JP7282780B2 - ４－（ナフタレン－１－イル）－４ｈ－１，２，４－トリアゾール系化合物の結晶形、塩形態及びその製造方法 - Google Patents
４－（ナフタレン－１－イル）－４ｈ－１，２，４－トリアゾール系化合物の結晶形、塩形態及びその製造方法 Download PDFInfo
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Description
［関連出願の引用］
本願は以下の優先権を主張する：
ＣＮ２０１７１１３５２２９１．０、出願日：２０１７－１２－１５
ＣＮ２０１７１１３７６７５９．Ｘ、出願日：２０１７－１２－１９。
本願は以下の優先権を主張する：
ＣＮ２０１７１１３５２２９１．０、出願日：２０１７－１２－１５
ＣＮ２０１７１１３７６７５９．Ｘ、出願日：２０１７－１２－１９。
［技術分野］
本発明は４－（ナフタレン－１－イル）－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール系化合物の結晶形及びその製造方法に関し、更に、尿酸水レベル異常関連疾患を治療する薬物の製造における前記結晶形の使用に関する。
本発明は４－（ナフタレン－１－イル）－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール系化合物の結晶形及びその製造方法に関し、更に、尿酸水レベル異常関連疾患を治療する薬物の製造における前記結晶形の使用に関する。
［背景技術］
近年、人々の生活習慣の変化に伴い、高尿酸血症及び痛風の発症が年々増加している。欧米では、疫学の研究は、痛風性関節炎の発症者数は総人口の１～２％を占め、成人男性の最も主要な関節炎のタイプであることを表明した。ブルームバーグ通信は２０２１年には１７７０万人の痛風患者がいると予想した。中国では、調査によると、２０～７４歳の年齢層の人口のうち、２５．３％の人口の血尿酸含有量が高く、０．３６％の人口が痛風疾患を患っている。現在、臨床治療薬は主に１）例えば、キサンチンオキシダーゼ阻害剤であるアロプリノール及びフェブリク等の尿酸の生成を抑える薬；２）例えば、プロベネシド及びベンズブロマロン等の尿酸の排泄を促進する薬；３）例えば、コルヒチン等の炎症阻害剤がある。これらの薬は治療上では全部一定の欠陥があって、治療効果が悪い、副作用が大きい、費用が高いのはその臨床の応用のいくつかの主要なボトルネックである。報道によれば、４０％～７０％の患者が標準流れの治療を受けた後、血尿酸の含有量が予想される治療目標（＜６ｍｇ／ｄＬ）に達していなかった。
近年、人々の生活習慣の変化に伴い、高尿酸血症及び痛風の発症が年々増加している。欧米では、疫学の研究は、痛風性関節炎の発症者数は総人口の１～２％を占め、成人男性の最も主要な関節炎のタイプであることを表明した。ブルームバーグ通信は２０２１年には１７７０万人の痛風患者がいると予想した。中国では、調査によると、２０～７４歳の年齢層の人口のうち、２５．３％の人口の血尿酸含有量が高く、０．３６％の人口が痛風疾患を患っている。現在、臨床治療薬は主に１）例えば、キサンチンオキシダーゼ阻害剤であるアロプリノール及びフェブリク等の尿酸の生成を抑える薬；２）例えば、プロベネシド及びベンズブロマロン等の尿酸の排泄を促進する薬；３）例えば、コルヒチン等の炎症阻害剤がある。これらの薬は治療上では全部一定の欠陥があって、治療効果が悪い、副作用が大きい、費用が高いのはその臨床の応用のいくつかの主要なボトルネックである。報道によれば、４０％～７０％の患者が標準流れの治療を受けた後、血尿酸の含有量が予想される治療目標（＜６ｍｇ／ｄＬ）に達していなかった。
ＵＲＡＴ１は、尿細管の上皮細胞の刷子縁膜上にある重要な腎臓陰イオントランスポーターであり、尿細管から上皮細胞に尿酸を特異的に輸送し、尿細管で尿酸を再吸収する主な原動力である。そのため、尿酸塩トランスポーターＵＲＡＴ１を有意に抑えることができれば、体内の尿酸の排泄を強化し、これにより、血尿酸レベルを低下させ、痛風発作の可能性を低下させることができる。
２０１５年１２月、アメリカのＦＤＡは、アストラゼネカの最初のＵＲＡＴ１抑制剤である下記の図に示されたＬｅｉｎｕｒａｄを承認した。その２００ｍｇの用量とキサンチンオキシダーゼ阻害剤ＸＯＩ（例えば、Ｆｅｂｕｘｏｓｔａｔ等）を併用して高尿酸血症と痛風性関節炎の治療に使用することを承認したが、併用する場合とキサンチンオキシダーゼ阻害剤を単独投与する場合を比較して、その付加的な効果はあまり目立つものではなかった。同時に、Ｌｅｉｎｕｒａｄ ４００ｍｇの用量が承認されてない原因は、用量が高い場合、併用により付加的な効果が十分に顕著になったとしても、著しい増加された毒副作用（腎臓に関連する有害な事象が発生する率、特に腎結石の発症率）が観察されたためである。したがって、ＦＤＡはＬｅｉｎｕｒａｄのラベルに黒枠の警告を付け、医療関係者にＬｅｉｎｕｒａｄが急性腎不全のリスクを引き起こし、特にＸＯＩとの併用しない場合にはよりよく見られ、もし許可された容量を超えてＬｅｉｎｕｒａｄを使用する場合、腎臓不全を引き起こすリスクはもっと高くなることを警告するように要求した。同時に、ＦＤＡはＬｅｉｎｕｒａｄが市場にでた後、アストラゼネカで腎臓と心血管の安全性についての考察を続けことを要請した。代謝類疾患に対する長期的な使用は、薬物の安全性問題が特に重要になった。そのため、安全的に血尿酸を下げる薬がこの分野の強い需要となった。
アストラゼネカは、開示した新薬申告書で、化合物Ｌｅｓｉｎｕｒａｄの複数の種属の動物肝ミクロソーム及び肝細胞代謝産物の体外の同定実験の結果を詳しく報道した。データは、下記の表－ａに示すように、Ｌｅｓｉｎｕｒａｄはサル及びヒトの肝細胞で代謝された場合、Ｍ３及びＭ４の二つの主な代謝産物が有意に検出されたが、イヌ及びラットの肝細胞ではＭ３及びＭ４は検出されなかった。
同時に、アストラゼネカは、Ｌｅｓｉｎｕｒａｄが複数の種属の動物の体内で投与された後の主要な代謝産物と代謝経路も報告し、その内、ジヒドロキシ代謝産物であるＭ４がヒトの代謝産物で特異的に検出された：
これは、Ｌｅｓｉｎｕｒａｄのヒト臨床データと一致した。実験データは、下記の表－ｂに示すように、Ｍ３、Ｍ４はヒト臨床で見られる最も重要な代謝産物であることを示した。
研究により、Ｍ４代謝産物の生成経路は、チトクロームＣＹＰ２Ｃ９と霊長類動物のエポキシドヒドロラーゼｍＥＨの共同作用の結果であることが確定できた。該ｍＥＨ代謝経路は霊長類の特有であり、これはＭ４がラットとイヌで観察できなかった原因を説明する：
［発明の概要］
本発明は粉末Ｘ線回折スペクトルが以下の２θ角：７．１６±０．２°、１７．９８±０．２°、２２．３０±０．２°において特徴的な回折ピークを有する、化合物１のＡ結晶形を提供した。
本発明は粉末Ｘ線回折スペクトルが以下の２θ角：７．１６±０．２°、１７．９８±０．２°、２２．３０±０．２°において特徴的な回折ピークを有する、化合物１のＡ結晶形を提供した。
本発明の幾つかの実施の形態において、前記化合物１のＡ結晶形の粉末Ｘ線回折スペクトルは以下の２θ角：７．１６±０．２°、１２．５０±０．２°、１４．６１±０．２°、１７．９８±０．２°、１９．６２±０．２°、２２．３０±０．２°、２４．６３±０．２°、２６．３７±０．２°において特徴的な回折ピークを有する。
本発明の幾つかの実施の形態において、前記化合物１のＡ結晶形の粉末Ｘ線回折スペクトルは以下の２θ角：７．１６±０．２°、９．５６±０．２°、１１．３０±０．２°、１２．５０±０．２°、１４．６１±０．２°、１７．９８±０．２°、１８．７２±０．２°、１９．６２±０．２°、２２．３０±０．２°、２４．６３±０．２°、２６．３７±０．２°において特徴的な回折ピークを有する。
本発明の幾つかの実施の形態において、前記化合物１のＡ結晶形のＸＲＰＤスペクトルは図１に示す通りである。
本発明の幾つかの実施の形態において、前記化合物１のＡ結晶形のＸＲＰＤスペクトル解析データは表１に示す通りである。
本発明の幾つかの実施の形態において、前記化合物１のＡ結晶形のＸＲＰＤスペクトル解析データは表１に示す通りである。
本発明の幾つかの実施の形態において、前記化合物１のＡ結晶形の示差走査熱量曲線は１６７．４２℃±２℃において吸熱ピークの開始点を有する。
本発明の幾つかの実施の形態において、前記化合物１のＡ結晶形のＤＳＣスペクトルは図２に示す通りである。
本発明の幾つかの実施の形態において、前記化合物１のＡ結晶形のＤＳＣスペクトルは図２に示す通りである。
本発明の幾つかの実施の形態において、前記化合物１のＡ結晶形の熱重量分析曲線は１４３．６４±３℃の際に重量が０．３７０８％減少する。
本発明の幾つかの実施の形態において、前記化合物１のＡ結晶形のＴＧＡスペクトルは図３に示す通りである。
本発明の幾つかの実施の形態において、前記化合物１のＡ結晶形のＴＧＡスペクトルは図３に示す通りである。
本発明は、更に、粉末Ｘ線回折スペクトルが図４に示す通りである、化合物１の非晶質Ｉを提供する。
本発明の幾つかの実施の形態において、前記化合物１の非晶質ＩのＤＳＣスペクトルは図５に示す通りである。
本発明の幾つかの実施の形態において、前記化合物１の非晶質ＩのＤＳＣスペクトルは図５に示す通りである。
本発明の幾つかの実施の形態において、前記化合物１の非晶質Ｉの熱重量分析曲線は１１６．０２±３℃の際に重量が０．８９７０％減少する。
本発明の幾つかの実施の形態において、前記化合物１のＡ結晶形のＴＧＡスペクトルは図６に示す通りである。
本発明の幾つかの実施の形態において、前記化合物１のＡ結晶形のＴＧＡスペクトルは図６に示す通りである。
本発明は、更に、粉末Ｘ線回折スペクトルは以下の２θ角：１７．３４±０．２°、２０．３６±０．２°、２７．１２±０．２°において特徴的な回折ピークを有する、化合物１ａのＢ結晶形を提供する。
本発明の幾つかの実施の形態において、前記化合物１ａのＢ結晶形の粉末Ｘ線回折スペクトルは以下の２θ角：１３．７７±０．２°、１５．５３±０．２°、１７．３４±０．２°、１８．７６±０．２°、２０．３６±０．２°、２１．３１±０．２°、２３．１０±０．２°、２７．１２±０．２°において特徴的な回折ピークを有する。
本発明の幾つかの実施の形態において、前記化合物１ａのＢ結晶形のＸＲＰＤスペクトルは図７に示す通りである。
本発明の幾つかの実施の形態において、前記化合物１ａのＢ結晶形のＸＲＰＤスペクトル解析データは表２に示す通りである。
本発明の幾つかの実施の形態において、前記化合物１ａのＢ結晶形のＸＲＰＤスペクトル解析データは表２に示す通りである。
本発明の幾つかの実施の形態において、前記化合物１ａのＢ結晶形の示差走査熱量曲線は１４０．７６℃±２℃において吸熱ピークの開始点を有する。
本発明の幾つかの実施の形態において、前記化合物１ａのＢ結晶形のＤＳＣスペクトルは図８に示す通りである。
本発明の幾つかの実施の形態において、前記化合物１ａのＢ結晶形のＤＳＣスペクトルは図８に示す通りである。
本発明の幾つかの実施の形態において、前記化合物１ａのＢ結晶形の熱重量分析曲線は１２８．０８℃±３℃の際に重量が０．４５９０％減少する。
本発明の幾つかの実施の形態において、前記化合物１ａのＢ結晶形のＴＧＡスペクトルは図９に示す通りである。
本発明の幾つかの実施の形態において、前記化合物１ａのＢ結晶形のＴＧＡスペクトルは図９に示す通りである。
本発明は、更に、粉末Ｘ線回折スペクトルは図１０に示す通りである、化合物１ａの非晶質ＩＩを提供する。
本発明の幾つかの実施の形態において、前記化合物１ａのＢ結晶形の示差走査熱量曲線は９１．３８℃±２℃において発熱ピークの開始点を有し、１３８．３２℃±２℃において吸熱ピークの開始点を有する。
本発明の幾つかの実施の形態において、前記化合物１ａのＢ結晶形の示差走査熱量曲線は９１．３８℃±２℃において発熱ピークの開始点を有し、１３８．３２℃±２℃において吸熱ピークの開始点を有する。
本発明の幾つかの実施の形態において、前記化合物１ａの非晶質ＩＩのＤＳＣスペクトルは図１１に示す通りである。
本発明の幾つかの実施の形態において、前記化合物１ａの非晶質ＩＩの熱重量分析曲線は１０１．３４℃±３℃の際に重量が１．８２１％減少し、１２９．１７℃±３℃の際に重量が３．６２９％減少する。
本発明の幾つかの実施の形態において、前記化合物１ａの非晶質ＩＩの熱重量分析曲線は１０１．３４℃±３℃の際に重量が１．８２１％減少し、１２９．１７℃±３℃の際に重量が３．６２９％減少する。
本発明の幾つかの実施の形態において、前記化合物１ａの非晶質ＩＩのＴＧＡスペクトルは図１２に示す通りである。
本発明は、更に、粉末Ｘ線回折スペクトルは以下の２θ角：１７．２４±０．２°、１８．６８±０．２°、２０．２６±０．２°において特徴的な回折ピークを有する、化合物１ｂのＣ結晶形を提供する。
本発明は、更に、粉末Ｘ線回折スペクトルは以下の２θ角：１７．２４±０．２°、１８．６８±０．２°、２０．２６±０．２°において特徴的な回折ピークを有する、化合物１ｂのＣ結晶形を提供する。
本発明の幾つかの実施の形態において、前記化合物１ｂのＣ結晶形の粉末Ｘ線回折スペクトルは以下の２θ角：１２．０６±０．２°、１３．６９±０．２°、１５．４６±０．２°、１７．２４±０．２°、１８．６８±０．２°、２０．２６±０．２°、２１．２３±０．２°、２７．０４±０．２°において特徴的な回折ピークを有する。
本発明の幾つかの実施の形態において、前記化合物１ｂのＣ結晶形の粉末Ｘ線回折スペクトルは以下の２θ角：１０．６５±０．２°、１２．０６±０．２°、１３．６９±０．２°、１５．４６±０．２°、１５．９７±０．２°、１７．２４±０．２°、１８．６８±０．２°、２０．２６±０．２°、２１．２３±０．２°、２３．０１±０．２°、２７．０４±０．２°において特徴的な回折ピークを有する。
本発明の幾つかの実施の形態において、前記化合物１ｂのＣ結晶形のＸＲＰＤスペクトルは図１３に示す通りである。
本発明の幾つかの実施の形態において、前記化合物１ｂのＣ結晶形のＸＲＰＤスペクトル解析データは表３に示す通りである。
本発明の幾つかの実施の形態において、前記化合物１ｂのＣ結晶形のＸＲＰＤスペクトル解析データは表３に示す通りである。
本発明の幾つかの実施の形態において、前記化合物１ｂのＣ結晶形の示差走査熱量曲線は１４０．１３℃±２℃において吸熱ピークの開始点を有する。
本発明の幾つかの実施の形態において、前記化合物１ｂのＣ結晶形のＤＳＣスペクトルは図１４に示す通りである。
本発明の幾つかの実施の形態において、前記化合物１ｂのＣ結晶形のＤＳＣスペクトルは図１４に示す通りである。
本発明の幾つかの実施の形態において、前記化合物１ｂのＣ結晶形の熱重量分析曲線は１３４．９８℃±３℃の際に重量が０．６６１２％減少する。
本発明の幾つかの実施の形態において、前記化合物１ｂのＣ結晶形のＴＧＡスペクトルは図１５に示す通りである。
本発明の幾つかの実施の形態において、前記化合物１ｂのＣ結晶形のＴＧＡスペクトルは図１５に示す通りである。
本発明は、更に、粉末Ｘ線回折スペクトルは図１６に示す通りである、化合物１ｂの非晶質ＩＩＩを提供する。
本発明の幾つかの実施の形態において、前記化合物１ｂの非晶質ＩＩＩの示差走査熱量曲線は１０３．０５℃±２℃において発熱ピークの開始点を有し、１３９．０７℃±２℃において吸熱ピークの開始点を有する。
本発明の幾つかの実施の形態において、前記化合物１ｂの非晶質ＩＩＩの示差走査熱量曲線は１０３．０５℃±２℃において発熱ピークの開始点を有し、１３９．０７℃±２℃において吸熱ピークの開始点を有する。
本発明の幾つかの実施の形態において、前記化合物１ｂの非晶質ＩＩＩのＤＳＣスペクトルは図１７に示す通りである。
本発明の幾つかの実施の形態において、前記化合物１ｂの非晶質ＩＩＩの熱重量分析曲線は６７．１４℃±３℃の際に重量が１．０３５％減少し、１０４．０４℃±３℃の際に重量が１．６４７％減少し、１３９．５８℃±３℃の際に重量が４．１３７％減少する。
本発明の幾つかの実施の形態において、前記化合物１ｂの非晶質ＩＩＩの熱重量分析曲線は６７．１４℃±３℃の際に重量が１．０３５％減少し、１０４．０４℃±３℃の際に重量が１．６４７％減少し、１３９．５８℃±３℃の際に重量が４．１３７％減少する。
本発明の幾つかの実施の形態において、前記化合物１ｂの非晶質ＩＩＩのＴＧＡスペクトルは図１８に示す通りである。
本発明は、更に、粉末Ｘ線回折スペクトルは以下の２θ角：９．１９±０．２°、１４．４１±０．２°、１９．９５±０．２°において特徴的な回折ピークを有する、化合物１のＤ結晶形を提供する。
本発明は、更に、粉末Ｘ線回折スペクトルは以下の２θ角：９．１９±０．２°、１４．４１±０．２°、１９．９５±０．２°において特徴的な回折ピークを有する、化合物１のＤ結晶形を提供する。
本発明の幾つかの実施の形態において、前記化合物１のＤ結晶形の粉末Ｘ線回折スペクトルは以下の２θ角：９．１９±０．２°、１０．８７±０．２°、１１．６３±０．２°、１３．７２±０．２°、１４．４１±０．２°、１６．９０±０．２°、１９．９５±０．２°、２２．２２±０．２°において特徴的な回折ピークを有する。
本発明の幾つかの実施の形態において、前記化合物１のＤ結晶形の粉末Ｘ線回折スペクトルは以下の２θ角：９．１９±０．２°、１０．８７±０．２°、１１．６３±０．２°、１３．７２±０．２°、１４．４１±０．２°、１６．９０±０．２°、１９．９５±０．２°、２２．２２±０．２°、２６．１１±０．２°において特徴的な回折ピークを有する。
本発明の幾つかの実施の形態において、前記化合物１のＤ結晶形のＸＲＰＤスペクトルは図１９に示す通りである。
本発明の幾つかの実施の形態において、前記化合物１のＤ結晶形のＸＲＰＤスペクトル解析データは表４に示す通りである。
本発明の幾つかの実施の形態において、前記化合物１のＤ結晶形のＸＲＰＤスペクトル解析データは表４に示す通りである。
本発明の幾つかの実施の形態において、前記化合物１のＤ結晶形の示差走査熱量曲線は１８３．１７℃±２℃において吸熱ピークの開始点を有する。
本発明の幾つかの実施の形態において、前記化合物１のＤ結晶形のＤＳＣスペクトルは図２０に示す通りである。
本発明の幾つかの実施の形態において、前記化合物１のＤ結晶形のＤＳＣスペクトルは図２０に示す通りである。
本発明の幾つかの実施の形態において、前記化合物１のＤ結晶形の熱重量分析曲線は１３０．９５℃±３℃の際に重量が０．２６５８％減少する。
本発明の幾つかの実施の形態において、前記化合物１のＤ結晶形のＴＧＡスペクトルは図２１に示す通りである。
本発明の幾つかの実施の形態において、前記化合物１のＤ結晶形のＴＧＡスペクトルは図２１に示す通りである。
本発明は、更に、尿酸レベル異常関連疾患を治療する医薬の製造における、化合物１のＡ結晶形、化合物１のＤ結晶形、化合物１の非晶質Ｉ、化合物１ａのＢ結晶形、化合物１ａの非晶質ＩＩ、化合物１ｂのＣ結晶形、化合物１ｂの非晶質ＩＩＩの使用を提供する。
本発明の幾つかの実施の形態において、前記疾患は高尿酸血症、痛風性関節炎、腎臓結石、尿路結石又は高血圧である
［発明の効果］
化合物１（Ａ結晶形）、１ａ（Ｂ結晶形）、１ｂ（Ｃ結晶形）は、いずれも化合物の安定した結晶形であり、優れた安定性を示す。同時に、化合物１ａ（Ｂ結晶形）、化合物１ｂ（Ｃ結晶形）、化合物１（Ａ結晶形）及び（±）－Ｌｅｓｉｎｕｒａｄはカニクイザルの体内で異なる薬物動態学を示す。同じ用量、同じＰＯ方式で投与した場合、（±）－Ｌｅｓｉｎｕｒａｄと比べ、化合物１ａ（結晶形Ｂ）、化合物１ｂ（結晶形Ｃ）、及び化合物１（結晶形Ａ）はより高い血漿曝露を示し、全体的な薬物動態学的性能がより優れている。（±）－ Ｌｅｓｉｎｕｒａｄと比較して、化合物１ａ（結晶形Ｂ）及び化合物１（結晶形Ａ）は、尿液中の化合物濃度が標的に対するより高いカバレッジ（０～２４ｈ）を示す。
［発明の効果］
化合物１（Ａ結晶形）、１ａ（Ｂ結晶形）、１ｂ（Ｃ結晶形）は、いずれも化合物の安定した結晶形であり、優れた安定性を示す。同時に、化合物１ａ（Ｂ結晶形）、化合物１ｂ（Ｃ結晶形）、化合物１（Ａ結晶形）及び（±）－Ｌｅｓｉｎｕｒａｄはカニクイザルの体内で異なる薬物動態学を示す。同じ用量、同じＰＯ方式で投与した場合、（±）－Ｌｅｓｉｎｕｒａｄと比べ、化合物１ａ（結晶形Ｂ）、化合物１ｂ（結晶形Ｃ）、及び化合物１（結晶形Ａ）はより高い血漿曝露を示し、全体的な薬物動態学的性能がより優れている。（±）－ Ｌｅｓｉｎｕｒａｄと比較して、化合物１ａ（結晶形Ｂ）及び化合物１（結晶形Ａ）は、尿液中の化合物濃度が標的に対するより高いカバレッジ（０～２４ｈ）を示す。
［定義及び説明］
特に断りのない限り、本明細書に用いられる以下の用語と句は下記の意味を含む。一つの特定の短句又は用語は、特に定義されていない場合、不確定か不明であると考えられるものではなく、一般的な意味で理解すべきである。本明細書に商品名が現れる場合、その対応する商品又はその活性成分を表すことが意図される。
特に断りのない限り、本明細書に用いられる以下の用語と句は下記の意味を含む。一つの特定の短句又は用語は、特に定義されていない場合、不確定か不明であると考えられるものではなく、一般的な意味で理解すべきである。本明細書に商品名が現れる場合、その対応する商品又はその活性成分を表すことが意図される。
本発明の中間体化合物は、以下に挙げられる具体的な実施の態様、他の化学合成法と組み合わせた実施の態様、及び当業者に周知である等価の置き換え方式を含む、当業者に周知である複数の合成方法により調製することができ、好ましい実施の態様は、本発明の実施例が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
本発明の具体的な実施の態様の化学反応は適当な溶剤において完成されるものであり、前記溶剤は本発明の化学変化及びその必要な試薬及び材料に適しなければならない。本発明の化合物を得るために、当業者は従来の実施の態様に基づき合成ステップ又は反応フローを変形又は選択する必要があることがある。
以下に実施の形態により本発明を詳しく説明するが、これらの実施の形態は本発明を何らか制限するものではない。
本発明に用いられる全ての溶剤は市販されるものであり、さらに精製することなく使用できる。
本発明に用いられる全ての溶剤は市販されるものであり、さらに精製することなく使用できる。
本発明は下記の略語を用いる：ＤＭＦはジメチルホルムアミド；ＭｓＯＨはメタンスルホン酸；ＥｔＯＨはエタノール；ＮａＯＨは水酸化ナトリウムである。
化合物は手作りで又はＣｈｅｍＤｒａｗ（登録商標）ソフトウェアで名付けられ、市販化合物は売業者のカタログ名を用いる。
化合物は手作りで又はＣｈｅｍＤｒａｗ（登録商標）ソフトウェアで名付けられ、市販化合物は売業者のカタログ名を用いる。
本発明に係る粉末Ｘ線回折（Ｘ－ｒａｙ ｐｏｗｄｅｒ ｄｉｆｆｒａｃｔｏｍｅｔｅｒ， ＸＲＰＤ）方法
装置の型番：ブルカーＤ８ ａｄｖａｎｃｅ Ｘ線回折計
測定方法：約１０～２０ｍｇの試料をＸＲＰＤの検出に用いる。
装置の型番：ブルカーＤ８ ａｄｖａｎｃｅ Ｘ線回折計
測定方法：約１０～２０ｍｇの試料をＸＲＰＤの検出に用いる。
詳細なＸＲＰＤパラメータは下記の通りである：
Ｘ線管：Ｃｕ，ｋα，（λ＝１．５４０５６Å）。
管電圧：４０ｋＶ、管電流：４０ｍＡ
発散スリット：０．６０ｍｍ
センサスリット：１０．５０ｍｍ
散乱防止スリット：７．１０ｍｍ
走査範囲：４～４０ｄｅｇ
ステップ角：０．０２ｄｅｇ
ステップ幅：０．１２秒
試料プレート回転数：１５ｒｐｍ
本発明に係る示差熱分析（Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ Ｓｃａｎｎｉｎｇ Ｃａｌｏｒｉｍｅｔｅｒ， ＤＳＣ）方法
装置の型番：ＴＡ Ｑ２０００示差走査熱量計
測定方法：試料（～１ ｍｇ）をＤＳＣアルミニウム製坩堝に量り取り測定を行い、１０℃／ｍｉｎの昇温速度で、試料を２５℃～３５０℃まで加熱する。
Ｘ線管：Ｃｕ，ｋα，（λ＝１．５４０５６Å）。
管電圧：４０ｋＶ、管電流：４０ｍＡ
発散スリット：０．６０ｍｍ
センサスリット：１０．５０ｍｍ
散乱防止スリット：７．１０ｍｍ
走査範囲：４～４０ｄｅｇ
ステップ角：０．０２ｄｅｇ
ステップ幅：０．１２秒
試料プレート回転数：１５ｒｐｍ
本発明に係る示差熱分析（Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ Ｓｃａｎｎｉｎｇ Ｃａｌｏｒｉｍｅｔｅｒ， ＤＳＣ）方法
装置の型番：ＴＡ Ｑ２０００示差走査熱量計
測定方法：試料（～１ ｍｇ）をＤＳＣアルミニウム製坩堝に量り取り測定を行い、１０℃／ｍｉｎの昇温速度で、試料を２５℃～３５０℃まで加熱する。
本発明に係る熱重量分析（Ｔｈｅｒｍａｌ Ｇｒａｖｉｍｅｔｒｉｃ Ａｎａｌｙｚｅｒ， ＴＧＡ）方法
装置の型番：ＴＡ Ｑ５０００ＩＲ熱重量分析計
測定方法：試料（２～５ｍｇ）をＴＧＡ白金坩堝に量り取り測定を行い、１０℃／ｍｉｎの昇温速度で、試料を室温から３５０℃まで加熱する。
装置の型番：ＴＡ Ｑ５０００ＩＲ熱重量分析計
測定方法：試料（２～５ｍｇ）をＴＧＡ白金坩堝に量り取り測定を行い、１０℃／ｍｉｎの昇温速度で、試料を室温から３５０℃まで加熱する。
本発明の内容がよりよく分かるように、以下に具体的な実施の形態を参照しながらさらに説明するが、具体的な実施の態様は本発明の内容を制限するものではない。
実施例１：化合物１ａ（（－）－ＷＸ００１）及び化合物１ｂ（（＋）－ＷＸ００２）の製造
実施例１：化合物１ａ（（－）－ＷＸ００１）及び化合物１ｂ（（＋）－ＷＸ００２）の製造
工程１： 化合物２の合成
化合物１－１（５００．００ ｍｇ， ２．７３ ｍｍｏｌ， １．００ ｅｑ）及びＮ－クロロスクシンイミド（３６４．３４ ｍｇ， ２．７３ ｍｍｏｌ， １．００ ｅｑ）を酢酸（５．００ ｍＬ）に添加し、２０℃で１６時間攪拌して反応させた。反応終了後、反応液を直接濃縮して酢酸を除去し、シリカゲル１．０ ｇを添加して試料を混合し、自動カラム装置（酢酸エチル／石油エーテル＝０～１０％）で精製して褐色の固体化合物２（３８３．００ ｍｇ， １．７６ ｍｍｏｌ， 収率：６４．４７％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ： ８．４１－８．３５ （ｍ， １Ｈ）， ７．８５－７．８０ （ｍ， １Ｈ）， ７．５７－７．５２ （ｍ， ２Ｈ）， ７．１９ （ｄ， Ｊ＝０．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．４３ （ｓ， ２Ｈ）， ２．２６－２．１７ （ｍ， １Ｈ）， １．０７－０．９７ （ｍ， ２Ｈ）， ０．７４－０．６７ （ｍ， ２Ｈ）。
化合物１－１（５００．００ ｍｇ， ２．７３ ｍｍｏｌ， １．００ ｅｑ）及びＮ－クロロスクシンイミド（３６４．３４ ｍｇ， ２．７３ ｍｍｏｌ， １．００ ｅｑ）を酢酸（５．００ ｍＬ）に添加し、２０℃で１６時間攪拌して反応させた。反応終了後、反応液を直接濃縮して酢酸を除去し、シリカゲル１．０ ｇを添加して試料を混合し、自動カラム装置（酢酸エチル／石油エーテル＝０～１０％）で精製して褐色の固体化合物２（３８３．００ ｍｇ， １．７６ ｍｍｏｌ， 収率：６４．４７％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ： ８．４１－８．３５ （ｍ， １Ｈ）， ７．８５－７．８０ （ｍ， １Ｈ）， ７．５７－７．５２ （ｍ， ２Ｈ）， ７．１９ （ｄ， Ｊ＝０．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．４３ （ｓ， ２Ｈ）， ２．２６－２．１７ （ｍ， １Ｈ）， １．０７－０．９７ （ｍ， ２Ｈ）， ０．７４－０．６７ （ｍ， ２Ｈ）。
工程２： 化合物３の合成
化合物２（３６０．００ ｍｇ， １．６５ ｍｍｏｌ， １．００ ｅｑ）、トリエチルアミン（５０２．０２ ｍｇ， ４．９６ ｍｍｏｌ， ６８７．７０ μＬ， ３．００ ｅｑ） をジクロロメタン（５．００ ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却した後、チオホスゲン（２２８．１７ｍｇ、１．９８ｍｍｏｌ、１５２．１２μＬ、１．２０ｅｑ）を滴下し、反応液を０℃で０．５時間反応させた。反応を希塩酸（１ ｍｏｌ ／ Ｌ、２０ ｍＬ）でクエンチし、ジクロロメタン（１０ ｍＬ×３）で抽出した。有機相を合わせ、飽和食塩水（３０ ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。ろ過し、ろ過液を濃縮させ、黒色の液体の粗化合物３（５２０．００ ｍｇ、粗生成物）が得られ、次の反応に直接に使用した。
化合物２（３６０．００ ｍｇ， １．６５ ｍｍｏｌ， １．００ ｅｑ）、トリエチルアミン（５０２．０２ ｍｇ， ４．９６ ｍｍｏｌ， ６８７．７０ μＬ， ３．００ ｅｑ） をジクロロメタン（５．００ ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却した後、チオホスゲン（２２８．１７ｍｇ、１．９８ｍｍｏｌ、１５２．１２μＬ、１．２０ｅｑ）を滴下し、反応液を０℃で０．５時間反応させた。反応を希塩酸（１ ｍｏｌ ／ Ｌ、２０ ｍＬ）でクエンチし、ジクロロメタン（１０ ｍＬ×３）で抽出した。有機相を合わせ、飽和食塩水（３０ ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。ろ過し、ろ過液を濃縮させ、黒色の液体の粗化合物３（５２０．００ ｍｇ、粗生成物）が得られ、次の反応に直接に使用した。
工程３：化合物４の合成
粗化合物３（５２０．００ ｍｇ， ２．００ ｍｍｏｌ， １．００ ｅｑ）、ヒドラジン水和物（１００．１２ ｍｇ， ２．００ ｍｍｏｌ， ９７．２０ μＬ， １．００ ｅｑ）及びＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドジメチルアセタール（２８５．９８ ｍｇ， ２．４０ ｍｍｏｌ， ３１７．７６ μＬ， １．２０ ｅｑ）をＮ、Ｎ－ジメチルホルムアミド（５．００ ｍＬ）に添加し、２０℃で１６時間攪拌反応させた。反応液を濃縮してＮ、Ｎ－ジメチルホルムアミドを除去し、残りの混合物を酢酸エチル（２０ ｍＬ）で溶解し、シリカゲル（２ ｇ）を添加して試料を混合し、自動カラム装置（酢酸エチル／石油エーテル＝０～３５％）で精製して白色の固体化合物４（８１３．００ ｍｇ、 粗生成物）を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ， Ｍｅｔｈａｎｏｌ－ｄ４） δ： ８．５８ （ｄ， Ｊ＝ ８．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．３７ （ｓ， １Ｈ）， ７．７３－７．６７ （ｍ， １Ｈ）， ７．６７－７．６２ （ｍ， １Ｈ）， ７．４８－７．４５ （ｍ， １Ｈ）， ７．３８－７．３４ （ｍ， １Ｈ）， ２．５９－２．４９ （ｍ， １Ｈ）， １．２５－１．１８ （ｍ， ２Ｈ）， ０．９６－０．８４ （ｍ， ２Ｈ）
工程４：化合物５の合成
化合物４（８１３．００ ｍｇ， ２．６９ ｍｍｏｌ， １．００ ｅｑ）、２－ブロモ酢酸エチル（５３９．８６ ｍｇ， ３．２３ ｍｍｏｌ， ３５７．５３ μＬ， １．２０ ｅｑ）及び炭酸セシウム（１．７６ ｇ， ５．３９ ｍｍｏｌ， ２．００ ｅｑ）をＮ、Ｎ－ジメチルホルムアミド（５．００ ｍＬ）に添加し、得られた反応液を２０℃で１６時間攪拌反応させた。反応終了後、オイルポンプで濃縮して黄色の油状物及び白色の固体の混合物を得、混合物にアセトニトリル（２０ ｍＬ）を添加して２分間攪拌し、ろ過し、ケーキをアセトニトリル（２０ ｍｌ）ですすぎ、ろ過液を合わせ、濃縮して淡い褐色のオイル状の粗化合物５（１．１０ ｇ、粗生成物）を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ： ８．４９ （ｄ， Ｊ＝８．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．２４ （ｓ， １Ｈ）， ７．６８－７．６３ （ｍ， １Ｈ）， ７．６２－７．５９ （ｍ， １Ｈ）， ７．３９－７．３７ （ｍ， １Ｈ）， ７．２２ （ｄ， Ｊ＝ ８．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．１９－４．１７ （ｍ， ２Ｈ）， ４．１６－４．１５ （ｍ， ２Ｈ）， ２．４６－２．３９ （ｍ， １Ｈ）， １．２２－１３．１８ （ｍ， ２Ｈ）， １．０６ （ｔ， Ｊ＝７．２ Ｈｚ， ３Ｈ）， ０．９０－０．８５ （ｍ， ２Ｈ）． ＭＳ ｍ／ｚ： ３８８．０ ［Ｍ＋Ｈ］ ＋
工程５：化合物６の合成
粗化合物５（１．１０ ｇ，粗生成物）、Ｎ－ブロモスクシンイミド（５０５．４６ ｍｇ， ２．８４ ｍｍｏｌ， １．００ ｅｑ）をアセトニトリル（１０．００ ｍＬ）に添加し、１８℃で２時間攪拌反応させた。反応終了後、反応液を直接濃縮して試料を混合し、自動カラム装置（酢酸エチル／石油エーテル＝０～２５％）で精製して褐色のオイル状の粗生成物を得た。粗生成物を分取ＨＰＬＣにより分離させ、白色の固体化合物６を得た。（２０１．１ ｍｇ， ４３０．８２ μｍｏｌ）。１Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ， Ｍｅｔｈａｎｏｌ－ｄ４） δ： ８．６４ （ｄ， Ｊ＝８．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．７９－７．７４ （ｍ， １Ｈ）， ７．７４－７．６９ （ｍ， １Ｈ）， ７．５２ （ｄ， Ｊ＝０．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．２７－７．２２ （ｍ，１Ｈ）， ４．１７－４．０９ （ｍ， ２Ｈ）， ４．０８－３．９６ （ｍ， ２Ｈ）， ２．６３－２．５２ （ｍ， １Ｈ）， １．２８－１．２３ （ｍ， ５Ｈ）， ０．９７－０．９０ （ｍ， ２Ｈ）． ＭＳ ｍ／ｚ： ４６８．０ ［Ｍ＋Ｈ＋２］＋
工程６： 化合物６Ａ＆６Ｂの合成
化合物６（２０１．１ ｍｇ、４３０．８２μｍｏｌ、１．００ ｅｑ）を超臨界流体クロマトグラフィーＳＦＣ（キラルカラム：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＡＤ（２５０ ｍｍ×３０ ｍｍ、５μｍ）；移動相：超臨界ＣＯ２／エタノール（０．１％アンモニア水）＝３０％－３０ ｍｉｎ；流速：６０ ｍＬ／ｍｉｎ；検出波長：２２０ ｎｍ）を通じて分離して無色の透明なオイル状化合物６Ａ（５０．３０ ｍｇ、１０７．７６μｍｏｌ）及び無色の透明なオイル状化合物６Ｂ（５２．６０ ｍｇ、１１２．６９μｍｏｌ）を得た。
粗化合物３（５２０．００ ｍｇ， ２．００ ｍｍｏｌ， １．００ ｅｑ）、ヒドラジン水和物（１００．１２ ｍｇ， ２．００ ｍｍｏｌ， ９７．２０ μＬ， １．００ ｅｑ）及びＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドジメチルアセタール（２８５．９８ ｍｇ， ２．４０ ｍｍｏｌ， ３１７．７６ μＬ， １．２０ ｅｑ）をＮ、Ｎ－ジメチルホルムアミド（５．００ ｍＬ）に添加し、２０℃で１６時間攪拌反応させた。反応液を濃縮してＮ、Ｎ－ジメチルホルムアミドを除去し、残りの混合物を酢酸エチル（２０ ｍＬ）で溶解し、シリカゲル（２ ｇ）を添加して試料を混合し、自動カラム装置（酢酸エチル／石油エーテル＝０～３５％）で精製して白色の固体化合物４（８１３．００ ｍｇ、 粗生成物）を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ， Ｍｅｔｈａｎｏｌ－ｄ４） δ： ８．５８ （ｄ， Ｊ＝ ８．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．３７ （ｓ， １Ｈ）， ７．７３－７．６７ （ｍ， １Ｈ）， ７．６７－７．６２ （ｍ， １Ｈ）， ７．４８－７．４５ （ｍ， １Ｈ）， ７．３８－７．３４ （ｍ， １Ｈ）， ２．５９－２．４９ （ｍ， １Ｈ）， １．２５－１．１８ （ｍ， ２Ｈ）， ０．９６－０．８４ （ｍ， ２Ｈ）
工程４：化合物５の合成
化合物４（８１３．００ ｍｇ， ２．６９ ｍｍｏｌ， １．００ ｅｑ）、２－ブロモ酢酸エチル（５３９．８６ ｍｇ， ３．２３ ｍｍｏｌ， ３５７．５３ μＬ， １．２０ ｅｑ）及び炭酸セシウム（１．７６ ｇ， ５．３９ ｍｍｏｌ， ２．００ ｅｑ）をＮ、Ｎ－ジメチルホルムアミド（５．００ ｍＬ）に添加し、得られた反応液を２０℃で１６時間攪拌反応させた。反応終了後、オイルポンプで濃縮して黄色の油状物及び白色の固体の混合物を得、混合物にアセトニトリル（２０ ｍＬ）を添加して２分間攪拌し、ろ過し、ケーキをアセトニトリル（２０ ｍｌ）ですすぎ、ろ過液を合わせ、濃縮して淡い褐色のオイル状の粗化合物５（１．１０ ｇ、粗生成物）を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ： ８．４９ （ｄ， Ｊ＝８．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．２４ （ｓ， １Ｈ）， ７．６８－７．６３ （ｍ， １Ｈ）， ７．６２－７．５９ （ｍ， １Ｈ）， ７．３９－７．３７ （ｍ， １Ｈ）， ７．２２ （ｄ， Ｊ＝ ８．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．１９－４．１７ （ｍ， ２Ｈ）， ４．１６－４．１５ （ｍ， ２Ｈ）， ２．４６－２．３９ （ｍ， １Ｈ）， １．２２－１３．１８ （ｍ， ２Ｈ）， １．０６ （ｔ， Ｊ＝７．２ Ｈｚ， ３Ｈ）， ０．９０－０．８５ （ｍ， ２Ｈ）． ＭＳ ｍ／ｚ： ３８８．０ ［Ｍ＋Ｈ］ ＋
工程５：化合物６の合成
粗化合物５（１．１０ ｇ，粗生成物）、Ｎ－ブロモスクシンイミド（５０５．４６ ｍｇ， ２．８４ ｍｍｏｌ， １．００ ｅｑ）をアセトニトリル（１０．００ ｍＬ）に添加し、１８℃で２時間攪拌反応させた。反応終了後、反応液を直接濃縮して試料を混合し、自動カラム装置（酢酸エチル／石油エーテル＝０～２５％）で精製して褐色のオイル状の粗生成物を得た。粗生成物を分取ＨＰＬＣにより分離させ、白色の固体化合物６を得た。（２０１．１ ｍｇ， ４３０．８２ μｍｏｌ）。１Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ， Ｍｅｔｈａｎｏｌ－ｄ４） δ： ８．６４ （ｄ， Ｊ＝８．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．７９－７．７４ （ｍ， １Ｈ）， ７．７４－７．６９ （ｍ， １Ｈ）， ７．５２ （ｄ， Ｊ＝０．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．２７－７．２２ （ｍ，１Ｈ）， ４．１７－４．０９ （ｍ， ２Ｈ）， ４．０８－３．９６ （ｍ， ２Ｈ）， ２．６３－２．５２ （ｍ， １Ｈ）， １．２８－１．２３ （ｍ， ５Ｈ）， ０．９７－０．９０ （ｍ， ２Ｈ）． ＭＳ ｍ／ｚ： ４６８．０ ［Ｍ＋Ｈ＋２］＋
工程６： 化合物６Ａ＆６Ｂの合成
化合物６（２０１．１ ｍｇ、４３０．８２μｍｏｌ、１．００ ｅｑ）を超臨界流体クロマトグラフィーＳＦＣ（キラルカラム：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＡＤ（２５０ ｍｍ×３０ ｍｍ、５μｍ）；移動相：超臨界ＣＯ２／エタノール（０．１％アンモニア水）＝３０％－３０ ｍｉｎ；流速：６０ ｍＬ／ｍｉｎ；検出波長：２２０ ｎｍ）を通じて分離して無色の透明なオイル状化合物６Ａ（５０．３０ ｍｇ、１０７．７６μｍｏｌ）及び無色の透明なオイル状化合物６Ｂ（５２．６０ ｍｇ、１１２．６９μｍｏｌ）を得た。
化合物６Ａ：ＳＦＣ（キラルカラム：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＡＤ－３（１００ ｍｍ×４．６ ｍｍ、３μｍ）、移動相：エタノール（０．０５％ＤＥＡ）／超臨界ＣＯ２ ＝ ５～４０％、４．５ ｍｉｎ、４０％、２．５ ｍｉｎ； ５％、１ ｍｉｎ；流速：２．８ ｍＬ ／ ｍｉｎ；検出波長：２２０ ｎｍ；カラム温度：４０℃）Ｒｔ ＝ ３．５１３ ｍｉｎ。軸不斉異性体過剰は９９．６９％であった。
化合物６Ｂ：ＳＦＣ（キラルカラム：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＡＤ－３（１００ ｍｍ×４．６ ｍｍ、３μｍ）、移動相：エタノール（０．０５％ＤＥＡ）／超臨界ＣＯ２ ＝ ５～４０％、４．５ ｍｉｎ、４０％、２．５ ｍｉｎ； ５％、１ ｍｉｎ；流速：２．８ ｍＬ／ｍｉｎ；検出波長：２２０ ｎｍ；カラム温度：４０℃）Ｒｔ ＝ ３．９１１ ｍｉｎ。軸不斉異性体の過剰量は９９．８７％であった。
工程７：化合物（－）－ＷＸ００１及び （＋）－ＷＸ００２の合成
化合物６Ａ（５０．００ ｍｇ、１０７．１２μｍｏｌ、１．００ ｅｑ）及び水酸化リチウム一水和物（２２．４７ ｍｇ、５３５．６０μｍｏｌ、５．００ ｅｑ）をエタノール（２．００ ｍＬ）／水（２．００ ｍＬ）に添加し、得られた反応溶液を２０℃で１６時間攪拌反応させた。反応液を濃縮してエタノールを除去し、残りの水相を希塩酸（２ ｍｏｌ／Ｌ）でｐＨ＝２に調整して、白色の固体が析出し、ろ過し、ケーキを水（５ ｍＬ）ですすぎ、その後、ケーキをエタノール（１ ｍＬ）に溶解し、水（２０ ｍＬ）を入れ凍結乾燥して、（－）－ＷＸ００１、即ち、化合物１ａの非晶質ＩＩ（３６．３０ ｍｇ、８２．７４μｍｏｌ、収率：７７．２４％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ， Ｍｅｔｈａｎｏｌ－ｄ４） δ： ８．５２ （ｄ， Ｊ＝８．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．６７－７．５５ （ｍ， ２Ｈ）， ７．３９ （ｓ， １Ｈ）， ７．１３ （ｄ， Ｊ＝８．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．５６ （ｓ， １Ｈ）， ３．９５－３．７９ （ｍ， ２Ｈ）， ２．５３－２．３９ （ｍ， １Ｈ）， １．１８－１．１０ （ｍ， ２Ｈ）， ０．８５－０．７６ （ｍ， ２Ｈ）． ＭＳ ｍ／ｚ： ４３９．９ ［Ｍ＋Ｈ＋２］＋ ＳＦＣ （キラルカラム： Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＡＳ－３ （１５０ ｍｍ × ４．６ ｍｍ， ３ μｍ）； 移動相： メタノール （０．０５％ ＤＥＡ）／ 超臨界ＣＯ２ ＝ ５～４０％，５ ｍｉｎ；４０％，２．５ ｍｉｎ；５％，２．５ ｍｉｎ；流速： ２．５ ｍＬ／ｍｉｎ； 検出波長： ２２０ ｎｍ； カラム温度： ３５ ℃） Ｒｔ ＝ ３．５４８ ｍｉｎ。軸不斉異性体の過剰量は１００％であった。［α］２５ Ｄ＝ －０．３５０ （ｃ ＝ ５．０ ｍｇ／ｍＬメタノール溶液）。
化合物６Ａ（５０．００ ｍｇ、１０７．１２μｍｏｌ、１．００ ｅｑ）及び水酸化リチウム一水和物（２２．４７ ｍｇ、５３５．６０μｍｏｌ、５．００ ｅｑ）をエタノール（２．００ ｍＬ）／水（２．００ ｍＬ）に添加し、得られた反応溶液を２０℃で１６時間攪拌反応させた。反応液を濃縮してエタノールを除去し、残りの水相を希塩酸（２ ｍｏｌ／Ｌ）でｐＨ＝２に調整して、白色の固体が析出し、ろ過し、ケーキを水（５ ｍＬ）ですすぎ、その後、ケーキをエタノール（１ ｍＬ）に溶解し、水（２０ ｍＬ）を入れ凍結乾燥して、（－）－ＷＸ００１、即ち、化合物１ａの非晶質ＩＩ（３６．３０ ｍｇ、８２．７４μｍｏｌ、収率：７７．２４％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ， Ｍｅｔｈａｎｏｌ－ｄ４） δ： ８．５２ （ｄ， Ｊ＝８．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．６７－７．５５ （ｍ， ２Ｈ）， ７．３９ （ｓ， １Ｈ）， ７．１３ （ｄ， Ｊ＝８．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．５６ （ｓ， １Ｈ）， ３．９５－３．７９ （ｍ， ２Ｈ）， ２．５３－２．３９ （ｍ， １Ｈ）， １．１８－１．１０ （ｍ， ２Ｈ）， ０．８５－０．７６ （ｍ， ２Ｈ）． ＭＳ ｍ／ｚ： ４３９．９ ［Ｍ＋Ｈ＋２］＋ ＳＦＣ （キラルカラム： Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＡＳ－３ （１５０ ｍｍ × ４．６ ｍｍ， ３ μｍ）； 移動相： メタノール （０．０５％ ＤＥＡ）／ 超臨界ＣＯ２ ＝ ５～４０％，５ ｍｉｎ；４０％，２．５ ｍｉｎ；５％，２．５ ｍｉｎ；流速： ２．５ ｍＬ／ｍｉｎ； 検出波長： ２２０ ｎｍ； カラム温度： ３５ ℃） Ｒｔ ＝ ３．５４８ ｍｉｎ。軸不斉異性体の過剰量は１００％であった。［α］２５ Ｄ＝ －０．３５０ （ｃ ＝ ５．０ ｍｇ／ｍＬメタノール溶液）。
化合物６Ｂ（５２．００ ｍｇ， １１１．４０ μｍｏｌ， １．００ ｅｑ）及び水酸化リチウム一水和物（２３．３７ ｍｇ， ５５７．００ μｍｏｌ， ５．００ ｅｑ）をエタノール（２．００ ｍＬ）／水（２．００ ｍＬ）に添加し、得られた反応溶液を２０℃で１６時間攪拌して反応させた。反応液を濃縮してエタノールを除去し、残りの水相を希塩酸（２ ｍｏｌ／Ｌ）でｐＨ＝２に調整し、白色の固体が析出し、ろ過し、ケーキを水（５ｍＬ）ですすぎ、その後、ケーキをエタノール（１ｍＬ）に溶解し、水（２０ｍＬ）を入れ凍結乾燥して、（＋）－ＷＸ００２、即ち、化合物１ｂの非晶質ＩＩＩ（３６．８０ ｍｇ， ８３．８８ μｍｏｌ， 収率：７５．２９％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ， Ｍｅｔｈａｎｏｌ－ｄ４） δ： ８．６４ （ｄ， Ｊ＝８．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．８１－７．６７ （ｍ， ２Ｈ）， ７．５１ （ｓ， １Ｈ）， ７．２６ （ｄ， Ｊ＝８．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．１４－３．９３ （ｍ， ２Ｈ）， ２．６３－２．５３ （ｍ， １Ｈ）， １．３０－１．２３ （ｍ， ２Ｈ）， ０．９７－０．９０ （ｍ， ２Ｈ）． ＭＳ ｍ／ｚ： ４３９．９ ［Ｍ＋Ｈ＋２］＋ ＳＦＣ （キラルカラム： Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＡＳ－３ （１５０ ｍｍ × ４．６ ｍｍ， ３ μｍ）； 移動相：メタノール（０．０５％ ＤＥＡ）／超臨界ＣＯ２ ＝ ５～４０％，５ ｍｉｎ；４０％，２．５ ｍｉｎ；５％，２．５ ｍｉｎ；流速： ２．５ ｍＬ／ｍｉｎ； 検出波長： ２２０ ｎｍ； カラム温度： ３５ ℃） Ｒｔ ＝ ３．７７４ ｍｉｎ。軸不斉異性体の過剰量は９９．２２％であった。［α］２５
Ｄ＝ ＋１．１９１ （ｃ ＝ ４．６ ｍｇ／ｍＬメタノール溶液）。
実施例２：化合物１（（±）－ＷＸ００３）の調製
工程１：化合物１（（±）－ＷＸ００３）の合成
化合物６（５６．３０ ｍｇ， １２０．６１ μｍｏｌ， １．００ ｅｑ）及び水酸化リチウム一水和物（２５．３０ ｍｇ， ６０３．０７ μｍｏｌ， ５．００ ｅｑ）をエタノール（２．００ ｍＬ）／水（２．００ ｍＬ）に添加し２０℃で１６時間攪拌して反応させた。反応終了後、反応液を濃縮してエタノールを除去し、２ｍＬまで水を入れた後、希塩酸（２ ｍｏｌ／Ｌ）でｐＨ＝３に調整し、白色の固体が析出し、ろ過し、ケーキを水（１０ｍＬ）ですすぎ、その後、ケーキをメタノール（１ｍＬ）で溶解し、更にメタノール溶液に水（２０ｍＬ）を添加して、混合溶液は白色で、固体は析出しなく、凍結乾燥して白色の粉末化合物（±）－ＷＸ００３即ち、化合物１の非晶質Ｉ（５０．３０ ｍｇ， １１４．６５ μｍｏｌ， 収率：９１．４３％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ， Ｍｅｔｈａｎｏｌ－ｄ４） δ： ８．６４ （ｄ， Ｊ＝８．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．８０ － ７．６７ （ｍ， ２Ｈ）， ７．５２ （ｓ， １Ｈ）， ７．２６ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝８．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．１３ － ３．９５ （ｍ， ２Ｈ）， ２．６３－２．５３ （ｍ， １Ｈ）， １．３０－１．２３ （ｍ， ２Ｈ）， ０．９８－０．９０ （ｍ， ２Ｈ）． ＭＳ ｍ／ｚ： ４３９．６ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
実施例３：化合物１ａのＢ結晶形の調製
５０ｍｇの化合物１ａの非晶質ＩＩを０．２ ｍＬ（エタノール：水＝１：１）又は０．２ ｍＬ（メタノール：水＝１：１）の混合溶剤で懸濁液に攪拌した。懸濁液試料を恒温ミキサー（４０℃）に置き、２日間（光を避ける）振動した。残りの固体を遠心分離し、真空乾燥機３０℃で一晩乾燥させた。ＸＲＰＤにより結晶形を検出し、得られた最終生成物の結晶形は、化合物１ａの結晶形Ｂであった。
化合物６（５６．３０ ｍｇ， １２０．６１ μｍｏｌ， １．００ ｅｑ）及び水酸化リチウム一水和物（２５．３０ ｍｇ， ６０３．０７ μｍｏｌ， ５．００ ｅｑ）をエタノール（２．００ ｍＬ）／水（２．００ ｍＬ）に添加し２０℃で１６時間攪拌して反応させた。反応終了後、反応液を濃縮してエタノールを除去し、２ｍＬまで水を入れた後、希塩酸（２ ｍｏｌ／Ｌ）でｐＨ＝３に調整し、白色の固体が析出し、ろ過し、ケーキを水（１０ｍＬ）ですすぎ、その後、ケーキをメタノール（１ｍＬ）で溶解し、更にメタノール溶液に水（２０ｍＬ）を添加して、混合溶液は白色で、固体は析出しなく、凍結乾燥して白色の粉末化合物（±）－ＷＸ００３即ち、化合物１の非晶質Ｉ（５０．３０ ｍｇ， １１４．６５ μｍｏｌ， 収率：９１．４３％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ， Ｍｅｔｈａｎｏｌ－ｄ４） δ： ８．６４ （ｄ， Ｊ＝８．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．８０ － ７．６７ （ｍ， ２Ｈ）， ７．５２ （ｓ， １Ｈ）， ７．２６ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝８．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．１３ － ３．９５ （ｍ， ２Ｈ）， ２．６３－２．５３ （ｍ， １Ｈ）， １．３０－１．２３ （ｍ， ２Ｈ）， ０．９８－０．９０ （ｍ， ２Ｈ）． ＭＳ ｍ／ｚ： ４３９．６ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
実施例３：化合物１ａのＢ結晶形の調製
５０ｍｇの化合物１ａの非晶質ＩＩを０．２ ｍＬ（エタノール：水＝１：１）又は０．２ ｍＬ（メタノール：水＝１：１）の混合溶剤で懸濁液に攪拌した。懸濁液試料を恒温ミキサー（４０℃）に置き、２日間（光を避ける）振動した。残りの固体を遠心分離し、真空乾燥機３０℃で一晩乾燥させた。ＸＲＰＤにより結晶形を検出し、得られた最終生成物の結晶形は、化合物１ａの結晶形Ｂであった。
実施例４：化合物１ａが異なる溶剤の中での結晶形の調製
適切な量の化合物１ａの非晶質ＩＩを何分取り、それぞれ０．２ ｍＬの下記の表の単一又は混合溶剤に添加し、４０℃の条件で攪拌した。２日間攪拌した後、試料が溶液状態である場合、自然揮発により溶剤を除去し；試料がサスペンションのままである場合、遠心分離した。全ての試料の中の固体を収集し、ＸＲＰＤにより結晶形の状態を検出した。結果は表４の通りであった。
適切な量の化合物１ａの非晶質ＩＩを何分取り、それぞれ０．２ ｍＬの下記の表の単一又は混合溶剤に添加し、４０℃の条件で攪拌した。２日間攪拌した後、試料が溶液状態である場合、自然揮発により溶剤を除去し；試料がサスペンションのままである場合、遠心分離した。全ての試料の中の固体を収集し、ＸＲＰＤにより結晶形の状態を検出した。結果は表４の通りであった。
実施例５：化合物１ｂのＣ結晶形の調製
５０ｍｇの化合物１ｂの非晶質ＩＩを０．２ ｍＬ（エタノール：水＝１：１）又は０．２ ｍＬ （メタノール：水＝１：１）の混合溶液で攪拌して懸濁液とした。懸濁液試料を恒温ミキサー（４０℃）に置き、２日間（遮光）振動した。残りの固体を遠心分離し、真空乾燥機３０℃で一晩乾燥させた。ＸＲＰＤにより結晶形を検出し、得られた最終生成物の結晶形は、化合物１ｂのＣ結晶形であった。
５０ｍｇの化合物１ｂの非晶質ＩＩを０．２ ｍＬ（エタノール：水＝１：１）又は０．２ ｍＬ （メタノール：水＝１：１）の混合溶液で攪拌して懸濁液とした。懸濁液試料を恒温ミキサー（４０℃）に置き、２日間（遮光）振動した。残りの固体を遠心分離し、真空乾燥機３０℃で一晩乾燥させた。ＸＲＰＤにより結晶形を検出し、得られた最終生成物の結晶形は、化合物１ｂのＣ結晶形であった。
実施例６：化合物１ｂが異なる溶剤の中での結晶形の調製
適切な量の化合物１ｂの非晶質ＩＩＩを何分取り、それぞれ０．２ ｍＬの下記の表の単一又は混合溶剤に添加し、４０℃の条件で攪拌した。２日間攪拌した後、試料が溶液状態である場合、自然揮発により溶剤を除去し；試料がサスペンションのままである場合、試料を遠心分離した。全ての試料の中の固体を収集し、ＸＲＰＤにより結晶形の状態を検出した。結果は表５の通りであった。
適切な量の化合物１ｂの非晶質ＩＩＩを何分取り、それぞれ０．２ ｍＬの下記の表の単一又は混合溶剤に添加し、４０℃の条件で攪拌した。２日間攪拌した後、試料が溶液状態である場合、自然揮発により溶剤を除去し；試料がサスペンションのままである場合、試料を遠心分離した。全ての試料の中の固体を収集し、ＸＲＰＤにより結晶形の状態を検出した。結果は表５の通りであった。
実施例７：化合物１のＡ結晶形の調製
１００ｍｇの化合物１の非晶質Ｉをグラス瓶に添加し、エタノール／水（１：１， １ ｍＬ）を添加し、懸濁液に攪拌した。この懸濁液試料を恒温ミキサー（４０℃）に置き、４０℃で２０時間振動した後ろ過し、試料を収集した。前記試料を真空乾燥機（４０℃）で一晩乾燥させ、ＸＲＰＤにより結晶形を検出し、得られた最終生成物の結晶形は、化合物１のＡ結晶形であった。
１００ｍｇの化合物１の非晶質Ｉをグラス瓶に添加し、エタノール／水（１：１， １ ｍＬ）を添加し、懸濁液に攪拌した。この懸濁液試料を恒温ミキサー（４０℃）に置き、４０℃で２０時間振動した後ろ過し、試料を収集した。前記試料を真空乾燥機（４０℃）で一晩乾燥させ、ＸＲＰＤにより結晶形を検出し、得られた最終生成物の結晶形は、化合物１のＡ結晶形であった。
実施例８：化合物１が異なる溶剤の中での結晶形の調製
適切な量の原料である化合物１の非晶質Ｉを何分取り、それぞれ１．０ ｍＬの下記の表の単一又は混合溶剤を添加し、４０℃の条件で攪拌した。１日間攪拌した後、試料が溶液状態である場合、自然揮発により溶剤を除去し；試料がサスペンションのままである場合、試料を遠心分離した。全ての試料の中の固体を収集し、ＸＲＰＤにより結晶形の状態を検出した。結果は表６の通りであった。
適切な量の原料である化合物１の非晶質Ｉを何分取り、それぞれ１．０ ｍＬの下記の表の単一又は混合溶剤を添加し、４０℃の条件で攪拌した。１日間攪拌した後、試料が溶液状態である場合、自然揮発により溶剤を除去し；試料がサスペンションのままである場合、試料を遠心分離した。全ての試料の中の固体を収集し、ＸＲＰＤにより結晶形の状態を検出した。結果は表６の通りであった。
実施例８：化合物１のＤ結晶形の調製
５３ ｇの化合物１の非晶質Ｉをグラス瓶に添加し、エタノール／水（１：１， ３５０ ｍＬ）を添加して、懸濁液に攪拌した。この懸濁液試料を恒温ミキサー（４０℃）に置き、４０℃で４８時間振動した後ろ過し、試料を収集した。前記試料を真空乾燥機（４０℃）で一晩乾燥させ、ＸＲＰＤにより結晶形を検出し、得られた最終生成物の結晶形は、化合物１のＤ結晶形であった。
５３ ｇの化合物１の非晶質Ｉをグラス瓶に添加し、エタノール／水（１：１， ３５０ ｍＬ）を添加して、懸濁液に攪拌した。この懸濁液試料を恒温ミキサー（４０℃）に置き、４０℃で４８時間振動した後ろ過し、試料を収集した。前記試料を真空乾燥機（４０℃）で一晩乾燥させ、ＸＲＰＤにより結晶形を検出し、得られた最終生成物の結晶形は、化合物１のＤ結晶形であった。
実施例９：化合物１のＡ結晶形の固体安定性試験
「原薬と製剤の安定性試験のガイドライン」（中国薬局方２０１５年版４つの一般原則９００１）に従って、化合物１のＡ結晶形を高温（６０℃、開口）、高湿度（室温／相対湿度９２．５％、開口）及び強い光照射（５０００ ｌｘ、閉口）の条件での安定性を調査した。
「原薬と製剤の安定性試験のガイドライン」（中国薬局方２０１５年版４つの一般原則９００１）に従って、化合物１のＡ結晶形を高温（６０℃、開口）、高湿度（室温／相対湿度９２．５％、開口）及び強い光照射（５０００ ｌｘ、閉口）の条件での安定性を調査した。
１５ ｍｇの化合物１のＡ結晶形を量って取り、ガラス製試料ボトルの底に置き、薄層に広げた。高温及び高湿の条件に置かれた試料をアルミホイルで瓶入り口を密封し、アルミホイル刺して小さな穴を開けて、試料が環境の空気と十分に接触できることを確保した；強い光照射の条件下に置かれた試料は、スクリューキャップで密閉させた。異なる条件下に置いた試料を５日目、１０日目サンプリングして検出（ＸＲＰＤ及びＨＰＬＣ）し、テスト結果を０日目の初期テスト結果と比較し、試験結果は表７の通りであった：
結論：化合物１のＡ結晶形は高温、高湿度、強い光照射の条件で安定性が良いことが示された。
テスト例１：体外評価
１．実験目的：
ＵＲＡＴ－１（尿酸トランスポーター）遺伝子を安定的にトランスフェクションしたＭＤＣＫ（イヌの腎細胞）細胞株を使用して、尿酸再吸収を阻害する化合物のＩＣ５０値を測定した。
２．背景紹介：
痛風は、血液の尿酸レベルの異常な上昇によって引き起こされる進行性疾患である。ＵＲＡＴ－１遺伝子コードは尿細管の尿酸トランスポーターに存在する。小分子化合物は、該タンパク質の機能を阻害することにより尿酸の排泄を促進し、それにより痛風の発症を防ぐ役割を果たす。
３．実験材料：
ＵＲＡＴ－１（ＭＤＣＫ）細胞株：ＵＲＡＴ－１遺伝子を安定的にトランスフェクションしたＭＤＣＫ細胞。
テスト例１：体外評価
１．実験目的：
ＵＲＡＴ－１（尿酸トランスポーター）遺伝子を安定的にトランスフェクションしたＭＤＣＫ（イヌの腎細胞）細胞株を使用して、尿酸再吸収を阻害する化合物のＩＣ５０値を測定した。
２．背景紹介：
痛風は、血液の尿酸レベルの異常な上昇によって引き起こされる進行性疾患である。ＵＲＡＴ－１遺伝子コードは尿細管の尿酸トランスポーターに存在する。小分子化合物は、該タンパク質の機能を阻害することにより尿酸の排泄を促進し、それにより痛風の発症を防ぐ役割を果たす。
３．実験材料：
ＵＲＡＴ－１（ＭＤＣＫ）細胞株：ＵＲＡＴ－１遺伝子を安定的にトランスフェクションしたＭＤＣＫ細胞。
細胞培養液：ＭＥＭ（イーグル最小必須培地）培養液、１０％ＦＢＳ（ウシ胎児血清）、１％ピルビン酸ナトリウム及び２５０μｇ／ ｍｌ のＧ４１８（ジェネティシン）を添加した。
ＨＢＳＳ （Ｈａｎｋ’ｓ Ｂａｌａｎｃｅｄ Ｓａｌｔ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ） Ｈａｎｋ’ｓ平衡塩緩衝液。
０．１ Ｍ ＮａＯＨ溶液。
０．１ Ｍ ＮａＯＨ溶液。
１４Ｃマーク－尿酸溶液。
ＣＯ２インキュベーター。
Ｔｒｉ－Ｃａｒｂ液体シンチレーションメーター
４．実験の手順及び方法：
４．１細胞播種：
１）細胞培地の培養上澄みを吸引除去し、１０ ｍＬ ＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水）で細胞を洗浄した。
ＣＯ２インキュベーター。
Ｔｒｉ－Ｃａｒｂ液体シンチレーションメーター
４．実験の手順及び方法：
４．１細胞播種：
１）細胞培地の培養上澄みを吸引除去し、１０ ｍＬ ＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水）で細胞を洗浄した。
２）洗浄した細胞培養フラスコに予熱したパンクレアチンを加え、フラスコの底を均等に覆うようにフラスコを回転した。室温で消化した。
３）各Ｔ１５０培養フラスコを１０～１５ ｍＬの培養液で細胞を懸濁し、０．１ｍＬを取り、トリパンブルー溶液で２倍に希釈して細胞をカウントした。
３）各Ｔ１５０培養フラスコを１０～１５ ｍＬの培養液で細胞を懸濁し、０．１ｍＬを取り、トリパンブルー溶液で２倍に希釈して細胞をカウントした。
４）細胞を培養液で２．５×１０５／ｍＬに希釈し、希釈した細胞を２４ウェルプレートに入れた（８００μＬ／穴、 ２．５×１０５細胞／穴）。３７℃， ５％ ＣＯ２のインキュベーターで、一晩インキュベートした。
４．２細胞の準備：
１）２４ウェルプレートに細胞を播種してから１６～１８時間後、上澄みを捨てた。各ウェルに６００μｌのＨＢＳＳ緩衝液を添加し、２回洗浄した。
１）２４ウェルプレートに細胞を播種してから１６～１８時間後、上澄みを捨てた。各ウェルに６００μｌのＨＢＳＳ緩衝液を添加し、２回洗浄した。
２）ＨＢＳＳ緩衝液を吸引除去した後、各ウェルに１８０μｌのＨＢＳＳ緩衝液を添加した。
４．３化合物溶液の調製、希釈及びサンプリング：
１）化合物の粉剤を１００％ ＤＭＳＯに溶解した。次に、化合物を３倍で６個ポイント、又は１０倍で２個ポイントを希釈し、最大開始濃度は５０ｍＭであった。
４．３化合物溶液の調製、希釈及びサンプリング：
１）化合物の粉剤を１００％ ＤＭＳＯに溶解した。次に、化合物を３倍で６個ポイント、又は１０倍で２個ポイントを希釈し、最大開始濃度は５０ｍＭであった。
２）ステップ１）の５μＬＤＭＳＯ溶液を１２０μｌ ＨＢＳＳ緩衝液に移し、２５倍に希釈した。
３）ステップ２）の１０μｌ希釈液を２４ウェル細胞プレートに添加し、３７℃， ５％ ＣＯ２インキュベーターで１５分間インキュベートした。ＤＭＳＯの最終濃度は０．２％であった。細胞対照ウェル：化合物を添加せず、０．２％ＤＭＳＯのみ含んだ。
３）ステップ２）の１０μｌ希釈液を２４ウェル細胞プレートに添加し、３７℃， ５％ ＣＯ２インキュベーターで１５分間インキュベートした。ＤＭＳＯの最終濃度は０．２％であった。細胞対照ウェル：化合物を添加せず、０．２％ＤＭＳＯのみ含んだ。
４．４検出：
１４Ｃマーカー－尿酸溶液を最終濃度５０μＭに希釈し、細胞プレートに添加した。３７℃、５％ＣＯ２のインキュベーターで、１０分間インキュベートした。上澄みを除去した後、細胞をＨＢＳＳ緩衝液で２回洗浄した。細胞に０．１Ｍ ＮａＯＨ溶液を添加して溶解した。細胞溶解液をシンチレーションチューブに取り、シンチレーション液を添加し、Ｔｒｉ－Ｃａｒｂ液体シンチレーションカウンターで信号データを読み取った。
１４Ｃマーカー－尿酸溶液を最終濃度５０μＭに希釈し、細胞プレートに添加した。３７℃、５％ＣＯ２のインキュベーターで、１０分間インキュベートした。上澄みを除去した後、細胞をＨＢＳＳ緩衝液で２回洗浄した。細胞に０．１Ｍ ＮａＯＨ溶液を添加して溶解した。細胞溶解液をシンチレーションチューブに取り、シンチレーション液を添加し、Ｔｒｉ－Ｃａｒｂ液体シンチレーションカウンターで信号データを読み取った。
４．５データの処理及び分析：
発光データに基づいて化合物のＵＲＡＴ－１に対する阻害効果を分析し、阻害率データを計算した。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアを使用して、阻害率（ｉｎｈ％）データの非線形フィッティング分析を実行し、ＩＣ５０値を得た。実験結果は表－７の通りであった：
発光データに基づいて化合物のＵＲＡＴ－１に対する阻害効果を分析し、阻害率データを計算した。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアを使用して、阻害率（ｉｎｈ％）データの非線形フィッティング分析を実行し、ＩＣ５０値を得た。実験結果は表－７の通りであった：
結論：ＵＲＡＴ－１（ＭＤＣＫ）細胞株において、（±）－Ｌｅｓｉｎｕｒａｄと比べ、化合物１及び化合物１ａはＵＲＡＴ－１が媒介する尿酸輸送に対してより強い阻害作用を示した。
テスト例２：体外評価
１．実験目的
該実験の目的は、ＬＣ－ＵＶ－ＭＳｎ（ｎ＝１－２）検出手段を使用して、ヒト肝細胞で１２０分間インキュベートした後の一連の化合物の代謝産物を実証することである。データを収集した後、ＭｅｔａｂｏＬｙｎｘＴＭソフトウェアを使用してＭＳ及びＭＳ２のデータを分析した。
２．実験方法
２．１肝臓細胞の培養系
１．実験目的
該実験の目的は、ＬＣ－ＵＶ－ＭＳｎ（ｎ＝１－２）検出手段を使用して、ヒト肝細胞で１２０分間インキュベートした後の一連の化合物の代謝産物を実証することである。データを収集した後、ＭｅｔａｂｏＬｙｎｘＴＭソフトウェアを使用してＭＳ及びＭＳ２のデータを分析した。
２．実験方法
２．１肝臓細胞の培養系
２．２試料の処理及び分析
試料を２時間培養した後、０．１％ギ酸を含むアセトニトリルでタンパク質を析出させ、遠心分離し、上澄みを取り、窒素ガス下でブロードライさせ、再溶解し、サンプリングして分析した。
３．実験結果
３．１化合物１ａの代謝産物の同定結果は表－８の通りであった。
試料を２時間培養した後、０．１％ギ酸を含むアセトニトリルでタンパク質を析出させ、遠心分離し、上澄みを取り、窒素ガス下でブロードライさせ、再溶解し、サンプリングして分析した。
３．実験結果
３．１化合物１ａの代謝産物の同定結果は表－８の通りであった。
３．２化合物１ｂの代謝産物の同定結果は表－９の通りであった。
３．３化合物（±）－Ｌｅｓｉｎｕｒａｄの代謝産物の同定結果は表－１０の通りであった。
実験データは、同じヒト肝細胞の代謝条件下で、化合物（±）－Ｌｅｓｉｎｕｒａｄは４．４０％の代謝産物Ｍ１を生成したが、化合物１Ａの非晶質ＩＩ及び化合物１ｂの非晶質ＩＩＩは何の代謝産物も検出できなかったことを示した。（±）－Ｌｅｓｉｎｕｒａｄと比較して、化合物１ａ及び化合物１ｂは体外肝細胞の安定性を高めたことを示した。
テスト例３：体内評価
１．実験目的
カニクイザルを実験動物として、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ方法をにより化合物１ａ（Ｂ結晶形）、化合物１ｂ（Ｃ結晶形）、化合物１（Ａ結晶形）及び（±）－ＬｅｓｉｎｕｒａｄをカニクイザルにＩＶ（静脈注射）、ＰＯ（経鼻投与）した後、異なる時点における血中の化合物１ａ、化合物１ｂ、化合物１及び（±）－Ｌｅｓｉｎｕｒａｄの薬物濃度を測定することにより、本発明の化合物がカニクイザルの体内での薬物動態学の行為を研究して、その薬物動態学的特性を評価することであった。
２．実験方法
２．１実験薬品
化合物１ａ（Ｂ結晶形）、化合物１ｂ（Ｃ結晶形）、化合物１（Ａ結晶形）及び（±）－Ｌｅｓｉｎｕｒａｄ
２．２実験動物
健康な成年オスカニクイザル２４匹、８群に分け（化合物当たりＩＶ、ＰＯ群あり）、毎群３匹。
１．実験目的
カニクイザルを実験動物として、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ方法をにより化合物１ａ（Ｂ結晶形）、化合物１ｂ（Ｃ結晶形）、化合物１（Ａ結晶形）及び（±）－ＬｅｓｉｎｕｒａｄをカニクイザルにＩＶ（静脈注射）、ＰＯ（経鼻投与）した後、異なる時点における血中の化合物１ａ、化合物１ｂ、化合物１及び（±）－Ｌｅｓｉｎｕｒａｄの薬物濃度を測定することにより、本発明の化合物がカニクイザルの体内での薬物動態学の行為を研究して、その薬物動態学的特性を評価することであった。
２．実験方法
２．１実験薬品
化合物１ａ（Ｂ結晶形）、化合物１ｂ（Ｃ結晶形）、化合物１（Ａ結晶形）及び（±）－Ｌｅｓｉｎｕｒａｄ
２．２実験動物
健康な成年オスカニクイザル２４匹、８群に分け（化合物当たりＩＶ、ＰＯ群あり）、毎群３匹。
２．３薬物の調製
適切な量の試料を計量し、一定量のＤＭＳＯを添加して超音波溶解し、次にＰＥＧ４００溶液を添加して、２ ｍｇ／ｍＬ濃度の試験化合物の透明なＤＭＳＯ／ＰＥＧ４００／Ｈ２Ｏ（５／４０／５５）溶液を調製し、ＩＶ投与に使用した。
適切な量の試料を計量し、一定量のＤＭＳＯを添加して超音波溶解し、次にＰＥＧ４００溶液を添加して、２ ｍｇ／ｍＬ濃度の試験化合物の透明なＤＭＳＯ／ＰＥＧ４００／Ｈ２Ｏ（５／４０／５５）溶液を調製し、ＩＶ投与に使用した。
適切な量の試料を計量し、一定量のＤＭＳＯを添加して超音波溶解し、次に０．５％ＭＣ溶液を添加して、２ ｍｇ／ｍＬ濃度の試験化合物のＤＭＳＯ／０．５％ＭＣ（５／９５）サスペンション溶液を作成し、ＰＯ投与に使用した。
２．４投与
カニクイザル２４匹を毎群オス３匹で８群に分け、一晩禁食させた後、それぞれＩＶ、ＰＯ投与した。ＩＶ用量は２ ｍｇ／ｋｇ、投与体積は１ ｍＬ／ｋｇであり；ＰＯ用量は１０ ｍｇ／ｋｇ、投与体積は５ ｍＬ／ｋｇであった。
３．実験の操作
ＩＶ群は、投与後０．０８３、０．２５、０．５、１、２、４、６、８、２４時間後に約２００μＬを採血し、Ｋ２－ＥＤＴＡの抗凝固チューブに入れ、３０００ｒｐｍで１５分間遠心分離して血漿を分離し、－８０℃で保管した。ＰＯ群は、投与後０．２５、０．５、１、２、４、６、８、２４時間後に採血し、その他の操作はＩＶ群と同様であった。血漿試料はタンパク質を析出する予備処理をした後、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ法により血液の薬物濃度を測定した。分析方法の線形範囲は２０．００～６０００ｎＭであった。ＰＯ群は投与後０～２４時間以内の尿液を採取し、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ法により尿中の薬物濃度を測定した。分析方法の線形範囲は２０．００～６０００ｎＭであった。
４．薬物動態学パラメータ
実験は以下の結果を示した：化合物１ａ（Ｂ結晶形）、化合物１ｂ（Ｃ結晶形）、化合物１（Ａ結晶形）及び（±）－Ｌｅｓｉｎｕｒａｄはカニクイザルの体内で異なる薬物動態学的性能を示した。同じ用量及び同じＰＯ方式で投与した場合、（±）－Ｌｅｓｉｎｕｒａｄと比べ、化合物１ａ（Ｂ結晶形）、化合物１ｂ（Ｃ結晶形）、及び化合物１（Ａ結晶形）は、高い血漿中の曝露量を示し、全体的な薬物動態学的性能がより優れていた。（±）－Ｌｅｓｉｎｕｒａｄと比べ、化合物１ａ（Ｂ結晶形）及び化合物１（Ａ結晶形）も、尿液中の化合物濃度が標的に対する（０～２４時間）より高い有効なカバレッジを示した。注：標的に対する尿液中の化合物濃度の有効なカバレッジ＝尿液の平均薬物濃度（０～２４時間）／ＵＲＡＴ１標的に対する薬物のＩＣ５０。同時に、体内では二つの軸不斉異性体である１ａ及び１ｂの相互変換は観察されず、循環システムで安定した単一軸不斉異性体が維持された。実験の結果は表－１１の通りであった：
カニクイザル２４匹を毎群オス３匹で８群に分け、一晩禁食させた後、それぞれＩＶ、ＰＯ投与した。ＩＶ用量は２ ｍｇ／ｋｇ、投与体積は１ ｍＬ／ｋｇであり；ＰＯ用量は１０ ｍｇ／ｋｇ、投与体積は５ ｍＬ／ｋｇであった。
３．実験の操作
ＩＶ群は、投与後０．０８３、０．２５、０．５、１、２、４、６、８、２４時間後に約２００μＬを採血し、Ｋ２－ＥＤＴＡの抗凝固チューブに入れ、３０００ｒｐｍで１５分間遠心分離して血漿を分離し、－８０℃で保管した。ＰＯ群は、投与後０．２５、０．５、１、２、４、６、８、２４時間後に採血し、その他の操作はＩＶ群と同様であった。血漿試料はタンパク質を析出する予備処理をした後、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ法により血液の薬物濃度を測定した。分析方法の線形範囲は２０．００～６０００ｎＭであった。ＰＯ群は投与後０～２４時間以内の尿液を採取し、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ法により尿中の薬物濃度を測定した。分析方法の線形範囲は２０．００～６０００ｎＭであった。
４．薬物動態学パラメータ
実験は以下の結果を示した：化合物１ａ（Ｂ結晶形）、化合物１ｂ（Ｃ結晶形）、化合物１（Ａ結晶形）及び（±）－Ｌｅｓｉｎｕｒａｄはカニクイザルの体内で異なる薬物動態学的性能を示した。同じ用量及び同じＰＯ方式で投与した場合、（±）－Ｌｅｓｉｎｕｒａｄと比べ、化合物１ａ（Ｂ結晶形）、化合物１ｂ（Ｃ結晶形）、及び化合物１（Ａ結晶形）は、高い血漿中の曝露量を示し、全体的な薬物動態学的性能がより優れていた。（±）－Ｌｅｓｉｎｕｒａｄと比べ、化合物１ａ（Ｂ結晶形）及び化合物１（Ａ結晶形）も、尿液中の化合物濃度が標的に対する（０～２４時間）より高い有効なカバレッジを示した。注：標的に対する尿液中の化合物濃度の有効なカバレッジ＝尿液の平均薬物濃度（０～２４時間）／ＵＲＡＴ１標的に対する薬物のＩＣ５０。同時に、体内では二つの軸不斉異性体である１ａ及び１ｂの相互変換は観察されず、循環システムで安定した単一軸不斉異性体が維持された。実験の結果は表－１１の通りであった：
テスト例４：体外評価
１．実験目的：
ＯＡＴ－４（有機陰イオントランスポーター－４）遺伝子を安定的にトランスフェクションしたＭＤＣＫ（イヌの腎細胞）の細胞株を使用して、特定の基質の再吸収を阻害する化合物のＩＣ５０値を測定した。
２．実験工程及び方法：
摂取阻害実験に使用された細胞培地は、ＤＭＥＭ（細胞基礎培地培地）に１０％ＦＢＳ（ペニシリン及びストレプトマイシンを含む）を添加したものである。ヒト薬物トランスポーターを過剰発現する細胞株（ＭＤＣＫ－ＯＡＴ４）及びブランクベクター細胞（ＭＤＣＫ－ｐｃＤＮＡ３．１）を蘇生させ及び継代培養した後、成長が良好な接着細胞を選んでトリプシンで消化して単細胞懸濁液に分散させ、その後、培地で細胞密度を２．０～３．０×１０５細胞／ｍＬに調節し、次に細胞懸濁液を１ ｍＬ／穴の量で２４ウェルの細胞培養プレートに接種し、３７℃、５％ＣＯ２、飽和空気湿度のインキュベーターで、各ウェルをカバーするまで細胞を２～３日間インキュベートした。先ず、培養板内の培養液を取り出し、Ｈａｎｋｓ緩衝塩溶液（Ｃｌ－なし）又はＰＢＳで一回洗浄し、その後、各ウェルに３７℃のＨａｎｋｓ緩衝塩溶液（Ｃｌ－なし）又はＰＢＳ緩衝塩溶液を入れ１０分間インキュベートし、次に放射性マーカーを含む５００μＬのプローブ基質溶液で２４ウェルプレート中のＨａｎｋｓ緩衝塩溶液（Ｃｌ－なし）又はＰＢＳ緩衝塩溶液を置換し、薬の投与を開始した；投与終了後（２分）、それぞれの予備冷却した緩衝塩溶液で反応を終了させ、細胞を３回洗浄した；次に、ウェル当たりに４００μＬ ０．１ ｍｍｏｌ／Ｌ ＮａＯＨを添加して細胞を溶解した；細胞溶解液をシンチレーションチューブに取り、３ ｍＬのＡｑｕａｓｏｌ－２シンチレーション液を添加し、Ｔｒｉ－Ｃａｒｂ ２９１０ ＴＲ液体シンチレーションカウンターで試料中の放射強度を測定した。細胞輸送試験で、各濃度及び陽性対照、ブランク対照（ｍｏｃｋ）に３ウェル（ｎ＝３）を設定した。
３．データの処理：
標的物投与群のトランスポーター細胞のみを含む摂取値（ベースｂａｃｋｇｒｏｕｎｄグループ、即ち、ブランクベクター細胞の摂取値Ｕ０を除く）を１００％（対照，Ｕｃ）と定義し、これを標準として、測定対象化合物を入れた後の、各投与群からベースを差し引いた摂取値Ｕと対照群の摂取値Ｕｃの割合（％）を計算し、トランスポーター活性に対する各濃度の阻害率（ＩＲ）を計算し、これにより、トランスポーターに対する化合物の阻害作用の強さを表し、その計算式は以下の通りである：
ＩＲ ＝１－ ［１００×（Ｕ－Ｕ０）／（Ｕｃ－Ｕ０）］％
投与濃度当たり３つの繰り返し（即ち、ｎ＝３）を設定し、Ｍｅａｎ ± ｓｔａｎｄａｒｄ ｅｒｒｏｒ （ＳＤ）をＭｉｃｒｏｓｏｆｔ（登録商標） Ｅｘｃｅｌ ２０１０ソフトウェアの統計学公式で計算した。各トランスポーターのそれぞれの投与濃度阻害率（ＩＲ）に基づき、Ｐｒｉｓｍ ５．０により、且つ、Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ（登録商標）Ｅｘｃｅｌ ２０１０ソフトウェアのＦｏｒｅｃａｓｔ関数と結合して薬物トランスポーターの転送活性に影響する化合物のＩＣ５０を計算した。
１．実験目的：
ＯＡＴ－４（有機陰イオントランスポーター－４）遺伝子を安定的にトランスフェクションしたＭＤＣＫ（イヌの腎細胞）の細胞株を使用して、特定の基質の再吸収を阻害する化合物のＩＣ５０値を測定した。
２．実験工程及び方法：
摂取阻害実験に使用された細胞培地は、ＤＭＥＭ（細胞基礎培地培地）に１０％ＦＢＳ（ペニシリン及びストレプトマイシンを含む）を添加したものである。ヒト薬物トランスポーターを過剰発現する細胞株（ＭＤＣＫ－ＯＡＴ４）及びブランクベクター細胞（ＭＤＣＫ－ｐｃＤＮＡ３．１）を蘇生させ及び継代培養した後、成長が良好な接着細胞を選んでトリプシンで消化して単細胞懸濁液に分散させ、その後、培地で細胞密度を２．０～３．０×１０５細胞／ｍＬに調節し、次に細胞懸濁液を１ ｍＬ／穴の量で２４ウェルの細胞培養プレートに接種し、３７℃、５％ＣＯ２、飽和空気湿度のインキュベーターで、各ウェルをカバーするまで細胞を２～３日間インキュベートした。先ず、培養板内の培養液を取り出し、Ｈａｎｋｓ緩衝塩溶液（Ｃｌ－なし）又はＰＢＳで一回洗浄し、その後、各ウェルに３７℃のＨａｎｋｓ緩衝塩溶液（Ｃｌ－なし）又はＰＢＳ緩衝塩溶液を入れ１０分間インキュベートし、次に放射性マーカーを含む５００μＬのプローブ基質溶液で２４ウェルプレート中のＨａｎｋｓ緩衝塩溶液（Ｃｌ－なし）又はＰＢＳ緩衝塩溶液を置換し、薬の投与を開始した；投与終了後（２分）、それぞれの予備冷却した緩衝塩溶液で反応を終了させ、細胞を３回洗浄した；次に、ウェル当たりに４００μＬ ０．１ ｍｍｏｌ／Ｌ ＮａＯＨを添加して細胞を溶解した；細胞溶解液をシンチレーションチューブに取り、３ ｍＬのＡｑｕａｓｏｌ－２シンチレーション液を添加し、Ｔｒｉ－Ｃａｒｂ ２９１０ ＴＲ液体シンチレーションカウンターで試料中の放射強度を測定した。細胞輸送試験で、各濃度及び陽性対照、ブランク対照（ｍｏｃｋ）に３ウェル（ｎ＝３）を設定した。
３．データの処理：
標的物投与群のトランスポーター細胞のみを含む摂取値（ベースｂａｃｋｇｒｏｕｎｄグループ、即ち、ブランクベクター細胞の摂取値Ｕ０を除く）を１００％（対照，Ｕｃ）と定義し、これを標準として、測定対象化合物を入れた後の、各投与群からベースを差し引いた摂取値Ｕと対照群の摂取値Ｕｃの割合（％）を計算し、トランスポーター活性に対する各濃度の阻害率（ＩＲ）を計算し、これにより、トランスポーターに対する化合物の阻害作用の強さを表し、その計算式は以下の通りである：
ＩＲ ＝１－ ［１００×（Ｕ－Ｕ０）／（Ｕｃ－Ｕ０）］％
投与濃度当たり３つの繰り返し（即ち、ｎ＝３）を設定し、Ｍｅａｎ ± ｓｔａｎｄａｒｄ ｅｒｒｏｒ （ＳＤ）をＭｉｃｒｏｓｏｆｔ（登録商標） Ｅｘｃｅｌ ２０１０ソフトウェアの統計学公式で計算した。各トランスポーターのそれぞれの投与濃度阻害率（ＩＲ）に基づき、Ｐｒｉｓｍ ５．０により、且つ、Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ（登録商標）Ｅｘｃｅｌ ２０１０ソフトウェアのＦｏｒｅｃａｓｔ関数と結合して薬物トランスポーターの転送活性に影響する化合物のＩＣ５０を計算した。
実験結果は表－１２の通りである：
結論：ＯＡＴ４－４（ＭＤＣＫ）細胞株では、（±）－Ｌｅｓｉｎｕｒａｄと比べ、化合物１はＯＡＴ－４が媒介する二つの異なる基質（尿酸及びエストロン硫酸アンモニウム）の転送に対してより弱い阻害効果を示した。
ＯＡＴ－４及びＵＲＡＴ－１のいずれも尿細管上皮細胞の刷子縁膜に位置するため、化合物はこの二つのトランスポーターの両方を同時に阻害する。したがって、ＵＲＡＴ－１が媒介する１４Ｃ－尿酸輸送を阻害する化合物のＩＣ５０と、ＯＡＴ－４が媒介する１４Ｃ－尿酸及び３Ｈ－エストロン硫酸アンモニウムを阻害する化合物のＩＣ５０を比較して、次のことが分かった：（±）－Ｌｅｓｉｎｕｒａｄは、ＵＲＡＴ－１の尿酸輸送に対して効果的な阻害を有すると同時に、ＯＡＴ－４の尿酸輸送に対して更に強力な阻害（１１倍）を有し、ＯＡＴ－４のエストロン硫酸アンモニウム輸送に対しても更に強力な阻害（２倍）を有する。一方、化合物１は、ＵＲＡＴ－１の尿酸輸送に対して効果的な阻害を有すると同時に、ＯＡＴ－４の尿酸輸送に対してはそれと相当な阻害（１倍）を有し、ＯＡＴ－４のエストロン硫酸アンモニウム輸送に対してはより弱い阻害（０．６倍）を示した。正常な人体の機能の維持におけるＯＡＴ－４トランスポーターの重要な役割を考慮すると、それに対する（±）－Ｌｅｓｉｎｕｒａｄの強力な優先的阻害は一定の安全リスクがあるが、それに対する化合物１の比較的弱い抑制は、より高い安全性を示した。
Claims (22)
- 化合物１のＡ結晶形であって、化合物１の前記Ａ結晶形の粉末Ｘ線回折スペクトルは以下の２θ角：７．１６±０．２°、１７．９８±０．２°、２２．３０±０．２°において特徴的な回折ピークを有することを特徴とする、化合物１のＡ結晶形。
- 化合物１の前記Ａ結晶形の粉末Ｘ線回折スペクトルは以下の２θ角：７．１６±０．２°、１２．５０±０．２°、１４．６１±０．２°、１７．９８±０．２°、１９．６２±０．２°、２２．３０±０．２°、２４．６３±０．２°、２６．３７±０．２°において特徴的な回折ピークを有することを特徴とする、請求項１に記載の化合物１のＡ結晶形。
- 化合物１の前記Ａ結晶形の粉末Ｘ線回折スペクトルは以下の２θ角：７．１６±０．２°、９．５６±０．２°、１１．３０±０．２°、１２．５０±０．２°、１４．６１±０．２°、１７．９８±０．２°、１８．７２±０．２°、１９．６２±０．２°、２２．３０±０．２°、２４．６３±０．２°、２６．３７±０．２°において特徴的な回折ピークを有することを特徴とする、請求項２に記載の化合物１のＡ結晶形。
- 化合物１の前記Ａ結晶形の粉末Ｘ線回折スペクトルは表１に示す通りであることを特徴とする、請求項３に記載の化合物１のＡ結晶形。
- 化合物１の前記Ａ結晶形の示差走査熱量曲線は１６７．４２℃±２℃において吸熱ピークの開始点を有することを特徴とし、
及び／又は、化合物１の前記Ａ結晶形の熱重量分析曲線は１４３．６４±３℃の際に重量が０．３７０８％減少することを特徴とする、請求項１～４の何れか１項に記載の化合物１のＡ結晶形。 - 化合物１のＤ結晶形であって、化合物１の前記Ｄ結晶形の粉末Ｘ線回折スペクトルは以下の２θ角：９．１９±０．２°、１４．４１±０．２°、１９．９５±０．２°において特徴的な回折ピークを有することを特徴とする、化合物１のＤ結晶形。
- 化合物１の前記Ｄ結晶形の粉末Ｘ線回折スペクトルは以下の２θ角：９．１９±０．２°、１０．８７±０．２°、１１．６３±０．２°、１３．７２±０．２°、１４．４１±０．２°、１６．９０±０．２°、１９．９５±０．２°、２２．２２±０．２°において特徴的な回折ピークを有することを特徴とする、請求項６に記載の化合物１のＤ結晶形。
- 化合物１の前記Ｄ結晶形の粉末Ｘ線回折スペクトルは以下の２θ角：９．１９±０．２°、１０．８７±０．２°、１１．６３±０．２°、１３．７２±０．２°、１４．４１±０．２°、１６．９０±０．２°、１９．９５±０．２°、２２．２２±０．２°、２６．１１±０．２°において特徴的な回折ピークを有することを特徴とする、請求項７に記載の化合物１のＤ結晶形。
- 化合物１の前記Ｄ結晶形の粉末Ｘ線回折スペクトルは表４に示す通りであることを特徴とする、請求項８に記載の化合物１のＤ結晶形。
- 化合物１の前記Ｄ結晶形の示差走査熱量曲線は１８３．１７℃±２℃において吸熱ピークの開始点を有することを特徴とし、
及び／又は、化合物１の前記Ｄ結晶形の熱重量分析曲線は１３０．９５℃±３℃の際に重量が０．２６５８％減少することを特徴とする、請求項６～９の何れか１項に記載の化合物１のＤ結晶形。 - 化合物１の非晶質Ｉ。
- 化合物１ａのＢ結晶形であって、化合物１ａの前記Ｂ結晶形の粉末Ｘ線回折スペクトルは以下の２θ角：１７．３４±０．２°、２０．３６±０．２°、２７．１２±０．２°において特徴的な回折ピークを有することを特徴とする、化合物１ａのＢ結晶形。
- 化合物１ａの前記Ｂ結晶形の粉末Ｘ線回折スペクトルは以下の２θ角：１３．７７±０．２°、１５．５３±０．２°、１７．３４±０．２°、１８．７６±０．２°、２０．３６±０．２°、２１．３１±０．２°、２３．１０±０．２°、２７．１２±０．２°において特徴的な回折ピークを有することを特徴とする、請求項１２に記載の化合物１ａのＢ結晶形。
- 化合物１ａの前記Ｂ結晶形の粉末Ｘ線回折スペクトルは表２に示す通りであることを特徴とする、請求項１３に記載の化合物１ａのＢ結晶形。
- 化合物１ａの前記Ｂ結晶形の示差走査熱量曲線は１４０．７６℃±２℃において吸熱ピークの開始点を有することを特徴とし、
及び／又は、化合物１ａの前記Ｂ結晶形の熱重量分析曲線は１２８．０８℃±３℃の際に重量が０．４５９０％減少することを特徴とする、請求項１２～１４の何れか１項に記載の化合物１ａのＢ結晶形。 - 化合物１ａの非晶質ＩＩ。
- 化合物１ｂのＣ結晶形であって、化合物１ｂの前記Ｃ結晶形の粉末Ｘ線回折スペクトルは以下の２θ角：１２．０６±０．２°、１３．６９±０．２°、１５．４６±０．２°、１７．２４±０．２°、１８．６８±０．２°、２０．２６±０．２°、２１．２３±０．２°、２７．０４±０．２°において特徴的な回折ピークを有することを特徴とする、化合物１ｂのＣ結晶形。
- 化合物１ｂの前記Ｃ結晶形の粉末Ｘ線回折スペクトルは表３に示す通りであることを特徴とする、請求項１７に記載の化合物１ｂのＣ結晶形。
- 化合物１ｂの前記Ｃ結晶形の示差走査熱量曲線は１４０．１３℃±２℃において吸熱ピークの開始点を有することを特徴とし、
及び／又は、化合物１ｂの前記Ｃ結晶形の熱重量分析曲線は１３４．９８℃±３℃の際に重量が０．６６１２％減少することを特徴とする、請求項１７又は１８項に記載の化合物１ｂのＣ結晶形。 - 化合物１ｂの非晶質ＩＩＩ。
- 請求項１～５の何れか１項に記載の化合物１のＡ結晶形、請求項６～１０の何れか１項に記載の化合物１のＤ結晶形、請求項１１に記載の化合物１の非晶質Ｉ、請求項１２～１５の何れか１項に記載の化合物１ａのＢ結晶形、請求項１６に記載の化合物１ａの非晶質ＩＩ、請求項１７～１９の何れか１項に記載の化合物１ｂのＣ結晶形、及び請求項２０に記載の化合物１ｂの非晶質ＩＩＩのうちの少なくとも１つ、並びに賦形剤を含む、尿酸レベル異常関連疾患を治療するための医薬組成物。
- 前記疾患は高尿酸血症、痛風性関節炎、腎臓結石、尿路結石又は高血圧であることを特徴とする、請求項２１に記載の医薬組成物。
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