JP7330630B2 - ロスマリン酸及びカルノシン酸を有効成分とする神経突起伸長誘導作用を有する組成物 - Google Patents

Description

本発明は、ロスマリン酸及びカルノシン酸を有効成分とする神経突起伸長誘導作用を有する組成物、並びに、これを含む機能性表示食品に関する。

老年型痴呆症等の原因の一つとして考えられている神経変性疾患の予防および／ または治療に利用し得る天然物由来の神経突起伸長剤を提供することを目的として天然物由来の神経突起伸長剤であり、ローズマリーおよびセージからなる群より選択される少なくとも１種の植物由来の抽出物を有効成分として含有する神経突起伸長剤が知られている（例えば特許文献１参照）。

神経新生とは、神経幹細胞が分裂、分化して新たな神経細胞が生まれること、神経細胞の成長（神経突起伸長）である。
近年、ストレスがこの神経新生にも強い抑制をもたらすといった報告や天敵の臭いをかがされたラットや拘束ストレスあるいはフットショック・ストレスを与えたラットの海馬で、神経新生が抑制されることが報告されており、神経新生（発生）と精神的ストレスとの関係が明らかになってきている（例えば非特許文献１参照）。
また、神経突起伸長誘導による治療が有用と考えられる疾患および作用としては、糖尿病性神経障害（例えば非特許文献４参照）、筋萎縮性側索硬化症（例えば非特許文献５参照）等の末梢神経疾患に付随する運動障害や知覚障害、あるいはうつ（例えば非特許文献２参照）、アルツハイマー病（例えば非特許文献３参照）、脊髄損傷（例えば非特許文献６参照）、パーキンソン病（例えば非特許文献３参照）等の中枢神経障害、または認知症（例えば非特許文献７参照）、脳機能改善（例えば非特許文献８参照）、記憶障害改善（例えば非特許文献７参照）等がある。
この神経突起伸長の代表的な誘導物質として神経成長因子（ＮＧＦ）が知られている（例えば非特許文献１１参照）。
また、ＮＧＦ以外で神経突起伸長を誘導する食品成分も多くの研究がされており、研究レベルでは、西洋ハーブの一種、ローズマリー（学名. Rosmarinus officinalis L.）に含まれるポリフェノールのロスマリン酸や、ジテルペンのカルノシン酸にも神経突起伸長作用があることが報告されており、抗ストレス作用や前述した疾患や作用への有効性が期待されているが、これらの成分の組み合わせによる報告はない（例えば非特許文献９参照）。

カルノシン酸（Carnosic acid）は、ローズマリー(Rosmarinus officinalis L.)やセージ（Salvia officinalis）などの西洋ハーブに含まれている天然のベンゼンジオールアビエタンのジテルペンで、ローズマリーやセージの乾燥葉には、０．２７～０．６６質量％のカルノシン酸が含まれている（例えば非特許文献１２参照）。

ロスマリン酸（Rosmarinic acid）は、ローズマリー、シソ、レモンバームなどの多くのシソ科植物に含まれるポリフェノール類である。
ロスマリン酸、カルノシン酸の両成分が含まれている植物としては、ローズマリー、セージが知られている（例えば非特許文献１３参照）。

ストレス・リラックスの市場として、２０１６年以降は“働き方改革”がキーワードとなり労働時間の短縮が進んでいる反面、従業員のストレスが増加するケースが見られ、“リラックス”をキーワードとした当該市場のニーズが高まっている背景もあり、２０１７年、２０１８年とＧＡＢＡが配合された食品が好調である点に加えて機能性表示食品での新規投入商品が増加しており、市場は拡大推移が見込まれている（約５５億円、２０１７年）。
成分別市場動向としては、ＧＡＢＡが７割を超え、ついでテアニン（１８．４％）とこの２成分が市場を占めている（例えば非特許文献１０参照）。
今後、働き方改革が進むオフィスだけでなく、家庭内においてもリラックスを求めるニーズは高まっていくものと考えられる。

特開２００７－２３０９４５号公報

蜂須 貢、「抗うつ薬はどの様にうつ病に効果をもたらすか？―SSRIとNaSSAの比較―」、昭和大学薬学雑誌、平成２４年、第２巻、第１号、p.57-70 仲川 伸、「海馬神経細胞新生と気分障害治療」、精神経誌、平成２３年、第１１２巻、第１０号、p.992-997 「難治である神経変性疾患発症の自覚前にバイオマーカーで病態進行を解明！」、［online］、名古屋大学、平成３０年３月２９日、Press Release、［令和元年１１月７日検索］、インターネット〈URL:https://www.med.nagoya-u.ac.jp/medical_J/research/pdf/Neurology_20180329.pdf〉 馬場 正之、「糖尿病：診断と治療の進歩―ＩＩＩ．合併症対策の進歩、３．糖尿病性神経障害」、日内会誌、平成２１年、第９８号、p.779-788 イチヤナギ・ナオキ（Ichiyanagi Naoki）、外１８名、「ステム・セル・レポート（Stem Cell Reportｓ）」、（米国）、平成２８年、第６巻、第４号、p.496-510 木山 博資、外２名、「損傷神経生存・修復の分子メカニズム」、蛋白 核酸 酵素、平成１２年、第４５巻、第８号、p.1309-1317 長井 薫、「大豆由来リン脂質ならびに糖たん白質糖鎖による神経変性疾患予防効果」、大豆たん白質研究、平成２１年、第１１巻、p.147-152 小山 豊、「脳傷害時のアストログリアの機能変化とその細胞内機構」、日薬理誌、平成１４年、第１１９巻、p.135-143 フェテン・タラム（Faten Taram）、外３名「モレキュールズ（Molecules）」、（米国）、平成３０年、第２３巻、第２９５６号、p.1-13 「Ｈ・Ｂフーズマーケティング便覧 ２０１９ Ｎｏ．１ －健康志向食品編－」、富士経済、平成３０年１０月２５日、p.330-339 古川昭栄、河岸洋和、「神経栄養因子（ＮＧＦ）の生理的意義とその合成促進物質」、化学と生物、平成３年、第２９巻、第１０号、p.640-646 ビン・シャン（Bin Shan）、外３名、「ジャーナル・オブ・アグリカルチュラル・アンド・フード・ケミストリー（Journal of Agricultural and Food Chemistry）」、（米国）、平成１７年、第５３巻、第２０号、p.7749-7759 アンナ・バルベルド―ケラルト（Anna Vallverdu-Queralt）、外５名、「フード・ケミストリー（Food Chemistry）」、（米国）、平成２６年、第１５４巻、p.299-307

本発明の目的は、ロスマリン酸及びカルノシン酸を有効成分とする神経突起伸長誘導作用を有する組成物、並びに、これを含む機能性表示食品を提供することである。

本発明者は前記の目的を達成するために鋭意研究を重ねた結果、特定量のロスマリン酸とカルノシン酸を併用することで神経突起伸長作用誘導作用において相乗効果があることを見出し、本発明を完成するに至った。
従って、本発明は、ロスマリン酸とカルノシン酸をモル濃度比で１：１～１：４の割合で神経突起伸長誘導作用の有効成分として含有することを特徴とする組成物である。

本発明の神経突起伸長誘導作用を有する組成物は、試験用試薬として利用できる他、ストレス、認知症あるいはアルツハイマー病、パーキンソン病、うつ、神経学的障害の治療または予防に有効であり、サプリメントや機能性表示食品、医薬品又は医薬部外品などとして利用できる。

以下、本発明を詳細に説明する。
本発明の神経突起伸長誘導作用を有する組成物は、ロスマリン酸とカルノシン酸をモル濃度比で１：４～４：１の割合で含有することを特徴とする。
本発明で使用するロスマリン酸とカルノシン酸は、ローズマリー等のロスマリン酸とカルノシン酸を含むハーブ類からエタノール抽出することで得ることが出来る他、市販品も使用できる。

本発明の神経突起伸長誘導作用を有する組成物は神経細胞の分化用試薬として使用できる。
ラット副腎髄質褐色細胞腫由来の神経細胞株ＰＣ１２細胞の神経細胞への分化には、増殖因子ＮＧＦを加えずに、前記組成物を使用することで効果的に分化を促進することができる。

本発明の組成物を使用して機能性表示食品を調製することもできる。
機能性表示食品としては、例えば、一般的なサプリメントの製造に用いられる種々の添加剤とともに錠剤、丸状、カプセル状、粉末状、顆粒状、細粒状、トローチ状、液状等の形状のサプリメントとして調製することができる。
また、配合可能な食品には特に限定はないが、例えば、飴、グミ、チューインガム、クッキー、クラッカー、ビスケット、チョコレート、プリン、ゼリー、スナック菓子、米菓、饅頭、羊羹、アイスクリーム、アイスキャンディー、シャーベット、ジェラート、ドーナツ、ケーキ、食パン、フランスパン、クロワッサン、うどん、そば、中華めん、きしめん、白飯、赤飯、ピラフ、カレーソース、シチュー、ドレッシング、 ハム、ソーセージ、かまぼこ、ちくわ、魚肉ソーセージ、 天ぷら、コロッケ、ハンバーグ、ジュース、お茶等に本発明の組成物を配合して機能性表示食品とすることができる。

機能性表示食品として使用する場合、ロスマリン酸の投与量は、投与方法と、患者の年齢、病状や一般状態等によって変化し得るが、大人では通常、１日、体重１ｋｇ当たり０．０１ｍｇ～１０ｍｇが適当である。
また、カルノシン酸の投与量は、投与方法と、患者の年齢、病状や一般状態等によって変化し得るが、大人では通常、１日、体重１ｋｇ当たり０．０１ｍｇ～１．６６ｍｇが適当である。
前記組成物は、ロスマリン酸とカルノシン酸が前記投与量の範囲内になるように適宜調製して機能性食品に配合すればよい。

［試験例１］神経突起伸長細胞の測定１
以下本発明を実施例により具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
国立研究開発法人理化学研究所バイオリソースセンターから入手したラット副腎髄質褐色細胞腫由来の神経細胞株ＰＣ１２細胞を培養用培地（ＤＭＥＭ培地＋１０％ウマ血清＋５％牛胎児血清）で培養した。
前記細胞をコラーゲンＩＶコートでコートされた６ウェル培養プレートを使用して６ウェルプレートあたり、６×１０^４細胞になるように細胞を播種した。
これを３７℃、５％ＣＯ^２インキュベータで２４時間、培養し分化用培地（ＤＭＥＭ培地＋０．１％ウマ血清＋０．０５％ 牛胎児血清）に交換し、同時に表１に示す量のロスマリン酸（「ＲＡ」と省略する）、カルノシン酸（「ＣＡ」と省略する）及びコントロールとしてジメチルスルフォキシド（「ＤＭＳＯ」と省略する）を添加した。
これを、さらに７２時間培養し細胞体の直径と同程度あるいはそれ以上に神経突起が伸長している細胞数を計測した。
各ウェル２５００細胞当たりの前記細胞数の割合を表１に示す。

ロスマリン酸、カルノシン酸をそれぞれ単独で５μｍｏl／Ｌ添加するよりも、ロスマリン酸とカルノシン酸を１：１（２．５μｍｏl／Ｌ＋２．５μｍｏl／Ｌ）の割合で添加したほうが、神経突起伸長細胞の割合が多かった。

［試験例２］神経突起伸長細胞の測定２
試験例１において、ロスマリン酸（「ＲＡ」と省略する）、カルノシン酸（「ＣＡ」と省略する）及びコントロールとしてジメチルスルフォキシド（「ＤＭＳＯ」と省略する）の添加量を表２に示す量に変更した以外は、試験例１と同様にして神経突起が伸長している細胞を測定した。
各ウェル２５００細胞当たりの前記細胞数の割合を表２に示す。

ロスマリン酸、カルノシン酸を単独で１０μmol/Lの濃度で添加するよりも、ロスマリン酸とカルノシン酸を1:1、1:2、2:1、1:3、3:1、1:4、4:1の割合で１０μmol/L添加した細胞のほうが、神経突起伸長細胞の割合が多かった。

［試験例３］アセチルコリンエステラーゼ酵素活性（mU/mg Protein）の測定
国立研究開発法人理化学研究所バイオリソースセンターから入手したラット副腎髄質褐色細胞腫由来の神経細胞株ＰＣ１２細胞を培養用培地（ＤＭＥＭ培地＋１０％ウマ血清＋５％牛胎児血清）で培養した。
前記細胞を温度応答性細胞培養容器（ＤＩＣ株式会社製、商品名：Ｃｅｐａｌｌｅｔ）の２４ウェル培養プレートに、２×１０^４細胞／ウェルになるように細胞を播種した。
これを３７℃、５％ＣＯ^２インキュベータで４８時間、培養し分化用培地（ＤＭＥＭ培地＋０．１％ウマ血清＋０．０５％ 牛胎児血清）に交換し、同時に表３に示す量のロスマリン酸（「ＲＡ」と省略する）、カルノシン酸（「ＣＡ」と省略する）及びコントロールとしてジメチルスルフォキシド（「ＤＭＳＯ」と省略する）を添加した。
これを、さらに７２時間培養し細胞を回収し、神経突起伸長のマーカーであるアセチルコリンエステラーゼ酵素活性を測定キット（コスモバイオ株式会社製、商品名：Amplite Colorimetric Acetylcholinesterase Assay Kit）を使用して説明書の記載に従って測定した。
蛋白量は、ＢＩＯＲＡＤ社製 タンパク測定キットを使用して説明書の記載に従って測定した。
アセチルコリンエステラーゼ酵素活性（mU/mg Protein）測定結果を表3に示す。

ロスマリン酸、カルノシン酸を単独で１０μｍｏl／Ｌの濃度で添加するよりも、ロスマリン酸とカルノシン酸を１：１、１：２、２：１、１：４、４：１の割合で１０μｍｏl／Ｌ相当併用添加した細胞のほうが、神経突起伸長により上昇するマーカーであるアセチルコリンエステラーゼ（ＡｃｈＥ）活性が高かった。

［試験例４］錠剤の製造
卵殻カルシウム１０８ｇ、ピロリン酸第二鉄２ｇ、アスコルビン酸４０ｇ、微結晶セルロース４０ｇ、還元麦芽糖２８０ｇ、ロスマリン酸とカルノシン酸をモル濃度比で２：１の割合で含有してなる組成物５ｇをミキサーによって常法により混合した後、打錠して錠剤を製造した。

Claims (1)

1. ロスマリン酸とカルノシン酸をモル濃度比で１：１～１：４の割合で神経突起伸長誘導作用の有効成分として含有することを特徴とする組成物。