JP7212051B2 - 大葉蒟抽出物、及びその調製方法と応用 - Google Patents

大葉蒟抽出物、及びその調製方法と応用 Download PDF

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Description

本発明は、医療分野に関わり、特に、大葉蒟抽出物、及びその調製方法と応用に関する。
大葉蒟（Ｐｉｐｅｒ ｌａｅｔｉｓｐｉｃｕｍ Ｃ．ＤＣ）は、コショウ科コショウ属の植物であって、主に中国の広東省、広西省、雲南省及び海南省に分布している。中国民間では、血行の促進、腫れの解消、痛止め、捻挫などの治療に使用される。
また、うつ病は、類の健康に脅かす主な疾患の１つとして、全世界では、概ね１２％～２５％の人が一生中、それに直面することになるとされる。現在、うつ病は、世界共通の疾患として、約３億５０００万人の患者が罹患していると推定されており、患者の年齢分布も、ますます若い年齢層に傾けつつある。
本出願の発明者は、長年にわたる体系的な研究の結果、動物実験および臨床実験を経て、大葉蒟抽出物には、顕著な抗うつ活性があり、及び一定の抗不安、鎮痛などの生物活性があることがわかった。そして、発明者は、すでに大葉蒟に関連する２つの中国発明特許と国際特許を出願した。
現在、大葉蒟に関する特許は以下の通りである：中国特許ＺＬ０３１１５９１１．７（大葉蒟の有効部位の調製方法及びその医療、保険分野での応用）、中国特許ＺＬ２００４１００８４７９１．７（大葉蒟抽出物の調製方法、抽出物及びその応用）、中国特許ＺＬ２０１０１０５５６０１７．７（大葉蒟有効組分の調製方法）、中国特許ＺＬ２０１０１０１６９６７９．９（抗うつ薬の調製における５’－メトキシ－３’，４’－メチルジオキシシンナメートイソブチルアミドの応用）、中国特許ＺＬ２０１０１０２９６９７４．０（大葉蒟抽出物の調製方法、抽出物及びその応用）、中国特許ＺＬ２０１１１０１２３０７６．Ｘ（アミド化合物、及びその調製方法と応用）。
中国特許０３１１５９１１．７ 中国特許２００４１００８４７９１．７ 中国特許２０１０１０５５６０１７．７ 中国特許２０１０１０１６９６７９．９ 中国特許２０１０１０２９６９７４．０ 中国特許２０１１１０１２３０７６．Ｘ
また、当業者なら、天然薬材の有効部位の抽出物の調製プロセスにおいて、使用する薬材の部位や調製プロセスにおける各パラメータが異なれば、得られた抽出部の物質的ベースも異なることを理解していることに言うまでも無い。
例えば、（一）、中国特許ＺＬ２０１０１０１６９６７９．９では、以下の方法を用いて、５’－メトキシ－３’，４’－メチルジオキシ桂皮酸イソブチルアミドを調製する。
ステップ１：コショウ属植物の大葉蒟又は華南コショウの地上部位を使用して、粗粉砕して、抽出タンクに入れて、１０～１５倍重量の７０％～９５％エタノールを添加して、リフロー抽出を２時間行って、濾過して、１０～１５倍重量の７０％～９５％エタノールを添加して、リフロー抽出を２時間行って、濾過してから、２回分の濾液を合わせ、６５℃で減圧濃縮してＲＤ１．３－１．３５のエキスを得た。
ステップ２：エキスは、３０％～６０％エタノールで溶解され、Ｄ１０１マクロポーラス吸着樹脂のカラムに入れ、３０％～６０％エタノールで溶出され、溶離液は廃棄され、７０％～９５％エタノールで置き換えられて、溶出液を集め、濃縮乾固して抽出物を得る。
ステップ３：抽出物を混練し、シリカゲルを充填したカラムに入れ、体積比５：１と３：１の石油エーテル－酢酸エチルでそれぞれ２回溶出し、薄層法で測定し、３：１系でサンプル量が最大の一点成分を合わせ、溶媒を回収し、液体がないまで濃縮し、黄色粒子を析出させ、黄色粒子を石油エーテルで洗浄して白色粒子にし、エタノール－水系で再結晶し、５’－メトキシ－３’，４’－次亜メトキシ桂皮酸イソブチルアミド白色結晶を得た。
（二）、中国特許ＺＬ２０１１１０１２３０７６．Ｘでは、以下の方法を用いて、１－［（２Ｅ，４Ｅ，７ｅ）－９－（３，４－メチレンジオキシベンゼン）ノナカルボジイミド］テトラヒドロピロールと、１－［（２Ｅ，７ｅ）－ｎ－７－（３，４－メチレンジオキシベンゼン）ノナカルボジイミド］テトラヒドロピロールを調製する。
ステップ１：大葉蒟の上部を煎じ薬に切って、４～１０倍の生薬量体積の７０％～９５％のエタノールを加えてリフロー抽出し、１．５～３．５時間煎じ、濾過し、さらに３～８倍のエタノールで１～３時間煎じ、濾過し、濾液を合わせ、エタノールを減圧回収し、６０℃で相対密度が１．３０～１．３８のエキスまで濃縮した。
ステップ２：エキスをアルコール水溶液で溶解した後、ＡＢ－８マクロポーラス吸着樹脂カラムを通過する。原薬剤とマクロポーラス樹脂の重量比は５：１～１：１とする。最初に、５０％エタノールでカラム床容量の３～８倍の量で洗浄する。 次に、２～８倍量の７０％～９５％エタノールで溶出し、溶出液を濃縮して抽出し、シリカゲルカラムで分離する。シリカゲルカラムの分離に使用する移動相は石油エーテル－酢酸エチル６：１～１：２、混合物を得る。
混合物を高効率調製液相で分離して、１－［（２Ｅ，４Ｅ，７Ｅ）－９－（３，４－メチレンジオキシベンゼン）ノナカルバジエノイル］テトラヒドロピロールと、１－［（２Ｅ，７Ｅ ）－Ｎ－７－（３，４－メチレンジオキシベンゼン）９炭素ジエノイル］テトラヒドロピロールを得る。
また、中国特許ＺＬ０３１１５９１１．７では、以下の方法を用いて、５’－メトキシ－３’，４’－メチレンジオキシケイ皮酸イソブチルアミドと、３’，４’－メチレンジオキシケイ皮酸イソブチルアミドと、Ｎ－イソブチル－９ （３’，４’－メチレンジオキシフェニル）－２Ｅ、８Ｅ－ノナジエンアミドと、１－［（２Ｅ，４Ｅ）－２，４－デカジエノイル］テトラヒドロピロールと、Ｎ－ｉｓｏ ブチルデカ－トランス－２－トランス－４－ジエンアミドと、１－［（２Ｅ）－５－（３，４－メチレンジオキシフェニル）］テトラヒドロピロールと、５’－メトキシ－ ３’，４’－メチレンジオキシケイ皮酸テトラヒドロピロールと、を含む抽出物を調製する。具体的な調製方法は、大葉蒟の乾燥した地下部分を粗い粉末にし、６０％エタノール溶液を加えて含浸させ、１時間ずつ水浴して２回リフローして、ろ過し、ろ液を合わせ、減圧下で元のろ液容量の１４％に濃縮し、３０％エタノールを加えて、透明で不透明な希薄エタノール溶液を得る。続いて、４０％、５５％、８０％エタノール溶液で順次溶出するマクロポーラス吸着樹脂カラムクロマトグラフィーで分離、精製し、８０％エタノール溶離液を収集し、濃縮および乾燥して、有効な部分の抽出物を得る。この抽出物におけるアミドアルカロイドの含有量は、ＨＰＬＣ法により６８％であると測定された。
また、中国特許ＺＬ２００４１００８４７９１．７では、以下の方法を用いて、Ｎ－イソブチルデカ－トランス－２－トランス－４－ジエンアミドと、１－［（２Ｅ，４Ｅ）－２，４－デカジエノイル］ピロリジンと、３’，４’－メチレンジオキシケイ皮酸－イソブチルアミドと、５’－メトキシ－３’，４’－メチレンジオキシケイ皮酸イソブチルアミドと、ピペロンアミドＣ５：１（２Ｅ）と、５’－メトキシ－３’，４’－メチレンジオキシケイ皮酸－テトラヒドロピロールと、４，５－ジヒドロエピペルミニン塩基と、ピペラミドと、を含む抽出物を得る。具体的な調製方法は、大葉蒟の乾燥根と根茎１ｋｇを段状に切り、約９０％エタノールを加えて常温で約４８時間浸漬した後、同濃度のエタノールを２０Ｌまで加えて、浸出水を温水１５Ｌで攪拌混合し、その後、希釈した浸出水にＤ１０１大孔吸着樹脂カラムを通し、流通後、順次４０％、９０％エタノールで溶出し、９０％エタノールで溶出した液体を収集し、７０℃以下で濃縮乾燥して精製した抽出物を得た。
また、中国特許ＺＬ２０１０１０５５６０１７．７では、以下の方法を用いて、［（２Ｅ，４Ｅ）－Ｎ－イソブチル－９－（３，４－メチレンジオキシベンゼン）］ヘプタカルボジイミドと、［２Ｅ，４Ｅ，７Ｅ）－Ｎ－イソブチル－９－（３，４－メチレンジオキシベンゼン）］ノナカルボジイミドと、（２Ｅ，４Ｅ）－Ｎ－イソブチル－９－フェニルノナカルボジイミドと、を含む抽出物を得る。具体的な調製方法は、大葉蒟の地上部分を採取し、粗粉砕し、６倍量の９５％エタノール溶液を加え、２時間リフロー抽出し、濾過し、薬滓を５倍量の９５％エタノールで２時間リフロー抽出し、濾過し、抽出液を合わせ、６０℃で減圧濃縮し、大葉蒟の総抽出物を得る。大葉蒟の総抽出物を５０％エタノールで１倍量の体積（１／２ ９５％で溶解し、不溶物を１／２お湯で溶解し、溶液を合わせたもの）まで溶解し、上Ｄ１０１多孔質樹脂カラムを７０％エタノール溶液で溶出し、流速１ＢＶ／ｈで溶出液４ＢＶを採取し、廃棄する。 引き続き９５％エタノールで溶出し、流速１ＢＶ／ｈ、溶出液４ＢＶを収集し、濃い浸せきに濃縮し、大葉蒟の有効成分を得る。
また、中国特許２０１０１０２９６９７４．０では、大葉蒟の根と藤茎を粗粉にして、生薬の約１０倍の量の７０％エタノールを加え、常温で粗抽出物溶液を浸透させ、その後、粗抽出物溶液を真空下で元の体積の約２５％まで濃縮し、濃縮した粗抽出物溶液を均一に攪拌した後、上の非極性型大型吸着樹脂カラムを分離精製し、順次３０％、８０％エタノールで溶出し、８０％エタノールで溶出した液体を集め、濃縮乾燥して精製した抽出物を得ることを開示している。 しかし、抽出物にどのような成分が含まれているかは開示されていなく、抽出物中の具体的な活性成分の分離や同定も行われておらず、活性成分の含有量は測定されておらず、実際、得たのは、活性成分が不明な抽出物である。
以上のように、従来の製造方法で得られた抽出物の抗うつ効果には、まだまだ改良する余地が存在している。
本発明の目的は、活性成分が明確で薬効が良く、安全性が高い大葉蒟抽出物及びその製造方法と応用を提供することである。
本発明の大葉蒟抽出物は、セサミン、（２Ｅ，６Ｅ）－Ｎ－イソブチル－７－（３，４－メチレンジオキシフェニル）ヘプタジエン酸アミド、（２Ｅ，４Ｅ）－Ｎ－イソブチルドデシル－２，４－ジエン酸アミド、（２Ｅ，４Ｅ）－Ｎ－イソブチル－１５－フェニル－２，４－ジエン酸アミド、（２Ｅ，４Ｅ，１４Ｚ）－Ｎ－イソブチルエイコサン－２，４，１４－トリエン酸アミド、（２Ｅ，４Ｅ）－Ｎ－イソブチル－１３－フェニル－２，４－ジエン酸アミドのうちのいずれ１つ又は１つ以上の組み合わせを含む。
また、本発明の大葉蒟抽出物は、３’，４’－メチレンジオオキシ桂皮酸－イソブチル酸アミド、５’－メトキシ－３’，４’－メチレンジオオキシ桂皮酸－イソブチル酸アミド、Ｎ－イソブチル癸－反－２－反－４－ジエンジオレフィン酸アミドのうちのいずれか１つまたは１つ以上の組み合わせを含むことが好ましい。
また、本発明の大葉蒟抽出物は、セサミン、（２Ｅ，６Ｅ）－Ｎ－イソブチル－７－（３，４－メチレンジオキシフェニル）ヘプタジエン酸アミド、（２Ｅ，４Ｅ）－Ｎ－イソブチルドデシル－２，４－ジエン酸アミド、（２Ｅ，４Ｅ）－Ｎ－イソブチル－１５－フェニル－２，４－ジエン酸アミド、（２Ｅ，４Ｅ，１４Ｚ）－Ｎ－イソブチルエイコサン－２，４，１４－トリエン酸アミド、（２Ｅ，４Ｅ）－Ｎ－イソブチル－１３－フェニル－２，４－ジエン酸アミド、３’，４’－メチレンジオオキシ桂皮酸－イソブチル酸アミド、５’－メトキシ－３’，４’－メチレンジオオキシ桂皮酸－イソブチル酸アミドおよびＮ－イソブチル癸－反－２－反－４－ジエンジオレフィン酸アミドを含むことが好ましい。
また、本発明の大葉蒟抽出物の総質量におけるアミドアルカロイドの含有量は３０％～８５％であることが好ましい。
本発明の別の目的は、前記大葉蒟抽出物の調製方法を提供することである。本発明の出願人は、大葉蒟から有効成分を可能な限り保持しながら、不純物の含有量の少ない抽出物を獲得するために、研究を重ねた後、以下の調製手順を得られた。大葉蒟のアミドアルカロイド化合物のほとんどは低極性化合物であるため、水抽出または低濃度エタノール抽出方式では、アルカロイドの抽出は不完全であり、不純物の含有量が高いである、したがって、本発明の出願人は、総合的に検討し、複数回試験した後、体積濃度は８０％～９５％であるエタノールを使用して抽出するように決定した。抽出方法には、煎煮、加熱還流、浸漬、濾過などの従来的抽出方法が含まれる、ただし、研究により、アミドアルカロイド化合物のほとんどは、熱に対して不安定であり、煎煮または加熱還流の抽出方法では、温度の制御が困難で、抽出効率に影響を及ぼすことが分かった、したがって、浸漬または濾過の抽出方法を使用するのが最適である。研究によると、溶媒を回収するとき、一部のアルカロイドは温度の影響を受けて破壊され、一部のアルカロイド成分が析出されると再溶解できない、したがって、溶媒の回収温度と溶媒回収後の抽出液の体積とアルコール含有量は、本発明の抽出物における前記アルカロイドの成分および含有量に大きな影響を及ぼし、大孔樹脂の吸着効果にも大きな影響を与える。本発明の出願人は、繰り返し研究を通じて、アルコール含有量が３５％～４５％になるまで溶媒を回収し、回収温度が７０％を超えない場合、得られる有効部位のアルカロイドの種類が最も完全であり、総含有量が最高であると発見した。吸着が完了した後、まず低濃度のエタノール溶液で洗脱し、その目的は、大孔樹脂に吸着した不純物を洗う同時に、有効成分を保持することである、したがって、洗脱溶媒として使うエタノール溶液の濃度は、アルカロイドを洗脱しないことを上限とする、本発明の出願人は、繰り返し研究により、順次に３０％～５０％、５０％～７０％のエタノール溶液で洗うことが最適であると発見した、それにより、本発明に記載のアルカロイド成分は完全に保持され、そして８０％～９５％エタノール溶液で脱着し、アルカロイド成分を洗脱し、洗脱液を収集し、減圧、濃縮を経て、大葉蒟有効部位の抽出物を獲得する、その中で、アミドアルカロイド成分に加えて、リグナン成分であるセサミンも含んでおり、同様に、７０℃を超えない洗脱液の濃縮温度は最適である。
したがって、本発明の前記大葉蒟抽出物の調製方法は以下の手順を含む。
手順（１）、大葉蒟に前処理をし、大葉蒟薬材の重量の１０～３０倍に相当する体積濃度は８０％～９５％であるエタノールを加え、浸漬または濾過により粗抽出物溶液を獲得する。
手順（２）、手順（１）で得られた粗抽出物溶液をアルコール含有量３５％～４５％まで濃縮し、７０℃を超えないように濃縮温度を制御する。
手順（３）、手順（２）で濃縮した粗抽出物溶液を大孔吸着樹脂柱に注入し、順次に大葉蒟薬材重量の２～６倍に相当する体積濃度３０％～５０％、５０％～７０％のアルコール溶液で洗脱し、洗脱液を捨てる。
手順（４）、次に、大葉蒟薬材重量の４～８倍に相当する体積濃度８０％～９５％のエタノール溶液で洗脱し、洗脱液を収集し、褐色の粘稠な膏状に濃縮し、真空乾燥し、７０℃を超えないように温度を制御し、前記大葉蒟抽出物を獲得する。
好ましくは、前記大葉蒟抽出物の調製方法は以下の手順を含む。
手順（１）、大葉蒟薬材を段状に切りまたは粉末にして、大葉蒟薬材重量の１９～２１倍に相当する体積濃度９０％～９５％のエタノールを加え、浸漬または濾過により粗抽出物溶液を獲得する。
手順（２）、手順（１）で得られた粗抽出物溶液をアルコール含有量３５％～４５％まで濃縮し、７０℃を超えないように濃縮温度を制御する。
手順（３）、手順（２）で濃縮した粗抽出物溶液をＤ１０１大孔吸着樹脂柱に注入し、順次に大葉蒟薬材重量の３～５倍に相当する体積濃度４０％～５０％のエタノール溶液、大葉蒟薬材重量の２～３倍に相当する体積濃度６０％～７０％のアルコール溶液で洗脱し、洗脱液を捨てる。
手順（４）、次に大葉蒟薬材重量の５～７倍に相当する体積濃度９０％～９５％のエタノール溶液で洗脱し、洗脱液を収集し、褐色の粘稠な膏状に濃縮し、真空乾燥し、７０℃を超えないように温度を制御し、前記大葉蒟抽出物を獲得する。
好ましくは、前記大葉蒟抽出物の調製方法は以下の手順を含む。
手順（１）、大葉蒟薬材を段状に切りまたは粉末にして、大葉蒟薬材重量の２０倍に相当する体積濃度９５％のエタノールを加え、浸漬または濾過により粗抽出物溶液を獲得する。
手順（２）、手順（１）で得られた粗抽出物溶液をアルコール含有量４０％まで濃縮し、７０℃を超えないように濃縮温度を制御する。
手順（３）、手順（２）で濃縮した粗抽出物溶液をＤ１０１大孔吸着樹脂柱に注入し、順次に大葉蒟薬材重量の４倍に相当する体積濃度４５％のエタノール溶液、大葉蒟薬材重量の２倍に相当する体積濃度６５％のアルコール溶液で洗脱し、洗脱液を捨てる。
手順（４）、次に大葉蒟薬材重量の６倍に相当する体積濃度９５％のエタノール溶液で洗脱し、洗脱液を収集し、褐色の粘稠な膏状に濃縮し、真空乾燥し、７０℃を超えないように温度を制御し、前記大葉蒟抽出物を獲得する。
さらに、手順（１）に記載の大葉蒟薬材は、大葉蒟の地上部または地上部と地下部から取る。
また、本発明の第３の目的は、精神疾患の予防、緩和および治療のための薬物または精神疾患の緩和のための健康食品の調製における活性成分としての大葉蒟抽出物の応用を提供することである。
さらに、前記精神疾患は鬱病、焦慮症などである。
本発明の第４の目的は、前記大葉蒟抽出物を含む精神疾患の予防、緩和および治療のための医薬品を提供することである。
本発明の第５の目的は、前記大葉蒟抽出物を含む精神疾患の緩和のための健康食品を提供することである。
さらに、前記医薬品または健康食品は、薬学的に許容される剤形に調製することができる。
上記の技術的解決策の実施により、本発明は、従来技術と比較して以下の利点を有する。
本発明は、大葉蒟抽出物を獲得するために調製方法を改善し、該抽出物の化学成分を分離および同定し、セサミン、（２Ｅ，６Ｅ）－Ｎ－イソブチル－７－（３，４－メチレンジオキシフェニル）ヘプタジエン酸アミド、Ｎ－イソブチル癸－反－２－反－４－ジエンジオレフィン酸アミド、（２Ｅ，４Ｅ）－Ｎ－イソブチル－１５－フェニル－２，４－ジエン酸アミド、３’，４’－メチレンジオオキシ桂皮酸－イソブチル酸アミドを獲得し、５’－メトキシ －３’，４’－メチレンジオオキシ桂皮酸－イソブチル酸アミドを獲得し、さらに大葉蒟から初めて化合物（２Ｅ，４Ｅ）－Ｎ－イソブチルドデシル－２，４－ジエン酸アミドと化合物（２Ｅ，４Ｅ，１４Ｚ）－Ｎ－イソブチルエイコサン－２，４，１４－トリエン酸アミドを獲得し、初めて新しい化合物（２Ｅ，４Ｅ）－Ｎ－イソブチル－１３－フェニル－２，４－ジエン酸アミドを獲得する。本発明の調製方法により得られた大葉蒟抽出物の抗うつ効果が明らかで安全性が高い。
（実施形態の説明）
以下、具体的な実施形態を挙げて本発明をさらに詳しく説明するが、本発明は以下の実施形態に限定されるものではない。実施形態で採用される実施条件は、特定の用途の異なる要件に従ってさらに調整することができ、明示されていない実施条件は、当業界の一般的な条件である。創造的な作業なしに当業者が得られた他のすべての実施形態は、本発明の保護範囲にある。
実施形態１
大葉蒟の根および根茎を取り、大きい粉にして、体積濃度９５％のエタノールを適量に加えて常温で２４時間浸漬してから、２０倍まで体積濃度９５％のエタノールを加え、濾過して抽出し、エタノール含有量が４０％になるまで濾過液を減圧して濃縮し、濃縮温度は６０℃で、濃縮後に大葉蒟粗抽出物溶液を獲得する。濃縮された粗抽出物溶液は、処理されたＤ１０１大孔吸着樹脂に注入し、順次に４倍の体積濃度４０％エタノール溶液、６０％エタノール溶液で洗脱し、洗脱液を捨てる。そして、６倍の体積濃度９５％エタノール溶液で洗脱し、洗脱液を収集し、粘稠な状態に濃縮し、真空乾燥し、濃縮と乾燥温度は６０℃で、大葉蒟抽出物を獲得する。
得られた抽出物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー、再結晶、中圧迅速調製および高効率液体クロマトグラフィーにより、９つのモノマー化合物を獲得し、化合物にＣ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ９の番号を付け、構造を同定した後、セサミンを除き、すべてアミドアルカロイドである。すなわち、本実施形態の抽出物は、化合物Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、およびＣ９を含む組成物である。
一、大葉蒟化学組成の構造の同定：
構造の同定により、化合物Ｃ１－Ｃ９は５’－メトキシ－３’，４’－メチレンジオオキシ桂皮酸－イソブチル酸アミド（Ｃ１）、（２Ｅ，６Ｅ）－Ｎ－イソブチル－７－（３，４－メチレンジオキシフェニル）ヘプタジエン酸アミド（フトアミド）（Ｃ２）、セサミン（Ｃ３）、Ｎ－イソブチル癸－反－２－反－４－ジエンジオレフィン酸アミド（ペリトリン）（Ｃ４）、（２Ｅ，４Ｅ）－Ｎ－イソブチルドデシル－２，４－ジエン酸アミド（Ｃ５）、（２Ｅ，４Ｅ）－Ｎ－イソブチル－１３－フェニル－２，４－ジエン酸アミド（Ｃ６）、（２Ｅ，４Ｅ）－Ｎ－イソブチル－１５－フェニル－２，４－ジエン酸アミド（Ｃ７）、（２Ｅ，４Ｅ，１４Ｚ）－Ｎ－イソブチルエイコサン－２，４，１４－トリエン酸アミド（Ｃ８）、３’，４’－メチレンジオオキシ桂皮酸－イソブチル酸アミド（Ｃ９）である。
１、化合物Ｃ４の構造の同定
白い粉末で、分子式はＣ１４Ｈ２５ＮＯ，ＥＳＩ－ＭＳ ｍ／ｚ：２２４［Ｍ＋１］＋，４４７［２Ｍ＋１］＋であり、分子量は２２３であることを示す。
ＵＶλＭｅＯＨ ｍａｘ ｎｍ：２６０
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，δｐｐｍ）：７．１８（ ｄｄ，Ｊ＝１５．０，１０．０Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ－３），６．１３（ｄｄ，Ｊ＝１５．４，９．８Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ－４），６．０６（ｍ，１Ｈ，Ｈ－５），５．７６（ｄ，Ｊ＝１５．０Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ－２），５．５８（ｓ，１Ｈ，－ＮＨ－），３．１５（ｄｄ，Ｊ＝１２．４，５．８Ｈｚ，２Ｈ，Ｈ－１’），１．７９（ｍ，１Ｈ，Ｈ－２’），０．９２（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，６Ｈ，Ｈ－３’，Ｈ－４’），２．１４（ｄｄ，Ｊ＝１３．８，７．０Ｈｚ，２Ｈ，Ｈ－６），１．４１（ｍ，２Ｈ，Ｈ－７ ），１．２８（ｍ，４Ｈ，Ｈ－８，Ｈ－９），０．８９（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，３Ｈ，Ｈ－１０）。
１３ＣＮＭＲ（１０１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，δｐｐｍ）：１６６．４０（Ｃ－１），１４３．１２（Ｃ－３），１４１．２４（Ｃ－５），１２８．２２（Ｃ－４），１２１．８０（Ｃ－２），４６．９３（Ｃ－１’），２８．４８（Ｃ－２’），２０．１１（Ｃ－３’，Ｃ－４’），３２．８９（Ｃ－６），３１．３５（Ｃ－８），２８．６３（Ｃ－７），２２．４５（Ｃ－９），１３．９７（Ｃ－１０）。
１ＨＮＭＲ （ ４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３ ） データーでは、低磁場領域δ７．１８ （ ｄｄ， Ｊ ＝ １５．０， １０．０ Ｈｚ， １Ｈ， Ｈ－３ ） ３個のエチレン結合プロトン信号であり、カルボニル基と共役し、低磁場領域にあり、Ｊ値は１５．０Ｈｚであるため、トランス二重結合であることを示す。δ６．１３ （ ｄｄ，
Ｊ ＝ １５．４， ９．８Ｈｚ， １Ｈ， Ｈ－４ ） と６．０６ （ ｍ， １Ｈ， Ｈ－５ ）はそれぞれ４個と５個のエチレン結合プロトン信号であり、Ｊ値は１５．４Ｈｚであり、トランス二重結合であることを示す。δ５．７６ （ ｄ， Ｊ ＝ １５．０ Ｈｚ， １Ｈ， Ｈ－２ ） は２個のエチレン結合プロトン信号である、上記のデーターから、これがトランス共役エチレン結合のペアであると推測される。δ５．５８ （ ｓ， １Ｈ， －ＮＨ－ ） はアミドのアミン信号であり、高磁場領域にあり、δ３．１５ （ ｄｄ， Ｊ ＝ １２．４， ５．８ Ｈｚ， ２Ｈ， Ｈ－１’
）， １．７９ （ ｍ， １Ｈ， Ｈ－２’ ） と０．９２ （ ｄ， Ｊ ＝ ６．７ Ｈｚ， ６Ｈ， Ｈ－３’， Ｈ－４’ ） はイソブチルアミン信号である。δ２．１４ （ ｄｄ， Ｊ ＝ １３．８， ７．０ Ｈｚ， ２Ｈ，Ｈ－６ ） は、共役エチレン結合に接続されたメチレンプロトン信号である。δ１．４１ （ ｍ， ２Ｈ， Ｈ－７ ） と１．２８ （ ｍ， ４Ｈ， Ｈ－８， Ｈ－９ ） は３個のメチレンプロトン信号であり、δ０．８９ （ ｔ， Ｊ ＝ ６．９Ｈｚ， ３Ｈ， Ｈ－１０ ） はメチルプロトン信号であり、－ＣＨ２ＣＨ３構造を持っていると推測される。
１３ＣＮＭＲ （ １０１ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３ ） データーでは、低磁場領域δ１６６．４０ （ Ｃ－１ ） はカルボニル信号である。δ１４３．１２ （ Ｃ－３ ）、１４１．２４ （ Ｃ－５ ）、１２８．２２ （ Ｃ－４ ）、１２１．８０ （
Ｃ－２ ） は共役二重結合信号である。高磁場δ４６．９３ （ Ｃ－１’ ）はアミドの窒素に接続された炭素信号であり、低磁場領域にあり、２８．４８ （ Ｃ－２’
），２０．１１ （ Ｃ－３’， Ｃ－４’ ） とイソブチルアミンの炭素信号を構成する。δ３２．８９ （ Ｃ－６ ） は共役二重結合に接続された炭素信号である。δ３１．３５ （ Ｃ－８ ）、２８．６３ （ Ｃ－７ ）、 ２２．４５ （ Ｃ－９ ）は３個のメチレン炭素信号であり、１３．９７ （ Ｃ－１０ ） は末端基のメチル信号である。
上記の分析に基づいて、化合物Ｃ４はＮ－イソブチル癸－反－２－反－４－ジエンジオレフィン酸アミドであると判断され、その構造式は次のとおりである：
Figure 0007212051000001
２、化合物Ｃ５の構造の同定
淡黄色の粉末、分子式：Ｃ１６Ｈ２９ＮＯ，ＥＳＩ－ＭＳ ｍ／ｚ：２５２［Ｍ＋１］＋，５０３［２Ｍ＋１］＋、分子量は２５１であることを示す。
ＵＶλＭｅＯＨ ｍａｘ ｎｍ：２６１
１ＨＮＭＲ （ ４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３， δｐｐｍ ）：７．１８ （ ｄｄ，
Ｊ ＝ １４．９， ９．９Ｈｚ， １Ｈ， Ｈ－３ ）， ６．１３ （ ｄｄ， Ｊ ＝ １３．９， ８．６Ｈｚ， １Ｈ ），６．０５ （ ｄｄ， Ｊ ＝ １３．９， ７．６Ｈｚ， １Ｈ， Ｈ－５ ），５．７４ （ ｄ， Ｊ ＝ １５．０Ｈｚ， １Ｈ， Ｈ－２ ）， ５．４６ （ ｓ， １Ｈ， －ＮＨ－ ），３．１６ （
ｔ， Ｊ ＝ ６．５Ｈｚ， ２Ｈ， Ｈ－１’ ）， １．８０ （ ｍ， １Ｈ，
Ｈ－２’ ）， ０．９２ （ ｄ， Ｊ ＝ ６．７Ｈｚ， ６Ｈ， Ｈ－３’， Ｈ－４’ ）， ２．１４ （ ｄｄ， Ｊ ＝ １３．７， ６．９Ｈｚ， ２Ｈ， Ｈ－６ ）， １．４２ （ ｄｄ， ２Ｈ， Ｈ－７ ）， １．２８ （ ｄ， Ｊ
＝ ２．９Ｈｚ， ８Ｈ， Ｈ－８， Ｈ－９， Ｈ－１０， Ｈ－１１ ）， ０．８８ （ ｔ， Ｊ ＝ ６．８Ｈｚ， ３Ｈ， Ｈ－１２ ）。
１ＨＮＭＲ （ ４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３ ） データーでは、低磁場領域δ７．１８ （ ｄｄ， Ｊ ＝ １４．９， ９．９ Ｈｚ， １Ｈ， Ｈ－３ ） は３個のエチレン結合プロトン信号であり、カルボニル基と共役し、低磁場領域にあり、Ｊ値は１４．９Ｈｚであるため、トランス二重結合であることを示す。δ６．１３ （ ｄｄ，
Ｊ ＝ １３．９， ８．６ Ｈｚ， １Ｈ ） と６．０５ （ ｄｄ， Ｊ ＝ １３．９， ７．６ Ｈｚ， １Ｈ， Ｈ－５ ） はそれぞれ４個と５個のエチレン結合プロトン信号である。δ５．７４ （ ｄ， Ｊ ＝ １５．０ Ｈｚ， １Ｈ， Ｈ－２ ）は２個のエチレン結合プロトン信号である。５．４６ （ ｓ， １Ｈ， －ＮＨ－ ） アミドのアミン信号であり、高磁場領域にあり、δ３．１６ （ ｔ， Ｊ ＝ ６．５Ｈｚ， ２Ｈ， Ｈ－１’ ）， １．８０ （ ｍ， １Ｈ， Ｈ－２’ ） 和０．９２ （ ｄ， Ｊ ＝ ６．７Ｈｚ， ６Ｈ， Ｈ－３’， Ｈ－４’ ）
はイソブチルアミン信号である。δ２．１４ （ ｄｄ， Ｊ ＝ １３．７， ６．９ Ｈｚ， ２Ｈ， Ｈ－６ ） は、共役エチレン結合に接続されたメチレンプロトン信号である。δ１．４２ （ ｄｄ， ２Ｈ， Ｈ－７ ）， １．２８ （ ｄ， Ｊ
＝ ２．９ Ｈｚ， ８Ｈ， Ｈ－８， Ｈ－９， Ｈ－１０， Ｈ－１１ ） はメチレンプロトン信号である。０．８８ （ ｔ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， ３Ｈ， Ｈ－１２ ） はメチルプロトン信号であり、－ＣＨ２ＣＨ３構造を持っていると判断される。
化合物Ｃ５のスペクトル特性は、化合物Ｃ４とよく似ており、化合物Ｃ５のスペクトル特性は、化合物Ｃ４とよく似ており、２個の分子量の差は２８であるため、同族体であると推測される、化合物Ｃ５はＣ４よりも２個のメチレン基を多く持っている。
上記の分析に基づいて、化合物Ｃ５は（２Ｅ，４Ｅ）－Ｎ－イソブチルドデシル－２，４－ジエン酸アミドであると判断され、大葉蒟から初めて獲得したものであり、その構造式は次のとおりである：
Figure 0007212051000002
３、化合物Ｃ７の構造の同定
白い粉末であり、分子式：Ｃ２５Ｈ３９ＮＯ，ＥＩ－ＭＳ ｍ／ｚ：３７０［Ｍ＋１］＋，７３９［２Ｍ＋１］＋、分子量は３６９であることを示す。
ＵＶλＭｅＯＨ ｍａｘ ｎｍ：２５５。
１ＨＮＭＲ （ ４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３， δｐｐｍ ）：７．２３ （ ｍ， ６Ｈ， Ａｒ－Ｈ， Ｈ－３ ）， ６．０８ （ ｑｄ， Ｊ ＝ １５．２， ８．２Ｈｚ， ２Ｈ， Ｈ－４， Ｈ－５ ），５．７５ （ ｄ， Ｊ ＝ １５．０Ｈｚ， １Ｈ， Ｈ－２ ）， ５．５２ （ ｓ， １Ｈ， －ＮＨ－ ）， ２．５９ （ ｍ， ２Ｈ， Ｈ－１５ ）， １．６０ （ ｄｄ， Ｊ ＝ １４．６， ７．１Ｈｚ， ２Ｈ， Ｈ－１４ ），２．１３ （ ｄｄ， Ｊ ＝ １３．７， ６．９Ｈｚ， ２Ｈ， Ｈ－６ ）， １．３９ （ ｄｄ， Ｊ ＝ １３．６， ６．９Ｈｚ， ２Ｈ， Ｈ－７ ）， １．２８ （ ｄ， Ｊ ＝ １５．７Ｈｚ， １２Ｈ，
Ｈ－８～Ｈ－１３ ）， ３．１６ （ ｔ， Ｊ ＝ ６．４Ｈｚ， ２Ｈ， Ｈ－１” ）， １．８０ （ ｄｔ， Ｊ ＝ １３．４， ６．７Ｈｚ， １Ｈ， Ｈ－２’’ ）， ０．９２ （ ｄ， Ｊ ＝ ６．７Ｈｚ， ６Ｈ， Ｈ－３’’， Ｈ－４’’ ）。
１３ＣＮＭＲ （ １０１ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３， δｐｐｍ ）：１６６．３８ （ Ｃ－１ ）， １４３．０４ （ Ｃ－１’ ）， １２８．２３ （ Ｃ－３’， Ｃ－５’ ），１２８．２１ （ Ｃ－２’， Ｃ－６’ ）， １２５．５４ （ Ｃ－４’ ）， １４２．９４ （ Ｃ－５ ）， １４１．２６ （ Ｃ－３ ）， １２８．３９ （ Ｃ－４ ）， １２１．７８ （ Ｃ－２ ）， ４６．９３ （ Ｃ－１’’ ）， ２８．６４ （ Ｃ－２’’ ）， ２０．１２ （ Ｃ－３’’， Ｃ－４’’）， ３５．９８ （ Ｃ－１５ ）， ３２．９４ （ Ｃ－６ ）， ３１．４９ （ Ｃ－１４ ）， ２９．５３ （ Ｃ－７ ）， ２９．４８～２８．６４
（ Ｃ－８～Ｃ－１３ ）。
１ＨＮＭＲ （ ４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３ ） データーでは、δ７．２３ （ ｍ， ６Ｈ， Ａｒ－Ｈ， Ｈ－３ ） は、一置換ベンゼン環信号と１個のオレフィン信号である。δ６．０８ （ ｑｄ， Ｊ ＝ １５．２， ８．２Ｈｚ， ２Ｈ， Ｈ－４， Ｈ－５ ） は４個と５個のエチレン結合プロトン信号であり、Ｊ値は１５．２Ｈｚであり、トランス二重結合であることを示す。δ５．７５ （ ｄ， Ｊ ＝ １５．０Ｈｚ， １Ｈ， Ｈ－２ ） は２個のトランスエチレン結合プロトン信号である。δ５．５２ （ ｓ， １Ｈ， －ＮＨ－ ） はアミドのアミン信号である。δ２．５９
（ ｍ， ２Ｈ， Ｈ－１５ ） は１５個のメチレン信号であり、ベンゼン環に接続されているため、より低い磁場にある。δ１．６０ （ ｄｄ， Ｊ ＝ １４．６， ７．１Ｈｚ， ２Ｈ， Ｈ－１４ ） は１４個のメチレン信号である。δ２．１３ （
ｄｄ， Ｊ ＝ １３．７， ６．９Ｈｚ， ２Ｈ， Ｈ－６ ） は共役エチレン結合に接続されたメチレンプロトン信号であり、低磁場領域にある。δ１．３９ （ ｄｄ， Ｊ ＝ １３．６， ６．９Ｈｚ， ２Ｈ， Ｈ－７ ） は７個のメチレン信号である。δ１．２８ （ ｄ， Ｊ ＝ １５．７Ｈｚ， １２Ｈ， Ｈ－８～Ｈ－１３ ） は８から１３個のメチレン信号である。δ３．１６ （ ｔ， Ｊ ＝ ６．４Ｈｚ， ２Ｈ， Ｈ－１’’ ）， １．８０ （ ｄｔ， Ｊ ＝ １３．４， ６．７Ｈｚ， １Ｈ， Ｈ－２’’ ） と０．９２ （ ｄ， Ｊ ＝ ６．７Ｈｚ， ６Ｈ，
Ｈ－３’’， Ｈ－４’’ ） はイソブチルアミン信号である。
１３ＣＮＭＲ （ １０１ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３ ）データでは、δ１６６．３８ （ Ｃ－１ ） カルボニル信号である。δ１４３．０４ （ Ｃ－１’ ）， １２８．２３ （ Ｃ－３’， Ｃ－５’ ）， １２８．２１ （ Ｃ－２’， Ｃ－６’ ），
１２５．５４ （ Ｃ－４’ ）は一置換ベンゼン環信号である。δ１４２．９４ （
Ｃ－５ ）， １４１．２６ （ Ｃ－３ ）， １２８．３９ （ Ｃ－４ ）， １２１．７８ （ Ｃ－２ ） は共役二重結合信号である。δ４６．９３ （ Ｃ－１’’ ）， ２８．６４ （ Ｃ－２’’ ）， ２０．１２ （ Ｃ－３’’， Ｃ－４’’ ）はイソブチルアミン信号である。δ３５．９８ （ Ｃ－１５ ） と３２．９４ （ Ｃ－６ ）はそれぞれベンゼン環とエチレン結合に接続されたメチレン信号である。δ３１．４９ （ Ｃ－１４ ） と２９．５３ （ Ｃ－７ ） はそれぞれ１４個と７個のメチレン信号である。δ２９．４８～２８．６４ （ Ｃ－８～Ｃ－１３ ） は６つのメチレン信号である。
上記の分析に基づいて、この化合物は、（２Ｅ，４Ｅ）－Ｎ－イソブチル－１５－フェニル－２，４－ジエン酸アミドであると判断され、その構造式は次のとおりである。
Figure 0007212051000003
４、化合物Ｃ６の構造の同定
白い針状の結晶であり、分子式：Ｃ２３Ｈ３５ＮＯ，ＥＳＩ－ＭＳ ｍ／ｚ：３４２［Ｍ＋１］＋，６８３［２Ｍ＋１］＋，分子量は３４１であることを示す。
ＵＶλＭｅＯＨ ｍａｘ ｎｍ：２５７
ＩＲ：３３０５、２９２３、２８５１、１６５７、１６２９、１５４９、１４６５、１３６９、１２５５、１１６０、９９８、７４６、６９６ｃｍ－１。
１ＨＮＭＲ （ ４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３， δｐｐｍ ）：７．２１ （ ｍ， ６Ｈ， Ａｒ－Ｈ， Ｈ－３ ）， ６．０８ （ ｍ， ２Ｈ， Ｈ－４， Ｈ－５ ）， ５．７４ （ ｄ， Ｊ ＝ １５．０Ｈｚ， １Ｈ， Ｈ－２ ）， ５．４５
（ ｓ， １Ｈ， －ＮＨ－ ）， ２．５９ （ ｍ， ２Ｈ， Ｈ－１５ ）， １．６１ （ ｍ， ２Ｈ， Ｈ－１４ ）， ２．１３ （ ｄｄ， Ｊ ＝ １３．７， ６．９Ｈｚ， ２Ｈ， Ｈ－６ ）， １．４０ （ ｍ， ２Ｈ， Ｈ－７ ）， １．２９ （ ｄ， Ｊ ＝ ７．０Ｈｚ， ８Ｈ， Ｈ－８～Ｈ－１１ ）， ３．１６ （ ｔ， Ｊ ＝ ６．４Ｈｚ， ２Ｈ， Ｈ－１’’ ）， １．７９ （ ｄｔ， Ｊ ＝ ２０．２， ６．８Ｈｚ， １Ｈ， Ｈ－２’’ ）， ０．９２ （
ｄ， Ｊ ＝ ６．７Ｈｚ， ６Ｈ， Ｈ－３’’， Ｈ－４’’ ）。
赤外線スペクトルでは、３３０５ｃｍ－１、１６５７ｃｍ－１、１５４９ｃｍ－１、１２５５ｃｍ－１で強い吸収が発生し、分子に二次アミドが含まれていることを示す、その中で、３３０５ｃｍ－１はＮ－Ｈ伸縮振動ピーク、１６５７ｃｍ－１はＣ＝０伸縮振動ピーク、１５４９ｃｍ－１はＮ－Ｈ面内曲げ振動、１２５５ｃｍ－１はＣ－Ｎ伸縮振動である。２９２３ｃｍ－１、２８５１ｃｍ－１での強い吸収ピークは、－ＣＨ２の非対称伸縮振動と対称伸縮振動によって引き起こされる。１６２９ｃｍ－１はＣ＝Ｃ伸縮振動ピークであり、分子内に二重結合があることを示す。１４６５ｃｍ－１、１３６９ｃｍ－１での吸収ピークは－ＣＨ３の非対称変形振動と対称曲げ振動によって引き起こされる。１１６０ｃｍ－１はＣ―Ｃスケルトン振動であり、分子に－Ｃ（ＣＨ３）２が含まれていることを示す。９９８ｃｍ－１は＝Ｃ－ＨのＣ―Ｈ面外曲げ振動であり、このピークは分子にトランス二重結合が含まれていることを示す。７４６ｃｍ－１、６９６ｃｍ－１は一置換ベンゼン環のＣ―Ｈ面の外曲げ振動である。
１ＨＮＭＲ （ ４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３ ） データーでは、δ７．２１ （ ｍ， ６Ｈ， Ａｒ－Ｈ， Ｈ－３ ） は一置換ベンゼン環信号と１つのオレフィン信号である。δ６．０８ （ ｍ， ２Ｈ， Ｈ－４， Ｈ－５ ） は４個と５個のエチレン結合プロトン信号である。δ５．７４ （ ｄ， Ｊ ＝ １５．０Ｈｚ， １Ｈ， Ｈ－２ ） ２個のトランスエチレン結合プロトン信号である。δ５．４５ （ ｓ， １Ｈ， －ＮＨ－ ） はアミドのアミン信号である。δ２．５９ （ ｍ， ２Ｈ， Ｈ－１５ ） は１５個のメチレン信号であり、ベンゼン環に接続されているので、より低い磁場領域にある。δ１．６１ （ ｍ， ２Ｈ， Ｈ－１４ ） は１４個のメチレン信号であるδ２．１３ （ ｄｄ， Ｊ ＝ １３．７， ６．９Ｈｚ， ２Ｈ， Ｈ－６ ） は共役エチレン結合に接続されたメチレンプロトン信号であるであり、より低い磁場領域にある。δ１．４０ （ ｍ， ２Ｈ， Ｈ－７ ） は７個のメチレン信号である。δ１．２９ （ ｄ， Ｊ ＝ ７．０Ｈｚ， ８Ｈ， Ｈ－８～Ｈ－１１ ）
は８から１１個のメチレン信号である。δ３．１６ （ ｔ， Ｊ ＝ ６．４ Ｈｚ， ２Ｈ， Ｈ－１’’ ）， １．７９ （ ｄｔ， Ｊ ＝ ２０．２， ６．８ Ｈｚ， １Ｈ， Ｈ－２’’ ） と０．９２ （ ｄ， Ｊ ＝ ６．７Ｈｚ， ６Ｈ， Ｈ－３’’， Ｈ－４’’ ） はイソブチルアミン信号である。
化合物Ｃ６のスペクトル特性は、化合物Ｃ７とよく似ており（表１を参照）、２つの分子量の差は２８であるため、２つは同族体であると推定される。化合物Ｃ６は、Ｃ７よりも２つのメチレンを少なく持っている。上記の分析に基づき、化合物Ｃ６は（２Ｅ，４Ｅ）－Ｎ－イソブチル－１３－フェニル－２，４－ジエン酸アミドであると判定される。文献を検索した後、現時点ではＣＡがこの構造を報道しておらず、この化合物は新しいか合部であると判断され、その構造式は次のとおりである。
Figure 0007212051000004
表１は化合物Ｃ７と化合物Ｃ６ １ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）のスペクトルデーターである。
Figure 0007212051000005
５、化合物Ｃ８の構造の同定
白い粉末であり、分子式：Ｃ２４Ｈ４３ＮＯ，ＥＳＩ－ＭＳ ｍ／ｚ：３６２［Ｍ＋１］＋，７２３［２Ｍ＋１］＋、分子量は３６１であることを示す。
ＵＶλＭｅＯＨ ｍａｘ ｎｍ：２６０。
１ＨＮＭＲ （ ４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３， δｐｐｍ ）：７．２０ （ ｍ， １Ｈ， Ｈ－３ ），６．１２ （ ｍ， １Ｈ， Ｈ－４ ）， ６．０５ （ ｄｄ， Ｊ ＝ １４．９， ６．４Ｈｚ， １Ｈ， Ｈ－５ ），５．７５ （ ｄ， Ｊ
＝ １５．０Ｈｚ， １Ｈ， Ｈ－２ ），５．５１ （ ｓ， １Ｈ， －ＮＨ－ ），５．３５ （ ｔ， Ｊ＝６．０Ｈｚ， ２Ｈ ），３．１６ （ ｔ， Ｊ ＝ ６．１Ｈｚ， ２Ｈ， Ｈ－１’ ）， １．８０ （ ｄｔ， Ｊ ＝ １３．１， ６．５Ｈｚ， １Ｈ， Ｈ－２’ ）， ０．９３ （ ｍ， ６Ｈ， Ｈ－３’， Ｈ－４’ ），２．１４ （ ｄ， Ｊ ＝ ６．６ Ｈｚ， ２Ｈ， Ｈ－６），２．０２ （ ｓ， ４Ｈ ）， １．４１ （ ｓ， ２Ｈ， Ｈ－７ ）， １．２７ （
ｓ， １６Ｈ ）， ０．９３ （ ｍ， ３Ｈ， Ｈ－２０ ）。
１３ＣＮＭＲ （ １０１ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３， δｐｐｍ）：１６６．３６ （ Ｃ－１ ）， １４３．１４ （ Ｃ－３ ）， １４１．２６ （ Ｃ－５ ）， １２８．１２ （ Ｃ－４ ）， １２１．８８ （ Ｃ－２ ）， １２９．７４，４６．９３ （ Ｃ－１’ ）， ２８．８１ （ Ｃ－２’ ）， ２０．１１ （ Ｃ－３’， Ｃ－４’ ）， ３２．９４ （ Ｃ－６ ）， １４．０８ （ Ｃ－２０ ）。
１ＨＮＭＲ （ ４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３ ） データーでは、δ ７．２０ （ ｍ， １Ｈ， Ｈ－３ ） は３個のエチレン結合プロトン信号であり、カルボニル基と共役しているため、より低い磁場領域にある、δ６．１２ （ ｍ， １Ｈ， Ｈ－４ ） と６．０５ （ ｄｄ， Ｊ ＝ １４．９， ６．４ Ｈｚ， １Ｈ， Ｈ－５ ） はそれぞれ４個と５個のエチレン結合プロトン信号であり、Ｊ値は１４．９Ｈｚであり、トランス二重結合であることを示す。δ５．７５ （ ｄ， Ｊ ＝ １５．０ Ｈｚ， １Ｈ，Ｈ－２ ） は２個のエチレン結合プロトン信号であり、Ｊ値は１５．０Ｈｚであり、トランス二重結合であることを示す、上記のデーターにより、これはトランス共役エチレン結合であることが推測される。δ５．５１ （ ｓ， １Ｈ， －ＮＨ－ ）はアミドのアミン信号である。δ５．３５ （ ｔ， Ｊ＝６．０Ｈｚ， ２Ｈ ） はエチレン結合プロトン信号であり、Ｊ値は６．０Ｈｚであり、シス二重結合であることを示す。低磁場領域にはベンゼン環プロトン信号がない。高磁場領域において、δ３．１６ （ ｔ， Ｊ ＝ ６．１ Ｈｚ， ２Ｈ，Ｈ－１’ ），１．８０ （ ｄｔ， Ｊ ＝ １３．１， ６．５ Ｈｚ， １Ｈ， Ｈ－２’ ） と０．９３ （ ｍ， ６Ｈ， Ｈ－３’， Ｈ－４’ ） はイソブチルアミン信号である。δ２．１４ （ ｄ， Ｊ ＝ ６．６ Ｈｚ， ２Ｈ， Ｈ－６ ） は共役エチレン結合に接続されたメチレンプロトン信号である。δ２．０２ （ ｓ， ４Ｈ ）はエチレン結合両端のメチレンプロトン信号である。δ１．４１ （ ｓ， ２Ｈ， Ｈ－７ ） と１．２７ （ ｓ， １６Ｈ ）は９個のメチレンプロトン信号である。δ０．９３ （ ｍ， ３Ｈ， Ｈ－２０ ） はメチルプロトン信号であり、－ＣＨ２ＣＨ３構造を持っていると推定される。
１３ＣＮＭＲ （ １０１ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３ ）データーでは、δ１６６．３６ （
Ｃ－１ ） はカルボニル信号である。δ１４３．１４ （ Ｃ－３ ）， １４１．２６ （ Ｃ－５ ）， １２８．１２ （ Ｃ－４ ）， １２１．８８ （ Ｃ－２
）は共役二重結合信号である。δ１２９．７４は孤立した二重結合信号である。δ４６．９３ （ Ｃ－１’ ） はアミド窒素に接続された炭素信号であり、より低い磁場領域にあり、δ２８．８１ （ Ｃ－２’ ）， ２０．１１ （ Ｃ－３’， Ｃ－４’
） とイソブチルアミンの炭素信号を構成する。δ３２．９４ （ Ｃ－６ ） は共役二重結合に接続された炭素信号である。δ３１．８８～２８．９０とδ２２．３３は９個のメチレン炭素信号である。δ２７．１９と２６．９１は孤立した二重結合両端のメチレン炭素信号である。δ１４．０８ （ Ｃ－２０ ）は末端基のメチル信号である。
上記の分析に基づいて、この化合物は、（２Ｅ，４Ｅ，１４Ｚ）－Ｎ－イソブチルエイコサン－２，４，１４－トリエン酸アミドであると判断され、大葉蒟から初めて発見され、その構造式は次のとおりである。
Figure 0007212051000006
６、化合物Ｃ３の構造の同定
白い針状の結晶であり、分子式： Ｃ２０Ｈ１８Ｏ６，ＥＳＩ－ＭＳ ｍ／ｚ：３３７［Ｍ＋１－１８］＋，７０９［２Ｍ＋１］＋、分子量は３５４であることを示す。
ＵＶλＭｅＯＨ ｍａｘ ｎｍ：２３６， ２８６
１ＨＮＭＲ （ ４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３， δｐｐｍ）：６．８４ （ ｓ， ２Ｈ， Ｈ－２， Ｈ－２’ ）， ６．７９ （ ｍ， ４Ｈ， Ｈ－５， Ｈ－５’，
Ｈ－６， Ｈ－６’ ）， ５．９４ （ ｓ， ４Ｈ， Ｈ－１０， Ｈ－１０’ ），４．７１ （ ｄ， Ｊ ＝ ４．１Ｈｚ， ２Ｈ， Ｈ－７， Ｈ－７’ ）， ４．２３ （ ｄｄ， Ｊ ＝ ９．０， ６．８Ｈｚ， ２Ｈ， Ｈ－９α， Ｈ－９α’ ）， ３．８７ （ ｄｄ， Ｊ ＝ ９．２， ３．４Ｈｚ， ２Ｈ， Ｈ－９β， Ｈ－９β’ ），３．０４ （ ｍ， ２Ｈ， Ｈ－８， Ｈ－８’ ）。
１３ＣＮＭＲ （ １０１ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３， δｐｐｍ ）：１４７．９９ （ Ｃ－４， Ｃ－４’ ）， １４７．１３ （ Ｃ－３， Ｃ－３’ ）， １３５．１１ （ Ｃ－１， Ｃ－１’ ），１１９．３４ （ Ｃ－６， Ｃ－６’ ），１０８．１９ （ Ｃ－５， Ｃ－５’ ）， １０６．５０ （ Ｃ－２， Ｃ－２’ ），
１０１．０７ （ Ｃ－１０， Ｃ－１０’ ）， ８５．８１ （ Ｃ－７， Ｃ－７’ ）， ７１．７３ （ Ｃ－９， Ｃ－９’ ）， ５４．３６ （ Ｃ－８， Ｃ－８’ ）。
１ＨＮＭＲ （ ４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３ ） データーでは、δ６．８４ （ ｓ， ２Ｈ， Ｈ－２， Ｈ－２’ ） と６．７９ （ｍ， ４Ｈ， Ｈ－５， Ｈ－５’， Ｈ－６， Ｈ－６’ ） は三置換ベンゼン環フラグメントのプロトン信号である。δ５．９４ （ ｓ， ４Ｈ， Ｈ－１０， Ｈ－１０’ ） はメチレンジオキシプロトン信号である。δ４．７１ （ ｄ， Ｊ ＝ ４．１Ｈｚ， ２Ｈ， Ｈ－７，
Ｈ－７’ ）， ４．２３ （ ｄｄ， Ｊ ＝ ９．０， ６．８Ｈｚ， ２Ｈ， Ｈ－９α， Ｈ－９α’ ）， ３．８７ （ ｄｄ， Ｊ ＝ ９．２， ３．４Ｈｚ， ２Ｈ， Ｈ－９β， Ｈ－９β’ ）， ３．０４ （ ｍ， ２Ｈ， Ｈ－８，
Ｈ－８’ ） はテトラヒドロフラン・テトラヒドロフランのプロトン信号である。
１３ＣＮＭＲ （ １０１ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３ ） データーでは１０個の炭素信号があり、δ１４７．９９ （ Ｃ－４， Ｃ－４’ ）， １４７．１３ （ Ｃ－３， Ｃ－３’ ）， １３５．１１ （ Ｃ－１， Ｃ－１’ ） ベンゼン環の第四級炭素信号である。δ１１９．３４ （ Ｃ－６， Ｃ－６’ ）， １０８．１９ （ Ｃ－５， Ｃ－５’ ）， １０６．５０ （ Ｃ－２， Ｃ－２’ ） ベンゼン環の第三級炭素信号である。δ１０１．０７ （ Ｃ－１０， Ｃ－１０’ ） メチレンジオキシの炭素信号である。δ８５．８１ （ Ｃ－７， Ｃ－７’ ）， ７１．７３ （ Ｃ－９， Ｃ－９’ ）， ５４．３６ （ Ｃ－８， Ｃ－８’ ） はテトラヒドロフラン・テトラヒドロフランの炭素信号である。
上記の分析に基づいて、化合物Ｃ４はセサミンであり、その構造式は次のとおりである。
Figure 0007212051000007
７、化合物１の構造の同定
白い針状の結晶であり、分子式：Ｃ１５Ｈ１９ＮＯ４，ＥＩ－ＭＳ ｍ／ｚ：２７７［Ｍ］＋、分子量２７７。
１ＨＮＭＲ （ ４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３， δｐｐｍ ）：０．９５（６Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，－（ＣＨ ３）２）；１．８５（１Ｈ，ｍ，－ＣＨ（ＣＨ３）２）；３．２２（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ１＝Ｊ２＝６．６Ｈｚ，－ＣＨ ２ＣＨ（ＣＨ３）２）；３．８９（３Ｈ，ｓ，Ａｒ－ＯＣＨ ３）；６．０２（２Ｈ，ｓ，Ａｒ－ＯＣＨ ２Ｏ）；６．３１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．６Ｈｚ，）；６．６６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．２）；６．７１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ）；７．５２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．６Ｈｚ）。
１３ＣＮＭＲ （ １０１ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３， δｐｐｍ）：１６６．０７，１４９．２２，１４３．５８，１４０．７９，１３６．７０，１２９．６６， １１９．２２，１０８．９２，１０１．８０，１００．７９，５６．５４，４７．１３，２８．５９，２０．１２。
上記の分析に基づいて、化合物１は５’－メトキシ －３’， ４’－メチレンジオオキシ桂皮酸－イソブチル酸アミドであると判断され、その構造式は次のとおりである。

Figure 0007212051000008
８、化合物２の構造の同定
無色結晶体、分子式Ｃ１８Ｈ２３ＮＯ３，ＥＩ－ＭＳ ｍ／ｚ：３０１［Ｍ］＋、分子量３０１。
１ＨＮＭＲ （ ４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３， δｐｐｍ ）：０．９３（６Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，－ＣＨ（ＣＨ３）２）；１．８１（１Ｈ，ｍ，－ＣＨ（ＣＨ３）２）；２．４３（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ）；２．６７（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，７．２Ｈｚ）；３．１８（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，－ＮＨ－ＣＨ２－）；５．５９（１Ｈ，ｂｒ，－ＮＨ－）；５．７７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１３．８Ｈｚ）；５．９２（２Ｈ，ｓ，Ａｒ－ＯＣＨ２Ｏ）；６．０９（２Ｈ，ｍ）；６．６１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，２．４Ｈｚ）；６．６７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝０．６Ｈｚ）；６．７４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ）；７．２７（１Ｈ，ｍ）。
１３ＣＮＭＲ （ １０１ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３， δｐｐｍ）：１６６．４７，１４７．６１，１４５．７７，１４１．７８，１４１．３０，１３５．０７， １２８．８６， １２１．９９，１２１．１７，１０８．８１，１０８．１７，１００．７９，４７．０５，３４．９５，２８．６０，２０．１１，１９．８７。
上記の分析に基づいて、化合物２は（２Ｅ，６Ｅ）－Ｎ－イソブチル－７－（３，４－メチレンジオキシフェニル）ヘプタジエン酸アミド（ペンガミド）であると判断され、その構造式は次のとおりである。
Figure 0007212051000009
９、化合物９の構造の同定
無色針状の結晶であり、分子式Ｃ１４Ｈ１７ＮＯ３，ＥＩ－ＭＳ ｍ／ｚ：２４７［Ｍ］＋、分子量２４７。
１ＨＮＭＲ （ ４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３， δｐｐｍ ）：０．９６（６Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．６０Ｈｚ，－ＣＨ（ＣＨ３）２）；１．８５（１Ｈ，ｍ，－ＣＨ（ＣＨ３）２）３．２３（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ１＝Ｊ２＝５．４９Ｈｚ，－ＮＨ－ＣＨ２－）；５．６４（１Ｈ，ｂｄ，－ＮＨ－）；６．００（２Ｈ，ｓ，Ａｒ－ＯＣＨ２Ｏ）；６．２５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．３８Ｈｚ）；６．８１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．６９Ｈｚ）；７．００（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．３４Ｈｚ）；７．５６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．３８Ｈｚ）。
１３ＣＮＭＲ （ １０１ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３， δｐｐｍ）：６６．５２，１４９．４３，１４８．６４，１４１．１５，１２９．６９，１２４．３２，１１９．１８，１０８．９９，１０６．７３，１０１．９０，４７．５０，２９．１２，２０．６４。
上記の分析に基づいて、化合物９は３’，４’－メチレンジオオキシ桂皮酸－イソブチル酸アミドであると判断され、その構造式は次のとおりである。
Figure 0007212051000010
（二）、大葉蒟抽出物におけるアミドアルカロイド含有量の測定方法に関する研究（ＨＰＬＣ含有量測定方法
（１）、計器、試薬、対照品
計器：Ａｇｉｌｅｎｔ １１００ 高速液体クロマトグラフ、Ｃｈｅｍｓｔａｔｉｏｎ Ｅｄｉｔｉｏｎ クロマトグラフィーワークステーション
試薬：メタノール（クロマトグラフィー試薬）、アセトニトリル（クロマトグラフィー試薬）、娃哈哈精製水。
対照品：分離により得られる前記化合物モノマーは、再結晶、中圧での迅速な調製または高速液体クロマトグラフィーなどによって含有量測定用の対照品を得る。
（２）、クロマトグラフィー条件
Ａｇｉｌｅｎｔ １１００ 高速液体クロマトグラフ，Ｃｈｅｍｓｔａｔｉｏｎ Ｅｄｉｔｉｏｎクロマトグラフィーワークステーション、クロマトグラフィーカラム：ＢＩＳＣＨＯＦＦ Ｐｒｏｎｔｏｓｉｌ １２０－５－Ｃ１８－ＳＨ、移動相：メタノール－アセトニトリル－水、流速：１ｍｌ／ｍｉｎ、カラム温度：４０℃、検出器：ＤＡＤ 検出器；検出波長：２４０ｎｍ；サンプル注入量：１０μｌ；グラジエント溶出手順は表２に示す。
Figure 0007212051000011
（３）、サンプル溶液の調製
大葉蒟抽出液を４０ｍｇ取り、正確にひょう量し、５０ｍｌの褐色メスフラスコに入れ、メタノールを目盛近くまで加え、メスフラスコを超音波洗浄機に入れて超音波処理して溶解させ、取り出して冷却し、メタノールを目盛近くまで加え、平均に混合し、微多孔質の膜ろ過によって溶液を獲得し、濃い色の容器に入れる。
（４）、測定方法
試験液および対照液をそれぞれ１０μｌ正確に取り、高速液体クロマトグラフを注入し、クロマトグラムのピーク面積を記録し、外部標準法によって含有量を算出する。検出により、抽出物には、セサミン、（２Ｅ，６Ｅ）－Ｎ－イソブチル－７－（３，４－メチレンジオキシフェニル）ヘプタジエン酸アミド、（２Ｅ，４Ｅ）－Ｎ－イソブチルドデシル－２，４－ジエン酸アミド、（２Ｅ，４Ｅ）－Ｎ－イソブチル－１５－フェニル－２，４－ジエン酸アミド、（２Ｅ，４Ｅ，１４Ｚ）－Ｎ－イソブチルエイコサン－２，４，１４－トリエン酸アミド、（２Ｅ，４Ｅ）－Ｎ－イソブチル－１３－フェニル－２，４－ジエン酸アミド、５’－メトキシ－３’，４’－メチレンジオオキシ桂皮酸－イソブチル酸アミド、３’，４’－メチレンジオオキシ桂皮酸－イソブチル酸アミドとＮ－イソブチル癸－反－２－反－４－ジエンジオレフィン酸アミドが含まれ、アルカロイド総含有量は７０．１５％である。
実施形態２
大葉蒟の根と根茎を取り、大きい粉にして、体積濃度９５％のエタノールを適量に加え、常温で２４時間浸漬し、２０倍まで体積濃度９５％のエタノールをさらに加え、濾過して抽出し、濾過液をエタノール含有量４０％まで減圧して濃縮し、大葉蒟粗抽出物溶液を獲得する。粗抽出物溶液を処理されたＤ１０１大孔吸着樹脂に注入し、順次に４倍の体積濃度４５％のエタノール溶液、２倍の体積濃度６５％のエタノール溶液で洗脱し、洗脱液を捨てる、次に６倍の体積濃度９５％のエタノール溶液で洗脱し、洗脱液を収集し、粘稠状に濃縮し、真空乾燥して抽出物を獲得する、濃縮と乾燥温度は６０℃である。抽出物の膏状体獲得率は１．２１％であり、ＨＰＬＣの検出により、抽出物にはセサミン、（２Ｅ，６Ｅ）－Ｎ－イソブチル－７－（３，４－メチレンジオキシフェニル）ヘプタジエン酸アミド、（２Ｅ，４Ｅ）－Ｎ－イソブチルドデシル－２，４－ジエン酸アミド、（２Ｅ，４Ｅ）－Ｎ－イソブチル－１５－フェニル－２，４－ジエン酸アミド、（２Ｅ，４Ｅ，１４Ｚ）－Ｎ－イソブチルエイコサン－２，４，１４－トリエン酸アミド、（２Ｅ，４Ｅ）－Ｎ－イソブチル－１３－フェニル－２，４－ジエン酸アミド、３’，４’－メチレンジオオキシ桂皮酸－イソブチル酸アミド和Ｎ－イソブチル－反－２－反－４－ジエンジオレフィン酸アミドが含まれ、アルカロイド総含有量は７５．３９％である。すなわち、本実施形態の抽出物は、化合物Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、およびＣ９を含む組成物である。
実施形態３
大葉蒟の根と根茎を取り、大きい粉にして、体積濃度９５％のエタノールを適量に加え、常温で２４時間浸漬し、２５倍まで体積濃度９５％のエタノールをさらに加え、濾過して抽出し、濾過液をエタノール含有量４５％まで減圧して濃縮し、大葉蒟粗抽出物溶液を獲得する、濃縮温度は６０℃である。粗抽出物溶液を処理されたＤ１０１大孔吸着樹脂に注入し、順次に４倍の体積濃度５０％エタノール溶液、４倍の体積濃度７０％エタノール溶液で洗脱し、洗脱液を捨てる。次に６倍の体積濃度９５％エタノール溶液で洗脱し、洗脱液を収集し、粘稠状に濃縮し、真空乾燥して抽出物を獲得する、濃縮と乾燥温度は６０℃である。抽出物の膏状体獲得率は０．８１％であり、ＨＰＬＣ検出により、抽出物には、（２Ｅ，４Ｅ）－Ｎ－イソブチルドデシル－２，４－ジエン酸アミド、（２Ｅ，４Ｅ）－Ｎ－イソブチル－１５－フェニル－２，４－ジエン酸アミド、（２Ｅ，４Ｅ，１４Ｚ）－Ｎ－イソブチルエイコサン－２，４，１４－トリエン酸アミド、（２Ｅ，４Ｅ）－Ｎ－イソブチル－１３－フェニル－２，４－ジエン酸アミド、Ｎ－イソブチル癸－反－２－反－４－ジエンジオレフィン酸アミドが含まれ、アルカロイド総含有量は３５．２５％である。すなわち、本実施形態の抽出物は、化合物Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、およびＣ８を含む組成物である。
実施形態４
大葉蒟の根と根茎を取り、大きい粉にして、体積濃度９０％のエタノールを適量に加え、常温で２４時間浸漬し、２０倍まで体積濃度９０％のエタノールをさらに加え、濾過して抽出し、濾過液をエタノール含有量３５％まで減圧して濃縮し、大葉蒟粗抽出物溶液を獲得する、濃縮温度は６０℃である。粗抽出物溶液を処理されたＤ１０１大孔吸着樹脂に注入し、順次に２倍の体積濃度４０％エタノール溶液、２倍の体積濃度６０％エタノール溶液で洗脱し、洗脱液を捨てる。次に６倍の体積濃度９０％エタノール溶液で洗脱し、洗脱液を収集し、粘稠状に濃縮し、真空乾燥して抽出物を獲得する、濃縮と乾燥温度は６０℃である。抽出物の膏状体獲得率は１．４２％であり、ＨＰＬＣ検出により、抽出物には、セサミン、（２Ｅ，６Ｅ）－Ｎ－イソブチル－７－（３，４－メチレンジオキシフェニル）ヘプタジエン酸アミド、（２Ｅ，４Ｅ）－Ｎ－イソブチルドデシル－２，４－ジエン酸アミド、（２Ｅ，４Ｅ）－Ｎ－イソブチル－１５－フェニル－２，４－ジエン酸アミド、（２Ｅ，４Ｅ，１４Ｚ）－Ｎ－イソブチルエイコサン－２，４，１４－トリエン酸アミド、（２Ｅ，４Ｅ）－Ｎ－イソブチル－１３－フェニル－２，４－ジエン酸アミド、５’－メトキシ －３’，４’－メチレンジオオキシ桂皮酸－イソブチル酸アミド、３’，４’－メチレンジオオキシ桂皮酸－イソブチル酸アミド、Ｎ－イソブチル癸－反－２－反－４－ジエンジオレフィン酸アミドが含まれ、アルカロイド総含有量は５５．２３％である。すなわち、本実施形態の抽出物は、化合物Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、およびＣ９を含む組成物である。
比較例１
大葉蒟の根と根茎を取り、大きい粉にして、体積濃度５０％のエタノールを適量に加え、常温で２４時間浸漬し、２０倍まで体積濃度５０％のエタノールをさらに加え、濾過して抽出し、濾過液をエタノール含有量３０％まで減圧して濃縮し、大葉蒟粗抽出物溶液を獲得する、濃縮温度は６０℃である。粗抽出物溶液を処理されたＤ１０１大孔吸着樹脂に注入し、４倍の体積濃度３０％のエタノール溶液で洗脱し、そして６倍の体積濃度７０％のエタノール溶液で洗脱し、洗脱液を収集し、粘稠状に濃縮し、真空乾燥して抽出物を獲得する、濃縮と乾燥温度は６０℃である。
比較例２
大葉蒟の根と根茎を取り、大きい粉にして、体積濃度７０％のエタノールを適量に加え、常温で２４時間浸漬し、２０倍まで体積濃度５０％のエタノールをさらに加え、濾過して抽出し、濾過液をエタノール含有量３０％まで減圧して濃縮し、大葉蒟粗抽出物溶液を獲得する、濃縮温度は６０℃である。粗抽出物溶液を処理されたＤ１０１大孔吸着樹脂に注入し、４倍の体積濃度４０％のエタノール溶液で洗脱し、そして６倍の体積濃度８５％のエタノール溶液で洗脱し、洗脱液を収集し、粘稠状に濃縮し、真空乾燥して抽出物を獲得する、濃縮と乾燥温度は６０℃である。
比較例３（ＺＬ２００４１００８４７９１．７）
大葉蒟の根と根茎を取って段状に切り、約８０％のエタノールを加えて常温で２４時間浸漬し、薬材の量の１５倍まで同等濃度のエタノールをさらに加え、濾過によって粗抽出物を獲得し、濾過液に６０℃のぬるま湯を約同等量を加えて平均に撹拌し混じって、それから希釈された濾過液をＤ１０１大孔吸着樹脂柱に注入し、該柱から注出した後は順次に５０％、８５％のエタノールで洗脱し、８５％のエタノールで洗脱した液体を収集し、＝＜７０℃の濃縮、乾燥を経て精製した抽出物を獲得する。ＨＰＬＣ検出により、抽出物には、５’－メトキシ－３’，４’－メチレンジオキシ桂皮酸テトラヒドロピロール、３’，４’－メチレンジオオキシ桂皮酸－イソブチル酸アミド、５’－メトキシ－３’， ４’－メチレンジオオキシ桂皮酸－イソブチル酸アミド、Ｎ－イソブチル癸－反－２－反－４－ジエンジオレフィン酸アミド、１－［（２Ｅ，４Ｅ）－２，４－デカジエノイル］テトラヒドロピロール、Ｎ－イソブチル－９－（３’，４’－メチレンジオキシフェニル）－２Ｅ、８Ｅ－ノナジエン酸アミド、１－［（２Ｅ）－５－（３，４－メチレンジオキシフェニル）］テトラヒドロピロールが含まれる。
比較例４（ＰＣＴ／ＣＮ２００５／００２０３４）
大葉蒟の根と根茎を１ｋｇ取って段状に切り、約９０％のエタノールを加えて常温で４８時間浸漬し、２０Ｌまで同等濃度のエタノールをさらに加え、濾過によって粗抽出物を獲得し、濾過液に１５Ｌぬるま湯を加えて平均に撹拌し混じって、それから希釈された濾過液をＤ１０１大孔吸着樹脂に注入し、該柱から注出した後は順次に４０％、９０％のエタノールで洗脱し、９０％のエタノールで洗脱した液体を収集し、＝＜７０℃の濃縮、乾燥を経て精製した抽出物を獲得する。抽出物には５’－メトキシ－３ ‘、４’－メチレンジオキシ桂皮酸テトラヒドロピロール、３’，４’－メチレンジオオキシ桂皮酸－イソブチル酸アミド、５’－メトキシ－３’，４’－メチレンジオオキシ桂皮酸－イソブチル酸アミド、Ｎ－イソブチル癸－反－２－反－４－ジエンジオレフィン酸アミド、１－［（２Ｅ，４Ｅ）－２，４－デカジエノイル］テトラヒドロピロール、Ｎ－イソブチル－９－（３’，４’－メチレンジオキシフェニル）－２Ｅ，８Ｅ－ノナジエン酸アミド、４，５－ジヒドロエピペルミニン、ピペロナミドが含まれる。
比較例５（２０１０１０２９６９７４．０）
大葉蒟の根と藤茎を取り、大きな粉にして、薬材の量の約１０倍に相当する７０％のエタノールを加え、常温でろ過して粗抽出物溶液を獲得し、そして真空条件下で粗抽出溶液を原体積の約２５％まで濃縮し、濃縮後の粗抽出物溶液を平均に撹拌した後、非極性の大型吸着樹脂柱に注入し、分離、純化してから、順次に３０％、８０％のエタノールで洗脱し、８０％のエタノールで洗脱した液体を収集し、濃縮、乾燥を経て精製した抽出物を獲得する。
実施形態１－４、比較例１－５の大葉蒟抽出物を利用して次の試験を行う。
１、小ネズミ尾掛け試験
昆明マウス（オス、１８－２０ｇ）をグループ毎に１０匹で、計１４グループにランダムに分け、各グループに表３に示すように対応する量の抽出物を投与し、同時に生理食塩水で対照とし、陽性対照グループはベンラファキシンである。最後の経口投与から１ｈ後に小ネズミ尾掛け試験を行い、テーブルから５０ｃｍ上にある木棒に小ネズミ尾を粘着テープで接着して上下逆さまにし、板で周りの視界から隔離する。小ネズミは、異常な姿勢を克服するのに苦労したが、一定期間活動した後は動かなくなり、絶望の状態を示している。６分持続し、６分以内の静止時間を記録する。
Figure 0007212051000012
表３の結果から、小ネズミに２０、１０、５と２．５ｍｇ／ｋｇ／ｄの本発明の抽出物（実施例１～４の抽出物）を２週間経口投与した後、小ネズミの静止時間が有意に短縮したことがわかる。ブランク対照グループと比較して、Ｐ値が０．０５、１０ｍｇ／ｋｇ／ｄ未満の場合、Ｐ値が０．０１、２．５ｍｇ／ｋｇ／ｄ 未満の本発明の抽出物は、良好な抗うつ効果を示している。
比較により、本発明の抽出物の生物活性は、５ｍｇ／ｋｇ／ｄの投与量で２０ｍｇ／ｋｇ／ｄでの比較例４の抽出物の活性と同等であることが分かり、本発明の大葉蒟抽出物の生物活性は、比較例４の大葉蒟抽出物よりも有意に高く、他の既存の技術により得られた大葉蒟抽出物よりも優れていることを示す。
２、小ネズミ水泳試験
昆明マウス（オス、１８－２０ｇ）をグループ毎に１０匹で、計１２グループにランダムに分け、各グループに表４に示すように対応する量の抽出物を投与し、同時に生理食塩水で対照とし、陽性対照グループはベンラファキシンである。毎日１回、１４日続いて薬を投与し、最後の１回で経口投与した１時間の後、小ネズミを１０×２０ｃｍ、水の深さは１０ｃｍであるガラス缶（水温２５℃）において水泳試験を行い、６ｍｉｎ持続し、５ｍｉｎ以内の停止時間を記録する。
Figure 0007212051000013
表４の結果から、小ネズミに１０、５、２．５ｍｇ／ｋｇ／ｄの本発明の抽出物（実施例１～４の抽出物）を２週間経口投与した後、小ネズミの停止時間が有意に短縮したことがわかる。ブランク対照グループと比較して、Ｐ値が０．０５、２．５ｍｇ／ｋｇ／ｄ未満の本発明の抽出物は、良好な抗うつ効果を示している。
比較により、２．５ｍｇ／ｋｇ／ｄの投与量で比較例４の抽出物の生物活性とブランク対照グループの活性に有意差はなく、本発明の抽出物の生物活性は、１０．０ｍｇ／ｋｇ／ｄで比較例４の抽出物の生物活性と同等である、これは、本発明の大葉蒟抽出物の生物活性は、比較例４の大葉蒟抽出物よりも有意に高く、他の既存の技術により得られた大葉蒟抽出物よりも優れていることを示す。
３、大ネズミ学習性無力感試験
Ｗｉｓｔａｒ大ネズミを採用し、グループ毎に１０匹でランダムに分ける。学習性無力感試験（ｌｅａｒｎｅｄ ｈｅｌｐｌｅｓｓｎｅｓｓ）モデルを採用し、表５に示すように相応の分量によって抽出物を胃に入れ、陽性対照グループはベンラファキシンであり、毎日１回、７日続き、最後の１回に投与した２４ｈの後、条件回避試験を行う。
Figure 0007212051000014
学習性無力モデルはうつ病の効果的な動物モデルである。表５に示すように、モデルグループの動物の平均逃避潜時はブランク対照グループ（Ｐ ＜ ０．０１）よりも有意に長く、動物は絶望の明確な状態を示し、モデリングの成功を反映した。陽性対照薬であるベンラファキシンと本発明抽出物（実施形態２の抽出物）１０、５、２．５ｍｇ／ｋｇ／ｄ
の分量は、大ネズミの逃避潜時を有意に短縮し、モデルグループと比較して、Ｐ＜０．０１、優れた抗うつ効果を示している。
比較により、２．５ｍｇ／ ｍｇ／ｄの分量で、比較例４の抽出物は大ネズミの逃避潜時を有意に短縮しないことがわかり、本発明の抗うつ活性は比較例４の抽出物のそれよりも優れていることを示している。
４、小ネズミの明箱及び暗箱試験
小ネズミをグループ毎に１０匹でランダムに分け、表６に示すように相応の分量によって抽出物を投与し、生理食塩水で対照とし、陽性対照グループはジアゼパムであり、胃に投与した６０ｍｉｎの後に明箱と暗箱試験を行う。１匹５ｍｉｎ持続し、明箱と暗箱における小ネズミの滞在時間と往来回数を記録する。
Figure 0007212051000015
表６に示すように、ブラックグループと比較して、分量が１０ｍｇ／ｋｇであるとき、本発明の抽出物は、明箱に入る小ネズミの行動量と行動時間を有意に高め、分量が１０ｍｇ／ｋｇの場合は、Ｐ＜０．０５、分量が２０ｍｇ／ｋｇである場合は、Ｐ＜０．０１、本発明の抽出物は抗不安効果を有することを示している。同時に、比較により、本発明の抽出物の抗不安効果は比較例の抽出物よりも優れていることを示している。
５、大葉蒟抽出物の安全性評価－小ネズミ急性毒性試験
昆明マウス（オスとメスはそれぞれ半分、体重１８－２２ｇ）、グループごとに１０匹でランダムに分け、メスとオスはそれぞれ５匹とする。すべての小ネズミは４時間絶食（禁水しない）した後、各グループに予備実験の結果の分量によって胃に入れ、投与量：０．２ｍｌ／１０ｇ。その後、投与後の小ネズミの反応を観察し、死亡を記録し、１日１回、連続１４日間観察する。１４日間の観察期間が完了した後、生きている小ネズミの体重をはかって解剖し、内蔵が異常であるかどうかを観察する。ＤＡＳＴＭ統計ソフトウェアＢｌｉｓｓ法で計算された小ネズミの急性毒性試験結果を表７に示す。
Figure 0007212051000016
表７から分かるように、本発明に記載の大葉蒟抽出物のＬＤ５０の値が比較例の抽出物よりも高く、本発明の前記抽出物の安全性が比較例４、比較例３の前記抽出物よりも有意に高く、他の既存の技術から得られた抽出物よりも高いことを示している。
以上、本発明について詳細に説明したが、その目的は、当業者が本発明の内容を理解して実施することを可能にすることであるが、これを持って本発明の保護範囲を限定するものではない、本発明の精神にしたがって実施したすべての同等の変更または修正は、本発明の保護範囲に含まれるものとする。

Claims (9)

  1. 少なくとも、（２Ｅ，４Ｅ）－Ｎ－イソブチルドデシル－２，４－ジエン酸アミド、（２Ｅ，４Ｅ）－Ｎ－イソブチル－１５－フェニル－２，４－ジエン酸アミド、（２Ｅ，４Ｅ，１４Ｚ）－Ｎ－イソブチルエイコサン－２，４，１４－トリエン酸アミド、（２Ｅ，４Ｅ）－Ｎ－イソブチル－１３－フェニル－２，４－ジエン酸アミド、Ｎ－イソブチルデカン－トランス－２－トランス－４－ジアリルアミドを含む大葉蒟抽出物。
  2. ３’，４’－メチレンジオオキシ桂皮酸－イソブチル酸アミド、（２Ｅ，６Ｅ）－Ｎ－イソブチル－７－（３，４－メチレンジオキシフェニル）ヘプタジエン酸アミド、セサミンのうちのいずれか１つまたは１つ以上の組み合わせを更に含む請求項１に記載の大葉蒟抽出物。
  3. ５’－メトキシ－３’，４’－メチレンジオオキシ桂皮酸－イソブチル酸アミドを更に含む請求項２に記載の大葉蒟抽出物。
  4. 手順（１）、大葉蒟を大きい粉にし、大葉蒟薬材の重量の１０～３０倍に相当する体積濃度は８０％～９５％であるエタノールを加え、浸漬または濾過により粗抽出物溶液を獲得し、
    手順（２）、手順（１）で得られた粗抽出物溶液をアルコール含有量３５％～４５％まで減圧して濃縮し、７０℃を超えないように濃縮温度を制御し、
    手順（３）、手順（２）で濃縮した粗抽出物溶液を大孔吸着樹脂柱に注入し、順次に大葉蒟薬材重量の２～６倍に相当する体積濃度３０％～５０％、５０％～７０％のアルコール溶液で溶出し、溶出液を捨て、
    手順（４）、次に、大葉蒟薬材重量の４～８倍に相当する体積濃度８０％～９５％のエタノール溶液で洗脱（溶出）し、洗脱（溶出）液を収集し、褐色の粘稠な膏状に濃縮し、真空乾燥し、７０℃を超えないように温度を制御し、前記大葉蒟抽出物を獲得することを含む請求項１～３の何れか一項に記載の大葉蒟抽出物の調製方法。
  5. 手順（１）に記載の大葉蒟薬材は、大葉蒟の地上部または地上部と地下部から取る請求項４に記載の大葉蒟抽出物の調製方法。
  6. 精神疾患の予防、緩和および治療のための薬物または精神疾患の緩和のための健康食品の調製における活性成分としての請求項１～３に記載の大葉蒟抽出物の応用。
  7. 前記精神疾患は、鬱病、不安障害を含む請求項６に記載の応用。
  8. 請求項１～３の何れか一項に記載の大葉蒟抽出物を含む、精神疾患の予防、緩和および治療のための医薬品。
  9. 請求項１～３の何れか一項に記載の大葉蒟抽出物を含む、精神疾患の緩和のための健康食品。
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