CN114657185B - 一种基于适配体有序排列的金磁纳米探针及其在大田软海绵酸检测中的应用 - Google Patents
一种基于适配体有序排列的金磁纳米探针及其在大田软海绵酸检测中的应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种基于适配体有序排列的金磁纳米探针及其在大田软海绵酸检测（OA）中的应用。所述的金磁纳米探针是由表面有序排列着核酸序列的纳米金球形核酸与纳米磁珠结合组成；所述的核酸序列为5’端带有腺嘌呤碱基聚合链的适配体与5’端带有荧光标记的DNA互补链形成。所述的金磁纳米探针由于表面修饰高密度负载由有序排列适配体，特异识别效率高、目标物分离简便，可与大田软海绵酸反应释放出荧光标记的DNA互补链，应用激光诱导荧光检测，从而实现痕量OA高灵敏分析。
Description
技术领域
本发明涉及分析化学技术领域，特别是涉及一种核酸适配体有序排列的金磁纳米探针及其在大田软海绵酸检测中的应用。
背景技术
大田软海绵酸（Okadaic acid，OA）是一种热稳定的脂溶性的聚醚类海洋毒素，是腹泻性贝类毒素中最主要的一种，其分子式是C44H88O13，分子量为805.02。OA 最初由鳍藻属和原甲藻属等藻类产生，经食物链传递给牡蛎、蛤蜊、贻贝等贝类，在其消化腺中积累。OA对这些贝类没有毒性危害，但当人们食用了这些含毒贝类后，就会引发胃肠道紊乱，出现等腹泻、腹痛、恶心、呕吐等症状，被称为腹泻性贝类中毒。因此，建立新型快速灵敏的OA 检测方法不仅有助于保护人们的饮食安全，还有利于保证水产行业的健康发展。
适配体作为一种分析工具，比其它分子识别元件具有更多的优势。有别于抗体这种经典的生物识别分子需要通过长期的动物免疫来制备，适配体是一种从人工合成的寡核苷酸文库中筛选获得的单链 DNA或RNA。而在纳米材料表面进行生物分子或者有机配体的连接，可以提高纳米材料的稳定性，使纳米材料具备更多的功能，甚至构建复杂的纳米结构体系，在实际应用中具有重要意义。适配体相对容易合成、成本较低且可以用不同的标记物进行标记，包括电化学活性分子和荧光基团。因此，以适配体为识别元件设计的传感器，可用于复杂环境中高灵敏、高选择性地检测目标分析物。
将DNA分子修饰至具有丰富物理和化学性质的无机纳米粒子表面，可形成DNA－无机纳米粒子复合物。一方面，借助DNA可准确识别特定目标分子的能力，这种DNA功能化纳米粒子在纳米分析化学和纳米药学等领域具有重要应用前景。另一方面，以DNA功能化无机纳米粒子作为基本构建单元，利用DNA分子的程序化组装能力，有望精确构筑具有特定功能与应用的无机纳米超结构。
为实现离散型纳米粒子超结构的程序化可控组装，精确控制结合在纳米粒子表面的单链DNA数目（“DNA价态”）十分关键。在纳米金-DNA 自组装中，常通过“两步法”对DNA 自组装进行优化，即用巯基小分子（如巯基己醇MCH）对DNA自组装的金进行封闭。然而，传统的金-巯基自组装方法并不能够对DNA 在纳米金表面上的密度和构型进行有序排列，并且常有适配体倒伏现象出现，这也是之前研究者在研究DNA在纳米金表面反应活性时得到的结论不一的重要原因之一。因此，为了在纳米材料表面进行生物分子或者有机配体的连接，提高纳米材料的稳定性，使纳米材料具备更多的功能，甚至构建复杂的纳米结构体系，很有必要开发一种基于有序排列的磁化纳米金探针用于大田软海绵酸OA的检测。
发明内容
本发明公开了一种基于适配体有序排列的金磁纳米探针及其在大田软海绵酸检测中的应用。所述的金磁纳米探针溶剂热法形成表面修饰PEI的Fe3O4为载体，并高密度负载由有序排列适配体表面修饰的金纳米粒子。具体的，所述的金磁纳米探针是由表面有序排列着核酸序列的纳米金颗粒与纳米磁珠结合组成；所述的核酸序列为5’端带有腺嘌呤碱基（A）聚合链的适配体DNA链与5’端带有荧光标记基团的的DNA互补链杂交形成；所制备的适配体有序排列的金磁纳米颗粒具有分离简便、结合效率高的特征，能够对适配体进行定向排列，从而避免了适配体倒伏现象，提高对大田软海绵酸OA的高效特异识别分离。通过金磁纳米探针与大田软海绵酸（OA）反应释放出荧光标记的DNA互补链，应用激光诱导荧光检测，实现痕量OA的高灵敏分析。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
本发明首先提供了一种基于适配体有序排列的金磁纳米探针，所述的金磁纳米探针是由有序排列适配体修饰的纳米金颗粒与磁性纳米颗粒结合组成；所述的有序排列适配体为5’端带有腺嘌呤碱基聚合链的适配体DNA链与5’端带有荧光标记基团的DNA互补链杂交形成。
进一步的，上述的5’端带有腺嘌呤碱基聚合链的适配体DNA链的序列为5'-AAAAAAAAAAAAAAAAAAAATTTTTCCACCAACGAGAGTCAGAAAACCATGGTGGG-3'；上述的5’端带有荧光标记基团的DNA互补链的序列为5'-FAM-GGTTTTCTGAC-3'；上述的磁性纳米颗粒为表面修饰聚乙烯亚胺（PEI）的Fe3O4球形磁性纳米颗粒PEI-Fe3O4，所述的PEI的分子量为10000。
进一步的，上述的一种基于适配体有序排列的金磁纳米探针的制备方法包括以下步骤：
（1）PEI-四氧化三铁纳米颗粒的制备：
称取0.68g六水合三氯化铁（FeCl3·6H2O）溶于12mL乙二醇（(CH2OH)2）中，随后在磁力搅拌（60℃）下向其中加入溶于4 mL乙二醇中的0.5g聚乙烯亚胺（PEI），再加入1.8g乙酸钠（CH3COONa），继续搅拌10mins，将所得溶液转移到反应釜中，置于220℃烘箱内，反应2小时，制备得到PEI-四氧化三铁纳米颗粒；
（2）纳米金颗粒（AuNPs）的制备：
在250mL的三颈烧瓶中加入98mL的二次水和2mL 50mmol/L的氯金酸（AuCl4H）溶液，充分搅匀后将三颈烧瓶放置于110℃的油浴锅中煮沸5mins后持续磁力搅拌，迅速加入10mL浓度为38.8mmoL/L的柠檬酸钠（C6H5Na3O7）溶液，当溶液的颜色在1min内迅速由淡黄色转变为酒红色后继续沸腾回流20mins后移去油浴锅停止加热，在磁力搅拌下冷却至室温，并使用0.22μm的滤膜进行过滤，得到AuNPs液体，制备完成的纳米金液体避光保存于4℃的冰箱内；
（3）表面有序排列适配体的纳米金颗粒（Apt@ AuNPs）的制备：
各取10μL 100μmol/L的5’端带有腺嘌呤碱基聚合链的适配体DNA链及5’端带有荧光标记基团的DNA互补链加入同一离心管中，置于摇床中37℃孵育1h，加入1.5 mL步骤（2）得到的纳米金液体，室温下漩涡振荡2 min后，于4℃下混匀反应16 h，使核酸适配体5’端修饰的腺嘌呤碱基链与纳米金胶充分自组装；之后加入60μL 2.0 mol/L NaCl溶液，4℃下陈化24 h；之后以10000 r/min离心分离30 min，二次水洗涤沉淀3次，所得沉淀重新分散在缓冲液A（由10 mmol/L NaH2PO4、10 mmol/L Na2HPO4、500 mmol/L NaCl组成）中，得到表面修饰有序排列适配体的纳米金颗粒（Apt@ AuNPs）溶液；
（4）适配体有序排列的金磁纳米探针（Apt@AuNPs@Fe3O4）制备：
在步骤（1）制得的PEI-Fe3O4颗粒中，加入适量步骤（3）得到的Apt@AuNPs储备溶液，在混匀器震荡后进行磁分离，溶剂会由红色转为透明，重复加入适量Apt@AuNPs储备溶液并进行磁分离，直至溶剂保持红色且不再变色，得到适配体有序排列的金磁纳米探针（Apt@AuNPs@Fe3O4）；其中，所述的PEI-Fe3O4颗粒使用量为0.48mg；其中，所述的Apt@AuNPs溶液使用量总共为600-900μL。
本发明还提供了上述一种基于适配体有序排列的金磁纳米探针在检测大田软海绵酸中的应用。
本发明还提供了一种大田软海绵酸的检测方法，其特征在于：使用上述的基于适配体有序排列的金磁纳米探针。
进一步的，上述的一种大田软海绵酸的检测方法包括如下步骤：向基于适配体有序排列的金磁纳米探针中加入待测浓度大田软海绵酸样品溶液，在室温条件下竞争反应60mins后经毛细管电泳-激光诱导荧光联用检测平台分离检测待测样品溶液中的大田软海绵酸。
进一步的，上述的毛细管电泳-激光诱导荧光检测条件为：激发波长为497nm，发射波长为512nm，色谱柱规格为100μm×500mm的石英毛细管，总流速：0.2mL/min，进样量：0.06-0.1μL。
本发明的显著优点在于：
1、本发明以具有多个氨基基团的聚乙烯亚胺作为氨基来源，得到富含氨基基团的Fe3O4以作为有效磁分离的载体，并结合纳米金与聚腺嘌呤表面较强的结合力制得表面有序排列适配体的纳米金颗粒；如图1所示，本发明所述的金磁纳米探针是由表面有序排列着核酸序列的纳米金颗粒与纳米磁珠结合组成，DNA在纳米金表面可有效结合和自组装有序性，通过纳米金与聚腺嘌呤自组装，实现对纳米金表面的饱和覆盖，从而抑制DNA在纳米金表面的非特异性吸附，解决传统使用巯基小分子进行取代的时间长，对环境不友好等问题，通过调控即实现可编程的纳米金复合物，为构筑具有特定功能与应用的无机纳米超结构提供了支撑。
2、本发明通过纳米金与聚腺嘌呤进行自组装，无需引入巯基基团，降低了适配体的合成成本，并且有效提高了适配体的利用效率，避免了传统巯基适配体使用前需要活化的繁琐步骤，提高了生物纳米界面反应活性，具有很好的经济效益。
附图说明
图1是表面有序排列适配体的纳米金颗粒的示意图。
图2是核酸适配体表面有序排列和无序排列修饰的金磁纳米探针的作用效果对比。
图3是大田软海绵酸OA的激光诱导荧光谱图。
图4是有序排列适配体磁分离传感体系的抗干扰作用。
具体实施方式
为了使本发明所述的内容更加便于理解，下面结合具体实施方式对本发明所述的技术方案做进一步的说明，但是本发明不仅限于此。
本发明中涉及的PEI的分子量为10000。
本发明中涉及的5’端带有腺嘌呤碱基（A）聚合链的适配体DNA链的序列为：
5'-AAAAAAAAAAAAAAAAAAAATTTTTCCACCAACGAGAGTCAGAAAACCATGGTGGG-3'。
本发明中涉及的5’端带有巯基的适配体DNA链的序列为：
5'-SH-TTTTTCCACCAACGAGAGTCAGAAAACCATGGTGGG-3'。
本发明中涉及的5’端带有荧光标记基团的互补DNA链的序列为：
5'-FAM-GGTTTTCTGAC-3'。
实施例1
一种适配体有序排列的金磁纳米探针（Apt@AuNPs@Fe3O4）的制备方法，具体步骤如下：
（1）PEI-四氧化三铁纳米颗粒的制备：
称取0.68g六水合三氯化铁（FeCl3·6H2O）溶于12mL乙二醇（(CH2OH)2）中，制得A溶液；称取0.5g聚乙烯亚胺（PEI）溶于4 mL乙二醇中，制得B溶液；在磁力搅拌下（60℃），将B溶液缓慢加入至A溶液中，向混合溶液中加入1.8g乙酸钠（CH3COONa），继续搅拌10mins，制得溶液C；将所得溶液C转移到水热反应釜中进行反应，水热反应釜置于烘箱内以温度为220℃加热2小时；待反应釜自然冷却到室温以后，依次用去离子水和无水乙醇各超声清洗固相 3次，进行磁分离后，在真空干燥箱中60℃烘干，得到PEI-四氧化三铁纳米颗粒。
（2）纳米金颗粒（AuNPs）的制备：
向250mL的三颈烧瓶中加入98mL的二次水和2mL 50mmol/L的氯金酸（AuCl4H）溶液，充分搅匀后将三颈烧瓶放置于110℃的油浴锅中加热5min并持续磁力搅拌，待瓶中液体沸腾后迅速向其中加入10mL浓度为38.8mmoL/L的柠檬酸钠（C6H5Na3O7）溶液，当混合溶液的颜色在1min内迅速由淡黄色转变为酒红色后继续沸腾回流20mins后移去油浴锅停止加热，在磁力搅拌下冷却至室温，再使用0.22μm的PES滤膜进行过滤，得到AuNPs液体。制备完成的纳米金颗粒液体避光保存于4℃的冰箱内。
（3）表面有序排列适配体的纳米金颗粒（Apt@ AuNPs）的制备：
各取10μL 100μmol/L的5’端带腺嘌呤碱基（A）聚合链的适配体DNA链及5’端带有荧光标记基团的DNA互补链加入同一离心管中，置于摇床中37℃孵育1h，随后向其中加入1.5 mL步骤（2）得到的纳米金颗粒液体（纳米金颗粒的最终浓度为10.0 nmol/L），室温下漩涡振荡2 min后，于4℃下混匀反应16 h，使核酸适配体5’端修饰的腺嘌呤A碱基链与纳米金颗粒充分自组装；之后加入60μL 2.0 mol/L 的NaCl溶液，4℃下陈化24 h；之后10000 r/min离心分离30 min，将所得沉淀用二次水洗涤3次后重新分散在1.5 mL缓冲液A（由10mmol/L NaH2PO4、10 mmol/L Na2HPO4、500 mmol/L NaCl组成）中，得到表面修饰有序排列适配体的纳米金颗粒（Apt@ AuNPs）溶液。
（4）适配体有序排列的金磁纳米探针（Apt@AuNPs@Fe3O4）的制备：
取0.48mg步骤（1）制得的PEI-Fe3O4颗粒，向其中加入适量步骤（3）得到的Apt@AuNPs溶液，在混匀器上震荡后进行磁分离，可观察到溶剂会由红色逐渐转为透明，重复加入适量Apt@AuNPs溶液并进行磁分离，直至磁分离后的溶剂保持红色且不再发生变化，随后去除溶剂，所得固相即为适配体有序排列的金磁纳米探针（Apt@AuNPs@Fe3O4）；其中，所述的Apt@AuNPs溶液使用量总共为800μL。
实施例2
一种适配体无序排列的金磁纳米探针的制备方法，具体步骤如下：
（1）PEI-四氧化三铁纳米颗粒的制备：
称取0.68g六水合三氯化铁（FeCl3·6H2O）溶于12mL乙二醇（(CH2OH)2）中，制得A溶液；称取0.5g聚乙烯亚胺（PEI）溶于4 mL乙二醇中，制得B溶液；在磁力搅拌下（60℃），将B溶液缓慢加入至A溶液中，向混合溶液中加入1.8g乙酸钠（CH3COONa），继续搅拌10mins，制得溶液C；将所得溶液C转移到水热反应釜中进行反应，水热反应釜置于烘箱内以温度为220℃加热2小时；待反应釜自然冷却到室温以后，依次用去离子水和无水乙醇各超声清洗固相 3次，进行磁分离后，在真空干燥箱中60℃烘干，得到PEI-四氧化三铁纳米颗粒。
（2）纳米金颗粒（AuNPs）的制备：
向250mL的三颈烧瓶中加入98mL的二次水和2mL 50mmol/L的氯金酸（AuCl4H）溶液，充分搅匀后将三颈烧瓶放置于110℃的油浴锅中加热5min并持续磁力搅拌，待瓶中液体沸腾后迅速向其中加入10mL浓度为38.8mmoL/L的柠檬酸钠（C6H5Na3O7）溶液，当混合溶液的颜色在1min内迅速由淡黄色转变为酒红色后继续沸腾回流20mins后移去油浴锅停止加热，在磁力搅拌下冷却至室温，再使用0.22μm的PES滤膜进行过滤，得到AuNPs液体。制备完成的纳米金颗粒液体避光保存于4℃的冰箱内。
（3）表面无序排列适配体的纳米金颗粒的制备：
各取10μL 100μmol/L的5’端带疏基的适配体DNA链及5’端带有荧光标记基团的互补DNA链加入同一离心管中，置于摇床中37℃孵育1h，随后向其中加入1.5 mL步骤（2）得到的纳米金颗粒液体（纳米金颗粒的最终浓度为10.0 nmol/L），室温下漩涡振荡2 min后，于4℃下混匀反应16 h；之后加入60μL 2.0 mol/L 的NaCl溶液，4℃下陈化24 h；之后10000 r/min离心分离30 min，将所得沉淀用二次水洗涤3次后重新分散在1.5 mL缓冲液A（由10mmol/L NaH2PO4、10 mmol/L Na2HPO4、500 mmol/L NaCl组成）中，得到表面修饰无序排列适配体的纳米金颗粒溶液。
（4）适配体无序排列的金磁纳米探针的制备：
取0.48mg步骤（1）制得的PEI-Fe3O4颗粒，向其中加入适量步骤（3）得到的表面修饰无序排列适配体的纳米金颗粒溶液，在混匀器上震荡后进行磁分离，可观察到溶剂会由红色逐渐转为透明，重复加入适量表面修饰无序排列适配体的纳米金颗粒并进行磁分离，直至磁分离后的溶剂保持红色且不再发生变化，随后去除溶剂，所得固相即为适配体无序排列的金磁纳米探针；其中，所述的表面修饰无序排列适配体的纳米金颗粒溶液使用量总共为800μL。
实施例3
有序/无序排列适配体磁分离传感体系定量检测大田软海绵酸OA：分别选用实施例1和实施例2中制备得到的0.48mg金磁纳米探针，向其中加入40μL不同浓度的大田软海绵酸（OA）溶液，在室温下竞争反应60mins后磁分离收集上清液，每个样品检测三次，取平均值；荧光测量条件为：毛细管电色谱-激光诱导荧光（LIF）联用检测平台，激发波长为497nm，发射波长为512nm，色谱柱规格为100μm×500mm的石英毛细管，流动相：pH =7.5的PBS缓冲液，流速：0.2mL/min，检测样品体积：0.06-0.1μL，所述PBS缓冲液由10 mmol/L NaH2PO4、10mmol/L Na2HPO4、500 mmol/L NaCl组成。
图2是核酸适配体表面有序排列和无序排列修饰的金磁纳米探针的作用效果对比。由图2可见，在相同荧光测量条件下，有序排列适配体磁分离传感体系对OA的荧光响应强度峰面积达到577216（uV.s），明显高于无序排列适配体磁分离传感体系，是无序排列适配体的1.5倍左右，这说明了基于有序排列的适配体充分在纳米金颗粒外围伸展，呈现有序分布，更有利于特异性识别捕获目标物。
图3是核酸适配体表面有序排列修饰的金磁纳米探针对OA的激光诱导荧光谱图。由图3可见，在有序适配体排列条件下，磁分离传感体系荧光响应强度随着OA浓度的增加而增加，具有良好的线性范围（R2=0.99219），线性方程y=166650x+3159，按照3倍标准差方法计算出检测限为0.01ng/mL。而在相同荧光测量条件下，无序适配体磁分离传感体系对OA的检测限为0.05 ng/mL。说明，在有序适配体排列条件下，磁分离传感体系检测性能好。
图4是有序排列适配体磁分离传感体系的抗干扰作用。由图4可见，有序排列适配体磁分离传感体系特异性良好，在其他毒素的浓度是大田软海绵酸OA浓度20倍的情况下，对OA的荧光响应依然较高，对0.5 ng/mL的OA的荧光强度识别保持在546941-577216（uV.s）之间，而其他毒素在浓度为10ng/mL的识别荧光强度范围只有4936-21796（uV.s），显示了有序排列适配体磁分离传感体系良好的抗干扰作用。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。
SEQUENCE LISTING
<110> 福州大学
<120> 一种基于适配体有序排列的金磁纳米探针及其在大田软海绵酸检测中的应用
<130>
<160> 3
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 1
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa tttttccacc aacgagagtc agaaaaccat ggtggg 56
<210> 2
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 2
tttttccacc aacgagagtc agaaaaccat ggtggg 36
<210> 3
<211> 11
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 3
ggttttctga c 11
Claims (1)
1.一种大田软海绵酸的检测方法，其特征在于：使用基于适配体有序排列的金磁纳米探针；
所述的金磁纳米探针是由有序排列适配体修饰的纳米金颗粒与磁性纳米颗粒结合组成；所述的有序排列适配体由5’端带有腺嘌呤碱基聚合链的适配体DNA链与5’端带有荧光标记基团的DNA互补链杂交形成；
所述的5’端带有腺嘌呤碱基聚合链的适配体DNA链的序列为5'-AAAAAAAAAAAAAAAAAAAATTTTTCCACCAACGAGAGTCAGAAAACCATGGTGGG-3'；所述的5’端带有荧光标记基团的DNA互补链的序列为5'-FAM-GGTTTTCTGAC-3'；所述的磁性纳米颗粒为表面修饰聚乙烯亚胺PEI的Fe3O4球形磁性纳米颗粒PEI-Fe3O4，所述的聚乙烯亚胺的分子量为10000；
所述的金磁纳米探针的制备方法包括以下步骤：
（1）PEI-四氧化三铁磁性纳米颗粒的制备：
称取0.68g六水合三氯化铁溶于12mL乙二醇中，制得溶液A；称取0.5g聚乙烯亚胺溶于4mL乙二醇中，制得溶液B；在60℃磁力搅拌下，将B溶液缓慢加入至A溶液中，向混合溶液中加入1.8g乙酸钠，继续搅拌10min，制得溶液C；将所得溶液C转移到水热反应釜中进行反应，置于220℃烘箱内反应2小时；待反应釜自然冷却到室温以后，依次用去离子水和无水乙醇超声清洗固相，进行磁分离后，在真空干燥箱中60℃烘干，得到PEI-四氧化三铁纳米颗粒PEI-Fe3O4；
（2）纳米金颗粒的制备：
在250mL的三颈烧瓶中加入98mL的二次水和2mL 50mmol/L的氯金酸溶液，充分搅匀后将三颈烧瓶放置于110℃的油浴锅中煮沸5min后持续磁力搅拌；待瓶中液体沸腾后迅速加入10mL浓度为38.8mmoL/L的柠檬酸钠溶液，当混合溶液的颜色在1min内迅速由淡黄色转变为酒红色后继续沸腾回流20min后移去油浴锅停止加热，磁力搅拌下冷却至室温，并使用0.22μm的滤膜进行过滤，得到纳米金颗粒液体；
（3）表面有序排列适配体的纳米金颗粒的制备：
各取10μL 100μmol/L 5’端带有腺嘌呤碱基聚合链的适配体DNA链及5’端带有荧光标记基团的DNA互补链加入同一离心管中，置于摇床中37℃孵育1h，随后向其中加入1.5mL步骤（2）得到的纳米金颗粒液体，室温下漩涡振荡2min后，于4℃下混匀反应16h；之后加入60μL 2.0mol/L NaCl溶液，4℃下陈化24h；之后以10000r/min离心分离30min，所得沉淀用二次水洗涤3次后重新分散在1.5mL缓冲液A中，得到表面有序排列适配体的纳米金颗粒溶液；其中，所述的缓冲液A由10mmol/L NaH2PO4、10mmol/L Na2HPO4、500mmol/L NaCl组成；
（4）适配体有序排列的金磁纳米探针的制备：
在0.48mg步骤（1）制得的PEI-Fe3O4颗粒中，加入600-900μL步骤（3）得到的表面有序排列适配体的纳米金颗粒溶液，在混匀器上混合均匀后进行磁分离，得到适配体有序排列的金磁纳米探针；
所述检测方法包括如下步骤：向基于适配体有序排列的金磁纳米探针中加入待测浓度大田软海绵酸样品溶液，室温下竞争反应60min后磁分离收集上清液，经毛细管电泳-激光诱导荧光联用检测平台分离检测待测样品溶液中的大田软海绵酸；
所述的毛细管电泳-激光诱导荧光检测条件为：激发波长为497nm，发射波长为512nm，色谱柱规格为100μm×500mm的石英毛细管，总流速：0.2mL/min，进样量：0.06-0.1μL，流动相：pH =7.5的PBS缓冲液；所述PBS缓冲液由10mmol/L NaH2PO4、10mmol/L Na2HPO4、500mmol/L NaCl组成。
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|---|---|---|---|---|
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| CN115369153B (zh) * | 2022-10-25 | 2023-03-10 | 中国医学科学院北京协和医院 | 一种Smad4基因检测生物传感器及制备方法 |
Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104630230A (zh) * | 2015-01-06 | 2015-05-20 | 江南大学 | 一组特异识别大田软海绵酸的核酸适配体 |
| CN106102781A (zh) * | 2013-08-29 | 2016-11-09 | 英联邦高等教育系统天普大学 | 用于hiv感染的rna指导的治疗的方法和组合物 |
| CN107841527A (zh) * | 2017-11-07 | 2018-03-27 | 天津科技大学 | 一种利用核酸适配体和磁性材料检测凝血酶的荧光检测方法 |
| CN108883201A (zh) * | 2016-01-25 | 2018-11-23 | 切除生物治疗公司 | Rna指导的治疗hiv感染的方法和组合物 |
| CN109813701A (zh) * | 2019-04-10 | 2019-05-28 | 徐州医科大学附属医院 | 一种快速无标签表面增强拉曼散射检测金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌的方法 |
| CN110702665A (zh) * | 2019-11-14 | 2020-01-17 | 济南大学 | 一种纸基耦合增强拉曼传感器制备及其在大田软海绵酸检测中的应用 |
| CN113670887A (zh) * | 2021-09-28 | 2021-11-19 | 福州大学 | 一种基于核酸适配体的荧光分子探针检测汞离子的方法 |
| KR102351301B1 (ko) * | 2020-08-18 | 2022-01-14 | 홍익대학교세종캠퍼스산학협력단 | 비스페놀 A 검출용 Fe3O4-PEI 나노복합소재의 제조방법, Fe3O4-PEI 나노복합소재 센서 전극의 제조방법 및 비스페놀 A 검출방법 |
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2022
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Patent Citations (8)
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|---|---|---|---|---|
| CN106102781A (zh) * | 2013-08-29 | 2016-11-09 | 英联邦高等教育系统天普大学 | 用于hiv感染的rna指导的治疗的方法和组合物 |
| CN104630230A (zh) * | 2015-01-06 | 2015-05-20 | 江南大学 | 一组特异识别大田软海绵酸的核酸适配体 |
| CN108883201A (zh) * | 2016-01-25 | 2018-11-23 | 切除生物治疗公司 | Rna指导的治疗hiv感染的方法和组合物 |
| CN107841527A (zh) * | 2017-11-07 | 2018-03-27 | 天津科技大学 | 一种利用核酸适配体和磁性材料检测凝血酶的荧光检测方法 |
| CN109813701A (zh) * | 2019-04-10 | 2019-05-28 | 徐州医科大学附属医院 | 一种快速无标签表面增强拉曼散射检测金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌的方法 |
| CN110702665A (zh) * | 2019-11-14 | 2020-01-17 | 济南大学 | 一种纸基耦合增强拉曼传感器制备及其在大田软海绵酸检测中的应用 |
| KR102351301B1 (ko) * | 2020-08-18 | 2022-01-14 | 홍익대학교세종캠퍼스산학협력단 | 비스페놀 A 검출용 Fe3O4-PEI 나노복합소재의 제조방법, Fe3O4-PEI 나노복합소재 센서 전극의 제조방법 및 비스페놀 A 검출방법 |
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Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| Engineering robust aptamers with high affinity by key fragments evolution and terminal fixation;Sai Wang 等;Analytical Chemistry;第94卷(第47期);16282-16289 * |
| Probing Cellular Molecules with PolyA-based Engineered Aptamer Nanobeacon;Lizhen Chen 等;ACS Applied Materials & Interfaces;1-23 * |
| Sensitive detection of the okadaic acid marine toxin in shellfish by Au@Pt NPs/horseradish peroxidase dual catalysis immunoassay;Yinqi Tian 等;Anal. Methods;第14卷;1261-1267 * |
| 吕菊波 等.基于磁性辅助的杂交链反应放大检测三磷酸腺苷.化学通报.2018,第81卷(第1期),59-76. * |
| 陈佳琦 等.一种高灵敏检测贝类中大田软海绵酸的可抛式核酸适配体传感器.分析化学.2019,第4卷(第6期),869-875. * |
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