JP7336759B2 - 経口用抗アレルギー剤 - Google Patents
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Description
項2.リポ多糖及び/又はTLR2アゴニスト活性を有する多糖類を更に含む、項1に記載の抗アレルギー剤。
項3.前記アレルギーが、I型アレルギー及び/又はIV型アレルギーである、項1又は2に記載の抗アレルギー剤。
項4.前記アレルギーが、アレルギー性鼻炎、花粉症、アトピー性皮膚炎、アレルギー性結膜炎、アレルギー性気管支喘息、食物アレルギー、蕁麻疹、及び接触性皮膚炎からなる群から選択される少なくとも1種である、項1~3のいずれか一項に記載の抗アレルギー剤。
項5.フコキサンチン若しくはその誘導体又はその塩を有効成分とするTh2抑制及びTreg活性化剤。
項6.リポ多糖及び/又はTLR2アゴニスト活性を有する多糖類を更に含む、項5に記載のTh2抑制及びTreg活性化剤。
項7.フコキサンチン若しくはその誘導体又はその塩を有効成分とするGATA3発現抑制及びFoxP3発現促進剤。
項8.フコキサンチン若しくはその誘導体又はその塩、並びに/又はリポ多糖及び/若しくはTLR2アゴニスト活性を有する多糖類を有効成分とするGATA3発現抑制用外用剤。
ファイトロックス社製、Infini-Pureフコキサンチン40を、シリカゲルクロマトグラフィーにより分離し、Journal of Pharmacological Sciences Volume 132, Issue 1, 2016, Pages 55-64に記載のある通りに精製した。
フコキサンチン処理によるGATA3発現への影響をリアルタイムPCRにより検証した。
GATA-1-F 5'-CGCTCCCTGTCACCGGCAGTGC-3'(AN: NM_008089)(配列番号1)
GATA-1-R 5'-CCGCCACAGTGGAGTAGCCGTT-3'(配列番号2)
GATA-2-F 5'-CTCCCGACGAGGTGGATGTCTT-3'(AN: NM_008090)(配列番号3)
GATA-2-R 5'-CCTGGGCTGTGCAACAAGTGTG-3'(配列番号4)
GATA-3-F 5'-TTTACCCTCCGGCTTCATCCTCTT-3'(AN: NM_008091)(配列番号5)
GATA-3-R 5'-TGCACCTGATACTTGAGGCACTCT-3'(配列番号6)
初代CD4+T細胞は、CD4+細胞単離キット及びLS Column (Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Germany)を用いてBL6雄マウスの脾臓から単離した。それから、細胞はCD3/CD28 T細胞活性化ビーズ(Life Technologies, Tokyo, Japan)と共に10μMのフコキサンチンの存在下又は非存在下で24時間インキュベートした。細胞は遠心により回収し、試験例1と同様に、qPCR解析を行った。
mIL-4-F 5'-CATCGGCATTTTGAACGAG-3'(AN: NM_021283)(配列番号7)
mIL-4-R 5'-CGAGCTCACTCTCTGTGGTG-3'(配列番号8)
mIL-5-F 5'-TTGACAAGCAATGAGACGATGAG-3'(AN: NM_010558)(配列番号9)
mIL-5-R 5'-GCCCCTGAAAGATTTCTCCAA-3'(配列番号10)
mIL-13-F 5'-GTGCCAAGATCTGTGTCTCTCC-3'(AN: NM_008355)(配列番号11)
mIL-13-R 5'-TTACAGAGGCCATGCAATATCC-3'(配列番号12)
初代CD4+T細胞は、試験例2と同様に調製し、CD3/CD28 T細胞活性化ビーズと共に10μMのフコキサンチンの存在下又は非存在下で24時間インキュベートした。インキュベート後、細胞は中性緩衝ホルマリンを用いて10分間固定化し、各抗体と反応させた。次に、FACS分析を行った(MACSQuant Analyzer 10, Miltenyi Biotech)。
FACSにて、T細胞サブセットのマーカーを指標に、免疫染色後、解析した。すべて、ミルテニー社の抗体を用いた。細胞は、試験例3と同様に調製した。
ラテックスビーズ(カルボキシル基修飾ポリスチレン製、蛍光レッド、平均粒子径2μm)(Merck, Darmstadt, Germany)を用いて、マクロファージ細胞の貧食作用に対するフコキサンチンの効果を試験した。細胞は、10 ng/mlのDer f1の存在下又は非存在下で、10μMのフコキサンチンを添加又は添加せず24時間インキュベートした。
10週齢の雄Nc/Ngaマウスに6日間3 mg/kgの量でLPSを経口投与した。1%カルボキシメチルセルロース溶液(CMC)に懸濁したフコキサンチンを1 mg/kgでマウスに1日1回経口投与した。全ての対照群はCMCを投与した。6日間投与後、マウスを安楽死させ、脾臓を摘出した。脾臓は、1 mlの血清不含RPMI 1640培地(Nakarai Tesque, Kyoto, Japan)に懸濁し、ナイロンメッシュ(70μm)でろ過した後、10 mlの懸濁液とした。細胞濃度を1.0×107 cellsをそれぞれの適切な抗体で染色した。FoxP3/CD4ダブルポジティブの細胞をFACSで測定した。
ヒトケラチノサイトHaCat細胞にダニアレルゲンDer f1 10 ng/mlを適用し、1μMのフコキサンチン及び10 ng/ml LPSの存在下又は非存在下で4日間インキュベートした。細胞は遠心により回収し、試験例1と同様に、qPCR解析を行った。
hGATA3-F 5'-GCTGTCTGCAGCCAGGAGAGC-3' (配列番号13)
hGATA3-R 5'-ATGCATCAAACAACTGTGGCCA-3' (配列番号14)
Claims (4)
- フコキサンチン又はその塩、及びリポ多糖を有効成分とする経口用抗アレルギー剤。
- 前記アレルギーが、I型アレルギー及び/又はIV型アレルギーである、請求項1に記載の抗アレルギー剤。
- 前記アレルギーが、アレルギー性鼻炎、花粉症、アトピー性皮膚炎、アレルギー性結膜炎、アレルギー性気管支喘息、食物アレルギー、蕁麻疹、及び接触性皮膚炎からなる群から選択される少なくとも1種である、請求項1又は2に記載の抗アレルギー剤。
- フコキサンチン又はその塩、及びリポ多糖を有効成分とするTh2抑制及びTreg活性化剤。
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---|---|---|---|---|
JP2007084518A (ja) | 2005-09-26 | 2007-04-05 | Kochi Univ | 海藻由来の免疫抑制物質を製造する方法 |
JP2009108022A (ja) | 2008-05-01 | 2009-05-21 | Tsujido Kagaku Kk | 治療剤 |
JP2012254959A (ja) | 2011-06-09 | 2012-12-27 | Kikkoman Corp | Il−17産生抑制剤 |
JP2013129627A (ja) | 2011-12-21 | 2013-07-04 | Hydrox Kk | フロロタンニン類の簡易な調製方法とその利用 |
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Non-Patent Citations (4)
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Clin Exp Allergy.,2017年,Vol.47, No.12,p.1574-1585 |
アレルギー,2004年,第53巻, 第3号, p.469-475 |
オレオサイエンス,2012年,第12巻, 第10号,p.509-514 |
生化学,2009年,第81巻, 第3号,p.209-217 |
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