JP7250539B2 - 疎水性素材に亜硝酸塩又は固形状酸性試薬を含浸させることにより、検体の展開を制御し得る、糖鎖抗原を抽出し測定するためのイムノクロマト試験片 - Google Patents
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Description
[1] 亜硝酸塩又は酸性溶液と混合した検体を添加するサンプルパッド、糖鎖抗原に対する抗体を標識した標識抗体を含む標識体領域及び前記糖鎖抗原に対する抗体を固相化した検出領域を含み、検出領域において抗体-糖鎖抗原-標識抗体の複合体を形成させ、糖鎖抗原を測定するイムノクロマト試験片であって、前記標識体領域の上流に中和試薬を含浸させた領域を有し、さらに該中和試薬を含浸させた領域の上流に、亜硝酸塩と混合した検体を用いるときには固形状酸性試薬を含浸させた領域を有し、酸性溶液と混合した検体を用いるときには亜硝酸塩を含浸させた領域を有する、検体中の糖鎖抗原を抽出し測定するためのイムノクロマト試験片であって、
亜硝酸塩又は固形状酸性試薬を含浸させた領域に疎水性の素材を用いることを特徴とする、イムノクロマト試験片。
[2] 亜硝酸塩又は固形状酸性試薬を含浸させた疎水性の素材に界面活性剤を含浸させる、[1]のイムノクロマト試験片。
[3] 界面活性剤がポリオキシエチレンオクチルフェニルエーテルである、[2]のイムノクロマト試験片。
[4] ポリオキシエチレンオクチルフェニルエーテルがTriton X-100である、[3]のイムノクロマト試験片。
[5] 亜硝酸塩又は固形状酸性試薬を含浸させた疎水性を有する素材が、ポリエステル、ポリエチレン、レーヨン、ナイロン、及びそれらのいずれか2種以上の混合物からなる群から選択される、[1]~[4]のいずれかのイムノクロマト試験片。
[6] サンプルパッド上に固形状酸性試薬若しくは亜硝酸塩を含浸させた領域が存在する、[1]~[5]のいずれかのイムノクロマト試験片。
[7] 固形状酸性試薬が、マロン酸、リンゴ酸、マレイン酸、クエン酸及び酒石酸からなる群から選択される、[1]~[6]のいずれかのイムノクロマト試験片。
[8] 中和試薬が、トリスヒドロキシルメチルアミノメタン又は水酸化ナトリウムである、[1]~[7]のいずれかのイムノクロマト試験片。
[9] 糖鎖抗原が、原生動物、真菌、細菌、マイコプラズマ、リケッチア、クラミジア又はウイルスの糖鎖抗原である、[1]~[8]のいずれかのイムノクロマト試験片。
[10] [1]~[9]のいずれかのイムノクロマト試験片と亜硝酸塩溶液若しくは酸性溶液を含むイムノクロマト試験キット。
[11] [1]~[10]のいずれかのイムノクロマト試験片を用いてイムノクロマト法により検体中の糖鎖抗原を測定する方法であって、
イムノクロマト試験片が固形状酸性試薬を含浸させた領域を有するときには検体を亜硝酸溶液と混合し、イムノクロマト試験片が亜硝酸塩を含浸させた領域を有するときには検体を酸性溶液と混合し、前記イムノクロマト試験片のサンプルパッドに添加することを含み、
固形状酸性試薬を含浸させた領域又は亜硝酸塩を含浸させた領域において、亜硝酸塩と固形状酸性試薬の反応により発生した亜硝酸の作用により検体から糖鎖抗原が抽出され、 中和試薬を含浸させた領域において、前記糖鎖抗原を含む酸性溶液が中和され、
検出領域において、抗体-糖鎖抗原-標識抗体の複合体が形成される、イムノクロマト法により、イムノクロマト試験片上での検体の展開のスピードや方向を制御し、酸性試薬と亜硝酸塩と中和試薬による処理を制御して、検体中の糖鎖抗原を測定する方法。
(B)予め検体と亜硝酸塩溶液を混合し、酸性試薬と中和試薬を含浸させたイムノクロマト試験片のサンプルパッドに添加する。混合液が酸性試薬を含浸させた領域に達すると亜硝酸塩と酸が反応し、亜硝酸が発生し、検体中の糖鎖抗原が抽出される。糖鎖抗原の抽出液はイムノクロマト試験片上の中和試薬を含浸させた領域で中和され、糖鎖抗原はイムノクロマト試験片上に固相化した抗体に結合し、検出できる。
以下の実施例において、%は、特に断らない場合はw/v%を示す。
A群溶連菌連鎖球菌測定イムノクロマト試験片の例
亜硝酸塩、固形状酸性試薬及び中和試薬として以下のものを用いた。亜硝酸塩(液状試薬) 2.0M亜硝酸ナトリウム
固形状酸性試薬(イムノクロマト試験片に含浸) 500mM クエン酸、0.0~2.5% TritonX-100
中和試薬(イムノクロマト試験片に含浸) 3.0Mトリス塩酸塩(Trizma BASE)
抗Streptococcus pyogenes抗体を希釈した液及び抗ウサギIgG抗体を準備し、PETフィルムで裏打ちされたニトロセルロースメンブレンのサンプルパッド側に抗Streptococcus pyogenes抗体、吸収帯側に抗ウサギIgG抗体をそれぞれ線状に塗布した。その後、ニトロセルロースメンブレンを乾燥させ、抗Streptococcus pyogenes抗体固定化メンブレンを得た。このメンブレンを本実施例において、「抗体固定化メンブレン」と呼ぶ。
抗Streptococcus pyogenes抗体希釈液に着色ポリスチレン粒子を加え、攪拌後、カルボジイミドを加え、さらに攪拌する。遠心操作により上清を除き、緩衝液に再浮遊し、抗Streptococcus pyogenes抗体結合着色ポリスチレン粒子浮遊液を得た。この粒子を、本実施例において、「抗体固定化粒子(着色ポリスチレン)」と呼ぶ。
2で作製した抗体固定化着色ポリスチレン粒子浮遊液を不織布に所定量を塗布し、乾燥させた。得られた不織布を、本実施例において、「C.Pad」と呼ぶ。
上記の中和試薬(塩基性試薬)を濾紙に塗布した。
上記の固形状酸性試薬を疎水性を有する素材の不織布(ポリエステル・ポリエチレン混合)に塗布した。塗布後に直ちに乾燥して、固形状酸性試薬含浸領域として固形状酸性試薬含浸パッドを得た。
ストリップのバッキングシートに、まず抗体固定化メンブレン(支持体)を下流から20mmの部分に貼付した。
メンブレンの上流にメンブレンとの間に2mmの重なりをもたせて、抗体結合着色ポリスチレン粒子が塗布された10mm幅のグラスファイバー(C.Pad)を貼付した。
実施例1で作製したイムノクロマト試験片にStreptococcus pyogenesを105cfc/mLに浮遊した2M亜硝酸Na溶液2倍に倍々希釈した検体を75μL滴下して、経過を観察した。
2 標識体領域
3 検出領域
5 固形状酸性試薬領域
6 中和試薬領域
7 吸収帯
8 バッキングシート
9 トップラミネートシート
10 サンプルパッド
Claims (8)
- 亜硝酸塩又は酸性溶液と混合した検体を添加するサンプルパッド、糖鎖抗原に対する抗体を標識した標識抗体を含む標識体領域及び前記糖鎖抗原に対する抗体を固相化した検出領域を含み、検出領域において抗体-糖鎖抗原-標識抗体の複合体を形成させ、糖鎖抗原を測定するイムノクロマト試験片であって、前記標識体領域の上流に中和試薬を含浸させた領域を有し、さらに該中和試薬を含浸させた領域の上流に、亜硝酸塩と混合した検体を用いるときには固形状酸性試薬を含浸させた領域を有し、酸性溶液と混合した検体を用いるときには亜硝酸塩を含浸させた領域を有する、検体中の糖鎖抗原を抽出し測定するためのイムノクロマト試験片であって、
亜硝酸塩又は固形状酸性試薬を含浸させた領域に疎水性の素材である不織布(ポリエステル・ポリエチレン混合)を用い、さらに該素材に0.2~0.5(w/v)%のポリオキシエチレンオクチルフェニルエーテルを含浸させることを特徴とする、イムノクロマト試験片。 - ポリオキシエチレンオクチルフェニルエーテルがTriton X-100である、請求項1記載のイムノクロマト試験片。
- サンプルパッド上に固形状酸性試薬若しくは亜硝酸塩を含浸させた領域が存在する、請求項1又は2に記載のイムノクロマト試験片。
- 固形状酸性試薬が、マロン酸、リンゴ酸、マレイン酸、クエン酸及び酒石酸からなる群から選択される、請求項1~3のいずれか1項に記載のイムノクロマト試験片。
- 中和試薬が、トリスヒドロキシルメチルアミノメタン又は水酸化ナトリウムである、請求項1~4のいずれか1項に記載のイムノクロマト試験片。
- 糖鎖抗原が、原生動物、真菌、細菌、マイコプラズマ、リケッチア、クラミジア又はウイルスの糖鎖抗原である、請求項1~5のいずれか1項に記載のイムノクロマト試験片。
- 請求項1~6のいずれか1項に記載のイムノクロマト試験片と亜硝酸塩溶液若しくは酸性溶液を含むイムノクロマト試験キット。
- 請求項1~6のいずれか1項に記載のイムノクロマト試験片を用いてイムノクロマト法により検体中の糖鎖抗原を測定する方法であって、
イムノクロマト試験片が固形状酸性試薬を含浸させた領域を有するときには検体を亜硝酸溶液と混合し、イムノクロマト試験片が亜硝酸塩を含浸させた領域を有するときには検体を酸性溶液と混合し、前記イムノクロマト試験片のサンプルパッドに添加することを含み、
固形状酸性試薬を含浸させた領域又は亜硝酸塩を含浸させた領域において、亜硝酸塩と固形状酸性試薬の反応により発生した亜硝酸の作用により検体から糖鎖抗原が抽出され、 中和試薬を含浸させた領域において、前記糖鎖抗原を含む酸性溶液が中和され、
検出領域において、抗体-糖鎖抗原-標識抗体の複合体が形成される、イムノクロマト法により、イムノクロマト試験片上での検体の展開のスピードや方向を制御し、酸性試薬と亜硝酸塩と中和試薬による処理を制御して、検体中の糖鎖抗原を測定する方法。
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