JP7398121B2 - カンキツの品種の識別方法および識別キット - Google Patents
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Description
〔1〕カンキツの品種の識別方法であって、
下記(a)~(c)および(e)~(l)の一塩基多型(SNP)マーカー:
(a)配列番号1で表される塩基配列の31番目の塩基に相当するSNPマーカー(SI312);
(b)配列番号2で表される塩基配列の33番目の塩基に相当するSNPマーカー(SI001);
(c)配列番号3で表される塩基配列の36番目の塩基に相当するSNPマーカー(SI322);
(e)配列番号5で表される塩基配列の35番目の塩基に相当するSNPマーカー(SI306);
(f)配列番号6で表される塩基配列の37番目の塩基に相当するSNPマーカー(SI201);
(g)配列番号7で表される塩基配列の44番目の塩基に相当するSNPマーカー(SI210);
(h)配列番号8で表される塩基配列の74番目の塩基に相当するSNPマーカー(SI381);
(i)配列番号41で表される塩基配列の40番目の塩基に相当するSNPマーカー(SI145);
(j)配列番号42で表される塩基配列の33番目の塩基に相当するSNPマーカー(SI2711);
(k)配列番号43で表される塩基配列の38番目の塩基に相当するSNPマーカー(SI281);および、
(l)配列番号44で表される塩基配列の55番目の塩基に相当するSNPマーカー(SI2042);
からなるSNPマーカーの群より選択される少なくとも1つのSNPマーカーを用いて、カンキツ被検体の前記品種を特定する特定工程を含む、識別方法。
〔2〕前記SNPマーカーの群より選択される2つ以上の前記SNPマーカーの組合せを用いて、カンキツ被検体の前記品種を特定する特定工程を含む、上記〔1〕に記載の識別方法。
〔3〕前記品種は、宮川早生、ダンカングレープフルーツ、トロビタスイートオレンジ、リスボンレモン、璃の香、不知火(またはデコポン(登録商標))、イヨカン、川野なつだいだい、ハッサク、太田ポンカン、みはや、あすみ、あすき、麗紅、津之輝、西南のひかり、津之望、はるひ、清見、せとか、はるみ、はれひめ、甘平、愛媛果試第28号(または紅まどんな(登録商標))、ユズ、土佐文旦、河内晩柑、ヒュウガナツ、スダチ、大宜味クガニー、カラ、タンカンT132、セミノール、カボスの品種、天草、黄金柑、キシュウミカン、スイートスプリング、サンボウカン、アンコール、たまみ、西之香、サガマンダリン、マーコット、南香、あまか、かんきつ中間母本農6号、カブス、せとみ、陽香、朱見、早香、べにばえ、はれやか、津之香、ミホコール、ダンシータンジェリン、クレメンティン、チチュウカイマンダリン、キングマンダリン、ミネオラ、オーランド、フォーチュン、サザンイエロー、ありあけ、安芸タンゴール、ウィルキング、ページ、ロビンソン、リー、フェアチャイルド、ノバ、オセオラ、清峰、かんきつ中間本母農5号、サザンレッド、辺塚だいだい、スィートライム、タヒチライム、サマーフレッシュ、タチバナ、ユコウ、ジャバラ、および、クネンボである、上記〔1〕または〔2〕に記載の識別方法。
〔4〕前記品種は、あすき、璃の香、みはや、あすみ、津之望、はるひ、津之輝、西南のひかり、麗紅、はれひめ、せとか、甘平、愛媛果試第28号、はるみ、かんきつ中間母本農6号、たまみ、西之香、およびあまかである、上記〔3〕に記載の識別方法。
〔5〕前記特定工程において、前記カンキツ被検体について、下記(1)~(30)からなる群より選択される少なくとも1つの前記品種の特定を行う、上記〔1〕に記載の識別方法:
(1)前記SI001および前記SI201からなるサブセット、または、前記SI001および前記SI210からなるサブセット、または、前記SI322および前記SI381からなるサブセットを用いた、宮川早生の特定;
(2)前記SI001および前記SI149をからなるサブセットを用いた、ダンカングレープフルーツの特定;
(3)前記SI001、前記SI149、前記SI210、前記SI312、および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI149、前記SI210、前記SI312および前記SI322からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI210、前記SI306、前記SI312、およびSI381からなるサブセットを用いた、トロビタスイートオレンジの特定;
(4)前記SI312および前記SI322からなるサブセットを用いた、リスボンレモンの特定;
(5)前記SI001、前記SI149、および前記SI201からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI149、および前記SI322からなるサブセットを用いた、不知火の特定;
(6)前記SI001、前記SI149、前記SI312、および前記SI322からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI306、前記SI312、および前記SI322からなるサブセット、または、前記SI149、前記SI312、前記SI322、および前記SI381からなるサブセットを用いた、イヨカンの特定;
(7)前記SI210および前記SI322からなるサブセットを用いた、川野なつだいだいの特定;
(8)前記SI001、前記SI149、および前記SI210からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI210、および前記SI381からなるサブセットを用いた、ハッサクの特定;
(9)前記SI149、前記SI210、および前記SI312からなるサブセット、または、前記SI210、前記SI312、および前記SI322からなるサブセット、または、前記SI210、前記SI312、および前記SI381からなるサブセットを用いた、太田ポンカンの特定;
(10)前記SI306および前記SI322からなるサブセットを用いた、璃の香の特定;
(11)前記SI001および前記SI306からなるサブセットを用いた、みはやの特定;
(12)前記SI312、前記SI306、および前記SI149からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI306、および前記SI210からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI306、および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI306、および前記SI322からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI306、および前記SI201からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI149、および前記SI306からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI306、および前記SI210からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI306、および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI306、および前記SI322からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI306、および前記SI201からなるサブセット、または、前記SI149、前記SI306、および前記SI210からなるサブセット、または、前記SI149、前記SI306、および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI149、前記SI306、および前記SI201からなるサブセット、または、前記SI306、前記SI210、および前記SI322からなるサブセット、または、前記SI306、前記SI210、および前記SI201からなるサブセット、または、前記SI306、前記SI381、および前記SI322からなるサブセット、または、前記SI306、前記SI381、および前記SI201からなるサブセット、または、前記SI306、前記SI322、および前記SI201からなるサブセットを用いた、あすみの特定;
(13)前記SI001、前記SI210、および前記SI306からなるサブセット、または、前記SI306、前記SI201、および前記SI210からなるサブセットを用いた、あすきの特定;
(14)前記SI210および前記SI312からなるサブセットを用いた、麗紅の特定;
(15)前記SI001、前記SI210、および前記SI312からなるサブセット、または、前記SI210、前記SI312、および前記SI381からなるサブセットを用いた、津之輝の特定;
(16)前記SI149、前記SI210、および前記SI306からなるサブセット、または、前記SI210、前記SI306、および前記SI322からなるサブセットを用いた、西南のひかりの特定;
(17)前記SI001、前記SI210、および前記SI312からなるサブセット、または、前記SI210、前記SI312、および前記SI381からなるサブセットを用いた、津之望の特定;
(18)前記SI201および前記SI306からなるサブセット、または、前記SI201および前記SI381からなるサブセット、または、SI201およびSI322からなるサブセットを用いた、はるひの特定;
(19)前記SI201、前記SI312、および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI149、前記SI201、および前記SI210からなるサブセット、または、前記SI149、前記SI210、および前記SI322からなるサブセットを用いた、清見の特定;
(20)前記SI001、前記SI201、および前記SI312からなるサブセット、または、前記SI210、前記SI312、および前記SI381からなるサブセットを用いた、せとかの特定;
(21)前記SI312、前記SI210、前記SI149、および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI210、前記SI149、および前記SI322からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI210、前記SI149、および前記SI201からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI306、前記SI210、および前記SI201からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI210、前記SI381、および前記SI201からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI210、前記SI322、および前記SI201からなるサブセットを用いた、はるみの特定;
(22)前記SI306、前記SI210、および前記SI001からなるサブセット、または、前記SI149、前記SI210、および前記SI322からなるサブセット、または、前記SI210、前記SI306、および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI306、前記SI210、および前記SI322からなるサブセットを用いた、はれひめの特定;
(23)前記SI149、前記SI210、および前記SI306からなるサブセットを用いた、甘平の特定;
(24)前記SI001、前記SI306、および前記SI322からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI201、および前記SI322からなるサブセットを用いた、愛媛果試第28号の特定;
(25)前記SI001および前記SI381からなるサブセットを用いた、ユズの特定;
(26)SI201、およびSI306からなるサブセットを用いた、河内晩柑の特定;
(27)前記SI001、前記SI149、および前記SI381からなるサブセットを用いた、たまみの特定;
(28)前記SI312、前記SI201、および前記SI306からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI210、および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI381、および前記SI201からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI306、および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI306、および前記SI201からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI210、および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI381、および前記SI201からなるサブセット、または、前記SI149、前記SI306、および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI149、前記SI210、および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI149、前記SI381、および前記SI201からなるサブセットを用いた、西之香の特定;
(29)前記SI001、前記SI149、および前記SI306、または、前記SI001、前記SI149、および前記SI210、または、前記SI001、前記SI149、および前記SI322からなるサブセットを用いた、あまかの特定;および、
(30)前記SI312および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI312および前記SI322からなるサブセットを用いた、かんきつ中間母本農6号の特定;
前記SI149は、配列番号4で表される塩基配列の66番目の塩基に相当するSNPマーカーである。
〔6〕前記特定工程において、前記カンキツ被検体について、下記(31)~(52)からなる群より選択される少なくとも1つの前記品種の特定を行う、上記〔1〕に記載の識別方法:
(31)前記SI201、前記SI2042および前記SI312からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI2042および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI322および前記SI306からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI306および前記SI201からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI306および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI2042、前記SI001および前記SI145からなるサブセット、または、前記SI2042、前記SI001および前記SI281からなるサブセット、または、前記SI2042、前記SI001および前記SI201からなるサブセット、または、前記SI2042、前記SI145および前記SI322からなるサブセット、または、前記SI2042、前記SI145および前記SI306からなるサブセット、または、前記SI2042、前記SI322および前記SI306からなるサブセット、または、前記SI2042、前記SI322および前記SI201からなるサブセット、または、前記SI2042、前記SI281および前記SI306からなるサブセット、または、前記SI2042、前記SI2711および前記SI201からなるサブセット、または、前記SI2042、前記SI306および前記SI201からなるサブセット、または、前記SI2042、前記SI306および前記SI210からなるサブセット、または、前記SI2042、前記SI306および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI2042、前記SI201および前記SI210からなるサブセット、または、前記SI2042、前記SI201および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI322および前記SI306からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI281および前記SI306からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI306および前記SI201からなるサブセット、または、前記SI322、前記SI281および前記SI306からなるサブセット、または、前記SI322、前記SI306および前記SI210からなるサブセット、または、前記SI281、前記SI306および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI306、前記SI201および前記SI210からなるサブセットを用いた、璃の香の特定;
(32)前記SI2042、前記SI2711、前記SI312および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI001、前記SI2711および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI145、前記SI2711および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI2711、前記SI306および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI2711、前記SI210および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI2042、前記SI2711、前記SI201および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI2042、前記SI2711、前記SI210および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI2711、前記SI201および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI2711、前記SI210および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI145、前記SI2711、前記SI201および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI2711、前記SI306、前記SI201および前記SI381からなるサブセットを用いた、朱見の特定;
(33)前記SI145、前記SI210および前記SI281からなるサブセット、または、前記SI322、前記SI281および前記SI201からなるサブセット、または、前記SI322、前記SI281および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI281、前記SI2711および前記SI210からなるサブセット、または、前記SI281、前記SI210および前記SI381からなるサブセットを用いた、あすきの特定;
(34)前記SI145および前記SI306からなるサブセットを用いた、あすみの特定;
(35)前記SI2042、前記SI2711および前記SI312からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI001および前記SI2711からなるサブセット、または、前記SI2042、前記SI281および前記SI2711からなるサブセット、または、前記SI2042、前記SI2711および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI281および前記SI2711からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI2711および前記SI381からなるサブセットを用いた、あまかの特定;
(36)前記SI281、前記SI312および前記SI322からなるサブセット、または、前記SI2042、前記SI322および前記SI2711からなるサブセット、または、前記SI2042、前記SI322および前記SI306からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI322および前記SI2711からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI322および前記SI306からなるサブセット、または、前記SI145、前記SI201および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI322、前記SI281および前記SI2711からなるサブセット、または、前記SI322、前記SI281および前記SI306からなるサブセット、または、前記SI322、前記SI281および前記SI381からなるサブセットを用いた、愛媛果試第28号の特定;
(37)前記SI145、前記SI201、前記SI312および前記SI381からなるサブユニット、または、前記SI312、前記SI322、前記SI201および前記SI381からなるサブユニット、または、前記SI312、前記SI281、前記SI201および前記SI381からなるサブユニット、または、前記SI312、前記SI201、前記SI210および前記SI381からなるサブユニット、または、前記SI145、前記SI322、前記SI306および前記SI210からなるサブユニット、または、前記SI145、前記SI322、前記SI306および前記SI381からなるサブユニット、または、前記SI145、前記SI281、前記SI201および前記SI210からなるサブユニット、または、前記SI145、前記SI201、前記SI210および前記SI381からなるサブユニット、または、前記SI322、前記SI281、前記SI201および前記SI381からなるサブユニット、または、前記SI281、前記SI201、前記SI210および前記SI381からなるサブセットを用いた、かんきつ中間母本農5号の特定;
(38)前記SI312および前記SI322からなるサブユニット、または、前記SI312および前記SI281からなるサブユニット、または、前記SI312および前記SI2711からなるサブユニット、または、前記SI312および前記SI381からなるサブセットを用いた、かんきつ中間母本農6号の特定;
(39)前記SI145、前記SI201、前記SI2711および前記SI312からなるサブユニット、または、前記SI2711、前記SI201、前記SI210および前記SI381からなるサブセットを用いた、甘平の特定;
(40)前記SI281、前記SI312および前記SI322からなるサブユニット、または、前記SI145、前記SI322および前記SI306からなるサブユニット、または、前記SI281、前記SI306および前記SI210からなるサブユニット、または、前記SI281、前記SI201および前記SI210からなるサブセットを用いた、西南のひかりの特定;
(41)前記SI145、前記SI2042および前記SI210からなるサブユニット、または、前記SI2042、前記SI281および前記SI210からなるサブユニット、または、前記SI001、前記SI145および前記SI210からなるサブユニット、または、前記SI001、前記SI281および前記SI210からなるサブユニット、または、前記SI145、前記SI281および前記SI210からなるサブユニット、または、前記SI145、前記SI2711および前記SI210からなるサブユニット、または、前記SI145、前記SI210および前記SI381からなるサブユニット、または、前記SI322、前記SI281および前記SI210からなるサブユニット、または、前記SI281、前記SI2711および前記SI210からなるサブユニット、または、前記SI281、前記SI306および前記SI210からなるサブユニット、または、前記SI281、前記SI201および前記SI210からなるサブユニット、または、前記SI281、前記SI210および前記SI381からなるサブセットを用いた、せとかの特定;
(42)前記SI2042、前記SI306および前記SI312からなるサブユニット、または、前記SI312、前記SI001および前記SI306からなるサブユニット、または、前記SI312、前記SI322および前記SI306からなるサブユニット、または、前記SI2042、前記SI306および前記SI201からなるサブユニット、または、前記SI001、前記SI306および前記SI201からなるサブユニット、または、前記SI145、前記SI306および前記SI381からなるサブユニット、または、前記SI322、前記SI2711および前記SI306からなるサブユニット、または、前記SI281、前記SI306および前記SI201からなるサブユニット、または、前記SI306、前記SI210および前記SI381からなるサブセットを用いた、せとみの特定;
(43)前記SI2042、前記SI2711、前記SI312および前記SI322からなるサブユニット、または、前記SI312、前記SI2042、前記SI2711および前記SI306からなるサブユニット、または、前記SI312、前記SI001、前記SI145および前記SI2711からなるサブユニット、または、前記SI312、前記SI001、前記SI322および前記SI2711からなるサブユニット、または、前記SI312、前記SI001、前記SI2711および前記SI306からなるサブユニット、または、前記SI2042、前記SI145、前記SI2711および前記SI381からなるサブユニット、または、前記SI2042、前記SI322、前記SI281および前記SI2711からなるサブユニット、または、前記SI2042、前記SI322、前記SI2711および前記SI210からなるサブユニット、または、前記SI2042、前記SI322、前記SI2711および前記SI381からなるサブユニット、または、前記SI2042、前記SI281、前記SI2711および前記SI306からなるサブユニット、または、前記SI2042、前記SI2711、前記SI306および前記SI381からなるサブユニット、または、前記SI2042、前記SI2711、前記SI210および前記SI381からなるサブユニット、または、前記SI001、前記SI145、前記SI281および前記SI2711からなるサブユニット、または、前記SI001、前記SI145、前記SI2711および前記SI210からなるサブユニット、または、前記SI001、前記SI145、前記SI2711および前記SI381からなるサブユニット、または、前記SI001、前記SI322、前記SI281および前記SI2711からなるサブユニット、または、前記SI001、前記SI322、前記SI2711および前記SI210からなるサブユニット、または、前記SI001、前記SI322、前記SI2711および前記SI381からなるサブユニット、または、前記SI001、前記SI281、前記SI2711および前記SI306からなるサブユニット、または、前記SI001、前記SI2711、前記SI306および前記SI210からなるサブユニット、または、前記SI001、前記SI2711、前記SI306および前記SI381からなるサブユニット、または、前記SI001、前記SI2711、前記SI210および前記SI381からなるサブユニットを用いた、たまみの特定;
(44)前記SI210および前記SI2711からなるサブユニットを用いた、津之輝の特定;
(45)前記SI145および前記SI210からなるサブユニットを用いた、津之望の特定;
(46)前記SI281および前記SI381からなるサブユニット、または、前記SI2711および前記SI381からサブユニットを用いた、西之香の特定;
(47)前記SI145および前記SI201からなるサブユニット、または、前記SI322および前記SI201からなるサブユニット、または、前記SI2711および前記SI201からなるサブユニット、または、前記SI306および前記SI201からなるサブユニット、または、前記SI201および前記SI381からなるサブユニットを用いた、はるひの特定;
(48)前記SI2042、前記SI281、前記SI312および前記SI322からなるサブユニット、または、前記SI312、前記SI2042、前記SI322および前記SI281からなるサブユニット、または、前記SI312、前記SI001、前記SI322および前記SI281からなるサブユニット、または、前記SI312、前記SI145、前記SI322および前記SI281からなるサブユニット、または、前記SI312、前記SI145、前記SI281および前記SI306からなるサブユニット、または、前記SI312、前記SI145、前記SI281および前記SI210からなるサブユニット、または、前記SI312、前記SI145、前記SI201および前記SI210からなるサブユニット、または、前記SI312、前記SI322、前記SI281および前記SI2711からなるサブユニット、または、前記SI312、前記SI322、前記SI281および前記SI210からなるサブユニット、または、前記SI312、前記SI322、前記SI201および前記SI210からなるサブユニット、または、前記SI145、前記SI281、前記SI2711および前記SI210からなるサブユニット、または、前記SI322、前記SI281、前記SI2711および前記SI306からなるサブユニット、または、前記SI322、前記SI281、前記SI2711および前記SI210からなるサブユニット、または、前記SI281、前記SI2711、前記SI306および前記SI210からなるサブユニット、または、前記SI281、前記SI2711、前記SI210および前記SI381からなるサブユニットを用いた、はるみの特定;
(49)前記SI2711および前記SI281からなるサブユニットを用いた、はれひめの特定;
(50)前記SI201、前記SI2042、前記SI312および前記SI322からなるサブユニット、または、前記SI312、前記SI2042、前記SI281および前記SI201からなるサブユニット、または、前記SI312、前記SI2042、前記SI201および前記SI381からなるサブユニット、または、前記SI312、前記SI001、前記SI322および前記SI201からなるサブユニット、または、前記SI312、前記SI001、前記SI281および前記SI201からなるサブユニット、または、前記SI312、前記SI001、前記SI201および前記SI381からなるサブユニット、または、前記SI2042、前記SI322、前記SI201および前記SI210からなるサブユニット、または、前記SI001、前記SI322、前記SI201および前記SI210からなるサブユニットを用いた、べにばえの特定;
(51)前記SI2042、前記SI210、前記SI306および前記SI312からなるサブユニット、または、前記SI312、前記SI2042、前記SI306および前記SI381からなるサブユニット、または、前記SI312、前記SI001、前記SI306および前記SI210からなるサブユニット、または、前記SI312、前記SI001、前記SI306および前記SI381からなるサブユニット、または、前記SI2042、前記SI322、前記SI306および前記SI201からなるサブユニット、または、前記SI001、前記SI322、前記SI306および前記SI201からなるサブユニットを用いた、みはやの特定;
(52)前記SI210および前記SI312からなるサブユニットを用いた、麗紅の特定。
〔7〕前記特定工程において、前記品種の特定に用いるSNPマーカーを含む領域を増幅するプライマーセットを用いて、前記カンキツ被検体のDNAにおける前記領域を増幅する、上記〔1〕から〔6〕の何れかに記載の識別方法。
〔8〕前記プライマーセットは、長さ150bp以下の増幅断片が生じるように設計されている、上記〔7〕に記載の識別方法。
〔9〕前記プライマーセットは、下記(a’)~(c’)および(d’)~(l’):
(a’)前記SI312を含む領域を増幅するためのプライマーセットであって、配列番号9に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第1のプライマーと、配列番号10に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第2のプライマーとからなるプライマーセット;
(b’)前記SI001を含む領域を増幅するためのプライマーセットであって、配列番号11に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第1のプライマーと、配列番号12に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第2のプライマーとからなるプライマーセット;
(c’)前記SI322を含む領域を増幅するためのプライマーセットであって、配列番号13に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第1のプライマーと、配列番号14に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第2のプライマーとからなるプライマーセット;
(e’)前記SI306を含む領域を増幅するためのプライマーセットであって、配列番号17に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第1のプライマーと、配列番号18に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第2のプライマーとからなるプライマーセット;
(f’)前記SI201を含む領域を増幅するためのプライマーセットであって、配列番号19に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第1のプライマーと、配列番号20に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第2のプライマーとからなるプライマーセット;
(g’)前記SI210を含む領域を増幅するためのプライマーセットであって、配列番号21に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第1のプライマーと、配列番号22に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第2のプライマーとからなるプライマーセット;
(h’)前記SI381を含む領域を増幅するためのプライマーセットであって、配列番号23に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第1のプライマーと、配列番号24に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第2のプライマーとからなるプライマーセット;
(i’)前記SI145を含む領域を増幅するためのプライマーセットであって、配列番号45に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第1のプライマーと、配列番号46に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第2のプライマーとからなるプライマーセット;
(j’)前記SI2711を含む領域を増幅するためのプライマーセットであって、配列番号47に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第1のプライマーと、配列番号48に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第2のプライマーとからなるプライマーセット;
(k’)前記SI281を含む領域を増幅するためのプライマーセットであって、配列番号49に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第1のプライマーと、配列番号50に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第2のプライマーとからなるプライマーセット;および、
(l’)前記SI2042を含む領域を増幅するためのプライマーセットであって、配列番号51に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第1のプライマーと、配列番号52に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第2のプライマーとからなるプライマーセット;
からなる群より選択される、上記〔7〕または〔8〕に記載の識別方法。
〔10〕前記特定工程において、前記プライマーセットを用いて増幅した増幅断片に含まれるSNPマーカーを検出するTaqMan(登録商標)プローブをさらに用いる、上記〔7〕から〔9〕の何れかに記載の識別方法。
〔11〕前記カンキツ被検体のDNAは、前記カンキツ被検体の生鮮果実または加工果実から調製したDNAである、上記〔7〕から〔10〕の何れかに記載の識別方法。
〔12〕カンキツの品種を識別するための識別キットであって、下記(a’)~(c’)および(e’)~(l’):
(a’)配列番号1で表される塩基配列の31番目の塩基に相当するSNPマーカーを含む領域を増幅するためのプライマーセットであって、配列番号9に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第1のプライマーと、配列番号10に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第2のプライマーとからなるプライマーセット;
(b’)配列番号2で表される塩基配列の33番目の塩基に相当するSNPマーカーを含む領域を増幅するためのプライマーセットであって、配列番号11に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第1のプライマーと、配列番号12に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第2のプライマーとからなるプライマーセット;
(c’)配列番号3で表される塩基配列の36番目の塩基に相当するSNPマーカーを含む領域を増幅するためのプライマーセットであって、配列番号13に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第1のプライマーと、配列番号14に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第2のプライマーとからなるプライマーセット;
(d’)配列番号4で表される塩基配列の66番目の塩基に相当するSNPマーカーを含む領域を増幅するためのプライマーセットであって、配列番号15に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第1のプライマーと、配列番号16に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第2のプライマーとからなるプライマーセット;
(e’)配列番号5で表される塩基配列の35番目の塩基に相当するSNPマーカーを含む領域を増幅するためのプライマーセットであって、配列番号17に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第1のプライマーと、配列番号18に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第2のプライマーとからなるプライマーセット;
(f’)配列番号6で表される塩基配列の37番目の塩基に相当するSNPマーカーを含む領域を増幅するためのプライマーセットであって、配列番号19に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第1のプライマーと、配列番号20に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第2のプライマーとからなるプライマーセット;
(g’)配列番号7で表される塩基配列の44番目の塩基に相当するSNPマーカーを含む領域を増幅するためのプライマーセットであって、配列番号21に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第1のプライマーと、配列番号22に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第2のプライマーとからなるプライマーセット;および、
(h’)配列番号8で表される塩基配列の74番目の塩基に相当するSNPマーカーを含む領域を増幅するためのプライマーセットであって、配列番号23に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第1のプライマーと、配列番号24に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第2のプライマーとからなるプライマーセット;
(i’)配列番号41で表される塩基配列の40番目の塩基に相当するSNPマーカーを含む領域を増幅するためのプライマーセットであって、配列番号45に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第1のプライマーと、配列番号46に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第2のプライマーとからなるプライマーセット;
(j’)配列番号42で表される塩基配列の33番目の塩基に相当するSNPマーカーを含む領域を増幅するためのプライマーセットであって、配列番号47に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第1のプライマーと、配列番号48に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第2のプライマーとからなるプライマーセット;
(k’)配列番号43で表される塩基配列の38番目の塩基に相当するSNPマーカーを含む領域を増幅するためのプライマーセットであって、配列番号49に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第1のプライマーと、配列番号50に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第2のプライマーとからなるプライマーセット;および、
(l’)配列番号44で表される塩基配列の55番目の塩基に相当するSNPマーカーを含む領域を増幅するためのプライマーセットであって、配列番号51に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第1のプライマーと、配列番号52に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第2のプライマーとからなるプライマーセット;
からなる群より選択される少なくとも1つのプライマーセットを含む、識別キット。
〔13〕前記プライマーセットを用いて増幅した増幅断片に含まれるSNPマーカーを検出するTaqMan(登録商標)プローブをさらに含む、上記〔12〕に記載の識別キット。
本発明の一態様に係るカンキツの品種の識別方法は、一塩基多型(SNP)マーカーを用いてカンキツの品種を識別する方法である。識別方法は、下記(a)~(c)および(e)~(l)の一塩基多型(SNP)マーカー:
(a)配列番号1で表される塩基配列の31番目の塩基に相当するSNPマーカー(SI312);
(b)配列番号2で表される塩基配列の33番目の塩基に相当するSNPマーカー(SI001);
(c)配列番号3で表される塩基配列の36番目の塩基に相当するSNPマーカー(SI322);
(e)配列番号5で表される塩基配列の35番目の塩基に相当するSNPマーカー(SI306);
(f)配列番号6で表される塩基配列の37番目の塩基に相当するSNPマーカー(SI201);
(g)配列番号7で表される塩基配列の44番目の塩基に相当するSNPマーカー(SI210);
(h)配列番号8で表される塩基配列の74番目の塩基に相当するSNPマーカー(SI381);
(i)配列番号41で表される塩基配列の40番目の塩基に相当するSNPマーカー(SI145);
(j)配列番号42で表される塩基配列の33番目の塩基に相当するSNPマーカー(SI2711);
(k)配列番号43で表される塩基配列の38番目の塩基に相当するSNPマーカー(SI281);
(l)配列番号44で表される塩基配列の55番目の塩基に相当するSNPマーカー(SI2042);
からなるSNPマーカーの群より選択される少なくとも1つのSNPマーカーを用いて、カンキツ被検体の前記品種を特定する特定工程を含む。
本発明の一態様に係る識別方法により識別するカンキツの品種は、ミカン科ミカン亜科のミカン属(Citrus)、キンカン属(Fortunella)、およびカラタチ属(Poncirus)等に属する植物体の集合であり、その特性の相違により他の植物体の集合と区別可能な植物体の集合を意味している。また、カンキツの品種は、日本の農林水産省に品種登録された品種であってもよいし、品種登録されていない品種であってもよいし、品種として確立される前の育成段階のものを含む。
本発明の一態様にかかる識別方法においては、上記(a)~(c)および(e)~(l)の11個のSNPマーカーのうちの少なくとも1つを用いたSNP分析を行う。また、11個のSNPマーカーの他に、(d)配列番号4で表される塩基配列の66番目の塩基に相当するSNPマーカー(SI149)も、カンキツの識別方法に用いることができる。ここで、SNPは、DNAの塩基配列中のある特定の領域内に一塩基の変異が見られるDNA多型を意味している。本発明の一態様にかかる識別方法において、SNPは、クレメンティン(Citrus clementina v1.0)のゲノム配列を基準とした一塩基多型である。基準品種であるクレメンティン(Citrus clementina v1.0)のゲノム配列は、Phytozomeのゲノムデータベース(https://phytozome.jgi.doe.gov/pz/portal.html)に公表されている。
(a)配列番号1で表される塩基配列の31番目の塩基のCまたはG;
(b)配列番号2で表される塩基配列の33番目の塩基のCまたはG;
(c)配列番号3で表される塩基配列の36番目の塩基のAまたはT;
(d)配列番号4で表される塩基配列の66番目の塩基のAまたはG;
(e)配列番号5で表される塩基配列の35番目の塩基のAまたはG;
(f)配列番号6で表される塩基配列の37番目の塩基のCまたはT;
(g)配列番号7で表される塩基配列の44番目の塩基のAまたはG;
(h)配列番号8で表される塩基配列の74番目の塩基のCまたはT;
(i)配列番号41で表される塩基配列の40番目の塩基のAまたはT;
(j)配列番号42で表される塩基配列の33番目の塩基のAまたはC;
(k)配列番号43で表される塩基配列の38番目の塩基のAまたはG;
(l)配列番号44で表される塩基配列の55番目の塩基のAまたはC。
(1)前記SI001および前記SI201からなるサブセット、または、前記SI001および前記SI210からなるサブセット、または、前記SI322および前記SI381からなるサブセットを用いた、宮川早生の特定;
(2)前記SI001および前記SI149をからなるサブセットを用いた、ダンカングレープフルーツの特定;
(3)前記SI001、前記SI149、前記SI210、前記SI312、および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI149、前記SI210、前記SI312および前記SI322からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI210、前記SI306、前記SI312、およびSI381からなるサブセットを用いた、トロビタスイートオレンジの特定;
(4)前記SI312および前記SI322からなるサブセットを用いた、リスボンレモンの特定;
(5)前記SI001、前記SI149、および前記SI201からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI149、および前記SI322からなるサブセットを用いた、不知火の特定;
(6)前記SI001、前記SI149、前記SI312、および前記SI322からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI306、前記SI312、および前記SI322からなるサブセット、または、前記SI149、前記SI312、前記SI322、および前記SI381からなるサブセットを用いた、イヨカンの特定;
(7)前記SI210および前記SI322からなるサブセットを用いた、川野なつだいだいの特定;
(8)前記SI001、前記SI149、および前記SI210からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI210、および前記SI381からなるサブセットを用いた、ハッサクの特定;
(9)前記SI149、前記SI210、および前記SI312からなるサブセット、または、前記SI210、前記SI312、および前記SI322からなるサブセット、または、前記SI210、前記SI312、および前記SI381からなるサブセットを用いた、太田ポンカンの特定;
(10)前記SI306および前記SI322からなるサブセットを用いた、璃の香の特定;
(11)前記SI001および前記SI306からなるサブセットを用いた、みはやの特定;
(12)前記SI312、前記SI306、および前記SI149からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI306、および前記SI210からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI306、および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI306、および前記SI322からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI306、および前記SI201からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI149、および前記SI306からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI306、および前記SI210からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI306、および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI306、および前記SI322からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI306、および前記SI201からなるサブセット、または、前記SI149、前記SI306、および前記SI210からなるサブセット、または、前記SI149、前記SI306、および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI149、前記SI306、および前記SI201からなるサブセット、または、前記SI306、前記SI210、および前記SI322からなるサブセット、または、前記SI306、前記SI210、および前記SI201からなるサブセット、または、前記SI306、前記SI381、および前記SI322からなるサブセット、または、前記SI306、前記SI381、および前記SI201からなるサブセット、または、前記SI306、前記SI322、および前記SI201からなるサブセットを用いた、あすみの特定;
(13)前記SI001、前記SI210、および前記SI306からなるサブセット、または、前記SI306、前記SI201、および前記SI210からなるサブセットを用いた、あすきの特定;
(14)前記SI210および前記SI312からなるサブセットを用いた、麗紅の特定;
(15)前記SI001、前記SI210、および前記SI312からなるサブセット、または、前記SI210、前記SI312、および前記SI381からなるサブセットを用いた、津之輝の特定;
(16)前記SI149、前記SI210、および前記SI306からなるサブセット、または、前記SI210、前記SI306、および前記SI322からなるサブセットを用いた、西南のひかりの特定;
(17)前記SI001、前記SI210、および前記SI312からなるサブセット、または、前記SI210、前記SI312、および前記SI381からなるサブセットを用いた、津之望の特定;
(18)前記SI201および前記SI306からなるサブセット、または、前記SI201および前記SI381からなるサブセット、または、SI201およびSI322からなるサブセットを用いた、はるひの特定;
(19)前記SI201、前記SI312、および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI149、前記SI201、および前記SI210からなるサブセット、または、前記SI149、前記SI210、および前記SI322からなるサブセットを用いた、清見の特定;
(20)前記SI001、前記SI201、および前記SI312からなるサブセット、または、前記SI210、前記SI312、および前記SI381からなるサブセットを用いた、せとかの特定;
(21)前記SI312、前記SI210、前記SI149、および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI210、前記SI149、および前記SI322からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI210、前記SI149、および前記SI201からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI306、前記SI210、および前記SI201からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI210、前記SI381、および前記SI201からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI210、前記SI322、および前記SI201からなるサブセットを用いた、はるみの特定;
(22)前記SI306、前記SI210、および前記SI001からなるサブセット、または、前記SI149、前記SI210、および前記SI322からなるサブセット、または、前記SI210、前記SI306、および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI306、前記SI210、および前記SI322からなるサブセットを用いた、はれひめの特定;
(23)前記SI149、前記SI210、および前記SI306からなるサブセットを用いた、甘平の特定;
(24)前記SI001、前記SI306、および前記SI322からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI201、および前記SI322からなるサブセットを用いた、愛媛果試第28号の特定;
(25)前記SI001および前記SI381からなるサブセットを用いた、ユズの特定;
(26)SI201、およびSI306からなるサブセットを用いた、河内晩柑の特定;
(27)前記SI001、前記SI149、および前記SI381からなるサブセットを用いた、たまみの特定;
(28)前記SI312、前記SI201、および前記SI306からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI210、および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI381、および前記SI201からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI306、および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI306、および前記SI201からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI210、および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI381、および前記SI201からなるサブセット、または、前記SI149、前記SI306、および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI149、前記SI210、および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI149、前記SI381、および前記SI201からなるサブセットを用いた、西之香の特定;
(29)前記SI001、前記SI149、および前記SI306、または、前記SI001、前記SI149、および前記SI210、または、前記SI001、前記SI149、および前記SI322からなるサブセットを用いた、あまかの特定;および、
(30)前記SI312および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI312および前記SI322からなるサブセットを用いた、かんきつ中間母本農6号の特定。
(10)前記SI306および前記SI322からなるサブセットを用いた、璃の香の特定;
(11)前記SI001および前記SI306からなるサブセットを用いた、みはやの特定;
(12)前記SI312、前記SI306、および前記SI149からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI306、および前記SI210からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI306、および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI306、および前記SI322からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI306、および前記SI201からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI149、および前記SI306からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI306、および前記SI210からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI306、および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI306、および前記SI322からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI306、および前記SI201からなるサブセット、または、前記SI149、前記SI306、および前記SI210からなるサブセット、または、前記SI149、前記SI306、および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI149、前記SI306、および前記SI201からなるサブセット、または、前記SI306、前記SI210、および前記SI322からなるサブセット、または、前記SI306、前記SI210、および前記SI201からなるサブセット、または、前記SI306、前記SI381、および前記SI322からなるサブセット、または、前記SI306、前記SI381、および前記SI201からなるサブセット、または、前記SI306、前記SI322、および前記SI201からなるサブセットを用いた、あすみの特定;
(13)前記SI001、前記SI210、および前記SI306からなるサブセット、または、前記SI306、前記SI201、および前記SI210からなるサブセットを用いた、あすきの特定;
(14)前記SI210および前記SI312からなるサブセットを用いた、麗紅の特定;
(15)前記SI001、前記SI210、および前記SI312からなるサブセット、または、前記SI210、前記SI312、および前記SI381からなるサブセットを用いた、津之輝の特定;
(16)前記SI149、前記SI210、および前記SI306からなるサブセット、または、前記SI210、前記SI306、および前記SI322からなるサブセットを用いた、西南のひかりの特定;
(17)前記SI001、前記SI210、および前記SI312からなるサブセット、または、前記SI210、前記SI312、および前記SI381からなるサブセットを用いた、津之望の特定;
(18)前記SI201および前記SI306からなるサブセット、または、前記SI201および前記SI381からなるサブセット、または、SI201およびSI322からなるサブセットを用いた、はるひの特定;
(20)前記SI001、前記SI201、および前記SI312からなるサブセット、または、前記SI210、前記SI312、および前記SI381からなるサブセットを用いた、せとかの特定;
(21)前記SI312、前記SI210、前記SI149、および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI210、前記SI149、および前記SI322からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI210、前記SI149、および前記SI201からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI306、前記SI210、および前記SI201からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI210、前記SI381、および前記SI201からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI210、前記SI322、および前記SI201からなるサブセットを用いた、はるみの特定;
(22)前記SI306、前記SI210、および前記SI001からなるサブセット、または、前記SI149、前記SI210、および前記SI322からなるサブセット、または、前記SI210、前記SI306、および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI306、前記SI210、および前記SI322からなるサブセットを用いた、はれひめの特定;
(23)前記SI149、前記SI210、および前記SI306からなるサブセットを用いた、甘平の特定;
(24)前記SI001、前記SI306、および前記SI322からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI201、および前記SI322からなるサブセットを用いた、愛媛果試第28号の特定;
(27)前記SI001、前記SI149、および前記SI381からなるサブセットを用いた、たまみの特定;
(28)前記SI312、前記SI201、および前記SI306からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI210、および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI381、および前記SI201からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI306、および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI306、および前記SI201からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI210、および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI381、および前記SI201からなるサブセット、または、前記SI149、前記SI306、および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI149、前記SI210、および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI149、前記SI381、および前記SI201からなるサブセットを用いた、西之香の特定;
(29)前記SI001、前記SI149、および前記SI306、または、前記SI001、前記SI149、および前記SI210、または、前記SI001、前記SI149、および前記SI322からなるサブセットを用いた、あまかの特定;および、
(30)前記SI312および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI312および前記SI322からなるサブセットを用いた、かんきつ中間母本農6号の特定。
(31)前記SI201、前記SI2042および前記SI312からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI2042および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI322および前記SI306からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI306および前記SI201からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI306および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI2042、前記SI001および前記SI145からなるサブセット、または、前記SI2042、前記SI001および前記SI281からなるサブセット、または、前記SI2042、前記SI001および前記SI201からなるサブセット、または、前記SI2042、前記SI145および前記SI322からなるサブセット、または、前記SI2042、前記SI145および前記SI306からなるサブセット、または、前記SI2042、前記SI322および前記SI306からなるサブセット、または、前記SI2042、前記SI322および前記SI201からなるサブセット、または、前記SI2042、前記SI281および前記SI306からなるサブセット、または、前記SI2042、前記SI2711および前記SI201からなるサブセット、または、前記SI2042、前記SI306および前記SI201からなるサブセット、または、前記SI2042、前記SI306および前記SI210からなるサブセット、または、前記SI2042、前記SI306および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI2042、前記SI201および前記SI210からなるサブセット、または、前記SI2042、前記SI201および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI322および前記SI306からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI281および前記SI306からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI306および前記SI201からなるサブセット、または、前記SI322、前記SI281および前記SI306からなるサブセット、または、前記SI322、前記SI306および前記SI210からなるサブセット、または、前記SI281、前記SI306および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI306、前記SI201および前記SI210からなるサブセットを用いた、璃の香の特定;
(32)前記SI2042、前記SI2711、前記SI312および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI001、前記SI2711および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI145、前記SI2711および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI2711、前記SI306および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI2711、前記SI210および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI2042、前記SI2711、前記SI201および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI2042、前記SI2711、前記SI210および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI2711、前記SI201および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI2711、前記SI210および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI145、前記SI2711、前記SI201および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI2711、前記SI306、前記SI201および前記SI381からなるサブセットを用いた、朱見の特定;
(33)前記SI145、前記SI210および前記SI281からなるサブセット、または、前記SI322、前記SI281および前記SI201からなるサブセット、または、前記SI322、前記SI281および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI281、前記SI2711および前記SI210からなるサブセット、または、前記SI281、前記SI210および前記SI381からなるサブセットを用いた、あすきの特定;
(34)前記SI145および前記SI306からなるサブセットを用いた、あすみの特定;
(35)前記SI2042、前記SI2711および前記SI312からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI001および前記SI2711からなるサブセット、または、前記SI2042、前記SI281および前記SI2711からなるサブセット、または、前記SI2042、前記SI2711および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI281および前記SI2711からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI2711および前記SI381からなるサブセットを用いた、あまかの特定;
(36)前記SI281、前記SI312および前記SI322からなるサブセット、または、前記SI2042、前記SI322および前記SI2711からなるサブセット、または、前記SI2042、前記SI322および前記SI306からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI322および前記SI2711からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI322および前記SI306からなるサブセット、または、前記SI145、前記SI201および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI322、前記SI281および前記SI2711からなるサブセット、または、前記SI322、前記SI281および前記SI306からなるサブセット、または、前記SI322、前記SI281および前記SI381からなるサブセットを用いた、愛媛果試第28号の特定;
(37)前記SI145、前記SI201、前記SI312および前記SI381からなるサブユニット、または、前記SI312、前記SI322、前記SI201および前記SI381からなるサブユニット、または、前記SI312、前記SI281、前記SI201および前記SI381からなるサブユニット、または、前記SI312、前記SI201、前記SI210および前記SI381からなるサブユニット、または、前記SI145、前記SI322、前記SI306および前記SI210からなるサブユニット、または、前記SI145、前記SI322、前記SI306および前記SI381からなるサブユニット、または、前記SI145、前記SI281、前記SI201および前記SI210からなるサブユニット、または、前記SI145、前記SI201、前記SI210および前記SI381からなるサブユニット、または、前記SI322、前記SI281、前記SI201および前記SI381からなるサブユニット、または、前記SI281、前記SI201、前記SI210および前記SI381からなるサブセットを用いた、かんきつ中間母本農5号の特定;
(38)前記SI312および前記SI322からなるサブユニット、または、前記SI312および前記SI281からなるサブユニット、または、前記SI312および前記SI2711からなるサブユニット、または、前記SI312および前記SI381からなるサブセットを用いた、かんきつ中間母本農6号の特定;
(39)前記SI145、前記SI201、前記SI2711および前記SI312からなるサブユニット、または、前記SI2711、前記SI201、前記SI210および前記SI381からなるサブセットを用いた、甘平の特定;
(40)前記SI281、前記SI312および前記SI322からなるサブユニット、または、前記SI145、前記SI322および前記SI306からなるサブユニット、または、前記SI281、前記SI306および前記SI210からなるサブユニット、または、前記SI281、前記SI201および前記SI210からなるサブセットを用いた、西南のひかりの特定;
(41)前記SI145、前記SI2042および前記SI210からなるサブユニット、または、前記SI2042、前記SI281および前記SI210からなるサブユニット、または、前記SI001、前記SI145および前記SI210からなるサブユニット、または、前記SI001、前記SI281および前記SI210からなるサブユニット、または、前記SI145、前記SI281および前記SI210からなるサブユニット、または、前記SI145、前記SI2711および前記SI210からなるサブユニット、または、前記SI145、前記SI210および前記SI381からなるサブユニット、または、前記SI322、前記SI281および前記SI210からなるサブユニット、または、前記SI281、前記SI2711および前記SI210からなるサブユニット、または、前記SI281、前記SI306および前記SI210からなるサブユニット、または、前記SI281、前記SI201および前記SI210からなるサブユニット、または、前記SI281、前記SI210および前記SI381からなるサブセットを用いた、せとかの特定;
(42)前記SI2042、前記SI306および前記SI312からなるサブユニット、または、前記SI312、前記SI001および前記SI306からなるサブユニット、または、前記SI312、前記SI322および前記SI306からなるサブユニット、または、前記SI2042、前記SI306および前記SI201からなるサブユニット、または、前記SI001、前記SI306および前記SI201からなるサブユニット、または、前記SI145、前記SI306および前記SI381からなるサブユニット、または、前記SI322、前記SI2711および前記SI306からなるサブユニット、または、前記SI281、前記SI306および前記SI201からなるサブユニット、または、前記SI306、前記SI210および前記SI381からなるサブセットを用いた、せとみの特定;
(43)前記SI2042、前記SI2711、前記SI312および前記SI322からなるサブユニット、または、前記SI312、前記SI2042、前記SI2711および前記SI306からなるサブユニット、または、前記SI312、前記SI001、前記SI145および前記SI2711からなるサブユニット、または、前記SI312、前記SI001、前記SI322および前記SI2711からなるサブユニット、または、前記SI312、前記SI001、前記SI2711および前記SI306からなるサブユニット、または、前記SI2042、前記SI145、前記SI2711および前記SI381からなるサブユニット、または、前記SI2042、前記SI322、前記SI281および前記SI2711からなるサブユニット、または、前記SI2042、前記SI322、前記SI2711および前記SI210からなるサブユニット、または、前記SI2042、前記SI322、前記SI2711および前記SI381からなるサブユニット、または、前記SI2042、前記SI281、前記SI2711および前記SI306からなるサブユニット、または、前記SI2042、前記SI2711、前記SI306および前記SI381からなるサブユニット、または、前記SI2042、前記SI2711、前記SI210および前記SI381からなるサブユニット、または、前記SI001、前記SI145、前記SI281および前記SI2711からなるサブユニット、または、前記SI001、前記SI145、前記SI2711および前記SI210からなるサブユニット、または、前記SI001、前記SI145、前記SI2711および前記SI381からなるサブユニット、または、前記SI001、前記SI322、前記SI281および前記SI2711からなるサブユニット、または、前記SI001、前記SI322、前記SI2711および前記SI210からなるサブユニット、または、前記SI001、前記SI322、前記SI2711および前記SI381からなるサブユニット、または、前記SI001、前記SI281、前記SI2711および前記SI306からなるサブユニット、または、前記SI001、前記SI2711、前記SI306および前記SI210からなるサブユニット、または、前記SI001、前記SI2711、前記SI306および前記SI381からなるサブユニット、または、前記SI001、前記SI2711、前記SI210および前記SI381からなるサブユニットを用いた、たまみの特定;
(44)前記SI210および前記SI2711からなるサブユニットを用いた、津之輝の特定;
(45)前記SI145および前記SI210からなるサブユニットを用いた、津之望の特定;
(46)前記SI281および前記SI381からなるサブユニット、または、前記SI2711および前記SI381からサブユニットを用いた、西之香の特定;
(47)前記SI145および前記SI201からなるサブユニット、または、前記SI322および前記SI201からなるサブユニット、または、前記SI2711および前記SI201からなるサブユニット、または、前記SI306および前記SI201からなるサブユニット、または、前記SI201および前記SI381からなるサブユニットを用いた、はるひの特定;
(48)前記SI2042、前記SI281、前記SI312および前記SI322からなるサブユニット、または、前記SI312、前記SI2042、前記SI322および前記SI281からなるサブユニット、または、前記SI312、前記SI001、前記SI322および前記SI281からなるサブユニット、または、前記SI312、前記SI145、前記SI322および前記SI281からなるサブユニット、または、前記SI312、前記SI145、前記SI281および前記SI306からなるサブユニット、または、前記SI312、前記SI145、前記SI281および前記SI210からなるサブユニット、または、前記SI312、前記SI145、前記SI201および前記SI210からなるサブユニット、または、前記SI312、前記SI322、前記SI281および前記SI2711からなるサブユニット、または、前記SI312、前記SI322、前記SI281および前記SI210からなるサブユニット、または、前記SI312、前記SI322、前記SI201および前記SI210からなるサブユニット、または、前記SI145、前記SI281、前記SI2711および前記SI210からなるサブユニット、または、前記SI322、前記SI281、前記SI2711および前記SI306からなるサブユニット、または、前記SI322、前記SI281、前記SI2711および前記SI210からなるサブユニット、または、前記SI281、前記SI2711、前記SI306および前記SI210からなるサブユニット、または、前記SI281、前記SI2711、前記SI210および前記SI381からなるサブユニットを用いた、はるみの特定;
(49)前記SI2711および前記SI281からなるサブユニットを用いた、はれひめの特定;
(50)前記SI201、前記SI2042、前記SI312および前記SI322からなるサブユニット、または、前記SI312、前記SI2042、前記SI281および前記SI201からなるサブユニット、または、前記SI312、前記SI2042、前記SI201および前記SI381からなるサブユニット、または、前記SI312、前記SI001、前記SI322および前記SI201からなるサブユニット、または、前記SI312、前記SI001、前記SI281および前記SI201からなるサブユニット、または、前記SI312、前記SI001、前記SI201および前記SI381からなるサブユニット、または、前記SI2042、前記SI322、前記SI201および前記SI210からなるサブユニット、または、前記SI001、前記SI322、前記SI201および前記SI210からなるサブユニットを用いた、べにばえの特定;
(51)前記SI2042、前記SI210、前記SI306および前記SI312からなるサブユニット、または、前記SI312、前記SI2042、前記SI306および前記SI381からなるサブユニット、または、前記SI312、前記SI001、前記SI306および前記SI210からなるサブユニット、または、前記SI312、前記SI001、前記SI306および前記SI381からなるサブユニット、または、前記SI2042、前記SI322、前記SI306および前記SI201からなるサブユニット、または、前記SI001、前記SI322、前記SI306および前記SI201からなるサブユニットを用いた、みはやの特定;
(52)前記SI210および前記SI312からなるサブユニットを用いた、麗紅の特定。
特定工程において、上記(a)~(l)のSNPマーカーを用いてカンキツ被検体のSNP分析を行う方法としては、特に限定されず、SNPを検出する公知のSNP分析方法を用いることができる。このような公知のSNP分析方法には、カンキツ被検体のPCR増幅断片中のSNPを、蛍光標識したオリゴヌクレオチドプローブにより検出することによりSNP分析する方法が含まれる。
(a’)配列番号1で表される塩基配列の31番目の塩基に相当するSNPマーカー(SI312)を含む領域を増幅するためのプライマーセットであって、配列番号9に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第1のプライマーと、配列番号10に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第2のプライマーとからなるプライマーセット;
(b’)配列番号2で表される塩基配列の33番目の塩基に相当するSNPマーカー(SI001)を含む領域を増幅するためのプライマーセットであって、配列番号11に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第1のプライマーと、配列番号12に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第2のプライマーとからなるプライマーセット;
(c’)配列番号3で表される塩基配列の36番目の塩基に相当するSNPマーカー(SI322)を含む領域を増幅するためのプライマーセットであって、配列番号13に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第1のプライマーと、配列番号14に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第2のプライマーとからなるプライマーセット;
(d’)配列番号4で表される塩基配列の66番目の塩基に相当するSNPマーカー(SI149)を含む領域を増幅するためのプライマーセットであって、配列番号15に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第1のプライマーと、配列番号16に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第2のプライマーとからなるプライマーセット;
(e’)配列番号5で表される塩基配列の35番目の塩基に相当するSNPマーカー(SI306)を含む領域を増幅するためのプライマーセットであって、配列番号17に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第1のプライマーと、配列番号18に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第2のプライマーとからなるプライマーセット;
(f’)配列番号6で表される塩基配列の37番目の塩基に相当するSNPマーカー(SI201)を含む領域を増幅するためのプライマーセットであって、配列番号19に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第1のプライマーと、配列番号20に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第2のプライマーとからなるプライマーセット;
(g’)配列番号7で表される塩基配列の44番目の塩基に相当するSNPマーカー(SI210)を含む領域を増幅するためのプライマーセットであって、配列番号21に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第1のプライマーと、配列番号22に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第2のプライマーとからなるプライマーセット;
(h’)配列番号8で表される塩基配列の74番目の塩基に相当するSNPマーカー(SI381)を含む領域を増幅するためのプライマーセットであって、配列番号23に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第1のプライマーと、配列番号24に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第2のプライマーとからなるプライマーセット;
(i’)配列番号41で表される塩基配列の40番目の塩基に相当するSNPマーカーを含む領域を増幅するためのプライマーセットであって、配列番号45に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第1のプライマーと、配列番号46に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第2のプライマーとからなるプライマーセット;
(j’)配列番号42で表される塩基配列の33番目の塩基に相当するSNPマーカーを含む領域を増幅するためのプライマーセットであって、配列番号47に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第1のプライマーと、配列番号48に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第2のプライマーとからなるプライマーセット;
(k’)配列番号43で表される塩基配列の38番目の塩基に相当するSNPマーカーを含む領域を増幅するためのプライマーセットであって、配列番号49に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第1のプライマーと、配列番号50に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第2のプライマーとからなるプライマーセット;および、
(l’)配列番号44で表される塩基配列の55番目の塩基に相当するSNPマーカーを含む領域を増幅するためのプライマーセットであって、配列番号51に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第1のプライマーと、配列番号52に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第2のプライマーとからなるプライマーセット;
からなる群より選択されてもよい。
(a’’)前記(a’)のプライマーセットと共に用いるプローブであって、配列番号25に示される塩基配列を有する第1のプローブと、配列番号26に示される塩基配列を有する第2のプローブとからなるプローブセット;
(b’’)前記(b’)のプライマーセットと共に用いるプローブであって、配列番号27に示される塩基配列を有する第1のプローブと、配列番号28に示される塩基配列を有する第2のプローブとからなるプローブセット;
(c’’)前記(c’)のプライマーセットと共に用いるプローブであって、配列番号29に示される塩基配列を有する第1のプローブと、配列番号30に示される塩基配列を有する第2のプローブとからなるプローブセット;
(d’’)前記(d’)のプライマーセットと共に用いるプローブであって、配列番号31に示される塩基配列を有する第1のプローブと、配列番号32に示される塩基配列を有する第2のプローブとからなるプローブセット;
(e’’)前記(e’)のプライマーセットと共に用いるプローブであって、配列番号33に示される塩基配列を有する第1のプローブと、配列番号34に示される塩基配列を有する第2のプローブとからなるプローブセット;
(f’’)前記(f’)のプライマーセットと共に用いるプローブであって、配列番号35に示される塩基配列を有する第1のプローブと、配列番号36に示される塩基配列を有する第2のプローブとからなるプローブセット;
(g’’)前記(g’)のプライマーセットと共に用いるプローブであって、配列番号37に示される塩基配列を有する第1のプローブと、配列番号38に示される塩基配列を有する第2のプローブとからなるプローブセット;
(h’’)前記(h’)のプライマーセットと共に用いるプローブであって、配列番号39に示される塩基配列を有する第1のプローブと、配列番号40に示される塩基配列を有する第2のプローブとからなるプローブセット;
(i’’)前記(i’)のプライマーセットと共に用いるプローブであって、配列番号53に示される塩基配列を有する第1のプローブと、配列番号54に示される塩基配列を有する第2のプローブとからなるプローブセット;
(j’’)前記(j’)のプライマーセットと共に用いるプローブであって、配列番号55に示される塩基配列を有する第1のプローブと、配列番号56に示される塩基配列を有する第2のプローブとからなるプローブセット;
(k’’)前記(k’)のプライマーセットと共に用いるプローブであって、配列番号57に示される塩基配列を有する第1のプローブと、配列番号58に示される塩基配列を有する第2のプローブとからなるプローブセット;および、
(l’’)前記(l’)のプライマーセットと共に用いるプローブであって、配列番号59に示される塩基配列を有する第1のプローブと、配列番号60に示される塩基配列を有する第2のプローブとからなるプローブセット。
別の実施形態において、本発明の一態様に係る識別方法は、指定の品種のカンキツの植物体またはその加工品において、他の品種の混在の可能性の評価に利用することができる。例えば、指定の品種のカンキツの植物体またはその加工品について、指定の品種に特有のSNP以外のSNPが検出される場合(例えば、他の品種に特有のSNPが検出される場合)、他の品種の混在の可能性、および/または、指定の品種が、他の品種により代用されている可能性があると評価することができる。また、指定の品種に特有のSNP以外のSNPが検出されない場合、他の品種の混在の可能性、および/または、指定の品種が他の品種により代用されている可能性がないか、または、低いと評価することができる。
本発明の一態様に係るカンキツの品種の識別キットは、カンキツの品種を識別するための識別キットであって、下記(a’)~(l’):
(a’)配列番号1で表される塩基配列の31番目の塩基に相当するSNPマーカーを含む領域を増幅するためのプライマーセットであって、配列番号9に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第1のプライマーと、配列番号10に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第2のプライマーとからなるプライマーセット;
(b’)配列番号2で表される塩基配列の33番目の塩基に相当するSNPマーカーを含む領域を増幅するためのプライマーセットであって、配列番号11に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第1のプライマーと、配列番号12に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第2のプライマーとからなるプライマーセット;
(c’)配列番号3で表される塩基配列の36番目の塩基に相当するSNPマーカーを含む領域を増幅するためのプライマーセットであって、配列番号13に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第1のプライマーと、配列番号14に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第2のプライマーとからなるプライマーセット;
(d’)配列番号4で表される塩基配列の66番目の塩基に相当するSNPマーカーを含む領域を増幅するためのプライマーセットであって、配列番号15に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第1のプライマーと、配列番号16に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第2のプライマーとからなるプライマーセット;
(e’)配列番号5で表される塩基配列の35番目の塩基に相当するSNPマーカーを含む領域を増幅するためのプライマーセットであって、配列番号17に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第1のプライマーと、配列番号18に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第2のプライマーとからなるプライマーセット;
(f’)配列番号6で表される塩基配列の37番目の塩基に相当するSNPマーカーを含む領域を増幅するためのプライマーセットであって、配列番号19に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第1のプライマーと、配列番号20に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第2のプライマーとからなるプライマーセット;
(g’)配列番号7で表される塩基配列の44番目の塩基に相当するSNPマーカーを含む領域を増幅するためのプライマーセットであって、配列番号21に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第1のプライマーと、配列番号22に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第2のプライマーとからなるプライマーセット;
(h’)配列番号8で表される塩基配列の74番目の塩基に相当するSNPマーカーを含む領域を増幅するためのプライマーセットであって、配列番号23に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第1のプライマーと、配列番号24に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第2のプライマーとからなるプライマーセット;
(i’)配列番号41で表される塩基配列の40番目の塩基に相当するSNPマーカーを含む領域を増幅するためのプライマーセットであって、配列番号45に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第1のプライマーと、配列番号46に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第2のプライマーとからなるプライマーセット;
(j’)配列番号42で表される塩基配列の33番目の塩基に相当するSNPマーカーを含む領域を増幅するためのプライマーセットであって、配列番号47に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第1のプライマーと、配列番号48に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第2のプライマーとからなるプライマーセット;
(k’)配列番号43で表される塩基配列の38番目の塩基に相当するSNPマーカーを含む領域を増幅するためのプライマーセットであって、配列番号49に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第1のプライマーと、配列番号50に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第2のプライマーとからなるプライマーセット;および、
(l’)配列番号44で表される塩基配列の55番目の塩基に相当するSNPマーカーを含む領域を増幅するためのプライマーセットであって、配列番号51に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第1のプライマーと、配列番号52に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第2のプライマーとからなるプライマーセット;
からなる群より選択される少なくとも1つのプライマーセットを含む。
(材料)
生鮮果実として、農業・食品産業技術総合研究機構 果樹茶業研究部門(NIFTS)のカンキツ研究領域において保存されるカンキツのうち、以下の表5に示される48品種および表6に示される36品種の果実を用意した。
用意した各材料のサンプルを、液化窒素により粉末化し、洗浄バッファ(0.1M Tris-HCl(pH8.0)、50mM EDTA(pH8.0)、1%ポリビニルピロリドン、10%ポリエチレングリコール(PEG)#6,000、および2%β-メルカプトエタノール)を用いて2回プレ洗浄を行い、セチルトリメチルアンモニウムブロミド(CTAB)法によりゲノムDNAを単離した。
(プライマーセットおよびプローブの設計)
384個の予め報告されているSNPを検証し、これらが以下の基準に適合しているかを検証した:(1)高いアレル頻度;(2)共顕性の対立遺伝子型;(3)PCRの増幅断片が短く(例えば、100bp未満)、生鮮果実および加工果実のジェノタイピングに適しているか;および、(4)各SNP座のゲノム領域が、異なる染色体に分散していて、ゲノムワイドなSNPアッセイを可能にしているか。
生鮮果実から抽出したDNAを用いて、SNPジェノタイピングアッセイを行った。SNPジェノタイピング試薬は、以下のように調製した:TaqMan Genotyping Master Mix(Thermo Fisher社製)7.5μL、各プライマー10μM、FAM-およびHEX-標識TaqMan(登録商標)-MGBプローブ5μM、および精製DNA10ngに、RNaseフリー水を加えて15μLとした。
8個のSNPの信頼性を評価するために、出願人が開発した親子推定ソフトウェアMARCOにより、共顕性を有する遺伝様式を、親子関係の品種のサブセットを用いて評価した。MARCOにより、親から子への各SNPにおける対立遺伝子の伝達に基づき、親子関係を評価した。
8個のSNPについてのカンキツ48品種のSNPジェノタイピングの結果を、出願人が開発したMinimalMarkerソフトウェアにより解析し、カンキツの48品種を識別するための最少サブセットを解析した。
8個のSNPについてのジェノタイピングアッセイが、加工果実に適用可能であるかを検証した。
表3のSI312、SI001、SI322、SI306、SI201、SI210およびSI381、ならびに、表12のSI145、SI2711、SI281およびSI2042の合計11個のSNPについて、ジェノタイピングアッセイを行った。その結果、表5および6に記載の84品種のカンキツに適用可能であることが分かった。表12のSNPに関し、増幅および塩基決定に使用したプライマーセットおよびプローブは、以下の表13および表14に示したとおりである。表14において、プローブのヌクレオチド配列中、SNP部位に相当する部分は下線が付されている。11個のSNPについての全てのジェノタイピングアッセイにおいて、生鮮果実から抽出したDNAを用いた結果は、葉から抽出したDNAを用いた結果と一致した。
上記〔6.84品種のカンキツの識別〕で検証した11個のSNPの信頼性を評価するために、出願人が開発した親子推定ソフトウェアMARCOにより、共顕性を有する遺伝様式を、親子関係の品種のサブセットを用いて評価した。MARCOにより、親から子への各SNPにおける対立遺伝子の伝達に基づき、親子関係を評価した。
宮川早生(キシュウミカン×クネンボ)、不知火、璃の香、津之望、清見、はるみ、甘平、愛媛果試第28号、カラ、セミノール、スイートスプリング、アンコール、たまみ、西之香、サガマンダリン、南香、あまか、かんきつ中間母本農6号、せとみ、陽香、朱見、早香、はれやか、津之香、ミホコール、クレメンティン、ミネオラ、オーランド、フォーチュン、ありあけ、安芸タンゴール、ウィルキング、ページ、ロビンソン、リー、フェアチャイルド、ノバ、オセオラ、清峰、かんきつ中間本母農5号、サザンレッド、サマーフレッシュ。
11個のSNPについての84品種のカンキツのSNPジェノタイピングの結果を、出願人が開発したMinimalMarkerソフトウェアにより解析し、カンキツの84品種を識別するための最少サブセットを解析した。
Claims (8)
- カンキツの品種の識別方法であって、
下記(a)~(l)の一塩基多型(SNP)マーカー:
(a)配列番号1で表される塩基配列の31番目の塩基に相当するSNPマーカー(SI312);
(b)配列番号2で表される塩基配列の33番目の塩基に相当するSNPマーカー(SI001);
(c)配列番号3で表される塩基配列の36番目の塩基に相当するSNPマーカー(SI322);
(d)配列番号4で表される塩基配列の66番目の塩基に相当するSNPマーカー(SI149)
(e)配列番号5で表される塩基配列の35番目の塩基に相当するSNPマーカー(SI306);
(f)配列番号6で表される塩基配列の37番目の塩基に相当するSNPマーカー(SI201);
(g)配列番号7で表される塩基配列の44番目の塩基に相当するSNPマーカー(SI210);および
(h)配列番号8で表される塩基配列の74番目の塩基に相当するSNPマーカー(SI381);
(i)配列番号41で表される塩基配列の40番目の塩基に相当するSNPマーカー(SI145);
(j)配列番号42で表される塩基配列の33番目の塩基に相当するSNPマーカー(SI2711);
(k)配列番号43で表される塩基配列の38番目の塩基に相当するSNPマーカー(SI281);および、
(l)配列番号44で表される塩基配列の55番目の塩基に相当するSNPマーカー(SI2042);
からなるSNPマーカーの群より選択される少なくとも1つのSNPマーカーを用いて、カンキツ被検体の前記品種を特定する特定工程を含み、
前記品種は、あすき、璃の香、みはや、あすみ、津之望、はるひ、津之輝、西南のひかり、麗紅、はれひめ、せとか、甘平、愛媛果試第28号、はるみ、かんきつ中間母本農6号、たまみ、西之香、および、あまかであり、
前記特定工程において、前記カンキツ被検体について、下記(A)~(AG)からなる群より選択される少なくとも1つの前記品種の特定を行い:
(A)前記SI001、前記SI210、および前記SI306からなるサブセット、または、前記SI306、前記SI201、および前記SI210からなるサブセットを用いた、あすきの特定;
(B)前記SI145、前記SI210および前記SI281からなるサブセット、または、前記SI322、前記SI281および前記SI201からなるサブセット、または、前記SI322、前記SI281および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI281、前記SI2711および前記SI210からなるサブセット、または、前記SI281、前記SI210および前記SI381からなるサブセットを用いた、あすきの特定;
(C)前記SI306および前記SI322からなるサブセットを用いた、璃の香の特定;
(D)前記SI201、前記SI2042および前記SI312からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI2042および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI322および前記SI306からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI306および前記SI201からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI306および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI2042、前記SI001および前記SI145からなるサブセット、または、前記SI2042、前記SI001および前記SI281からなるサブセット、または、前記SI2042、前記SI001および前記SI201からなるサブセット、または、前記SI2042、前記SI145および前記SI322からなるサブセット、または、前記SI2042、前記SI145および前記SI306からなるサブセット、または、前記SI2042、前記SI322および前記SI306からなるサブセット、または、前記SI2042、前記SI322および前記SI201からなるサブセット、または、前記SI2042、前記SI281および前記SI306からなるサブセット、または、前記SI2042、前記SI2711および前記SI201からなるサブセット、または、前記SI2042、前記SI306および前記SI201からなるサブセット、または、前記SI2042、前記SI306および前記SI210からなるサブセット、または、前記SI2042、前記SI306および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI2042、前記SI201および前記SI210からなるサブセット、または、前記SI2042、前記SI201および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI322および前記SI306からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI281および前記SI306からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI306および前記SI201からなるサブセット、または、前記SI322、前記SI281および前記SI306からなるサブセット、または、前記SI322、前記SI306および前記SI210からなるサブセット、または、前記SI281、前記SI306および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI306、前記SI201および前記SI210からなるサブセットを用いた、璃の香の特定;
(E)前記SI001および前記SI306からなるサブセットを用いた、みはやの特定;
(F)前記SI2042、前記SI210、前記SI306および前記SI312からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI2042、前記SI306および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI001、前記SI306および前記SI210からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI001、前記SI306および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI2042、前記SI322、前記SI306および前記SI201からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI322、前記SI306および前記SI201からなるサブセットを用いた、みはやの特定;
(G)前記SI312、前記SI306、および前記SI149からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI306、および前記SI210からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI306、および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI306、および前記SI322からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI306、および前記SI201からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI149、および前記SI306からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI306、および前記SI210からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI306、および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI306、および前記SI322からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI306、および前記SI201からなるサブセット、または、前記SI149、前記SI306、および前記SI210からなるサブセット、または、前記SI149、前記SI306、および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI149、前記SI306、および前記SI201からなるサブセット、または、前記SI306、前記SI210、および前記SI322からなるサブセット、または、前記SI306、前記SI210、および前記SI201からなるサブセット、または、前記SI306、前記SI381、および前記SI322からなるサブセット、または、前記SI306、前記SI381、および前記SI201からなるサブセット、または、前記SI306、前記SI322、および前記SI201からなるサブセットを用いた、あすみの特定;
(H)前記SI145および前記SI306からなるサブセットを用いた、あすみの特定;
(I)前記SI001、前記SI210、および前記SI312からなるサブセット、または、前記SI210、前記SI312、および前記SI381からなるサブセットを用いた、津之望の特定;
(J)前記SI145および前記SI210からなるサブセットを用いた、津之望の特定;
(K)前記SI201および前記SI306からなるサブセット、または、前記SI201および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI201および前記SI322からなるサブセットを用いた、はるひの特定;
(L)前記SI145および前記SI201からなるサブセット、または、前記SI322および前記SI201からなるサブセット、または、前記SI2711および前記SI201からなるサブセット、または、前記SI306および前記SI201からなるサブセット、または、前記SI201および前記SI381からなるサブセットを用いた、はるひの特定;
(M)前記SI001、前記SI210、および前記SI312からなるサブセット、または、前記SI210、前記SI312、および前記SI381からなるサブセットを用いた、津之輝の特定;
(N)前記SI149、前記SI210、および前記SI306からなるサブセット、または、前記SI210、前記SI306、および前記SI322からなるサブセットを用いた、西南のひかりの特定;
(O)前記SI281、前記SI312および前記SI322からなるサブセット、または、前記SI145、前記SI322および前記SI306からなるサブセット、または、前記SI281、前記SI306および前記SI210からなるサブセット、または、前記SI281、前記SI201および前記SI210からなるサブセットを用いた、西南のひかりの特定;
(P)前記SI210および前記SI312からなるサブセットを用いた、麗紅の特定;
(Q)前記SI210および前記SI312からなるサブセットを用いた、麗紅の特定;
(R)前記SI306、前記SI210、および前記SI001からなるサブセット、または、前記SI149、前記SI210、および前記SI322からなるサブセット、または、前記SI210、前記SI306、および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI306、前記SI210、および前記SI322からなるサブセットを用いた、はれひめの特定;
(S)前記SI001、前記SI201、および前記SI312からなるサブセット、または、前記SI210、前記SI312、および前記SI381からなるサブセットを用いた、せとかの特定;
(T)前記SI145、前記SI2042および前記SI210からなるサブセット、または、前記SI2042、前記SI281および前記SI210からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI145および前記SI210からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI281および前記SI210からなるサブセット、または、前記SI145、前記SI281および前記SI210からなるサブセット、または、前記SI145、前記SI2711および前記SI210からなるサブセット、または、前記SI145、前記SI210および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI322、前記SI281および前記SI210からなるサブセット、または、前記SI281、前記SI2711および前記SI210からなるサブセット、または、前記SI281、前記SI306および前記SI210からなるサブセット、または、前記SI281、前記SI201および前記SI210からなるサブセット、または、前記SI281、前記SI210および前記SI381からなるサブセットを用いた、せとかの特定;
(U)前記SI149、前記SI210、および前記SI306からなるサブセットを用いた、甘平の特定;
(V)前記SI145、前記SI201、前記SI2711および前記SI312からなるサブセット、または、前記SI2711、前記SI201、前記SI210および前記SI381からなるサブセットを用いた、甘平の特定;
(W)前記SI001、前記SI306、および前記SI322からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI201、および前記SI322からなるサブセットを用いた、愛媛果試第28号の特定;
(X)前記SI281、前記SI312および前記SI322からなるサブセット、または、前記SI2042、前記SI322および前記SI2711からなるサブセット、または、前記SI2042、前記SI322および前記SI306からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI322および前記SI2711からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI322および前記SI306からなるサブセット、または、前記SI145、前記SI201および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI322、前記SI281および前記SI2711からなるサブセット、または、前記SI322、前記SI281および前記SI306からなるサブセット、または、前記SI322、前記SI281および前記SI381からなるサブセットを用いた、愛媛果試第28号の特定;
(Y)前記SI312、前記SI210、前記SI149、および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI210、前記SI149、および前記SI322からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI210、前記SI149、および前記SI201からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI306、前記SI210、および前記SI201からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI210、前記SI381、および前記SI201からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI210、前記SI322、および前記SI201からなるサブセットを用いた、はるみの特定;
(Z)前記SI2042、前記SI281、前記SI312および前記SI322からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI2042、前記SI322および前記SI281からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI001、前記SI322および前記SI281からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI145、前記SI322および前記SI281からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI145、前記SI281および前記SI306からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI145、前記SI281および前記SI210からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI145、前記SI201および前記SI210からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI322、前記SI281および前記SI2711からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI322、前記SI281および前記SI210からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI322、前記SI201および前記SI210からなるサブセット、または、前記SI145、前記SI281、前記SI2711および前記SI210からなるサブセット、または、前記SI322、前記SI281、前記SI2711および前記SI306からなるサブセット、または、前記SI322、前記SI281、前記SI2711および前記SI210からなるサブセット、または、前記SI281、前記SI2711、前記SI306および前記SI210からなるサブセット、または、前記SI281、前記SI2711、前記SI210および前記SI381からなるサブセットを用いた、はるみの特定;
(AA)前記SI312および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI312および前記SI322からなるサブセットを用いた、かんきつ中間母本農6号の特定;
(AB)前記SI001、前記SI149、および前記SI381からなるサブセットを用いた、たまみの特定;
(AC)前記SI2042、前記SI2711、前記SI312および前記SI322からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI2042、前記SI2711および前記SI306からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI001、前記SI145および前記SI2711からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI001、前記SI322および前記SI2711からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI001、前記SI2711および前記SI306からなるサブセット、または、前記SI2042、前記SI145、前記SI2711および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI2042、前記SI322、前記SI281および前記SI2711からなるサブセット、または、前記SI2042、前記SI322、前記SI2711および前記SI210からなるサブセット、または、前記SI2042、前記SI322、前記SI2711および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI2042、前記SI281、前記SI2711および前記SI306からなるサブセット、または、前記SI2042、前記SI2711、前記SI306および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI2042、前記SI2711、前記SI210および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI145、前記SI281および前記SI2711からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI145、前記SI2711および前記SI210からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI145、前記SI2711および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI322、前記SI281および前記SI2711からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI322、前記SI2711および前記SI210からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI322、前記SI2711および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI281、前記SI2711および前記SI306からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI2711、前記SI306および前記SI210からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI2711、前記SI306および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI2711、前記SI210および前記SI381からなるサブセットを用いた、たまみの特定;
(AD)前記SI312、前記SI201、および前記SI306からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI210、および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI381、および前記SI201からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI306、および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI306、および前記SI201からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI210、および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI381、および前記SI201からなるサブセット、または、前記SI149、前記SI306、および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI149、前記SI210、および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI149、前記SI381、および前記SI201からなるサブセットを用いた、西之香の特定;
(AE)前記SI281および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI2711および前記SI381からなるサブセットを用いた、西之香の特定;
(AF)前記SI001、前記SI149、および前記SI306からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI149、および前記SI210からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI149、および前記SI322からなるサブセットを用いた、あまかの特定;ならびに、
(AG)前記SI2042、前記SI2711および前記SI312からなるサブセット、または、前記SI312、前記SI001および前記SI2711からなるサブセット、または、前記SI2042、前記SI281および前記SI2711からなるサブセット、または、前記SI2042、前記SI2711および前記SI381からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI281および前記SI2711からなるサブセット、または、前記SI001、前記SI2711および前記SI381からなるサブセットを用いた、あまかの特定;
前記特定工程において、表1~2に記載の、前記品種と前記SNPマーカーとの関係に基づき、前記カンキツ被検体の前記品種を特定する、
- 前記特定工程において、前記品種の特定に用いるSNPマーカーを含む領域を増幅するプライマーセットを用いて、前記カンキツ被検体のDNAにおける前記領域を増幅する、請求項1に記載の識別方法。
- 前記プライマーセットは、長さ150bp以下の増幅断片が生じるように設計されている、請求項2に記載の識別方法。
- 前記プライマーセットは、下記(a’)~(l’):
(a’)前記SI312を含む領域を増幅するためのプライマーセットであって、配列番号9に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第1のプライマーと、配列番号10に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第2のプライマーとからなるプライマーセット;
(b’)前記SI001を含む領域を増幅するためのプライマーセットであって、配列番号11に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第1のプライマーと、配列番号12に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第2のプライマーとからなるプライマーセット;
(c’)前記SI322を含む領域を増幅するためのプライマーセットであって、配列番号13に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第1のプライマーと、配列番号14に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第2のプライマーとからなるプライマーセット;
(d’)配列番号4で表される塩基配列の66番目の塩基に相当するSNPマーカー(SI149)を含む領域を増幅するためのプライマーセットであって、配列番号15に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第1のプライマーと、配列番号16に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第2のプライマーとからなるプライマーセット;
(e’)前記SI306を含む領域を増幅するためのプライマーセットであって、配列番号17に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第1のプライマーと、配列番号18に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第2のプライマーとからなるプライマーセット;
(f’)前記SI201を含む領域を増幅するためのプライマーセットであって、配列番号19に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第1のプライマーと、配列番号20に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第2のプライマーとからなるプライマーセット;
(g’)前記SI210を含む領域を増幅するためのプライマーセットであって、配列番号21に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第1のプライマーと、配列番号22に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第2のプライマーとからなるプライマーセット;
(h’)前記SI381を含む領域を増幅するためのプライマーセットであって、配列番号23に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第1のプライマーと、配列番号24に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第2のプライマーとからなるプライマーセット;
(i’)前記SI145を含む領域を増幅するためのプライマーセットであって、配列番号45に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第1のプライマーと、配列番号46に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第2のプライマーとからなるプライマーセット;
(j’)前記SI2711を含む領域を増幅するためのプライマーセットであって、配列番号47に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第1のプライマーと、配列番号48に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第2のプライマーとからなるプライマーセット;
(k’)前記SI281を含む領域を増幅するためのプライマーセットであって、配列番号49に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第1のプライマーと、配列番号50に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第2のプライマーとからなるプライマーセット;および、
(l’)前記SI2042を含む領域を増幅するためのプライマーセットであって、配列番号51に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第1のプライマーと、配列番号52に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第2のプライマーとからなるプライマーセット;
からなる群より選択される、請求項2または3に記載の識別方法。 - 前記特定工程において、前記プライマーセットを用いて増幅した増幅断片に含まれるSNPマーカーを検出するTaqMan(登録商標)プローブをさらに用いる、請求項2から4の何れか1項に記載の識別方法。
- 前記カンキツ被検体のDNAは、前記カンキツ被検体の生鮮果実または加工果実から調製したDNAである、請求項2から5の何れか1項に記載の識別方法。
- 請求項1から6の何れか1項に記載の識別方法において、カンキツの品種を識別するための識別キットであって、下記(a’)~(l’):
(a’)配列番号1で表される塩基配列の31番目の塩基に相当するSNPマーカーを含む領域を増幅するためのプライマーセットであって、配列番号9に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第1のプライマーと、配列番号10に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第2のプライマーとからなるプライマーセット;
(b’)配列番号2で表される塩基配列の33番目の塩基に相当するSNPマーカーを含む領域を増幅するためのプライマーセットであって、配列番号11に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第1のプライマーと、配列番号12に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第2のプライマーとからなるプライマーセット;
(c’)配列番号3で表される塩基配列の36番目の塩基に相当するSNPマーカーを含む領域を増幅するためのプライマーセットであって、配列番号13に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第1のプライマーと、配列番号14に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第2のプライマーとからなるプライマーセット;
(d’)配列番号4で表される塩基配列の66番目の塩基に相当するSNPマーカー(SI149)を含む領域を増幅するためのプライマーセットであって、配列番号15に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第1のプライマーと、配列番号16に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第2のプライマーとからなるプライマーセット;
(e’)配列番号5で表される塩基配列の35番目の塩基に相当するSNPマーカーを含む領域を増幅するためのプライマーセットであって、配列番号17に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第1のプライマーと、配列番号18に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第2のプライマーとからなるプライマーセット;
(f’)配列番号6で表される塩基配列の37番目の塩基に相当するSNPマーカーを含む領域を増幅するためのプライマーセットであって、配列番号19に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第1のプライマーと、配列番号20に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第2のプライマーとからなるプライマーセット;
(g’)配列番号7で表される塩基配列の44番目の塩基に相当するSNPマーカーを含む領域を増幅するためのプライマーセットであって、配列番号21に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第1のプライマーと、配列番号22に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第2のプライマーとからなるプライマーセット;
(h’)配列番号8で表される塩基配列の74番目の塩基に相当するSNPマーカーを含む領域を増幅するためのプライマーセットであって、配列番号23に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第1のプライマーと、配列番号24に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第2のプライマーとからなるプライマーセット;
(i’)配列番号41で表される塩基配列の40番目の塩基に相当するSNPマーカーを含む領域を増幅するためのプライマーセットであって、配列番号45に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第1のプライマーと、配列番号46に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第2のプライマーとからなるプライマーセット;
(j’)配列番号42で表される塩基配列の33番目の塩基に相当するSNPマーカーを含む領域を増幅するためのプライマーセットであって、配列番号47に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第1のプライマーと、配列番号48に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第2のプライマーとからなるプライマーセット;
(k’)配列番号43で表される塩基配列の38番目の塩基に相当するSNPマーカーを含む領域を増幅するためのプライマーセットであって、配列番号49に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第1のプライマーと、配列番号50に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第2のプライマーとからなるプライマーセット;および、
(l’)配列番号44で表される塩基配列の55番目の塩基に相当するSNPマーカーを含む領域を増幅するためのプライマーセットであって、配列番号51に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第1のプライマーと、配列番号52に示される塩基配列における15以上の連続する塩基を含む第2のプライマーとからなるプライマーセット;
からなる群より選択される少なくとも1つのプライマーセットを含む、識別キット。 - 前記プライマーセットを用いて増幅した増幅断片に含まれるSNPマーカーを検出するTaqMan(登録商標)プローブをさらに含む、請求項7に記載の識別キット。
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