JP7436069B1 - Piezo2受容体遺伝子発現促進剤、及びPiezo2受容体タンパク質産生促進剤 - Google Patents
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Abstract
Description
ショウガ及び/又はウンシュウミカンの抽出物を有効成分として含有することにある。
前記抽出物は、水及びエタノールの混合液による抽出物であることが好ましい。
前記抽出物の濃度が1~500μg/mLとなるように調整してあることが好ましい。
ショウガ及び/又はウンシュウミカンの抽出物を有効成分として含有することにある。
ショウガ及び/又はウンシュウミカンの抽出物をPiezo2受容体遺伝子の発現を促進するための有効成分として含有することにある。
前記抽出物の濃度が0.002~6mg/mLとなるように調整してあることが好ましい。
上述した化粧料の使用感の評価方法であって、
前記化粧料を手の甲に塗布した後、前記化粧料の使用感を、前記化粧料を塗布した際に想起された感情を示す複数の言葉を選択することによって評価することにある。
Piezo2受容体遺伝子発現促進剤は、ショウガ及び/又はウンシュウミカンの抽出物を有効成分として含有する。Piezo2受容体遺伝子発現促進剤は、ヒトの皮膚のメルケル細胞に含まれるPiezo2受容体遺伝子の発現を促進することができる。Piezo2受容体遺伝子発現促進剤は、液状のエキス剤であることが好ましい。
Piezo2受容体は、ヒトの皮膚の表皮に存在するメルケル細胞の細胞膜に存在する受容体である。上述したように、化粧料を皮膚に塗布する際に、手で撫でるような軽い接触圧等が伴い、この接触圧等に起因する皮膚への弱い機械刺激(弱機械刺激)を、メルケル細胞のPiezo2受容体が受容する。Piezo2受容体は、上記弱機械刺激を受容すると、その刺激をAβ神経線維に伝達する。上記刺激は、さらに中枢神経系を介して脳に伝達され、手で撫でるような軽い接触圧等に関する触覚が認識される。Piezo2受容体は、Piezo2受容体タンパク質を、その機能面に着目して称したものである。
Piezo2受容体遺伝子は、メルケル細胞に含まれている核酸である。Piezo2受容体遺伝子は、Piezo2受容体タンパク質を産生するための遺伝情報を有しており、Piezo2受容体遺伝子が有する上記遺伝情報に基づいて、メルケル細胞は、Piezo2受容体タンパク質を産生させる。
ショウガは、ショウガ科ショウガ属の多年草である。ショウガの抽出物としては、ショウガの根茎の抽出物を用いる。ショウガの抽出物は、Zingiber officinale Roscoe(Zingiberaceae)の根茎を細切した後に、粗末にして、任意の濃度でエタノールを含有するエタノール及び水の混合液に浸漬して数日間、室温にて抽出し、次いでろ過し、その後、減圧濃縮又は凍結乾固することによって得ることができる。また、得られた抽出物は、水やエタノール等の有機溶媒を使用して一定の濃度に調整(希釈)することができる。例えば、ショウガの抽出物の含有量が20mg/mLである液(濃度が調整されてなる濃度調整液)を作製することができる。
Piezo2受容体遺伝子発現促進剤は、例えば上記濃度調整液をさらに適切な溶媒に溶解又は分散させて、ショウガ及び/又はウンシュウミカンの抽出物の濃度が1~500μg/mLとなるように調整してあることが好ましく、1~200μg/mLとなるように調整してあることがより好ましく、10~120μg/mLとなるように調整してあることがさらに好ましい。ショウガ及び/又はウンシュウミカンの抽出物の濃度(含有量)を上記の適切な範囲となるように調整することにより、メルケル細胞に直接接触させることで、細胞毒性を抑えつつ、Piezo2受容体遺伝子の発現をより促進することができる。なお、上記抽出物を溶解又は分散させる溶媒としては、水、エタノール等が挙げられ、抽出に使用した溶媒や、希釈(濃度の調整)に使用した溶媒をそのまま使用してもよい。また、上記抽出物の濃度は、有効成分としての濃度である。
Piezo2受容体遺伝子発現促進剤は、自然由来であるショウガ及び/又はウンシュウミカンの抽出物を有効成分として含有することにより、自然由来でありながら、Piezo2受容体遺伝子の発現を促進することができる。これにより、Piezo2受容体遺伝子の発現量が増加するため、その遺伝子が有する遺伝情報に基づいて産生されるPiezo2受容体タンパク質の産生を促進することができる。その結果、例えばPiezo2受容体遺伝子発現促進剤を皮膚に適用する場合、Piezo2受容体タンパク質が本来的に有する弱刺激伝達機能(皮膚での弱い機械刺激を、刺激信号として中枢神経系に伝達する機能)を高めることができる。具体的には例えば、Piezo2受容体遺伝子発現促進剤を化粧料に配合する場合、ヒトの皮膚に塗布した際の触覚機能を高めると共に、感情価値を高めることができる。また、例えばPiezo2受容体遺伝子発現促進剤を生体外(インビトロ:in vitro)においてメルケル細胞に適用する場合、Piezo2受容体タンパク質を比較的多く産生可能となるため、Piezo2受容体を用いた研究開発の促進にも繋がる。
Piezo2受容体タンパク質産生促進剤は、ショウガ及び/又はウンシュウミカンの抽出物を有効成分として含有する。Piezo2受容体タンパク質産生促進剤は、ヒトの皮膚のメルケル細胞に含まれるPiezo2受容体タンパク質の産生を促進することができる。Piezo2受容体タンパク質産生促進剤は、液状のエキス剤であることが好ましい。
本実施形態の化粧料は、上述したショウガ及び/又はウンシュウミカンの抽出物をPiezo2受容体遺伝子の発現を促進するための有効成分として含有する。より具体的には、当該化粧料は、上述したショウガ及び/又はウンシュウミカンの抽出物をPiezo2受容体遺伝子の発現促進を介してPiezo2受容体タンパク質の産生を促進するための有効成分として含有する。
ショウガとしてのZingiber officinale Roscoe(Zingiberaceae)の根茎を細切した後に、粗末にして、水及びエタノールの混合液に浸漬して数日間、室温にて抽出し、次いでろ過し、その後、減圧濃縮又は凍結乾固することによって、ショウガの抽出物を得た。得られた抽出物を、上記混合液で希釈(濃度を調整)して、エキス剤Aを得た。エキス剤Aにおけるショウガの抽出物の含有量は、20mg/mLであった。
ウンシュウミカンとしてのCitrus unshiu(Swingle) Marcow(Rutaceae)の成熟した果皮を風乾し、細かく粉砕した後に、水及びエタノールの混合液に浸漬して数日間、室温にて抽出し、次いでろ過し、その後、減圧濃縮又は凍結乾固することによって、ウンシュウミカンの抽出物を得た。得られた抽出物を、上記混合液で希釈(濃度を調整)して、エキス剤Bを得た。エキス剤Bにおけるウンシュウミカンの抽出物の含有量は、60mg/mLであった。
8種のエキス剤(エキス剤A、B、1~5、及びコントロール)を用い、各エキス剤によるPiezo2受容体遺伝子の発現を、下記の試験方法によって評価した。エキス剤1~5に関しては、水と1価又は多価のアルコールとの混合液を用いて抽出物を得た後、抽出で使用した上記混合液で希釈(濃度を調整)してエキス剤1~5を得た。
・エキス剤A(ショウガの抽出物を含有するエキス剤)
・エキス剤B(ウンシュウミカンの抽出物を含有するエキス剤)
・エキス剤1(ローズマリーの抽出物を含有するエキス剤)
・エキス剤2(セージの抽出物を含有するエキス剤)
・エキス剤3(ボタンピの抽出物を含有するエキス剤)
・エキス剤4(タイムの抽出物を含有するエキス剤)
・エキス剤5(ペパーミントの抽出物を含有するエキス剤)
・コントロール(エキス剤A又はBの溶媒である水及びエタノールの混合液のみ)
ヒトメルケル細胞癌(MCC14/2)のPiezo2受容体遺伝子の発現を確認・評価するため、RT-qPCR(半定量的逆転写ポリメラーゼ連鎖反応)法を活用して検討した。検討は、以下に説明する(1)~(4)の操作手順で行った。
(1)増殖培地(RPMI-1640培地に2mM L-Glutamine、25mM HEPES、15%FBSを添加したもの)で懸濁した一定数のMCC14/2細胞調製液を12ウェル(well)培養プレートに播種した。
(2)24時間後、基礎培地(RPMI-1640培地に2mM L-Glutamine、25mM HEPES、0.5%FBSを添加したもの)に置換した。
(3)さらに24時間後、各エキス剤を基礎培地に加えて表1に示す濃度に調整した後、MCC14/2細胞調製液に添加した。
(4)各エキス剤の添加から24時間後に遺伝子を回収し、RT-qPCRによってPiezo2受容体遺伝子の発現量を測定した。発現量の補正は、ハウスキーピング遺伝子GAPDHを使用した。結果を表1及び図1に示す。
試験例1で使用したエキス剤A、B、及びコントロールを用い、各エキス剤によるPiezo2受容体タンパク質の産生を評価した。
MCC14/2細胞におけるPiezo2受容体のタンパク質の産生量を確認・評価するため、Piezo2受容体に対する一次抗体と蛍光標識二次抗体とを使用し、以下に説明する(1)~(8)の操作手順による試験を行った。
(1)試験例1と同様の増殖培地を用い、この増殖培地で懸濁した一定数のMCC14/2細胞調製液を2ウェル(well)チャンバースライドに播種した。
(2)24時間後、試験例1と同様の基礎培地に置換した。
(3)さらに24時間後、各エキス剤を基礎培地に加えて一定濃度に調整した後、MCC14/2細胞調製液に添加した。
(4)各エキス剤の添加から30時間経過後に培養液を除去し、氷冷した無水メタノールで細胞を固定した。
(5)その後、スキムミルクで調製したブロッキングバッファー液で細胞を60分間ブロッキングし、続いてブロッキングバッファー液で調製したPiezo2抗体液(一次抗体)を添加し、一晩、4℃で処理(放置)した。
(6)翌日、ブロッキングバッファー液を除去した後、同じくブロッキングバッファー液で調製した二次抗体液(緑色蛍光標識抗体)を2時間、室温で処理(放置)し、細胞を緑色に蛍光染色した。これにより、Piezo2受容体タンパク質が緑色に蛍光染色された。
(7)反応終了後、さらにナイルレッド(赤色蛍光)及びDAPI(青色蛍光)の各液で細胞膜及び細胞核を蛍光染色した(上記(6)と合わせて計3色の蛍光染色)。
(8)蛍光顕微鏡を使用して、上記(6)において緑色に蛍光染色した際の緑色(GFP)蛍光強度(輝度)を測定した。また、上記(7)において、上記(6)の緑色蛍光染色に加えて赤色蛍光染色及び青色蛍光染色の3色をオーバーレイした際に確認することができる黄色蛍光の面積(Piezo2受容体タンパク質の産生を示す)、及び細胞膜を示す赤色蛍光の面積を測定した。Piezo2受容体タンパク質の産生量に関しては、「緑色蛍光強度(輝度)」と、黄色面積を赤色面積で調整すること(黄色面積/赤色面積)によって算出した「Piezo2陽性面積率(黄色陽性面積率)」とで評価した。評価結果を表2及び3、並びに図2に示す。
試験例1で使用したエキス剤A、B、及び2~3を用い、表4に示す処方に従って、化粧料として、実施例1~2、比較例1~3の化粧水を調製した。各エキス剤を含有する化粧水を塗布した際にヒトの感情に及ぼす影響を、以下に説明する試験方法によって評価した。
実施例1~2、比較例1~3の化粧水を用い、各化粧水を被験者の皮膚に、1日1回、1週間連続して塗布した後、被験者に、化粧水を塗布した際に想起された感情をランダムに列挙した47個の言葉から、複数回答可能であるとの条件下で選択してもらった。これを、7名(男性:5名、女性:2名)の被験者について評価した。評価結果を表5に示す。
楽しい、やる気、安心、豊か、潤った、繊細、喜び、幸せ、悲しい、爽やか、生き生き、輝いている、新しい、落ち着く、陽気、愉快、好き、安らか、気持ち良い、優しい、嬉しい、高級感、鮮やか、怖い、楽しみ、心地良い、嫌い、のどか、気持ち悪い、暖かい、上品、弾んだ、平和、びっくり、面白い、イライラ、調和、上質、穏やか、気楽、くつろいだ、素晴らしい、ぬくもり、なごやか、親しい、新鮮、ニュートラルな感じ
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- ショウガ及び/又はウンシュウミカンの抽出物を有効成分として含有するPiezo2受容体遺伝子発現促進剤。
- ショウガ及び/又はウンシュウミカンの抽出物を有効成分として含有するPiezo2受容体タンパク質産生促進剤。
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