JP7405139B2

JP7405139B2 - 二重特異性抗体

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Publication number: JP7405139B2
Application number: JP2021512315A
Authority: JP
Inventors: 史朗柴山; 智也手塚; マークスロスビー; クルイフコルネリスアドリアンデ; ローピーテルフォッコヴァン; リンスクロースター; ロベルタスコルネリスローヴァーズ
Original assignee: Ono Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Ono Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2019-04-04
Filing date: 2020-04-03
Publication date: 2023-12-26
Anticipated expiration: 2040-04-03
Also published as: JPWO2020204152A1; IL286918A; CN113660952A; CA3136395A1; EP3978015A1; BR112021019823A2; US20220185885A1; MX2021012061A; AU2020251578A1; WO2020204152A1; SG11202110993QA; TW202102544A; KR20210149044A; EP3978015A4; JP2024009224A

Description

本発明は、ＰＤ－１およびＣＤ１９に各々特異的に結合することができる二重特異性抗体（以下、「ＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体」と略記することがある。）またはその抗体断片（以下、これらを「ＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体等」と略記することがある。）、これを有効成分として含む医薬組成物ならびにそれらの医薬治療用途に関する。

ＰＤ－１は免疫グロブリンファミリーに属する免疫抑制受容体であり、抗原レセプターからの刺激により活性化したＢ細胞の免疫活性化シグナルを抑制する機能を持つ分子である。ＰＤ－１ノックアウトマウスの解析等から、ＰＤ－１シグナルは、自己免疫性拡張型心筋症、ループス様症候群、自己免疫性脳脊髄炎、全身性ループスエリテマトーデス、移植片対宿主病、Ｉ型糖尿病およびリウマチ性関節炎などの自己免疫疾患の抑制に重要な役割を果たすことが知られている。したがって、ＰＤ－１シグナルを増強する物質は自己免疫疾患等の予防または治療剤となり得ることが指摘されている。

一方、ＣＤ１９は、Ｂ細胞に発現する膜タンパクであり、Ｂ細胞受容体複合体と共にＢ細胞へ刺激を伝える分子である。

自己免疫疾患の予防または治療を目的としたＰＤ－１二重特異性抗体について、これまでに幾つかの報告はあるが（特許文献１ないし３）、その一方の標的はＴ細胞受容体複合体のメンバーであるＣＤ３である。

また、がん治療を目的とする、ＰＤ－１およびＣＤ１９を標的とする二重特異性抗体に関する報告もあるが（特許文献４）、自己免疫疾患の予防、症状進展抑制、再発抑制または治療を目的とする、ＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体に関する報告はない。

国際公開第２００３／０１１９１１号国際公開第２００４／０７２２８６号国際公開第２０１３／０２２０９１号中国特許出願公開第１０６９３９０５０号明細書

本発明の目的は、自己免疫疾患等に対する予防、症状進展抑制、再発抑制または治療のための新たな薬剤を提供することにある。

本発明の発明者らは鋭意検討した結果、かかる課題を解決し得る物質として、本発明のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体に着目し、本発明を完成した。

さらに、本発明の発明者らは、当該ＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体が、ＰＤ－１およびそのリガンドであるＰＤ－Ｌ１との相互作用を許容する特徴を有することを確認した。くわえて、本発明の発明者らは、当該ＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体を構成するＣＤ１９に特異的に結合する第二アームの重鎖への所定の一つまたは複数のアミノ酸置換または付加により、その精製工程において、副産物との分離が容易なＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体を見出した。

すなわち、本発明は、以下のとおりである。

［１］ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームおよびＣＤ１９に特異的に結合する第二アームを有し、ＰＤ－１およびＣＤ１９に各々特異的に結合する二重特異性抗体またはその抗体断片であって、ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームが、
（Ａ）（ａ）配列番号６のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域の相補性決定領域１（以下、「重鎖可変領域の相補性決定領域１」を、ＶＨ－ＣＤＲ１と略記することがある。）、
（ｂ）配列番号７のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域の相補性決定領域２（以下、「重鎖可変領域の相補性決定領域２」を、ＶＨ－ＣＤＲ２と略記することがある。）および
（ｃ）配列番号８のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域の相補性決定領域３（以下、「重鎖可変領域の相補性決定領域３」を、ＶＨ－ＣＤＲ３と略記することがある。）を有する重鎖可変領域（以下、「重鎖可変領域」を、「ＶＨ」と略記することがある。）、
（Ｂ）（ａ）配列番号９のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号１１のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有するＶＨ、
（Ｃ）（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有するＶＨ、
（Ｄ）（ａ）配列番号１５のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号１６のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号１７のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有するＶＨ、ならびに
（Ｅ）（ａ）配列番号１８のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号１９のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号２０のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有するＶＨから選択される何れか一つのＶＨを有し、
ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームが、
（Ａ）（ａ）配列番号３５のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号３６のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号３７のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有するＶＨ、
（Ｂ）（ａ）配列番号３８のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号３９のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号４０のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有するＶＨ、
（Ｃ）（ａ）配列番号４１のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号４３のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有するＶＨ、
（Ｄ）（ａ）配列番号４４のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号４５のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号４６のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有するＶＨ、ならびに
（Ｅ）（ａ）配列番号４７のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号４８のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号４９のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有するＶＨから選択される何れか一つのＶＨを有し、ここで、ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームにおける、ＶＨ－ＣＤＲ１、ＶＨ－ＣＤＲ２およびＶＨ－ＣＤＲ３から選択される何れか一つまたは複数のＶＨ－ＣＤＲにおいて、各々その任意の１～５個のアミノ酸残基が他のアミノ酸に置換されていてもよく、および／または、ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームにおける、ＶＨ－ＣＤＲ１、ＶＨ－ＣＤＲ２およびＶＨ－ＣＤＲ３から選択される何れか一つまたは複数のＶＨ－ＣＤＲにおいて、各々その任意の１～５個のアミノ酸残基が他のアミノ酸に置換されていてもよい、当該ＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［２］ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームが、
（Ａ）（ａ）配列番号６のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号７のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号８のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有するＶＨ、
（Ｂ）（ａ）配列番号９のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号１１のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有するＶＨ、
（Ｃ）（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有するＶＨ、
（Ｄ）（ａ）配列番号１５のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号１６のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号１７のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有するＶＨ、ならびに
（Ｅ）（ａ）配列番号１８のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号１９のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号２０のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有するＶＨから選択される何れか一つのＶＨを有し、
ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームが、
（Ａ）（ａ）配列番号３５のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号３６のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号３７のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有するＶＨ、
（Ｂ）（ａ）配列番号３８のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号３９のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号４０のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有するＶＨ、
（Ｃ）（ａ）配列番号４１のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号４３のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有するＶＨ、
（Ｄ）（ａ）配列番号４４のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号４５のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号４６のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有するＶＨ、ならびに
（Ｅ）（ａ）配列番号４７のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号４８のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号４９のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有するＶＨから選択される何れか一つのＶＨを有する、前項[１]記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［３］（ｉ）ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームのＶＨが、
（ａ）配列番号６のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号７のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号８のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有し、
（ｉｉ）ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームのＶＨが、
（Ａ）（ａ）配列番号３５のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号３６のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号３７のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有するＶＨ、
（Ｂ）（ａ）配列番号３８のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号３９のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号４０のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有するＶＨ、
（Ｃ）（ａ）配列番号４１のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号４３のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有するＶＨ、
（Ｄ）（ａ）配列番号４４のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号４５のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号４６のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有するＶＨ、ならびに
（Ｅ）（ａ）配列番号４７のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号４８のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号４９のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有するＶＨから選択される何れか一つである、前項［１］または［２］記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［４］（ｉ）ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームのＶＨが、
（ａ）配列番号９のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号１１のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有し、
（ｉｉ）ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームのＶＨが、
（Ａ）（ａ）配列番号３５のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号３６のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号３７のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有するＶＨ、
（Ｂ）（ａ）配列番号３８のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号３９のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号４０のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有するＶＨ、
（Ｃ）（ａ）配列番号４１のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号４３のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有するＶＨ、
（Ｄ）（ａ）配列番号４４のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号４５のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号４６のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有するＶＨ、ならびに
（Ｅ）（ａ）配列番号４７のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号４８のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号４９のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有するＶＨから選択される何れか一つである、前項［１］または［２］記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［５］（ｉ）ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームのＶＨが、
（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有し、
（ｉｉ）ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームのＶＨが、
（Ａ）（ａ）配列番号３５のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号３６のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号３７のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有するＶＨ、
（Ｂ）（ａ）配列番号３８のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号３９のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号４０のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有するＶＨ、
（Ｃ）（ａ）配列番号４１のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号４３のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有するＶＨ、
（Ｄ）（ａ）配列番号４４のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号４５のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号４６のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有するＶＨ、ならびに
（Ｅ）（ａ）配列番号４７のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号４８のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号４９のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有するＶＨから選択される何れか一つである、前項［１］または［２］記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［６］（ｉ）ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームのＶＨが、
（ａ）配列番号１５のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号１６のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号１７のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有し、
（ｉｉ）ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームのＶＨが、
（Ａ）（ａ）配列番号３５のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号３６のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号３７のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有するＶＨ、
（Ｂ）（ａ）配列番号３８のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号３９のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号４０のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有するＶＨ、
（Ｃ）（ａ）配列番号４１のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号４３のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有するＶＨ、
（Ｄ）（ａ）配列番号４４のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号４５のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号４６のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有するＶＨ、ならびに
（Ｅ）（ａ）配列番号４７のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号４８のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号４９のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有するＶＨから選択される何れか一つである、前項［１］または［２］記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［７］（ｉ）ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームのＶＨが、
（ａ）配列番号１８のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号１９のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号２０のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有し、
（ｉｉ）ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームのＶＨが、
（Ａ）（ａ）配列番号３５のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号３６のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号３７のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有するＶＨ、
（Ｂ）（ａ）配列番号３８のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号３９のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号４０のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有するＶＨ、
（Ｃ）（ａ）配列番号４１のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号４３のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有するＶＨ、
（Ｄ）（ａ）配列番号４４のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号４５のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号４６のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有するＶＨ、ならびに
（Ｅ）（ａ）配列番号４７のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号４８のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号４９のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有するＶＨから選択される何れか一つである、前項［１］または［２］記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［８］（ｉ）ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームのＶＨが、
（ａ）配列番号６のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号７のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号８のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有し、
（ｉｉ）ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームのＶＨが、
（ａ）配列番号３５のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号３６のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号３７のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有する、前項［１］または［２］記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［９］（ｉ）ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームのＶＨが、
（ａ）配列番号６のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号７のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号８のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有し、
（ｉｉ）ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームのＶＨが、
（ａ）配列番号３８のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号３９のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号４０のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有する、前項［１］または［２］記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［１０］（ｉ）ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームのＶＨが、
（ａ）配列番号６のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号７のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号８のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有し、
（ｉｉ）ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームのＶＨが、
（ａ）配列番号４１のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号４３のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有する、前項［１］または［２］記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［１１］（ｉ）ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームのＶＨが、
（ａ）配列番号６のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号７のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号８のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有し、
（ｉｉ）ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームのＶＨが、
（ａ）配列番号４４のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号４５のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号４６のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有する、前項［１］または［２］記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［１２］（ｉ）ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームのＶＨが、
（ａ）配列番号６のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号７のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号８のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有し、
（ｉｉ）ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームのＶＨが、
（ａ）配列番号４７のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号４８のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号４９のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有する、前項［１］または［２］記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［１３］（ｉ）ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームのＶＨが、
（ａ）配列番号９のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号１１のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有し、
（ｉｉ）ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームのＶＨが、
（ａ）配列番号３５のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号３６のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号３７のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有する、前項［１］または［２］記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［１４］（ｉ）ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームのＶＨが、
（ａ）配列番号９のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号１１のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有し、
（ｉｉ）ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームのＶＨが、
（ａ）配列番号３８のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号３９のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号４０のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有する、前項［１］または［２］記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［１５］（ｉ）ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームのＶＨが、
（ａ）配列番号９のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号１１のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有し、
（ｉｉ）ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームのＶＨが、
（ａ）配列番号４１のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号４３のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有する、前項［１］または［２］記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［１６］（ｉ）ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームのＶＨが、
（ａ）配列番号９のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号１１のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有し、
（ｉｉ）ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームのＶＨが、
（ａ）配列番号４４のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号４５のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号４６のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有する、前項［１］または［２］記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［１７］（ｉ）ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームのＶＨが、
（ａ）配列番号９のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号１１のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有し、
（ｉｉ）ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームのＶＨが、
（ａ）配列番号４７のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号４８のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号４９のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有する、前項［１］または［２］記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［１８］（ｉ）ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームのＶＨが、
（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有し、
（ｉｉ）ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームのＶＨが、
（ａ）配列番号３５のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号３６のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号３７のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有する、前項［１］または［２］記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［１９］（ｉ）ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームのＶＨが、
（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有し、
（ｉｉ）ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームのＶＨが、
（ａ）配列番号３８のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号３９のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号４０のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有する、前項［１］または［２］記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［２０］（ｉ）ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームのＶＨが、
（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有し、
（ｉｉ）ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームのＶＨが、
（ａ）配列番号４１のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号４３のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有する、前項［１］または［２］記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［２１］（ｉ）ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームのＶＨが、
（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有し、
（ｉｉ）ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームのＶＨが、
（ａ）配列番号４４のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号４５のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号４６のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有する、前項［１］または［２］記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［２２］（ｉ）ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームのＶＨが、
（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有し、
（ｉｉ）ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームのＶＨが、
（ａ）配列番号４７のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号４８のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号４９のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有する、前項［１］または［２］記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［２３］（ｉ）ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームのＶＨが、
（ａ）配列番号１５のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号１６のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号１７のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有し、
（ｉｉ）ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームのＶＨが、
（ａ）配列番号３５のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号３６のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号３７のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有する、前項［１］または［２］記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［２４］（ｉ）ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームのＶＨが、
（ａ）配列番号１５のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号１６のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号１７のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有し、
（ｉｉ）ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームのＶＨが、
（ａ）配列番号３８のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号３９のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号４０のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有する、前項［１］または［２］記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［２５］（ｉ）ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームのＶＨが、
（ａ）配列番号１５のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号１６のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号１７のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有し、
（ｉｉ）ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームのＶＨが、
（ａ）配列番号４１のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号４３のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有する、前項［１］または［２］記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［２６］（ｉ）ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームのＶＨが、
（ａ）配列番号１５のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号１６のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号１７のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有し、
（ｉｉ）ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームのＶＨが、
（ａ）配列番号４４のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号４５のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号４６のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有する、前項［１］または［２］記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［２７］（ｉ）ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームのＶＨが、
（ａ）配列番号１５のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号１６のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号１７のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有し、
（ｉｉ）ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームのＶＨが、
（ａ）配列番号４７のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号４８のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号４９のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有する、前項［１］または［２］記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［２８］（ｉ）ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームのＶＨが、
（ａ）配列番号１８のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号１９のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号２０のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有し、
（ｉｉ）ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームのＶＨが、
（ａ）配列番号３５のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号３６のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号３７のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有する、前項［１］または［２］記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［２９］（ｉ）ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームのＶＨが、
（ａ）配列番号１８のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号１９のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号２０のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有し、
（ｉｉ）ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームのＶＨが、
（ａ）配列番号３８のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号３９のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号４０のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有する、前項［１］または［２］記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［３０］（ｉ）ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームのＶＨが、
（ａ）配列番号１８のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号１９のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号２０のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有し、
（ｉｉ）ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームのＶＨが、
（ａ）配列番号４１のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号４３のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有する、前項［１］または［２］記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［３１］（ｉ）ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームのＶＨが、
（ａ）配列番号１８のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号１９のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号２０のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有し、
（ｉｉ）ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームのＶＨが、
（ａ）配列番号４４のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号４５のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号４６のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有する、前項［１］または［２］記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［３２］（ｉ）ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームのＶＨが、
（ａ）配列番号１８のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号１９のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号２０のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有し、
（ｉｉ）ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームのＶＨが、
（ａ）配列番号４７のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号４８のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号４９のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有する、前項［１］または［２］記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［３３］ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームのＶＨのフレームワーク（以下、「フレームワーク」を、ＦＲと略記することがある。）領域のうち、フレームワーク１（以下、ＦＲ１と略記することがある。）、フレームワーク２（以下、ＦＲ２と略記することがある。）およびフレームワーク３（以下、ＦＲ３と略記することがある。）領域が、生殖細胞系列型Ｖ遺伝子ＩＧＨＶ７－４－１あるいはその体細胞突然変異を受けた当該遺伝子にコードされるアミノ酸配列に各々対応する、前項［１］～［３２］の何れか一項記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［３４］ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームのＶＨのフレームワーク４（以下、「フレームワーク４」を、ＦＲ４と略記することがある。）領域が、生殖細胞系列型Ｊ遺伝子ＪＨ６ｃあるいはその体細胞突然変異を受けた当該遺伝子にコードされるアミノ酸配列（但し、ＶＨ－ＣＤＲ３領域に含まれるアミノ酸配列を除く。）からなる、前項［３３］記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［３５］ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームのＶＨのＦＲ領域が、生殖細胞系列型Ｖ遺伝子ＩＧＨＶ７－４－１の体細胞突然変異を受けていてもよい当該遺伝子にコードされ、当該体細胞突然変異により、配列番号２１のアミノ酸配列中の位置１３のリシンがグルタミンに、位置１６のアラニンがバリンに、または位置１９のリシンがメチオニンに各々置換されるか、あるいはそれらの任意の複数の組み合わせで置換されたあるいは置換されていてもよいＦＲ１領域からなる、前項［３３］または［３４］記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［３６］ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームのＶＨのＦＲ領域が、生殖細胞系列型Ｖ遺伝子ＩＧＨＶ７－４－１の体細胞突然変異を受けていてもよい当該遺伝子にコードされ、当該体細胞突然変異により、配列番号２１のアミノ酸配列中の位置３７のバリンがロイシンに置換されたあるいは置換されていてもよいＦＲ２領域からなる、前項［３３］～［３５］の何れか一項記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［３７］ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームのＶＨのＦＲ領域が、生殖細胞系列型Ｖ遺伝子ＩＧＨＶ７－４－１の体細胞突然変異を受けていてもよい当該遺伝子にコードされ、当該体細胞突然変異により、配列番号２１のアミノ酸配列中の位置７７のセリンがスレオニンに、または位置８４のシステインがセリンもしくはアスパラギンに各々置換されるか、あるいはそれらの任意の複数の組み合わせで置換されたあるいは置換されていてもよいＦＲ３領域からなる、前項［３３］～［３６］の何れか一項記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［３８］ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームのＶＨのＦＲ４領域が、生殖細胞系列型Ｊ遺伝子ＪＨ６ｃの体細胞突然変異を受けていてもよい当該遺伝子（但し、ＶＨ－ＣＤＲ３領域をコードする遺伝子領域を除く。）にコードされ、そのＦＲ４領域のアミノ酸配列（Ｔｒｐ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｔｈｒ＊－Ｖａｌ－Ｔｈｒ－Ｖａｌ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ）（配列番号６１）中のリシン（Ｌｙｓ）がグルタミンもしくはアスパラギンに、および／または＊印のスレオニン（Ｔｈｒ）がロイシンに置換されたあるいは置換されていてもよい、前項［３３］～［３７］の何れか一項記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［３９］ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームのＶＨのＦＲ領域のうち、ＦＲ１、ＦＲ２およびＦＲ３領域が、生殖細胞系列型Ｖ遺伝子ＩＧＨＶ５－５１あるいはその体細胞突然変異を受けた当該遺伝子にコードされるアミノ酸配列に各々対応する、前項［１］～［３８］の何れか一項記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［４０］ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームのＶＨのＦＲ領域が、生殖細胞系列型Ｖ遺伝子ＩＧＨＶ５－５１の体細胞突然変異を受けていてもよい当該遺伝子にコードされ、当該体細胞突然変異により、配列番号２２のアミノ酸配列中の位置１のグルタミン酸がグルタミンに、位置１４のプロリンがセリンに、位置２７のチロシンがフェニルアラニンに、または位置３０のスレオニンがイソロイシンに各々置換されるか、あるいはそれらの任意の複数の組み合わせで置換されたあるいは置換されていてもよいＦＲ１領域からなる、前項［３９］記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［４１］ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームのＶＨのＦＲ領域が、生殖細胞系列型Ｖ遺伝子ＩＧＨＶ５－５１の体細胞突然変異を受けていてもよい当該遺伝子にコードされたＦＲ２領域からなる、前項［３９］または［４０］記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［４２］ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームのＶＨのＦＲ領域が、生殖細胞系列型Ｖ遺伝子ＩＧＨＶ５－５１の体細胞突然変異を受けていてもよい当該遺伝子にコードされ、当該体細胞突然変異により、配列番号２２のアミノ酸配列中の位置７６のイソロイシンがフェニルアラニンに、位置７７のセリンがスレオニンもしくはアスパラギンに、位置７８のスレオニンがバリンに、位置８４のセリンがアスパラギンに、位置９３のメチオニンがイソロイシンもしくはロイシンに、または位置９７のアラニンがバリンに各々置換されるか、あるいはそれらの任意の複数の組み合わせで置換されたあるいは置換されていてもよいＦＲ３領域からなる、前項［３９］～［４１］の何れか一項記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［４３］ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームのＶＨが、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４および配列番号５から選択される何れか一つのアミノ酸配列、または当該ＶＨのアミノ酸配列と少なくとも８０％、９０％、９５％、９８％もしくは９９％同一なアミノ酸配列からなる、前項［１］～［４２］の何れか一項記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［４４］ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームのＶＨが、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４および配列番号５から選択される何れか一つのアミノ酸配列からなる、前項［１］～［４３］の何れか一項記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［４５］ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームのＶＨが、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３および配列番号３４から選択される何れか一つのアミノ酸配列、または当該ＶＨのアミノ酸配列と少なくとも８０％、９０％、９５％、９８％もしくは９９％同一なアミノ酸配列からなる、前項［１］～［４４］の何れか一項記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［４６］ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームのＶＨが、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３および配列番号３４から選択される何れか一つのアミノ酸配列であって、当該配列において１１４番目のグルタミンがアルギニンに置換された、または置換されていてもよいアミノ酸配列からなる、前項［１］～［４５］の何れか一項記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［４７］ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームのＶＨが、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５および配列番号６６から選択される何れか一つのアミノ酸配列からなる、前項［１］～［４５］の何れか一項記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［４８］ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームのＶＨが、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４および配列番号５から選択される何れか一つのアミノ酸配列からなり、ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームのＶＨが、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５および配列番号６６から選択される何れか一つのアミノ酸配列からなる、前項［１］または［２］記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［４９］ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームおよびＣＤ１９に特異的に結合する第二アームを有する二重特異性抗体またはその抗体断片であって、
ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームのＶＨが、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４および配列番号５から選択される何れか一つのアミノ酸配列、または当該ＶＨのアミノ酸配列と少なくとも８０％、９０％、９５％、９８％もしくは９９％同一なアミノ酸配列からなり、ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームのＶＨが、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５および配列番号６６から選択される何れか一つのアミノ酸配列、または当該ＶＨのアミノ酸配列と少なくとも８０％、９０％、９５％、９８％もしくは９９％同一なアミノ酸配列からなる、ＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［５０］ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームにおけるＶＨが、配列番号１のアミノ酸配列からなり、ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームにおけるＶＨが、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５および配列番号６６から選択される何れか一つのアミノ酸配列からなる、前項［１］または［２］記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［５１］ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームにおけるＶＨが、配列番号２のアミノ酸配列からなり、ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームにおけるＶＨが、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５および配列番号６６から選択される何れか一つのアミノ酸配列からなる、前項［１］または［２］記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［５２］ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームにおけるＶＨが、配列番号３のアミノ酸配列からなり、ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームにおけるＶＨが、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５および配列番号６６から選択される何れか一つのアミノ酸配列からなる、前項［１］または［２］記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［５３］ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームにおけるＶＨが、配列番号４のアミノ酸配列からなり、ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームにおけるＶＨが、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５および配列番号６６から選択される何れか一つのアミノ酸配列からなる、前項［１］または［２］記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［５４］ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームにおけるＶＨが、配列番号５のアミノ酸配列からなり、ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームにおけるＶＨが、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５および配列番号６６から選択される何れか一つのアミノ酸配列からなる、前項［１］または［２］記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［５５］ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームにおけるＶＨが、配列番号１のアミノ酸配列からなり、ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームにおけるＶＨが、配列番号３０または配列番号６２のアミノ酸配列からなる、前項［１］、［２］または［８］記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［５６］ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームにおけるＶＨが、配列番号１のアミノ酸配列からなり、ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームにおけるＶＨが、配列番号３１または配列番号６３のアミノ酸配列からなる、前項［１］、［２］または［９］記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［５７］ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームにおけるＶＨが、配列番号１のアミノ酸配列からなり、ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームにおけるＶＨが、配列番号３２または配列番号６４のアミノ酸配列からなる、前項［１］、［２］または［１０］記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［５８］ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームにおけるＶＨが、配列番号１のアミノ酸配列からなり、ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームにおけるＶＨが、配列番号３３または配列番号６５のアミノ酸配列からなる、前項［１］、［２］または［１１］記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［５９］ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームにおけるＶＨが、配列番号１のアミノ酸配列からなり、ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームにおけるＶＨが、配列番号３４または配列番号６６のアミノ酸配列からなる、前項［１］、［２］または［１２］記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［６０］ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームにおけるＶＨが、配列番号２のアミノ酸配列からなり、ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームにおけるＶＨが、配列番号３０または配列番号６２のアミノ酸配列からなる、前項［１］、［２］または［１３］記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［６１］ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームにおけるＶＨが、配列番号２のアミノ酸配列からなり、ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームにおけるＶＨが、配列番号３１または配列番号６３のアミノ酸配列からなる、前項［１］、［２］または［１４］記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［６２］ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームにおけるＶＨが、配列番号２のアミノ酸配列からなり、ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームにおけるＶＨが、配列番号３２または配列番号６４のアミノ酸配列からなる、前項［１］、［２］または［１５］記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［６３］ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームにおけるＶＨが、配列番号２のアミノ酸配列からなり、ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームにおけるＶＨが、配列番号３３または配列番号６５のアミノ酸配列からなる、前項［１］、［２］または［１６］記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［６４］ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームにおけるＶＨが、配列番号２のアミノ酸配列からなり、ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームにおけるＶＨが、配列番号３４または配列番号６６のアミノ酸配列からなる、前項［１］、［２］または［１７］記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［６５］ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームにおけるＶＨが、配列番号３のアミノ酸配列からなり、ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームにおけるＶＨが、配列番号３０または配列番号６２のアミノ酸配列からなる、前項［１］、［２］または［１８］記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［６６］ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームにおけるＶＨが、配列番号３のアミノ酸配列からなり、ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームにおけるＶＨが、配列番号３１または配列番号６３のアミノ酸配列からなる、前項［１］、［２］または［１９］記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［６７］ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームにおけるＶＨが、配列番号３のアミノ酸配列からなり、ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームにおけるＶＨが、配列番号３２または配列番号６４のアミノ酸配列からなる、前項［１］、［２］または［２０］記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［６８］ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームにおけるＶＨが、配列番号３のアミノ酸配列からなり、ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームにおけるＶＨが、配列番号３３または配列番号６５のアミノ酸配列からなる、前項［１］、［２］または［２１］記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［６９］ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームにおけるＶＨが、配列番号３のアミノ酸配列からなり、ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームにおけるＶＨが、配列番号３４または配列番号６６のアミノ酸配列からなる、前項［１］、［２］または［２２］記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［７０］ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームにおけるＶＨが、配列番号４のアミノ酸配列からなり、ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームにおけるＶＨが、配列番号３０または配列番号６２のアミノ酸配列からなる、前項［１］、［２］または［２３］記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［７１］ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームにおけるＶＨが、配列番号４のアミノ酸配列からなり、ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームにおけるＶＨが、配列番号３１または配列番号６３のアミノ酸配列からなる、前項［１］、［２］または［２４］記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［７２］ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームにおけるＶＨが、配列番号４のアミノ酸配列からなり、ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームにおけるＶＨが、配列番号３２または配列番号６４のアミノ酸配列からなる、前項［１］、［２］または［２５］記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［７３］ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームにおけるＶＨが、配列番号４のアミノ酸配列からなり、ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームにおけるＶＨが、配列番号３３または配列番号６５のアミノ酸配列からなる、前項［１］、［２］または［２６］記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［７４］ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームにおけるＶＨが、配列番号４のアミノ酸配列からなり、ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームにおけるＶＨが、配列番号３４または配列番号６６のアミノ酸配列からなる、前項［１］、［２］または［２７］記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［７５］ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームにおけるＶＨが、配列番号５のアミノ酸配列からなり、ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームにおけるＶＨが、配列番号３０または配列番号６２のアミノ酸配列からなる、前項［１］、［２］または［２８］記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［７６］ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームにおけるＶＨが、配列番号５のアミノ酸配列からなり、ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームにおけるＶＨが、配列番号３１または配列番号６３のアミノ酸配列からなる、前項［１］、［２］または［２９］記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［７７］ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームにおけるＶＨが、配列番号５のアミノ酸配列からなり、ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームにおけるＶＨが、配列番号３２または配列番号６４のアミノ酸配列からなる、前項［１］、［２］または［３０］記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［７８］ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームにおけるＶＨが、配列番号５のアミノ酸配列からなり、ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームにおけるＶＨが、配列番号３３または配列番号６５のアミノ酸配列からなる、前項［１］、［２］または［３１］記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［７９］ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームにおけるＶＨが、配列番号５のアミノ酸配列からなり、ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームにおけるＶＨが、配列番号３４または配列番号６６のアミノ酸配列からなる、前項［１］、［２］または［３２］記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［８０］ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームおよび／またはＣＤ１９に特異的に結合する第二アームが、各々、
（ａ）配列番号２６のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域の相補性決定領域１（以下、「軽鎖可変領域の相補性決定領域１」を、ＶＬ－ＣＤＲ１と略記することがある。）、
（ｂ）配列番号２７のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域の相補性決定領域２（以下、「軽鎖可変領域の相補性決定領域２」を、ＶＬ－ＣＤＲ２と略記することがある。）、および
（ｃ）配列番号２８のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域の相補性決定領域３（以下、「軽鎖可変領域の相補性決定領域３」を、ＶＬ－ＣＤＲ３と略記することがある。）を有する軽鎖可変領域（以下、「軽鎖可変領域」を、「ＶＬ」と略記することがある。）を有する、前項［１］～［７９］の何れか一項記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［８１］ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームおよび／またはＣＤ１９に特異的に結合する第二アームが、各々、配列番号２５のアミノ酸配列からなるＶＬを有する、前項［１］～［８０］の何れか一項記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［８２］ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームおよびＣＤ１９に特異的に結合する第二アームを有し、ＰＤ－１およびＣＤ１９に各々特異的に結合する二重特異性抗体またはその抗体断片であって、
（Ａ）配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４および配列番号５から選択される何れか一つのアミノ酸配列からなるＶＨならびに配列番号２５のアミノ酸配列からなるＶＬを有する、ＰＤ－１に特異的に結合する第一アーム、ならびに
（Ｂ）配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５および配列番号６６から選択される何れか一つのアミノ酸配列からなるＶＨならびに配列番号２５のアミノ酸配列からなるＶＬを有する、ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームを含む、ＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［８３］ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームおよびＣＤ１９に特異的に結合する第二アームを有し、ＰＤ－１およびＣＤ１９に各々特異的に結合する二重特異性抗体またはその抗体断片であって、当該ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームが、（１）配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４および配列番号５から選択される何れか一つのアミノ酸配列からなるＶＨならびに配列番号２５のアミノ酸配列からなるＶＬを有する、ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームのＰＤ－１への結合もしくは（２）当該ＶＨおよびＶＬからなるＰＤ－１に特異的に結合するモノクローナル抗体の可変領域のＰＤ－１への結合に交差競合する、当該ＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［８４］ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームおよびＣＤ１９に特異的に結合する第二アームを有し、ＰＤ－１およびＣＤ１９に各々特異的に結合する二重特異性抗体またはその抗体断片であって、当該ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームによるＰＤ－１への結合が、（１）配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４および配列番号５から選択される何れか一つのアミノ酸配列からなるＶＨならびに配列番号２５のアミノ酸配列からなるＶＬを有する、ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームまたは（２）当該ＶＨおよびＶＬからなるＰＤ－１に特異的に結合するモノクローナル抗体の可変領域によって交差競合される、当該ＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［８５］さらに、当該ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームが、（１）配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５および配列番号６６から選択される何れか一つのアミノ酸配列からなるＶＨならびに配列番号２５のアミノ酸配列からなるＶＬを有する、ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームのＣＤ１９への結合もしくは（２）当該ＶＨおよびＶＬからなるＣＤ１９に特異的に結合するモノクローナル抗体の可変領域のＣＤ１９への結合に交差競合する、前項［８３］または［８４］記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［８６］さらに、当該ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームによるＣＤ１９への結合が、（１）配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５および配列番号６６から選択される何れか一つのアミノ酸配列からなるＶＨならびに配列番号２５のアミノ酸配列からなるＶＬを有する、ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームもしくは（２）当該ＶＨおよびＶＬからなるＣＤ１９に特異的に結合するモノクローナル抗体の可変領域によって交差競合される、前項［８３］または［８４］記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［８７］ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームが、
（Ａ）（ａ）配列番号３５のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号３６のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号３７のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有するＶＨ、
（Ｂ）（ａ）配列番号３８のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号３９のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号４０のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有するＶＨ、
（Ｃ）（ａ）配列番号４１のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号４３のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有するＶＨ、
（Ｄ）（ａ）配列番号４４のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号４５のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号４６のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有するＶＨ、ならびに
（Ｅ）（ａ）配列番号４７のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号４８のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号４９のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有するＶＨから選択される何れか一つのＶＨを有する、前項［８３］または［８４］記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［８８］ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームのＶＨが、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５および配列番号６６から選択される何れか一つのアミノ酸配列、または当該ＶＨのアミノ酸配列と少なくとも８０％、９０％、９５％、９８％もしくは９９％同一なアミノ酸配列からなる、前項［８３］または［８４］記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［８９］ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームのＶＨが、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５および配列番号６６から選択される何れか一つのアミノ酸配列からなる、前項［８３］または［８４］記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［９０］ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームおよび／またはＣＤ１９に特異的に結合する第二アームが、
（ａ）配列番号２６のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号２７のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号２８のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ３を有するＶＬを有する、前項［８３］～［８９］の何れか一項記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［９１］ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームおよび／またはＣＤ１９に特異的に結合する第二アームが、配列番号２５のアミノ酸配列からなるＶＬを有する、前項［８３］～［８９］の何れか一項記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［９２］ＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体が、ＩｇＧ抗体である前項［１］～［９１］の何れか一項記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［９３］前項［９２］記載のＩｇＧ抗体が、ＩｇＧ_１抗体またはＩｇＧ_４抗体である前項［９２］記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［９４］前項［９２］記載のＩｇＧ抗体が、ＩｇＧ_１抗体である前項［９２］記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［９５］前項［９２］記載のＩｇＧ抗体が、ＩｇＧ_４抗体である前項［９２］記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［９６］前項［９４」記載のＩｇＧ_１抗体における２個の重鎖定常領域中のＥＵナンバリングシステムにおける２３５番目のロイシンが各々グリシンに置換され、および／または２３６番目のグリシンが各々アルギニンに置換された前項［９４］記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［９７］ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームのＶＨを有する重鎖における定常領域中のＥＵナンバリングシステムによる３５１番目のロイシンおよび３６６番目のスレオニンがともにリシンに置換され、ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームのＶＨを有する重鎖における定常領域中の３５１番目のロイシンがアスパラギン酸に置換され、かつ３６８番目のロイシンがグルタミン酸に置換された前項［９４］または［９６］記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［９８］ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームのＶＨを有する重鎖における定常領域中のＥＵナンバリングシステムによる３５１番目のロイシンがアスパラギン酸に置換され、かつ３６８番目のロイシンがグルタミン酸に置換され、ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームのＶＨを有する重鎖における定常領域中の３５１番目のロイシンおよび３６６番目のスレオニンがともにリシンに置換された前項［９４］または［９６］記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［９９］前項［９４］および［９６］～［９８］の何れか一項記載のＩｇＧ_１抗体の２個の重鎖定常領域中のＥＵナンバリングシステムによる４４７番目のリシンが各々欠如している前項［９４］および［９６］～［９８］の何れか一項記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［１００］前項［９５］記載のＩｇＧ_４抗体における２個の重鎖定常領域中のＥＵナンバリングシステムによる２２８番目のセリンが各々プロリンに置換された前項［９５］記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［１０１］ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームのＶＨを有する重鎖が、そのＣ末端に、さらに、Ｇｌｙ（グリシン）、Ｇｌｙ－Ｌｙｓ－Ｌｙｓ－Ａｌａ（配列番号６７）、Ｇｌｙ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｌｙｓ－Ａｌａ（配列番号６８）、Ｇｌｙ－Ａｒｇ－Ａｒｇ－Ａｌａ（配列番号６９）またはＧｌｙ－Ａｒｇ－Ａｌａ－Ａｒｇ－Ａｌａ（配列番号７０）を有する前項［９４］および［９６］～［９９］の何れか一項記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［１０２］ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームのＶＨを有する重鎖が、配列番号２３のアミノ酸配列からなる重鎖定常領域を含む、前項［１］～［９４］、［９６］、［９８］、［９９］および［１０１］の何れか一項記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［１０３］ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームのＶＨを有する重鎖が、配列番号２４、配列番号７１、配列番号７２、配列番号７３、配列番号７４および配列番号７５から選択される何れか一つのアミノ酸配列からなる重鎖定常領域を含む、前項［１］～［９４］、［９６］、［９８］、［９９］、［１０１］および［１０２］の何れか一項記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［１０４］ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームのＶＬを有する軽鎖および／またはＣＤ１９に特異的に結合する第二アームのＶＬを有する軽鎖が、配列番号２９のアミノ酸配列からなる軽鎖定常領域を含む、前項［１］～［１０３］の何れか一項記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［１０５］ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームおよびＣＤ１９に特異的に結合する第二アームを有し、ＰＤ－１およびＣＤ１９に各々特異的に結合する二重特異性抗体またはその抗体断片であって、
（Ａ）ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームのＶＨを有する重鎖が、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４および配列番号５から選択される何れか一つのアミノ酸配列からなるＶＨならびに配列番号２３のアミノ酸配列からなる重鎖定常領域を含み、
（Ｂ）ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームのＶＬを有する軽鎖が、配列番号２５のアミノ酸配列からなるＶＬおよび配列番号２９のアミノ酸配列からなる軽鎖定常領域を含み、
（Ｃ）ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームのＶＨを有する重鎖が、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５および配列番号６６から選択される何れか一つのアミノ酸配列からなるＶＨならびに配列番号２４のアミノ酸配列からなる重鎖定常領域を含み、および
（Ｄ）ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームのＶＬを有する軽鎖が、配列番号２５のアミノ酸配列からなるＶＬおよび配列番号２９のアミノ酸配列からなる軽鎖定常領域を含む、当該ＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［１０６］ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームが、ＰＤ－１およびＰＤ－Ｌ１間の相互作用を許容する、前項［１］～［１０５］の何れか一項記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［１０７］ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームの重鎖および軽鎖からなる複合体の等電点が、約７．４～約７．７（好ましくは、約７．５～約７．６）である、前項［１］～［１０６］の何れか一項記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［１０８］ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームの重鎖および軽鎖からなる複合体の等電点が、約８．３～約８．８（好ましくは、約８．４～約８．６）である、前項［１］～［１０７］の何れか一項記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［１０９］投与中あるいは投与後２４時間以内において、血中あるいは組織中のサイトカイン産生が十分に低減された、前項［１］～［１０８］の何れか一項記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［１１０］ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームがＰＤ－１およびＰＤ－Ｌ１間の相互作用を許容し、かつ、サイトカイン産生が十分に低減された、前項［１］～［１０８］の何れか一項記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［１１１］サイトカインが、少なくともＩＬ－２、ＩＦＮ－γまたはＴＮＦ－αである、前項［１０９］または［１１０］記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［１１２］同じＢ細胞上に各々発現するＰＤ－１およびＣＤ１９に結合することにより、Ｂ細胞の活性化を抑制する、前項［１］～［１１１］の何れか一項記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［１１３］Ｔ細胞（好ましくは、メモリーＴ細胞）の活性化を抑制する、前項［１］～［１１１］の何れか一項記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［１１４］Ｂ細胞上に発現するＣＤ１９およびＴ細胞上に発現するＰＤ－１に各々結合することにより、Ｔ細胞の活性化を抑制する、前項［１１３］記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［１１５］ＰＤ－１およびＣＤ１９が、各々ヒトＰＤ－１およびヒトＣＤ１９である、前項［１］～［１１４］の何れか一項記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［１１６］当該ＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体が、モノクローナル抗体である前項［１］～［１１５］の何れか一項記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［１１７］当該ＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体が、単離抗体である、前項［１］～［１１６］の何れか一項記載のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［１－１］前項［１］～［１１７］の何れか一項から選択されるＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片を有効成分として含む医薬組成物。
［１－２］さらに、少なくとも一つの薬学的に許容できる担体を含む、前項［１－１］記載の医薬組成物。

［２－１］前項［１］～［１１７］の何れか一項から選択されるＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片を有効成分として含む、自己免疫疾患の予防、症状進展抑制、再発抑制および／または治療剤。
［２－２］自己免疫疾患が、ベーチェット病、全身性エリテマトーデス、慢性円板状エリテマトーデス、多発性硬化症（全身性強皮症、進行性全身性硬化症）、強皮症、多発性筋炎、皮膚筋炎、結節性動脈周囲炎（結節性多発動脈炎、顕微鏡的多発血管炎）、大動脈炎症候群（高安動脈炎）、悪性関節リウマチ、関節リウマチ、若年性特発性関節炎、脊椎関節炎、混合性結合組織病、シェーグレン症候群、成人スティル病、血管炎、アレルギー性肉芽腫性血管炎、過敏性血管炎、リウマトイド血管炎、大型血管炎、ＡＮＣＡ関連血管炎（例えば、多発血管炎性肉芽腫症および好酸球性多発血管炎性肉芽腫症）、コーガン症候群、ＲＳ３ＰＥ症候群、側頭動脈炎、リウマチ性多発筋痛症、線維筋痛症、抗リン脂質抗体症候群、好酸球性筋膜炎、ＩｇＧ_４関連疾患（例えば、原発性硬化性胆管炎、自己免疫性膵炎など）、ギラン・バレー症候群、重症筋無力症、慢性萎縮性胃炎、自己免疫性肝炎、非アルコール性脂肪肝炎、原発性胆汁性肝硬変、グッドパスチャー症候群、急速進行性糸球体腎炎、巨赤芽球性貧血、自己免疫性溶血性貧血、悪性貧血、自己免疫性好中球減少症、特発性血小板減少性紫斑病、バセドウ病（グレーブス病（甲状腺機能亢進症））、橋本病、自己免疫性副腎機能不全、原発性甲状腺機能低下症、アジソン病（慢性副腎皮質機能低下症）、特発性アジソン病、Ｉ型糖尿病、緩徐進行性Ｉ型糖尿病（成人潜在性自己免疫性糖尿病）、限局性強皮症、乾癬、乾癬性関節炎、水疱性類天疱瘡、天疱瘡、類天疱瘡、妊娠性疱疹、線状ＩｇＡ水疱性皮膚症、後天性表皮水疱症、円形脱毛症、白斑、尋常性白斑、視神経脊髄炎、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、多巣性運動ニューロパチー、サルコイドーシス、巨細胞性動脈炎、筋委縮性側索硬化症、原田病、自己免疫性視神経症、特発性無精子症、習慣性流産、炎症性腸疾患（例えば、潰瘍性大腸炎、クローン病）、セリアック病、強直性脊椎炎、重症喘息、慢性蕁麻疹、移植免疫、家族性地中海熱、好酸球性副鼻腔炎、拡張型心筋症、全身性肥満細胞症または封入体筋炎である前項［２－１］記載の剤。
［２－３］前項［１］～［１１７］の何れか一項から選択されるＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片を有効成分として含む、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の予防、症状進展抑制、再発抑制および／または治療剤。
［２－４］インスリン製剤（例えば、ヒトインスリン、インスリングラルギン、インスリンリスプロ、インスリンデテミル、インスリンアスパルト等）、スルホニルウレア剤（例えば、グリベンクラミド、グリクラジド、グリメピリド等）、速攻型インスリン分泌促進薬（例えば、ナテグリニド等）、ビグアナイド製剤（例えば、メトホルミン等）、インスリン抵抗性改善薬（例えば、ピオグリタゾン等）、α－グルコシダーゼ阻害薬（例えば、アカルボース、ボグリボース等）、糖尿病性神経症治療薬（例えば、エパルレスタット、メキシレチン、イミダプリル等）、ＧＬＰ－１アナログ製剤（例えば、リラグルチド、エクセナチド、リキシセナチド等）およびＤＰＰ－４阻害剤（例えば、シタグリプチン、ビルダグリプチン、アログリプチン等）から選択される何れか一以上の薬剤とともに投与されることを特徴とし、前項［１］～［１１７］の何れか一項から選択されるＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片を有効成分として含む、Ｉ型糖尿病の予防、症状進展抑制、再発抑制および／または治療剤。
［２－５］ステロイド薬（例えば、酢酸コルチゾン、ヒドロコルチゾン、リン酸ヒドロコルチゾンナトリウム、コハク酸ヒドロコルチゾンナトリウム、酢酸フルドロコルチゾン、プレドニゾロン、酢酸プレドニゾロン、コハク酸プレドニゾロンナトリウム、ブチル酢酸プレドニゾロン、リン酸プレドニゾロンナトリウム、酢酸ハロプレドン、メチルプレドニゾロン、酢酸メチルプレドニゾロン、コハク酸メチルプレドニゾロンナトリウム、トリアムシノロン、酢酸トリアムシノロン、トリアムシノロンアセトニド、デキサメタゾン、酢酸デキサメタゾン、リン酸デキサメタゾンナトリウム、パルミチン酸デキサメタゾン、酢酸パラメタゾン、ベタメタゾン等）、インターフェロンβ－１ａ、インターフェロンβ－１ｂ、酢酸グラチラマー、ミトキサントロン、アザチオプリン、シクロホスファミド、シクロスポリン、メトトレキサート、クラドリビン、副腎皮質刺激ホルモン（ＡＣＴＨ）、コルチコトロピン、ミゾリビン、タクロリムス、フィンゴリモドおよびアレムツズマブから選択される何れか一以上の薬剤とともに投与されることを特徴とし、前項［１］～［１１７］の何れか一項から選択されるＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片を有効成分として含む、多発性硬化症の予防、症状進展抑制、再発抑制および／または治療剤。
［２－６］ステロイド薬（例えば、前項［２－５］記載のステロイド薬）、免疫抑制剤（例えば、シクロスポリン、タクロリムス、フィンゴリモド等）およびべリムマブから選択される何れか一以上の薬剤とともに投与されることを特徴とし、前項［１］～［１１７］の何れか一項から選択されるＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片を有効成分として含む、全身性エリテマトーデスの予防、症状進展抑制、再発抑制および／または治療剤。
［２－７］ステロイド薬（例えば、前項［２－５］記載のステロイド薬）、抗リウマチ薬（例えば、メトトレキサート、スルファサラジン、ブシラミン、レフルノミド、ミゾリビン、タクロリムス等）、抗サイトカイン薬（例えば、インフリキシマブ、アダリムマブ、トシリズマブ、エタネルセプト、ゴリムマブ、セルトリズマブ）およびアバタセプトから選択される何れか一以上の薬剤とともに投与されることを特徴とし、前項［１］～［１１７］の何れか一項から選択されるＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片を有効成分として含む、関節リウマチの予防、症状進展抑制、再発抑制および／または治療剤。
［２－８］前項［２－４］～［２－７］において挙げられる何れか一以上の薬剤とともに投与されることを特徴とし、前項［１］～［１１７］の何れか一項から選択されるＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片を有効成分として含む、自己免疫疾患の予防、症状進展抑制、再発抑制および／または治療剤。
［２－９］前項［２－４］～［２－７］において挙げられる何れか一以上の薬剤を投与される患者に投与されることを特徴とする、前項［２－４］～［２－８］記載の各疾患の予防、症状進展抑制、再発抑制および／または治療剤。
［２－１０］前項［２－４］～［２－７］において挙げられる何れか一以上の薬剤の投与後に投与されることを特徴とする、前項［２－４］～［２－８］記載の各疾患の予防、症状進展抑制、再発抑制および／または治療剤。
［２－１１］前項［２－４］～［２－７］において挙げられる何れか一以上の薬剤の投与前に投与されることを特徴とする、前項［２－４］～［２－８］記載の各疾患の予防、症状進展抑制、再発抑制および／または治療剤。

［３－１］前項［１］～［１１７］の何れか一項から選択されるＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片および少なくとも一つの薬学的に許容できる担体を含む、静脈内注射用製剤。
［３－２］自己免疫疾患の予防、症状進展抑制、再発抑制および／または治療のための前項［３－１］記載の静脈内注射用製剤。
［３－３］点滴用である、前項［３－１］または［３－２］記載の静脈内注射用製剤。
［４－１］前項［１］～［１１７］の何れか一項から選択されるＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体を構成する、ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームのＶＨを有する重鎖をコードする単離ポリヌクレオチドまたはその断片。
［４－２］前項［１］～［１１７］の何れか一項から選択されるＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体を構成する、ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームのＶＨをコードする単離ポリヌクレオチドまたはその断片。
［４－３］ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームのＶＨが、配列番号５６～６０および配列番号７６～８０から選択される塩基配列からなるポリヌクレオチドによってコードされる、前項［４－１］または［４－２］記載の単離ポリヌクレオチドまたはその断片。
［４－４］配列番号５６～６０および配列番号７６～８０から選択される塩基配列からなるポリヌクレオチドを含む単離ポリヌクレオチドまたはその断片。
［５－１］前項［４－１］～［４－４］の何れかに記載のポリヌクレオチドを含む発現ベクター。
［６－１］前項［５－１］記載の発現ベクターが導入され、あるいは同ベクターの導入によって形質転換された動物細胞。
［７－１］前項［１］～［１１７］の何れか一項から選択されるＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片の有効量を患者に投与することからなる、自己免疫疾患の予防、症状進展抑制、再発抑制および／または治療方法。
［８－１］自己免疫疾患の予防、症状進展抑制、再発抑制および／または治療に使用される、前項［１］～［１１７］の何れか一項から選択されるＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［９－１］自己免疫疾患の予防、症状進展抑制、再発抑制および／または治療のための医薬の製造における、前項［１］～［１１７］の何れか一項から選択されるＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片の使用。

［１０－１］配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５および配列番号６６から選択される何れか一つのアミノ酸配列からなるＶＨならびに配列番号２５のアミノ酸配列からなるＶＬを有するＣＤ１９に特異的に結合する抗体のＣＤ１９への結合に交差競合する、単離抗ＣＤ１９モノクローナル抗体またはその抗体断片。
［１０－２］単離抗ＣＤ１９モノクローナル抗体またはその抗体断片であって、当該抗体またはその抗体断片のＣＤ１９への結合が、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５および配列番号６６から選択される何れか一つのアミノ酸配列からなるＶＨならびに配列番号２５のアミノ酸配列からなるＶＬを有するＣＤ１９に特異的に結合する抗体によって交差競合される、当該抗体またはその抗体断片。
［１０－３］（Ａ）（ａ）配列番号３５のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号３６のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号３７のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有するＶＨ、
（Ｂ）（ａ）配列番号３８のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号３９のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号４０のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有するＶＨ、
（Ｃ）（ａ）配列番号４１のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号４３のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有するＶＨ、
（Ｄ）（ａ）配列番号４４のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号４５のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号４６のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有するＶＨ、ならびに
（Ｅ）（ａ）配列番号４７のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号４８のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号４９のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有するＶＨから選択される何れか一つのＶＨを有し、
（ａ）配列番号２６のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号２７のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号２８のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ３を有するＶＬを有する、単離抗ＣＤ１９モノクローナル抗体またはその抗体断片。
［１０－４］（Ａ）（ａ）配列番号３５のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号３６のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号３７のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有するＶＨ、
（Ｂ）（ａ）配列番号３８のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号３９のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号４０のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有するＶＨ、
（Ｃ）（ａ）配列番号４１のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号４３のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有するＶＨ、
（Ｄ）（ａ）配列番号４４のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号４５のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号４６のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有するＶＨ、ならびに
（Ｅ）（ａ）配列番号４７のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号４８のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号４９のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有するＶＨから選択される何れか一つのＶＨを有し、
（ａ）配列番号２６のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号２７のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号２８のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ３を有するＶＬを有し、ここで、当該ＶＨにおけるＶＨ－ＣＤＲ１、ＶＨ－ＣＤＲ２およびＶＨ－ＣＤＲ３から選択される何れか一つまたは複数のＣＤＲにおいて、その任意の１～５個のアミノ酸残基が他のアミノ酸に置換されていてもよい、単離抗ＣＤ１９モノクローナル抗体またはその抗体断片。
［１０－５］配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３および配列番号３４から選択される何れか一つのアミノ酸配列からなるＶＨ、または当該ＶＨのアミノ酸配列と少なくとも８０％、９０％、９５％、９８％もしくは９９％同一なアミノ酸配列からなるＶＨならびに配列番号２５のアミノ酸配列からなるＶＬを有する、前項［１０－１］～［１０－４］の何れか一項記載の単離抗ＣＤ１９モノクローナル抗体またはその抗体断片。
［１０－６］配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３および配列番号３４から選択される何れか一つのアミノ酸配列における１１４番目のグルタミンがアルギニンに置換された、または置換されていてもよいアミノ酸配列からなるＶＨならびに配列番号２５のアミノ酸配列からなるＶＬを有する、前項［１０－１］～［１０－４］の何れか一項記載の単離抗ＣＤ１９モノクローナル抗体またはその抗体断片。
［１０－７］配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５および配列番号６６から選択される何れか一つのアミノ酸配列からなるＶＨならびに配列番号２５のアミノ酸配列からなるＶＬを有する、前項［１０－１］～［１０－４］の何れか一項記載の単離抗ＣＤ１９モノクローナル抗体またはその抗体断片。
［１０－８］ＣＤ１９が、ヒトＣＤ１９である、前項［１０－１］～［１０－７］の何れか一項記載の単離抗ＣＤ１９モノクローナル抗体またはその抗体断片。
［１０－９］抗ＣＤ１９抗体が、ＩｇＧ抗体である前項［１０－１］～［１０－８］の何れか一項記載の単離ＣＤ１９モノクローナル抗体またはその抗体断片。
［１０－１０］前項［１０－９］記載のＩｇＧ抗体が、ＩｇＧ_１抗体またはＩｇＧ_４抗体である前項［１０－９］記載の単離抗ＣＤ１９モノクローナル抗体またはその抗体断片。
［１０－１１］前項［１０－９］記載のＩｇＧ抗体が、ＩｇＧ_１抗体である前項［１０－９］記載の単離抗ＣＤ１９モノクローナル抗体またはその抗体断片。
［１０－１２］前項［１０－９］記載のＩｇＧ抗体が、ＩｇＧ_４抗体である前項［１０－９］記載の単離抗ＣＤ１９モノクローナル抗体またはその抗体断片。
［１０－１３］（１）当該重鎖定常領域中の３５１番目のロイシンがアスパラギン酸に置換され、かつ３６８番目のロイシンがグルタミン酸に置換された、または（２）当該重鎖定常領域中の３５１番目のロイシンおよび３６６番目のスレオニンがともにリシンに置換された、前項［１０－１］～［１０－１１］の何れか一項記載の単離抗ＣＤ１９モノクローナル抗体またはその抗体断片。
［１０－１４］当該重鎖のＣ末端に、さらに、Ｇｌｙ（グリシン）、Ｇｌｙ－Ｌｙｓ－Ｌｙｓ－Ａｌａ（配列番号６７）、Ｇｌｙ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｌｙｓ－Ａｌａ（配列番号６８）、Ｇｌｙ－Ａｒｇ－Ａｒｇ－Ａｌａ（配列番号６９）またはＧｌｙ－Ａｒｇ－Ａｌａ－Ａｒｇ－Ａｌａ（配列番号７０）を有する、前項［１０－１］～［１０－１３］の何れか一項記載の単離抗ＣＤ１９モノクローナル抗体またはその抗体断片。
［１０－１５］当該重鎖が、配列番号２４、配列番号７１、配列番号７２、配列番号７３、配列番号７４および配列番号７５から選択される何れか一つのアミノ酸配列からなる重鎖定常領域を含む、前項［１０－１］～［１０－１４］の何れか一項記載の単離抗ＣＤ１９モノクローナル抗体またはその抗体断片。
［１１－１］前項［１］～［１１７］の何れか一項から選択されるＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片を有効成分として含む、自己反応性Ｂ細胞介在性疾患の予防、症状進展抑制、再発抑制および／または治療剤。
［１１－２］自己反応性Ｂ細胞介在性疾患が、全身性エリテマトーデス、グレーブス病、重症筋無力症、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性血小板減少症、喘息、クリオグロブリン血症、原発性胆管硬化症または悪性貧血である前項［１１－１］記載の予防、症状進展抑制、再発抑制および／または治療剤。
［１２－１］前項［１］～［１１７］の何れか一項から選択されるＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片を有効成分として含む、自己反応性Ｂ細胞抑制剤。
［１２－２］自己反応性Ｂ細胞抑制が、イムノグロブリン産生抑制である、前項［１２－１］記載の自己反応性Ｂ細胞抑制剤。
［１２－３］当該イムノグロブリンが、ＩｇＧまたはＩｇＭである前項［１２－２］記載の自己反応性Ｂ細胞抑制剤。
［１３－１］前項［１］～［１１７］の何れか一項から選択されるＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片を有効成分として含む、Ｔ細胞活性化抑制剤。
［１３－２］当該Ｔ細胞活性化抑制が、サイトカイン産生抑制である、前項［１３－１］記載のＴ細胞活性化抑制剤。
［１３－３］当該Ｔ細胞活性化抑制が、メモリーＴ細胞抑制である、前項［１３－１］または［１３－２］記載のＴ細胞活性化抑制剤。
［１４－１］前項［１］～［１１７］の何れか一項から選択されるＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片の有効量を患者に投与することを含む、自己反応性Ｂ細胞抑制またはＴ細胞活性化抑制方法。
［１５－１］自己反応性Ｂ細胞抑制またはＴ細胞活性化抑制に使用される、前項［１］～［１１７］の何れか一項から選択されるＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片。
［１６－１］自己反応性Ｂ細胞抑制剤またはＴ細胞活性化抑制剤の製造における、前項［１］～［１１７］の何れか一項から選択されるＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片の使用。

本発明のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体は、ＰＤ－１およびＰＤ－Ｌ１間の相互作用を許容し、自己免疫疾患の予防、症状進展抑制、再発抑制および／または治療の効果の増強あるいは持続が期待できる。

共通軽鎖のＶＬおよび定常領域のアミノ酸配列を示す。共通軽鎖のＶＬの各ＣＤＲのアミノ酸配列を示す。生殖細胞系列型Ｖ遺伝子ＩＧＨＶ７－４－１およびＩＧＨＶ５－５１によって各々コードされるアミノ酸配列を示す。ＰＤ－１に特異的に結合する抗体（以下、抗ＰＤ－１抗体と略記することがある。）の各クローンのＶＨと、生殖細胞系列型遺伝子ＩＧＨＶ７－４－１およびＪＨ６ｃとの配列アラインメントを示す。図中、各クローンのアミノ酸配列中の“－”は、対応する生殖細胞系列型遺伝子ＩＧＨＶ７－４－１あるいはＪＨ６ｃのアミノ酸配列と同一であるアミノ酸を表わし、アミノ酸の略字が記載されている部分は、同生殖細胞系列型遺伝子のアミノ酸配列と相違するアミノ酸を表わす。ＣＤ１９に特異的に結合する抗体（以下、「抗ＣＤ１９抗体」と略記することがある。）の各クローンのＶＨと、生殖細胞系列型遺伝子ＩＧＨＶ５－５１にコードされるアミノ酸配列との配列アラインメントを示す。図中の各表記は、図４のものと同じ意味を表わす。抗ＰＤ－１抗体各クローンのＶＨのアミノ酸配列を示す。抗ＰＤ－１抗体各クローンのＶＨ中の各ＣＤＲのアミノ酸配列を示す。抗ＣＤ１９抗体各クローンのＶＨのアミノ酸配列を示す。抗ＣＤ１９抗体各クローンのＶＨ中の各ＣＤＲのアミノ酸配列を示す。ＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体の各重鎖定常領域のアミノ酸配列を示す。ＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体各クローンのＰＤ－１およびＣＤ１９に対する結合活性を各々確認したBiacore測定結果を示す。ＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体各クローンＣＤ１９－１（Ｂｉ）～ＣＤ１９－３（Ｂｉ）のＣＤ１９に対する結合性を各々確認したフローサイトメトリーを示す。ＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体各クローンＣＤ１９－４（Ｂｉ）およびＣＤ１９－５（Ｂｉ）のＣＤ１９に対する結合性を各々確認したフローサイトメトリーを示す。ＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体各クローンＣＤ１９－１（Ｂｉ）～ＣＤ１９－３（Ｂｉ）のＰＤ－１に対する結合性を各々確認したフローサイトメトリーを示す。ＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体各クローンＣＤ１９－４（Ｂｉ）およびＣＤ１９－５（Ｂｉ）のＰＤ－１に対する結合性を各々確認したフローサイトメトリーを示す。ＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体各クローンＣＤ１９－６（Ｂｉ）のＰＤ－１およびＣＤ１９各々に対する結合性を確認したフローサイトメトリーを示す。ＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体各クローンのＰＤ－１およびＣＤ１９への同時結合性を各々確認したフローサイトメトリーを示す。ＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体各クローンのＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１相互作用への影響を各々確認したフローサイトメトリーを示す。インビトロにおけるヒトＢ細胞活性化時のＩｇＭ産生に対するＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体各クローンの作用結果を各々示す。なお、図中の「Ｃｔｒｌ」はコントロール群を表わす。インビボにおけるヒトＢ細胞活性化時のＩｇＧ_２産生に対するＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体各クローン（ＣＤ１９－１（Ｂｉ）～ＣＤ１９－４（Ｂｉ））の作用結果を各々示す。なお、図中の「Ｃｔｒｌ」はコントロール群を表わす。インビボにおけるヒトＢ細胞活性化時のＩｇＧ_２産生に対するＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体クローンＣＤ１９－５（Ｂｉ）およびＣＤ１９－６（Ｂｉ）の作用結果を各々示す。なお、図中の「Ｃｔｒｌ」はコントロール群を表わす。ヒト末梢血単核細胞からのサイトカイン産生に対するＰＤ－１／ＣＤ３二重特異性抗体クローンＣＤ１９－６（Ｂｉ）の作用結果を示す。なお、図中の「Ｍｅｄｉｕｍ」はコントロール群を表わす。

ＰＤ－１（ＰｒｏｇｒａｍｍｅｄＣｅｌｌＤｅａｔｈ－１）は、ヒトにおいては、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号NP_005009で示されるアミノ酸配列から成る膜型タンパク質である。本明細書において「ＰＤ－１」と記載される場合、特に限定しない限り、そのすべてのアイソフォーム、および本発明にかかる「ＰＤ－１に特異的に結合する第一アーム」のエピトープが保存された、それら改変体をも含むものとして使用される場合がある。本発明において、ＰＤ－１として好ましくは、ヒトＰＤ－１である。

ＣＤ１９は、ヒトにおいては、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号NP_001171569あるいはNP_001761で示されるアミノ酸配列から成る、Ｂ細胞に発現する膜タンパクであり、Ｂ細胞受容体複合体と共にＢ細胞へ刺激を伝える分子である。本明細書において「ＣＤ１９」と記載される場合、特に限定しない限り、本発明にかかる「ＣＤ１９に特異的に結合する第二アーム」のエピトープが保存された、それら改変体をも含むものとして使用される場合がある。本発明において、ＣＤ１９として好ましくはヒトＣＤ１９である。

本明細書において「単離」とは、宿主細胞から抽出された、複数ないし無数の成分が含まれる夾雑物の中から同定、分離および／または精製されることにより、実質的に単一の純粋な成分となることを意味する。

本明細書において「モノクローナル抗体」とは、同一の特定の抗原に対して結合する、実質的に均一である抗体集団から得られた抗体を意味する。

本明細書において「二重特異性抗体」とは、二つの異なる抗原分子あるいはエピトープに対する結合特異性を一分子に備え持つ抗体を意味し、「二重特異性モノクローナル抗体」とは、さらに、実質的に均一である抗体集団から得られた二重特異性抗体を意味する。

本発明は、ＰＤ－１およびＣＤ１９に各々特異的に結合することができる二重特異性抗体（本明細書において、「ＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体」と略記することがある。）に関する。本発明において、ＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体として好ましくは、ＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性モノクローナル抗体であり、より好ましくは、単離ＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性モノクローナル抗体であり、さらに好ましくは、単離ヒトＰＤ－１／ヒトＣＤ１９二重特異性モノクローナル抗体である。ここで、「単離ヒトＰＤ－１／ヒトＣＤ１９二重特異性モノクローナル抗体」とは、ヒトＰＤ－１とヒトＣＤ１９に対する、単離された二重特異性モノクローナル抗体を意味する。

ここで、二重特異性抗体の形態には、例えば、ダイアボディ、二重特異性ｓｃ（Ｆｖ）_２、二重特異性ミニボディ、二重特異性Ｆ（ａｂ′）_２、二重特異性ハイブリッド抗体、共有結合型ダイアボディ（二重特異性ＤＡＲＴ）、二重特異性（ＦｖＣｙｓ）_２、二重特異性Ｆ（ａｂ′－ジッパー）_２、二重特異性（Ｆｖ－ジッパー）_２、二重特異性三鎖抗体および二重特異性ｍＡｂ^２等がある。

ダイアボディとは、異なる抗原を認識するＶＨ、ＶＬ同士がペプチドリンカーで連結された一本鎖ペプチドの二量体である（Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1993), Vol. 90, No.14: p.6444-6448参照）。

二重特異性ｓｃ（Ｆｖ）_２とは、異なる抗原を認識する２つの抗体の２組のＶＨ／ＶＬがペプチドリンカーを介して連続する一本鎖の形態で産生されるよう改変された低分子化抗体である（J. Biological Chemistry (1994), Vol. 269: p.199-206参照）。

二重特異性Ｆ（ａｂ′）_２とは、異なる２つの抗原を認識する抗体のＦａｂ′断片が、ジスルフィド結合等により共有結合した低分子化抗体である。

二重特異性ミニボディとは、各々異なる抗原を認識するｓｃＦｖに抗体の定常領域ＣＨ３ドメインが連結されるよう改変された低分子抗体断片を、そのＣＨ３ドメイン上のジスルフィド結合等によって共有結合した低分子化抗体である（Biochemistry (1992), Vo.31, No.6, p.1579-1584参照）。

二重特異性ハイブリッド抗体とは、異なる２つの抗原を認識する抗体の重鎖／軽鎖複合体がジスルフィド結合等によって共有結合したインタクトな抗体である。

本発明において、好ましい二重特異性抗体の形態としては、二重特異性ハイブリッド抗体である。

二重特異性ハイブリッド抗体は、例えば、ハイブリッドハイブリドーマ法（US4474893参照）で作製されたハイブリドーマから産生させることができる。また、異なる抗原を認識する抗体の重鎖および軽鎖を各々コードする計４種類のｃＤＮＡを哺乳動物細胞に共発現ならびに分泌させて製造することができる。

本発明において使用されるモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ法（例えば、KohlerおよびMilsteinら， Natur (1975)， Vol. 256, p.495-97、Hongoら, Hybridoma (1995), Vol. 14, No. 3, p.253-260、Harlowら, Antibodies: A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press (1988), Vol. 2)およびHammerlingら, Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas, p.563-681(Elsevier, N.Y., 1981)参照）、組換えＤＮＡ法（例えば、US4816567参照）、ファージディスプレイ方法（例えば、LadnerらのUS5223409、US5403484およびUS5571698、DowerらのUS5427908およびUS5580717、McCaffertyらのUS5969108およびUS6172197およびGriffithsらのUS5885793、US6521404、US6544731、US6555313、US6582915およびUS6593081参照）で作製することができる。

抗体あるいはモノクローナル抗体は、ヒトに投与される場合には、その抗原性を低減あるいは消失させるために、キメラ抗体、ヒト化抗体あるいは完全ヒト型抗体の形態で作製することができる。

「キメラ抗体」は、可変領域配列と定常領域配列が別々の哺乳動物に由来する抗体を意味し、例えば、可変領域配列がマウス抗体に由来し、定常領域配列がヒト抗体に由来するものがある。キメラ抗体は、上記のハイブリドーマ法、組換えＤＮＡ法あるいはファージディスプレイ方法で単離された抗体産生ハイブリドーマから、公知の手法により単離された抗体可変領域をコードする遺伝子を、公知の方法を用いて、ヒト由来の抗体定常領域をコードする遺伝子に連結させ、作製することができる（例えば、CabillyらのUS4816567参照）。

「ヒト化抗体」とは、マウスのような別の哺乳動物の生殖細胞型に由来する相補性決定領域（ＣＤＲ）配列をヒトフレームワーク配列上に移植した抗体を意味する。ヒト化抗体の場合も、上記方法で単離された抗体産生ハイブリドーマから、公知の手法により単離された抗体ＣＤＲ領域をコードする遺伝子を、公知の方法を用いて、ヒト由来の抗体フレームワーク領域をコードする遺伝子に連結させ、作製することができる（例えば、WinterのUS5225539およびUS5530101、QueenらのUS5585089号およびUS6180370参照）。

「ヒト抗体」または「完全ヒト型抗体」とは、フレームワーク領域およびＣＤＲ領域からなる可変領域ならびに定常領域の両方ともにヒト生殖細胞型免疫グロブリン配列に由来する抗体を意味する。本発明において使用されるヒト抗体は、ヒト抗体を産生するように形質転換されたマウス、例えば、Ｈｕｍａｂマウス（例えば、LonbergとKayらによるUS5545806、US5569825、US5625126、US5633425、US5789650、US5877397、US5661016、US5814318、US5874299およびUS5770429参照）、ＫＭマウス（例えば、IshidaらのWO2002/43478参照）、Ｘｅｎｏマウス（例えば、US5939598、US6075181、US6114598、US6150584およびUS6162963参照）またはＴｃマウス（例えば、Tomizukaら, Proc. Natl. Acad. Sci. USA (2000), p.722-727参照）を用いた方法で作製することができる。また、免疫によりヒト抗体応答が起こるように、ヒト免疫細胞を再構築したＳＣＩＤマウス（例えば、WilsonらのUS5476996およびUS5698767参照）を用いても調製できる。さらに、本発明において使用されるヒト抗体は、上記したファージディスプレイ方法でも作製することができる。

本明細書において、ＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体の「抗体断片」とは、全長抗体の一部であって、ＰＤ－１に対する抗原結合部分およびＣＤ１９に対する抗原結合部分を有する抗体であり、例えば、Ｆ（ａｂ′）₂などが挙げられる。ここで、抗原結合部分とは、抗体がその抗原に結合することができる最少単位を意味し、例えば、ＶＨおよびＶＬにある各々３つずつのＣＤＲとそれらＣＤＲの組合せにより目的の抗原が認識できるようＣＤＲを配置するフレームワーク領域から構成される。

本明細書において、「共通軽鎖」とは、異なる２種以上の重鎖と会合し、各々の抗原に対して結合能を示し得る軽鎖を意味する(De Wildt RMら、J. Mol. Biol. (1999), Vol. 285, p.895-901、De Kruifら、J. Mol. Biol. (2009), Vol. 387, p.548-58、WO2004/009618、WO2009/157771およびWO2014/051433)。そのような共通軽鎖として好ましくは、例えば、ヒトκ軽鎖ＩｇＶκ１－３９＊０１／ＩＧＪκ１＊０１（ＩＭＧＴデータベースによる命名法）生殖細胞系列型遺伝子によりコードされる軽鎖（以下、ＩＧＶＫ１－３９／ＪＫ１共通軽鎖と略記することがある。）であり、より好ましくは、例えば、配列番号２６のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ１、配列番号２７のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ２および配列番号２８のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ３を含むＶＬを有する当該軽鎖、さらに好ましくは、例えば、配列番号２５のアミノ酸配列からなるＶＬを有する当該軽鎖である。また、共通軽鎖の定常領域として好ましくは、配列番号２９のアミノ酸配列からなる軽鎖定常領域が挙げられる。本発明において使用される共通軽鎖のＶＬおよび定常領域の各々アミノ酸配列を図１に示し、その可変領域の各ＣＤＲのアミノ酸配列を図２に示す。

本明細書において「アイソタイプ」とは、重鎖定常領域遺伝子によってコードされる抗体クラス（例えば、ＩｇＭまたはＩｇＧ）を称するものとして使用される。本発明のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体として好ましいアイソタイプは、ＩｇＧであり、より好ましくはＩｇＧ_１またはＩｇＧ_４である。ここで、ＩｇＧ_１としては、Ｆｃ受容体への結合が消失あるいは減弱したものが好ましい。具体的には、その重鎖定常領域の任意のアミノ酸を置換、欠損あるいは挿入することによって、Ｆｃ受容体への結合が消失あるいは減弱されたＩｇＧ_１抗体を得ることができる。例えば、二重特異性抗体の各々二つの重鎖定常領域あるいはヒンジ領域上において、ＥＵナンバリングシステムによる２３５番目のロイシンがグリシンに置換され、および／または２３６番目のグリシンがアルギニンに置換された抗体が挙げられる。また、抗体の不均一性を低減させるために、Ｃ末端のアミノ酸、例えば、ＥＵナンバリングシステムによる４４７番目のリシンを欠損した抗体が好ましい。さらに、二重特異性抗体がＩｇＧ_４である場合、抗体分子内におけるスワッピングを抑制するように、その重鎖定常領域の任意のアミノ酸が置換、欠損あるいは挿入した改変体がより好ましい。例えば、ヒンジ領域に位置する、ＥＵナンバリングシステムによる２２８番目のセリンをプロリンに置換した抗体が好ましい。なお、本明細書において、抗体の可変領域のＣＤＲとフレームワークに割り当てられるアミノ酸位置はＫａｂａｔナンバリングシステムにしたがって規定される場合がある（Sequences of Proteins of Immunological Interest（National Institute of Health, Bethesda, Md., (1987)および(1991)参照）。また、定常領域のアミノ酸はＫａｂａｔのアミノ酸位置に準じたＥＵナンバリングシステム（Sequences of proteins of immunological interest, NIH Publication No. 91-3242参照）に従って表わされる。

本発明のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体のＦｃ領域は、二つの異なる重鎖が会合し易いように、その領域の任意のアミノ酸が置換されていてもよい。好ましい態様としては、例えば、ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームのＶＨを有する重鎖上の定常領域のＥＵナンバリングシステムによる３５１番目のロイシンがリシンに置換され、かつ３６６番目のスレオニンがリシンに置換され、ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームのＶＨを有する重鎖における定常領域中の３５１番目のロイシンがアスパラギン酸に置換され、かつ３６８番目のロイシンがグルタミン酸に置換されたＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体が挙げられる。また、ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームのＶＨを有する重鎖における定常領域中のＥＵナンバリングシステムによる３５１番目のロイシンがアスパラギン酸に置換され、かつ３６８番目のロイシンがグルタミン酸に置換され、ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームのＶＨを有する重鎖における定常領域中の３５１番目のロイシンがリシンに置換され、かつ３６６番目のスレオニンがリシンに置換されたＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体も挙げられる。

ＰＤ－１に特異的に結合する第一アーム
本明細書において、「ＰＤ－１に特異的に結合する第一アーム」（以下、「第一アーム」と略記することがある。）は、抗体あるいは抗体断片の一部に含まれるか、あるいは一部ではなく、それ自体単体として存在するか否かにかかわらず、少なくとも、ＰＤ－１に特異的に結合する抗体のＶＨを含み、かつＰＤ－１に特異的に結合することができる抗体部分を意味し、例えば、このような第一アームは、抗ＰＤ－１抗体のＶＨおよび当該抗ＰＤ－１抗体を構成する共通軽鎖のＶＬからなり、さらに、第一アームには、当該ＶＨおよびＶＬを含む抗体のＦａｂ部も含まれる。ここで、「ＰＤ－１に特異的に結合する」とは、少なくとも、１ｘ１０^－５Ｍ、好ましくは１ｘ１０^－７Ｍ、より好ましくは１ｘ１０^－９Ｍより高い親和性（解離定数（Ｋｄ値））を有する結合活性でＰＤ－１に対して直接結合することができ、少なくとも、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ－４およびＩＣＯＳなどの、所謂、ＣＤ２８ファミリー受容体に属するほかの受容体メンバーには実質的に結合しない特徴として使用される。また、「ＰＤ－１に特異的に結合する抗体」あるいは「抗ＰＤ－１抗体」における「抗体」とは、全長抗体、すなわち、ジスルフィド結合で連結された２つの重鎖および２つの軽鎖からなる完全長の抗体を意味するが、好ましくは、そのモノクローナル抗体である。

ここで、「ＰＤ－１に特異的に結合する第一アーム」としては、例えば、（ａ）ＨＹＪ^１ＬＨで表わされるアミノ酸配列［配列中、Ｊ^１は、Ｇ（グリシン）またはＡ（アラニン）を表わし、その他のアルファベットは、各々アミノ酸の一文字略号を表わす。］からなるＶＨ－ＣＤＲ１、（ｂ）ＷＪ^２ＮＴＮＴＵ^２ＮＰＴＸ^２ＡＱＧＦＴＧで表わされるアミノ酸配列［配列中、Ｊ^２は、Ｌ（ロイシン）またはＩ（イソロイシン）を表わし、Ｕ^２は、Ｅ（グルタミン酸）またはＧ（グリシン）を表わし、Ｘ^２は、Ｆ（フェニルアラニン）またはＹ（チロシン）を表わし、その他のアルファベットは、各々上記と同じ意味を表わす。］からなるＶＨ－ＣＤＲ２、ならびに（ｃ）ＧＤＪ^３ＶＶＰＴＴＩＷＮＹＹＵ^３Ｘ^３ＭＺ^３Ｖで表わされるアミノ酸配列［配列中、Ｊ^３は、Ｍ（メチオニン）またはＬ（ロイシン）を表わし、Ｕ^３は、Ｈ（ヒスチジン）またはＹ（チロシン）を表わし、Ｘ^３は、Ｆ（フェニルアラニン）またはＹ（チロシン）を表わし、Ｚ^３は、Ｄ（アスパラギン酸）またはＥ（グルタミン酸）を表わし、その他のアルファベットは、各々上記と同じ意味を表わす。］からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有するＶＨを有するものが挙げられる。

また、「ＰＤ－１に特異的に結合する第一アーム」の別の態様としては、例えば、
（１ｂ）配列番号６のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および配列番号８のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を含むＶＨ、
（２ｂ）配列番号９のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、配列番号１０のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および配列番号１１のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を含むＶＨ、
（３ｂ）配列番号１２のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、配列番号１３のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および配列番号１４のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を含むＶＨ、
（４ｂ）配列番号１５のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、配列番号１６のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および配列番号１７のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を含むＶＨ、ならびに
（５ｂ）配列番号１８のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、配列番号１９のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および配列番号２０のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を含むＶＨから選択される何れか一つのＶＨを有するものが挙げられる。

さらに、本発明における、「ＰＤ－１に特異的に結合する第一アーム」には、上記（１ｂ）～（５ｂ）から選択される何れか一つのＶＨにおける各々のＶＨ－ＣＤＲにおいて、その任意の１～５個のアミノ酸残基が他のアミノ酸（好ましくは、その保存的アミノ酸）に置換され、かつ、当該アミノ酸に置換されていない元の第一アームによるＰＤ－１への結合活性と実質的に同等の結合活性を有するものも含まれる。例えば、ＶＨ－ＣＤＲ１の場合には、１個のアミノ酸残基が他のアミノ酸（好ましくは、その保存的アミノ酸）に置換され、ＶＨ－ＣＤＲ２またはＶＨ－ＣＤＲ３の場合には、各々１～５個のアミノ酸残基が他のアミノ酸（好ましくは、その保存的アミノ酸）に置換されたものが挙げられる。また、図４に示されるように、ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームに各々対応する抗ＰＤ－１抗体クローンの各ＣＤＲにおいて、各クローン間で相違する各アミノ酸またはそれらの任意の複数の組み合わせは当該クローン間において相互に置換可能である。ここで、保存的アミノ酸による置換は、類似する側鎖を有する残基の可換性を意味し、例えば、脂肪族側鎖を有するアミノ酸の群においては、グリシン、アラニン、バリン、ロイシンおよびイソロイシンであり、脂肪族ヒドロキシル側鎖を有するアミノ酸の群においては、セリンおよびトレオニンであり、アミド含有側鎖を有するアミノ酸の群においては、アスパラギンおよびグルタミンであり、芳香族側鎖を有するアミノ酸の群においては、フェニルアラニン、チロシンおよびトリプトファンであり、塩基性側鎖を有するアミノ酸の群においては、リシン、アルギニンおよびヒスチジンであり、硫黄含有側鎖を有するアミノ酸の群においては、システインおよびメチオニンである。好ましい保存的アミノ酸による置換の例としては、バリン、ロイシンおよびイソロイシン間での置換、フェニルアラニンおよびチロシン間での置換、リシンおよびアルギニン間での置換、アラニンおよびバリン間での置換ならびにアスパラギンおよびグルタミン間での置換が挙げられる。また、ここで、上記の「当該アミノ酸に置換されていない元の第一アームによるＰＤ－１への結合活性と実質的に同等の結合活性を有する」とは、当該アミノ酸に置換された第一アームのＰＤ－１への結合活性が、当該アミノ酸に置換されていない元の第一アームの結合活性の９５％以上であり、好ましくは９８％以上であり、より好ましくは９９％以上であることを意味する。

さらに、本発明における「ＰＤ－１に特異的に結合する第一アーム」には、そのＶＨにおいて、上述の特定のアミノ酸配列を有する各ＶＨ－ＣＤＲを含み、そのＶＨのフレームワークのアミノ酸配列が、特定の生殖細胞系列型遺伝子もしくはその体細胞突然変異を受けた当該遺伝子にコードされるＶＨを有するものも含まれる。例えば、上記（１ｂ）～（５ｂ）から選択される何れかで示されるＶＨは、生殖細胞系列型Ｖ遺伝子がＩＧＨＶ７－４－１であって、生殖細胞系列型Ｊ遺伝子がＪＨ６ｃであるＶＤＪ組換遺伝子もしくはその体細胞突然変異を受けた当該遺伝子にコードされ得る。ここで、生殖細胞系列型のＶ遺伝子ＩＧＨＶ７－４－１によって各々コードされるアミノ酸配列は、配列番号２１のアミノ酸配列に対応する（図３）。

本発明のＰＤ－１に特異的に結合する第一アームのＶＨのフレームワークは、生殖細胞系列型のＶＤＪ組換遺伝子が体細胞突然変異を受けた当該遺伝子によってコードされる場合がある。例えば、生殖細胞系列型Ｖ遺伝子がＩＧＨＶ７－４－１である、上記（１ｂ）～（５ｂ）から選択される何れかで示されるＶＨのＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３は、図４に示すアミノ酸位置において、ＩＧＨＶ７－４－１遺伝子がコードするアミノ酸配列と相違するため、当該各位置において体細胞突然変異を受けている。例えば、ＦＲ１領域については、配列番号２１のアミノ酸配列中の位置１３のリシンがグルタミンに、位置１６のアラニンがバリンに、または位置１９のリシンがメチオニンに各々置換されるか、あるいはそれらの任意の複数の組み合わせで置換されていてもよい。ＦＲ２領域については、配列番号２１のアミノ酸配列中の位置３７のバリンがロイシンに置換されてもよい。ＦＲ３領域については、配列番号２１のアミノ酸配列中の位置７７のセリンがスレオニンに、位置８４のシステインがセリンもしくはアスパラギンに各々置換されるか、あるいは任意の複数の組み合わせで置換されてもよい。また、上記（１ｂ）～（５ｂ）から選択される何れかで示されるＶＨのＦＲ４領域については、Ｊ遺伝子ＪＨ６ｃに由来するＦＲ４領域アミノ酸配列（Ｔｒｐ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｔｈｒ＊－Ｖａｌ－Ｔｈｒ－Ｖａｌ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ）（配列番号４１）中のリシン（Ｌｙｓ）がグルタミンもしくはアスパラギンに、および／または＊印のスレオニン（Ｔｈｒ）がロイシンに置換されていてもよい。上記何れかのアミノ酸置換の組み合わせを有する各々ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４も、ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームの機能に実質的な影響を与えず、フレームワークとして使用することができる。

さらに、本発明における「ＰＤ－１に特異的に結合する第一アーム」には、上述の特定のアミノ酸配列を有する各ＣＤＲを含み、かつ、そのＶＨのＦＲのアミノ酸配列が、特定の生殖細胞系列型遺伝子もしくはその体細胞突然変異を受けた当該遺伝子にコードされるものも含まれる。例えば、そのような第一アームとして、配列番号１～５から選択されるアミノ酸配列からなるＶＨを有するものが挙げられる。

さらに、そのような「ＰＤ－１に特異的に結合する第一アーム」には、例えば、配列番号１～５から選択される何れか一つのアミノ酸配列と少なくとも８０％同一であり、好ましくは少なくとも９０％同一であり、より好ましくは少なくとも９５％同一であり、さらに好ましくは少なくとも９８％同一であり、さらにより好ましくは少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列からなるＶＨを有し、かつ、元の第一アームのＶＨのアミノ酸配列との相違がＰＤ－１への結合活性に実質的に影響しないもの（以下、相同第一アームと略記することがある。）も含まれる。ここで、アミノ酸配列に関する同一性の比較において使用される「％同一」とは、２つの配列を整列させ、参照するアミノ酸配列（ここで、最大のパーセントの同一性を達成するために必要な場合には、ギャップを導入した後の参照するアミノ酸配列）と同一であるアミノ酸配列の百分率と定義される。また、ここで、「元の第一アームのＶＨのアミノ酸配列との相違がＰＤ－１への結合活性に実質的に影響しない」とは、相同第一アームのＰＤ－１への結合活性が元の第一アームの当該結合活性の９５％以上であり、好ましくは９８％以上であり、より好ましくは９９％以上であることを意味する。

さらに別の態様において、本発明における「ＰＤ－１に特異的に結合する第一アーム」には、（１）上記（１ｂ）～（５ｂ）から選択される何れかで示されるＶＨあるいは配列番号１～５から選択される何れか一つのアミノ酸配列からなるＶＨおよび本明細書における共通軽鎖のＶＬ（好ましくは、配列番号２５のアミノ酸配列からなるＶＬ）を有する第一アームのＰＤ－１への結合または（２）当該ＶＨおよびＶＬからなるＰＤ－１に特異的に結合するモノクローナル抗体の可変領域のＰＤ－１への結合に交差競合する抗ＰＤ－１抗体の可変領域（ここで、当該可変領域は、それを構成するＶＨおよびＶＬを含む。）を有するものも含まれ、また、ＰＤ－１への結合が、（３）上記（１ｂ）～（５ｂ）から選択される何れかで示されるＶＨあるいは配列番号１～５から選択される何れか一つのアミノ酸配列からなるＶＨおよび当該共通軽鎖のＶＬを有する第一アームまたは（４）当該ＶＨおよびＶＬからなるＰＤ－１に特異的に結合するモノクローナル抗体の可変領域により交差競合される抗ＰＤ－１抗体の可変領域を有するものも含まれる。ここで、「ＰＤ－１への結合に交差競合する」とは、本明細書において例示された第一アームと同一のあるいは一部重複するエピトープに結合することによって、当該第一アームのＰＤ－１への結合をその程度に関わらず阻害する、あるいは当該例示された第一アームと同一のあるいは一部重複するエピトープに結合する抗体によるＰＤ－１への結合が、当該例示された第一アームによってその程度に関わらず阻害されることを意味し、交差競合するかどうかは競合結合アッセイによって評価することができる。例えば、ビアコア分析、ＥＬＩＳＡアッセイ、フローサイトメトリー、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）、蛍光エネルギー転移測定法（ＦＲＥＴ）や蛍光微量測定技術（ＦＭＡＴ（登録商標））を用いて判断することができる。

例えば、上記（５ｂ）に示されるＶＨおよび当該共通軽鎖のＶＬを有する第一アームによるＰＤ－１への結合に交差競合するものとして、例えば、上記（１ｂ）～（４ｂ）から選択される何れかで示されるＶＨおよび当該共通軽鎖のＶＬ（好ましくは、配列番号２６のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ１、配列番号２７のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ２および配列番号２８のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ３を有するＶＬ）を有する第一アーム、さらには、配列番号１～４から選択されるアミノ酸配列からなるＶＨおよび当該共通軽鎖のＶＬ（好ましくは、配列番号２５のアミノ酸配列からなるＶＬ）を有する第一アームが挙げられる。

また、例えば、上記（１ｂ）～（４ｂ）から選択される何れかで示されるＶＨあるいは配列番号１～４から選択されるアミノ酸配列からなるＶＨおよび当該共通軽鎖のＶＬを有する第一アームによるＰＤ－１への結合に交差競合するものとして、例えば、上記（５ｂ）に示されるＶＨおよび当該共通軽鎖のＶＬ（好ましくは、配列番号２６のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ１、配列番号２７のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ２および配列番号２８のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ３を有するＶＬ）を有する第一アーム、さらには、配列番号５のアミノ酸配列からなるＶＨおよび当該共通軽鎖のＶＬ（好ましくは、配列番号２５のアミノ酸配列からなるＶＬ）を有する第一アームが挙げられる。

ここで、本発明における「ＰＤ－１に特異的に結合する第一アーム」として好ましくは、上記（１ｂ）～（５ｂ）で示されるＶＨを有する第一アームが挙げられ、さらに、この好ましい第一アームには、上述したように、そのＶＨの各ＣＤＲにおいて、その任意の１～５個のアミノ酸残基が他のアミノ酸（好ましくは、その保存的アミノ酸）に置換され、かつ、そのアミノ酸置換がＰＤ－１への結合活性に実質的に影響しないものも含まれ、また、さらに、上述したように、ＶＨのフレームワークのアミノ酸配列が、生殖細胞系列型Ｖ遺伝子ＩＧＨＶ７－４－１もしくは同Ｊ遺伝子ＪＨ６ｃまたはそれらの体細胞突然変異を受けた当該遺伝子にコードされるＶＨを有するものも含まれる。そして、当該第一アームとしてより好ましくは、配列番号１～５から選択される何れか一つのアミノ酸配列からなるＶＨを有するものが挙げられる。

さらに、本発明における「ＰＤ－１に特異的に結合する第一アーム」は、本明細書における共通軽鎖のＶＬを含むものが好ましく、そのような共通軽鎖として好ましくは、例えば、ＩＧＶＫ１－３９／ＪＫ１共通軽鎖であり、より好ましくは、例えば、配列番号２６のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ１、配列番号２７のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ２および配列番号２８のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ３を含むＶＬを有する軽鎖であり、さらに好ましくは、例えば、配列番号２５のアミノ酸配列からなるＶＬを有する軽鎖である。また、共通軽鎖の定常領域として好ましくは、配列番号２９のアミノ酸配列からなる軽鎖定常領域が挙げられる。

また、「ＰＤ－１に特異的に結合する第一アーム」は、ＰＤ－１およびＰＤ－Ｌ１との相互作用、ＰＤ－１およびＰＤ－Ｌ２との相互作用、またはそれら両相互作用を許容するものがより好ましい。ここで、「ＰＤ－１およびＰＤ－Ｌ１との相互作用、ＰＤ－１およびＰＤ－Ｌ２との相互作用、またはそれら両相互作用を許容する」とは、本発明のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体が可溶型ＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２の濃度の２０倍過剰に存在する状況下においても、当該ＰＤ－Ｌ１とＰＤ－１との相互作用、当該ＰＤ－Ｌ２とＰＤ－１との相互作用、またはそれら両相互作用が、本発明のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体が存在しない時の当該相互作用に比べて５０％以上維持され、好ましくは７０％以上維持され、より好ましくは８０％以上維持されることを意味する。また、「ＰＤ－１およびＰＤ－Ｌ１との相互作用、ＰＤ－１およびＰＤ－Ｌ２との相互作用、またはそれら両相互作用を許容する」という定義は、「ＰＤ－１およびＰＤ－Ｌ１との相互作用、ＰＤ－１およびＰＤ－Ｌ２との相互作用、またはそれら両相互作用を実質的に阻害しない」という意味と同義で使用されることがある。

本発明のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体を構築するために取得された抗ＰＤ－１モノクローナル抗体の各クローンと、それらのＶＨのアミノ酸配列およびその配列番号との対応関係を図６に、ならびに当該抗ＰＤ－１モノクローナル抗体の各クローンのＶＨ中の各ＣＤＲのアミノ酸配列とその配列番号との対応関係を図７に示す。

ＣＤ１９に特異的に結合する第二アーム
本明細書において、「ＣＤ１９に特異的に結合する第二アーム」（以下、「第二アーム」と略記することがある。）とは、抗体あるいは抗体断片の一部に含まれるか、あるいは一部ではなく、それ自体単体として存在するか否かにかかわらず、少なくとも、ＣＤ１９に特異的に結合する抗体のＶＨを含み、かつＣＤ１９に特異的に結合することができる抗体部分を意味し、例えば、そのような第二アームは、抗ＣＤ１９抗体のＶＨおよび当該抗ＣＤ１９抗体を構成する共通軽鎖のＶＬからなり、さらに、第二アームには、当該ＶＨおよびＶＬを含む抗体のＦａｂ部も含まれる。ここで、「ＣＤ１９に特異的に結合する」とは、少なくとも、１ｘ１０^－５Ｍ、好ましくは１ｘ１０^－７Ｍ、より好ましくは１ｘ１０^－９Ｍより高い親和性（解離定数（Ｋｄ値））を有する結合活性でＣＤ１９に対して直接結合することができ、他のタンパク質には実質的に結合しない特徴として使用される。また、「ＣＤ１９に特異的に結合する抗体」あるいは「抗ＣＤ１９抗体」における「抗体」とは、全長抗体、すなわち、ジスルフィド結合で連結された２つの重鎖および２つの軽鎖からなる完全長の抗体を意味するが、好ましくは、そのモノクローナル抗体である。

ここで、「ＣＤ１９に特異的に結合する第二アーム」としては、例えば、（ａ）ＳＹＷＩＪ^４で表わされるアミノ酸配列［配列中、Ｊ^４は、Ｇ（グリシン）またはＡ（アラニン）を表わし、その他のアルファベットは、各々アミノ酸の一文字略号を表わす。］からなるＶＨ－ＣＤＲ１、（ｂ）ＩＩＵ^４ＰＧＤＳＤＴＲＹＳＰＳＦＱＧで表わされるアミノ酸配列［配列中、Ｕ^４は、Ｗ（トリプトファン）またはＹ（チロシン）を表わし、その他のアルファベットは、各々上記と同じ意味を表わす。］からなるＶＨ－ＣＤＲ２、および（ｃ）Ｘ^４ＴＩＶＺ^４Ｊ^５Ｕ^５Ｘ^５Ｚ^５ＡＪ^６ＤＵ^６で表わされるアミノ酸配列［配列中、Ｘ^４は、Ｋ（リシン）、Ｑ（グルタミン）、Ｈ（ヒスチジン）もしくはＲ（アルギニン）を表わし、Ｚ^４は、Ｇ（グリシン）もしくはＡ（アラニン）を表わし、Ｊ^５は、Ｔ（スレオニン）もしくはＶ（バリン）を表わし、Ｕ^５は、Ｖ（バリン）、Ｉ（イソロイシン）もしくはＴ（スレオニン）を表わし、Ｘ^５は、Ｍ（メチオニン）、Ｙ（チロシン）、Ｇ（グリシン）もしくはＨ（ヒスチジン）を表わし、Ｚ^５は、Ｔ（スレオニン）、Ｎ（アスパラギン）、Ｌ（ロイシン）もしくはＷ（トリプトファン）を表わし、Ｊ^６は、Ｆ（フェニルアラニン）もしくはＳ（セリン）を表わし、Ｕ^６は、Ｉ（イソロイシン）、Ｆ（フェニルアラニン）もしくはＹ（チロシン）を表わし、その他のアルファベットは、各々上記と同じ意味を表わす。］からなるＶＨ－ＣＤＲ３を有するＶＨを有するものが挙げられる。

また、「ＣＤ１９に特異的に結合する第二アーム」の別の態様としては、例えば、
（１ｄ）配列番号３５のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、配列番号３６のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および配列番号３７のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を含むＶＨ、
（２ｄ）配列番号３８のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、配列番号３９のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および配列番号４０のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を含むＶＨ、
（３ｄ）配列番号４１のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、配列番号４２のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および配列番号４３のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を含むＶＨ、
（４ｄ）配列番号４４のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、配列番号４５のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および配列番号４６のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を含むＶＨ、ならびに
（５ｄ）配列番号４７のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、配列番号４８のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２および配列番号４９のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を含むＶＨから選択される何れか一つのＶＨを有するものが挙げられる。

さらに、本発明における、「ＣＤ１９に特異的に結合する第二アーム」には、上記（１ｄ）～（５ｄ）から選択される何れか一つのＶＨにおける各々のＶＨ－ＣＤＲにおいて、その任意の１～５個のアミノ酸残基が他のアミノ酸（好ましくは、その保存的アミノ酸）に置換され、かつ、当該アミノ酸に置換されていない元の第二アームによるＣＤ１９への結合活性と実質的に同等の結合活性を有するものも含まれる。例えば、ＶＨ－ＣＤＲ１の場合には、１個のアミノ酸残基が他のアミノ酸（好ましくは、その保存的アミノ酸）に置換され、ＶＨ－ＣＤＲ２またはＶＨ－ＣＤＲ３の場合には、各々１～５個のアミノ酸残基が他のアミノ酸（好ましくは、その保存的アミノ酸）に置換されたものが挙げられる。また、図５に示されるように、ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームに各々対応する抗ＣＤ１９抗体クローンの各ＣＤＲにおいて、各クローン間で相違する各アミノ酸またはそれらの任意の複数の組み合わせは、当該クローン間において相互に置換可能である。ここで、「当該アミノ酸に置換されていない元の第二アームによるＣＤ１９への結合活性と実質的に同等の結合活性を有する」とは、当該アミノ酸置換された第二アームのＣＤ１９への結合活性が、当該アミノ酸に置換されていない元の第二アームの結合活性の９５％以上であり、好ましくは９８％以上であり、より好ましくは９９％以上であることを意味する。なお、第二アームの各ＶＨ－ＣＤＲにおける「保存的アミノ酸による置換」には、例えば、上述の第一アームにおけるアミノ酸置換の例が挙げられる。

また、さらに、本発明における、「ＣＤ１９に特異的に結合する第二アーム」には、そのＶＨにおいて、上述の特定のアミノ酸配列を有する各ＣＤＲを含み、そのＶＨのＦＲのアミノ酸配列が、特定の生殖細胞系列型遺伝子もしくはその体細胞突然変異を受けた当該遺伝子にコードされるＶＨを有するものも含まれる。例えば、上記（１ｄ）～（５ｄ）から選択される何れか一つのＶＨは、生殖細胞系列型Ｖ遺伝子がＩＧＨＶ５－５１であるＶＤＪ組換え遺伝子もしくはその体細胞突然変異を受けた当該遺伝子にコードされ得る。ここで、生殖細胞系列型のＶ遺伝子ＩＧＨＶ５－５１によってコードされるアミノ酸配列は、配列番号２２で表わされるアミノ酸配列に対応する（図３）。

本発明のＣＤ１９に特異的に結合する第二アームのＶＨのフレームワークは、生殖細胞系列型のＶＤＪ組換遺伝子が体細胞突然変異を受けた当該遺伝子によってコードされる場合がある。例えば、生殖細胞系列型Ｖ遺伝子がＩＧＨＶ５－５１である、上記（１ｄ）～（５ｄ）から選択される何れかで示されるＶＨのＦＲ１およびＦＲ３は、図５に示すアミノ酸位置において、ＩＧＨＶ５－５１遺伝子がコードするアミノ酸配列と相違するため、当該各位置において体細胞突然変異を受けている。例えば、ＦＲ１領域については、配列番号２２のアミノ酸配列中の位置１のグルタミン酸がグルタミンに、位置１４のプロリンがセリンに、位置２７のチロシンがフェニルアラニンに、または位置３０のスレオニンがイソロイシンに各々置換されるか、あるいはそれらの任意の複数の組み合わせで置換されていてもよい。ＦＲ３領域については、配列番号２２のアミノ酸配列中の位置７６のイソロイシンがフェニルアラニンに、位置７７のセリンがスレオニンもしくはアスパラギンに、位置７８のスレオニンがバリンに、位置８４のセリンがアスパラギンに、位置９３のメチオニンがイソロイシンもしくはロイシンに、または位置９７のアラニンがバリンに各々置換されるか、あるいは任意の複数の組み合わせで置換されてもよい。上記何れかのアミノ酸置換の組み合わせを有する各々ＦＲ１およびＦＲ３も、ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームの機能に実質的な影響を与えず、フレームワークとして使用することができる。

さらに、本発明における「ＣＤ１９に特異的に結合する第二アーム」には、上述の特定のアミノ酸配列を有する各ＣＤＲを含み、かつ、そのＶＨのＦＲのアミノ酸配列が、特定の生殖細胞系列型遺伝子もしくはその体細胞突然変異を受けた当該遺伝子にコードされるＶＨを有するものも含まれる。例えば、そのような第二アームとして、配列番号３０～３４から選択される何れか一つのアミノ酸配列からなるＶＨを有するものが挙げられる。

さらに、そのような「ＣＤ１９に特異的に結合する第二アーム」には、例えば、配列番号３０～３４から選択される何れか一つのアミノ酸配列と少なくとも８０％同一であり、好ましくは少なくとも９０％同一であり、より好ましくは少なくとも９５％同一であり、さらに好ましくは少なくとも９８％同一であり、さらにより好ましくは少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列からなるＶＨを有し、かつ、元の第二アームのＶＨのアミノ酸配列との相違がＣＤ１９への結合活性に実質的に影響しないもの（以下、相同第二アームと略記することがある。）も含まれる。ここで、「元の第二アームのＶＨのアミノ酸配列との相違がＣＤ１９への結合活性に実質的に影響しない」とは、相同第二アームのＣＤ１９への結合活性が元の第二アームの当該結合活性の９５％以上であり、好ましくは９８％以上であり、より好ましくは９９％以上であることを意味する。

さらに別の態様において、本発明における「ＣＤ１９に特異的に結合する第二アーム」には、（１）上記（１ｄ）～（５ｄ）から選択される何れかで示されるＶＨまたは配列番号３０～３４から選択される何れか一つのアミノ酸配列からなるＶＨおよび本明細書における共有軽鎖のＶＬ（好ましくは、配列番号２５のアミノ酸配列からなるＶＬ）を有する第二アームのＣＤ１９への結合または（２）当該ＶＨおよびＶＬからなるＣＤ１９に特異的に結合するモノクローナル抗体の可変領域のＣＤ１９への結合に交差競合する抗ＣＤ１９抗体の可変領域（ここで、当該可変領域は、それを構成するＶＨおよびＶＬを含む。）を有するものも含まれ、また、ＣＤ１９への結合が、（３）上記（１ｄ）～（５ｄ）から選択される何れかで示されるＶＨあるいは配列番号３０～３４から選択される何れか一つのアミノ酸配列からなるＶＨおよび当該共有軽鎖のＶＬを有する第二アームまたは（４）当該ＶＨおよびＶＬからなるＣＤ１９に特異的に結合するモノクローナル抗体の可変領域により交差競合される抗ＣＤ１９抗体の可変領域を有するものも含まれる。ここで、「ＣＤ１９への結合において交差競合する」とは、本明細書において例示された第二アームと同一のあるいは一部重複するエピトープに結合することによって、当該第二アームのＣＤ１９への結合を、その程度に関わらず阻害する、あるいは当該例示された第二アームと同一のあるいは一部重複するエピトープに結合する抗体によるＣＤ１９への結合が、当該例示された第二アームによってその程度に関わらず阻害されることを意味する。ここで、交差競合するかどうかは、「ＰＤ－１に特異的に結合する第一アーム」に関する説明において記載された方法に準じて、同様に測定することができる。

ここで、本発明における「ＣＤ１９に特異的に結合する第二アーム」として好ましくは、上記（１ｄ）～（５ｄ）で示されるＶＨを有する第二アームが挙げられ、さらに、この好ましい第二アームには、上述したように、そのＶＨの各ＣＤＲにおいて、その任意の１～５個のアミノ酸残基が他のアミノ酸（好ましくは、その保存的アミノ酸）に置換され、かつ、そのアミノ酸置換がＣＤ１９への結合活性に実質的に影響しないものも含まれ、また、さらに、上述したように、ＶＨのフレームワークのアミノ酸配列が、生殖細胞系列型Ｖ遺伝子ＩＧＨＶ５－５１またはそれらの体細胞突然変異を受けた当該遺伝子にコードされるＶＨを有するものも含まれる。そして、当該第二アームとしてより好ましくは、配列番号３０～３４から選択される何れか一つのアミノ酸配列からなるＶＨを有するものが挙げられる。

さらに、別の態様において、本発明における「ＣＤ１９に特異的に結合する第二アーム」として好ましくは、配列番号３０～３４の各アミノ酸配列における１１４番目のアミノ酸がアルギニンに置換された、または置換されていてもよい、配列番号３０～３４から選択される何れか一つのアミノ酸配列からなるＶＨを有する第二アームが挙げられ、より好ましくは、配列番号３０～３４の各アミノ酸配列における１１４番目のグルタミンがアルギニンに置換された、配列番号３０～３４から選択される何れか一つのアミノ酸配列からなるＶＨを有する第二アームであり、それらは各々配列番号６２～６６から選択される何れか一つのアミノ酸配列からなるＶＨを有する第二アームに相当する。これらアミノ酸置換により、当該第二アームを有する重鎖および軽鎖からなる複合体（以下、第二アーム重鎖／軽鎖複合体）の等電点（ｐＩ値）を増加させることができ、それにより、本発明のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体の精製工程において、特に、第二アーム重鎖／軽鎖複合体のホモダイマーからの当該二重特異性抗体の分離が容易となる。なお、本発明において、第二アーム重鎖／軽鎖複合体の等電点として好ましくは、約８．３～約８．９であり、より好ましくは、約８．４～約８．８である。また、第一アームを有する重鎖および軽鎖からなる複合体（以下、第一アーム重鎖／軽鎖複合体）の等電点として好ましくは、約７．４～約７．７であり、より好ましくは、約７．５～約７．６である。

さらに、本発明における「ＣＤ１９に特異的に結合する第二アーム」は、本明細書における共通軽鎖のＶＬを含むものが好ましく、そのような共通軽鎖として好ましくは、例えば、ＩＧＶＫ１－３９／ＪＫ１共通軽鎖であり、より好ましくは、例えば、配列番号２６のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ１、配列番号２７のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ２および配列番号２８のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ３を含むＶＬを有する軽鎖であり、さらに好ましくは、例えば、配列番号２５のアミノ酸配列からなるＶＬを有する軽鎖である。また、共通軽鎖の定常領域として好ましくは、配列番号２９のアミノ酸配列からなる軽鎖定常領域が挙げられる。

以下に、本発明のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体を構築するための抗ＣＤ１９抗体の各クローンと、それらのＶＨのアミノ酸配列およびその配列番号との対応関係を図８に、ならびに当該抗ＣＤ１９抗体の各クローンのＶＨ中の各ＣＤＲのアミノ酸配列とその配列番号との対応関係を図９に示す。

一方、本発明のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体として好ましい態様としては、例えば、ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームが、
（Ａ）上記（１ｂ）～（５ｂ）から選択される何れかで示されるＶＨにおける、ＶＨ－ＣＤＲ１、ＶＨ－ＣＤＲ２およびＶＨ－ＣＤＲ３の何れか一つまたは複数のＣＤＲにおいて、各々その任意の１～５個のアミノ酸残基が他のアミノ酸（好ましくは、その保存的アミノ酸）に置換されていてもよいＶＨ、および
（Ｂ）配列番号２６のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ１、配列番号２７のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ２および配列番号２８のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ３を含むＶＬを有し、ならびに
ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームが、
（Ｃ）上記（１ｄ）～（５ｄ）から選択される何れかで示されるＶＨにおける、ＶＨ－ＣＤＲ１、ＶＨ－ＣＤＲ２およびＶＨ－ＣＤＲ３から選択される何れか一つまたは複数のＣＤＲにおいて、各々その任意の１～５個のアミノ酸残基が他のアミノ酸（好ましくは、保存的アミノ酸）に置換されていてもよいＶＨ、および
（Ｄ）配列番号２６のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ１、配列番号２７のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ２および配列番号２８のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ３を含むＶＬを有することを特徴とする、ＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体が挙げられる。

より好ましくは、例えば、ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームが、
（Ａ）上記（１ｂ）～（５ｂ）から選択される何れかで示されるＶＨ、および
（Ｂ）配列番号２６のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ１、配列番号２７のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ２および配列番号２８のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ３を含むＶＬを有し、ならびに
ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームが、
（Ｃ）上記（１ｄ）～（５ｄ）から選択される何れかで示されるＶＨ、および
（Ｄ）配列番号２６のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ１、配列番号２７のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ２および配列番号２８のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ３を含むＶＬを有することを特徴とする、ＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体が挙げられる。

また、本発明のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体として好ましい別の態様としては、例えば、ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームが、
（Ａ）配列番号１～５から選択される何れか一つのアミノ酸配列からなるＶＨ、または当該ＶＨのアミノ酸配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列からなるＶＨ、および
（Ｂ）配列番号２５のアミノ酸配列からなるＶＬを有し、ならびに、
ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームが、
（Ｃ）配列番号３０～３４および６２～６６から選択される何れか一つのアミノ酸配列からなるＶＨ、または当該ＶＨのアミノ酸配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列からなるＶＨ、および
（Ｄ）配列番号２５のアミノ酸配列からなるＶＬを有することを特徴とする、ＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体が挙げられる。

この別の態様としてより好ましくは、例えば、ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームが、
（Ａ）配列番号１～５から選択される何れか一つのアミノ酸配列からなるＶＨ、および
（Ｂ）配列番号２５のアミノ酸配列からなるＶＬを有し、ならびに、
ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームが、
（Ｃ）配列番号３０～３４および６２～６６から選択される何れか一つのアミノ酸配列からなるＶＨ、および
（Ｄ）配列番号２５のアミノ酸配列からなるＶＬを有することを特徴とする、ＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体が挙げられる。

さらに、この別の態様としてさらに好ましくは、例えば、ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームが、
（Ａ）配列番号１～５から選択される何れか一つのアミノ酸配列からなるＶＨ、および
（Ｂ）配列番号２５のアミノ酸配列からなるＶＬを有し、ならびに、
ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームが、
（Ｃ）配列番号６２～６６から選択される何れか一つのアミノ酸配列からなるＶＨ、および
（Ｄ）配列番号２５のアミノ酸配列からなるＶＬを有することを特徴とする、ＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体が挙げられる。

本発明のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体として好ましいアイソタイプとしてはＩｇＧ抗体であり、さらに好ましくは、ＩｇＧ_１もしくはＩｇＧ_４抗体であり、さらにより好ましくはＩｇＧ_１抗体である。同抗体がＩｇＧ_１抗体である場合には、各々二つの重鎖定常領域あるいはヒンジ領域上において、ＥＵナンバリングシステムによる２３５番目のロイシンがグリシンに置換され、および／または２３６番目のグリシンがアルギニンに置換されたＩｇＧ_１抗体が好ましい。さらに、それら二重特異性抗体の重鎖Ｃ末端のアミノ酸、例えば、ＥＵナンバリングシステムによる４４７番目のリシンを欠損した抗体がより好ましい。また、ＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体がＩｇＧ_４抗体である場合には、そのヒンジ領域に位置する、ＥＵナンバリングシステムによる２２８番目のセリンをプロリンに置換した抗体が好ましい。

さらに、これらＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体がＩｇＧ_１抗体である場合に好ましい態様としては、ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームのＶＨを有する重鎖における定常領域中のＥＵナンバリングシステムによる３５１番目のロイシンがリシンに置換され、かつ３６６番目のスレオニンがリシンに置換され、ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームのＶＨを有する重鎖における定常領域中の３５１番目のロイシンがアスパラギン酸に置換され、かつ３６８番目のロイシンがグルタミン酸に置換されたＩｇＧ_１抗体が挙げられる。また、ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームのＶＨを有する重鎖における定常領域中のＥＵナンバリングシステムによる３５１番目のロイシンがアスパラギン酸に置換され、かつ３６８番目のロイシンがグルタミン酸に置換され、ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームのＶＨを有する重鎖における定常領域中の３５１番目のロイシンがリシンに置換され、かつ３６６番目のスレオニンがリシンに置換されたＩｇＧ_１抗体も同様に好ましい。

重鎖定常領域における上記したすべてのアミノ酸置換を取り入れたＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性ＩｇＧ_１抗体の好ましい態様としては、例えば、ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームのＶＨを有する重鎖が、配列番号２３のアミノ酸配列からなる重鎖定常領域を有し、ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームのＶＨを有する重鎖が、配列番号２４および配列番号７１～７５から選択される何れか一つのアミノ酸配列からなる重鎖定常領域を有する抗体が挙げられる。それらのアミノ酸配列を図１０に例示する。

ここで、ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームのＶＨを有する重鎖は、そのＣ末端において、そのＣ末端アミノ酸とのアミド結合を介して、さらに、Ｇｌｙ（グリシン）、Ｇｌｙ－Ｌｙｓ－Ｌｙｓ－Ａｌａ（配列番号６７）、Ｇｌｙ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｌｙｓ－Ａｌａ（配列番号６８）、Ｇｌｙ－Ａｒｇ－Ａｒｇ－Ａｌａ（配列番号６９）またはＧｌｙ－Ａｒｇ－Ａｌａ－Ａｒｇ－Ａｌａ（配列番号７０）を有していてもよい。これらアミノ酸またはペプチドの付加により、当該第二アーム重鎖／軽鎖複合体の等電点（ｐＩ値）を増加させることができ、それにより、上述した第二アームのＶＨにおけるアミノ酸置換の事例と同様に、特に、第二アーム重鎖／軽鎖複合体のホモダイマーからの当該二重特異性抗体の分離が容易となる。なお、そのＣ末端に当該アミノ酸またはペプチドが付加された第二アーム重鎖／軽鎖複合体についても、その等電点として好ましくは、約８．３～約８．９であり、より好ましくは、約８．４～約８．８である。

本発明のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体の態様として最も好ましくは、本明細書実施例１２において作製された、クローンＣＤ１９－１（Ｂｉ）、クローンＣＤ１９－２（Ｂｉ）、クローンＣＤ１９－３（Ｂｉ）、クローンＣＤ１９－４（Ｂｉ）およびクローンＣＤ１９－５（Ｂｉ）ならびに実施例１３において作製されたクローンＣＤ１９－６（Ｂｉ）が挙げられる。

本発明のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体として好ましい特徴としては、ＰＤ－１およびＰＤ－Ｌ１との相互作用、ＰＤ－１およびＰＤ－Ｌ２との相互作用、またはそれら両相互作用を許容することが挙げられる。ここで、「ＰＤ－１およびＰＤ－Ｌ１との相互作用、ＰＤ－１およびＰＤ－Ｌ２との相互作用、またはそれら両相互作用を許容する」とは、「ＰＤ－１に特異的に結合する第一アーム」に関する説明において記載された定義と同じ意味を表わす。

さらに、本発明のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体として好ましい特徴としては、サイトカイン産生が十分に低減されたものが挙げられる。ここで、「サイトカイン産生が十分に低減された」とは、例えば、本発明のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体を点滴等により静脈内投与中、あるいは投与してから２４時間以内において、例えば、血中あるいは組織中のＩＬ－２、ＩＦＮ－γおよび／またはＴＮＦ－αを含むサイトカインの濃度が増加しないか、増加しても、ステロイド投与により抑制可能な程度であることを意味する。

さらに、本発明のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体として好ましい特徴としては、Ｔ細胞（例えば、メモリーＴ細胞）の活性化に対して抑制効果を有するものが挙げられる。同抑制効果は、Ｔ細胞を含む末梢血単核球からのサイトカイン（例えば、ＩＬ－２）産生抑制効果として評価することができる。

ＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体の製造および精製方法
本発明のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体およびその抗体断片は、WO2014/051433、WO2013/157953あるいはWO2013/157954に開示された方法でも製造することができる。

具体的には、（１）ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームのＶＨを有する重鎖をコードするポリヌクレオチド、（２）ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームのＶＨを有する重鎖をコードするポリヌクレオチド、および（３）共通軽鎖をコードするポリヌクレオチドが各々挿入された発現ベクターを、哺乳動物細胞に遺伝子導入して形質転換させ、両重鎖および共有軽鎖を共に発現ならびに分泌させて製造することができる。

ここで、本発明のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体を発現する宿主細胞は、発現ベクターを遺伝子導入でき、導入された発現ベクターを発現することができるいかなる宿主細胞でもよい。好ましくは、ＳＦ－９およびＳＦ－２１細胞のような昆虫細胞、より好ましくは、ＣＨＯ細胞、ＢＨＫ細胞、ＳＰ２／０細胞およびＮＳ－０ミエローマ細胞を含むマウス細胞、ＣＯＳおよびＶｅｒｏ細胞のような霊長類細胞、ＭＤＣＫ細胞、ＢＲＬ３Ａ細胞、ハイブリドーマ、腫瘍細胞、不死化した初代細胞、Ｗ１３８、ＨｅｐＧ２、ＨｅＬａ、ＨＥＫ２９３、ＨＴ１０８０またはＰＥＲ．Ｃ６のような胚性の網膜細胞等の哺乳類細胞が挙げられる。なお、発現システムの選択においては、抗体が適切にグリコシル化されるように、哺乳類の細胞の発現ベクターおよび宿主を用いることがある。ヒト細胞株、好ましくはＰＥＲ．Ｃ６は、ヒトにおけるグリコシル化パターンと一致する抗体を得るために有利に用いられる。

発現ベクターの遺伝子導入によって形質転換された宿主細胞における蛋白質の産生は、例えば、Current Protocols in Protein Science (1995), Coligan JE, Dunn BM, Ploegh HL, Speicher DW, Wingfield PT, ISBN 0-471-11184-8，Bendig, 1988を参考に実施することができ、さらに、宿主細胞の培養の生産性を最大にするための一般的な指針、手順および実用的な方法は、Mammalian Cell Biotechnology: a Practical Approach (M. Butler, ed., IRL Press, 1991)を参考に実施できる。宿主細胞での抗体の発現は、例えば、EP0120694、EP0314161、EP0481790、EP0523949、US4816567およびWO2000/63403などの公開公報に記述されている。

ここで、宿主細胞の培養条件は、公知の方法により最適化でき、蛋白質の生産量を最適化することができる。培養は、例えば、培養シャーレ、ローラーボトルもしくは反応槽の中で、バッチ培養、流加培養、連続培養、中空糸による培養で実施できる。細胞培養により、大規模かつ連続的な組み換えタンパク質の生産を行うためには、細胞を懸濁液の中で増殖させることが好ましい。また、動物もしくはヒト由来血清または動物もしくはヒト由来の血清の構成要素がない条件下で細胞の培養をさせることが好ましい。

宿主細胞で発現され、その細胞または細胞培地から公知の方法により回収された抗体は、公知の方法を用いて精製することができる。精製方法には、免疫沈降法、遠心分離法、ろ過、サイズ排除クロマトグラフィー、親和性クロマトグラフィー、陽イオンおよび／または陰イオン交換クロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー等が含まれる。さらに、プロテインＡまたはプロテインＧ親和性クロマトグラフィーが好適に用いられる場合がある（例えば、US4801687およびUS5151504参照）。

抗ＣＤ１９モノクローナル抗体
本発明は、本発明のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体を構築するための「ＣＤ１９に特異的に結合するモノクローナル抗体」（以下、「抗ＣＤ１９モノクローナル抗体」と略記することがある。）およびそれらの抗体断片を含む。

本発明の抗ＣＤ１９モノクローナル抗体の一態様としては、ＶＨおよび本発明における共通軽鎖のＶＬが会合することによって、ＣＤ１９に特異的に結合することができるモノクローナル抗体である。ここで、「ＣＤ１９に特異的に結合する」とは、少なくとも、１ｘ１０^－５Ｍ、好ましくは１ｘ１０^－７Ｍ、より好ましくは１ｘ１０^－９Ｍより高い親和性（解離定数（Ｋｄ値））を有する結合活性でＣＤ１９に対して直接結合することができ、ほかのタンパク質には実質的に結合しない特徴として使用される。ここで、「ＣＤ１９に特異的に結合するモノクローナル抗体」における「抗体」とは、全長抗体、すなわち、ジスルフィド結合で連結された２つの重鎖および２つの軽鎖からなる完全長の抗体を意味する。また、「ＣＤ１９に特異的に結合するモノクローナル抗体の断片」とは、全長抗体の一部であって、少なくとも抗原結合部分を含む抗体であり、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ′、Ｆｖ、ｓｃＦｖおよびＦ（ａｂ′）_２などが挙げられる。

本発明の抗ＣＤ１９モノクローナル抗体としては、例えば、「ＣＤ１９に特異的に結合する第二アーム」のＶＨを構成する上記（１ｄ）～（５ｄ）から選択される何れか一つのＶＨまたは配列番号３０～３４から選択される何れか一つのアミノ酸配列からなるＶＨおよび本明細書における共通軽鎖のＶＬ（好ましくは、配列番号２５のアミノ酸配列からなるＶＬ）を有するものが挙げられる。

さらに、本発明の抗ＣＤ１９モノクローナル抗体には、上記（１ｄ）～（５ｄ）から選択される何れか一つのＶＨにおける各々のＣＤＲにおいて、その任意の１～５個のアミノ酸残基が他のアミノ酸（好ましくは、保存的アミノ酸）に置換され、かつ、当該アミノ酸に置換されていない元のＶＨを有する抗ＣＤ１９モノクローナル抗体によるＣＤ１９への結合活性と実質的に同等の結合活性を有するＶＨをもつものも含まれる。例えば、そのＣＤＲ１の場合には、１個のアミノ酸残基が他のアミノ酸（好ましくは、保存的アミノ酸）に置換され、ＣＤＲ２またはＣＤＲ３の場合には、各々１～５個のアミノ酸残基が他のアミノ酸（好ましくは、保存的アミノ酸）に置換されたものが挙げられる。また、図５に示されるように、抗ＣＤ１９モノクローナル抗体クローンの各ＣＤＲにおいて、各クローン間で相違する各アミノ酸またはそれらの任意の複数の組み合わせは、当該クローン間において相互に置換可能である。ここで、「当該アミノ酸に置換されていない元のＶＨを有する抗ＣＤ１９モノクローナル抗体によるＣＤ１９への結合活性と実質的に同等の結合活性を有する」とは、当該アミノ酸に置換された抗ＰＤ－１モノクローナル抗体のＣＤ１９への結合活性が、当該アミノ酸に置換されていない元のＶＨを有する抗ＰＤ－１モノクローナル抗体の結合活性の９５％以上であり、好ましくは９８％以上であり、より好ましくは９９％以上であることを意味する。

さらに、本発明の抗ＣＤ１９モノクローナル抗体には、そのＶＨにおいて、上述の特定のアミノ酸配列を有する各ＣＤＲを含み、そのＶＨのフレームワークのアミノ酸配列が、特定の生殖細胞系列型遺伝子もしくはその体細胞突然変異を受けた当該遺伝子にコードされるＶＨを有するものも含まれ、例えば、上記の「ＣＤ１９に特異的に結合する第二アーム」に関する説明において挙げられた、特定の生殖細胞系列型遺伝子もしくはその体細胞突然変異を受けた当該遺伝子にコードされる特定のＶＨを有するものなどである。

さらに、本発明の抗ＣＤ１９モノクローナル抗体のうち、上記（１ｄ）～（５ｄ）から選択される何れか一つのＶＨにおける各々のＣＤＲを含み、そのＶＨのＦＲのアミノ酸配列が、特定の生殖細胞系列型遺伝子もしくはその体細胞突然変異を受けた当該遺伝子にコードされるＶＨを有するものとしては、例えば、配列番号３０～３４から選択されるアミノ酸配列からなるＶＨを有するものが挙げられる。さらに、そのような抗ＣＤ１９モノクローナル抗体には、例えば、配列番号３０～３４から選択される何れか一つのアミノ酸配列と少なくとも８０％同一であり、好ましくは少なくとも９０％同一であり、より好ましくは少なくとも９５％同一であり、さらに好ましくは少なくとも９８％同一であり、さらにより好ましくは少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列からなるＶＨを有し、かつ、元のＶＨを有する抗ＣＤ１９モノクローナル抗体によるＣＤ１９への結合活性と実質的に同等の結合活性を有するものも含まれる。ここで、「元のＶＨを有する抗ＣＤ１９モノクローナル抗体によるＣＤ１９への結合活性と実質的に同等の結合活性を有する」とは、当該何れか一つのアミノ酸配列からなるＶＨを有する抗ＣＤ１９モノクローナル抗体のＣＤ１９への結合活性の９５％以上であり、好ましくは９８％以上であり、より好ましくは９９％以上であることを意味する。

さらに別の態様において、本発明の抗ＣＤ１９モノクローナル抗体には、（１）上記（１ｄ）～（５ｄ）から選択される何れか一つのＶＨまたは配列番号３０～３４から選択されるアミノ酸配列からなるＶＨおよび本明細書における共通軽鎖のＶＬ（好ましくは、配列番号２５のアミノ酸配列からなるＶＬ）を有する抗ＣＤ１９モノクローナル抗体のＣＤ１９への結合に交差競合する抗ＰＤ－１モノクローナル抗体、ならびに（２）ＣＤ１９への結合が上記（１ｄ）～（５ｄ）から選択される何れか一つのＶＨまたは配列番号３０～３４から選択される何れか一つのアミノ酸配列からなるＶＨおよび当該共通軽鎖のＶＬを有する抗ＣＤ１９モノクローナル抗体により交差競合される抗ＣＤ１９モノクローナル抗体も含まれる。

また、さらに別の態様において、本発明の抗ＣＤ１９モノクローナル抗体には、配列番号３０～３４から選択される何れか一つのアミノ酸配列における１１４番目のアミノ酸がアルギニンに置換された、または置換されていてもよいアミノ酸配列からなるＶＨおよび本明細書における共通軽鎖のＶＬ（好ましくは、配列番号２５のアミノ酸配列からなるＶＬ）を有するものが挙げられ、より好ましくは、配列番号３０～３４から選択される何れか一つのアミノ酸配列における１１４番目のグルタミンがアルギニンに置換されたアミノ酸配列からなるＶＨおよび当該共通軽鎖のＶＬを有するものであり、それらは各々配列番号６２～６６から選択される何れか一つのアミノ酸配列からなるＶＨおよび当該共通軽鎖のＶＬを有する抗ＣＤ１９モノクローナル抗体に相当する。

ＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体をコードするポリヌクレオチド
ＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体をコードするポリヌクレオチドは、（１）ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームのＶＨを有する重鎖をコードするポリヌクレオチド、（２）ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームのＶＨを有する重鎖をコードするポリヌクレオチド、および（３）共通軽鎖をコードするポリヌクレオチドから構成される。ここで、ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームのＶＨを有する重鎖をコードするポリヌクレオチドは、ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームのＶＨをコードするポリヌクレオチドおよび当該ＶＨを有する重鎖の定常領域をコードするポリヌクレオチドから構成され、同様に、ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームのＶＨを有する重鎖をコードするポリヌクレオチドは、ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームのＶＨをコードするポリヌクレオチドおよび当該ＶＨを有する重鎖の定常領域をコードするポリヌクレオチドから構成される。

ＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体をコードするポリヌクレオチドとは、これらＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体を構成する部分を各々コードするポリヌクレオチドを有するものであればいかなるものであってもよく、ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ、合成ＤＮＡ、ＲＮＡ、ＤＮＡ－ＲＮＡハイブリッドのいずれでもよい。一つのアミノ酸をコードするコドンは１～６種類知られており、例えば、ＰｈｅにはＴＴＴまたはＴＴＣ、ＬｅｕにはＴＴＡ、ＴＴＧ、ＣＴＴ、ＣＴＣ、ＣＴＡまたはＣＴＧ、ＩｌｅにはＡＴＴ、ＡＴＣまたはＡＴＡ、ＭｅｔにはＡＴＧ、ＶａｌにはＧＴＴ、ＧＴＣ、ＧＴＡまたはＧＴＧ、ＳｅｒにはＴＣＴ、ＴＣＣ、ＴＣＡまたはＴＣＧ、ＰｒｏにはＣＣＴ、ＣＣＣ、ＣＣＡまたはＣＣＧ、ＴｈｒにはＡＣＴ、ＡＣＣ、ＡＣＡまたはＡＣＧ、ＡｌａにはＧＣＴ、ＧＣＣ、ＧＣＡまたはＧＣＧ、ＴｙｒにはＴＡＴまたはＴＡＣ、ＨｉｓにはＣＡＴまたはＣＡＣ、ＧｌｎにはＣＡＡまたはＣＡＧ、ＡｓｎにはＡＡＴまたはＡＡＣ、ＬｙｓにはＡＡＡまたはＡＡＧ、ＡｓｐにはＧＡＴまたはＧＡＣ、ＧｌｕにはＧＡＡまたはＧＡＧ、ＣｙｓにはＴＧＴまたはＴＧＣ、ＴｒｐにはＴＧＧ、ＡｒｇにはＣＧＴ、ＣＧＣ、ＣＧＡまたはＣＧＧ、ＳｅｒにはＡＧＴまたはＡＧＣ、ＡｒｇにはＡＧＡまたはＡＧＧ、およびＧｌｙにはＧＧＴ、ＧＧＣ、ＧＧＡまたはＧＧＧが各々対応しているので、ＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体をコードするポリヌクレオチドには、各アミノ酸に対応する各コドンが任意に組み合わされたポリヌクレオチドが含まれる。ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームのＶＨをコードするポリヌクレオチドとして好ましくは、例えば、クローンＰＤ１－１～ＰＤ１－５のＶＨを各々コードする配列番号５０～５４から選択される何れか一つの塩基配列からなるポリヌクレオチドが挙げられ、ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームのＶＨをコードするポリヌクレオチドとして好ましくは、例えば、クローンＣＤ１９－５、ＣＤ１９－１、ＣＤ１９－４、ＣＤ１９－２およびＣＤ１９－３のＶＨを各々コードする配列番号５６～６０および配列番号７６～８０から選択される何れか一つの塩基配列からなるポリヌクレオチドが挙げられる。また、共通軽鎖の可変領域をコードするポリヌクレオチドとして好ましくは、配列番号５５の塩基配列からなるポリヌクレオチドが挙げられる。

医薬的用途
本発明のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体等は、自己免疫疾患または移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の予防、症状進展抑制、再発抑制および／または治療に有用である。

本発明のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体等が予防、症状進展抑制および／または治療可能な自己免疫疾患としては、例えば、ベーチェット病、全身性エリテマトーデス、慢性円板状エリテマトーデス、多発性硬化症（全身性強皮症、進行性全身性硬化症）、強皮症、多発性筋炎、皮膚筋炎、結節性動脈周囲炎（結節性多発動脈炎、顕微鏡的多発血管炎）、大動脈炎症候群（高安動脈炎）、悪性関節リウマチ、関節リウマチ、若年性特発性関節炎、脊椎関節炎、混合性結合組織病、シェーグレン症候群、成人スティル病、血管炎、アレルギー性肉芽腫性血管炎、過敏性血管炎、リウマトイド血管炎、大型血管炎、ＡＮＣＡ関連血管炎（例えば、多発血管炎性肉芽腫症および好酸球性多発血管炎性肉芽腫症）、コーガン症候群、ＲＳ３ＰＥ症候群、側頭動脈炎、リウマチ性多発筋痛症、線維筋痛症、抗リン脂質抗体症候群、好酸球性筋膜炎、ＩｇＧ_４関連疾患（例えば、原発性硬化性胆管炎、自己免疫性膵炎など）、ギラン・バレー症候群、重症筋無力症、慢性萎縮性胃炎、自己免疫性肝炎、非アルコール性脂肪肝炎、原発性胆汁性肝硬変、グッドパスチャー症候群、急速進行性糸球体腎炎、巨赤芽球性貧血、自己免疫性溶血性貧血、悪性貧血、自己免疫性好中球減少症、特発性血小板減少性紫斑病、バセドウ病（グレーブス病（甲状腺機能亢進症））、橋本病、自己免疫性副腎機能不全、原発性甲状腺機能低下症、アジソン病（慢性副腎皮質機能低下症）、特発性アジソン病、Ｉ型糖尿病、緩徐進行性Ｉ型糖尿病（成人潜在性自己免疫性糖尿病）、限局性強皮症、乾癬、乾癬性関節炎、水疱性類天疱瘡、天疱瘡、類天疱瘡、妊娠性疱疹、線状ＩｇＡ水疱性皮膚症、後天性表皮水疱症、円形脱毛症、白斑、尋常性白斑、視神経脊髄炎、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、多巣性運動ニューロパチー、サルコイドーシス、巨細胞性動脈炎、筋委縮性側索硬化症、原田病、自己免疫性視神経症、特発性無精子症、習慣性流産、炎症性腸疾患（例えば、潰瘍性大腸炎、クローン病）、セリアック病、強直性脊椎炎、重症喘息、慢性蕁麻疹、移植免疫、家族性地中海熱、好酸球性副鼻腔炎、拡張型心筋症、全身性肥満細胞症および封入体筋炎などが挙げられる。

本発明において「治療」とは、例えば、ある疾患もしくはその症状を治癒させることまたは改善させることを意味し、「予防」とは、ある疾患もしくは症状の発現を未然に防止するあるいは一定期間遅延させることを意味し、「症状進展抑制」とは症状の進展または悪化を抑制して病態の進行を止めることを意味する。なお、「予防」の意味には再発抑制も含まれる。「再発抑制」とは、ある疾患もしくは症状の再発を防止または再発の可能性を低減させることを意味する。

また、別の態様において、本発明のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体等は、自己反応性Ｂ細胞介在性疾患の予防、症状進展抑制、再発抑制および／または治療に有用である。自己反応性Ｂ細胞介在性疾患としては、全身性エリテマトーデス、グレーブス病、重症筋無力症、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性血小板減少症、喘息、クリオグロブリン血症、原発性胆管硬化症および悪性貧血などが挙げられる。当該医薬的用途において、本発明のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体等は、自己反応性Ｂ細胞に対する抑制作用を介する。ここで、自己反応性Ｂ細胞に対する抑制作用には、ＩｇＧおよびＩｇＭなどのイムノグロブリン産生抑制作用が含まれる。さらに、本発明のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体等は、メモリーＴ細胞活性化に対する抑制作用を有する。ここで、メモリーＴ細胞活性化に対する抑制作用には、サイトカイン産生抑制作用が含まれる。

本発明のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体等は、通常、全身的または局所的に、非経口の形で投与される。かかる投与方法として、具体的には、注射投与、経鼻投与、経肺投与、経皮投与などが挙げられる。注射投与としては、例えば、静脈内注射、筋肉内注射、腹腔内注射などが挙げられ、静脈内注射の場合には、点滴による投与が好ましい。その投与量は、年齢、体重、症状、治療効果、投与方法、処理時間等により異なるが、通常、成人一人当たり、一回につき、０．１μｇ／ｋｇから３００ｍｇ／ｋｇの範囲で、特に好ましくは、０．１ｍｇ／ｋｇから１０ｍｇ／ｋｇの範囲で、一日一回から数回非経口投与されるか、または一日３０分から２４時間の範囲で静脈内に持続投与される。もちろん前記したように、投与量は種々の条件により変動するので、上記投与量より少ない量で十分な場合もあるし、また範囲を越えて投与の必要な場合もある。

製剤
本発明のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体等は、注射剤または点滴のための輸液として製剤化されて用いられる場合、当該注射剤または輸液は、水溶液、懸濁液または乳濁液のいずれの形態であってもよく、また、用時に溶剤を加えることにより、溶解、懸濁または乳濁して使用されるように、薬学的に許容できる担体とともに、固形剤として製剤化されていてもよい。注射剤または点滴のための輸液に使用される溶剤として、例えば、注射用蒸留水、生理食塩水、ブドウ糖溶液および等張液（例えば、塩化ナトリウム、塩化カリウム、グリセリン、マンニトール、ソルビトール、ホウ酸、ホウ砂、プロピレングリコール等の溶液）等を用いることができる。

ここで、薬学的に許容できる担体としては、例えば、安定剤、溶解補助剤、懸濁化剤、乳化剤、無痛化剤、緩衝剤、保存剤、防腐剤、ｐＨ調整剤および抗酸化剤等が挙げられる。安定剤としては、例えば、各種アミノ酸、アルブミン、グロブリン、ゼラチン、マンニトール、グルコース、デキストラン、エチレングリコール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、アスコルビン酸、亜硫酸水素ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、エデト酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、ジブチルヒドロキシトルエン等を用いることができる。溶解補助剤としては、例えば、アルコール（例えば、エタノール等）、ポリアルコール（例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール等）、非イオン性界面活性剤（例えば、ポリソルベート２０（登録商標）、ポリソルベート８０（登録商標）、ＨＣＯ－５０等）等を用いることができる。懸濁化剤としては、例えば、モノステアリン酸グリセリン、モノステアリン酸アルミニウム、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ラウリル硫酸ナトリウム等を用いることができる。乳化剤としては、例えば、アラビアゴム、アルギン酸ナトリウム、トラガント等を用いることができる。無痛化剤としては、例えば、ベンジルアルコール、クロロブタノール、ソルビトール等を用いることができる。緩衝剤としては、例えば、リン酸緩衝液、酢酸緩衝液、ホウ酸緩衝液、炭酸緩衝液、クエン酸緩衝液、トリス緩衝液、グルタミン酸緩衝液、イプシロンアミノカプロン酸緩衝液等を用いることができる。保存剤としては、例えば、パラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸エチル、パラオキシ安息香酸プロピル、パラオキシ安息香酸ブチル、クロロブタノール、ベンジルアルコール、塩化ベンザルコニウム、デヒドロ酢酸ナトリウム、エデト酸ナトリウム、ホウ酸、ホウ砂等を用いることができる。防腐剤としては、例えば、塩化ベンザルコニウム、パラオキシ安息香酸、クロロブタノール等を用いることができる。ｐＨ調整剤としては、例えば、塩酸、水酸化ナトリウム、リン酸、酢酸等を用いることができる。抗酸化剤として、例えば、（１）アスコルビン酸、システインハイドロクロライド、重硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウム等のような水溶性抗酸化剤、（２）アスコルビルパルミテート、ブチル化ハイドロキシアニソール、ブチル化ハイドロキシトルエン、レシチン、プロピルガレート、α－トコフェロール等のような油溶性抗酸化剤および（３）クエン酸、エチレンジアミン四酢酸、ソルビトール、酒石酸、リン酸等のような金属キレート剤等を用いることができる。

注射剤または点滴のための輸液は、その最終工程において滅菌するかあるいは無菌操作法、例えば、フィルター等で濾過して滅菌し、次いで無菌的な容器に充填することによって製造することができる。また、注射剤または点滴のための輸液は、真空乾燥および凍結乾燥による無菌粉末（薬学的に許容できる担体の粉末を含んでいてもよい。）を、適切な溶剤に用時溶解して使用することもできる。

併用または配合剤
さらに、本発明のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体等は、自己免疫疾患の予防、症状進展抑制、再発抑制および／または治療に使用される他の薬剤とともに組み合わせて使用してもよい。本発明において、他の薬剤とともに組み合わせて使用する場合（併用）の投与形態には、１つの製剤中に両成分を配合した配合剤の形態であっても、また別々の製剤としての投与形態であってもよい。その併用により、その他の薬剤の予防、症状進展抑制、再発抑制および／または治療効果を補完したり、投与量あるいは投与回数を維持ないし低減することができる。本発明のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体等と他の薬剤を別々に投与する場合には、一定期間同時投与し、その後、ＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体等のみあるいは他の薬剤のみを投与してもよい。また、本発明のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体等を先に投与し、その投与終了後に他の薬剤を投与してもよいし、他の薬剤を先に投与し、その投与終了後に本発明のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体等を後に投与してもよく、各々の投与方法は同じでも異なっていてもよい。本発明のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体等を含む製剤と他の薬剤を含む製剤のキットとして提供することもできる。ここで、他の薬剤の投与量は、臨床上用いられている用量を基準として適宜選択することができる。また、他の薬剤は任意の２種以上を適宜の割合で組み合わせて投与してもよい。また、前記他の薬剤には、現在までに見出されているものだけでなく今後見出されるものも含まれる。

例えば、本発明のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体等をＩ型糖尿病の予防、症状進展抑制、再発抑制および／または治療に適用する場合、インスリン製剤（例えば、ヒトインスリン、インスリングラルギン、インスリンリスプロ、インスリンデテミル、インスリンアスパルト等）、スルホニルウレア剤（例えば、グリベンクラミド、グリクラジド、グリメピリド等）、速攻型インスリン分泌促進薬（例えば、ナテグリニド等）、ビグアナイド製剤（例えば、メトホルミン等）、インスリン抵抗性改善薬（例えば、ピオグリタゾン等）、α－グルコシダーゼ阻害薬（例えば、アカルボース、ボグリボース等）、糖尿病性神経症治療薬（例えば、エパルレスタット、メキシレチン、イミダプリル等）、ＧＬＰ－１アナログ製剤（例えば、リラグルチド、エクセナチド、リキシセナチド等）およびＤＰＰ－４阻害剤（例えば、シタグリプチン、ビルダグリプチン、アログリプチン等）等から選択される何れか一以上の薬剤と組み合わせて使用してもよい。

また、例えば、本発明のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体等を多発性硬化症の予防、症状進展抑制、再発抑制および／または治療に適用する場合、ステロイド薬（例えば、酢酸コルチゾン、ヒドロコルチゾン、リン酸ヒドロコルチゾンナトリウム、コハク酸ヒドロコルチゾンナトリウム、酢酸フルドロコルチゾン、プレドニゾロン、酢酸プレドニゾロン、コハク酸プレドニゾロンナトリウム、ブチル酢酸プレドニゾロン、リン酸プレドニゾロンナトリウム、酢酸ハロプレドン、メチルプレドニゾロン、酢酸メチルプレドニゾロン、コハク酸メチルプレドニゾロンナトリウム、トリアムシノロン、酢酸トリアムシノロン、トリアムシノロンアセトニド、デキサメタゾン、酢酸デキサメタゾン、リン酸デキサメタゾンナトリウム、パルミチン酸デキサメタゾン、酢酸パラメタゾン、ベタメタゾン等）、インターフェロンβ－１ａ、インターフェロンβ－１ｂ、酢酸グラチラマー、ミトキサントロン、アザチオプリン、シクロホスファミド、シクロスポリン、メトトレキサート、クラドリビン、副腎皮質刺激ホルモン（ＡＣＴＨ）、コルチコトロピン、ミゾリビン、タクロリムス、フィンゴリモドおよびアレムツズマブ等から選択される何れか一以上の薬剤と組み合わせて使用してもよい。

また、例えば、本発明のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体等を全身性エリテマトーデスの予防、症状進展抑制、再発抑制および／または治療に適用する場合、ステロイド薬（例えば、上記記載のステロイド薬）、免疫抑制剤（例えば、シクロスポリン、タクロリムス、フィンゴリモド等）およびベリムマブから選択される何れか一以上の薬剤と組み合わせて使用してもよい。

例えば、本発明のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体等を関節リウマチの予防、症状進展抑制、再発抑制および／または治療に適用する場合、ステロイド薬（例えば、上記記載のステロイド薬）、抗リウマチ薬（例えば、メトトレキサート、スルファサラジン、ブシラミン、レフルノミド、ミゾリビン、タクロリムス等）あるいは抗サイトカイン薬（例えば、インフリキシマブ、アダリムマブ、トシリズマブ、エタネルセプト、ゴリムマブおよびセルトリズマブ等）およびアバタセプト等から選択される何れか一以上の薬剤と組み合わせて使用してもよい。

その他の自己免疫疾患の予防、症状進展抑制、再発抑制および／または治療に適用する場合、本発明のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体等と、上記に記載した他の薬剤の何れか一以上と組み合わせて使用してもよい。

本発明を以下の実施例によってさらに詳しく説明するが、本発明の範囲はこれに限定されない。本発明の記載に基づき種々の変更、修飾が当業者には可能であり、これらの変更、修飾も本発明に含まれる。

実施例１：組換えヒトＰＤ－１－Ｆｃ融合タンパクを用いたＭｅＭｏ（登録商標）マウスへの免疫
本発明のＰＤ－１に特異的に結合する第一アームを取得する方法として、ＭｅＭｏ（登録商標）マウス（WO2009/157771参照）に組換ヒトＰＤ－１タンパク質を免疫する方法を選択した。ＭｅＭｏ（登録商標）マウスは、非組換ヒト重鎖Ｖ遺伝子領域、Ｄ遺伝子領域およびＪ遺伝子領域ならびに組換ヒトκ軽鎖ＩｇＶκ１－３９＊０１／ＩＧＪκ１＊０１生殖細胞系列型遺伝子を含む遺伝子断片が、マウス定常領域遺伝子に連結されるように遺伝子改変されたマウスであり、抗体の標的タンパクを直接免疫することによって、多様性を有する重鎖と共通軽鎖からなる抗体を産生させることができる。

１２～１６週齢の１２匹のＭｅＭｏ（登録商標）マウスに、ＧｅｒｂｕａｄｊｕｖａｎｔＭＭ（Gerbu Biotechnik、型番#3001）を用いてエマルジョン化した、組換ヒトＰＤ－１－Ｆｃ融合タンパク質（R&D Systems、型番1086-PD）を１４日間隔で各々免疫した。免疫０日目、１４日目および２８日目に同組換ヒトＰＤ－１－Ｆｃ融合タンパク質を皮下投与し、以降のタイミングでは、ＰＢＳに溶解した同組換ヒトＰＤ－１－Ｆｃ融合タンパク質を皮下投与した。免疫２１日目、３５日目、５６日目、７７日目および９８日目にヒトＰＤ－１強制発現ＨＥＫ２９３Ｔ細胞株を用いたフローサイトメトリーにより、血清中抗体価を評価した。１０００倍希釈した血清においてヒトＰＤ－１強制発現ＨＥＫ２９３Ｔ細胞株を染色した場合、コントロールとなるヒトＰＤ－１非発現ＨＥＫ２９３Ｔ細胞株と比較してＭＦＩ値が３倍以上増加したマウスのリンパ組織を、ファージディスプレイ・ライブラリーの構築に用いた。ライブラリー構築に進む基準を満たしたマウスは、抗体価の評価日から３日間、組換ＰＤ－１－Ｆｃ融合タンパク質で追加免疫し、脾臓およびそ径リンパ節を回収した。ヒトＰＤ－１およびカニクイザルＰＤ－１に対する血清中抗体価が１／１００以上、かつ追加免疫によって抗体価が上昇しないマウスも脾臓およびそ径リンパ節を回収した。それらのリンパ組織からＲＮＡを抽出したのち、ｃＤＮＡ合成を行った。

実施例２：抗ＰＤ－１抗体取得のためのファージディスプレイ・ライブラリーの構築（タンパク免疫）
実施例１にて調製したＤＮＡを使用して、イムノグロブリン重鎖可変領域ファミリーに特異的なプライマーを用いてＰＣＲ反応を行った。同ＰＣＲ産物を制限酵素ＳｆｉＩとＸｈｏＩで切断した後、同制限酵素を用いて切断したファージミドベクター［共通軽鎖をコードする遺伝子（ヒトκ軽鎖ＩｇＶκ１－３９＊０１／ＩＧＪκ１＊０１生殖細胞系列型遺伝子）を含む］に挿入し、同ライブラリーを構築した。

実施例３：抗ＰＤ－１抗体のスクリーニング
ヒトＰＤ－１－Ｆｃ融合タンパク質、ヒトＰＤ－１－Ｈｉｓタグ融合タンパク質、カニクイザルＰＤ－１－Ｈｉｓタグ融合タンパク質またはマウスＰＤ－１－Ｈｉｓタグ融合タンパク質をコートさせたプレートを用いて、ＰＤ－１への結合性に基づいたファージセレクションを実施した。ヒトＰＤ－１－Ｆｃ融合タンパク質を用いた場合、ファージとインキュベーションする間、ヒトＩｇＧ（SIGMA、型番I4506）を添加することによって、Ｆｃ反応性クローンを吸収した。ヒトＰＤ－１、カニクイザルＰＤ－１およびマウスＰＤ－１に結合する結合ファージが濃縮された。カニクイザルＰＤ－１強制発現ＨＥＫ２９３Ｔ細胞株でのセレクションにより、カニクイザルＰＤ－１に結合するファージが濃縮された。セレクションによって得られたファージで形質転換させた大腸菌株ＴＧ１のクローンを取得し、マスタープレートを作製した。

さらに、ヒトＰＤ－１－Ｆｃ融合タンパク質を吸着させたプレート上のＰＤ－１への結合性に基づいて、上記セレクションから得られたクローンのペリプラズム抽出物から、ファージセレクションを実施した。なお、選択する基準として、陰性対照ウェル（ＰＢＳ）で得られたシグナル（ＯＤ_４５０値）に対して、３倍以上のシグナルが得られたものを陽性クローンとした。

実施例４：抗ＰＤ－１抗体の候補クローンのＤＮＡシークエンス
実施例３のスクリーニングによって取得された陽性クローンの重鎖可変領域遺伝子のＤＮＡシークエンスを実施した。解析されたＤＮＡ配列はスーパークラスター（重鎖ＣＤＲ３が同一の長さであって、同ＣＤＲ３のアミノ酸配列が７０％以上相同である一群）とクラスター（重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列が同一である一群）に分類した。数百個のクローンが取得され、それらはスーパークラスターおよびクラスターに分類された。

実施例５：ＰＤ－１発現細胞に対する結合性評価によるスクリーニング
分類された各々スーパークラスターから、以下の条件を満たす抗ＰＤ－１モノクローナル抗体クローンを選別し、単離した。
（１）ＣＤＲ領域に高頻度に体細胞突然変異が導入され、
（２）使用頻度の高いＶＨの生殖細胞系列型遺伝子を有し、および
（３）ヒトＰＤ－１－Ｆｃ融合タンパク質に対する結合性スクリーニングにおいて高いシグナルが得られた。

それらのペリプラズム抽出物に含まれるＦａｂフラグメントを用いて、ヒトＰＤ－１強制発現ＣＨＯ－Ｓ細胞株、カニクイザルＰＤ－１強制発現ＣＨＯ－Ｓ細胞株に対する結合性を抗マウスＩｇＧポリクローナル抗体で検出することにより評価した。評価した１１７個のクローン（１０５種のクラスター）のうち、抗ＰＤ－１モノクローナル抗体クローンＰＤ１－１、ＰＤ１－２、ＰＤ１－３およびＰＤ１－４を含む２２個のクローンでヒトＰＤ－１発現ＣＨＯ－Ｓ細胞株に対する結合性が認められた。

実施例６：抗ＰＤ－１モノクローナル抗体のアミノ酸置換体の作製
クローンＰＤ１－１およびＰＤ１－４は、その重鎖可変領域のフレームワーク４に脱アミド化モチーフ（Ａｓｎ－Ｇｌｙ）を含む。脱アミド化のリスクを低減したＰＤ－１アームの取得を目的として、この脱アミド化モチーフを変換した変異体を作製した。クローンＰＤ１－４のＥＵナンバリングシステムによる１１９番目のアスパラギン（Ａｓｎ）が、公知の部位特異的変異法により、グルタミンとなるよう改変されたクローンＰＤ１－５を作製し、単離した。同クローンもヒトＰＤ－１強制発現ＣＨＯ－Ｓ細胞に対する結合性はクローンＰＤ１－４と同等であった。

実施例７：ＣＤ１９発現プラスミドベクターを用いたＭｅＭｏ（登録商標）マウスへの免疫
本発明のＣＤ１９に特異的に結合する第二アームを取得する方法として、ＭｅＭｏ（登録商標）マウス（WO2009/157771参照）にヒトＣＤ１９発現プラスミドベクターおよびカニクイザルＣＤ１９発現プラスミドベクターを免疫する方法を選択した。

ＭｅＭｏ（登録商標）マウスは、非組換ヒト重鎖Ｖ遺伝子領域、Ｄ遺伝子領域およびＪ遺伝子領域ならびに組換ヒトκ軽鎖ＩｇＶκ１－３９＊０１／ＩＧＪκ１＊０１生殖細胞系列型遺伝子を含む遺伝子断片が、マウス定常領域遺伝子に連結されるように遺伝子改変されたマウスであり、抗体の標的タンパクを発現するプラスミドベクターをＭｅＭｏ（登録商標）マウスに免疫することによって、多様性を有する重鎖と共通軽鎖からなる抗体を産生させることができる。

１２～１６週齢の１２匹のＭｅＭｏ（登録商標）マウスに、ヒトＣＤ１９発現プラスミドベクターおよび／またはカニクイザルＣＤ１９発現プラスミドベクターを各々または交互に免疫した。発現プラスミドベクターは、免疫０日目、３日目、６日目、１４日目、１７日目、２８日目、３１日目、４２日目、４９日目、６３日目および／または７０日目に投与した。ヒトＣＤ１９発現細胞株を用いたフローサイトメトリーにより、血清中抗体価を評価した。１００倍希釈した血清においてヒトＣＤ１９発現細胞株を染色した場合、コントロールとなるヒトＣＤ１９非発現細胞株と比較してＭＦＩ値が３倍以上増加したマウスのリンパ組織を、ファージディスプレイ・ライブラリーの構築に用いた。ライブラリー構築に進む基準を満たしたマウスは、追加免疫した後、脾臓およびそ径リンパ節を回収した。それらのリンパ組織からＲＮＡを抽出したのち、ＩｇＧ定常領域特異的プライマーを用いた逆転写反応によりｃＤＮＡ合成を行った。

実施例８：抗ＣＤ１９抗体取得のためのファージディスプレイ・ライブラリーの構築
実施例７にて調製したＤＮＡからイムノグロブリン重鎖可変領域ファミリーに特異的なプライマーを用いてＰＣＲ反応を行った。同ＰＣＲ産物を制限酵素で切断した後、当該制限酵素を用いて切断したファージミドベクター［共通軽鎖をコードする遺伝子（ヒトκ軽鎖ＩｇＶκ１－３９＊０１／ＩＧＪκ１＊０１生殖細胞系列型遺伝子）を含む］に挿入し、同ライブラリーを構築した。

実施例９：抗ＣＤ１９抗体のスクリーニング
ヒトＣＤ１９－Ｆｃ融合タンパク質（R&D systems、型番9269-CD）、カニクイザルＣＤ１９－Ｆｃ融合タンパク質（NovoPro Bioscience、型番504385）、ヒトＢ細胞株ＲａｊｉまたはカニクイザルＣＤ１９強制発現ＨＥＫ２９３Ｔ細胞株を用いて、ＣＤ１９への結合性に基づいたファージセレクションを実施した。セレクションによって得られたファージで形質転換させた大腸菌株ＴＧ１のクローンを取得し、マスタープレートを作製した。なお、選択基準として、陰性対照で得られたシグナル（ＯＤ_４５０値またはＭＦＩ）に対して、３倍以上のシグナルが得られたものを陽性クローンとした。

実施例１０：抗ＣＤ１９抗体の候補クローンのＤＮＡシークエンス
実施例９のスクリーニングによって取得された陽性クローンの重鎖可変領域遺伝子のＤＮＡシークエンスを実施した。解析されたＤＮＡ配列はスーパークラスター（重鎖ＣＤＲ３が同一の長さであって、重鎖可変領域のアミノ酸配列が相互に７０％以上相同である一群）とクラスター（重鎖ＣＤＲ３および重鎖可変領域のアミノ酸配列が各々相互に同一である一群）に分類した。

初回のスクリーニングにおいて、数百個のクローンが取得され、それらはスーパークラスター、クラスターおよび４種の生殖細胞系列に分類された。２回目のスクリーニングにおいて、数百個のクローンが取得され、スーパークラスター、クラスターおよび８種の生殖細胞系列に分類された。その内、１９種のスーパークラスターが初回のスクリーニングとは異なっていた。

実施例１１：ＣＤ１９に対する結合性評価によるスクリーニング
分類された各スーパークラスターから、以下の条件を満たす抗ＣＤ１９モノクローナル抗体クローンを選別し、単離した。
（１）ＣＤＲ領域に高頻度に体細胞突然変異が導入され、
（２）使用頻度の高いＶＨの生殖細胞系列型遺伝子を有し、および
（３）ＣＤ１９に対する結合性スクリーニングにおいて高いシグナルが得られた。

それらのペリプラズム抽出物に含まれるＦａｂフラグメントを用いて、ＣＤ１９に対する結合性を評価した。

評価したクローンのうち、抗ＣＤ１９モノクローナル抗体クローンＣＤ１９－１、ＣＤ１９－２、ＣＤ１９－３、ＣＤ１９－４およびＣＤ１９－５を含む複数のクローンにヒトＣＤ１９発現細胞株に対する結合性が認められた。

実施例１２：ＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体の調製
ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームの各々の重鎖を発現する発現ベクターは、実施例５および実施例６にて選択した抗ＰＤ－１モノクローナル抗体クローンＰＤ１－１～ＰＤ１－５の各々の重鎖可変領域をコードするＤＮＡを、ＩｇＧ_１重鎖定常領域をコードするＤＮＡに各々連結して作製した。一方、ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームの重鎖を発現する発現ベクターは、実施例１１にて選択した抗ＣＤ１９モノクローナル抗体クローンＣＤ１９－１～ＣＤ１９－５の重鎖可変領域をコードするＤＮＡを、ＩｇＧ_１重鎖定常領域をコードするＤＮＡに連結して作製した。ここで、それらの重鎖定常領域を発現する遺伝子には、ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームの場合には、Ｌ３５１Ｄ／Ｌ３６８Ｅ変異（ＤＥ変異）を有するＦｃ領域を発現するものを使用し、ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームの場合には、Ｌ３５１Ｋ／Ｔ３６６Ｋ変異（ＫＫ変異）を有するＦｃ領域を発現するものを使用した。これら発現ベクターには、ＩＧＶＫ１－３９／ＪＫ１共通軽鎖もともに発現するように、これをコードする遺伝子を含むように構築された。さらに、これらの重鎖定常領域を発現する遺伝子には、各々、Ｆｃエフェクター活性を消失させるため、重鎖定常領域の２３５番目ロイシンがグリシンに、２３６番目グリシンがアルギニンに置換されて発現するように改変されており、さらに、翻訳後のプロセシングを回避するため、重鎖定常領域Ｃ末端４４７番目のリジンが欠失するよう改変されたものを使用した。これら発現ベクターを、ともに、ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ２９３Ｆ細胞に遺伝子導入し、培養上清中に抗体を産生させた。培養上清を回収し、プロテインＡアフィニティークロマトグラフィーにて処理することにより、本発明のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性モノクローナル抗体である、クローンＣＤ１９－１（Ｂｉ）、クローンＣＤ１９－２（Ｂｉ）、クローンＣＤ１９－３（Ｂｉ）、クローンＣＤ１９－４（Ｂｉ）およびクローンＣＤ１９－５（Ｂｉ）を各々精製した。

なお、これらＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体クローンは、その作製において使用された抗ＣＤ１９モノクローナル抗体クローンＣＤ１９－１、ＣＤ１９－２、ＣＤ１９－３、ＣＤ１９－４およびＣＤ１９－５に由来する、ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームを有する点において、それら抗ＣＤ１９モノクローナル抗体クローンに各々対応している。また、これらＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体クローンは、何れもＰＤ１－５に由来する、ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームを有する。

実施例１３：抗ＣＤ１９モノクローナル抗体の変異体およびそれらに対応するＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体の作製
実施例１２において作製したＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体クローンは、医薬品化のためにスケールアップされた生産工程においては、第一アーム重鎖／軽鎖複合体、第二アーム重鎖／軽鎖複合体および／またはそれらの各ホモダイマーである副産物との分離精製が十分に達成できないおそれがある。そのため、陽イオン交換クロマトグラフィー精製時において、当該副産物からの当該二重特異性抗体の分離向上を目的とし、等電点を高めた抗ＣＤ１９モノクローナル抗体のアミノ酸変異体を作製した。

クローンＣＤ１９－５のＶＨのアミノ酸配列を表す配列番号３０における１１４番目のグルタミンを、公知の部位特異的変異法によりアルギニンに置換した変異体を作製した。なお、本発明において、その変異体を「ＣＤ１９－６」と命名した。また、各抗体の等電点は、遺伝子およびアミノ酸配列解析ソフトウェアGenetyx（株式会社ゼネティクス）を用いて計算した。

さらに、ＣＤ１９－６のＶＨを有する重鎖のＣ末端（但し、Ｃ末端アミノ酸であるリシンを有する。）に、グリシンおよび配列番号６７～７０で表されるペプチドが各々付加された形態の各変異体（以下、これらをまとめて「ＣＤ１９－６／Ｃ末端ペプチド付加体」と記載する。）を、公知の遺伝子改変手法により作製した。なお、本発明において、ＣＤ１９－６の当該Ｃ末端に、配列番号６７で表されるペプチドが付加された形態の変異体を、「ＣＤ１９－７」と命名した。

実施例１２と同様の手法に従い、これら抗ＣＤ１９モノクローナル抗体の変異体をコードする各ＤＮＡとクローンＰＤ１－５をコードするＤＮＡが各々挿入された同実施例記載の各発現ベクターを、ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ２９３Ｆ細胞に遺伝子導入して培養上清中に抗体を産生させた。培養上清を回収し、プロテインＡアフィニティークロマトグラフィーにて処理することにより、本実施例において作製された各変異体に由来する本発明の二重特異性抗体を各々精製した。これらのうち、ＣＤ１９－６に由来する同二重特異性抗体を「ＣＤ１９－６（Ｂｉ）」とし、ＣＤ１９－７に由来する同二重特異性抗体クローンを「ＣＤ１９－７（Ｂｉ）」と命名した。

実施例１４：ＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体と副産物との精製分離の検討
実施例１２および１３において各々作製されたＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体について、それらの製造において生成されてくると懸念される副産物との精製分離の成否について検討した。

実施例１２および１３において各々回収した同二重特異性抗体が含まれる培養上清を別途、プロテインＡアフィニティークロマトグラフィーおよびサイズ排除クロマトグラフィーにて処理することにより、同二重特異性抗体と副産物に相当する抗ＰＤ－１抗体および抗ＣＤ１９抗体を各々精製した。

これら各精製抗体が含まれる溶媒を、ｐＨ６．０となるように限外濾過法によりバッファー置換した。バッファーＡ（ｐＨ７．０）を用いて平衡化した陽イオン交換カラムTSKgel SP-STAT Column（東ソー、型番0021964）にバッファー置換後の各精製抗体をアプライした。１ｍｏｌ/Ｌ塩化ナトリウムを含むバッファーＢ（ｐＨ７．０）を用いた塩グラジエントによって、カラムに結合した各精製抗体を溶出した。なお、移動相の流速は０．５ｍＬ／分、溶出はバッファーＡからバッファーＢへのリニアグラジエントとし、各精製抗体をアプライ開始後０～１０分はバッファーＢを０％、１０～４０分にかけてバッファーＢを０～１００％に直線的に増やし、４０～５０分はバッファーＢを１００％とした。

クローンＣＤ１９－２（等電点：８．３２）、ＣＤ１９－５（等電点：８．４０）、ＣＤ１９－６（等電点：８．４９）およびＣＤ１９－７（等電点：８．７５）の陽イオン交換カラムにおける保持時間（分）は、各々１５．１６７、１５．１８５、１５．７４９および１７．５２１であり、クローンＣＤ１９－６およびＣＤ１９－７については保持時間が延長した。一方、クローンＰＤ１－３（等電点：７．６７）およびＰＤ１－５（等電点：７．５２）は陽イオン交換カラムに結合せず溶出した。

一方、ＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体クローンＣＤ１９－２（Ｂｉ）およびＣＤ１９－５（Ｂｉ）は陽イオン交換カラムに結合せず溶出したが、クローンＣＤ１９－６（Ｂｉ）およびＣＤ１９－７（Ｂｉ）は、その保持時間（分）１３．７１５および１４．９５５であった。

以上のように、第二アームにおけるアミノ酸置換あるいはその重鎖Ｃ末端への特定のペプチドの付加により等電点を高めることで、陽イオン交換クロマトグラフィー精製時において、目的物である本発明の二重特異性抗体と副産物である抗ＰＤ－１抗体および抗ＣＤ１９抗体との分離向上が図られ、当該副産物の混入が極めて低減された本発明の二重特異性抗体の提供が可能となった。

実施例１５：ＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体の結合性評価
ヒトＩｇＧ１－Ｆｃ融合ヒトＰＤ－１細胞外領域組換タンパク質（R&D systems、型番1086-PD）を用いたBiacore測定にて、実施例１２および１３において取得したＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性モノクローナル抗体の第一アームのＰＤ－１組換タンパク質への結合親和性を評価した。なお、当該組換タンパク質の固定化には、ＳｅｒｉｅｓＳＳｅｎｓｏｒＣｈｉｐＣＭ５センサーチップ（GEヘルスケア、型番29-1049-88）を使用した。

同様に、ヒトＩｇＧ１－Ｆｃ融合ヒトＣＤ１９細胞外領域組換タンパク質（R&D systems、型番9269-CD）を用いたBiacore測定にて、同抗体の第二アームのＣＤ１９結合親和性を評価した。各クローンの第一アームのＰＤ－１への結合親和性（Ｋｄ値）ならびに第二アームのＣＤ１９への結合親和性を図１１に示す。ＣＤ１９－６（Ｂｉ）のＰＤ－１およびＣＤ１９への各結合親和性は、実施例１３のアミノ酸置換を受けていない構造のＣＤ１９－５（Ｂｉ）の活性に比べ向上していることが確認された。

実施例１６：ＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体の結合性確認
実施例１２および１３において取得したＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体がヒトＰＤ－１、カニクイザルＰＤ－１、ヒトＣＤ１９およびカニクイザルＣＤ１９に各々特異的に結合することを確認した。ヒトＰＤ－１強制発現ＣＨＯ－Ｓ細胞株、カニクイザルＰＤ－１強制発現ＣＨＯ－Ｓ細胞株、ＣＨＯ－Ｓ細胞株、ヒトＣＤ１９強制発現ＣＨＯ－Ｋ１細胞株、カニクイザルＣＤ１９強制発現ＣＨＯ－Ｋ１細胞株およびＣＨＯ－Ｋ１細胞株に対して、クローンＣＤ１９－１（Ｂｉ）～ＣＤ１９－６（Ｂｉ）を各々添加し、氷上にて２０分間インキュベートした。細胞を洗浄した後、ＰＥ標識ヤギ抗ヒトＩｇＧ－ＦｃＦ（ａｂ’）_２フラグメント抗体（ThermoFisher、型番H10104）１００μＬを添加して氷上にて２０分間インキュベートした。細胞を洗浄した後、フローサイトメトリーにて同抗体の第一アームのＰＤ－１結合性および第二アームのＣＤ１９結合性を評価した。当該アッセイの結果を図１２～図１６に示す。

いずれのクローンもヒトＰＤ－１、カニクイザルＰＤ－１、ヒトＣＤ１９およびカニクイザルＣＤ１９に結合した。なお、この実験系での非特異的結合は検出されなかった。

実施例１２において取得したＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性モノクローナル抗体がＰＤ－１およびＣＤ１９に同時に各々特異的に結合することを確認した。まず、ヒトＣＤ１９強制発現ＣＨＯ－Ｋ１細胞株およびＣＨＯ－Ｋ１細胞株に対して、クローンＣＤ１９－１（Ｂｉ）～ＣＤ１９－５（Ｂｉ）を各々添加し、氷上にて２０分間インキュベートした。細胞を洗浄した後、６×Ｈｉｓタグ融合ヒトＰＤ－１細胞外領域組換タンパク質（R&D systems、型番8986-PD）１００μＬを添加して氷上にて２０分間インキュベートした。細胞を洗浄した後、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８標識マウス抗Ｈｉｓタグ抗体（MBL、型番D291-A48）１００μＬを添加して氷上にて２０分間インキュベートした。細胞を洗浄した後、フローサイトメトリーにてヒトＰＤ－１細胞外領域組換タンパク質の結合量を評価した。当該アッセイの結果を図１７に示す。

いずれのクローンもＰＤ－１およびＣＤ１９に同時に結合した。なお、この実験系での非特異的結合は検出されなかった。

実施例１７：ＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体の第一アームの結合特性評価
実施例１２において取得したＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体の第一アームのＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１結合への影響を評価するため、同二重特異性抗体クローンと可溶性ＰＤ－Ｌ１組換タンパク質のＰＤ－１への結合に関する競合結合アッセイを行った。まず、ヒトＰＤ－１強制発現ＣＨＯ－Ｓ細胞株に対してクローンＣＤ１９－１（Ｂｉ）～ＣＤ１９－５（Ｂｉ）、ニボルマブおよび抗ヒトＰＤ－１抗体Ｊ１０５（Immunology Letters, 2002, Vol.83, Issue 3, p.215-220）を氷上にて各々添加した。さらに、ビオチン標識用キット（同仁化学研究所、型番LK03）を用いてビオチン化した可溶性ＰＤ－Ｌ１組換タンパク質（R&D systems、型番156-B7）を氷上にて添加した。細胞を洗浄した後、ＡＰＣ標識ストレプトアビジン（BioLegend、型番405207）を氷上にて添加した。細胞を洗浄した後、フローサイトメトリーにて可溶性ＰＤ－Ｌ１組換タンパク質の結合量を評価した。その結果を図１８に示す。

クローンＣＤ１９－１（Ｂｉ）～ＣＤ１９－５（Ｂｉ）は、ＰＤ－１に対する可溶性ＰＤ－Ｌ１組換タンパク質の結合を許容した。一方、ニボルマブおよびＪ１０５は、同条件でＰＤ－１に対する可溶性ＰＤ－Ｌ１組換タンパク質の結合を完全に阻害した。

また、実施例５において取得された抗ＰＤ－１モノクローナル抗体クローンＰＤ１－１～ＰＤ１－４を各々第一アームとした二重特異性抗体も、同様の評価により、ＰＤ－１に対する可溶性ＰＤ－Ｌ１組換タンパク質の結合を許容することが確認された。

実施例１８：ＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体の活性化Ｂ細胞に対するインビトロ抑制作用
健常人由来末梢血単核細胞（LONZA、型番CC-2702）から、B Cell Isolation Kit II, human（Miltenyi Biotec、型番130-091-151）によって分離したＢ細胞を用いて、ヒトＩｇＭ産生に対する抑制作用を評価した。細胞培養プレートにヒトＢ細胞を播種し、抗ヒトＣＤ７９Ｂ抗体（LifeSpan Biosciences、型番LS-C134648）、ヒトＣＤ４０Ｌ組換タンパク質（Enzo Life Sciences、型番ALX-522-110）、ヒトＩＬ－２１組換タンパク質（R&D systems、型番8879-IL）を添加して、活性化処置を行った。クローンＣＤ１９－１（Ｂｉ）～ＣＤ１９－５（Ｂｉ）またはコントロール抗体を処置し、活性化処置後の培養上清中に含まれるＩｇＭをＥＬＩＳＡ法（ThermoFisher、型番BMS2098）にて定量した。その結果を図１９に示す。クローンＣＤ１９－１（Ｂｉ）～ＣＤ１９－５（Ｂｉ）は、何れもＩｇＭ産生を抑制した。なお、図中のＩｇＭ産生量（ｎｇ／ｍＬ）は、平均値±標準誤差（Ｎ＝４）で示した。

実施例１９：ＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体の活性化Ｂ細胞に対するインビボ抑制作用
健常人由来末梢血単核細胞（LONZA、型番CC-2702）を移植したNOD.Cg-PrkdcscidIl2rgtm1Wjl/SzJマウス（以下、ＮＳＧマウスと略記する。）を用いて、ヒトＩｇＧ_２産生に対する抑制作用を評価した。ＮＳＧマウス１匹当たり１×１０^７個の健常人由来末梢血単核細胞を移植した。移植３日目、７日目、１０日目、１４日目および１７日目に、クローンＣＤ１９－１（Ｂｉ）～ＣＤ１９－４（Ｂｉ）またはコントロール抗体を３ｍｇ／ｋｇの投与量で１日１回各々腹腔内投与した。移植２１日目に尾静脈より採血を行い、血清を調製した。一方、クローンＣＤ１９－５（Ｂｉ）およびＣＤ１９－６（Ｂｉ）については、移植３日目、７日目および１０日目に、同様の用法用量にて各々腹腔内投与した。この際も並行してコントロール抗体を腹腔内投与した。移植１４日目に尾静脈より採血を行い、血清を調製した。血清中に含まれるヒトＩｇＧ_２をＥＬＩＳＡ法（ThermoFisher、型番BMS2093）にて定量した。図２０および２１にその結果を示す。クローンＣＤ１９－１（Ｂｉ）～ＣＤ１９－６（Ｂｉ）は、何れもＩｇＧ_２産生を抑制した。なお、図中のＩｇＧ_２産生量（μｇ／ｍＬ）は、平均値±標準誤差（Ｎ＝４～８）で示した。

実施例２０：ＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体のＰＤ－１への結合に対する交差競合性の評価
ＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体の作製に使用される抗ＰＤ－１モノクローナル抗体の各クローンＰＤ１－１～ＰＤ１－５を第一アームとした二重特異性抗体のＰＤ－１への結合に対する交差競合性を評価するため、競合結合アッセイを行った。

まず、ヒトＰＤ－１発現ＣＨＯ－Ｓ細胞株に対して、クローンＰＤ１－５を第一アームとした二重特異性抗体を氷上にて添加した。さらに、ビオチン標識したクローンＰＤ１－１～ＰＤ１－５を各々第一アームとした二重特異性抗体を各々添加し、氷上にてインキュベートした。細胞を洗浄した後、ＰＥ標識ストレプトアビジン（BD Pharmingen，型番554061）を添加して氷上にてインキュベートした。細胞を洗浄した後、フローサイトメトリーにてビオチン標識した同抗体の結合量を評価した。

クローンＰＤ１－５を第一アームとした二重特異性抗体は、クローンＰＤ１－１～ＰＤ１－４を各々第一アームとした同抗体のＰＤ－１への結合を阻害し、それらのＰＤ－１への結合に対して交差競合することが確認された。

実施例２１：ヒト末梢血単核細からのサイトカイン放出に対する、ＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体のインビトロ作用の評価
ＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体のサイトカイン放出活性を解析することを目的として、本発明の二重特異性抗体クローンおよびマウス抗ヒトＣＤ３抗体ＯＫＴ３（BioLegend、型番317304）のヒト末梢血単核細胞（以下、ヒトＰＢＭＣ）への添加実験を各々実施した。

ヒトＰＢＭＣ（LONZA、型番CC-2702）に、クローンＣＤ１９－６（Ｂｉ）およびＯＫＴ３を添加し、培養を行った。サイトメトリックビーズアレイ（BD Biosciences、型番551809）を用いたフローサイトメトリーにて培養上清中に含まれるＩＬ－２を定量した。その結果を図２２に示す。なお、図中のＩＬ－２産生量（ｐｇ／ｍＬ）は、平均値±標準誤差（Ｎ＝３）で示した。

ＯＫＴ３はＩＬ－２産生を顕著に誘導したのに比べ、ＣＤ１９－６（Ｂｉ）によるＩＬ－２産生は認められなかった。

実施例２２：ＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体の物理化学的安定性評価
本発明のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体は、示差走査カロリメトリー（ＤＳＣ）による構造安定性評価、拡散係数変化率（ＤＬＳ）測定によるコロイド安定性およびストレス条件下（例えば、ｐＨ３～４／５℃下またはｐＨ７／５℃下／凍結融解５回）における化学的安定性（例えば、タンパク質濃度変化、分子構造変化、会合／凝集の有無、チャージバリアント生成の有無、構造変化およびＣＤ１９への結合性）の何れの物理化学的安定性評価において良好な性能を示すことが確認された。

本発明のＰＤ－１／ＣＤ１９二重特異性抗体またはその抗体断片は、自己免疫疾患または移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の予防、症状進展抑制、再発抑制および／または治療に有用である。

Claims

ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームおよびＣＤ１９に特異的に結合する第二アームを有し、ＰＤ－１およびＣＤ１９に各々特異的に結合する二重特異性抗体であって、
（Ａ）ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームは、配列番号５のアミノ酸配列からなるＶＨおよび配列番号２５のアミノ酸配列からなるＶＬを有し、ならびに
（Ｂ）ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームは、配列番号６２のアミノ酸配列からなるＶＨおよび配列番号２５のアミノ酸配列からなるＶＬを有する、当該二重特異性抗体。
ＩｇＧ_１抗体である、請求項１記載の二重特異性抗体。
ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームのＶＨを有する重鎖が、配列番号２３のアミノ酸配列からなる重鎖定常領域を有する、請求項１または２記載の二重特異性抗体。
ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームのＶＨを有する重鎖が、配列番号２４のアミノ酸配列からなる重鎖定常領域を有する、請求項１～３の何れか一項記載の二重特異性抗体。
ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームのＶＬを有する軽鎖およびＣＤ１９に特異的に結合する第二アームのＶＬを有する軽鎖が、各々、配列番号２９のアミノ酸配列からなる軽鎖定常領域を有する、請求項１～４の何れか一項記載の二重特異性抗体。
ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームおよびＣＤ１９に特異的に結合する第二アームを有し、ＰＤ－１およびＣＤ１９に各々特異的に結合する二重特異性抗体であって、
（Ａ）ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームのＶＨを有する重鎖、
（Ｂ）ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームのＶＬを有する軽鎖、
（Ｃ）ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームのＶＨを有する重鎖、および
（Ｄ）ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームのＶＬを有する軽鎖からなり、
（ａ）ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームのＶＨを有する重鎖が、配列番号５のアミノ酸配列からなるＶＨおよび配列番号２３のアミノ酸配列からなる重鎖定常領域を有し、
（ｂ）ＰＤ－１に特異的に結合する第一アームのＶＬを有する軽鎖が、配列番号２５のアミノ酸配列からなるＶＬおよび配列番号２９のアミノ酸配列からなる軽鎖定常領域を有し、
（ｃ）ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームのＶＨを有する重鎖が、配列番号６２のアミノ酸配列からなるＶＨおよび配列番号２４のアミノ酸配列からなる重鎖定常領域を有し、ならびに
（ｄ）ＣＤ１９に特異的に結合する第二アームのＶＬを有する軽鎖が、配列番号２５のアミノ酸配列からなるＶＬおよび配列番号２９のアミノ酸配列からなる軽鎖定常領域を有する、
当該二重特異性抗体。