JP7092787B2 - ろ過デバイス、捕捉デバイス、及びそれらの使用 - Google Patents
ろ過デバイス、捕捉デバイス、及びそれらの使用 Download PDFInfo
- Publication number
- JP7092787B2 JP7092787B2 JP2019549397A JP2019549397A JP7092787B2 JP 7092787 B2 JP7092787 B2 JP 7092787B2 JP 2019549397 A JP2019549397 A JP 2019549397A JP 2019549397 A JP2019549397 A JP 2019549397A JP 7092787 B2 JP7092787 B2 JP 7092787B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- filtration device
- filter
- capture
- well
- layer
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 238000001914 filtration Methods 0.000 title claims description 35
- 210000001808 exosome Anatomy 0.000 claims description 39
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 33
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 26
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 20
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 20
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 20
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 claims description 18
- 239000003365 glass fiber Substances 0.000 claims description 16
- 229920001903 high density polyethylene Polymers 0.000 claims description 13
- 239000004700 high-density polyethylene Substances 0.000 claims description 13
- 238000011045 prefiltration Methods 0.000 claims description 8
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims description 7
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 claims description 7
- 108091034057 RNA (poly(A)) Proteins 0.000 claims description 4
- 239000005388 borosilicate glass Substances 0.000 claims description 4
- 239000000835 fiber Substances 0.000 claims description 4
- 238000011068 loading method Methods 0.000 claims description 4
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 claims description 4
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 claims description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 3
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 claims description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 3
- 210000003567 ascitic fluid Anatomy 0.000 claims description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 claims description 2
- 210000004243 sweat Anatomy 0.000 claims description 2
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 21
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 11
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 8
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 7
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 6
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 6
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 5
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 description 4
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 description 4
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 102000006602 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 4
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 4
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 4
- 229920000098 polyolefin Polymers 0.000 description 4
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 description 4
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 3
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 3
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 3
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- -1 polyethylene Polymers 0.000 description 3
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 3
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 2
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 2
- 108700011259 MicroRNAs Proteins 0.000 description 2
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 2
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 2
- 208000002352 blister Diseases 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 210000004020 intracellular membrane Anatomy 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 description 2
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 108091007413 Extracellular RNA Proteins 0.000 description 1
- 229920000339 Marlex Polymers 0.000 description 1
- 108091005461 Nucleic proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010036790 Productive cough Diseases 0.000 description 1
- 101800001295 Putative ATP-dependent helicase Proteins 0.000 description 1
- 101800001006 Putative helicase Proteins 0.000 description 1
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 description 1
- 108091034135 Vault RNA Proteins 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 210000004381 amniotic fluid Anatomy 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 210000002726 cyst fluid Anatomy 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 210000004251 human milk Anatomy 0.000 description 1
- 235000020256 human milk Nutrition 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 208000017169 kidney disease Diseases 0.000 description 1
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 description 1
- 210000004324 lymphatic system Anatomy 0.000 description 1
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 108091070501 miRNA Proteins 0.000 description 1
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000009832 plasma treatment Methods 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 210000000582 semen Anatomy 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 210000003802 sputum Anatomy 0.000 description 1
- 208000024794 sputum Diseases 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 210000001138 tear Anatomy 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D39/00—Filtering material for liquid or gaseous fluids
- B01D39/14—Other self-supporting filtering material ; Other filtering material
- B01D39/20—Other self-supporting filtering material ; Other filtering material of inorganic material, e.g. asbestos paper, metallic filtering material of non-woven wires
- B01D39/2003—Glass or glassy material
- B01D39/2017—Glass or glassy material the material being filamentary or fibrous
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D29/00—Filters with filtering elements stationary during filtration, e.g. pressure or suction filters, not covered by groups B01D24/00 - B01D27/00; Filtering elements therefor
- B01D29/11—Filters with filtering elements stationary during filtration, e.g. pressure or suction filters, not covered by groups B01D24/00 - B01D27/00; Filtering elements therefor with bag, cage, hose, tube, sleeve or like filtering elements
- B01D29/13—Supported filter elements
- B01D29/23—Supported filter elements arranged for outward flow filtration
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D29/00—Filters with filtering elements stationary during filtration, e.g. pressure or suction filters, not covered by groups B01D24/00 - B01D27/00; Filtering elements therefor
- B01D29/50—Filters with filtering elements stationary during filtration, e.g. pressure or suction filters, not covered by groups B01D24/00 - B01D27/00; Filtering elements therefor with multiple filtering elements, characterised by their mutual disposition
- B01D29/52—Filters with filtering elements stationary during filtration, e.g. pressure or suction filters, not covered by groups B01D24/00 - B01D27/00; Filtering elements therefor with multiple filtering elements, characterised by their mutual disposition in parallel connection
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D36/00—Filter circuits or combinations of filters with other separating devices
- B01D36/04—Combinations of filters with settling tanks
- B01D36/045—Combination of filters with centrifugal separation devices
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B32—LAYERED PRODUCTS
- B32B—LAYERED PRODUCTS, i.e. PRODUCTS BUILT-UP OF STRATA OF FLAT OR NON-FLAT, e.g. CELLULAR OR HONEYCOMB, FORM
- B32B5/00—Layered products characterised by the non- homogeneity or physical structure, i.e. comprising a fibrous, filamentary, particulate or foam layer; Layered products characterised by having a layer differing constitutionally or physically in different parts
- B32B5/02—Layered products characterised by the non- homogeneity or physical structure, i.e. comprising a fibrous, filamentary, particulate or foam layer; Layered products characterised by having a layer differing constitutionally or physically in different parts characterised by structural features of a fibrous or filamentary layer
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B32—LAYERED PRODUCTS
- B32B—LAYERED PRODUCTS, i.e. PRODUCTS BUILT-UP OF STRATA OF FLAT OR NON-FLAT, e.g. CELLULAR OR HONEYCOMB, FORM
- B32B5/00—Layered products characterised by the non- homogeneity or physical structure, i.e. comprising a fibrous, filamentary, particulate or foam layer; Layered products characterised by having a layer differing constitutionally or physically in different parts
- B32B5/22—Layered products characterised by the non- homogeneity or physical structure, i.e. comprising a fibrous, filamentary, particulate or foam layer; Layered products characterised by having a layer differing constitutionally or physically in different parts characterised by the presence of two or more layers which are next to each other and are fibrous, filamentary, formed of particles or foamed
- B32B5/24—Layered products characterised by the non- homogeneity or physical structure, i.e. comprising a fibrous, filamentary, particulate or foam layer; Layered products characterised by having a layer differing constitutionally or physically in different parts characterised by the presence of two or more layers which are next to each other and are fibrous, filamentary, formed of particles or foamed one layer being a fibrous or filamentary layer
- B32B5/26—Layered products characterised by the non- homogeneity or physical structure, i.e. comprising a fibrous, filamentary, particulate or foam layer; Layered products characterised by having a layer differing constitutionally or physically in different parts characterised by the presence of two or more layers which are next to each other and are fibrous, filamentary, formed of particles or foamed one layer being a fibrous or filamentary layer another layer next to it also being fibrous or filamentary
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
- C12N15/1003—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
- C12N15/1003—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor
- C12N15/1017—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor by filtration, e.g. using filters, frits, membranes
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D2239/00—Aspects relating to filtering material for liquid or gaseous fluids
- B01D2239/06—Filter cloth, e.g. knitted, woven non-woven; self-supported material
- B01D2239/065—More than one layer present in the filtering material
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D2239/00—Aspects relating to filtering material for liquid or gaseous fluids
- B01D2239/12—Special parameters characterising the filtering material
- B01D2239/1258—Permeability
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B32—LAYERED PRODUCTS
- B32B—LAYERED PRODUCTS, i.e. PRODUCTS BUILT-UP OF STRATA OF FLAT OR NON-FLAT, e.g. CELLULAR OR HONEYCOMB, FORM
- B32B2250/00—Layers arrangement
- B32B2250/20—All layers being fibrous or filamentary
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B32—LAYERED PRODUCTS
- B32B—LAYERED PRODUCTS, i.e. PRODUCTS BUILT-UP OF STRATA OF FLAT OR NON-FLAT, e.g. CELLULAR OR HONEYCOMB, FORM
- B32B2262/00—Composition or structural features of fibres which form a fibrous or filamentary layer or are present as additives
- B32B2262/10—Inorganic fibres
- B32B2262/101—Glass fibres
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B32—LAYERED PRODUCTS
- B32B—LAYERED PRODUCTS, i.e. PRODUCTS BUILT-UP OF STRATA OF FLAT OR NON-FLAT, e.g. CELLULAR OR HONEYCOMB, FORM
- B32B2307/00—Properties of the layers or laminate
- B32B2307/70—Other properties
- B32B2307/726—Permeability to liquids, absorption
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Geology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Sampling And Sample Adjustment (AREA)
Description
本開示は、ろ過デバイス、捕捉デバイス、並びにエキソソーム及び／又はベシクルから核酸を単離するためのそれらの使用に関する。
本開示は、フィルター及び排出ポートを各々が含む１又は複数のウェルを含むろ過デバイスに関する。
本開示はまた、１又は複数の捕捉ウェルを含む捕捉デバイスにも関し、複数の捕捉ウェルの各々は、プラズマで処理された高密度ポリエチレンを含む。
本開示はさらに、ろ過デバイス及び捕捉デバイスを含むろ過システムにも関する。
本開示はまた、生物サンプル中のエキソソーム及び／又はベシクルから核酸を単離する方法にも関し、その方法は：フィルター及び排出ポートを各々が含む１又は複数のウェルを含むマルチウェルインサートの少なくとも１つのウェルに生物サンプルをローディングすること；エキソソーム及び／又はベシクルをフィルター中に捕捉するために、生物サンプルの少なくとも一部をフィルターに通すこと；エキソソーム及び／又はベシクルを溶解すること；並びにエキソソーム及び／又はベシクルから核酸を単離すること、を含む。
１つの態様では、本開示は、フィルター及び排出ポートを各々が含む１又は複数のウェルを含むろ過デバイスに関する。「ウェル」とは、内壁によって定められた縦方向の孔である。ある実施形態では、ウェルは、管状、球状、又は円錐状の孔であってよい。
ある実施形態では、フィルターは第一及び第二の部分を含み、これらは、第一及び第二の層であってよい。第一の部分は、第二の部分と異なる保持率を有していてよい。層は、それ自体を別の層と区別する固定された境界を有していてよいが、部分は、そのような固定された境界を有していなくてもよく、フィルターのいずれの部分を含んでいてもよい。ある実施形態では、フィルターは、第一、第二、及び第三の部分又は層を含む。第一、第二、及び第三の部分などの異なる部分は、重なっていなくてもよい。ある実施形態では、上流にある部分又は層の保持率は、下流にある部分又は層の保持率よりも大きくてよい。本明細書において、ろ液は、上流にある部分又は層と接触し、その後、下流にある層の部分と接触する。追加の実施形態では、第一、第二、及び第三の部分又は層のうちの少なくとも１つ、２つ、又はすべてが、少なくとも１つのガラス繊維を含む。さらなる実施形態
では、ガラス繊維は、ホウケイ酸ガラス繊維である。なおさらなる実施形態では、第一の部分又は層は、第一のガラス繊維を含み、第二の部分又は層は、第二のガラス繊維を含み、第一及び第二のガラス繊維は、異なっている。なお追加の実施形態では、第一、第二、及び第三の部分又は層は、それぞれ、第一、第二、及び第三のガラス繊維を含む。第一、第二、及び第三のガラス繊維は、同じであっても、又は異なっていてもよい。
では、ガラス繊維は、ホウケイ酸ガラス繊維である。なおさらなる実施形態では、第一の部分又は層は、第一のガラス繊維を含み、第二の部分又は層は、第二のガラス繊維を含み、第一及び第二のガラス繊維は、異なっている。なお追加の実施形態では、第一、第二、及び第三の部分又は層は、それぞれ、第一、第二、及び第三のガラス繊維を含む。第一、第二、及び第三のガラス繊維は、同じであっても、又は異なっていてもよい。
ある実施形態では、第一の部分又は層は、第二の部分又は層の上にあり、したがって、第二の部分又は層の前に、最初に生物サンプルと接触する。追加の実施形態では、第一の部分又は層は、第二の部分又は層の真上にあり、第二の部分又は層と接触している。さらなる実施形態では、第二の部分又は層は、第三の部分又は層の上にある。なお追加の実施形態では、第一の層は、少なくとも約０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、又は１．０ｍｍの厚さを有する。第一の層は、約４．０、３．５、３．０、２．９、２．８、２．７、２．６、２．５、２．４、２．３、２．２、２．１、２．０、１．９、１．８、１．７、１．６、１．５、１．４、１．３、１．２、１．１、１．０、０．９、０．８、０．７、０．６、０．５、０．４、０．３、０．２、０．１ｍｍ、又は０．１ｍｍ未満の厚さを有し得る。追加の実施形態では、第一の層は、約０．０１～４．０（約０．０１～約４．０）ｍｍ、０．０２～３．０ｍｍ、０．１～１．０ｍｍ、０．２～０．３ｍｍ、０．２～０．４ｍｍ、０．１～３．０ｍｍ、０．２５～０．３０ｍｍ、又は０．１～０．７ｍｍの厚さを有する。なおさらなる実施形態では、第二の層は、少なくとも約０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、又は１．０ｍｍの厚さを有する。第二の層は、約４．０、３．５、３．０、２．５、２．０、２．９、２．８、２．７、２．６、２．５、２．４、２．３、２．２、２．１、２．０、１．９、１．８、１．７、１．６、１．５、１．４、１．３、１．２、１．１、１．０、０．９、０．８、０．７、０．６、０．５、０．４、０．３、０．２、０．１ｍｍ、又は０．１ｍｍ未満の厚さを有し得る。追加の実施形態では、第二の層は、約０．１～４．０（約０．１～約４．０）ｍｍ、０．１～３．０ｍｍ、０．１～２．０ｍｍ、０．１～１．０ｍｍ、０．２～０．３ｍｍ、０．２～４．０ｍｍ、０．２～３．０ｍｍ、０．２～２．０ｍｍ、０．２～１．５ｍｍ、又は０．１～０．７ｍｍの厚さを有する。ある実施形態では、第三の層は、少なくとも約０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、又は１．０ｍｍの厚さを有する。第三の層は、約４．０、３．５、３．０、２．９、２．８、２．７、２．６、２．５、２．４、２．３、２．２、２．１、２．０、１．９、１．８、１．７、１．６、１．５、１．４、１．３、１．２、１．１、１．０、０．９、０．８、０．７、０．６、０．５、０．４、０．３、０．２、０．１ｍｍ、又は０．１ｍｍ未満の厚さを有し得る。追加の実施形態では、第三の層は、約０．１～４．０（約０．１～約４．０）ｍｍ、０．１～３．０ｍｍ、０．１～２．０ｍｍ、０．１～１．０ｍｍ、０．２～０．３ｍｍ、０．２～４．０ｍｍ、０．２～３．０ｍｍ、０．２～２．０ｍｍ、０．２～１．５ｍｍ、又は０．１～０．７ｍｍの厚さを有する。
ある実施形態では、フィルターの保持率は、約０．６ミクロン～約１．５ミクロンの径を有するベシクルの場合、５０％、７５％、９０％、又は９９％超である。１つの実施形態では、フィルター材は、径が約０．７ミクロン～約１．６ミクロンのサイズであるベシクルを捕捉する。１つの実施形態では、フィルター材は、サイズが約０．０２０～約１．０ミクロンの範囲内であるエキソソーム又は他のベシクルを捕捉する。保持率は、粒子保持に依存し得る。
ある実施形態では、第一の部分又は層は、少なくとも約０．１、０．２、０．３、０．
４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．１、１．２、１．３、又は１．４μｍの粒子保持を有する。第一の部分又は層は、少なくとも約５．０、４．０、３．０、２．９、２．８、２．７、２．６、２．５、２．４、２．３、２．２、２．１、２．０、１．９、１．８、１．７、１．６、１．５、１．４、１．３、１．２、１．１、１．０、０．９、０．８、０．７、０．６、０．５、０．４、０．３、０．２、０．１μｍ、又は０．１μｍ未満の粒子保持を有し得る。追加の実施形態では、第一の部分又は層は、約０．１～６．０（約０．１～約４．０）μｍ、０．４～３．０μｍ、０．２～２．０μｍ、０．２～１．５μｍ、０．５～４．０μｍ、０．４～３．０μｍ、０．５～２．０μｍ、０．６～２．０、又は１．０～２．０μｍの粒子保持を有する。なおさらなる実施形態では、第二の部分又は層は、少なくとも約０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、又は１．０μｍの粒子保持を有する。第二の部分又は層は、約５．０、４．０、３．５、３．０、２．５、２．０、２．９、２．８、２．７、２．６、２．５、２．４、２．３、２．２、２．１、２．０、１．９、１．８、１．７、１．６、１．５、１．４、１．３、１．２、１．１、１．０、０．９、０．８、０．７、０．６、０．５、０．４、０．３、０．２、０．１μｍ、又は０．１μｍ未満の粒子保持を有し得る。追加の実施形態では、第二の部分又は層は、約０．１～４．０（約０．１～約４．０）μｍ、０．４～３．０μｍ、０．２～２．０μｍ、０．４～１．０μｍ、０．４～１．５μｍ、０．２～２．０μｍ、０．２～３．０μｍ、０．２～１．０μｍ、０．５～１．０μｍ、又は０．１～１．０μｍの粒子保持を有する。第一の部分又は層は、第二の部分又は層と異なる粒子保持を有していてよい。
４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．１、１．２、１．３、又は１．４μｍの粒子保持を有する。第一の部分又は層は、少なくとも約５．０、４．０、３．０、２．９、２．８、２．７、２．６、２．５、２．４、２．３、２．２、２．１、２．０、１．９、１．８、１．７、１．６、１．５、１．４、１．３、１．２、１．１、１．０、０．９、０．８、０．７、０．６、０．５、０．４、０．３、０．２、０．１μｍ、又は０．１μｍ未満の粒子保持を有し得る。追加の実施形態では、第一の部分又は層は、約０．１～６．０（約０．１～約４．０）μｍ、０．４～３．０μｍ、０．２～２．０μｍ、０．２～１．５μｍ、０．５～４．０μｍ、０．４～３．０μｍ、０．５～２．０μｍ、０．６～２．０、又は１．０～２．０μｍの粒子保持を有する。なおさらなる実施形態では、第二の部分又は層は、少なくとも約０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、又は１．０μｍの粒子保持を有する。第二の部分又は層は、約５．０、４．０、３．５、３．０、２．５、２．０、２．９、２．８、２．７、２．６、２．５、２．４、２．３、２．２、２．１、２．０、１．９、１．８、１．７、１．６、１．５、１．４、１．３、１．２、１．１、１．０、０．９、０．８、０．７、０．６、０．５、０．４、０．３、０．２、０．１μｍ、又は０．１μｍ未満の粒子保持を有し得る。追加の実施形態では、第二の部分又は層は、約０．１～４．０（約０．１～約４．０）μｍ、０．４～３．０μｍ、０．２～２．０μｍ、０．４～１．０μｍ、０．４～１．５μｍ、０．２～２．０μｍ、０．２～３．０μｍ、０．２～１．０μｍ、０．５～１．０μｍ、又は０．１～１．０μｍの粒子保持を有する。第一の部分又は層は、第二の部分又は層と異なる粒子保持を有していてよい。
追加の実施形態では、ろ過デバイスは、第三の部分又は層を有していてよい。第三の部分又は層は、第二の部分又は層の下にあってよい。第二の部分又は層は、少なくとも約０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、又は１．０μｍの粒子保持を有する。第三の部分又は層は、約５．０、４．０、３．５、３．０、２．５、２．０、２．９、２．８、２．７、２．６、２．５、２．４、２．３、２．２、２．１、２．０、１．９、１．８、１．７、１．６、１．５、１．４、１．３、１．２、１．１、１．０、０．９、０．８、０．７、０．６、０．５、０．４、０．３、０．２、０．１μｍ、又は０．１μｍ未満の粒子保持を有し得る。追加の実施形態では、第三は、約０．１～４．０（約０．１～約４．０）μｍ、０．４～３．０μｍ、０．２～２．０μｍ、０．４～１．０μｍ、０．４～１．５μｍ、０．２～２．０μｍ、０．２～３．０μｍ、０．２～１．０μｍ、０．５～１．０μｍ、又は０．１～１．０μｍの粒子保持を有する。
追加の実施形態では、フィルターは、約５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５ｍｍ３、又は２５ｍｍ３超の総体積（例えば、面積×厚さ）を有し得る。フィルターは、約１００、９０、８０、７０、６０、５０、４０、３５、３０、２９、２８、２７、２６ｍｍ３、又は２６ｍｍ３未満の総体積（例えば、面積×厚さ）を有し得る。追加の実施形態では、フィルターは、約５～１００（約５～約５０）ｍｍ３、１０～５０ｍｍ３、１５～４０ｍｍ３、又は１５～３０ｍｍ３の総体積を有する。
ある実施形態では、ろ過デバイスは、さらに、本明細書で述べるフィルターの上流側面上にプレフィルターを含んでもよい。プレフィルターは、フィルターを固定するのに有効であり得る。ある実施形態では、プレフィルターは、多孔質ポリオレフィンを含む。多孔質ポリオレフィンは、多孔質ポリエチレンであってよい。
追加の実施形態では、プレフィルターは、約０．２、０．３、０．４、０．５、０．６
、０．７、０．８、０．９、１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、又は１．５ｍｍ、又は１．５ｍｍ超の厚さを有する。プレフィルターは、約３．０、２．９、２．８、２．７、２．６、２．５、２．４、２．３、２．２、２．１、２．０、１．９、１．８、１．７、１．６、１．５、１．４、１．３、１．２、１．１、１．０、０．９、０．８、０．７、０．６、０．５、０．４、０．３、０．２、又は０．１ｍｍ、又は０．１ｍｍ未満の厚さを有し得る。追加の実施形態では、プレフィルターは、約０．２～５．０（約０．２～約５．０）ｍｍ、０．５～４．０ｍｍ、０．８～３．０ｍｍ、１．０～２．０ｍｍ、又は１．２～１．７ｍｍの厚さを有する。
、０．７、０．８、０．９、１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、又は１．５ｍｍ、又は１．５ｍｍ超の厚さを有する。プレフィルターは、約３．０、２．９、２．８、２．７、２．６、２．５、２．４、２．３、２．２、２．１、２．０、１．９、１．８、１．７、１．６、１．５、１．４、１．３、１．２、１．１、１．０、０．９、０．８、０．７、０．６、０．５、０．４、０．３、０．２、又は０．１ｍｍ、又は０．１ｍｍ未満の厚さを有し得る。追加の実施形態では、プレフィルターは、約０．２～５．０（約０．２～約５．０）ｍｍ、０．５～４．０ｍｍ、０．８～３．０ｍｍ、１．０～２．０ｍｍ、又は１．２～１．７ｍｍの厚さを有する。
ある実施形態では、多孔質ポリオレフィンの細孔サイズは、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、又は１５μｍ、又は１５μｍ超を有する。多孔質ポリオレフィンの細孔サイズは、約１００、９０、８０、７０、６０、５０、又は４０μｍ、又は４０μｍ未満を有する。
ある実施形態では、排出ポートの出口開口部は、約０．２５、０．３０、０．３５、０．４０、０．４５、０．５０、０．５５、０．５６、０．５７、０．５８、０．５９、０．６０、０．６１、０．６２、０．６３、０．６４、０．６５、０．６６、０．６７、０．６８、０．６９、０．７０、０．７１、０．７２、０．７３、０．７４、０．７５、０．７６、０．７７、０．７８、０．７９、０．８０、０．８１、０．８２、０．８３、０．８４、０．８５、０．８６、０．８７、０．８８、０．８９、０．９０、０．９１、０．９２、０．９３、０．９４、０．９５、０．９６、０．９７、０．９８、０．９９、１．００、１．０５、１．１０、１．１５、１．２０、１．２５、１．３０、１．３５、１．４０、１．４５、１．５０、１．５５、１．６０、１．６５、１．７０、１．７５、１．８０、１．８５、１．９０、１．９５、２．００、２．０５、２．１０、２．１５、２．２０、２．２５、又は２．３０ｍｍ、又は２．３０ｍｍ未満である少なくとも１つの径を有する。追加の実施形態では、排出ポートの出口開口部は、約０．０１、０．０５、０．１０、０．１５、０．２０、０．２５、０．３０、０．３５、０．４０、０．４５、０．５０、０．５５、０．６０、０．６５、０．７０、０．７５、０．８０、０．８５、０．９０、０．９５、１．００、１．０５、又は１．１０ｍｍ超である少なくとも１つの径を有する。さらなる実施形態では、排出ポートの出口開口部は、約０．０１～０．６１ｍｍ、０．１０～２．５（約０．１～約２．５）ｍｍ、０．２０～２．３ｍｍ、０．４５～０．７０ｍｍ、０．４０～２．０ｍｍ、０．４５～１．１５ｍｍ、０．４０～１．１０ｍｍ、０．０１～０．７０ｍｍ、０．３０～０．７０ｍｍ、又は０．５０～０．７０ｍｍである少なくとも１つの径を有する。
追加の実施形態では、フィルターは、ウェルの排出ポートの上流に、例えば排出ポートと接触して、配置されてよい。
溶解バッファーが１又は複数のウェルに配置されてよく、エキソソームを溶解する。溶解反応は、インキュベーション時間を必要とし得る。
溶解バッファーは、３７℃で少なくとも５又は１０分間にわたってフィルター中に維持されてよく、その後、遠心分離によってフィルターから移される。インキュベーション時のバッファーの保持時間は、排出ポートの出口開口部のサイズ又は寸法に依存し得る。エキソソーム溶解の効率は、フィルター中での溶解バッファーとの５又は１０分間の接触後に飽和し得る。エキソソーム溶解の効率は、フィルター中でのエキソソームとの接触状態の維持が５分間未満である場合、５０％未満減少し得る。排出ポートの出口開口部のサイズ又は径が、フィルター中でのバッファーの最も効率的な保持時間を決定し得る。排出ポートの出口開口部が大き過ぎると、バッファーが通過するのが早過ぎる可能性があり、小さ過ぎると、バッファーが詰まる可能性がある。
本明細書で用いられる場合、例えば組成物中の成分の量、濃度、体積、プロセス温度、プロセス時間、収率、流量、圧力、径、長さ、及び類似の値、並びにそれらの範囲を修飾する、「約」の用語は、例えば、化合物、組成物、濃縮物、又は使用製剤を作製するために用いられる典型的な測定及び取り扱い手順を通して；これらの手順における不慮の誤りを通して；方法を実施するために用いられる出発物質若しくは成分の製造、入手源、又は純度の相違を通して；並びに類似の考慮事項を通して発生し得る数値量の変動を意味する。「約」の用語はまた、例えば、特定の初期濃度若しくは混合物を有する組成物、製剤、又は細胞培養物の老化に起因して異なる量、及び特定の初期濃度若しくは混合物を有する組成物又は製剤の混合又は処理に起因して異なる量も包含する。「約」の用語によって修飾されるかどうかに関わらず、本明細書に添付される請求項は、これらの量の同等量を含む。「約」の用語は、さらに、記載された参照値に類似する値の範囲も意味し得る。ある特定の実施形態では、「約」の用語は、記載された参照値の１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１パーセント、又は１パーセント未満以内に入る値の範囲を意味する。
ある実施形態では、ろ過デバイスは、横列に並んだ複数のウェルを有するストリップの形態である。さらなる実施形態では、ろ過デバイスは、８ウェルのフィルターストリップである。追加の実施形態では、ろ過デバイスは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２４、３６、４８、６０、７２、８４、９６、又は９６超のウェルを有する。ウェルは、横列及び／又は縦列に配置されてよい。
別の態様では、本開示は、１又は複数の捕捉ウェルを含む捕捉デバイスに関する。ある実施形態では、捕捉ウェルの各々は、高密度ポリエチレン（ＨＤＰＥ）を含む。追加の実施形態では、ＨＤＰＥは、その表面を含めて、プラズマイオン化ガスによって処理されてよい。プラズマ処理の後、ｍＲＮＡポリＡテールを含むＲＮＡが、ＨＤＰＥプラスチック表面上に固定されたオリゴ（ｄＴ）を用いて単離され得る。例えば、カルボキシル基（ＣＯＯ－）は、オリゴ（ｄＴ）２０の５’アミン（ＮＨ２＋）と架橋することが可能であり得る。ＨＤＰＥは、少なくとも約０．８００、０．８５０、０．９００、０．９１０、０．９２０、０．９３０、０．９４０、０．９５０、又は０．９６０ｇ／ｃｍ３の密度を有し得る。ＨＤＰＥは、約１．０００、０．９９０、０．９８０、０．９７０、０．９６０、０．９５０ｇ／ｃｍ３、又は０．９５０ｇ／ｃｍ３未満の密度を有し得る。例えば、ＨＤＰＥは、約０．９４０～０．９６５（０．９４０ｇ／ｃｍ３～０．９６５ｇ／ｃｍ３）の密度を有し得る。例えば、ＨＤＰＥは、Ｍａｒｌｅｘ９０１２であってよい。
なお追加の実施形態では、捕捉デバイスは、横列に並んだ複数のウェルを有するストリップの形態である。さらなる実施形態では、捕捉デバイスは、８ウェルのフィルターストリップである。追加の実施形態では、捕捉デバイスは、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２４、３６、４８、６０、７２、８４、９６、又は９６超のウェルを有する。ウェルは、横列及び／又は縦列に配置されてよい。
別の態様では、本開示は、（ｉ）上記で述べたろ過デバイス、及び（ｉｉ）上記で述べた捕捉デバイスを含むろ過システムに関する。ろ過デバイスは、捕捉デバイスに嵌め込むように構成されていてよい。
細胞外環境中における核酸分解の速度が速いことに起因して、従来の理解では、多くの組織が診断ターゲットとして適する核酸を提供することができないと示唆されており、それは、核酸が、検出のための鋳型として用いることができる前に分解されるからである。しかし、細胞外ＲＮＡ（さらには、本明細書で開示される他のバイオマーカー）は、１又
は複数の異なる種類の膜粒子（５０～８０ｎｍの範囲のサイズ）、エキソソーム（５０～１００ｎｍの範囲のサイズ）、エキソソーム様ベシクル（２０～５０ｎｍの範囲のサイズ）、及びマイクロベシクル（１００～１０００ｎｍの範囲のサイズ）を伴っている場合がある。他の種類のベシクルも捕捉することができ、限定されないが、ナノベシクル、ベシクル、デキソソーム、ブレブ、プロスタソーム、マイクロ粒子、腔内ベシクル、エンドソーム様ベシクル、又はエキソサイトーシスされたベシクルが挙げられる。本明細書で用いられる場合、「エキソソーム」及び「ベシクル」の用語は、本分野におけるそれぞれの通常の意味に従って用いられ、細胞膜又は細胞内膜のいずれかに由来する排出されたいずれの膜結合粒子をも含むとしても解釈されるものとする。明確性のために、明示的にそれ以外が記載されていない限り、様々な種類のベシクルを表す用語は、概してベシクル又はエキソソームを意味するものとする。エキソソームはまた、細胞膜の一部分の脱出性膨出（herniated evagination）（例：ブレブ形成）分離及び封止から、又は腫瘍由来マイクロ
ＲＮＡ又は細胞内タンパク質が挙げられるが限定されないエキソソーム内腔に含有される分子と共に腫瘍由来タンパク質と選択的に結合する宿主循環に由来する表面結合分子を含む腫瘍起源の様々な膜結合タンパク質を含有する、細胞内膜に囲まれたいずれかのベシクル状構造体の放出から、のいずれによっても生ずる脂質二重膜に囲まれた細胞由来構造も含み得る。エキソソームはまた、膜フラグメントも含み得る。循環腫瘍由来エキソソーム（ＣＴＥ）は、本明細書で言及される場合、腫瘍細胞から循環又は体液中に排出されたエキソソームである。ＣＴＥは、起源細胞特異的エキソソームと同様に、典型的には、非常に特異的に体液からそれらを単離することを可能とする固有のバイオマーカーを有する。本明細書で開示されるいくつかの実施形態によって実現されるように、そのような種類のベシクルのいずれかの選択的単離により、数多くの疾患の診断又は予後診断に有用であり得るそれらのＲＮＡ（ｍＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、及びｓｉＲＮＡなど）の単離及び分析が可能となる。したがって、エキソソーム及びマイクロベシクル（ＥＭＶ）は、疾患のためのバイオマーカーを提供することができる（限定されないが、腎疾患の評価のための尿からのベシクルの単離など）。本明細書で開示されるデバイス及び方法を用いて抽出することができるターゲット化合物としては、タンパク質、脂質、抗体、ビタミン、ミネラル、ステロイド、ホルモン、コレステロール、アミノ酸、ベシクル、エキソソーム、及び核酸が挙げられる。
は複数の異なる種類の膜粒子（５０～８０ｎｍの範囲のサイズ）、エキソソーム（５０～１００ｎｍの範囲のサイズ）、エキソソーム様ベシクル（２０～５０ｎｍの範囲のサイズ）、及びマイクロベシクル（１００～１０００ｎｍの範囲のサイズ）を伴っている場合がある。他の種類のベシクルも捕捉することができ、限定されないが、ナノベシクル、ベシクル、デキソソーム、ブレブ、プロスタソーム、マイクロ粒子、腔内ベシクル、エンドソーム様ベシクル、又はエキソサイトーシスされたベシクルが挙げられる。本明細書で用いられる場合、「エキソソーム」及び「ベシクル」の用語は、本分野におけるそれぞれの通常の意味に従って用いられ、細胞膜又は細胞内膜のいずれかに由来する排出されたいずれの膜結合粒子をも含むとしても解釈されるものとする。明確性のために、明示的にそれ以外が記載されていない限り、様々な種類のベシクルを表す用語は、概してベシクル又はエキソソームを意味するものとする。エキソソームはまた、細胞膜の一部分の脱出性膨出（herniated evagination）（例：ブレブ形成）分離及び封止から、又は腫瘍由来マイクロ
ＲＮＡ又は細胞内タンパク質が挙げられるが限定されないエキソソーム内腔に含有される分子と共に腫瘍由来タンパク質と選択的に結合する宿主循環に由来する表面結合分子を含む腫瘍起源の様々な膜結合タンパク質を含有する、細胞内膜に囲まれたいずれかのベシクル状構造体の放出から、のいずれによっても生ずる脂質二重膜に囲まれた細胞由来構造も含み得る。エキソソームはまた、膜フラグメントも含み得る。循環腫瘍由来エキソソーム（ＣＴＥ）は、本明細書で言及される場合、腫瘍細胞から循環又は体液中に排出されたエキソソームである。ＣＴＥは、起源細胞特異的エキソソームと同様に、典型的には、非常に特異的に体液からそれらを単離することを可能とする固有のバイオマーカーを有する。本明細書で開示されるいくつかの実施形態によって実現されるように、そのような種類のベシクルのいずれかの選択的単離により、数多くの疾患の診断又は予後診断に有用であり得るそれらのＲＮＡ（ｍＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、及びｓｉＲＮＡなど）の単離及び分析が可能となる。したがって、エキソソーム及びマイクロベシクル（ＥＭＶ）は、疾患のためのバイオマーカーを提供することができる（限定されないが、腎疾患の評価のための尿からのベシクルの単離など）。本明細書で開示されるデバイス及び方法を用いて抽出することができるターゲット化合物としては、タンパク質、脂質、抗体、ビタミン、ミネラル、ステロイド、ホルモン、コレステロール、アミノ酸、ベシクル、エキソソーム、及び核酸が挙げられる。
いくつかの実施形態では、生体液サンプルが処理される。本明細書で用いられる場合、「体液」には、その通常の意味が与えられるものとし、例えば、血液、血漿、血清、尿、痰、髄液、胸腔内液、乳頭吸引液、リンパ液、気道、腸管、及び泌尿生殖管の液体、涙液、唾液、母乳、リンパ系からの液体、精液、脳脊髄液、器官内系液（intra-organ system
fluid）、腹水、腫瘍嚢胞液、羊水、並びにこれらの組み合わせを含むが、これらに限定されない、対象の身体から採取された液体のサンプルも意味し得る。
fluid）、腹水、腫瘍嚢胞液、羊水、並びにこれらの組み合わせを含むが、これらに限定されない、対象の身体から採取された液体のサンプルも意味し得る。
別の態様では、本開示は、生物サンプル中のエキソソーム及び／又はベシクルから核酸を単離する方法に関し、その方法は、フィルター及び排出ポートを各々が含む１又は複数のウェルを含み、フィルターは第一及び第二の部分又は層を含んでいる、マルチウェルインサートの少なくとも１つのウェルに生物サンプルをローディングすること；エキソソーム及び／又はベシクルをフィルター中に捕捉するために、生物サンプルの少なくとも一部をフィルターに通すこと；
エキソソーム及び／又はベシクルを溶解すること；並びにエキソソーム及び／又はベシクルから核酸を単離すること、を含む。ある実施形態では、マルチウェルインサートは、上記で述べたろ過デバイスであってよい。追加の実施形態では、単離することは、エキソソーム及び／又はベシクルから捕捉ウェルへ核酸を回収することを含む。捕捉ウェルは、捕捉デバイスにおいて上記で述べたＨＤＰＥを含んでよい。なお追加の実施形態では、単離することは、マルチウェルインサートの１又は複数のウェルから１又は複数の捕捉ウェルへ核酸を回収することを含む。さらなる実施形態では、１又は複数の捕捉ウェルは、上記
で述べた捕捉デバイスであってよい。
エキソソーム及び／又はベシクルを溶解すること；並びにエキソソーム及び／又はベシクルから核酸を単離すること、を含む。ある実施形態では、マルチウェルインサートは、上記で述べたろ過デバイスであってよい。追加の実施形態では、単離することは、エキソソーム及び／又はベシクルから捕捉ウェルへ核酸を回収することを含む。捕捉ウェルは、捕捉デバイスにおいて上記で述べたＨＤＰＥを含んでよい。なお追加の実施形態では、単離することは、マルチウェルインサートの１又は複数のウェルから１又は複数の捕捉ウェルへ核酸を回収することを含む。さらなる実施形態では、１又は複数の捕捉ウェルは、上記
で述べた捕捉デバイスであってよい。
ある実施形態では、通すことは、マルチウェルインサートの１又は複数のウェルから１又は複数のウェルを含むプレートへ生物サンプルを通すことを含む。追加の実施形態では、回収することは、マルチウェルインサートを遠心分離することを含む。さらなる実施形態では、通すことは、マルチウェルインサートを遠心分離することを含む。
ある実施形態では、生体液サンプルとしては、ＲＮＡ、ＤＮＡ、タンパク質、エキソソーム、ベシクル、他の循環膜結合核酸及び／又はタンパク質含有構造体、並びに炭水化物から成る群より選択されるサンプルが挙げられ得る。ＲＮＡは、ポリ（Ａ）＋ＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ｔＲＮＡ、及びｖＲＮＡから成る群より選択されるＲＮＡを含み得る。
ある実施形態では、生物サンプルは、血液、血清、血漿、尿、汗、唾液、腹水、腹腔液、培地、及び便から成る群より選択される。さらなる実施形態では、本明細書で述べる方法は、対象から生物サンプルを採取することを含み得る。対象は、ヒト、動物、又は植物であってよい。
様々な量の血漿サンプル（８００μＬ～１００μＬ）を各デバイスに適用した。フィルターは、Ａｈｌｓｔｒｏｍのフィルター＃１１１（粒子保持；１．２μｍ）及び＃１５１（粒子保持；０．７μｍ）を用いる。さらに、プレフィルターは、Ｐｏｒｅｘ ＩＲＭ－１５６４（Ｐｏｒｅｘ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、多孔質ポリエチレン、厚さ；１．５３ｍｍ、細孔サイズ；１５～４０μｍ）を用いる。
細胞外ベシクル（ＥＶ）をフィルター膜上に捕捉した後、溶解バッファーを添加することによってＥＶを溶解し、ポリ（Ａ）＋ｍＲＮＡハイブリダイゼーションのために、オリゴ（ｄＴ）固定マイクロタイタープレートへ移した。ｍＲＮＡハイブリダイゼーションの後、ウェル中において、ランダムヘキサマー及び特異的ｍＲＮＡを用いて直接ｃＤＮＡを合成した。トランスフォーミング増殖因子ベータ（ＴＧＦ－β）、グリセルアルデヒド３リン酸脱水素酵素（ＧＡＰＤＨ）、及びベータ－アクチン（ＡＣＴＢ）を、リアルタイムｑＰＣＲ装置（ＶｉｉＡ ７、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ－ＡＢＩ）により、ＳＹＢＲグリーンケミストリーを用いることによって増幅した。低い閾値サイクル（Ｃｔ）値は、エキソソームに対する捕捉率がより良好であることを意味する。図１に示されるように、他の実施例と比較して最も良い性能が実施例３で得られた。
様々な量（４００μＬ、２００μＬ、及び１００μＬ）の血漿サンプルを、実施例１及び比較例１をデバイスに取り付けたＥＶプレート（４００μＬ／ウェル）に適用した。遠
心分離によってフィルター膜上にＥＶを捕捉した。溶解バッファーを添加することによって捕捉したＥＶを溶解し、ポリ（Ａ）＋ｍＲＮＡハイブリダイゼーションのために、オリゴ（ｄＴ）固定マイクロタイタープレートへ移した。ｍＲＮＡハイブリダイゼーションの後、ウェル中において、ランダムヘキサマー及び特異的ｍＲＮＡを用いて直接ｃＤＮＡを合成し、トランスフォーミング増殖因子ベータ（ＴＧＦ－β）、グリセルアルデヒド３リン酸脱水素酵素（ＧＡＰＤＨ）、及びベータ－アクチン（ＡＣＴＢ）を、ＳＹＢＲグリーンの化学的性質を用いてリアルタイムｑＰＣＲ装置（ＶｉｉＡ ７、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ－ＡＢＩ）により増幅した。出口開口部が大きいことにより（比較例１）、溶解バッファーはフィルター層を通過してしまい、その結果、実施例１と比較して低い性能であった。出口開口部の径のみが異なる同じフィルターを用いた追加の実験を行い、結果を以下の表２に示す。
着色した溶解バッファー（６０μＬ）を、上記のフィルターストリップを有する各ウェル(ｎ＝３）に適用し、直ちにタイマーをスタートさせた。ストリップをディープウェル
プレート上に配置し、上部をシールし、３７℃のインキュベーター中に５分間入れる。５分間のインキュベーション後、各ウェルにおける溶解バッファーの保持を測定した。
心分離によってフィルター膜上にＥＶを捕捉した。溶解バッファーを添加することによって捕捉したＥＶを溶解し、ポリ（Ａ）＋ｍＲＮＡハイブリダイゼーションのために、オリゴ（ｄＴ）固定マイクロタイタープレートへ移した。ｍＲＮＡハイブリダイゼーションの後、ウェル中において、ランダムヘキサマー及び特異的ｍＲＮＡを用いて直接ｃＤＮＡを合成し、トランスフォーミング増殖因子ベータ（ＴＧＦ－β）、グリセルアルデヒド３リン酸脱水素酵素（ＧＡＰＤＨ）、及びベータ－アクチン（ＡＣＴＢ）を、ＳＹＢＲグリーンの化学的性質を用いてリアルタイムｑＰＣＲ装置（ＶｉｉＡ ７、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ－ＡＢＩ）により増幅した。出口開口部が大きいことにより（比較例１）、溶解バッファーはフィルター層を通過してしまい、その結果、実施例１と比較して低い性能であった。出口開口部の径のみが異なる同じフィルターを用いた追加の実験を行い、結果を以下の表２に示す。
着色した溶解バッファー（６０μＬ）を、上記のフィルターストリップを有する各ウェル(ｎ＝３）に適用し、直ちにタイマーをスタートさせた。ストリップをディープウェル
プレート上に配置し、上部をシールし、３７℃のインキュベーター中に５分間入れる。５分間のインキュベーション後、各ウェルにおける溶解バッファーの保持を測定した。
Claims (34)
- フィルター及び排出ポートを含むウェルを含み、前記フィルターは、第一の粒子保持部を有する第一の部分、前記第一の粒子保持部とは異なる第二の粒子保持部を有する第二の部分、及び前記第二の粒子保持部と同じ又は異なる第三の粒子保持部を有する第三の部分を含み、
前記第一の部分が、０．６μｍ～２．０μｍの粒子を保持するものであり、前記第二の部分が、０．４μｍ～１．０μｍの粒子を保持するものであり、前記第三の部分が、０．４μｍ～１．０μｍの粒子を保持するものである、並びに
前記排出ポートの出口開口部が、１．５ｍｍ未満の径を有する、ろ過デバイス。 - 前記排出ポートの出口開口部が、０．４５ｍｍ～１．１５ｍｍの径を有する、請求項１に記載のろ過デバイス。
- 前記排出ポートの出口開口部が、０．４５ｍｍ～０．７０ｍｍの径を有する、請求項１又は２に記載のろ過デバイス。
- 前記第一及び第二の部分が、ガラス繊維を含み、請求項１～３のいずれか一項に記載のろ過デバイス。
- 前記第一及び第二の部分が、ホウケイ酸ガラス繊維を含み、請求項１～４のいずれか一項に記載のろ過デバイス。
- 前記第一の部分が、第一の層を形成し、及び前記第二の部分が、第二の層を形成する、請求項１～５のいずれか一項に記載のろ過デバイス。
- 前記第一の層が、０．１ｍｍ～１ｍｍの厚さを有し、及び前記第二の層が、０．２ｍｍ～１．５ｍｍの厚さを有する、請求項６に記載のろ過デバイス。
- 前記第一の部分が、第一のガラス繊維を含み、前記第二の部分が、第二のガラス繊維を含み、並びに前記第一及び第二のガラス繊維は異なっている、請求項１～７のいずれか一項に記載のろ過デバイス。
- 前記ろ過デバイスが、８ウェルのフィルターストリップである、請求項１～８のいずれか一項に記載のろ過デバイス。
- 前記第三の部分が、ガラス繊維を含む、請求項１～９のいずれか一項に記載のろ過デバイス。
- 前記第三の部分が、ホウケイ酸ガラス繊維を含む、請求項１０に記載のろ過デバイス。
- 前記ろ過デバイスが、前記フィルター上にプレフィルターをさらに含む、請求項１～１１のいずれか一項に記載のろ過デバイス。
- （ｉ）請求項１～１２のいずれか一項に記載のろ過デバイス、及び（ｉｉ）捕捉デバイスを含み、前記ろ過デバイスは、前記捕捉デバイスに嵌め込むように構成されており、
前記捕捉デバイスは、請求項１～１２のいずれか一項に記載のろ過デバイスと組み合わせて使用するものであって、１又は複数の捕捉ウェルを含み、前記捕捉ウェルの各々は、０．９４０ｇ／ｃｍ ３ ～０．９６５ｇ／ｃｍ ３ の密度を有する高密度ポリエチレンを含み、及び前記高密度ポリエチレンの表面は、プラズマで処理されているものである、
ろ過システム。 - 生物サンプル中のエキソソーム及び／又はベシクルから核酸を単離する方法であって：
前記生物サンプルを、請求項１～１２のいずれか一項に記載のろ過デバイスを各々が含む１又は複数のウェルを含むマルチウェルインサートの少なくとも１つのウェルにローディングすること；
前記エキソソーム及び／又はベシクルを前記フィルター中に捕捉するために、前記生物サンプルの少なくとも一部を前記フィルターに通すこと；
前記エキソソーム及び／又はベシクルを溶解すること；並びに
前記エキソソーム及び／又はベシクルから前記核酸を単離すること、
を含む、方法。 - 生物サンプル中のエキソソーム及び／又はベシクルから核酸を単離する方法であって：
前記生物サンプルを、フィルター及び排出ポートを各々が含む１又は複数のウェルを含むマルチウェルインサートの少なくとも１つのウェルにローディングすることであって、前記フィルターは、第一の部分、第二の部分及び第三の部分を含み、前記第一の部分が、０．６μｍ～２．０μｍの粒子を保持するものであり、前記第二の部分が、０．４μｍ～１．０μｍの粒子を保持するものであり、前記第三の部分が、０．４μｍ～１．０μｍの粒子を保持するものである、ローディングすること；
前記エキソソーム及び／又はベシクルを前記フィルター中に捕捉するために、前記生物サンプルの少なくとも一部を前記フィルターに通すこと；
前記エキソソーム及び／又はベシクルを溶解すること；並びに
前記エキソソーム及び／又はベシクルから前記核酸を単離すること、
を含み、
前記排出ポートの出口開口部が、１．５ｍｍ未満の径を有する、方法。 - 前記排出ポートの出口開口部が、０．４５ｍｍ～１．１５ｍｍの径を有する、請求項１５に記載の方法。
- 前記排出ポートの出口開口部が、０．４５ｍｍ～０．７０ｍｍの径を有する、請求項１５又は１６に記載の方法。
- 前記第一及び第二の部分が、ガラス繊維を含む、請求項１５～１７のいずれか一項に記載の方法。
- 前記第一及び第二の部分が、ホウケイ酸ガラス繊維を含む、請求項１５～１８のいずれか一項に記載の方法。
- 前記第一の部分が、第一の層を形成し、及び前記第二の部分が、第二の層を形成する、請求項１５～１９のいずれか一項に記載の方法。
- 前記第一の層が、０．１ｍｍ～１ｍｍの厚さを有し、及び前記第二の層が、０．２ｍｍ～１．５ｍｍの厚さを有する、請求項２０に記載の方法。
- 前記第一の部分が、第一のガラス繊維を含み、前記第二の部分が、第二のガラス繊維を含み、並びに前記第一及び第二のガラス繊維は異なっている、請求項１５～２１のいずれか一項に記載の方法。
- 前記単離することが、前記エキソソーム及び／又はベシクルから捕捉ウェルへ前記核酸を回収することを含む、請求項１５～２２のいずれか一項に記載の方法。
- 前記捕捉ウェルが、０．９４０ｇ／ｃｍ３～０．９６５ｇ／ｃｍ３の密度を有する高密度ポリエチレンを含む、請求項２３に記載の方法。
- 前記単離することが、前記マルチウェルインサートの前記１又は複数のウェルから１又は複数の捕捉ウェルへ前記核酸を回収することを含む、請求項２３又は２４に記載の方法。
- 前記１又は複数の捕捉ウェルが、８ウェルの捕捉ストリップを形成する、請求項２５に記載の方法。
- 前記回収することが、前記マルチウェルインサートを遠心分離することを含む、請求項２３～２６のいずれか一項に記載の方法。
- 前記マルチウェルインサートが、８ウェルのフィルターストリップである、請求項２３～２７のいずれか一項に記載の方法。
- 前記通すことが、前記マルチウェルインサートの前記１又は複数のウェルから１又は複数のウェルを含むプレートへ前記生物サンプルを通すことを含む、請求項２３～２８のいずれか一項に記載の方法。
- 前記核酸が、ＤＮＡ又はＲＮＡである、請求項２３～２９のいずれか一項に記載の方法。
- 前記核酸が、ＲＮＡである、請求項２３～３０のいずれか一項に記載の方法。
- 前記ＲＮＡが、ポリ（Ａ）＋ＲＮＡから成る群より選択されるＲＮＡを含む、請求項３１に記載の方法。
- 前記生物サンプルが、血液、血清、血漿、尿、汗、唾液、腹水、腹腔液、培地、及び便から成る群より選択される、請求項２３～３２のいずれか一項に記載の方法。
- 前記通すことが、前記マルチウェルインサートを遠心分離することを含む、請求項２３～３３のいずれか一項に記載の方法。
Applications Claiming Priority (7)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201762470115P | 2017-03-10 | 2017-03-10 | |
| US62/470,115 | 2017-03-10 | ||
| US201762508162P | 2017-05-18 | 2017-05-18 | |
| US62/508,162 | 2017-05-18 | ||
| US201762569537P | 2017-10-07 | 2017-10-07 | |
| US62/569,537 | 2017-10-07 | ||
| PCT/US2018/021884 WO2018165635A1 (en) | 2017-03-10 | 2018-03-09 | Filtering device, capturing device, and uses thereof |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2020511134A JP2020511134A (ja) | 2020-04-16 |
| JP2020511134A5 JP2020511134A5 (ja) | 2020-05-28 |
| JP7092787B2 true JP7092787B2 (ja) | 2022-06-28 |
Family
ID=63447968
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2019549397A Active JP7092787B2 (ja) | 2017-03-10 | 2018-03-09 | ろ過デバイス、捕捉デバイス、及びそれらの使用 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20200047096A1 (ja) |
| JP (1) | JP7092787B2 (ja) |
| WO (1) | WO2018165635A1 (ja) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20240052336A1 (en) * | 2019-10-01 | 2024-02-15 | Showa Denko Materials (America), Inc. | Filter-based extracellular vesicle nucleic acid isolation method |
| CN113776919B (zh) * | 2021-09-02 | 2022-07-15 | 中国科学院大连化学物理研究所 | 一种基于正负电荷吸附原理的外泌体分离装置 |
| CN114073865B (zh) * | 2022-01-17 | 2022-11-25 | 深圳市达科为生物工程有限公司 | 去除血清中外泌体的方法及过滤装置 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2014124821A (ja) | 2012-12-26 | 2014-07-07 | Tsuda Industries Co Ltd | 蒸着皮膜層を有する可撓性ポリエチレン容器とその製造方法 |
| JP2014519331A (ja) | 2011-06-10 | 2014-08-14 | 日立化成株式会社 | 小胞捕捉デバイスおよびそれを用いるための方法 |
| WO2017040992A1 (en) | 2015-09-04 | 2017-03-09 | Mo Bio Laboratories, Inc. | Methods for co-isolation of nucelic acids and proteins |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61164947A (ja) * | 1985-01-11 | 1986-07-25 | 日産自動車株式会社 | 樹脂製中空容器 |
| US5264184A (en) * | 1991-03-19 | 1993-11-23 | Minnesota Mining And Manufacturing Company | Device and a method for separating liquid samples |
| DE4143639C2 (de) * | 1991-12-02 | 2002-10-24 | Qiagen Gmbh | Verfahren zur Isolierung und Reinigung von Nukleinsäuren |
| US5595653A (en) * | 1994-07-15 | 1997-01-21 | Cera, Inc. | Microcolumn for extraction of analytes from liquids |
| US5888831A (en) * | 1997-03-05 | 1999-03-30 | Gautsch; James W. | Liquid-sample-separation laboratory device and method particularly permitting ready extraction by syringe of the separated liquid sample |
| WO2005037983A1 (ja) * | 2003-10-21 | 2005-04-28 | Fuji Photo Film Co., Ltd. | 核酸分離精製カートリッジおよびその製造方法 |
| WO2014026008A1 (en) * | 2012-08-08 | 2014-02-13 | Diffinity Genomics, Inc. | Disposable functional pipette tips for the isolation of nucleic acids |
-
2018
- 2018-03-09 WO PCT/US2018/021884 patent/WO2018165635A1/en active Application Filing
- 2018-03-09 JP JP2019549397A patent/JP7092787B2/ja active Active
- 2018-03-09 US US16/492,675 patent/US20200047096A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2014519331A (ja) | 2011-06-10 | 2014-08-14 | 日立化成株式会社 | 小胞捕捉デバイスおよびそれを用いるための方法 |
| JP2014124821A (ja) | 2012-12-26 | 2014-07-07 | Tsuda Industries Co Ltd | 蒸着皮膜層を有する可撓性ポリエチレン容器とその製造方法 |
| WO2017040992A1 (en) | 2015-09-04 | 2017-03-09 | Mo Bio Laboratories, Inc. | Methods for co-isolation of nucelic acids and proteins |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| ＪＩＳ使い方シリーズ 新版 プラスチック材料選択のポイント 第２版，財団法人日本規格協会，2003年，p. 436, 437, 440, 441, 444 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2018165635A1 (en) | 2018-09-13 |
| US20200047096A1 (en) | 2020-02-13 |
| JP2020511134A (ja) | 2020-04-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP7354327B2 (ja) | 生体液からの細胞外小胞の単離及びセルフリーｄｎａの同時単離のための自動及び手動方法 | |
| JP7092787B2 (ja) | ろ過デバイス、捕捉デバイス、及びそれらの使用 | |
| CN104755628B (zh) | 生物样品的稳定化 | |
| EP1100873B1 (de) | Krebszellen aus zellhaltigen körperflüssigkeiten, deren isolierung, verwendung sowie diese enthaltende mittel | |
| AU2015287763B2 (en) | Methods for isolating microvesicles and extracting nucleic acids from biological samples | |
| JP2012502632A (ja) | スモールｒｎａの単離法 | |
| EP2746406B1 (en) | Composition and kit for diagnosing breast cancer including miRNAs within vesicle, and method of diagnosing breast cancer using the same | |
| US20100112586A1 (en) | Diagnosis of fetal abnormalities by comparative genomic hybridization analysis | |
| US20110300609A1 (en) | Nucleic acid extraction apparatus | |
| EP2315619B1 (en) | Nucleic acid extraction method | |
| CN102498397A (zh) | 核酸分析 | |
| DE102008061714A1 (de) | Verfahren zur Aufreinigung von Nukleinsäuren, inbesondere aus fixiertem Gewebe | |
| JP2014513959A (ja) | 新生物の診断方法 | |
| DE102008029356A1 (de) | Verfahren zur Aufreinigung von Nukleinsäuren, insbesondere aus fixiertem Gewebe | |
| DE212013000295U1 (de) | Vorrichtungen zum Einfangen von Zielmolekülen | |
| US20120264628A1 (en) | Methods for Enriching Microparticles or Nucleic Acids in a Complex Mixture Using Size Exclusion Filtration | |
| CN106715717A (zh) | 使用有机溶剂除去抑制剂的核酸提取 | |
| CN108866046A (zh) | 一种分离、纯化样品中外泌体和/或游离核酸的方法 | |
| EP3452613B1 (en) | Profiling microvesicle nucleic acids and uses thereof as signatures in diagnosis of renal transplant rejection | |
| RU2556825C1 (ru) | Способ получения экзосом из крови | |
| US11268085B2 (en) | Methods for isolating microvesicles and extracting nucleic acids from biological samples | |
| US20130052647A1 (en) | Methods for fractionating and processing microparticles from biological samples and using them for biomarker discovery | |
| Soltesz et al. | Quantification of mtDNA in extracellular vesicles | |
| CA2348054C (en) | Processes and means for the isolation and purification of nucleic acids at surfaces | |
| CN118103495A (zh) | 使用盐分级沉淀分离细胞外囊泡的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20200311 |
|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20200311 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20210413 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20210628 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20211019 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20220112 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20220524 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20220616 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7092787 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |