JP7118588B2 - Hiv感染のrnaガイド処置のための方法および組成物 - Google Patents
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Description
本出願は2013年8月29日出願の米国暫定出願61/871,626(特許文献1)、2014年6月27日出願の米国暫定出願62/018,441(特許文献2)および2014年7月18日出願の米国暫定出願62/026,103(特許文献3)の出願日の恩恵を主張する。米国暫定出願61/871,626、米国暫定出願62/018,441および米国暫定出願62/026,103の恩恵を主張するため、これら出願の内容はその全てがここに参照として採り入れられる。
本願はASCIIフォーマットで電子的に提出された配列リストを含み、それはその全てにおいてここに参照として採り入れられる。そのASCIIコピーは2014年8月26日に作成され、その名称はF5129-00031 SL.txtであり、そのサイズは74,547バイトである。
本発明は、国立保健局により授与された補助番号R01MH093271,R01NS087971およびP30MH092177の下での米国政府の補助により行われた。米国政府が本発明に対し一定の権利を有する可能性がある。
本発明の組成物はCRISPR関連エンドヌクレアーゼ例えばCas9およびレトロウイルス、例えばHIV内の標的配列に対し相補的である1つのガイドRNAをコードする1つの核酸配列を有する。バクテリアでは、CRISPR/Cas遺伝子座は、可動遺伝要素(ウイルス、転位因子および接合性プラスミド)に対するRNAガイド適応性免疫システムをコードする。CRISPRシステムの3つのタイプ(I-III)はすでに識別されている。CRISPRクラスターはスペーサーを有し、その配列は前駆可動要素に相補的である。CRISPRクラスターは転写されそして成熟CRISPR RNA(crRNA)にプロセスされる。CRISPR関連エンドヌクレアーゼのCas9はタイプII CRISPR/Casシステムに属し、そして標的DNAを切断する強いエンドヌクレアーゼ活性を有する。Cas9は、約20塩基対(bp)のユニークな標的配列(スペーサーと呼ばれる)および、crRNA前駆体のリボヌクレアーゼIII補助プロセシングに対するガイドとして機能する、トランス活性化低分子RNA(tracrRNA)を含む、成熟crRNAによりガイドされる。crRNA:tracrRNA二重鎖は、crRNA上のスペーサーと標的DNA上の相補的配列(プロトスペーサーと呼ばれる)の間の相補的対形成を介して、Cas9を標的DNAに向ける。Cas9は切断部位(PAMから3番目のヌクレオチド)を特定するためにトリヌクレオチド(NGG)プロトスペーサー隣接モチーフ(PAM)を認識する。crRNAおよびtracrRNAは別々に発現され、または天然crRNA/tracrRNA二重鎖を模倣するため合成ステムループを介して人工的融合小分子量ガイドRNA(sgRNA)に操作されてもよい。sgRNAは低分子ヘアピン型RNA(shRNA)のように、直接RNA遺伝子導入のために合成され、またはin vitroで転写され、またはU6またはH1プロモートRNA発現ベクターから発現される。しかし人工的sgRNAの切断効率はcrRNAとtracrRNAが別々に発現されるシステムの効率に比べて低い。
LTR A:ATCAGATATCCACTGACCTTTGG(配列番号:96)、
LTR B:CAGCAGTTCTTGAAGTACTCCGG(配列番号:121)、
LTR C:GATTGGCAGAACTACACACCAGG(配列番号:87)、または
LTR D:GCGTGGCCTGGGCGGGACTGGGG(配列番号:110)。
LTR A:ATCAGATATCCACTGACCTTTGG(配列番号:96)、
LTR B:CAGCAGTTCTTGAAGTACTCCGG(配列番号:121)、
LTR C GATTGGCAGAACTACACACCAGG(配列番号:87)、または
LTR D:GCGTGGCCTGGGCGGGACTGGGG(配列番号:110)。
ガイドRNA配列はプロトスペーサーと呼ばれることがある、例えば、プロトスペース(A)、プロトスペース(B)、プロトスペース(C)、及びプロトスペース(D)。
例えば、RNA分子の既知の修飾は、例えば、遺伝子VI、第9章(「遺伝コードの解釈」)、ルイス、エド(1997年、オックスフォード大学出版、ニューヨーク)およびGrosjeanおよびBenne著RNAの修飾と編集(1998、ASMプレス、ワシントンDC)に記載されている。
修飾されたRNAの構成要素は、次のものがある:2´-O-メチルシチジン;N4-メチルシチジン;N4-2´-O-ジメチルシチジン;N4-アセチルシチジン;5-メチルシチジン;5,2´-O-ジメチルシチジン;5-ヒドロキシジメチルシチジン; 5-フォルミルシチジン;2´-O-メチル-5-フォルミルシチジン;3-メチルシチジン;2-チオシチジン;ライシジン;2´-O-メチルウリジン;2-チオウリジン;2-チオ-2´-O-メチルウリジン;3,2´-O-ジメチルウリジン;3-(3-アミノ-3-カルボキシプロピル)ウリジン;4-チオウリジン;リボシルチミン; 5,2´-O-ジメチルウリジン;5-メチル-2-チオウリジン;5-ヒドロキシウリジン;5-メトキシウリジン;ウリジン5-オキシ酢酸;ウリジン-5-オキシ酢酸メチルエステル;5-カルボキシメチルウリジン;5-メトキシカルボニルメチルウリジン;5-メトキシカルボニルメチル-2´-O-メチルウリジン;5-メトキシカルボニルメチル-2´-チオウリジン;5-カルバモイルメチルウリジン;5-カルバモイルメチル-2´-O-メチルウリジン;5-(カルボキシヒドロキシメチル)ウリジン;5-(カルボキシヒドロキシメチル)ウリジンメチルエステル;5-アミノメチル-2-チオウリジン;5-メチルアミノメチルウリジン;5-メチルアミノメチル-2-チオウリジン;5-メチルアミノメチル-2-セレノウリジン;5-カルボキシメチルアミノメチルウリジン;5-カルボキシメチルアミノメチル-2´-O-メチル-ウリジン;5-カルボキシメチルアミノメチル-2-チオウリジン;ジヒドロウリジン;ジヒドロリボシルチミン;2´-メチルアデノシン;2-メチルアデノシン;N.sup.6N-メチルアデノシン;N6、N6-ジメチルアデノシン;N6,2´-O-トリメチルアデノシン;2-メチルチオ-N6N-イソペンテニルアデノシン;N6-(シスヒドロキシイソペンテニル)-アデノシン;2-メチルチオ-N6-(シスヒドロキシイソペンテニル)-アデノシン;N6-グリシニルカルバモイル)アデノシン;N6-トレオニルカルバモイルアデノシン;N6-メチル-N6-トレオニルカルバモイルアデノシン;2-メチルチオ-N6-メチル-N6-トレオニルカルバモイルアデノシン;N6-ヒドロキシノルバリルカルバモイルアデノシン;2-メチルチオ-N6-ヒドロキシノルバリルカルバモイルアデノシン;2´-O-リボシルアデノシン(リン酸塩);イノシン;2´-O-メチルイノシン;1-メチルイノシン;1,2´-O-ジメチルイノシン;2´-O-メチルグアノシン;1-メチルグアノシン;N2-メチルグアノシン;N2,N2-ジメチルグアノシン;N2,2´-O-ジメチルグアノシン;N2,N2,2´-O-トリメチルグアノシン;2´-O-リボシルグアノシン(リン酸塩);7-メチルグアノシン;N2,7-ジメチルグアノシン;N2,N2,7-トリメチルグアノシン;ワイオシン;メチルワイオシン;未修飾ヒドロキシワイブトシン;ワイブトシン;ヒドロキシワイブトシン;ペルオキシワイブトシン;キューオシン;エポキシキューオシン;ガラクトシル-キューオシン;マンノシル-キューオシン;7-シアノ-7-デアザグアノシン;アルカエオシン(arachaeosine)[7-ホルムアミド-7-デアザグアノシンとも呼ばれる];そして7‐アミノメチル-7-デアザグアノシン。
上述したように、本発明の組成物は、当業者に公知の種々の方法で調製することができる。それらの元のソースまたはそれらが得られた態様に関係なく、本発明の組成物は、それらの使用方法に従って処方できる。例えば、上述の核酸およびベクターは、組織培養中細胞への適用、または患者または被験者への投与のために組成物内に処方されうる。任意の本発明の医薬組成物は医薬品の調製における使用のために処方することができ、そして特定の使用は、処置、例えば、HIV感染を有するまたはHIV感染のリスクのある被験者の処置、の文脈で以下に示される。医薬品として使用する場合、任意の核酸およびベクターは、医薬組成物の形態で投与されうる。
ここで開示された組成物は、レトロウイルス感染、例えば、HIV感染を有する被験者の処置にとって全般的にそして様々に有用である。我々は、被験者、患者、または個人を交換可能に言う。本発明の方法は、任意のHIV、例えばHIV-1、HIV-2およびそれらの任意の循環組換え形態を標的とするために有用である。被験者は、臨床的に有益な結果が起こる場合は常に有効に処置されている。これは、例えば、疾患の症状の完全な回復、疾患の症状の重症度の減少、または疾患の進行の遅延を意味してもよい。これらの方法はさらに、a)HIV感染を有する被験者(例えば、患者、より具体的には、ヒト患者)の識別;およびb)CRISPR関連ヌクレアーゼ、例えば、Cas9およびHIVの標的配列に相補的なガイドRNA、例えばHIV LTRをコードする1つの核酸を含む組成物を被験者に提供するステップ、を含みうる。被験者は、標準的な臨床試験、例えば、被験者の血清中のHIV抗体、またはHIVのp24のポリペプチドを検出するための免疫検定法を使用して、またはHIV核酸増幅検定法を介して識別しうる。疾患の症状の完全な回復、疾患の症状の重症度の減少、または疾患の進行の遅延をもたらす、被験者に提供されるこれら組成物の量が処置上有効な量とみなされる。
ヒト免疫不全ウイルスは、染色体に組み込まれたプロウイルスでありうる。哺乳動物細胞は、限定されないが、CD4+リンパ球、マクロファージ、線維芽細胞、単球、Tリンパ球、Bリンパ球、ナチュラルキラー細胞、ランゲルハンス細胞および濾胞樹状細胞のような樹状細胞、造血幹細胞、内皮細胞、脳の小膠細胞および胃腸上皮細胞を含む、HIVに感染された任意の細胞型でありうる。このような細胞型は一般的に、一次感染時に感染した細胞型、例えば、CD4+リンパ球、マクロファージ、またはランゲルハンス細胞、ならびに潜伏HIV貯蔵庫を構成するこれら細胞型、即ち、潜伏感染細胞を含む。
本明細書に記載の組成物は、例えば、レトロウイルス感染、例えばHIV感染を有する被験者、またはレトロウイルス感染、例えばHIV感染を罹患するリスクのある被験者を処置するための治療薬として使用するために標識化された適切な容器に収容されうる。容器は、例えば、CRISPR-関連エンドヌクレアーゼ、例えばCas9エンドヌクレアーゼ、およびヒト免疫不全ウイルスに相補的なガイドRNA、またはその核酸、をコードする1つの核酸、またはその核酸をコードする1つのベクター、および1つ以上の適切な安定剤、担体分子、香味料、および/または意図される用途のために適切な類似のものを有する、1つの組成物を含みうる。したがって、パッケージ製品(例えば、1つ以上の本明細書に記載の組成物を含み、濃縮またはすぐに使用できる濃度で貯蔵、出荷、または販売用に包装された滅菌容器)および、少なくとも一つの本発明の組成物、例えば、CRISPR関連エンドヌクレアーゼ、例えば、Cas9エンドヌクレアーゼおよびヒト免疫不全ウイルス内の標的配列に対して相補的なガイドRNAをコードする1つの核酸配列、またはその核酸をコードする1つのベクター、および使用説明書、を含むキットは、本発明の範囲に含まれる。製品は、一つまたはそれ以上の本発明の組成物を含む容器(例えば、バイアル、ジャー、ボトル、バッグ、等)を含みうる。さらに製造品は、例えば、包装材料、使用説明書、シリンジ、送達装置、予防または処置が必要とされる病状を処置またはモニターするためのバッファまたは他の対照試薬を含んでよい。
(事例1:材料と方法)
プラスミドの調製:ヒトCas9とgRNA発現カセットを含むベクター、pX260およびpX330(Addgene)が、種々の構築物LTR-A、B、C、およびDを作成するために利用された。
細胞培養および安定な細胞株:TZM-blレポーターおよびU1細胞株は、NIH AIDS試薬プログラムから得られ、CHME5ミクログリア細胞は、当技術分野で知られている。
免疫組織化学およびウエスタンブロット:細胞の免疫細胞化学観察のための標準的な方法、およびウエスタンブロットによるタンパク質発現の評価が使用された。
ホタルルシフェラーゼ検定:細胞は、処置後24時間後に受動溶解緩衝液(Promega)を使用して溶解され、そしてルシフェラーゼレポーター遺伝子検定キット(Promega)を用いて製造業者のプロトコルに従って検定された。ルシフェラーゼ活性は、平行MTT検定(Vybrant、Invitrogen社)によって測定された細胞数に対して正規化された。
p24 ELISA:感染または再活性化後、上清中のHIV-1ウイルス負荷のレベルが、p24Gag ELISA(アドバンスド・バイオサイエンス・ラボラトリーズ社)により、製造業者のプロトコルに従って定量化された。処置時の細胞生存率を評価するため、MTT検定が平行で、製造業者の取扱説明書(Vybrant、Invitrogen社)に従って、実施された。
EGFPフローサイトメトリー:細胞はトリプシン処理され、PBSで洗浄され、そして室温で10分間、2%パラホルムアルデヒド中で固定され、次いで、PBSで2回洗浄され、そしてGuava EasyCyteミニフローサイトメータ(グアバテクノロジーズ)を用いて解析された。
ゲノムDNAの増幅、PCR、TAクローニング、およびサンガー配列決定、ゲノムウォーカーリンクPCR:クローニングおよび配列決定のためのDNA操作に対する標準的な方法が使用された。HIV-1の組み込み部位の同定のため、我々は、レンチX(登録商標)組込み部位分析キットを使用した。
LTR内の潜在的な標的部位の最初の同定のため、ジャック・リンのCRISPR/Cas9 gRNAファインダーツールを使用した。
プラスミド調製:LTR-AまたはLTR-Bを発現するcrRNA前駆体のためのDNAセグメントが、ピューロマイシン選択遺伝子を含むpX260ベクター(Addgene社、プラスミド#42229)の中にクローニングされた。LTR-CまたはLTR-Dを発現するキメラcrRNA-tracrRNAのためのDNAセグメントが、pX330ベクター(Addgene社、プラスミド#42230)の中にクローニングされた。両ベクター共に、CAGプロモーターによって駆動されるヒト化Cas9コーディング配列、およびヒトU6プロモーターによって駆動されるgRNA発現カセットを含む。ベクターは、BbsIで消化され、そしてアンタークティックホスファターゼで処理され、そして直線化ベクターは、クイックヌクレオチド除去キット(Qiagen)で精製された。各標的部位(図14、アルファDNA)に対する一対のオリゴヌクレオチドが、徐冷され、リン酸化され、そして直線化ベクターに連結された。gRNA発現カセットは、U6配列決定プライマー(図14)でジーンウィズ社において配列決定された。pX330ベクターに対し、我々は直接遺伝子導入または他のベクターへのサブクローニングのため、gRNA発現カセット(U6-gRNA-crRNA-ステム-tracrRNA)を開裂することができる、オーバーハング消化部位を持つ1対のユニバーサルPCRプライマー(図14)を設計した。
安定な細胞株およびサブクローニング TZM-blまたはCHME5/HIV細胞は 1.5×105細胞/ウェルの密度で6ウェルプレートに播種され、そしてリポフェクタミン2000試薬(Invitrogen)を用いて1μgのpX260(LTR-A及びBの場合)または1μg/0.1μgのpX330/pX260プラスミド(LTR-CおよびDの場合)で遺伝子導入された。翌日、細胞は100mmディッシュに移され、1μg/mlのピューロマイシンを含む増殖培地(Sigma)でインキュベートされた。二週間後、生存細胞コロニーがクローニングシリンダー(Corning社)を用いて単離された。U1細胞(1.5x105)は1μgのDNAで、10μlチップ、3×10ms1400Vのインパルスを使用してネオン(登録商標)トランスフェクションシステム(Invitrogen社)においてエレクトロポレーションされた。細胞は、0.5μg/mlのピューロマイシンで2週間に亘って選択された。安定したクローンが限界希釈法を使用して96ウェルプレート内で継代培養され、そして単一細胞由来のサブクローンがさらなる研究のために維持された。
p24ELISA 感染または再活性化した後、上清中のHIV-1ウイルス負荷レベルは、製造業者のプロトコルに従ってp24 Gag ELISA(アドバンスト・バイオサイエンスラボラトリーズ社)によって定量された。処置の際の細胞の生存率を評価するために、製造業者のプロトコルに従ってMTT検定(Vybrant、Invitrogen社)が平行で行われた。
EGFPフローサイトメトリー 細胞はトリプシン処理され、PBSで洗浄され、そして2%パラホルムアルデヒドで室温で10分間固定され、その後、PBSで2回洗浄され、そしてグアバEasyCyteミニフローサイトメータ(Guava Technologies社)を用いて分析された。
48時間後、上清が回収され、0.45μmで濾過され、そして感染マーカーとして発現EGFPを用いてヒーラー細胞内で滴定された。ウイルス感染のために、安定したCas9/gRNA TZM-Bl細胞は、希釈されたウイルスストックで2時間インキュベートされ、そしてPBSで2回洗浄された。感染後2日目および4日目に、細胞は回収され、固定され、そしてEGFP発現についてフローサイトメトリーによって分析され、またはPCRおよび全ゲノム配列決定のためにゲノムDNAの精製が実施された。
ゲノムDNA精製、PCR、TAクローニングおよびサンガー配列決定 ゲノムDNAは、製造業者が推奨するプロトコルに従ってArchivePure DNA細胞/組織精製キット(5PRIME社)を用いて細胞から単離された。抽出されたDNAの100ngが、図14に記載のプライマーを用いた高忠実度のFailSafe PCRキット(Epicentre社)を用いてPCRを受けた。標準的PCRの3つのステップが55℃のアニーリングと72℃の伸長の30サイクルに亘って実行された。産物は2%アガロースゲル内に溶解された。対象バンドはゲル精製され、そしてpCRIIT-Aベクター(Invitrogen)内にクローニングされ、そして個々のクローンのヌクレオチド配列は、ユニバーサルT7および/またはSP6プライマーを用いてジーンウィズで配列決定により決定された。
我々は、HIV-1指向ガイドRNA(gRNAs)の、LTRの転写活性を阻害し、脳内のHIV-1貯蔵場所として機能し、特に難治性の集団である、潜伏感染骨髄細胞のゲノムからプロウイルスDNAを根絶する能力について評価した。我々の戦略は、HIV-1 LTRプロモーターのU3領域を標的とすることに焦点を当てた。バイオインフォマティクススクリーニングおよび効率/オフターゲット予測により、我々は保存された転写因子結合部位を避け、宿主の遺伝子発現を変化させる可能性を最小限に抑える、4つのgRNA標的(プロトスペーサ;LTR A-D)を同定した(図5および13)。我々は、gRNA A-Dに相補的なDNA断片をヒト化Cas9発現ベクター(pX260でA/B;pX330でC/D)に挿入し、そして、組み込みHIV-1ゲノム活性を変化させるそれらの個々のそして組み合わせた能力を試験した。
前単球U937細胞のサブクローンU1、感染した血管周囲性マクロファージおよび単球のためのHIV-1の潜伏モデルは、慢性的にHIV-1に感染され、そして低レベルの構成的ウイルス遺伝子の発現および複製を示す。GenomeWalkerマッピングは、U1細胞内の染色体Xp11-4(図2A)および2p21(図9A)で2つの組み込みプロウイルスDNAのコピーを検出した。9709bpのプロウイルスHIV-1DNA全体プラス隣接する226bpのX染色体由来の配列(図2A)を示す9935bpのDNA断片、および9709bpのHIV-1ゲノムプラスその隣接する2染色体由来の467bpを含む10176bpの断片(図9A、B)が、親対照または空ベクター(U6-CAG)U1細胞のロングレンジPCR分析により同定された。226bpおよび467bpの断片はそれぞれ、X染色体と2番染色体の他のコピーからの予測セグメントを表し、それらは組み込まれたプロウイルスDNAを欠いた。LTR-A/B gRNAsとCas9を発現するU1細胞内で、我々はX染色体内に833及び670bpの二つの追加のDNA断片を、そして2番染色体内に1102bpの1つの追加のDNA断片を発見した。したがってgRNA A/Bは、Cas9が両方の染色体においてHIV-1の5´-3´LTRにまたがるウイルスゲノムセグメントを切除することを可能にした。833bpの断片は、宿主ゲノムからの予想される226bpおよびLTR-A部位の周りの約27bpの欠失を有する607bpのウイルスLTR配列を含む(図2A-B)。670bp断片は、両方のLTRにおけるgRNA A/B誘導切断に起因する(図2A)190bpの断片切除後に226bpの宿主配列と残留444bpのウイルスのLTR配列を包含した(図1D)。
次に我々は、安定的にCas9/gRNA-Aおよび-Bを発現するTZM-blベースのクローンを用いて、Cas9/LTR gRNAの組み合わせがHIV-1感染に対して細胞を免疫化することができるかどうかを試験した(図3A)。7つのピューロマイシン選択サブクローンの内の2つが190bpのLTR-A/B部位にまたがるDNA断片(図3B)の効率的な切除を示した。しかし、残りの5サブクローンには、サンガー配列決定によって確認されるように切除もインデル変異も示さなかった(図3B)。Cas9およびU6-LTRを標的とするプライマーを用いたPCR遺伝子型決定は、これらの非有効なサブクローンのいずれもが、Cas9/LTR-A/B gRNA発現カセットの組み込まれたコピーを保持しないことを示した。(図11A、B)。その結果、完全長Cas9の発現は検出されなかった(図11C、D)。Cas9/LTR-A/B gRNAの長期発現は、細胞の増殖や生存率に悪影響を及ぼさなかった。そのことはこのモデルにおいて、宿主ゲノムに対するオフターゲット干渉、またはCas9誘発毒性の低い発生率を示唆した。我々は、HIV-1複製を示すフローサイトメトリーにより、EGFP-ポジティブな、VSVG偽型pNL4-3-ΔE-EGFPレポーターウイルスを細胞に感染させることによって、新規HIV-1複製を評価した。対照U6-CAG細胞とは異なり、Cas9/gRNA LTR-A/Bを安定的に発現する細胞は、感染後2日目においてHIV-1複製をサポートすることに失敗した、それは、それらが効果的に新たなHIV-1感染に対して免疫化したことを示す(図3C-D)。HIV-lに対する同様の免疫性が、ネイティブT-向性X4株pNL4-3-ΔE-EGFPレポーターウイルス(図12A)または、SF162およびJRFL(図12B-D)などのネイティブM向性R5株に感染したCas/LTR-A/B gRNA発現細胞で観察された。
Cas9/gRNAの介入アプローチとしての魅力は、その高度に特異的なオンターゲットのインデル生成切断にかかっているが、多重gRNAは、潜在的に宿主ゲノム変異誘発および染色体異常、細胞毒性、遺伝子毒性、または腫瘍形成を引き起こす可能性がある。ウイルス-ヒトのかなり低いゲノム相同性は、このリスクを減少させるが、ヒトゲノムは、HIV-1を指向したgRNAsに潜在的に感受性の多数の内在性レトロウイルスゲノムを含む。したがって、我々は、選択されたHIV-1 LTR gRNAsのヒトゲノムに対するオフターゲット効果を評価した。プロトスペーサー隣接モチーフ(PAM)領域(NGG)に最近接の12-14bpのシード配列が切断特異性のために重要であるため、我々は、>14bpのシード+NGGをサーチし、そしてLTR gRNAsのA-Dによってオフターゲット候補部位を全く発見しなかった(図13)。連続的により短いgRNAセグメントが、対応するオンターゲット対応配列に100%一致したオフターゲット切断部位をより多くもたらしたこと(即ち、NGG+13bpは、それぞれ6、0、2、9個のオフターゲット部位をもたらし、一方NGG+12bpは16、5、16、29個をもたらした;図13)ことは驚くべきことではない。ヒトゲノムDNAから、我々は、高忠実度PCRを用いて、予測されたオフターゲット部位の1つをカバーする500-800bpの配列を取得し、潜在的変異をSURVEYORとサンガー配列決定により解析した。我々は変異を全く発見しなかった。(TZM-blとU1細胞中の代表的オフターゲット部位#1、5および6を参照;図4A)
Claims (27)
- 組成物であって、
(a)1つのCRISPR関連Cas9エンドヌクレアーゼと、(b)2つ以上のガイドRNAと、をコードする1つの核酸を有し、(i)前記2つ以上のガイドRNAの第1のガイドRNAはヒト免疫不全ウイルス配列の5´-長い末端反復(LTR)のU3領域内の第1の標的核酸配列に相補的であり、そして(ii)前記2つ以上のガイドRNAの第2のガイドRNAは前記ヒト免疫不全ウイルス配列の3´-長い末端反復(LTR)のU3領域内の第2の標的核酸配列に相補的であり、前記2つ以上のガイドRNAの少なくとも2つは異なる、ことを特徴とする組成物。 - 前記ヒト免疫不全ウイルスはHIV-1またはHIV-2である、ことを特徴とする請求項1に記載の組成物。
- 前記ヒト免疫不全ウイルスは組み込まれたプロウイルスDNAを有する、ことを特徴とする請求項1または2に記載の組成物。
- 前記ヒト免疫不全ウイルス配列は前記ヒト免疫不全ウイルスに潜伏感染した細胞の中にあるものである、ことを特徴とする請求項1-3のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記潜伏感染した細胞はCD4+T細胞、マクロファージ、単球、腸管関連リンパ細胞、ミクログリア細胞またはアストロサイトである、ことを特徴とする請求項4に記載の組成物。
- 前記組成物は、ヒト免疫不全ウイルスの生体外での不活性化のためのものである、ことを特徴とする請求項1-5のいずれかに記載の組成物。
- 前記潜伏感染した細胞はヒト免疫不全ウイルス感染を有する被験者からの1つの培養細胞、1つの体外移植組織または1つの細胞株を含む、ことを特徴とする請求項4または5に記載の組成物。
- 前記核酸は、細胞に接触した時に当該細胞のゲノムからプロウイルスDNAの全てまたは実質的に全ての切除を引き起こすことが出来るものである、ことを特徴とする請求項1-7のいずれかに記載の組成物。
- 前記CRISPR関連Cas9エンドヌクレアーゼはヒト細胞における発現に対し最適化される、ことを特徴とする請求項1-8のいずれかに記載の組成物。
- 前記第1のガイドRNAまたは前記第2のガイドRNAは、配列ID番号:96、配列ID番号:121、配列ID番号:87、配列ID番号:110からなるグループから選択される1つの配列に少なくとも95%配列が一致する1つの配列を含む、ことを特徴とする請求項1-9のいずれかに記載の組成物。
- 前記第1のガイドRNAまたは前記第2のガイドRNAは、配列ID番号:96、配列ID番号:121、配列ID番号:87、配列ID番号:110からなるグループから選択される1つの配列を含む、ことを特徴とする請求項1-10のいずれかに記載の組成物。
- 前記組成物はさらに、トランス活性化スモールRNA(tracrRNA)をコードする1つの配列を含む、ことを特徴とする請求項1-11のいずれかに記載の組成物。
- 前記トランス活性化スモールRNA(tracrRNA)配列は前記ガイドRNAをコードする配列に融合される、ことを特徴とする請求項12に記載の組成物。
- 前記1つのCRISPR関連Cas9エンドヌクレアーゼおよび前記2つ以上のガイドRNAをコードする前記核酸はさらに核局在化シグナルを含む、ことを特徴とする請求項1-13のいずれかに記載の組成物。
- 前記1つのCRISPR関連Cas9エンドヌクレアーゼおよび前記2つ以上のガイドRNAをコードする前記核酸は1つの発現ベクターに動作可能に結合している、ことを特徴とする請求項1-14のいずれかに記載の組成物。
- 前記発現ベクターは1つのレンチウイルスベクター、1つのアデノウイルスベクター、または1つのアデノ-関連ウイルスベクターである、ことを特徴とする請求項15に記載の組成物。
- (a)1つのCRISPR関連Cas9エンドヌクレアーゼと、(b)2つ以上のガイドRNAと、をコードする1つの単離核酸を有し、(i)前記2つ以上のガイドRNAの第1のガイドRNAはヒト免疫不全ウイルス配列の5´-長い末端反復(LTR)のU3領域内の第1の標的核酸配列に相補的であり、そして(ii)前記2つ以上のガイドRNAの第2のガイドRNAは前記ヒト免疫不全ウイルス配列の3´-長い末端反復(LTR)のU3領域内の第2の標的核酸配列に相補的であり、前記2つ以上のガイドRNAの少なくとも2つは異なる、ことを特徴とする発現ベクター。
- 前記発現ベクターはレンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、またはアデノ-関連ウイルスベクターである、ことを特徴とする請求項17に記載の発現ベクター。
- 請求項17または18に記載の発現ベクターを含む宿主細胞。
- 請求項17または18に記載の発現ベクター、または請求項19に記載の宿主細胞、および医薬的に受容可能な担体を含む、ことを特徴とするヒト免疫不全ウイルス(HIV)感染を処置するための医薬組成物。
- 前記医薬的に受容可能な担体は、脂質ベースまたはポリマーベースのコロイドを含む、ことを特徴とする請求項20に記載の医薬組成物。
- 前記脂質ベースまたはポリマーベースのコロイドは、リポソーム、ヒドロゲル、マイクロ粒子、ナノ粒子、またはブロック共重合体ミセルである、ことを特徴とする請求項21に記載の医薬組成物。
- 前記医薬組成物は局所に適用するために処方される、ことを特徴とする請求項20-22のいずれか1項に記載の医薬組成物。
- ヒト免疫不全ウイルス感染を処置するための薬剤を生産するために、単離核酸配列を使用する方法であって、
前記単離核酸配列は、
1つのCRISPR関連Cas9エンドヌクレアーゼと1つ以上のガイドRNAをコードする1つの配列であって、前記1つ以上のガイドRNAはヒト免疫不全ウイルス内の1つの標的核酸配列に相補的である、1つの配列;または、
1つのCRISPR関連エンドヌクレアーゼと1つのガイドRNAをコードする1つの配列を含む1つの発現ベクターであって、前記ガイドRNAはヒト免疫不全ウイルス内の1つの標的核酸配列に相補的である、1つの発現ベクター;を有し、
前記標的核酸配列は、ヒト免疫不全ウイルス配列のLTR(長い末端反復)内にあり、そして配列ID番号:96、配列ID番号:121、配列ID番号:87および配列ID番号:110からなるグループから選択される1つの配列に少なくとも95%配列が一致する1つの配列を有する、
ことを特徴とする方法。 - 曝露前予防(PrEP)のための薬剤を生産するために、ヒト免疫不全ウイルス(HIV)感染を処置するための単離核酸配列を使用する方法であって、
前記単離核酸配列は、
1つのCRISPR関連Cas9エンドヌクレアーゼと1つ以上のガイドRNAをコードする1つの配列であって前記1つ以上のガイドRNAはヒト免疫不全ウイルス内の1つの標的核酸配列に相補的である、1つの配列;または、
1つのCRISPR関連エンドヌクレアーゼと1つのガイドRNAをコードする1つの配列を含む1つの発現ベクターであって、前記ガイドRNAはヒト免疫不全ウイルス内の1つの標的核酸配列に相補的である、1つの発現ベクター;を有し、
前記標的核酸配列は、LTR(長い末端反復)内にあり、そして配列ID番号:96、配列ID番号:121、配列ID番号:87および配列ID番号:110からなるグループから選択される1つの配列に少なくとも95%配列が一致する1つの配列を有する、
ことを特徴とする方法。 - ヒト免疫不全ウイルス(HIV)感染を処置するためのキットであって、測定された量の1つの組成物を有し、
前記組成物は、単離核酸配列であって、1つのCRISPR関連Cas9エンドヌクレアーゼと1つ以上のガイドRNAをコードする1つの配列を含み、ここにおいて前記1つ以上のガイドRNAはヒト免疫不全ウイルス内の1つの標的核酸配列に相補的であり、前記標的核酸配列は、ヒト免疫不全ウイルス配列のLTR(長い末端反復)内にあり、そして配列ID番号:96、配列ID番号:121、配列ID番号:87および配列ID番号:110からなるグループから選択される1つの配列に少なくとも95%配列が一致する1つの配列を有する、1つの単離核酸配列、または、前記単離核酸をコードする1つのベクターを有し、
前記キットはまた、包装材料、使用説明書を含む装入物、無菌液、シリンジ、および無菌容器からなるグループから選択される1つ以上のアイテムを有する、
ことを特徴とするキット。 - 前記組成物はさらに医薬的に許容可能な担体を含む、ことを特徴とする請求項26に記載のキット。
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SG10201804976YA (en) | 2013-12-12 | 2018-07-30 | Broad Inst Inc | Delivery, Use and Therapeutic Applications of the Crispr-Cas Systems and Compositions for Genome Editing |
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AU2014361784A1 (en) * | 2013-12-12 | 2016-06-23 | Massachusetts Institute Of Technology | Delivery, use and therapeutic applications of the CRISPR-Cas systems and compositions for HBV and viral diseases and disorders |
JP6793547B2 (ja) | 2013-12-12 | 2020-12-02 | ザ・ブロード・インスティテュート・インコーポレイテッド | 最適化機能CRISPR−Cas系による配列操作のための系、方法および組成物 |
WO2015089364A1 (en) | 2013-12-12 | 2015-06-18 | The Broad Institute Inc. | Crystal structure of a crispr-cas system, and uses thereof |
CN106232823A (zh) * | 2014-02-18 | 2016-12-14 | 杜克大学 | 灭活病毒复制的组合物及其制备和使用方法 |
US20160060655A1 (en) | 2014-05-30 | 2016-03-03 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Compositions and methods to treat latent viral infections |
CA2952697A1 (en) | 2014-06-16 | 2015-12-23 | The Johns Hopkins University | Compositions and methods for the expression of crispr guide rnas using the h1 promoter |
CA2956224A1 (en) | 2014-07-30 | 2016-02-11 | President And Fellows Of Harvard College | Cas9 proteins including ligand-dependent inteins |
AU2015332451A1 (en) | 2014-10-15 | 2017-04-20 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for generating or maintaining pluripotent cells |
US10457960B2 (en) | 2014-11-21 | 2019-10-29 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for targeted genetic modification using paired guide RNAs |
WO2016094867A1 (en) | 2014-12-12 | 2016-06-16 | The Broad Institute Inc. | Protected guide rnas (pgrnas) |
MA41382A (fr) | 2015-03-20 | 2017-11-28 | Univ Temple | Édition génique basée sur le système crispr/endonucléase à induction par tat |
CN104726449A (zh) * | 2015-03-23 | 2015-06-24 | 国家纳米科学中心 | 一种用于预防和/或治疗HIV的CRISPR-Cas9系统及其制备方法和用途 |
CA3000187A1 (en) * | 2015-04-02 | 2016-10-06 | Agenovir Corporation | Gene delivery methods and compositions |
WO2016183345A1 (en) * | 2015-05-13 | 2016-11-17 | Seattle Children' S Hospital (Dba Seattle Children 's Research Institute) | Enhancing endonuclease based gene editing in primary cells |
JP2018516984A (ja) * | 2015-05-29 | 2018-06-28 | アジェノビア コーポレーション | 細胞を標的にしたhpv処置のための組成物および方法 |
WO2016196283A1 (en) * | 2015-05-29 | 2016-12-08 | Agenovir Corporation | Antiviral methods and compositions |
US10117911B2 (en) | 2015-05-29 | 2018-11-06 | Agenovir Corporation | Compositions and methods to treat herpes simplex virus infections |
AU2016270702B2 (en) * | 2015-06-01 | 2022-01-20 | Temple University - Of The Commonwealth System Of Higher Education | Methods and compositions for RNA-guided treatment of HIV infection |
CN104894071A (zh) * | 2015-06-08 | 2015-09-09 | 东华大学 | 一种对gt1-7细胞进行基因编辑的方法 |
WO2016205759A1 (en) | 2015-06-18 | 2016-12-22 | The Broad Institute Inc. | Engineering and optimization of systems, methods, enzymes and guide scaffolds of cas9 orthologs and variants for sequence manipulation |
RU2021120582A (ru) | 2015-06-18 | 2021-09-02 | Те Брод Инститьют, Инк. | Мутации фермента crispr, уменьшающие нецелевые эффекты |
CN114875012A (zh) | 2015-08-28 | 2022-08-09 | 通用医疗公司 | 工程化的CRISPR-Cas9核酸酶 |
US9512446B1 (en) | 2015-08-28 | 2016-12-06 | The General Hospital Corporation | Engineered CRISPR-Cas9 nucleases |
US9926546B2 (en) | 2015-08-28 | 2018-03-27 | The General Hospital Corporation | Engineered CRISPR-Cas9 nucleases |
EP3356521A4 (en) * | 2015-09-28 | 2019-03-13 | Temple University - Of The Commonwealth System of Higher Education | METHOD AND COMPOSITIONS FOR RNA-TREATED TREATMENT OF HIV INFECTIONS |
US20170096649A1 (en) * | 2015-10-02 | 2017-04-06 | Agenovir Corporation | Transgenic nuclease systems and methods |
MX2018004263A (es) | 2015-10-08 | 2019-08-16 | Harvard College | Edición genómica multiplexada. |
JP2018531261A (ja) * | 2015-10-16 | 2018-10-25 | テンプル ユニバーシティー オブ ザ コモンウェルス システム オブ ハイヤー エデュケーション | Cpf1を用いた、rnaガイド遺伝子編集方法および組成物 |
US20190225955A1 (en) | 2015-10-23 | 2019-07-25 | President And Fellows Of Harvard College | Evolved cas9 proteins for gene editing |
RU2018124657A (ru) | 2015-12-09 | 2020-01-09 | Эксижн Биотерапевтикс, Инк. | Способы редактирования генов и композиции для устранения риска активации вируса jc и пмл (прогрессирующая мультифокальная лейкоэнцефалопатия) во время иммуносупрессивной терапии |
AU2017211062A1 (en) * | 2016-01-25 | 2018-06-07 | Excision Biotherapeutics | Methods and compositions for RNA-guided treatment of HIV infection |
MX2018009904A (es) * | 2016-02-15 | 2019-07-08 | Univ Temple | Escision de secuencias de acido nucleico retrovirales. |
SG11201807025SA (en) * | 2016-02-26 | 2018-09-27 | Lanzatech New Zealand Ltd | Crispr/cas systems for c-1 fixing bacteria |
EP3219799A1 (en) | 2016-03-17 | 2017-09-20 | IMBA-Institut für Molekulare Biotechnologie GmbH | Conditional crispr sgrna expression |
CA3024494A1 (en) * | 2016-05-10 | 2017-11-16 | United States Government As Represented By The Department Of Veterans Affairs | Lentiviral delivery of crispr/cas constructs that cleave genes essential for hiv-1 infection and replication |
CN107365786A (zh) * | 2016-05-12 | 2017-11-21 | 中国科学院微生物研究所 | 一种将spacer序列克隆至CRISPR-Cas9系统中的方法及其应用 |
AU2017277810A1 (en) * | 2016-06-03 | 2018-12-06 | Temple University - Of The Commonwealth System Of Higher Education | Negative feedback regulation of HIV-1 by gene editing strategy |
WO2018027078A1 (en) | 2016-08-03 | 2018-02-08 | President And Fellows Of Harard College | Adenosine nucleobase editors and uses thereof |
AU2017308889B2 (en) | 2016-08-09 | 2023-11-09 | President And Fellows Of Harvard College | Programmable Cas9-recombinase fusion proteins and uses thereof |
US11542509B2 (en) | 2016-08-24 | 2023-01-03 | President And Fellows Of Harvard College | Incorporation of unnatural amino acids into proteins using base editing |
WO2018049372A1 (en) * | 2016-09-12 | 2018-03-15 | Excision Biotherapeutics Inc | Hiv clinical plan |
KR20240007715A (ko) | 2016-10-14 | 2024-01-16 | 프레지던트 앤드 펠로우즈 오브 하바드 칼리지 | 핵염기 에디터의 aav 전달 |
WO2018070850A1 (ko) * | 2016-10-14 | 2018-04-19 | 연세대학교 산학협력단 | Kras 유전자에 상보적인 가이드 rna 및 이의 용도 |
KR101997116B1 (ko) * | 2016-10-14 | 2019-07-05 | 연세대학교 산학협력단 | Kras 유전자에 상보적인 가이드 rna 및 이의 용도 |
WO2018119359A1 (en) | 2016-12-23 | 2018-06-28 | President And Fellows Of Harvard College | Editing of ccr5 receptor gene to protect against hiv infection |
US20190071673A1 (en) * | 2017-01-18 | 2019-03-07 | Thomas Malcolm | CRISPRs WITH IMPROVED SPECIFICITY |
US20190367924A1 (en) * | 2017-02-17 | 2019-12-05 | Temple University - Of The Commonwealth System Of Higher Education | Gene editing therapy for hiv infection via dual targeting of hiv genome and ccr5 |
EP3592853A1 (en) | 2017-03-09 | 2020-01-15 | President and Fellows of Harvard College | Suppression of pain by gene editing |
WO2018165629A1 (en) | 2017-03-10 | 2018-09-13 | President And Fellows Of Harvard College | Cytosine to guanine base editor |
CN106755268B (zh) * | 2017-03-22 | 2020-07-17 | 中国科学院海洋研究所 | 体外筛选具有改善记忆力的牡蛎活性肽的方法 |
IL269458B2 (en) | 2017-03-23 | 2024-02-01 | Harvard College | Nucleic base editors that include nucleic acid programmable DNA binding proteins |
US20200140865A1 (en) * | 2017-04-17 | 2020-05-07 | Temple University - Of The Commonwealth System Of Higher Education | An hiv-1 eradication strategy employing nanoformulated anti-retroviral drugs and gene editing agents |
US11591589B2 (en) | 2017-04-21 | 2023-02-28 | The General Hospital Corporation | Variants of Cpf1 (Cas12a) with altered PAM specificity |
WO2018209320A1 (en) | 2017-05-12 | 2018-11-15 | President And Fellows Of Harvard College | Aptazyme-embedded guide rnas for use with crispr-cas9 in genome editing and transcriptional activation |
EP3630849A4 (en) | 2017-05-25 | 2021-01-13 | The General Hospital Corporation | BIPARTITE BASIC EDITOR (BBE) AND TYPE II-C-CAS9 ZINC FINGER EDITOR ARCHITECTURES |
US11732274B2 (en) | 2017-07-28 | 2023-08-22 | President And Fellows Of Harvard College | Methods and compositions for evolving base editors using phage-assisted continuous evolution (PACE) |
US11319532B2 (en) | 2017-08-30 | 2022-05-03 | President And Fellows Of Harvard College | High efficiency base editors comprising Gam |
EP3697906A1 (en) | 2017-10-16 | 2020-08-26 | The Broad Institute, Inc. | Uses of adenosine base editors |
US11618780B2 (en) | 2017-10-20 | 2023-04-04 | City Of Hope | Composition and method for activating latent human immunodeficiency virus (HIV) |
WO2020160418A1 (en) * | 2019-01-31 | 2020-08-06 | Board Of Regents Of The University Of Nebraska | Virus-like particles and methods of use thereof |
WO2020163396A1 (en) | 2019-02-04 | 2020-08-13 | The General Hospital Corporation | Adenine dna base editor variants with reduced off-target rna editing |
MX2021011426A (es) | 2019-03-19 | 2022-03-11 | Broad Inst Inc | Metodos y composiciones para editar secuencias de nucleótidos. |
CA3141313A1 (en) | 2019-05-23 | 2020-11-26 | Christiana Care Health Services, Inc. | Gene knockout of variant nrf2 for treatment of cancer |
JP2022532939A (ja) | 2019-05-23 | 2022-07-20 | クリスティアナ ケア ヘルス サービシズ,インコーポレーテッド | がんを処置するためのnrf2の遺伝子ノックアウト |
CN115867650A (zh) | 2020-04-20 | 2023-03-28 | 克里斯蒂安娜基因编辑研究公司 | 用于肺癌治疗的aav递送系统 |
JP2023525304A (ja) | 2020-05-08 | 2023-06-15 | ザ ブロード インスティテュート,インコーポレーテッド | 標的二本鎖ヌクレオチド配列の両鎖同時編集のための方法および組成物 |
MX2023000661A (es) * | 2020-07-13 | 2023-07-03 | Alexandra L Howell | Métodos y composiciones para la eficiencia y especificidad de arn guía de crispr/cas9 frente a aislados de vih-1 genéticamente diferentes. |
EP4256044A1 (en) * | 2020-12-01 | 2023-10-11 | United States Government as Represented by The Department of Veterans Affairs | Compositions and methods for cleaving viral genomes |
AU2022216614A1 (en) | 2021-02-05 | 2023-02-23 | Christiana Care Gene Editing Institute, Inc. | Methods of and compositions for reducing gene expression and/or activity |
AU2022393213A1 (en) | 2021-11-19 | 2024-05-30 | Christiana Care Gene Editing Institute, Inc. | Methods for intratumoral delivery of crispr/cas systems |
WO2023091696A1 (en) | 2021-11-19 | 2023-05-25 | Christiana Care Gene Editing Institute, Inc. | Adenovirus delivery system for cancer treatment |
US20230279442A1 (en) | 2021-12-15 | 2023-09-07 | Versitech Limited | Engineered cas9-nucleases and method of use thereof |
WO2023154451A1 (en) | 2022-02-10 | 2023-08-17 | Christiana Care Gene Editing Institute, Inc. | Methods for lipid nanoparticle delivery of crispr/cas system |
CN114657185B (zh) * | 2022-03-28 | 2023-11-10 | 福州大学 | 一种基于适配体有序排列的金磁纳米探针及其在大田软海绵酸检测中的应用 |
CN115762764A (zh) * | 2022-11-25 | 2023-03-07 | 中山大学附属第三医院 | 一种hiv阴性隐球菌脑膜炎治疗结局预测模型及其构建方法 |
WO2024130151A1 (en) | 2022-12-16 | 2024-06-20 | Christiana Care Gene Editing Institute, Inc. | Compositions and methods for treating broad chemoresistance through chemoresistance-specific regulatory components |
Family Cites Families (41)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4235871A (en) | 1978-02-24 | 1980-11-25 | Papahadjopoulos Demetrios P | Method of encapsulating biologically active materials in lipid vesicles |
US4501728A (en) | 1983-01-06 | 1985-02-26 | Technology Unlimited, Inc. | Masking of liposomes from RES recognition |
US4837028A (en) | 1986-12-24 | 1989-06-06 | Liposome Technology, Inc. | Liposomes with enhanced circulation time |
TW247876B (en) | 1993-12-28 | 1995-05-21 | New York Blood Ct Inc | Pharmaceutical compositions for prevention or treating HIV-1 or HIV-2 infection |
JPH10501681A (ja) | 1994-02-22 | 1998-02-17 | ダナ−ファーバー キャンサー インスティチュート | 核酸送達システムならびにその合成および使用方法 |
AU728512B2 (en) * | 1996-04-02 | 2001-01-11 | Progenics Pharmaceuticals, Inc. | Method for preventing HIV-1 infection of CD4+ cells |
US6392029B1 (en) * | 1997-05-09 | 2002-05-21 | The Research Foundation Of State University Of New York | HIV chemokines |
US20040132161A1 (en) * | 1998-04-20 | 2004-07-08 | Finkel Terri H. | Methods and compositions for increasing CD4lymphocyte immune responsiveness |
US6534261B1 (en) * | 1999-01-12 | 2003-03-18 | Sangamo Biosciences, Inc. | Regulation of endogenous gene expression in cells using zinc finger proteins |
EP1849873B1 (en) * | 1999-04-29 | 2011-10-12 | Gbp Ip, Llc | Method and means for producing high titer, safe, recombinant lentivirus vectors |
US6864085B2 (en) | 1999-12-14 | 2005-03-08 | Novartis Ag | Bovine immunodeficiency virus (BIV) based vectors |
FR2825280B1 (fr) | 2001-06-01 | 2005-04-15 | Merial Sas | Vaccination contre le virus de l'immunodeficience feline |
US20030180756A1 (en) | 2002-03-21 | 2003-09-25 | Yang Shi | Compositions and methods for suppressing eukaryotic gene expression |
US20070175484A1 (en) | 2006-01-30 | 2007-08-02 | Staab Robert J | Condoms for beneficial agents delivery |
EP1942192A1 (en) | 2007-01-08 | 2008-07-09 | Heinrich-Pette-Institut für experimentelle Virologie und Immunologie | Use of a tailored recombinase for the treatment of retroviral infections |
CN103060378A (zh) | 2011-10-24 | 2013-04-24 | 四川百利药业有限责任公司 | 一种siv载体的制备方法 |
GB201122458D0 (en) * | 2011-12-30 | 2012-02-08 | Univ Wageningen | Modified cascade ribonucleoproteins and uses thereof |
EP2931899A1 (en) | 2012-12-12 | 2015-10-21 | The Broad Institute, Inc. | Functional genomics using crispr-cas systems, compositions, methods, knock out libraries and applications thereof |
SG10201912327SA (en) | 2012-12-12 | 2020-02-27 | Broad Inst Inc | Engineering and Optimization of Improved Systems, Methods and Enzyme Compositions for Sequence Manipulation |
RU2721275C2 (ru) * | 2012-12-12 | 2020-05-18 | Те Брод Инститьют, Инк. | Доставка, конструирование и оптимизация систем, способов и композиций для манипуляции с последовательностями и применения в терапии |
ES2741951T3 (es) | 2012-12-17 | 2020-02-12 | Harvard College | Modificación por ingeniería genética del genoma humano guiada por ARN |
CA2908253C (en) * | 2013-04-04 | 2024-01-09 | Trustees Of Dartmouth College | Compositions and methods for in vivo excision of hiv-1 proviral dna |
KR20160060659A (ko) | 2013-08-29 | 2016-05-30 | 템플 유니버시티-오브 더 커먼웰쓰 시스템 오브 하이어 에듀케이션 | Hiv 감염증의 rna-유도 치료를 위한 방법 및 조성물 |
US20160060655A1 (en) * | 2014-05-30 | 2016-03-03 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Compositions and methods to treat latent viral infections |
AU2016270702B2 (en) | 2015-06-01 | 2022-01-20 | Temple University - Of The Commonwealth System Of Higher Education | Methods and compositions for RNA-guided treatment of HIV infection |
EP3356521A4 (en) | 2015-09-28 | 2019-03-13 | Temple University - Of The Commonwealth System of Higher Education | METHOD AND COMPOSITIONS FOR RNA-TREATED TREATMENT OF HIV INFECTIONS |
JP2018531261A (ja) | 2015-10-16 | 2018-10-25 | テンプル ユニバーシティー オブ ザ コモンウェルス システム オブ ハイヤー エデュケーション | Cpf1を用いた、rnaガイド遺伝子編集方法および組成物 |
RU2018124657A (ru) | 2015-12-09 | 2020-01-09 | Эксижн Биотерапевтикс, Инк. | Способы редактирования генов и композиции для устранения риска активации вируса jc и пмл (прогрессирующая мультифокальная лейкоэнцефалопатия) во время иммуносупрессивной терапии |
AU2017371665A1 (en) | 2016-01-25 | 2018-07-19 | Excision Biotherapeutics | RNA guided eradication of human JC virus and other polyomaviruses |
AU2017211062A1 (en) | 2016-01-25 | 2018-06-07 | Excision Biotherapeutics | Methods and compositions for RNA-guided treatment of HIV infection |
MX2018009904A (es) | 2016-02-15 | 2019-07-08 | Univ Temple | Escision de secuencias de acido nucleico retrovirales. |
US20190093091A1 (en) | 2016-04-06 | 2019-03-28 | Temple University - Of The Commonwealth System Of Higher Education | Compositions for eradicating flavivirus infections in subjects |
US20190093092A1 (en) | 2016-05-05 | 2019-03-28 | Temple University - Of The Commonwealth System Of Higher Education | Rna guided eradication of varicella zoster virus |
EP3466177A4 (en) | 2016-05-26 | 2020-01-29 | Nokia Technologies Oy | ADAPTATION OF CODE WORD FOR NON-ORTHOGONAL CODED ACCESS |
US20190256844A1 (en) | 2016-06-07 | 2019-08-22 | Temple University - Of The Commonwealth System Of Higher Education | Rna guided compositions for preventing and treating hepatitis b virus infections |
US20190085326A1 (en) | 2016-09-14 | 2019-03-21 | Temple University - Of The Commonwealth System Of Higher Education | Negative feedback regulation of HIV-1 by gene editing strategy |
WO2018071623A2 (en) | 2016-10-12 | 2018-04-19 | Temple University - Of The Commonwealth System Of Higher Education | Combination therapies for eradicating flavivirus infections in subjects |
CN110431230A (zh) | 2017-01-26 | 2019-11-08 | 切除生物治疗公司 | 慢病毒和非整合型慢病毒作为病毒载体实施crispr治疗 |
US20190367924A1 (en) | 2017-02-17 | 2019-12-05 | Temple University - Of The Commonwealth System Of Higher Education | Gene editing therapy for hiv infection via dual targeting of hiv genome and ccr5 |
US20200140865A1 (en) | 2017-04-17 | 2020-05-07 | Temple University - Of The Commonwealth System Of Higher Education | An hiv-1 eradication strategy employing nanoformulated anti-retroviral drugs and gene editing agents |
US20210060138A1 (en) | 2019-03-06 | 2021-03-04 | Temple University - Of The Commonwealth System Of Higher Education | CRISPR and LASER ART Eliminates HIV |
-
2014
- 2014-08-29 KR KR1020167008253A patent/KR20160060659A/ko not_active IP Right Cessation
- 2014-08-29 JP JP2016537900A patent/JP7118588B2/ja active Active
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