JP7067802B2 - アプタマー-薬物コンジュゲート及びその用途 - Google Patents
アプタマー-薬物コンジュゲート及びその用途 Download PDFInfo
- Publication number
- JP7067802B2 JP7067802B2 JP2019555545A JP2019555545A JP7067802B2 JP 7067802 B2 JP7067802 B2 JP 7067802B2 JP 2019555545 A JP2019555545 A JP 2019555545A JP 2019555545 A JP2019555545 A JP 2019555545A JP 7067802 B2 JP7067802 B2 JP 7067802B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- mmae
- cit
- val
- pab
- drug
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
- A61K31/4025—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil not condensed and containing further heterocyclic rings, e.g. cromakalim
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
- A61K47/549—Sugars, nucleosides, nucleotides or nucleic acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
- A61K47/10—Alcohols; Phenols; Salts thereof, e.g. glycerol; Polyethylene glycols [PEG]; Poloxamers; PEG/POE alkyl ethers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/115—Aptamers, i.e. nucleic acids binding a target molecule specifically and with high affinity without hybridising therewith ; Nucleic acids binding to non-nucleic acids, e.g. aptamers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/16—Aptamers
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
ADCは、抗体の利点(特異性(specificity)、循環中での非毒性(non-toxicity in circulation)、および薬物動態(pharmacokinetics))を最大に活用して、薬物が具体的にがん細胞のみをターゲティングすることに焦点を合わせたテクノロジーである。ADCは、単クローン抗体薬物、そして抗体と薬物を連結するリンカー(linker)を含む3つの構成要素で構成されており、ADCテクノロジーは、がん細胞の表面に発現された特定の抗原に特異的に結合する抗体を使用して薬物を腫瘍細胞に伝達する方法である。
ADC(Antibody-Drug Conjugate)の開発は、1980年から始まったが、実際の臨床に適用するにあたり、臨床のための安定したリンカーの開発のほか、ADC合成プロセスにおけるQCが簡単ではない問題を有している。つまり、抗体(antibody)(huJ591)にDM1(薬物(drug))を結合するとき、1つの抗体(antibody)(huj591)にDM1薬物(drug)が1~7個までついた混合物が得られると、その分離/精製ができず、平均3.5個のDM1薬物(drug)が結合したADCを臨床で使用する。
抗体(antibody)がターゲット指向的に結合した薬物(drug)をガン細胞まで到達させて薬物(drug)による治療効果を示すが、抗体(antibody)に結合してがん細胞に到達する薬物(drug)はわずか2%以下に過ぎない、非常に低い効率を示すことが問題である。これを解決するために、ドキソルビシン(Doxorubicine)のような臨床許可を受けた安全な抗がん剤は、安定な代わりに薬効が低いため、100~1,000倍以上の高い毒性を有する高毒物(highly toxic agents)を抗体に結合する薬物(drug)として選択する。
アプタマー(aptamer)は、抗体(antibody)と類似した性質で、がんなどの病気を引き起こすバイオマーク(biomark)に非常に選択的に結合することにより、診断や標的治療が可能なDNAまたはRNAオリゴヌクレオチド(oligonucleotide)である。つまり、アプタマー(aptamer)は、標的物質によってユニークな3次元構造(3-dimensional structures)を有し、この3次元構造がタンパク質タグ(がん誘発タンパク質、バイオマーク)に非常に選択的に強く結合して、標的治療、カスタム診断またはミサイル療法を可能にする新しいBio-capturing物質である。
標的治療剤として最も成功したものは抗体であり、現在30種の抗体標的治療剤がFDAの承認を受けて市販されており、300種余りが臨床段階を進行中である。しかし、その開発コストが非常に高く、飽和状態であるため、先進製薬会社は既に新しい治療剤の開発に転換している。
2006年、Eyetech社で最初のアプタマー治療剤であるMacugenを、FDAの許可を受けてPfizerにライセンスして市販を開始した。Macugenは、老眼による失明の原因となる黄斑変性(AMD、Age-related Macular Degeneration)の治療剤であり、VEGF(血管内皮成長因子)による異常な血管の成長を、VEGF(血管内皮成長因子)を抑制することで治療効果を示す。その後、アプタマーの治療剤としての可能性が高まり、Merck Serono、Takeda、Pfizer、Elan、Eli Lilly、GlaxoSmithKline、Ribomicなどがアプタマーの新薬開発に挑み、現在、約10種のアプタマーが臨床中である。
GRO(Guanine-Rich Oligonucleotide)アプタマー(Aptamer)は、199年Louisville大学のPaula J. Bates教授が最初に合成して、がん患者に多く発現されるヌクレオリンタンパク質に特異的に結合するメカニズムを明らかにすることにより、抗がん剤治療剤の開発可能性を提示した。現在、GROアプタマーの一つとして、Antisoma社(英)でAS1411というコードの腎臓および非小細胞がん(AML)治療剤を開発中であり、非小細胞がん(AML)に対しては最近、臨床第2相を終えた。
Yは、マレイミドカプロイル-バリン‐シトルリン-p-アミノベンゾイルオキシカルボニル(MC-Val-Cit-PAB)、ヒドラゾン、ペプチド、ジスルフィド、チオエーテル、バリン‐シトルリン、N-マレイミドメチルシクロヘキサン-1-カルボキシレート(MCC)、マレイミドカプロイル、メルカプトアセトアミドカプロイル、N-スクシンイミジル4-(2-ピリジルジチオ)ペンタノエート(SPP)、SMCC、スクシンイミジル4-(N-マレイミドメチル)シクロヘキサン-1-カルボキシレート(SMCC)、N-スクシンイミジル4-(2-ピリジルチオ)ペンタノエート(SPDB)、ホスホジエステル結合、およびヌクレオチドからなる群より選択され、
Xは、5’-チオール-改質剤C6、チオール-改質剤C6 S-S、ジチオールセリノール、PCアミノ-改質剤、5’-アミノ-改質剤C3、5’-アミノ-改質剤C6、5’-アミノ-改質剤C12、5’-アミノ-改質剤TEG、アミノ-改質剤C2 dT、アミノ-改質剤C6 dT、S-Bz-チオール-改質剤C6-dT、ホスホジエステル結合、およびヌクレオチドからなる群より選択される。
実施例1
MMAE-(PAB-Cit-Val-MC-S-C6)-T3-AS1411[AS1411-MMAEコンジュゲート]の合成
マレイミドカプロイル-バリン-シトルリン-p-アミノベンゾイルオキシカルボニルモノメチルアウリスタチンE[MC-Val-Cit-PAB-MMAE]にHS-C6-tttggtggtggtggttgtggtggtggtgg[HS-C6-T3-AS141]を反応して、モノメチルアウリスタチンE-p-アミノベンゾイルオキシカルボニル-シトルリン-バリン-Mal-S-C6-tttggtggtggtggttgtggtggtggtgg[MMAE-(PAB-Cit-Val-MC-S-C6)-T3-AS1411]を合成した。つまり、RSS-C6-tttggtggtggtggttgtggtggtggtgg[RSS-C6-T3-AS141])をDTTの存在下で約3時間還元反応した後、残っているDTTを遠心分離器で除去し、SB17緩衝液に交換して、HS-C6-tttggtggtggtggttgtggtggtggtgg[HS-C6-T3-AS141]を得た。少量のDMSOに溶かしたMC-Val-Cit-PAB-MMAEを入れて一晩振とうさせた。逆相HPLC(Waters-Xbridge OST C18 10×50mm、65、TEAE/ CAN 緩衝液(buffer))により分離/精製した。
MMAE-(PAB-Cit-Val-MC-S-C6)-T3-CROの合成
マレイミドカプロイル-バリン-シトルリン-p-アミノベンゾイルオキシカルボニルモノメチルアウリスタチンE[MC-Val-Cit-PAB-MMAE]にHS-C6-tttcctcctcctccttctcctcctcctcc[HS-C6-T3-CRO]を反応して、モノメチルアウリスタチンE-p-アミノベンゾイルオキシカルボニル-シトルリン-バリン-Mal-S-C6-tttcctcctcctccttctcctcctcctcc[MMAE-(PAB-Cit-Val-MC-S-C6)-T3-CRO]を合成した。つまり、RSS-C6-tttcctcctcctccttctcctcctcctcc[RSS-C6-T3-CRO)をDTTの存在下で約3時間還元反応した後、残っているDTTを遠心分離器で除去し、SB17緩衝液に交換しHS-C6-tttcctcctcctccttctcctcctcctcc[HS-C6-T3-CRO]を得た。少量のDMSOに溶かしたMC-Val-Cit-PAB-MMAEを入れて一晩振とうさせた。逆相HPLC(Waters-Xbridge OST C18 10×50mm、65、TEAE/CAN 緩衝液(buffer))により分離/精製した。
12,13-(MMAE-PAB-Cit-Val-MC-S-C6)2-AS1411、および12又は13-(MMAE-PAB-Cit-Val-MC-S-C6)-AS1411の合成
マレイミドカプロイル-バリン-シトルリン-p-アミノベンゾイルオキシカルボニルモノメチルアウリスタチンE[MC-Val-Cit-PAB-MMAE]に、ggtggtggtggu[5-N-(6-(3-チオプロパノイル)-アミノヘキシル)-3-アクリルアミド]u[5-N-(6-(3-チオプロパノイル)-アミノヘキシル)-3-アクリルアミド]gtggtggtggtgg[12,13-(HS-C6)2-AS1411]を反応し、ggtggtggtggu[5-N-(6-(3-モノメチルアウリスタチン-p-アミノベンゾイルオキシカルボニル-シトルリン-バリン-Mal-チオプロパノイル)-アミノヘキシル)-3-アクリルアミド]u[5-N-(6-(3-モノメチルアウリスタチン-p-アミノベンゾイルオキシカルボニル-シトルリン-バリン-Mal-チオプロパノイル)-アミノヘキシル)-3-アクリルアミド]gtggtggtggtgg[12,13-(MMAE-PAB-Cit-Val-MC-S-C6)2-AS1411]およびggtggtggtggu [5-N-(6-(3-モノメチルアウリスタチン-p-アミノベンゾイルオキシカルカルボニル-シトルリン-バリン-Mal-チオプロパノイル)-アミノヘキシル)-3-アクリルアミド]ugtggtggtggtgg][12又は13-(MMAE-PAB-Cit-Val-MC-S-C6)-AS1411]を合成した。つまり、ggtggtggtggu[5-N-(6-(3-benzoylチオプロパノイル)-アミノヘキシル)-3-アクリルアミド]u[5-N-(6-(3-benzoylチオプロパノイル)-アミノヘキシル)-3-アクリルアミド]gtggtggtggtgg[12,13-(Bz-S-C6)2-AS1411]をDTTの存在下で約3時間還元反応した後、残っているDTTを遠心分離器で除去し、SB17緩衝液に交換してggtggtggtggu[5-N-(6-(3-チオプロパノイル)-アミノヘキシル)-3-アクリルアミド]u[5-N-(6-(3-チオプロパノイル)-アミノヘキシル)-3-アクリルアミド]gtggtggtggtgg[12,13-(HS-C6)2-AS1411]を得た。少量のDMSOに溶かしたMC-Val-Cit-PAB-MMAEを入れて一晩振とうさせた。逆相HPLC(Waters-Xbridge OST C18 10×50mm、65、TEAE/CAN 緩衝液(buffer))により精製し、12,13-(MMAE-PAB-Cit-Val-MC-S-C6)2-AS1411、および12又は13-(MMAE-PAB-Cit-Val-MC-S-C6)-AS1411を得た。
シタラビン-(GLFG-MC-S-C6)-T3-AS1411コンジュゲートの合成
マレイミドカプロイル-(Gly-Phe-Leu-Gly)-シタラビン[MC-GFLG-シタラビン]に、HS-C6-tttggtggtggtggttgtggtggtggtgg[HS-C6-T3-AS1411]を反応し、シタラビン-(Gly-Leu-Phe-Gly)-Mal-S-C6-tttggtggtggtggttgtggtggtggtgg[シタラビン-(GLFG-MC-S-C6)-T3-AS1411]を合成した。つまり、RSS-C6-tttggtggtggtggttgtggtggtggtgg[RSS-C6-T3-AS141])をDTTの存在下で約3時間還元反応した後、残っているDTTを遠心分離器で除去し、SB17緩衝液に交換した。少量のDMSOに溶かしたMal-GPLG-シタラビンを入れて一晩振とうさせた。逆相HPLC(Waters-Xbridge OST C18 10×50mm、65、TEAE/CAN 緩衝液)により精製してシタラビン-(GLFG-MC-S-C6)-T3-AS1411を得た。ESI-MSによりシタラビン-(GLFG-MC-S-C6)-T3-AS1411の分子量を確認した。C334H424N117O199P29S[Cal.MW=10191.91、Obs.MW=10190.88]
12,13-(シタラビン-GLFG-MC-S-C6)2-AS1411コンジュゲート、および12又は13-(シタラビン-GLFG-MC-S-C6)-AS1411コンジュゲートの合成
マレイミドカプロイル-(Gly-Phe-Leu-Gly)-シタラビン[MC-GFLG-シタラビン]に、ggtggtggtggu[5-N-(6-(3-チオプロパノイル)-アミノヘキシル)-3-アクリルアミド]u[5-N-(6-(3-チオプロパノイル)-アミノヘキシル)-3-アクリルアミド]gtggtggtggtgg[12,13-(HS-C6)2-AS1411]を反応し、ggtggtggtggu[シタラビン-Gly-Leu-Phe-Gly-Mal-チオプロパノイル)-アミノヘキシル)-3-アクリルアミド]u[シタラビン-Gly-Leu-Phe-Gly-Mal-チオプロパノイル)-アミノヘキシル)-3-アクリルアミド]gtggtggtggtgg[12,13-(シタラビン-GLFG-MC-S-C6)2-AS1411]およびggtggtggtggu[シタラビン-Gly-Leu-Phe-Gly-Mal-チオプロパノイル)-アミノヘキシル)-3-アクリルアミド]ugtggtggtggtgg][12又は13-(シタラビン-GLFG-MC-S-C6)-AS1411]を合成した。つまり、ggtggtggtggu[5-N-(6-(3-benzoylチオプロパノイル)-アミノヘキシル)-3-アクリルアミド]u[5-N-(6-(3-benzoylチオプロパノイル)-アミノヘキシル)-3-アクリルアミド]gtggtggtggtgg[12,13-(Bz-S-C6)2-AS1411]をDTTの存在下で約3時間還元反応した後、残っているDTTを遠心分離器で除去し、SB17緩衝液に交換して、ggtggtggtggu[5-N-(6-(3-チオプロパノイル)-アミノヘキシル)-3-アクリルアミド]u[5-N-(6-(3-チオプロパノイル)-アミノヘキシル)-3-アクリルアミド]gtggtggtggtgg[12,13-(HS-C6)2-AS1411]を得た。少量のDMSOに溶かしたMC-GFLG-シタラビンを入れて一晩振とうさせた。逆相HPLC(Waters-Xbridge OST C18 10×50mm、65、TEAE/CAN 緩衝液)により精製して、12,13-(シタラビン-GLFG-MC-S-C6)2-AS1411、および12又は13-(シタラビン-GLFG-MC-S-C6)-AS1411を得た。ESI-MSにより、それぞれの分子量を確認した。12,13-(シタラビン-GLFG-MC-S-C6)2-AS1411、C358H458N123O191P25S2[Cal.MW=10378,66 Obs.MW=10379.23]、12又は13-(シタラビン-GLFG-MC-S-C6)-AS1411、C320H408N115O179P25S2[Cal.MW=9567.81、Obs.MW=9568.09]
In vitro効能の検証
MMAE-(PAB-Cit-Val-MC-S-C6)-T3-AS1411およびMMAE-(PAB-Cit-Val-MC-S-C6)-T3-CROのA549細胞株に対するMTTアッセイ
ヌクレオリンタンパク質が過剰発現された肺がん細胞株であるA549細胞株におけるMMAE-(PAB-Cit-Val-MC-S-C6)-T3-AS1411の細胞阻害(cell inhibition)効能の検証をMTT アッセイによりin vitroで確認した。MMAE、AS1411、MMAE-(PAB-Cit-Val-MC-S-C6)-T3-AS1411とMMAE-(PAB-Cit-Val-MC-S-C6)-T3-CROを、MTTアッセイにより細胞の細胞生存能力(cell viability)及び増殖(proliferation)を比較したところ、MMAE-(PAB-Cit-Val-MC-S-C6)-T3-AS1411がMMAEとほぼ同様の効果を示すことを確認した。A549細胞(cell)(ATCC、IMDM+10%FBS)は、適正細胞濃度を決定する細胞試験(cell test)により定められた細胞数(cell number)2.5~5×105個/wellを96ウエルプレート(96well Plate)に蒔種(seeding)した後、一日育てた。MMAE-(PAB-Cit-Val-MC-S-C6)-T3-AS1411とMMAE-(PAB-Cit-Val-MC-S-C6)-T3-CROは、95℃で5分間熱処理(heating)して常温で徐々に冷却した後、濃度別に各ウエル(well)にすぐに処理した。処理されたA549細胞(cell)は、5%CO2インキュベーター(incubator)で72時間の間インキュベーション(incubation)した後、MTTアッセイ用試薬液(reagent solution)(Cell Proliferation kit II、Roche)を20uLずつ処理し、時間別(10分、30分、1時間)でインキュベーション(incubation)した後、ELISAリーダー(reader)機で490nm吸光度を測定した(図5)。
シタラビン-(GLFG-MC-S-C6)-T3-AS1411およびシタラビン-(GLFG-MC-S-C6)-T3-CROのMv4-11細胞株に対するMTTアッセイ
ヌクレオリンタンパク質が過剰発現された肺がん細胞株であるMv4-11細胞株におけるシタラビン-(GLFG-MC-S-C6)-T3-AS1411の細胞阻害(cell inhibition)効能の検証をMTTアッセイによりin vitroで確認した。シタラビン、AS1411、シタラビン-(GLFG-MC-S-C6)-T3-AS1411およびシタラビン-(GLFG-MC-S-C6)-T3-CROを、MTTアッセイにより細胞の細胞生存能力(cell viability)及び増殖(proliferation)を比較したところ、シタラビン-(GLFG-MC-S-C6)-T3-AS1411コンジュゲートがシタラビンとほぼ同様の効果を示すことを確認した。Mv4-11細胞(cell)(ATCC、IMDM+10%FBS)は、適正細胞濃度を決定する細胞試験(cell test)により定められた細胞数(cell number)2.5~5×105個/ウエル(well)を96ウエルプレート(96well plate)に蒔種(seeding)した後、一日育てた。シタラビン-(GLFG-MC-S-C6)-T3-AS1411とシタラビン-(GLFG-MC-S-C6)-T3-CROは、95℃で5分間熱処理(heating)して常温で徐々に冷却(cooling)した後、濃度別に各ウエル(well)にすぐに処理した。処理されたA549細胞(cell)は、5%CO2インキュベーター(incubator)で72時間の間インキュベーション(incubation)した後、MTTアッセイ用試薬液(reagent solution)(Cell Proliferation kit II、Roche)を20uLずつ処理し、時間別(10分、30分、1時間)にインキュベーション(incubation)した後、ELISAリーダー(reader)機で490nm吸光度を測定した(図6)。
In vivo効能の検証
MMAE-(PAB-Cit-Val-MC-S-C6)-T3-AS1411のA549肺がん細胞株注入マウスに対するin vivo治療効果の検証
A549肺がん細胞株注入マウスに対して静脈注射(IV injection)でMMAE-(PAB-Cit-Val-MC-S-C6)-T3-AS1411とMMAEをそれぞれ30日間投与した後、PET imageから腫瘍サイズ(tumor size)を確認した。A549肺がん細胞6.1x106細胞(cell)/mlをヌードマウスの右太ももに皮下注入した。注射してから3~4週間後に腫瘍の大きさを測定し、直径0.8cmに達した時に治療前のmicroPET撮影を行った。PET画像のために、F-18 FDG 0.2mCiを腹腔内に注射した後の画像を得た。(Siemens Inveon)画像から腫瘍のFDG摂取を確認した後、実験群5匹のマウスにMMAE-(PAB-Cit-Val-MC-S-C6)-T3-AS1411を5日間隔で4回静脈内注射した(7.5mg/kg、0.5mg/kg of MMAE)。治療開始30日後に、治療前と同じ方法でmicroPETを撮影した。A549肺がん細胞株注入マウスに対して、静脈注射(IV injection)でMMAE-(PAB-Cit-Val-MC-S-C6)-T3-AS1411を30日間投与した後にPET imageを確認したとき、腫瘍のFDG摂取が著しく減少したことを確認した(図7及び図8)。
MMAEのA549肺がん細胞株注入マウスに対するin vivo治療効果の検証
A549肺がん細胞株注入マウスに対して、静脈注射(IV injection)でMMAEを30日間投与した後、PET imageを確認した。A549肺がん細胞6.1×106細胞(cell)/mlをヌードマウスの右太ももに皮下注入した。注射してから3~4週間後に腫瘍の大きさを測定し、直径0.8cmに達した時に治療前のmicroPET撮影を行った。PET画像のために、F-18 FDG 0.2mCiを腹腔内に注射した後の画像を得た。(Siemens Inveon)治療前の画像から腫瘍のFDG摂取を確認した後、5匹のマウスにMMAEを5日間隔で4回静脈内注射した(0.5mg/kg)。治療開始30日後に治療前と同じ方法でmicroPETを撮影した。MMAE治療前と比較して、治療後にもFDG PET画像から腫瘍のFDG摂取が増加したことを確認した(図9及び図10)。
Ex-vivo検証
A549肺がん細胞株注入マウスにおいて、MMAE-(PAB-Cit-Val-MC-S-C6)-T3-AS1411が、MMAEを単独で投与した時よりも優れたがん抑制効果を示す。MMAE単独投与に比べて、MMAE-(PAB-Cit-Val-MC-S-C6)-T3-AS1411が80%さらに癌を抑制することを確認した。治療開始後5日間隔で腫瘍の大きさを横縦軸で測定し、治療開始から30日経過した後に各グループの腫瘍を摘出した。下記の写真のようにグループ別に分けて撮影して、MMAE-(PAB-Cit-Val-MC-S-C6)-T3-AS1411とMMAEの腫瘍サイズを比較した(図11及び図12)。
MMAE-(PAB-Cit-Val-MC-S-C6)-T3-AS1411とMMAEの肺がん(A549細胞ライン(cell line))に対するin vivo効能を検証したところ、MMAE-(PAB-Cit-Val-MC-S-C6)-T3-AS1411がMMAE単独投与に比べて優れた効能を示すことを確認した。
In vivo効能の検証
シタラビン-(GLFG-MC-S-C6)-T3-AS1411のMv4-11 AML細胞株注入マウスに対するin vivo治療効果の検証
Mv4-11 AML細胞株注入マウスに対して静脈注射(IV injection)でシタラビン-(GLFG-MC-S-C6)-T3-AS1411とMMAEをそれぞれ30日間投与した後、PET imageから腫瘍サイズ(tumor size)を確認した。Mv4-11 AML細胞6.1×106細胞(cell)/mlをヌードマウスの右太ももに皮下注入した。注射してから3~4週間後に腫瘍の大きさを測定し、直径0.8cmに達した時に治療前のmicroPET撮影を行った。PET画像のために、F-18 FDG 0.2mCiを腹腔内に注射した後の画像を得た。(Siemens Inveon)画像から腫瘍のFDG摂取を確認した後、実験群5匹のマウスにシタラビン-(GLFG-MC-S-C6)-T3-AS1411を5日間隔で4回静脈内注射した(MMAEの7.5mg/kg、0.5mg/kg)。治療開始30日後に治療前と同じ方法でmicroPETを撮影した(図13、図14)。
MMAEのMv4-11 AML細胞株注入マウスに対するin vivo治療効果の検証
Mv4-11 AML細胞株注入マウスに対して、静脈注射(IV injection)でMMAEを30日間投与した後、PET imageを確認した。Mv4-11 AML細胞6.1×106細胞(cell)/mlをヌードマウスの右太ももに皮下注入した。注射してから3~4週間後に腫瘍の大きさを測定し、直径0.8cmに達した時に治療前のmicroPET撮影を行った。PET画像のために、F-18 FDG 0.2mCiを腹腔内に注射した後の画像を得た。(Siemens Inveon)治療前の画像から腫瘍のFDG摂取を確認した後、5匹のマウスからMMAEを5日間隔で4回静脈内注射した(0.5mg/kg)。治療開始30日後に治療前と同じ方法でmicroPETを撮影した。MMAEの治療前と比較して、治療後にもFDG PET画像から腫瘍のFDG摂取が増加したことを確認した(図15、図16)。
In vitro効能の検証
A549細胞株に対するMMAE-(PAB-Cit-Val-MC-S-C6)-T3-AS1411、12又は13-(MMAE-PAB-Cit-Val-MC-S-C6)-AS1411、および12,13-(MMAE-PAB-Cit-Val-MC-S-C6)2-AS1411のMTTアッセイ
ヌクレオリンタンパク質が過剰発現された肺がん細胞株であるA549細胞株におけるMMAE-(PAB-Cit-Val-MC-S-C6)-T3-AS1411、12又は13-(MMAE-PAB-Cit-Val-MC-S-C6)-AS1411、および12,13-(MMAE-PAB-Cit-Val-MC-S-C6)2-AS1411の細胞阻害(cell inhibition)効能の検証をMTTアッセイによりin vitroで確認した。MMAE-(PAB-Cit-Val-MC-S-C6)-T3-AS1411、12又は13-(MMAE-PAB-Cit-Val-MC-S-C6)-AS1411、および12,13-(MMAE- PAB-Cit-Val-MC-S-C6)2-AS1411をMTTアッセイにより細胞の細胞生存能力(cell viability)及び増殖(proliferation)を比較したところ、12,13-(MMAE-PAB-Cit-Val-MC-S-C6)2-AS1411が、MMAE-(PAB-Cit-Val-MC-S-C6)-T3-AS1411よりも優れた効能を示すことを確認した。A549細胞(cell)(ATCC、IMDM+10%FBS)は、適正細胞濃度を決定する細胞試験(cell test)により定められた細胞数(cell number)2.5~5×105個/ウエル(well)を96ウエルプレート(96well plate)に蒔種(seeding)した後一日育てた。MMAE-(PAB-Cit-Val-MC-S-C6)-T3-AS1411、12又は13-(MMAE-PAB-Cit-Val-MC-S-C6)-AS1411、および12,13-(MMAE- PAB-Cit-Val-MC-S-C6)2-AS1411は、95℃で5分間熱処理(heating)して常温で徐々に冷却(cooling)した後、濃度別に各ウエル(well)にすぐに処理した。処理されたA549細胞(cell)は、5%CO2インキュベーター(incubator)で72時間の間インキュベーション(incubation)した後、MTTアッセイ用試薬液(reagent solution)(Cell Proliferation kit II、Roche)を20uLずつ処理し、時間別(10分、30分、1時間)に培養した後、ELISAリーダー(reader)機で490nm吸光度を測定した(図17)。図17のA、B、C、Dは、次のとおりである。
Claims (3)
- 薬物-リンカー-AS1411の構造を含み、
前記薬物は、モノメチルアウリスタチンE(MMAE)、モノメチルアウリスタチンF(MMAF)、シタラビン、ゲムシタビン、メイタンシン、下記化学式1で表されるDM1、下記化学式2で表されるDM4、カリケアミシン、アシル化されたカリケアミシン、ドキソルビシン、デュオカルマイシン、ピロロベンゾジアゼピン(PBD)、下記化学式3で表されるSN-38またはα-アマニチンであり、
前記リンカーは、X-Yで構成され、前記Yは、マレイミドカプロイル-バリン‐シトルリン-p-アミノベンゾイルオキシカルボニル(MC-Val-Cit-PAB)、マレイミドカプロイル-グリシン-フェニルアラニン-ロイシン-グリシン(MC-Gly-Phe-Leu-Gly)、ヒドラゾン、ジスルフィド、チオエーテル、バリン‐シトルリン、N-マレイミドメチルシクロヘキサン-1-カルボキシレート(MCC)、マレイミドカプロイル、メルカプトアセトアミドカプロイル、N-スクシンイミジル4-(2-ピリジルジチオ)ペンタノエート(SPP)、スクシンイミジル4-(N-マレイミドメチル)シクロヘキサン-1-カルボキシレート(SMCC)またはN-スクシンイミジル4-(2-ピリジルチオ)ペンタノエート(SPDB)であり、前記Xは、5’-チオール-改質剤C6、チオール-改質剤C6 S-S、ジチオールセリノール、PCアミノ-改質剤、5’-アミノ-改質剤C3、5’-アミノ-改質剤C6、5’-アミノ-改質剤C12、アミノ-改質剤C2 dT、アミノ-改質剤C6 dT、S-Bz-チオール-改質剤C6-dTまたは下記化学式4で表される化合物であり、前記XがAS1411と結合し、前記Yが薬物と結合し、
前記リンカーは、AS1411の12または13の位置、若しくは12と13の位置の両方に連結され、
前記AS1411は、配列番号1の塩基配列で前記リンカーと連結される部位がウラシルに置換された配列からなることを特徴とする、がん標的治療剤。
- 前記薬物は、モノメチルアウリスタチンE(MMAE)、および、シタラビンから選択されることを特徴とする、請求項1に記載のがん標的治療剤。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
KR1020160179111A KR102015524B1 (ko) | 2016-12-26 | 2016-12-26 | 압타머-약물 콘쥬게이트 및 그 용도 |
KR10-2016-0179111 | 2016-12-26 | ||
PCT/KR2017/014060 WO2018124512A2 (ko) | 2016-12-26 | 2017-12-04 | 압타머-약물 콘쥬게이트 및 그 용도 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2020512393A JP2020512393A (ja) | 2020-04-23 |
JP7067802B2 true JP7067802B2 (ja) | 2022-05-16 |
Family
ID=62711062
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2019555545A Active JP7067802B2 (ja) | 2016-12-26 | 2017-12-04 | アプタマー-薬物コンジュゲート及びその用途 |
Country Status (7)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US11458120B2 (ja) |
EP (1) | EP3560517A4 (ja) |
JP (1) | JP7067802B2 (ja) |
KR (1) | KR102015524B1 (ja) |
CN (1) | CN110167597A (ja) |
AU (1) | AU2017389094B2 (ja) |
WO (1) | WO2018124512A2 (ja) |
Families Citing this family (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20210388361A1 (en) * | 2018-10-19 | 2021-12-16 | Interoligo Corporation | Modified nucleic acid having improved treatment efficacy, and anticancer pharmaceutical composition containing same |
EP3868774A4 (en) * | 2018-10-19 | 2023-05-10 | Interoligo Corporation | MODIFIED NUCLEIC ACID WITH IMPROVED TREATMENT EFFICIENCY AND ANTI-CANCER PHARMACEUTICAL COMPOSITION THEREOF |
KR20210061293A (ko) * | 2019-11-19 | 2021-05-27 | 주식회사 바이오이즈 | 압타머 기반 표적화 복합 항암제 |
CN114053248B (zh) * | 2020-08-10 | 2023-10-20 | 复旦大学 | 一种调控肿瘤代谢的核酸和小分子药物共递送纳米制剂及其制备方法 |
WO2023113243A1 (ko) * | 2021-12-16 | 2023-06-22 | 인터올리고 주식회사 | 변형 올리고뉴클레오티드-약물 접합체 및 이의 용도 |
CN115227829B (zh) * | 2022-02-22 | 2023-10-13 | 成都中医药大学 | 酸敏感性适配体雷公藤甲素偶联物及应用 |
Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2002538080A (ja) | 1998-11-30 | 2002-11-12 | シント イーエム エス.エ−. | 抗癌剤及び少なくとも一つのペプチドを含む医薬組成物 |
JP2006518753A (ja) | 2003-02-20 | 2006-08-17 | シアトル ジェネティックス, インコーポレイテッド | 抗cd70抗体−医薬結合体、ならびに癌および免疫障害の処置のためのそれらの使用 |
JP2014514329A (ja) | 2011-04-26 | 2014-06-19 | リガド・バイオサイエンシーズ・インコーポレーテツド | Peg化オリゴヌクレオチドの製造方法 |
US20140213636A1 (en) | 2009-04-15 | 2014-07-31 | Postech Academy-Industry Foundation | Method of treating hyperproliferation of cells using a nucleolin specific aptamer |
WO2015184224A1 (en) | 2014-05-30 | 2015-12-03 | Academia Sinica | Aptamer targeting mage-a3 peptide and uses thereof |
Family Cites Families (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
AU596068B2 (en) * | 1983-02-22 | 1990-04-26 | Syngene, Inc. | Defined sequence single strand oligonucleotides incorporating reporter groups, process for the chemical synthesis thereof, and nucleosides useful in such synthesis |
DK1545613T3 (da) * | 2002-07-31 | 2011-11-14 | Seattle Genetics Inc | Auristatinkonjugater og deres anvendelse til behandling af cancer, en autoimmun sygdom eller en infektiøs sygdom |
US8030475B2 (en) * | 2008-05-22 | 2011-10-04 | The Curators Of The University Of Missouri | Inhibitors of retroviral reverse transcriptase |
CA2811601A1 (en) * | 2010-09-24 | 2012-03-29 | Mallinckrodt Llc | Aptamer conjugates for targeting of therapeutic and/or diagnostic nanocarriers |
US9845362B2 (en) | 2010-10-08 | 2017-12-19 | The University Of North Carolina At Charlotte | Compositions comprising chimeric antigen receptors, T cells comprising the same, and methods of using the same |
US20170151339A1 (en) * | 2014-06-30 | 2017-06-01 | Tarveda Therapeutics, Inc. | Targeted conjugates and particles and formulations thereof |
KR101653451B1 (ko) | 2014-09-17 | 2016-09-01 | 포항공과대학교 산학협력단 | Her-2 표적화 압타머 복합체 및 이의 용도 |
CN106215191A (zh) * | 2016-08-04 | 2016-12-14 | 华东师范大学 | 一种脑胶质瘤靶向递药系统及其制备方法和用途 |
-
2016
- 2016-12-26 KR KR1020160179111A patent/KR102015524B1/ko active IP Right Grant
-
2017
- 2017-12-04 JP JP2019555545A patent/JP7067802B2/ja active Active
- 2017-12-04 AU AU2017389094A patent/AU2017389094B2/en active Active
- 2017-12-04 US US16/473,771 patent/US11458120B2/en active Active
- 2017-12-04 EP EP17887935.9A patent/EP3560517A4/en active Pending
- 2017-12-04 WO PCT/KR2017/014060 patent/WO2018124512A2/ko active Application Filing
- 2017-12-04 CN CN201780080822.7A patent/CN110167597A/zh active Pending
Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2002538080A (ja) | 1998-11-30 | 2002-11-12 | シント イーエム エス.エ−. | 抗癌剤及び少なくとも一つのペプチドを含む医薬組成物 |
JP2006518753A (ja) | 2003-02-20 | 2006-08-17 | シアトル ジェネティックス, インコーポレイテッド | 抗cd70抗体−医薬結合体、ならびに癌および免疫障害の処置のためのそれらの使用 |
US20140213636A1 (en) | 2009-04-15 | 2014-07-31 | Postech Academy-Industry Foundation | Method of treating hyperproliferation of cells using a nucleolin specific aptamer |
JP2014514329A (ja) | 2011-04-26 | 2014-06-19 | リガド・バイオサイエンシーズ・インコーポレーテツド | Peg化オリゴヌクレオチドの製造方法 |
WO2015184224A1 (en) | 2014-05-30 | 2015-12-03 | Academia Sinica | Aptamer targeting mage-a3 peptide and uses thereof |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
Int. J. Mol. Sci. (2015), 16, p.23784-23822 |
J. Biomed. Biotechnol. (2010), Vol. 2010, Article ID 168306 |
PLoS ONE (2015), 10(11), e0136673 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US11458120B2 (en) | 2022-10-04 |
US20190358202A1 (en) | 2019-11-28 |
KR102015524B1 (ko) | 2019-08-29 |
JP2020512393A (ja) | 2020-04-23 |
CN110167597A (zh) | 2019-08-23 |
AU2017389094A1 (en) | 2019-07-11 |
WO2018124512A3 (ko) | 2018-08-23 |
WO2018124512A2 (ko) | 2018-07-05 |
EP3560517A2 (en) | 2019-10-30 |
KR20180075133A (ko) | 2018-07-04 |
AU2017389094B2 (en) | 2023-01-05 |
EP3560517A4 (en) | 2020-08-26 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP7067802B2 (ja) | アプタマー-薬物コンジュゲート及びその用途 | |
US20220289785A1 (en) | Novel tetragalnac and peptide containing conjugates and methods for delivery of oligonucleotides | |
EP3897738B1 (en) | Saponin conjugates | |
JP6385525B2 (ja) | タンパク質−活性剤コンジュゲートおよびこれを調製するための方法 | |
EA027925B1 (ru) | Ендиины, их конъюгаты и способы их получения и применения | |
WO2016108587A1 (ko) | 리피바디 유도체-약물 복합체, 그 제조방법 및 용도 | |
US11679160B2 (en) | Castration resistant prostate cancer | |
KR101223484B1 (ko) | 사람 혈청 알부민-siRNA 나노입자 전달체 | |
US20230263897A1 (en) | Conjugate of galnac and saponin, therapeutic composition comprising said conjugate and a galnac-oligonucleotide conjugate | |
CN115666642A (zh) | 含有α-烯醇酶抗体的药物缀合物和其用途 | |
JP5478492B2 (ja) | 医薬化合物 | |
US20240131178A1 (en) | Antibody-drug conjugate including antibody against human cldn18.2, and use thereof | |
US20230302140A1 (en) | Conjugate of a single domain antibody, a saponin and an effector molecule, pharmaceutical composition comprising the same, therapeutic use of said pharmaceutical composition | |
US20220054645A1 (en) | Targeted Delivery of Therapeutic Molecules | |
WO2023048233A1 (ja) | 腫瘍細胞を死滅させるための医薬 | |
US20240115712A1 (en) | Semicarbazone-based saponin conjugate | |
US20240066045A1 (en) | Semicarbazone-based saponin conjugate | |
WO2023121447A1 (en) | Conjugate of a single domain antibody, a saponin and an effector molecule, pharmaceutical composition comprising the same, therapeutic use of said pharmaceutical composition | |
KR20240051956A (ko) | 암의 치료 및/또는 예방용 의약 조성물 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20190628 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20201106 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20210824 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20210831 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20211124 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20220412 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20220421 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7067802 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |