイマー病（ＡＤ）患者ＥＤＴＡ血漿１８検体、軽度認知症（ＭＣＩ）患者ＥＤＴＡ血漿１８検体、健常者ＥＤＴＡ血漿３７検体をＣキット付属のスタンダード希釈液で４．４４倍希釈し、「測定用検体希釈液」とした。
（３）ＥＬＩＳＡ法による測定
（２）で調製した測定用検体希釈液を、Ｃキットを用いて測定した。具体的にはまず、Ｃキットに付属の洗浄液（２０×）を精製水（蒸留水）で２０倍に希釈した溶液を調製し、「洗浄液（１×）」とした。次いで、（１）で調製したキャリブレーター、（２）で調製した測定用検体希釈液及びブランクとしてＣキット付属のスタンダード希釈液を、Ｃキットに付属の抗体（ＢＡＮ５０）固相化マイクロプレートの各ウェルに９５μＬずつｎ＝２で分注した。次いで、プレートにプレートシールを貼り、冷蔵で一晩反応させた。反応後、反応液を捨て、各ウェルを洗浄液（１×）３００～３５０μＬで４回洗浄した。
次いで、Ｃキットに付属のＨＲＰ標識抗体（ＢＡ２７）溶液、各ウェルに１００μＬずつ分注し、プレートシールを貼り、冷蔵で２時間反応させた。反応後、反応液を捨て、各ウェルを洗浄液（１×）３００～３５０μＬで５回洗浄した。
次いで、室温に戻したＣキットに付属のＴＭＢ（３，３’，５，５’－テトラメチルベンジジン）溶液を１００μＬずつ各ウェルに分注し、マイクロプレート振とう器を用いて約１分間撹拌した後、プレートシールを貼り、室温（２０～２５℃）で３０分間静置反応させた。その後、室温に戻したＣキットに付属の停止液を１００μＬずつ各ウェルに添加し、マイクロプレート振とう器を用いて約５秒間撹拌後、速やかに９６ウェルマイクロプレートリーダー（Ｔｅｃａｎ社、ＳＰＡＲＫ）を用いて４５０ｎｍの吸光度と副波長６２０ｎｍの吸光度をそれぞれ測定した。４５０ｎｍ吸光度値から副波長６２０ｎｍ吸光度値を差し引いた値を「吸光度値」とし、測定用検体希釈液の吸光度値からブランクの吸光度値を差し引いた値を「補正後検体吸光度値」として、それぞれ算出した。そして、スタンダード希釈系列（キャリブレーター）の吸光度値からブランクの吸光度値を差し引いた値とキャリブレーターの濃度から標準曲線を作成した。標準曲線を用いて、補正後検体吸光度値をタンパク質濃度に換算し、得られた換算値に検体希釈率を乗じた値を「検体測定値」［ｐｍｏｌ／Ｌ］とした。
（４）ＡＵＣの算出
（３）で得られた検体測定値に基づいて、実施例１と同様の方法により、アルツハイマー型認知症患者と健常者、アルツハイマー型認知症患者と軽度認知症患者、軽度認知症患者と健常者の有意差検定を行い、ＡＵＣおよびｐ値を算出した。
得られた結果を下記表７に示す。
比較例２０．アミロイドβ（１－４２）の量を指標とするアルツハイマー型認知症検体の評価
（１）キャリブレーターの調製
「Ｈｕｍａｎ βＡｍｙｒｏｉｄ（１－４２）ＥＬＩＳＡ Ｋｉｔ Ｗａｋｏ，Ｈｉｇｈ－Ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ」（富士フイルム和光純薬（株）製、以下「Ｄキット」とする）に付属のスタンダード溶液（ヒトβアミロイド（１－４２）、２０ｐｍｏｌ／Ｌ）をＤキット付属のスタンダード希釈液で０．１、０．５、１．０、２．０、５．０、１０．０、２０．０ ｐｍｏｌ／Ｌとなるようにそれぞれ希釈し、７点の濃度からなるスタンダード希釈系列（以下、「キャリブレーター」とする）を得た。
（２）測定用検体の調製
ＰｒｅｃｉｓｉｏｎＭｅｄ社より購入したアルツハイマー病（ＡＤ）患者ＥＤＴＡ血漿１８検体、軽度認知症（ＭＣＩ）患者ＥＤＴＡ血漿１８検体、健常者ＥＤＴＡ血漿３７検体をＤキット付属のスタンダード希釈液で４．４４倍希釈し、「測定用検体希釈液」とした。
（３）ＥＬＩＳＡ法による測定
（２）で調製した測定用検体希釈液を、Ｄキットを用いて測定した。具体的にはまず、Ｄキットに付属の洗浄液（２０×）を精製水（蒸留水）で２０倍に希釈した溶液を調製し、「洗浄液（１×）」とした。次いで、（１）で調製したキャリブレーター、（２）で調製した測定用検体希釈液及びブランクとしてＤキット付属のスタンダード希釈液を、Ｄキットに付属の抗体（ＢＡＮ５０）固相化マイクロプレートの各ウェルに９５μＬずつｎ＝２で分注した。次いで、プレートにプレートシールを貼り、冷蔵で一晩反応させた。反応後、反応液を捨て、各ウェルを洗浄液（１×）３００～３５０μＬで４回洗浄した。
次いで、Ｄキットに付属のＨＲＰ標識抗体（ＢＣ０５）溶液、各ウェルに１００μＬずつ分注し、プレートシールを貼り、冷蔵で２時間反応させた。反応後、反応液を捨て、各ウェルを洗浄液（１×）３００～３５０μＬで５回洗浄した。
次いで、室温に戻したＤキットに付属のＴＭＢ（３，３’，５，５’－テトラメチルベンジジン）溶液を１００μＬずつ各ウェルに分注し、マイクロプレート振とう器を用いて約１分間撹拌した後、プレートシールを貼り、室温（２０～２５℃）で３０分間静置反応させた。その後、室温に戻したＤキットに付属の停止液を１００μＬずつ各ウェルに添加し、マイクロプレート振とう器を用いて約５秒間撹拌後、速やかに９６ウェルマイクロプレートリーダー（Ｔｅｃａｎ社、ＳＰＡＲＫ）を用いて４５０ｎｍの吸光度と副波長６２０ｎｍの吸光度をそれぞれ測定した。４５０ｎｍ吸光度値から副波長６２０ｎｍ吸光度値を差し引いた値を「吸光度値」とし、測定用検体希釈液の吸光度値からブランクの吸光度値を差し引いた値を「補正後検体吸光度値」として、それぞれ算出した。そして、スタンダード希釈系列（キャリブレーター）の吸光度値からブランクの吸光度値を差し引いた値とキャリブレーターの濃度から標準曲線を作成した。標準曲線を用いて、補正後検体吸光度値をタンパク質濃度に換算し、得られた換算値に検体希釈率を乗じた値を「検体測定値」［ｐｍｏｌ／Ｌ］とした。
（４）ＡＵＣの算出
（３）で得られた検体測定値に基づいて、実施例１と同様の方法により、アルツハイマー型認知症患者と健常者、アルツハイマー型認知症患者と軽度認知症患者、軽度認知症患者と健常者の有意差検定を行い、ＡＵＣおよびｐ値を算出した。
得られた結果を下記表７に示す。
（１）キャリブレーターの調製
「Ｈｕｍａｎ βＡｍｙｒｏｉｄ（１－４２）ＥＬＩＳＡ Ｋｉｔ Ｗａｋｏ，Ｈｉｇｈ－Ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ」（富士フイルム和光純薬（株）製、以下「Ｄキット」とする）に付属のスタンダード溶液（ヒトβアミロイド（１－４２）、２０ｐｍｏｌ／Ｌ）をＤキット付属のスタンダード希釈液で０．１、０．５、１．０、２．０、５．０、１０．０、２０．０ ｐｍｏｌ／Ｌとなるようにそれぞれ希釈し、７点の濃度からなるスタンダード希釈系列（以下、「キャリブレーター」とする）を得た。
（２）測定用検体の調製
ＰｒｅｃｉｓｉｏｎＭｅｄ社より購入したアルツハイマー病（ＡＤ）患者ＥＤＴＡ血漿１８検体、軽度認知症（ＭＣＩ）患者ＥＤＴＡ血漿１８検体、健常者ＥＤＴＡ血漿３７検体をＤキット付属のスタンダード希釈液で４．４４倍希釈し、「測定用検体希釈液」とした。
（３）ＥＬＩＳＡ法による測定
（２）で調製した測定用検体希釈液を、Ｄキットを用いて測定した。具体的にはまず、Ｄキットに付属の洗浄液（２０×）を精製水（蒸留水）で２０倍に希釈した溶液を調製し、「洗浄液（１×）」とした。次いで、（１）で調製したキャリブレーター、（２）で調製した測定用検体希釈液及びブランクとしてＤキット付属のスタンダード希釈液を、Ｄキットに付属の抗体（ＢＡＮ５０）固相化マイクロプレートの各ウェルに９５μＬずつｎ＝２で分注した。次いで、プレートにプレートシールを貼り、冷蔵で一晩反応させた。反応後、反応液を捨て、各ウェルを洗浄液（１×）３００～３５０μＬで４回洗浄した。
次いで、Ｄキットに付属のＨＲＰ標識抗体（ＢＣ０５）溶液、各ウェルに１００μＬずつ分注し、プレートシールを貼り、冷蔵で２時間反応させた。反応後、反応液を捨て、各ウェルを洗浄液（１×）３００～３５０μＬで５回洗浄した。
次いで、室温に戻したＤキットに付属のＴＭＢ（３，３’，５，５’－テトラメチルベンジジン）溶液を１００μＬずつ各ウェルに分注し、マイクロプレート振とう器を用いて約１分間撹拌した後、プレートシールを貼り、室温（２０～２５℃）で３０分間静置反応させた。その後、室温に戻したＤキットに付属の停止液を１００μＬずつ各ウェルに添加し、マイクロプレート振とう器を用いて約５秒間撹拌後、速やかに９６ウェルマイクロプレートリーダー（Ｔｅｃａｎ社、ＳＰＡＲＫ）を用いて４５０ｎｍの吸光度と副波長６２０ｎｍの吸光度をそれぞれ測定した。４５０ｎｍ吸光度値から副波長６２０ｎｍ吸光度値を差し引いた値を「吸光度値」とし、測定用検体希釈液の吸光度値からブランクの吸光度値を差し引いた値を「補正後検体吸光度値」として、それぞれ算出した。そして、スタンダード希釈系列（キャリブレーター）の吸光度値からブランクの吸光度値を差し引いた値とキャリブレーターの濃度から標準曲線を作成した。標準曲線を用いて、補正後検体吸光度値をタンパク質濃度に換算し、得られた換算値に検体希釈率を乗じた値を「検体測定値」［ｐｍｏｌ／Ｌ］とした。
（４）ＡＵＣの算出
（３）で得られた検体測定値に基づいて、実施例１と同様の方法により、アルツハイマー型認知症患者と健常者、アルツハイマー型認知症患者と軽度認知症患者、軽度認知症患者と健常者の有意差検定を行い、ＡＵＣおよびｐ値を算出した。
得られた結果を下記表７に示す。
比較例２１．アミロイドβ（１－４０）の量に対するアミロイドβ（１－４２）の量の割合を指標とするアルツハイマー型認知症検体の評価
比較例１９で得られたアミロイドβ（１－４２）の「検体測定値」（値（Ｄ））を、比較例２０で得られたアミロイドβ（１－４０）「検体測定値」（値（Ｃ））で除することにより、（Ｄ）／（Ｃ）（以下、「補正後検体測定値」とする）を得た。
得られた補正後検体測定値に基づいて、実施例１と同様の方法により、アルツハイマー型認知症患者と健常者、アルツハイマー型認知症患者と軽度認知症患者、軽度認知症患者と健常者の有意差検定を行い、ＡＵＣおよびｐ値を算出した。
得られた結果を下記表７に示す。
比較例１９で得られたアミロイドβ（１－４２）の「検体測定値」（値（Ｄ））を、比較例２０で得られたアミロイドβ（１－４０）「検体測定値」（値（Ｃ））で除することにより、（Ｄ）／（Ｃ）（以下、「補正後検体測定値」とする）を得た。
得られた補正後検体測定値に基づいて、実施例１と同様の方法により、アルツハイマー型認知症患者と健常者、アルツハイマー型認知症患者と軽度認知症患者、軽度認知症患者と健常者の有意差検定を行い、ＡＵＣおよびｐ値を算出した。
得られた結果を下記表７に示す。
実施例１５．ＣＤ９を有するエクソソームの量に対するＰＳ及びＣＤ９を有するエクソソームの量の割合に、アミロイドβ（１－４０）の量に対するアミロイドβ（１－４２）の量の割合を乗じた値を指標とするアルツハイマー型認知症検体の評価
実施例１１で得られたＣＤ９を有するエクソソームの量に対するＰＳ及びＣＤ９を有するエクソソームの量の割合（補正後検体測定値（（Ａ）／（Ｂ）））に、比較例２１で得られたアミロイドβ（１－４０）の量に対するアミロイドβ（１－４２）の量の割合（補正後検体測定値（（Ｄ）／（Ｃ）））を乗じることにより算出される積を求めた。
求めた積の値に基づいて、実施例１と同様の方法により、アルツハイマー型認知症患者と健常者、アルツハイマー型認知症患者と軽度認知症患者、軽度認知症患者と健常者の有意差検定を行い、ＡＵＣおよびｐ値を算出した。
得られた結果を下記表７に示す。また、補正後検体測定値を基に作成した箱ひげグラフを図５に示す。図中、縦軸は実施例１１の補正後検体測定値（（Ａ）／（Ｂ））×比較例２１の補正後検体測定値（（Ｄ）／（Ｃ））、横軸のＣｏｎｔｒｏｌは健常者の結果、ＭＣＩは軽度認知障害患者の結果、ＡＤはアルツハイマー型認知症患者の結果をそれぞれ示す。
実施例１１で得られたＣＤ９を有するエクソソームの量に対するＰＳ及びＣＤ９を有するエクソソームの量の割合（補正後検体測定値（（Ａ）／（Ｂ）））に、比較例２１で得られたアミロイドβ（１－４０）の量に対するアミロイドβ（１－４２）の量の割合（補正後検体測定値（（Ｄ）／（Ｃ）））を乗じることにより算出される積を求めた。
求めた積の値に基づいて、実施例１と同様の方法により、アルツハイマー型認知症患者と健常者、アルツハイマー型認知症患者と軽度認知症患者、軽度認知症患者と健常者の有意差検定を行い、ＡＵＣおよびｐ値を算出した。
得られた結果を下記表７に示す。また、補正後検体測定値を基に作成した箱ひげグラフを図５に示す。図中、縦軸は実施例１１の補正後検体測定値（（Ａ）／（Ｂ））×比較例２１の補正後検体測定値（（Ｄ）／（Ｃ））、横軸のＣｏｎｔｒｏｌは健常者の結果、ＭＣＩは軽度認知障害患者の結果、ＡＤはアルツハイマー型認知症患者の結果をそれぞれ示す。
表７より、アルツハイマー型認知症患者、軽度認知症患者と健常者由来の血漿をそれぞれ試料とし、比較例２１の補正後検体測定値（Ｄ）／（Ｃ）を指標として、アルツハイマー型認知症、軽度認知症を評価した場合、ＡＵＣがそれぞれ健常者‐アルツハイマー型認知症患者間で０．８７８、健常者‐軽度認知症患者間で０．８２４、アルツハイマー型認知症患者‐軽度認知症患者間で０．６８６であった。
また、アルツハイマー型認知症の検査手法であるＭＭＳＥと補正後検体測定値（Ａ）／（Ｂ）との相関係数Ｒを算出したところ、得られた相関係数Ｒは０．５７８１であった。
また、アルツハイマー型認知症の検査手法であるＭＭＳＥと補正後検体測定値（Ａ）／（Ｂ）との相関係数Ｒを算出したところ、得られた相関係数Ｒは０．５７８１であった。
表７より、実施例１１の補正後検体測定値（（Ａ）／（Ｂ））に比較例２１の補正後検体測定値（（Ｄ）／（Ｃ））を乗じた値を指標として、アルツハイマー型認知症、軽度認知症を評価した場合、ＡＵＣがそれぞれ健常者‐アルツハイマー型認知症患者間で０．９２３、健常者‐軽度認知症患者間で０．８３３、アルツハイマー型認知症患者‐軽度認知症患者間で０．８０４であった。
また、アルツハイマー型認知症の検査手法であるＭＭＳＥと補正後検体測定値（Ａ）／（Ｂ）との相関係数Ｒを算出したところ、得られた相関係数Ｒは、０．７０２３であった。
また、アルツハイマー型認知症の検査手法であるＭＭＳＥと補正後検体測定値（Ａ）／（Ｂ）との相関係数Ｒを算出したところ、得られた相関係数Ｒは、０．７０２３であった。
ＣＤ９を有するエクソソームの量に対するＰＳ及びＣＤ９を有するエクソソームの量の割合（実施例１１の補正後検体測定値（（Ａ）／（Ｂ）））に、アミロイドβ（１－４０）の量に対するアミロイドβ（１－４２）の量の割合（比較例２１の補正後検体測定値（（Ｄ）／（Ｃ）））を乗じた値を指標とすることにより、より高い正確度でアルツハイマー型認知症又は／及び軽度認知障害を検出することができた。また、当該値を用いることにより、特に健常者とアルツハイマー型認知症患者、アルツハイマー型認知症患者と軽度認知症患者をより高い正確度で区別して検出できることが判った。
Claims (14)
- 被験者に由来する生体試料中の、
ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量を測定すること、
前記ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量を、被験者がアルツハイマー型認知症であると判定するための指標として提供することを含み、
前記ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の測定は、生体試料中のホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞と、抗ＣＤ９抗体、抗ＣＤ６３抗体又は抗ＣＤ８１抗体と、Ｔｉｍ４又はＴｉｍ１とを接触させ、生体試料中のホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞と、抗ＣＤ９抗体、抗ＣＤ６３抗体又は抗ＣＤ８１抗体と、Ｔｉｍ４又はＴｉｍ１とを含む複合体を形成させる複合体形成工程Ａ、及び当該複合体の量を測定する複合体量測定工程Ａを含み、
前記生体試料が、血液試料又は脳脊髄液である、
アルツハイマー型認知症の診断のための指標を提供する方法。 - 被験者に由来する生体試料中の、
ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量、並びにテトラスパニンを有する細胞外小胞の量を測定すること、
前記テトラスパニンを有する細胞外小胞の量に対する前記ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の割合を、被験者がアルツハイマー型認知症であると判定するための指標として提供することを含み、
前記ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の測定は、生体試料中のホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞と、抗ＣＤ９抗体又は抗ＣＤ６３抗体と、Ｔｉｍ４又はＴｉｍ１とを接触させ、生体試料中のホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞と、抗ＣＤ９抗体又は抗ＣＤ６３抗体と、Ｔｉｍ４又はＴｉｍ１とを含む複合体を形成させる複合体形成工程Ａ、及び当該複合体の量を測定する複合体量測定工程Ａを含み、
前記テトラスパニンを有する細胞外小胞の量の測定は、生体試料中のテトラスパニンを有する細胞外小胞と、抗ＣＤ９抗体又は抗ＣＤ６３抗体とを接触させ、生体試料中のテトラスパニンを有する細胞外小胞と、抗ＣＤ９抗体又は抗ＣＤ６３抗体を含む複合体を形成させる複合体形成工程Ｂ、及び当該複合体の量を測定する複合体量測定工程Ｂを含み、
複合体形成工程Ａ、複合体量測定工程Ａ、複合体形成工程Ｂ、及び複合体量測定工程Ｂが後述の（１）～（２）の組み合わせのいずれかにより行われ、
前記生体試料が、血液試料又は脳脊髄液である、
アルツハイマー型認知症の診断のための指標を提供する方法。
（１）前記ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の測定は、生体試料中のホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞と、抗ＣＤ９抗体と、Ｔｉｍ４又はＴｉｍ１とを接触させ、生体試料中のホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞と、抗ＣＤ９抗体と、Ｔｉｍ４又はＴｉｍ１とを含む複合体を形成させる複合体形成工程Ａ、及び当該複合体の量を測定する複合体量測定工程Ａを含み、
前記テトラスパニンを有する細胞外小胞の量の測定は、生体試料中のテトラスパニンを有する細胞外小胞と、抗ＣＤ９抗体とを接触させ、生体試料中のテトラスパニンを有する細胞外小胞と、抗ＣＤ９抗体を含む複合体を形成させる複合体形成工程Ｂ、及び当該複合体の量を測定する複合体量測定工程Ｂを含む
（２）前記ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の測定は、生体試料中のホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞と、抗ＣＤ６３抗体と、Ｔｉｍ４又はＴｉｍ１とを接触させ、生体試料中のホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞と、抗ＣＤ６３抗体と、Ｔｉｍ４又はＴｉｍ１とを含む複合体を形成させる複合体形成工程Ａ、及び当該複合体の量を測定する複合体量測定工程Ａを含み、
前記テトラスパニンを有する細胞外小胞の量の測定は、生体試料中のテトラスパニンを有する細胞外小胞と、抗ＣＤ６３抗体とを接触させ、生体試料中のテトラスパニンを有する細胞外小胞と、抗ＣＤ６３抗体を含む複合体を形成させる複合体形成工程Ｂ、及び当該複合体の量を測定する複合体量測定工程Ｂを含む - 前記複合体形成工程Ａ及び前記複合体形成工程Ｂが後述の（３）～（４）の組み合わせのいずれかにより行われる、請求項２に記載のアルツハイマー型認知症の診断のための指標を提供する方法。
（３）複合体形成工程Ａが生体試料とＴｉｍ４又はＴｉｍ１とを接触させて生体試料中の細胞外小胞とＴｉｍ４又はＴｉｍ１とから構成される第１の複合体を形成させる第１手順と、当該第１の複合体と抗ＣＤ９抗体とを接触させて、当該第１の複合体と抗ＣＤ９抗体とから構成される第２の複合体を形成させる第２手順を含み、複合体形成工程Ｂが、生体試料と抗ＣＤ９抗体とを接触させて生体試料中の細胞外小胞と抗ＣＤ９抗体とから構成される第１の複合体を形成させる第１手順と、当該第１の複合体と別の抗ＣＤ９抗体とを接触させて、当該第１の複合体と別の抗ＣＤ９抗体とから構成される第２の複合体を形成させる第２手順を含む
（４）複合体形成工程Ａが生体試料とＴｉｍ４又はＴｉｍ１とを接触させて生体試料中の細胞外小胞とＴｉｍ４又はＴｉｍ１とから構成される第１の複合体を形成させる第１手順と、当該第１の複合体と抗ＣＤ６３抗体とを接触させて、当該第１の複合体と抗ＣＤ６３抗体とから構成される第２の複合体を形成させる第２手順を含み、複合体形成工程Ｂが、生体試料と抗ＣＤ６３抗体とを接触させて生体試料中の細胞外小胞と抗ＣＤ６３抗体とから構成される第１の複合体を形成させる第１手順と、当該第１の複合体と別の抗ＣＤ６３抗体とを接触させて、当該第１の複合体と別の抗ＣＤ６３抗体とから構成される第２の複合体を形成させる第２手順を含む - 前記ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量が基準値以下であることは被験者がアルツハイマー型認知症であることを示す、請求項１に記載のアルツハイマー型認知症の診断のための指標を提供する方法。
- 前記テトラスパニンを有する細胞外小胞の量に対する前記ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の割合が基準値以下であることはアルツハイマー型認知症であることを示す、請求項２に記載のアルツハイマー型認知症の診断のための指標を提供する方法
- 被験者に由来する生体試料中の、
ホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量、並びにＣＤ９を有する細胞外小胞の量を測定すること、
前記ＣＤ９を有する細胞外小胞の量に対する前記ホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の割合を、被験者がアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害であると判定するための指標として提供することを含み、
前記ホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の測定は、生体試料中のホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞と、抗ＣＤ９抗体と、Ｔｉｍ４又はＴｉｍ１とを接触させ、生体試料中のホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞と、抗ＣＤ９抗体と、Ｔｉｍ４又はＴｉｍ１とを含む複合体を形成させる複合体形成工程Ａ、及び当該複合体の量を測定する複合体量測定工程Ａを含み、
前記ＣＤ９を有する細胞外小胞の量の測定は、生体試料中のＣＤ９を有する細胞外小胞と、抗ＣＤ９抗体とを接触させ、生体試料中のＣＤ９を有する細胞外小胞と、抗ＣＤ９抗体を含む複合体を形成させる複合体形成工程Ｂ、及び当該複合体の量を測定する複合体量測定工程Ｂを含み、
前記生体試料が、血液試料又は脳脊髄液である、
アルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の診断のための指標を提供する方法。 - 前記ＣＤ９を有する細胞外小胞の量に対する前記ホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の割合が基準値以下であることは被験者がアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害であることを示す、請求項６に記載のアルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の診断のための指標を提供する方法。
- 抗ＣＤ９抗体、抗ＣＤ６３抗体又は抗ＣＤ８１抗体、及び、Ｔｉｍ４又はＴｉｍ１を含む、アルツハイマー型認知症の診断補助用試薬キット。
- 抗ＣＤ９抗体、及び、Ｔｉｍ４又はＴｉｍ１を含む、アルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の診断補助用試薬キット。
- ホスファチジルセリンと、ＣＤ９、ＣＤ６３、又はＣＤ８１とを有する細胞外小胞である、アルツハイマー型認知症の診断補助用バイオマーカー。
- ホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞、並びにＣＤ９を有する細胞外小胞の組み合わせである、アルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の診断補助用バイオマーカーセット。
- 被験者に由来する生体試料中のホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量を測定する測定部、及び
前記ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量を指標として提供する提供部を有し、
前記ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の測定は、生体試料中のホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞と、抗ＣＤ９抗体、抗ＣＤ６３抗体又は抗ＣＤ８１抗体と、Ｔｉｍ４又はＴｉｍ１とを接触させ、生体試料中のホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞と、抗ＣＤ９抗体、抗ＣＤ６３抗体又は抗ＣＤ８１抗体と、Ｔｉｍ４又はＴｉｍ１とを含む複合体を形成させる複合体形成工程Ａ、及び当該複合体の量を測定する複合体量測定工程Ａにより行われ、
前記生体試料が、血液試料又は脳脊髄液である、
アルツハイマー型認知症の指標を提供するための装置。 - 被験者に由来する生体試料中の、ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量、並びにテトラスパニンを有する細胞外小胞の量を測定する測定部、
前記テトラスパニンを有する細胞外小胞の量に対する前記ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の割合を算出する演算部、及び
前記テトラスパニンを有する細胞外小胞の量に対するホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の割合を指標として提供する提供部を有し、
前記ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の測定は、生体試料中のホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞と、抗ＣＤ９抗体又は抗ＣＤ６３抗体と、Ｔｉｍ４又はＴｉｍ１とを接触させ、生体試料中のホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞と、抗ＣＤ９抗体又は抗ＣＤ６３抗体と、Ｔｉｍ４又はＴｉｍ１とを含む複合体を形成させる複合体形成工程Ａ、及び当該複合体の量を測定する複合体量測定工程Ａにより行われ
前記テトラスパニンを有する細胞外小胞の量の測定は、生体試料中のテトラスパニンを有する細胞外小胞と、抗ＣＤ９抗体又は抗ＣＤ６３抗体とを接触させ、生体試料中のテトラスパニンを有する細胞外小胞と、抗ＣＤ９抗体又は抗ＣＤ６３抗体を含む複合体を形成させる複合体形成工程Ｂ、及び当該複合体の量を測定する複合体量測定工程Ｂにより行われ、
複合体形成工程Ａ、複合体量測定工程Ａ、複合体形成工程Ｂ、及び複合体量測定工程Ｂが後述の（１）～（２）の組み合わせのいずれかにより行われ、
前記生体試料が、血液試料又は脳脊髄液である、
アルツハイマー型認知症の指標を提供するための装置。
（１）前記ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の測定は、生体試料中のホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞と、抗ＣＤ９抗体と、Ｔｉｍ４又はＴｉｍ１とを接触させ、生体試料中のホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞と、抗ＣＤ９抗体と、Ｔｉｍ４又はＴｉｍ１とを含む複合体を形成させる複合体形成工程Ａ、及び当該複合体の量を測定する複合体量測定工程Ａを含み、
前記テトラスパニンを有する細胞外小胞の量の測定は、生体試料中のテトラスパニンを有する細胞外小胞と、抗ＣＤ９抗体とを接触させ、生体試料中のテトラスパニンを有する細胞外小胞と、抗ＣＤ９抗体を含む複合体を形成させる複合体形成工程Ｂ、及び当該複合体の量を測定する複合体量測定工程Ｂを含む
（２）前記ホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞の量の測定は、生体試料中のホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞と、抗ＣＤ６３抗体と、Ｔｉｍ４又はＴｉｍ１とを接触させ、生体試料中のホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞と、抗ＣＤ６３抗体と、Ｔｉｍ４又はＴｉｍ１とを含む複合体を形成させる複合体形成工程Ａ、及び当該複合体の量を測定する複合体量測定工程Ａを含み、
前記テトラスパニンを有する細胞外小胞の量の測定は、生体試料中のテトラスパニンを有する細胞外小胞と、抗ＣＤ６３抗体とを接触させ、生体試料中のテトラスパニンを有する細胞外小胞と、抗ＣＤ６３抗体を含む複合体を形成させる複合体形成工程Ｂ、及び当該複合体の量を測定する複合体量測定工程Ｂを含む - 被験者に由来する生体試料中の、ホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量、並びにＣＤ９を有する細胞外小胞の量の測定を測定する測定部、
前記ＣＤ９を有する細胞外小胞の量に対する前記ホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の割合を算出する演算部、及び
前記生体試料中のＣＤ９を有する細胞外小胞の量に対する生体試料中のホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の割合を指標として提供する提供部を有し、
前記ホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞の量の測定は、生体試料中のホスファチジルセリン及びＣＤ９を有する細胞外小胞と、抗ＣＤ９抗体と、Ｔｉｍ４又はＴｉｍ１とを接触させ、生体試料中のホスファチジルセリン及びテトラスパニンを有する細胞外小胞と、抗ＣＤ９抗体と、Ｔｉｍ４又はＴｉｍ１とを含む複合体を形成させる複合体形成工程Ａ、及び当該複合体の量を測定する複合体量測定工程Ａにより行われ、
前記ＣＤ９を有する細胞外小胞の量の測定は、生体試料中のＣＤ９を有する細胞外小胞と、抗ＣＤ９抗体とを接触させ、生体試料中のＣＤ９を有する細胞外小胞と、抗ＣＤ９抗体を含む複合体を形成させる複合体形成工程Ｂ、及び当該複合体の量を測定する複合体量測定工程Ｂにより行われ、
前記生体試料が、血液試料又は脳脊髄液である、
アルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の指標を提供するための装置。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2019217482 | 2019-11-29 | ||
| JP2019217482 | 2019-11-29 | ||
| PCT/JP2020/044399 WO2021107154A1 (ja) | 2019-11-29 | 2020-11-27 | アルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の診断を補助する方法、バイオマーカー、試薬キット及び装置 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPWO2021107154A1 JPWO2021107154A1 (ja) | 2021-06-03 |
| JP7448831B2 true JP7448831B2 (ja) | 2024-03-13 |
Family
ID=76129638
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2021561585A Active JP7448831B2 (ja) | 2019-11-29 | 2020-11-27 | アルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の診断を補助する方法、バイオマーカー、試薬キット及び装置 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20220291242A1 (ja) |
| EP (1) | EP4067906A4 (ja) |
| JP (1) | JP7448831B2 (ja) |
| CN (1) | CN115176163A (ja) |
| WO (1) | WO2021107154A1 (ja) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP4067905A4 (en) * | 2019-11-29 | 2023-02-08 | FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation | METHODS TO AID THE DIAGNOSIS OF PARKINSON'S DISEASE, BIOMARKERS, REAGENT KIT AND DEVICE |
| JPWO2022250009A1 (ja) * | 2021-05-26 | 2022-12-01 | ||
| JPWO2023058627A1 (ja) * | 2021-10-04 | 2023-04-13 | ||
| CN116793909A (zh) * | 2022-06-02 | 2023-09-22 | 浙江大学医学院附属第一医院 | 诊断及鉴别诊断非阿尔兹海默病认知障碍的系统、组合物和试剂盒 |
| WO2024122459A1 (ja) * | 2022-12-05 | 2024-06-13 | アルメッド株式会社 | 認知機能障害ステージを判定する方法 |
Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2013054534A1 (ja) | 2011-10-14 | 2013-04-18 | 国立大学法人北海道大学 | アミロイドβ関連の疾患用医薬及びそのスクリーニング |
| WO2016088689A1 (ja) | 2014-12-05 | 2016-06-09 | 和光純薬工業株式会社 | Ｔｉｍタンパク質結合担体、当該担体を用いた細胞外膜小胞及びウイルスの取得方法、除去方法、検出方法並びに当該担体を含むキット |
| JP2016161480A (ja) | 2015-03-04 | 2016-09-05 | 国立大学法人 千葉大学 | 微量の微小胞の定量、診断及びスクリーニング方法 |
| JP2016535283A (ja) | 2013-10-24 | 2016-11-10 | ナノソミックス・インコーポレイテッドＮａｎｏＳｏｍｉＸ， Ｉｎｃ． | アルツハイマー病および他の神経変性障害のためのバイオマーカーおよび診断方法 |
| WO2019058303A1 (en) | 2017-09-21 | 2019-03-28 | Braindtech S.P.A. | DIAGNOSTIC AND PROGNOSTIC METHODS FOR NEURODEGENERATIVE AND NEUROINFLAMMATORY DISEASES |
| JP2021012189A (ja) | 2019-07-04 | 2021-02-04 | 国立研究開発法人産業技術総合研究所 | がん及び神経変性疾患の検出方法 |
| WO2022250009A1 (ja) | 2021-05-26 | 2022-12-01 | 富士フイルム株式会社 | レビー小体病とアルツハイマー病の鑑別を補助する方法、バイオマーカー、及び試薬キット |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102301002A (zh) * | 2008-11-12 | 2011-12-28 | 卡里斯生命科学卢森堡控股有限责任公司 | 使用外来体来确定表现型的方法和系统 |
| US9590760B2 (en) | 2014-06-03 | 2017-03-07 | Raytheon Company | Analog RF memory system |
| WO2017124000A1 (en) * | 2016-01-14 | 2017-07-20 | The Regents Of The University Of California | 3d-exoquant method for the analysis of surface molecules and quantification of tissue-specific exosomes in biological fluids |
| US10393760B2 (en) * | 2017-07-05 | 2019-08-27 | Edward J. Goetzl | Specialized excitatory synaptic protein biomarkers of plasma neuronal exosomes for prediction and staging of Alzheimer's disease |
-
2020
- 2020-11-27 WO PCT/JP2020/044399 patent/WO2021107154A1/ja unknown
- 2020-11-27 JP JP2021561585A patent/JP7448831B2/ja active Active
- 2020-11-27 EP EP20893721.9A patent/EP4067906A4/en active Pending
- 2020-11-27 CN CN202080095234.2A patent/CN115176163A/zh active Pending
-
2022
- 2022-05-27 US US17/826,923 patent/US20220291242A1/en active Pending
Patent Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2013054534A1 (ja) | 2011-10-14 | 2013-04-18 | 国立大学法人北海道大学 | アミロイドβ関連の疾患用医薬及びそのスクリーニング |
| JP2016535283A (ja) | 2013-10-24 | 2016-11-10 | ナノソミックス・インコーポレイテッドＮａｎｏＳｏｍｉＸ， Ｉｎｃ． | アルツハイマー病および他の神経変性障害のためのバイオマーカーおよび診断方法 |
| WO2016088689A1 (ja) | 2014-12-05 | 2016-06-09 | 和光純薬工業株式会社 | Ｔｉｍタンパク質結合担体、当該担体を用いた細胞外膜小胞及びウイルスの取得方法、除去方法、検出方法並びに当該担体を含むキット |
| JP2016161480A (ja) | 2015-03-04 | 2016-09-05 | 国立大学法人 千葉大学 | 微量の微小胞の定量、診断及びスクリーニング方法 |
| WO2019058303A1 (en) | 2017-09-21 | 2019-03-28 | Braindtech S.P.A. | DIAGNOSTIC AND PROGNOSTIC METHODS FOR NEURODEGENERATIVE AND NEUROINFLAMMATORY DISEASES |
| JP2021012189A (ja) | 2019-07-04 | 2021-02-04 | 国立研究開発法人産業技術総合研究所 | がん及び神経変性疾患の検出方法 |
| WO2022250009A1 (ja) | 2021-05-26 | 2022-12-01 | 富士フイルム株式会社 | レビー小体病とアルツハイマー病の鑑別を補助する方法、バイオマーカー、及び試薬キット |
Non-Patent Citations (7)
| Title |
|---|
| AGOSTA Federica et al.，Myeloid microvesicles in cerebrospinal fluid are associated with myelin damage and neuronal loss in mild cognitive impairment and Alzheimer disease，Annals of Neurology，2014年，Vol.76 No.6，Page.813-825 |
| Haruki Odaka，Platelet-derived extracellular vesicles are increased in sera of Alzheimer’s disease patients, as revealed by Tim4-based assays，FEBS Open Bio，2021年02月03日，Vol.11 No.3，Page.741-752 |
| Huaqi Su，Extracellular vesicular lipids as biomarkers for the diagnosis of Alzheimer’s disease，Alzheimer’s Dement，2021年，Vol.17 No.Suppl.5，Page.e053298 |
| NAKAI Wataru et al.，A novel affinity-based method for the isolation of highly purified extracellular vesicles，Sci Rep，2016年09月23日，Vol.6，Page.33935 |
| PULLIAM Lynn et al.，Plasma neuronal exosomes serve as biomarkers of cognitive impairment in HIV infection and Alzheimer's disease，J Neurovirol，2019年01月04日，Vol.25 No.5，Page.702-709 |
| Xiaohuan Xia，Exosome: A novel neurotransmission modulator or non-canonical neurotransmitter?，Ageing Research Reviews，2022年01月03日，Vol.74，Page.101558 |
| 下田麻子等，細胞外ベシクルの構造特性と機能制御，Drug Delivery System，2014年03月25日 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2021107154A1 (ja) | 2021-06-03 |
| US20220291242A1 (en) | 2022-09-15 |
| EP4067906A1 (en) | 2022-10-05 |
| CN115176163A (zh) | 2022-10-11 |
| JPWO2021107154A1 (ja) | 2021-06-03 |
| EP4067906A4 (en) | 2023-04-26 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP7448831B2 (ja) | アルツハイマー型認知症又は軽度認知障害の診断を補助する方法、バイオマーカー、試薬キット及び装置 | |
| JP6716458B2 (ja) | アルツハイマー病の早期診断のためのバイオマーカーおよび方法 | |
| Veerabhadrappa et al. | Detection of amyloid beta peptides in body fluids for the diagnosis of alzheimer’s disease: Where do we stand? | |
| EP2572195A1 (en) | Biomarkers | |
| US20180059107A1 (en) | Method of detecting or diagnosing sjogren's syndrome based on the presence of auto-antibody against aquaporin 5 | |
| US20150285804A1 (en) | Diagnostic method for colorectal cancer | |
| JP7348604B2 (ja) | パーキンソン病の診断を補助する方法、バイオマーカー、試薬キット及び装置 | |
| WO2022250009A1 (ja) | レビー小体病とアルツハイマー病の鑑別を補助する方法、バイオマーカー、及び試薬キット | |
| Tsao et al. | Detection and assessment of alpha-synuclein in Parkinson disease | |
| EP3452830B1 (en) | Assay for the diagnosis of a neurological disease | |
| WO2015019979A1 (ja) | 統合失調症に関するバイオマーカー | |
| Sauer et al. | Critical role of the sample matrix in a point-of-care protein chip for sepsis | |
| US8460884B2 (en) | Use of hematopoietic growth factor inducible neurokinin-1 (HGFIN) as a biomarker for renal injury or renal disease | |
| KR102254053B1 (ko) | 인지기능 정상군 또는 경도 인지장애에서 아밀로이드 베타의 뇌 침착 검출용 혈액 바이오 마커 | |
| EP1459071A2 (en) | Diagnosis of dementia utilizing thrombospondin | |
| US10234455B2 (en) | Regulatory brain specific ctyoplasmic RNAs (BC RNAs) and methods of use thereof in diagnosis and treatment of neuropsychiatric lupus | |
| JP2006250862A (ja) | 妊娠中毒症の検知方法及び検知キット | |
| Class et al. | Patent application title: REGULATORY BRAIN SPECIFIC CTYOPLASMIC RNAS (BC RNAs) AND METHODS OF USE THEREOF IN DIAGNOSIS AND TREATMENT OF NEUROPSYCHIATRIC LUPUS | |
| WO2023229024A1 (ja) | 血液腫瘍の診断を補助する方法、血液腫瘍の診断を行うためのデータを得る方法、及びこれらの方法のためのキット | |
| WO2019181830A1 (ja) | 精神疾患の判定方法 | |
| Diagnostics | Differential Dementia Diagnostics ELISA based Diagnosis of Neurodegeneration |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20220525 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20220531 |
|
| AA64 | Notification of invalidation of claim of internal priority (with term) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A241764 Effective date: 20220719 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20230627 |
|
| A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A712 Effective date: 20230810 |
|
| A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20230821 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20231026 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20240130 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20240219 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20240212 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7448831 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |