JP7053508B2

JP7053508B2 - 輸血を必要とする患者集団における有害事象を管理するための方法

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Publication number: JP7053508B2
Application number: JP2018567201A
Authority: JP
Inventors: アンヘロダレッサンドロ; ラファエルコルデロ; アンドリューダナム; フィリップキーガン; 達郎吉田
Original assignee: New Health Sciences Inc
Current assignee: New Health Sciences Inc
Priority date: 2016-06-23
Filing date: 2017-06-22
Publication date: 2022-04-12
Anticipated expiration: 2037-06-22
Also published as: US11090331B2; JP2019521998A; CN115429961A; IL305115A; US20190388467A1; IL263695B; CA3028435A1; EP3474922A1; IL263695B2; WO2017223377A1; JP7267482B2; IL297507B1; AU2022259846A1; AU2017281514A1; AU2017281514B2; EP4321215A2; US20230047634A1; EP4321215A3; IL297507A; JP2022093350A

Description

本開示は、輸血医療の分野における改善に関する。

従来通りに保存された場合、血液では種々の保存障害に関連する劣化、特に、溶血、ヘモグロビン分解、小胞形成、酸化ストレスの増加、ＡＴＰおよび２，３－ＤＰＧ濃度の低下などが着実に起こる。患者に輸血されると、保存中の着実な劣化の影響が、例えば、２４時間での体内回復の低下、血管外溶血および非トランスフェリン結合鉄の増加として現れる。２４時間回復の低減に起因するヘマトクリット値の急速な減少は、重度な場合、遅発性溶血性輸血反応（ＤＨＴＲ）をもたらす可能性がある。他の合併症、例えば、全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）、輸血関連急性肺障害（ＴＲＡＬＩ）、および輸血関連免疫調節（ＴＲＩＭ）は、保存血液の輸血に関連するが、根底にある原因の同定については不明なままであった。ある特定の症例において、輸血を受ける患者は、酸化ストレスの増加および酸化損傷に関連する糖尿病など、種々の基礎病態を患う。病態を管理または急性合併症を治療するために定期的な輸血を受ける鎌状赤血球症またはサラセミアを有する患者は、輸血された血液に有害反応を発症する可能性がある。これらおよび他の保存血液の輸血による医学的後遺症のために、保存が血液に及ぼす影響を最小限に抑え、医学的転帰を改善するための様々な手法が開発されてきた。例えば、Ｚｉｍｒｉｎｇｅｔａｌ．，“Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄａｎｄｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌｆａｃｔｏｒｓｔｏｃｏｎｓｉｄｅｒｉｎａｓｓｅｓｓｉｎｇｔｈｅｒｅｄｃｅｌｌｓｔｏｒａｇｅｌｅｓｉｏｎ”Ｂｌｏｏｄ，１２５：２１８５－９０（２０１５）、Ｄ’Ａｌｅｓｓａｎｄｒｏｅｔａｌ．，“Ｔｉｍｅ－ｃｏｕｒｓｅｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎｏｆＳＡＧＭ－ｓｔｏｒｅｄｌｅｕｋｏｃｙｔｅ－ｆｉｌｔｅｒｅｄｒｅｄｂｌｏｏｄｃｅｌｌｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｓ：ｆｒｏｍｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｔｏｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ”Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａ９７（１）：１０７－１１５（２０１２）、Ｄ’Ａｌｅｓｓａｎｄｒｏｅｔａｌ．，“Ｒｅｄｂｌｏｏｄｃｅｌｌｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｕｎｄｅｒｐｒｏｌｏｎｇｅｄａｎａｅｒｏｂｉｃｓｔｏｒａｇｅ”ＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏＳｙｓｔｅｍｓ９（６）：１１９６－２０９（２０１３）、Ｄ’Ａｌｅｓｓａｎｄｒｏｅｔａｌ．，“Ｒｅｄｂｌｏｏｄｃｅｌｌｓｔｏｒａｇｅｉｎａｄｄｉｔｉｖｅｓｏｌｕｔｉｏｎ－７ｐｒｅｓｅｒｖｅｓｅｎｅｒｇｙａｎｄｒｅｄｏｘｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ：ａｍｅｔａｂｏｌｏｍｉｃｓａｐｐｒｏａｃｈ，”Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ，５５（１２）：２９５５－６６（２０１５）、Ｄ’Ａｌｅｓｓａｎｄｒｏｅｔａｌ．，“Ｒｏｕｔｉｎｅｓｔｏｒａｇｅｏｆｒｅｄｂｌｏｏｄｃｅｌｌ（ＲＢＣ）ｕｎｉｔｓｉｎａｄｄｉｔｉｖｅｓｏｌｕｔｉｏｎ－３：ａｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎｏｆｔｈｅＲＢＣｍｅｔａｂｏｌｏｍｅ，”Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ，；５５（６）：１１５５－６８（２０１５）、Ｄ’Ａｌｅｓｓａｎｄｒｏｅｔａｌ．，“Ｃｉｔｒａｔｅｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｉｎｒｅｄｂｌｏｏｄｃｅｌｌｓｓｔｏｒｅｄｉｎａｄｄｉｔｉｖｅｓｏｌｕｔｉｏｎ－３，”Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ，；５７（２）：３２５－３３６（２０１６）（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい。

保存障害を最小限に抑え、輸血の転帰を改善することを目的とした数多くの手法が開発されている。手法としては、添加液（例えば、Ｈａｍａｓａｋｉらに対する米国特許第４，７６９，３１８号およびＳａｓａｋａｗａらに対する米国特許第４，８８０，７８６号、Ｈｅｓｓらに対する米国特許第６，４４７，９８７号）、凍結保存（ＳｅｒｅｂｒｅｎｎｉｋｏｖＣｈａｐｌｉｎらに対する米国特許第６，４１３，７１３号、”ＢｌｏｏｄＣｅｌｌｓｆｏｒＴｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ，”Ｂｌｏｏｄ，５９：１１１８－２０（１９８２）、およびＶａｌｅｒｉｅｔａｌ．，”Ｔｈｅｓｕｒｖｉｖａｌ，ｆｕｎｃｔｉｏｎ，ａｎｄｈｅｍｏｌｙｓｉｓｏｆｈｕｍａｎＲＢＣｓｓｔｏｒｅｄａｔ４ｄｅｇｒｅｅｓＣｉｎａｄｄｉｔｉｖｅｓｏｌｕｔｉｏｎ（ＡＳ－１，ＡＳ－３，ｏｒＡＳ－５）ｆｏｒ４２ｄａｙｓａｎｄｔｈｅｎｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｌｙｍｏｄｉｆｉｅｄ，ｆｒｏｚｅｎ，ｔｈａｗｅｄ，ｗａｓｈｅｄ，ａｎｄｓｔｏｒｅｄａｔ４ｄｅｇｒｅｅｓＣｉｎｓｏｄｉｕｍｃｈｌｏｒｉｄｅａｎｄｇｌｕｃｏｓｅｓｏｌｕｔｉｏｎｆｏｒ２４ｈｏｕｒｓ，”Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ，４０：１３４１－５（２０００）（「Ｖａｌｅｒｉ２０００」）、Ｄ’Ａｌｅｓｓａｎｄｒｏ，ｅｔａｌ．，”Ａｎｕｐｄａｔｅｏｎｒｅｄｂｌｏｏｄｃｅｌｌｓｔｏｒａｇｅｌｅｓｉｏｎｓ，ａｓｇｌｅａｎｅｄｔｈｒｏｕｇｈｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄｏｍｉｃｓｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，”Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ，５５（１）：２０５－２１９（ｅｐｕｂ２０１４）、Ｄ’Ａｌｅｓｓａｎｄｒｏ，ｅｔａｌ．，”Ｒｅｄｂｌｏｏｄｃｅｌｌｍｅｔａｂｏｌｉｃｒｅｓｐｏｎｓｅｓｔｏｒｅｆｒｉｇｅｒａｔｅｄｓｔｏｒａｇｅ，ｒｅｊｕｖｅｎａｔｉｏｎ，ａｎｄｆｒｏｚｅｎｓｔｏｒａｇｅ，”Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ，５７（４）：１０１９－１０３０（２０１７）、およびＤ’Ａｌｅｓｓａｎｄｒｏ，ｅｔａｌ．，”Ｒｅｄｂｌｏｏｄｃｅｌｌｓｔｏｒａｇｅｌｅｓｉｏｎ，”ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＳｏｃｉｅｔｙｏｆＢｌｏｏｄＴｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ，ＩＳＢＴＳｃｉｅｎｃｅＳｅｒｉｅｓ，１２：２０７－２１３（２０１７）（参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい）、再生（Ｖａｌｅｒｉ２０００を参照されたい）が挙げられる。

血液の品質を改善し、その有用性を拡張することで実績がある手法の１つは、酸素の枯渇によるもの、および嫌気性条件下での保存によるものである。酸素枯渇条件下で血液を保存することの利点の中には、ＡＴＰおよび２，３－ＤＰＧレベルの改善、ならびに溶血の低減がある。Ｂｉｔｅｎｓｋｙらに対する米国特許第５，６２４，７９４号、Ｂｉｔｅｎｓｋｙらに対する米国特許第６，１６２，３９６号、およびＢｉｔｅｎｓｋｙに対する米国特許第５，４７６，７６４号（参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）は、酸素枯渇条件下での赤血球の保存を対象としている。Ｂｉｔｅｎｓｋｙらに対する米国特許第５，７８９，１５１号は、血液保存添加液を対象としている。Ｂｉｔｅｎｓｋｙらに対する米国特許第６，１６２，３９６号（‘３９６特許）（参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）は、酸素不透過性の外層、酸素に対して透過性の赤血球（ＲＢＣ）適合性内層を備え、内層と外層との間に配置された酸素スクラバーを有する、血液保存のための嫌気性保存バッグについて開示している。

酸素枯渇条件下で血液保存することはまた、微小粒子レベルの低下（Ｙｏｓｈｉｄａｅｔａｌ．，“ＴｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆａｄｄｉｔｉｖｅｓｏｌｕｔｉｏｎｐＨａｎｄｍｅｔａｂｏｌｉｃｒｅｊｕｖｅｎａｔｉｏｎｏｎａｎａｅｒｏｂｉｃｓｔｏｒａｇｅｏｆｒｅｄｃｅｌｌｓ，”Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ４８：２０９６－２１０５（２００８）およびＹｏｓｈｉｄａ，Ｔ．，ｅｔａｌ．Ｒｅｄｕｃｔｉｏｎｏｆｍｉｃｒｏｐａｒｔｉｃｌｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｄｕｒｉｎｇａｎａｅｒｏｂｉｃｓｔｏｒａｇｅｏｆｒｅｄｂｌｏｏｄｃｅｌｌｓ．Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ，５２，８３Ａ（２０１２）（参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい）、従来の条件下で保存された血液と比較した場合に、変形能喪失の低減、脂質およびタンパク質酸化の低減、ならびにより高い輸血後の生存率（Ｄ’Ａｌｅｓｓａｎｄｒｏｅｔａｌ．“Ｒｅｄｂｌｏｏｄｃｅｌｌｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｕｎｄｅｒｐｒｏｌｏｎｇｅｄａｎａｅｒｏｂｉｃｓｔｏｒａｇｅ，”ＭｏｌＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ６：１１９６－１２０９（２０１３）、Ｐａｌｌｏｔｔａｅｔａｌ．，“ＳｔｏｒｉｎｇｒｅｄｂｌｏｏｄｃｅｌｌｓｗｉｔｈｖｉｔａｍｉｎＣａｎｄＮ－ａｃｅｔｙｌｃｙｓｔｅｉｎｅｐｒｅｖｅｎｔｓｏｘｉｄａｔｉｖｅｓｔｒｅｓｓ－ｒｅｌａｔｅｄｌｅｓｉｏｎｓ：ａｍｅｔａｂｏｌｏｍｉｃｓｏｖｅｒｖｉｅｗ，”ＢｌｏｏｄＴｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ，１２：３７６－３８７（２０１４）、ＺｏｌｌａａｎｄＤ’Ａｌｅｓｓａｎｄｒｏ，“Ｒｅｓｐｏｎｓｅｔｏ ‘ｐｌａｔｅｌｅｔｓｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓｉｎｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎｍｅｄｉｃｉｎｅ：ａｒｅａｌｉｔｙｗｉｔｈｃｈａｌｌｅｎｇｉｎｇｂｕｔｐｒｏｍｉｓｉｎｇｆｕｔｕｒｅ’，”ＢｌｏｏｄＴｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ，１１：３１６（２０１３）、Ｂｌａｓｉｅｔａｌ．，“Ｒｅｄｂｌｏｏｄｃｅｌｌｓｔｏｒａｇｅａｎｄｃｅｌｌｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ，”ＴｒａｎｓｆｕｓｉｏｎＭｅｄｉｃｉｎｅ，２２：９０－９６（２０１２）、Ｌｏｎｇｏｅｔａｌ．，“Ｄｅｏｘｙｇｅｎａｔｉｏｎｏｆｌｅｕｃｏｆｉｌｔｅｒｅｄｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｓｐｒｅｓｅｒｖｅｓｐｒｏｔｅｏｍｅｓｔａｂｉｌｉｔｙｄｕｒｉｎｇｓｔｏｒａｇｅｉｎｔｈｅｂｌｏｏｄｂａｎｋ，”ＢｌｏｏｄＴｒａｎｓｆｕｓ１２（４）：５９９－６０４（２０１４）（「Ｌｏｎｇｏ２０１４」）、およびＲｅｉｓｚ，ｅｔａｌ．，“Ｏｘｉｄａｔｉｖｅｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓｏｆｇｌｙｃｅｒａｌｄｅｈｙｄｅ３－ｐｈｏｓｐｈａｔｅｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅｒｅｇｕｌａｔｅｍｅｔａｂｏｌｉｃｒｅｐｒｏｇｒａｍｍｉｎｇｏｆｓｔｏｒｅｄｒｅｄｂｌｏｏｄｃｅｌｌｓ，”Ｂｌｏｏｄ，（２０１６）（「Ｒｅｉｓｚ２０１６」）（参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい）をもたらす可能性がある。

イソプロスタン、ならびにバンド３、グリセルアルデヒド３リン酸デヒドロゲナーゼおよびヘモグロビンなどの酸化した構造タンパク質および機能性タンパク質などの脂質過酸化のマーカーの蓄積によって示唆されるように、保存中の酸化損傷は、濃厚赤血球（ｐＲＢＣ）の膜損傷の主要原因として関与しているとされてきた（Ｗｉｔｈｅｒｅｔａｌ．，“Ｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎｏｘｉｄａｔｉｏｎａｔｆｕｎｃｔｉｏｎａｌａｍｉｎｏａｃｉｄｒｅｓｉｄｕｅｓｄｕｒｉｎｇｒｏｕｔｉｎｅｓｔｏｒａｇｅｏｆｒｅｄｂｌｏｏｄｃｅｌｌｓ，”Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ，（５６）２：４２１－４２６，（２０１６）（「Ｗｉｔｈｅｒ２０１６」）、およびＲｅｉｓｚ２０１６を参照されたい）。保存期間中のサイトカイン量の増加も、輸血の負の転帰に関する潜在的な臨床的意義を有する保存障害の発生に関与し得る。

ある特定の患者集団は、他の集団よりも保存障害の影響を受けやすい。患者集団を限定するものではないが、これらの患者集団は、大量にまたは長期に輸血されるレシピエント、例えば、外傷患者もしくは癌患者、またはヘモグロビン異常症を患う患者を含む（例えば、鎌状赤血球症）。これらのより感受性の高い集団の中には、非限定的な例として、外傷患者および癌患者が含まれる。有害な臨床転帰には、炎症を媒介し、細胞増殖を調節し、血管新生を調節し、Ｔ細胞の機能を調整する、サイトカインを含む生物学的応答調節物質（ＢＲＭ）の蓄積が関係している。これらのＢＲＭとして、インターロイキン１７（ＩＬ－１７）、エオタキシン（ＣＣＬ１１）、塩基性ＦＧＦ（ｂＦＧＦ）、マクロファージ炎症性タンパク質１ａ（ＭＩＰ－１ａ）、単球走化性タンパク質１（ＭＣＰ－１）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ－α）、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、ヒドロキシエイコサテトラエン酸（ＨＥＴＥ）、ロイコトリエン、およびトロンボキサンが挙げられる。Ｂｅｈｒｅｎｓｅｔａｌ．，“Ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎｏｆｂｉｏｌｏｇｉｃｒｅｓｐｏｎｓｅｍｏｄｉｆｉｅｒｓｄｕｒｉｎｇｒｅｄｂｌｏｏｄｃｅｌｌｃｏｌｄｓｔｏｒａｇｅ，”Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ４９（Ｓｕｐｐｌ３）：１０Ａ（２００９）（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい。また、サイトカインが血液の保存中に蓄積することも観察されており、これらの蓄積したサイトカインは、癌患者に周術期に投与された場合、負の転帰に関連する可能性がある。Ｂｅｎｓｏｎｅｔａｌ．，“ＡｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎｏｆＰｒｏ－ＣａｎｃｅｒＣｙｔｏｋｉｎｅｓｉｎｔｈｅＰｌａｓｍａＦｒａｃｔｉｏｎｏｆＳｔｏｒｅｄＰａｃｋｅｄＲｅｄＣｅｌｌｓ，”ＪＧａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔＳｕｒｇ．１６：４６０－４６８（２０１２）（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい。

保存障害を低減するための方法は進んできたが、どのような変化が保存中に生じるかについての理解は欠如している。最近の分子、ゲノムおよび代謝研究は、保存プロセス中に赤血球中で発生する特定の変化を同定し始めた。Ｄ’Ａｌｅｓｓａｎｄｒｏｅｔａｌ．，“Ｒｅｄｂｌｏｏｄｃｅｌｌｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｕｎｄｅｒｐｒｏｌｏｎｇｅｄａｎａｅｒｏｂｉｃｓｔｏｒａｇｅ，” Ｍｏｌ．Ｂｉｏｓｙｓｔ．９（６）：１１９６－２０９（２０１３）（Ｄ’Ａｌｅｓｓａｎｄｒｏ２０１３）、Ｄ’Ａｌｅｓｓａｎｄｒｏｅｔａｌ．，“Ｔｉｍｅ－ｃｏｕｒｓｅｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎｏｆＳＡＧＭ－ｓｔｏｒｅｄｌｅｕｋｏｃｙｔｅ－ｆｉｌｔｅｒｅｄｒｅｄｂｌｏｏｄｃｅｌｌｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｓ：ｆｒｏｍｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｔｏｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ” Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａ９７（１）：１０７－１１５（２０１２）、およびＲｏｂａｃｋｅｔａｌ．，“ＭｅｔａｂｏｌｏｍｉｃｓｏｆＡＳ－１ＲＢＣｓｔｏｒａｇｅ，”ＴｒａｎｓｆｕｓＭｅｄＲｅｖ．２８（２）：４１－５５（２０１４）、Ｄ’Ａｌｅｓｓａｎｄｒｏｅｔａｌ．，“Ｒｅｄｂｌｏｏｄｃｅｌｌｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｕｎｄｅｒｐｒｏｌｏｎｇｅｄａｎａｅｒｏｂｉｃｓｔｏｒａｇｅ，”Ｍｏｌ．Ｂｉｏｓｙｓｔ．９（６）：１１９６－２０９（２０１３）（Ｄ’Ａｌｅｓｓａｎｄｒｏ２０１３）、Ｄ’Ａｌｅｓｓａｎｄｒｏｅｔａｌ．，“Ｔｉｍｅ－ｃｏｕｒｓｅｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎｏｆＳＡＧＭ－ｓｔｏｒｅｄｌｅｕｋｏｃｙｔｅ－ｆｉｌｔｅｒｅｄｒｅｄｂｌｏｏｄｃｅｌｌｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｓ：ｆｒｏｍｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｔｏｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ” Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａ９７（１）：１０７－１１５（２０１２）、およびＲｏｂａｃｋｅｔａｌ．，“ＭｅｔａｂｏｌｏｍｉｃｓｏｆＡＳ－１ＲＢＣｓｔｏｒａｇｅ，”ＴｒａｎｓｆｕｓＭｅｄＲｅｖ．２８（２）：４１－５５（２０１４）（参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい。Ｄ’Ａｌｅｓｓａｎｄｒｏ２０１３は、好気性および酸素を除去した条件下で保存された赤血球の代謝を比較することを意図したものであるが、定常状態のみの代謝パラメータは、現在の最先端の分析ワークフローからは程遠い、予備的なメタボロミクス手法で測定された。その中に採取された結果は、それゆえ本質的に予備的で、濃厚ＲＢＣの嫌気性保存に関連する代謝利益の解明を制限し、解糖および低酸素的に保存された赤血球のペントースリン酸経路を介した実際の代謝流量に関連した機構的証拠の欠如を負っていた。したがって、結果は、酸素除去保存血液の特性の改善を正しく明らかにしなかった。これらの不備が原因で、Ｄ’Ａｌｅｓｓａｎｄｒｏ２０１３では、酸素除去保存が上昇させた酸化ストレスが、ペントースリン酸経路を介してグルコース代謝を制限することによりＲＢＣの抗酸化能を損なう可能性があり、酸化還元平衡を調節するために不可欠な等価物（ＮＡＤＰＨ）の低減を生じさせる（例えば、酸化グルタチオンの再循環）と結論した。しかしながら、これらの定常状態の観察は、代謝流量の実際の直接の測定値を提供せず、その研究において直接的に検証されなかった。Ｄ’Ａｌｅｓｓａｎｄｒｏ２０１３の結果とは対照的に、本開示の結果は、他の有益な特性の中でも特に、酸化ストレスおよびＰＰＰ活性化の減少を正確に明らかにする。

溶血の低下（ＦＤＡにより保存期間の間１％未満に保つよう定められる）、ならびにＡＴＰおよび２，３－ＤＰＧレベルの低下を含む同定された改善のような種々の保存液における全体的な血液の健康について嫌気性保存が及ぼす影響を解明する保存試験。現時点では、いかなる国際規制機関からも必要とされているわけではないが、保存中のＡＴＰおよび２，３－ＤＰＧレベルの生理学的な維持が、全体的な一般生存率および輸液された血液製剤の治療有効性を改善する可能性を有する。

本研究について、¹³Ｃ－グルコース（位置１、２および３）は、保存の初期に上昇し、保存期間の全体にわたり嫌気的および好気的両方で保存された細胞における乳酸＋２および＋３の同位体分子種比率、ならびにエネルギー代謝を計算することにより決定されるように、解糖によるグルコース酸化（高エネルギーリン酸化合物を生成する）およびペントースリン酸経路（抗酸化カスケードに燃料を供給する）の実際の流量を追跡して、比較する方法を提供する。簡潔には、理論に制限されるものではないが、ペントースリン酸経路（ＰＰＰ）の非酸化部分は、エムデン－マイヤーホフ－パルナス経路（ＥＭＰ）と交わり、５－炭素糖は、ＥＭＰに再び入り、乳酸として終わる。乳酸は、酸化ＰＰＰ（逆反応、糖新生なしで）によって現れ、位置１で¹³Ｃを欠いているだろう（グルコースがＰＰＰによって代謝される際、ＣＯ２の形で放出される）が、ＥＭＰによりグルコースから直接生成される乳酸は、¹³Ｃの３つの炭素全てを有するか、または全く有しないかのいずれかである。このようにして、代謝モデルを使用してＰＰＰを介した流量を評価できる。リボース－５－Ｐがアデニンヌクレオチドプール（ＡＸＰ）経路に入るので、ＡＴＰ分解および再合成に対するさらなる洞察を推論することができる。Ｒｅｉｓｚ２０１６を参照されたい。

２０世紀の変わり目に血液型が同定され、１９１６年にＲｏｕｓおよびＴｕｒｎｅｒにより輸血のための血液を保存する方法が開発されて以来、輸血は日常的な治療になった。輸血治療は、手術中の外傷および血液交換の治療から、癌療法、ならびに鎌状赤血球貧血およびサラセミアのような遺伝病の治療にまで及ぶ。特に、血液型および免疫性不適合の判定を除けば、血液保存傷害の根底にある変化を理解し、または輸血療法由来の合併症リスクの状態にある患者を同定することは、ほとんど進んでいない。これまでに、最適な方法の勧告および患者集団の選択については、ほとんど関心が持たれてこなかった。近年、専門家らは、全血、未分画血液（非溶血性発熱輸血反応（ＮＨＦＴＲｓ）、同種異系免疫化、および感染を減らす白血球除去を除く）が提供された場合、血漿、血小板、およびＲＢＣが１：１：１の比率で提供される場合の再組成された血液と比較して、外傷患者および出血患者の転帰の改善を認めた。全血について観察される改善に関して基礎をなす生化学および生理学は明らかではないが、観察により輸血のための患者集団の区別についての専門家間の議論がもたらされた。

赤血球の酸素除去保存に関する生化学的および細胞生理学的な影響力についての理解があがるにつれ、輸血治療が画一的なアプローチを乗り越える必要があることを、患者病理学の不均一性により示されたことが明らかになった。むしろ、広範囲の慢性および急性病理により、定義のより微細な段階および血液製剤の生化学的および細胞構造に関する制御が、患者転帰を改善する可能性があることが示された。一部の患者集団、特に若く、１～２ユニットのみの急性輸血を必要とする比較的健康な患者は、通常、赤血球保存傷害の有害作用に耐性を示すが、生存のためにＲＢＣ輸血に依存する患者集団では、より輸血関連合併症に脆弱である。

したがって、従来の輸血方法を使用した治療リスクがある患者集団、およびカスタマイズした輸血医療から恩恵を得る可能性がある患者集団を同定する必要性が高まっている。血液型に基づいて患者を区別することに加えて、以下に示された結果は、輸血を受ける患者の医学的な状況の評価、および患者と年齢、保存条件、添加液、および血液製剤の種別（全血、ｐＲＢＣ、再組成された、二重血小板など）とのマッチングが、特定の形態の輸血治療を処方する前に、医師によって考慮されるべきであることを示す。

本開示は、輸血を必要とする患者における炎症反応リスクを低減する方法であって、同一保存期間の間保存された酸素除去保存血液と比較した場合に、少なくとも１つの炎症因子レベルが低下した酸素除去保存血液を提供することを含み、該患者の炎症反応リスクが増加している方法、を提供し、かつ含む。

本開示は、輸血を必要とするヒト患者の酸化ストレスを低減するための方法であって、輸血媒介型の酸化ストレスのリスクが増加し輸血を必要とするヒト患者への輸血のために、酸素除去保存血液を提供することを含み、該酸素除去保存血液は、保存期間の間保存される前に２０％以下の初期酸素飽和を有し、該患者の酸化ストレスリスクが増加している方法を提供し、かつ含む。

本開示は、輸血を必要とし、心臓、腎臓および胃腸虚血再潅流傷害のリスクが増加しているヒト患者への輸血のために、保存期間の間保存される前に２０％以下の初期酸素飽和を有する酸素除去保存血液を提供することを含む、輸血を必要とする患者における心臓、腎臓、および胃腸の虚血再潅流傷害を低減するための方法を提供し、かつ含む。

本開示は、輸血を必要とするヘモグロビン異常症患者への輸血のために酸素除去保存血液を提供することを含み、酸素除去保存血液は保存期間の間保存される前に２０％以下の初期酸素飽和を有し、患者の酸化ストレスリスクが増加している、輸血を必要とするヘモグロビン異常症患者の有害事象リスクを低減するための方法を提供し、かつ含む。

本開示は、輸血を必要とする患者の遅発性溶血性輸血反応を低減するための方法であって、保存期間の間保存される前に２０％以下の初期酸素飽和を有する酸素除去保存血液を提供することを含み、患者の遅発性溶血性輸血反応リスクが増加している、方法を提供し、かつ含む。

本開示は、添付図面を参照して開示される。
図１～２０は、本開示の態様に従って、従来通りに保存された血液（正常酸素）および保存前に充分に酸素添加された血液（超酸素化または高酸素）と比較した、保存期間の間保存される前に２０％以下の初期酸素飽和（酸素除去保存血液）を有する保存血液（この態様において、濃厚赤血球）の研究の結果を提示する。
対応する参照特徴は、いくつかの図を通して対応する部分を示す。本明細書において開示される実施例は、本開示のいくつかの実施形態を例示するが、いかなる方法においても本開示の範囲を限定するものと解釈すべきではない。

図１は、従来通りに保存された正常酸素（実線）および高酸素血液（－－－）、ならびに初期ＳＯ₂パーセントが２０、１０、５および＜３％の嫌気性保存血液における、４２日間のＳＯ₂パーセントを示しているグラフである。図２は、本開示による実験結果を示しているグラフであり、従来通りに保存された正常酸素（実線）および高酸素（－－－）、ならびに初期ＳＯ₂パーセントが２０、１０、５および＜３％の酸素除去保存血液のロイコトリエンＢ４のレベルを比較している。図３は、本開示による実験結果を示しているグラフであり、従来通りに保存された正常酸素（実線）および高酸素（－－－）、ならびに初期初期ＳＯ₂パーセントが２０、１０、５および＜３％の酸素除去保存血液のトロンボキサンＢ２のレベルを比較している。図４Ａおよび４Ｂは、本開示による実験結果を示しているグラフであり、従来通りに保存された正常酸素（実線）および高酸素（－－－）、ならびに初期初期ＳＯ₂パーセントが２０、１０、５および＜３％の酸素除去保存血液のヒドロキシエイコサテトラエン酸（ＨＥＴＥ）のレベルを比較している。図４Ａは、４２日間の上清中のＨＥＴＥレベルを示す。図４Ｂは、４２日間にわたる酸素除去保存血液中のＨＥＴＥレベルを示す。図５は、本開示による実験結果を示しているグラフであり、従来通りに保存された正常酸素（実線）および高酸素（－－－）、ならびに初期初期ＳＯ₂パーセントが２０、１０、５および＜３％の酸素除去保存血液のＮＡＤＰＨのレベルを比較している。図６は、本開示による実験結果を示しているグラフであり、従来通りに保存された正常酸素（実線）および高酸素（－－－）、ならびに初期初期ＳＯ₂パーセントが２０、１０、５および＜３％の酸素除去保存血液のＮＡＤＰＨ／ＮＡＤＰ⁺を比較している。図７は、本開示による実験結果を示しているグラフであり、従来通りに保存された正常酸素（実線）および高酸素（－－－）、ならびに初期初期ＳＯ₂パーセントが２０、１０、５および＜３％の酸素除去保存血液のＮＡＤＰＨおよびＮＡＤＰ⁺の総貯蔵を比較している。図８は、本開示による実験結果を示しているグラフであり、従来通りに保存された正常酸素（実線）および高酸素（－－－）、ならびに初期初期ＳＯ₂パーセントが２０、１０、５および＜３％の酸素除去保存血液のＮＡＤＰおよびＮＡＤ⁺の総貯蔵を比較している。図９は、本開示による実験結果を示しているグラフであり、従来通りに保存された正常酸素（実線）および高酸素（－－－）、ならびに初期初期ＳＯ₂パーセントが２０、１０、５および＜３％の酸素除去保存血液のメチレンテトラヒドロ葉酸のレベルを比較している。図１０は、本開示による実験結果を示しているグラフであり、従来通りに保存された正常酸素（実線）および高酸素（－－－）、ならびに初期初期ＳＯ₂パーセントが２０、１０、５および＜３％の酸素除去保存血液のグルタミン酸塩のレベルを比較している。図１１は、本開示による実験結果を示しているグラフであり、従来通りに保存された正常酸素（実線）および高酸素（－－－）、ならびに初期初期ＳＯ₂パーセントが２０、１０、５および＜３％の酸素除去保存血液の還元型グルタチオン（ＧＳＨ）のレベルを比較している。図１２は、本開示による実験結果を示しているグラフであり、従来通りに保存された正常酸素（実線）および高酸素（－－－）、ならびに初期初期ＳＯ₂パーセントが２０、１０、５および＜３％の酸素除去保存血液のＧＳＨ／ＧＳＳＧ比率を比較している。図１３は、本開示による実験結果を示しているグラフであり、従来通りに保存された正常酸素（実線）および高酸素（－－－）、ならびに初期初期ＳＯ₂パーセントが２０、１０、５および＜３％の酸素除去保存血液のシステインのレベルを比較している。図１４は、本開示による実験結果を示しているグラフであり、従来通りに保存された正常酸素（実線）および高酸素（－－－）、ならびに初期初期ＳＯ₂パーセントが２０、１０、５および＜３％の酸素除去保存血液の尿酸塩のレベルを比較している。図１５は、本開示による実験結果を示しているグラフであり、従来通りに保存された正常酸素（実線）および高酸素（－－－）、ならびに初期初期ＳＯ₂パーセントが２０、１０、５および＜３％の酸素除去保存血液のＥＭＰ流量を比較している。図１６は、本開示による実験結果を示しているグラフであり、従来通りに保存された正常酸素（実線）および高酸素（－－－）、ならびに初期初期ＳＯ₂パーセントが２０、１０、５および＜３％の酸素除去保存血液のＡＴＰ合成を比較している。図１７は、本開示による実験結果を示しているグラフであり、従来通りに保存された正常酸素（実線）および高酸素（－－－）、ならびに初期ＳＯ₂パーセントが５％の酸素除去保存血液における、グリセルアルデヒド３リン酸デヒドロゲナーゼのＣｙｓ１５２ジオキシド化を比較している。図１８Ａおよび１８Ｂは、本開示による実験結果を示しているグラフであり、従来通りに保存された正常酸素（実線）および高酸素（－－－）、ならびに初期初期ＳＯ₂パーセントが２０、１０、５および＜３％の酸素除去保存血液のＰＩＰ３に対するＰＩＰのリン酸化を比較している。図１９は、本開示による実験結果を示しているグラフであり、従来通りに保存された正常酸素（実線）および高酸素（－－－）、ならびに初期初期ＳＯ₂パーセントが２０、１０、５および＜３％の酸素除去保存血液のヘモグロビンβサブユニットのヒスチジン９３の酸化を比較している。図２０は、本開示による実験結果を示しているグラフであり、従来通りに保存された正常酸素（実線）および高酸素（－－－）、ならびに初期初期ＳＯ₂パーセントが２０、１０、５および＜３％の酸素除去保存血液のメトヘモグロビンレベルを比較している。

血液型判定以外の、幅広い種々の医学分野における個別医療の進歩とは対照的に、血液バンクから保存血液を受ける際、特定の集団に対するリスクはこれまで同定されておらず、リスクを減少または最小化するための有効な戦略および方法は開発されてこなかった。さらに具体的には、特定の集団は、根底にあるまたは付随的な続発性の病態に基づく、輸血療法由来の合併症のリスクが高い状態にある（例えば、既存の病態）。既存の病態とは、糖尿病、虚血性心疾患、外傷または感染によって引き起こされる全身性炎症反応症候群、外傷または感染によって引き起こされる多臓器不全、煙吸入、および感染、自己免疫疾患による全身性炎症などの慢性肺閉塞性疾患、および糖尿病などが挙げられるが、これらに限定されるものではない。さらに他の集団、例えば鎌状赤血球およびサラセミア患者は、例えば、頻回輸血の結果生じる合併症のリスクが高い。本明細書で提供される酸素除去保存血液および方法は、炎症因子レベルの新しく予想外な低下、酸化損傷からの保護の改善、微小粒子レベルの低下、および／または保存中のその他の変化を提供することができ、それによって、輸血治療を必要とする特定の患者集団に対して改善および安全性またはその他の有用性を提供する。本明細書において提供されるように、本方法は、リスクの増加に伴う既存病態を有するとみなせる特定の患者の罹患率および有害事象の減少を提供し、かつ含むものを含むものである。

酸素除去保存血液の特定の有用性については当該技術分野で既知であったが、保存障害の性質および従来通りの保存中または酸素を除去した保存中に生じる変化に関しては、比較的ほとんど知られていない。以下の表１で提供されるように、保存血液に対する変化は低温保存開始後、早ければ２日間で認識可能である。
表１：従来の保存と比較した、酸素除去保存血液の改善および臨床的有用性

本開示は、輸血を必要とするヒト患者において炎症反応リスクを減らすための方法であって、輸血を必要とするヒト患者への輸血のために、保存期間の間保存される前に２０％以下の初期酸素飽和を有する酸素除去保存血液を提供することを含み、該患者の炎症反応リスクが増加している方法を、提供し、かつ含む（例えば、表１参照のこと）。本開示による態様において、酸素除去保存血液は、少なくとも１つの炎症因子レベルが低下している。本明細書において用いられる場合、初期酸素飽和とは、１～６℃での保存開始前の血液の酸素飽和を意味する。従来通りの保存について、採取および赤血球を濃縮する処置での静脈血の初期酸素飽和は約５０％であり、保存期間の間、従来の保存バッグの透過性が原因で１～２週間で完全飽和にまで増加する（例えば、図１参照のこと）。

いかなる科学理論にも制限されるものではないが、他の変化の中でも、好気性環境での赤血球の保存は、保存中および輸血後の両方で、循環環境への微小粒子の浸出、および膜の小胞形成を促進する。しかしながら、酸素除去保存血液製剤の生成および維持は、ランズ回路の活性化ならびにカルシウムイオンチャネルの活性化を阻害することを介して、全体的な膜安定性を増加させ、そしてそれは細胞膜スクランブリングおよび脱落することに関連している。図１８を参照されたい。さらに、酸素除去保存血液はまた、ロイコトリエンＢ４（例えば、図２を参照のこと）およびＨＥＴＥ（例えば、図４を参照のこと）、強力な炎症促進性脂質のレベルを低下させた。ある態様において、酸素除去保存血液の使用は、輸血による炎症促進性の影響、特に既存の炎症性病理の患者について予防または軽減するだろう。加えて、酸素除去保存血液は、輸血関連急性肺障害（ＴＲＡＬＩ）および全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）などの新しい病理を予防することができる。

本開示の方法は、炎症反応リスクの状態にある患者を同定することと、同定した患者に、保存期間の間保存される前に２０％以下の初期酸素飽和を有する酸素除去保存血液を提供することと、を提供し、かつ含む。本明細書で使用される場合、酸素除去保存血液を提供することは、段落［０１２８］に提供されるように全血、および段落［０１２９］および［０１３０］に提供されるように赤血球、を含むが、これらに限定されない。

保存期間の間保存される前に２０％以下の初期酸素飽和を有する酸素除去保存血液は、より低レベルの酸素で調整され得る。本開示により提供される場合、ある特定の改善は２０％の初期飽和レベルの始まりで明らかである。本明細書で使用される場合、本開示において提供される、選ばれた患者に対する改善および有用性は、同一保存期間の間保存された非酸素除去保存血液に対して（例えば、に比べて）である。重要なことに、これらの差異は、保存期間が増えるにつれておよび保存前の初期酸素飽和が減るにつれて、より顕著になる。

本開示の一態様において、段落００４７で特定されるように、少なくとも２日間保存された、２０％以下の初期酸素飽和を有する酸素除去保存血液は、ロイコトリエンＢ４を減らした。別の態様において、本開示の酸素除去保存血液は、さらに、トロンボキサンＢ２の低減を含む。他の態様において、本開示の酸素除去保存血液は、ロイコトリエンＢ４の低減、トロンボキサンＢ２の低減、およびＨＥＴＥの低減を有する酸素除去保存血液である。さらなる態様において、本開示の酸素除去保存血液は、ロイコトリエンＢ４の低減およびＨＥＴＥの低減を有する酸素除去保存血液である。他の態様において、段落［０１２８］、［０１２９］、および［０１３０］で特定されるように、酸素除去保存血液はさらに、ロイコトリエンＢ４の低減、トロンボキサンＢ２、およびＨＥＴＥをさらに含む。本開示の一態様において、炎症反応リスクを低減するのに好適な酸素除去保存血液としては、ロイコトリエンＢ４の低減、トロンボキサンＢ２、およびＨＥＴＥを有する酸素除去保存血液が挙げられる。別の態様において、炎症反応リスクを低減させるのに好適な酸素除去保存血液は、メトヘモグロビンの低減、残基Ｈ９３でのβヘモグロビンの酸化の低減、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＤＰＨ）貯蔵の増加、ＧＳＨの増加、ＡＴＰの増加、ＤＰＧの増加、ＮＡＤＰＨ貯蔵の増加、ＰＩＰ対ＰＩＰ３比率の低下、メチレンＴＨＦの増加、グルタミン酸塩の増加、ＧＳＨ対グルタチオンジスルフィド（ＧＳＳＧ）比率（ＧＳＨ／ＧＳＳＧ比）の増加、尿酸塩の増加、およびシステインの増加をさらに含む。別の態様において、炎症反応リスクを低減させるのに好適な酸素除去保存血液は、さらに、メトヘモグロビンの低減を含む。別の態様において、炎症反応リスクを低減させるのに好適な酸素除去保存血液は、残基Ｈ９３におけるβヘモグロビンの酸化の低減を含む。別の態様において、炎症反応リスクを低減させるのに好適な酸素除去保存血液は、さらに、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＤＰＨ）貯蔵の増加を含む。別の態様において、炎症反応リスクを低減させるのに好適な酸素除去保存血液は、さらに、ＧＳＨの増加を含む。別の態様において、炎症反応リスクを低減させるのに好適な酸素除去保存血液は、さらに、ＡＴＰの増加を含む。別の態様において、炎症反応リスクを低減させるのに好適な酸素除去保存血液は、さらに、ＤＰＧの増加を含む。別の態様において、炎症反応リスクを低減させるのに好適な酸素除去保存血液は、ＮＡＤＰＨ貯蔵の増加をさらに含む。別の態様において、炎症反応リスクを低減させるのに好適な酸素除去保存血液は、さらに、ＰＩＰ対ＰＩＰ３比率の低減を含む。別の態様において、炎症反応リスクを低減させるのに好適な酸素除去保存血液は、さらに、メチレンＴＨＦの増加を含む。別の態様において、炎症反応リスクを低減させるのに好適な酸素除去保存血液は、さらに、グルタミン酸塩の増加を含む。別の態様において、炎症反応リスクを低減させるのに好適な酸素除去保存血液は、さらに、ＧＳＨ対グルタチオンジスルフィド（ＧＳＳＧ）比率（ＧＳＨ／ＧＳＳＧ比）の増加を含む。別の態様において、炎症反応リスクを低減させるのに好適な酸素除去保存血液は、さらに、尿酸塩の増加を含む。別の態様において、炎症反応リスクを低減させるのに好適な酸素除去保存血液は、さらに、システインの増加を含む。

本開示の一態様において、例えば、段落００４８で特定されるように、少なくとも２日間保存された、１０％以下の初期酸素飽和を有する酸素除去保存血液は、ロイコトリエンＢ４を減らす。別の態様において、本開示の酸素除去保存血液は、さらに、トロンボキサンＢ２の低減を含む。他の態様において、本開示の酸素除去保存血液は、ロイコトリエンＢ４の低減、トロンボキサンＢ２の低減、およびＨＥＴＥの低減を有する酸素除去保存血液である。さらなる態様において、本開示の酸素除去保存血液は、ロイコトリエンＢ４の低減およびＨＥＴＥの低減を有する酸素除去保存血液である。さらなる態様において、例えば、段落［００５２］および［００５４］で特定されるように、酸素除去保存血液は、ロイコトリエンＢ４の低減、トロンボキサンＢ２、およびＨＥＴＥをさらに含む。炎症反応リスクを低減するのに好適な酸素除去保存血液としては、ロイコトリエンＢ４の低減、トロンボキサンＢ２、およびＨＥＴＥを有する酸素除去保存血液が挙げられる。

本開示の一態様において、例えば、段落［００４９］で特定されるように、少なくとも２日間保存された、５％以下の初期酸素飽和を有する酸素除去保存血液は、ロイコトリエンＢ４を減らした。別の態様において、本開示の酸素除去保存血液は、さらに、トロンボキサンＢ２の低減を含む。他の態様において、本開示の酸素除去保存血液は、ロイコトリエンＢ４の低減、トロンボキサンＢ２の低減、およびＨＥＴＥの低減を有する酸素除去保存血液である。さらなる態様において、本開示の酸素除去保存血液は、ロイコトリエンＢ４の低減およびＨＥＴＥの低減を有する酸素除去保存血液である。さらなる態様において、例えば、段落［００５２］および［００５４］で特定されるように、酸素除去保存血液は、ロイコトリエンＢ４の低減、トロンボキサンＢ２、およびＨＥＴＥをさらに含む。炎症反応リスクを低減するのに好適な酸素除去保存血液としては、ロイコトリエンＢ４の低減、トロンボキサンＢ２、およびＨＥＴＥを有する酸素除去保存血液が挙げられる。

本開示の一態様において、例えば、段落［００５０］で特定されるように、少なくとも２日間保存された、３％以下の初期酸素飽和を有する酸素除去保存血液は、ロイコトリエンＢ４を減らした。別の態様において、本開示の酸素除去保存血液は、さらに、トロンボキサンＢ２の低減を含む。他の態様において、本開示の酸素除去保存血液は、ロイコトリエンＢ４の低減、トロンボキサンＢ２の低減、およびＨＥＴＥの低減を有する酸素除去保存血液である。さらなる態様において、本開示の酸素除去保存血液は、ロイコトリエンＢ４の低減およびＨＥＴＥの低減を有する酸素除去保存血液である。さらなる態様において、例えば、段落［００５２］および［００５４］で特定されるように、酸素除去保存血液は、ロイコトリエンＢ４の低減、トロンボキサンＢ２、およびＨＥＴＥをさらに含む。炎症反応リスクを低減させるのに好適な酸素除去保存血液としては、ロイコトリエンＢ４の低減、トロンボキサンＢ２、およびＨＥＴＥを有する酸素除去保存血液が挙げられる。

本開示の方法は、炎症反応リスクが増加している患者を同定することと、同定した患者に、保存期間の間保存される前に２０％以下の初期酸素飽和を有する酸素除去保存血液を提供することと、を提供し、かつ含む。方法はまた、炎症反応リスクが増加している人物に輸血するために、保存期間の間保存される前に２０％以下の初期酸素飽和を有する酸素除去保存血液を提供することを提供する。また、炎症反応リスクが増加している患者に、保存期間の間保存される前に２０％以下の初期酸素飽和を有する酸素除去保存血液を輸血することを含む方法も含まれる。考察されるように、保存期間が増加するにつれて、酸素除去保存血液を輸血することの炎症反応リスクが増加している患者への改善および有用性は、従来の方法を用いて保存された血液に対して増加する。したがって、２０％以下の初期酸素飽和を有する酸素除去保存血液を提供する方法は、１０％以下の初期酸素飽和を有する酸素除去保存血液を提供することを含む。２０％以下の初期酸素飽和を有する酸素除去保存血液を提供する方法は、さらに、５％以下の初期酸素飽和を有する酸素除去保存血液を提供することを含む。２０％以下の初期酸素飽和を有する酸素除去保存血液を提供する方法は、３％以下の初期酸素飽和を有する酸素除去保存血液を提供することをさらに含む。

一部の態様において、炎症因子はタンパク質である。一態様において、炎症因子はサイトカインである。本開示による一部の態様において、少なくとも炎症因子は、少なくとも１つのエイコサノイド炎症性メディエーターである。少なくとも１つのエイコサノイド炎症性メディエーターおよび少なくとも１つの炎症性サイトカインの低減がさらに本明細書において提供される。本開示による一態様において、酸素除去保存血液は、少なくとも２日間保存され、低レベルの炎症因子をもたらす。一態様において、低減された炎症因子は、トロンボキサンＢ２およびヒドロキシエイコサテトラエン酸（ＨＥＴＥ）を含む。さらなる態様において、低レベルの炎症因子は、ＲＡＮＴＥＳ、エオタキシン１、可溶性ＣＤ４０－リガンド（ＳＣＤ４０Ｌ）、またはそれらの組み合わせなどの生物反応修飾物質を含む。

一態様において、本開示の方法は、保存期間の間保存される前に２０％以下の初期酸素飽和を有する酸素除去保存血液を炎症反応リスクが増加している患者に提供すること、を提供し、かつ含む。一態様において、炎症反応リスクが増加している患者は、組織潅流バイパスを必要とする手術患者である。一態様において、炎症反応リスクが増加している患者は、慢性血管炎症を有する患者である。一態様において、炎症反応リスクが増加している患者は、慢性炎症性腸疾患を有する患者である。一態様において、炎症反応リスクが増加している患者は、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）を有する患者である。一態様において、炎症反応リスクが増加している患者は、鎌状赤血球症を有する患者である。一態様において、炎症反応リスクが増加している患者は、サラセミアを有する患者である。一態様において、患者はα－サラセミアを有する。別の態様において、必要とする患者は、β－サラセミアを有する。一態様において、炎症反応リスクが増加している患者は、臓器不全を有する患者である。一態様において、炎症反応リスクが増加している患者は、全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）を有する患者である。一態様において、炎症反応リスクが増加している患者は、真性糖尿病を有する患者である。一態様において、炎症反応リスクが増加している患者は、ベーチェット病を有する患者である。一態様において、炎症反応リスクが増加している患者は、リウマチ性関節炎を有する患者である。一態様において、炎症反応リスクが増加している患者は、煙吸入を有する患者である。一態様において、炎症反応リスクが増加している患者は、虚血性心疾患を有する患者である。

また、基礎病態の組み合わせを有する患者が、提供され、かつ含まれる。一態様において、炎症反応リスクが増加している患者は、鎌状赤血球およびβ－サラセミアを有する。一態様において、炎症反応リスクが増加している患者は、糖尿病およびＣＯＰＤを有する。一態様において、炎症反応リスクが増加している患者は、鎌状赤血球症およびＳＩＲＳを有する。一態様において、炎症反応リスクが増加している患者は、糖尿病および虚血性心疾患を有する。一態様において、炎症反応リスクが増加している患者は、ＭＯＤＳおよびＳＩＲＳを有する。一態様において、炎症反応リスクが増加している患者は、ＣＯＰＤおよび虚血性心疾患を有する。一態様において、炎症反応リスクが増加している患者は、自己免疫疾患の外傷患者である。個々の患者が個々のリスクについて別々に評価されることは、当業者に理解されるであろう。つまり、個々のリスクについて参照するために提供される方法であって、リスク因子を選択するリスク一覧として提供するものではない。

ある特定の態様において、本開示の方法は、増加したレベルの炎症因子を有する輸血された血液によって悪化する、２つ以上の基礎病態を有する患者により大きな利益を提供する。一態様において、既存の病態を悪化させるリスクが増加している患者は、鎌状赤血球およびβ－サラセミアを有する。一態様において、既存の病態を悪化させるリスクが増加している患者は、糖尿病およびＣＯＰＤを有する。一態様において、既存の病態を悪化させるリスクが増加している患者は、鎌状赤血球症およびＳＩＲＳを有する。一態様において、既存の病態を悪化させるリスクが増加している患者は、糖尿病および虚血性心疾患を有する。一態様において、既存の病態を悪化させるリスクが増加している患者は、ＭＯＤＳおよびＳＩＲＳを有する。一態様において、既存の病態を悪化させるリスクが増加している患者は、ＣＯＰＤおよび虚血性心疾患を有する。他の態様において、増加したレベルの炎症因子を有する血液を輸血することによって悪化する基礎病態リスクの状態にある患者は、長期輸血治療後に炎症反応が悪化した鎌状赤血球症に起因する慢性炎症の患者である。別の態様において、基礎病態を悪化させるリスク状態にある患者は、治療用輸血後に貧血がＤＨＴＲによって悪化した、鎌状赤血球および／またはサラセミアの溶血性貧血患者である。さらに別の態様では、基礎病態を悪化させる危険性のある患者は、輸血後に悪化した炎症反応が増加した、肥満および糖尿病に起因する全身性炎症の患者である。別の態様において、基礎病態を悪化させる危険性のある患者は、輸血を受けた後に炎症反応を悪化させた、外傷または感染に起因したＳＩＲＳＳに罹患している患者である。一態様において、基礎病態を悪化させる危険性のある患者は、手術中に輸血を受ける虚血性心疾患の患者であり、活性酸素種および炎症性生体分子の輸血の結果として、組織損傷を増加させ得る。本明細書に提供されるように、本開示の酸素除去保存血液は、初期の、少なくとも早ければ保存期間の２日目から、炎症因子レベルの低下をもたらす。本明細書で使用される場合、「悪化」とは、既存の炎症性病態の炎症の増加を意味する。本開示の一態様において、反応の悪化を有する患者は、糖尿病、自己免疫疾患、または外傷から生じる基礎低級炎症性病態を有する患者である。

本開示の方法は、慢性血管炎症を有する患者に酸素除去保存血液を提供することを提供し、かつ含む。いかなる科学理論にも制限されるものではないが、慢性血管炎症は、鎌状赤血球症、血液癌、糖尿病および心疾患などいくつかの変性障害に伴う併存症である。これらの炎症促進性病態において、赤血球は、生物活性キナーゼおよび他のシグナル伝達分子を含有する膜微小粒子の放出によって炎症促進性シグナルを開始または伝達する可能性があることが示された。これらの微小粒子は、循環単球によって取り込まれる可能性があり、ＴＮＦ－α、ＩＬ－１β、およびＩＬ－６の放出を刺激する；さらにまた、ＲＢＣ分泌した微小粒子の取り込みは、単球内皮癒着も促進する。Ａｗｏｊｏｏｄｕｅｔａｌ．，“ＡｃｉｄｓｐｈｉｎｇｏｍｙｅｌｉｎａｓｅｉｓａｃｔｉｖａｔｅｄｉｎｓｉｃｋｌｅｃｅｌｌｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅｓａｎｄｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓｔｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｍｉｃｒｏｐａｒｔｉｃｌｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｉｎＳＣＤ，”Ｂｌｏｏｄ１２４（１２）：１９４１－５０（２０１４）（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい。しかしながら、慢性炎症性障害は、通常の治療パラダイムまたは外科的介入の課程の中で、従来の赤血球製剤の輸血によって、さらに悪化する可能性がある。加えて、ＲＢＣ保存またはエリプトーシスの結果として生成された、ホスファチジルセリン（ＰＳ）を露出する微小粒子は、レシピエントにおいて炎症増加の原因となり得る。Ｓａａｓｅｔａｌ．，“Ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｓｅｒｉｎｅ－ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇｃｅｌｌｂｙ－ｐｒｏｄｕｃｔｓｉｎｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ：Ａｐｒｏ－ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｏｒａｎａｎｔｉ－ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｅｆｆｅｃｔ？” ＴｒａｎｓｆｕｓｉｏｎＣｌｉｎｉｑｕｅｅｔＢｉｏｌｏｇｉｑｕｅ１９（３）：９０－９７（２０１２）Ｓａａｓｅｔａｌ．，“Ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｓｅｒｉｎｅ－ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇｃｅｌｌｂｙ－ｐｒｏｄｕｃｔｓｉｎｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ：Ａｐｒｏ－ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｏｒａｎａｎｔｉ－ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｅｆｆｅｃｔ？”ＴｒａｎｓｆｕｓｉｏｎＣｌｉｎｉｑｕｅｅｔＢｉｏｌｏｇｉｑｕｅ１９（３）：９０－９７（２０１２）（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい。

本開示の方法は、慢性炎症性腸疾患を有する患者に酸素除去保存血液を提供することを提供し、かつ含む。潰瘍性大腸炎およびクローン病などの慢性炎症性大腸疾患患者は、循環環境から腸管腔に好中球の漸増が上昇した結果として、慢性的に活性化された腸内炎症によって特徴づけられる。Ｎｉｅｌｓｅｎｅｔａｌ．，“ＡｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌｃｈｅｍｏｔａｘｉｓｂｙｌｅｕｋｏｔｒｉｅｎｅＢ４ａｎｄ５－ｈｙｄｒｏｘｙｅｉｃｏｓａｔｅｔｒａｅｎｏｉｃａｃｉｄｉｎｃｈｒｏｎｉｃｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｂｏｗｅｌｄｉｓｅａｓｅ，”ＳｃａｎｄｉｎａｖｉａｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｌｉｎｉｃａｌａｎｄＬａｂｏｒａｔｏｒｙＩｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ４７（６）：６０５－６１１（１９８７）（Ｎｉｅｌｓｅｎｅｔａｌ．（１９８７）（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい。漸増に応じて、好中球は追加の免疫細胞の漸増を促進する炎症性サイトカインおよびケモカインを分泌し、炎症反応をさらに悪化させる。理論に制限されるものではないが、ＩＢＤにおける好中球の初期および継続的な活性化および漸増は、部分的にはヒドロキシエイコサテトラエン酸（ＨＥＴＥ）の結果である。Ｎｉｅｌｓｅｎｅｔａｌ．（１９８７）ａｎｄＮｉｅｌｓｅｎｅｔａｌ．，“ＲｅｌｅａｓｅｏｆｌｅｕｋｏｔｒｉｅｎｅＢ４ａｎｄ５－ｈｙｄｒｏｘｙｅｉｃｏｓａｔｅｔｒａｅｎｏｉｃａｃｉｄｄｕｒｉｎｇｐｈａｇｏｃｙｔｏｓｉｓｏｆａｒｔｉｆｉｃｉａｌｉｍｍｕｎｅｃｏｍｐｌｅｘｅｓｂｙｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌｓｉｎｃｈｒｏｎｉｃｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｂｏｗｅｌｄｉｓｅａｓｅ，”Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ６５（２）：４６５－４７１（１９８６）（参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい。本開示にて示すように、酸素除去保存血液は、低濃度のＨＥＴＥ酸（例えば図４参照のこと）を含有する。加えて、酸素除去保存血液は、ロイコトリエンＢ４レベルを低下させ（例えば、図２参照のこと）、潰瘍性大腸炎を患う患者において上昇することが示されてきた。酸素除去保存血液の輸血を受けた潰瘍性大腸炎およびクローン病などの慢性ＩＢＤ患者は、ＨＥＴＥ酸およびロイコトリエンＢ４への曝露の低下を有し、循環環境への好中球の活性化および漸増を減少させ、腸内壁の続発性の炎症リスクを潜在的に減少させる。

本開示の方法は、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）を有する患者に酸素除去保存血液を提供することを提供し、かつ含む。慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）を患う人々は、気道の持続的な細菌コロニー形成を発症する（慢性のコロニー形成と呼ばれる）。Ｍｏｎｓｏｅｔａｌ．，“Ｂａｃｔｅｒｉａｌｉｎｆｅｃｔｉｏｎｉｎｃｈｒｏｎｉｃｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅｐｕｌｍｏｎａｒｙｄｉｓｅａｓｅ．Ａｓｔｕｄｙｏｆｓｔａｂｌｅａｎｄｅｘａｃｅｒｂａｔｅｄｏｕｔｐａｔｉｅｎｔｓｕｓｉｎｇｔｈｅｐｒｏｔｅｃｔｅｄｓｐｅｃｉｍｅｎｂｒｕｓｈ，”ＡｍｅｒｉｃａｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＲｅｓｐｉｒａｔｏｒｙａｎｄＣｒｉｔｉｃａｌＣａｒｅＭｅｄｉｃｉｎｅ１５２（４）：１３１６－１３２０（１９９５）およびＣｒｏｏｋｓｅｔａｌ．，“Ｂｒｏｎｃｈｉａｌｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎｉｎａｃｕｔｅｂａｃｔｅｒｉａｌｅｘａｃｅｒｂａｔｉｏｎｓｏｆｃｈｒｏｎｉｃｂｒｏｎｃｈｉｔｉｓ：ｔｈｅｒｏｌｅｏｆｌｅｕｋｏｔｒｉｅｎｅＢ４，”ＥｕｒｏｐｅａｎＲｅｓｐｉｒａｔｏｒｙＪｏｕｒｎａｌ１５（２）：２７４－２８０（２０００）（Ｃｒｏｏｋｓｅｔａｌ．（２０００）（参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい。この慢性のコロニー形成は、肺機能の低下をもたらす慢性気道炎症によるＣＯＰＤに関連した罹患率の一因となる。研究により、慢性細菌感染症のＣＯＰＤ患者は、痰（感染中に、気道から吐き出される唾液および粘液の混合物）の中にある程度の高いレベルのロイコトリエンＢ４を有し、それは一次免疫細胞の活性化に関連する強力な炎症促進性サイトカインであることが示されている。Ｃｒｏｏｋｓｅｔａｌ．（２０００）を参照されたい。ＣＯＰＤの急激な進行は、外科的介入を必要とする可能性があり、患者への輸血を余儀なくさせる。本開示は、従来通りに保存された血液に対して、酸素除去保存血液がロイコトリエンＢ４レベルを低下させる（例えば、図２参照のこと）ことを提供する。血管内手術中に酸素除去保存血液を用いた輸血が、肺閉塞を悪化させるリスクを減少でき、優れた肺機能を促進することを本明細書で提供する。

本開示の方法は、鎌状赤血球症を有する患者に酸素除去保存血液を提供することを提供し、かつ含む。鎌状赤血球症における罹患率および死亡率の主要原因である、血管閉塞性事象の発症は、ＴＮＦαなど炎症性サイトカインレベルの上昇、ならびに好中球および単球など循環白血球数の増加を特徴とする、慢性的に炎症を起こした血管環境から引き起こす。Ｓｅｔｔｙｅｔａｌ．，“Ｓｉｃｋｌｅｒｅｄｂｌｏｏｄｃｅｌｌｓｓｔｉｍｕｌａｔｅｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｅｉｃｏｓａｎｏｉｄｓａｎｄｄｉａｃｙｌｇｌｙｃｅｒｏｌ，”ＪｏｕｒｎａｌｏｆＬａｂｏｒａｔｏｒｙａｎｄＣｌｉｎｉｃａｌＭｅｄｉｃｉｎｅ１２８（３）：３１３－３２１（１９９６）、Ｌｕｍｅｔａｌ．，“Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｐｏｔｅｎｔｉａｌｏｆｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌｓｄｅｔｅｃｔｅｄｉｎｓｉｃｋｌｅｃｅｌｌｄｉｓｅａｓｅ，”ＡｍｅｒｉｃａｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＨｅｍａｔｏｌｏｇｙ７６（２）：１２６－３３（２００４）、Ｐａｔｈａｒｅｅｔａｌ．，“ＣｙｔｏｋｉｎｅｐｒｏｆｉｌｅｏｆｓｉｃｋｌｅｃｅｌｌｄｉｓｅａｓｅｉｎＯｍａｎ，” ＡｍｅｒｉｃａｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＨｅｍａｔｏｌｏｇｙ７７（４）：３２３－８（２００４）、Ｆｉｎｎｅｇａｎｅｔａｌ．，“Ａｄｈｅｒｅｎｔｌｅｕｋｏｃｙｔｅｓｃａｐｔｕｒｅｓｉｃｋｌｅｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅｓｉｎａｎｉｎｖｉｔｒｏｆｌｏｗｍｏｄｅｌｏｆｖａｓｏ－ｏｃｃｌｕｓｉｏｎ，”ＡｍｅｒｉｃａｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＨｅｍａｔｏｌｏｇｙ８２（４）：２６６－７５（２００７）、およびＭｏｎｔｅｓｅｔａｌ．，“Ｓｉｃｋｌｅｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅａｄｈｅｒｅｎｃｅｔｏｅｎｄｏｔｈｅｌｉｕｍａｔｌｏｗｓｈｅａｒ：Ｒｏｌｅｏｆｓｈｅａｒｓｔｒｅｓｓｉｎｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎｏｆｖａｓｏ－ｏｃｃｌｕｓｉｏｎ，”ＡｍｅｒｉｃａｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＨｅｍａｔｏｌｏｇｙ７０（３）：２１６－２７（２００２）（参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい。さらに、理論に制限されるものではないが、循環好中球は、ヒドロキシエイコサテトラエン（ＨＥＴＥ）酸ならびにロイコトリエンＢ４への曝露に起因して、活性化される。輸血の投与は、鎌状赤血球症における血管閉塞性クリーゼの治療および解決のための共通の治療である。本開示は、酸素除去保存血液が、従来通りに保存された血液に対してＨＥＴＥ酸およびロイコトリエンＢ４（例えば、図４および図２参照のこと）レベルを低下させた、ことを提供する。酸素除去保存血液の輸血は、免疫性促進性活性化分子への患者の曝露を減少させることにより、血管急性発症を解決すること、ならびに後のクリーゼの発生をさらに予防すること、により有効である可能性がある。

本開示の方法は、サラセミアを有する患者に酸素除去保存血液を提供することを提供し、かつ含む。αまたはβ重症型サラセミアの患者は、機能性ヘモグロビン分子を産生することができないので、結果的に重症貧血をもたらし赤血球（ＲＢＣ）輸血を必要とせざるを得ない。定期的な（すなわち、長期的な）輸血を必要とする結果、サラセミアのある人々は、治療輸血後のヘマトクリット値の急激な減少を特徴とする、遅発性溶血性輸血反応（ＤＨＴＲ）を患う可能性がある。ある態様において、ＤＨＴＲは、突然のエリプトーシスに対する反応として誘導されることがあり、マクロファージおよび単球によって循環させている赤血球の急激な除去をもたらす。

理論に制限されるものではないが、エリプトーシスの１つの誘因は、従来の赤血球保存の結果として既知の、必然的に生じた酸化損傷であると考えられている。Ｂｈａｖｓａｒｅｔａｌ．，“ＪａｎｕｓＫｉｎａｓｅ３ｉｓＥｘｐｒｅｓｓｅｄｉｎＥｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅｓ，ＰｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｅｄＵｐｏｎＥｎｅｒｇｙＤｅｐｌｅｔｉｏｎａｎｄＩｎｖｏｌｖｅｄｉｎｔｈｅＲｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆＳｕｉｃｉｄａｌＥｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅＤｅａｔｈ，”ＣｅｌｌｕｌａｒＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙａｎｄＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ２７（５）：５４７－５５６（２０１１）（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい。酸素除去保存血液細胞は、ＮＡＤＰＨ貯蔵の増加（例えば、図５、図６、および図７参照のこと）、システインレベルの上昇（例えば、図１３参照）、ＧＳＨとＧＳＳＧ比率の上昇（例えば、図１２参照のこと）により明示されるように、優れた抗酸化性防御を有する。

さらにまた、理論に制限されるものではないが、赤血球がＡＴＰの充分なレベルをもはや有しない場合、エリプトーシスも促進され、それはまた、従来の保存中に起こる。Ｇｕｒｅｒｅｔａｌ．“ＡｒａｃｈｉｄｏｎｉｃａｃｉｄｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓａｎｄｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅｉｎＢｅｈｃｅｔ’ｓｄｉｓｅａｓｅ（ＢＤ）”Ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎｓ，ｌｅｕｋｏｔｒｉｅｎｅｓ，ａｎｄｅｓｓｅｎｔｉａｌｆａｔｔｙａｃｉｄｓ４３（４）：２５７－９（１９９１）（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい。しかしながら、酸素除去保存血液は、全体的なＡＴＰレベルを改善し（例えば、図１６参照のこと）、ペントースリン酸経路を介した持続的解糖による代謝活性を改善した（例えば、図１５参照のこと）。

α－またはβ－サラセミアの人々の慢性治療用の輸血のために嫌気的に保存された血液製剤の使用は、酸化損傷からの防御の増加に起因するＤＨＴＲ発症リスクの低減、および細胞内のエネルギー（ＡＴＰ）の優れた保存、および輸血が必要とされる頻度を減少させるさらなる潜在的な利点、を有することができる。

本開示の方法は、全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）を有する患者に酸素除去保存血液を提供することを提供し、かつ含む。以下の基準：３８℃超または３６℃未満の体温、毎分９０拍（ＢＰＭ）より速い心拍数、毎分２０呼吸より大きい呼吸数、３２ｍｍＨｇ未満の動脈二酸化炭素分圧、および異常な白血球（１２，０００細胞／μＬ超または４，０００細胞／μＬ未満、のうち２つが満たされる場合、患者は全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）有すると考えられる。Ｌａｎｇ，Ｅ．ｅｔａｌ．，“Ｋｉｌｌｉｎｇｍｅｓｏｆｔｌｙ－ｓｕｉｃｉｄａｌｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅｄｅａｔｈ，” ＴｈｅＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＪｏｕｒｎａｌｏｆＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ＆ＣｅｌｌＢｉｏｌｏｇｙ，４４（８）：１２３６－４３（２０１２）およびＤｉＧｅｎｎａｒｏｅｔａｌ．，“ＴａｒｇｅｔｉｎｇｌｅｕｋｏｔｒｉｅｎｅＢ４ｉｎｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ，”Ｅｘｐｅｒｔｏｐｉｎｉｏｎｏｎｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｔａｒｇｅｔｓ．１８（１）７９－９３（２０１４）（参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい。ＳＩＲＳは、細菌感染症、インフルエンザ、感染性心内膜炎などの感染因子、ならびに非伝染性の原因、例えば重症火傷、自己免疫障害、出血ショック、血液学的悪性腫瘍および化学暴露などの結果として発症することがあり得る。現在ＳＩＲＳを患っている患者は、該患者が輸血も受けるならば、血液ユニット内の炎症性生体分子およびサイトカインの存在に起因して悪化した病態を有する可能性がある。本明細書により提供される場合、酸素除去保存血液は、ヒドロキシエイコサテトラエン酸（ＨＥＴＥ）およびロイコトリエンＢ４（例えば、図２および図４参照のこと）などの炎症因子レベルを低下させた。したがって、ＳＩＲＳ患者は、ＨＥＴＥ酸およびロイコトリエンＢ４への曝露の低下を提供できる、酸素除去保存血液の輸血を受けることができ、循環環境への好中球の活性化および漸増を減少させ、長期の臓器系損傷リスクを減少させる。

さらに、従来通りに保存された血液が検出可能なレベルの炎症促進性サイトカインおよび生体分子を含有するので、従来通りに保存された血液の輸血は、ＳＩＲＳの発症を引き起こすことがあり得る。炎症性生体分子の低下とともに、酸素除去保存血液の使用は、入院患者におけるＳＩＲＳの新規惹起のリスクをかなり低下させる。ＳＩＲＳの発症は、非ＳＩＲＳ患者と比較しておよそ７日間でより高い死亡率を引き起こすことが過去の研究で示されたように、このことは考慮すべき利点である。Ｇｕｒｅｒ，Ｍ．Ａ．ｅｔａｌ．，“ＡｒａｃｈｉｄｏｎｉｃａｃｉｄｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓａｎｄｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅｉｎＢｅｈｃｅｔ’ｓｄｉｓｅａｓｅ（ＢＤ），”Ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎｓ，ｌｅｕｋｏｔｒｉｅｎｅｓ，ａｎｄｅｓｓｅｎｔｉａｌｆａｔｔｙａｃｉｄｓ．４３（４）２５７－２５９（１９９１）（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい。

本開示の方法は、ベーチェット病を有する患者に酸素除去保存血液を提供することを提供し、かつ含む。ベーチェット症候群としても知られるベーチェット病は、原因不明の希少な慢性自己炎症性障害である。その症状は、体全体の血管に損傷を引き起こす、血管炎によって起こされると考えられ、口腔病変または皮膚病変、眼性炎症、関節炎および胃腸傷害により特徴づけられる。現在の調査では、ベーチェット病の発症に関与し得る、ウイルス、細菌、遺伝子的および環境的要因が示唆されるが、特定の原因は確定されず、誘因は同定されなかった。慢性炎症の結果として、ベーチェット病のある人々は、白血球、例えば好中球を循環させる強力な活性化因子である、ロイコトリエンの血清レベルが増加した。Ｌａｎｇ．ｅｔａｌ．，“ＯｘｉｄａｔｉｖｅＳｔｒｅｓｓａｎｄＳｕｉｃｉｄａｌＥｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅＤｅａｔｈ，”ＡｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓＲｅｄｏｘＳｉｇｎａｌｉｎｇ２１（１）：１３８－１５３（２０１４）を参照されたい。本開示によって提供されるように、酸素除去保存血液は、低濃度ロイコトリエンＢ４およびＨＥＴＥを含有する（例えば、図２および図４参照のこと）。したがって、酸素除去保存血液の輸血を受けたベーチェット病患者は、ＨＥＴＥ酸およびロイコトリエンＢ４への曝露の減少を有することができ、循環環境に好中球を循環させることの活性化および漸増を減らし、合併症のリスクおよび慢性全身性炎症に関する続発性の罹患率を潜在的に減少させる。

本開示の方法は、酸素除去保存血液を、リウマチ性関節炎を有する患者に提供することを提供し、かつ含む。リウマチ性関節炎は、手および足のわずかな関節に特徴的に関わる慢性自己免疫疾患である。疾患が進行するにつれて、患者の軟骨および骨は、関節の滑膜空間において分解し始め、Ｔリンパ球、メモリーＢリンパ球およびマクロファージなどの大量の免疫担当細胞を含有する組織の過形成、浸潤性を特徴とする。ロイコトリエンは、まだ同定されない白血球に対する最も強力な内因性の走化性物質の１つである炎症性脂質であり、リウマチ性関節炎の滑膜組織への免疫細胞の漸増に強く関係する。Ｗｅｌｌｅｎ，Ｋ．Ｅ．ｅｔａｌ．，“Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ，ｓｔｒｅｓｓ，ａｎｄｄｉａｂｅｔｅｓ，”ＴｈｅＪｏｕｒｎａｌｏｆｃｌｉｎｉｃａｌｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ．１１５（５）：１１１１－１１１９（２００５）Ｗｅｌｌｅｎ，Ｋ．Ｅ．ｅｔａｌ．，“Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ，ｓｔｒｅｓｓ，ａｎｄｄｉａｂｅｔｅｓ，”ＴｈｅＪｏｕｒｎａｌｏｆｃｌｉｎｉｃａｌｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ．１１５（５）：１１１１－１１１９（２００５）（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい。リウマチ性関節炎を有する患者にとって、従来通りに保存された血液ユニット内の炎症性生体分子およびサイトカインの蓄積を輸血することの結果として、血液の輸血は患者の病態を悪化させる可能性を有する。しかしながら、本開示において提供されるように、酸素除去保存血液は、ロイコトリエンＢ４およびＨＥＴＥなどの低濃度の炎症因子を有する（例えば、図２および図４参照のこと）。したがって、リウマチ性関節炎の患者は、強力な、外因性の炎症促進性分子への曝露を回避するだろう酸素除去保存血液の輸血を提供されることができ、それによって、関節炎病態の重症度を深刻化させるまたは悪化させるリスクの低下を可能にする。

本開示の方法は、煙吸入を有する患者に酸素除去保存血液を提供することを提供し、かつ含む。肺および気道への損傷は、火災関連の代表する死因の１つである。肺損傷プロセスは、煙のガスおよび粒子成分の毒素によって活性化され、得られた肺炎症によって永続する。この炎症過程は、多数の炎症カスケードの活性化および炎症性サイトカインの血漿レベルの増加を介して、自己永続的になる。Ｐａｒｋ，Ｇ．Ｙ．ｅｔａｌ．“Ｐｒｏｌｏｎｇｅｄａｉｒｗａｙａｎｄｓｙｓｔｅｍｉｃｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｒｅａｃｔｉｏｎｓａｆｔｅｒｓｍｏｋｅｉｎｈａｌａｔｉｏｎ，”Ｃｈｅｓｔ．１２３（２）：４７５－４８０（２００３）（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい。加えて、煙害は、他の臓器を傷つけ、火傷障害プロセスを目立たせ、メディエーター誘発性細胞障害を続けて起こし、場合によっては多臓器不全がさらに起こるなどの、重大な全身異常を引き起こす。煙吸入などの重症外傷の後、患者は輸血を必要とする可能性がある；しかしながら、従来通りに保存された血液における炎症性分子のかなりの増加は、患者転帰および罹患率に悪影響を有する可能性がある。さらに、代謝物レベルの増加は、赤血球保存のマウスモデルにおける輸血後の不十分な回復と相関する（ｄｅＷｏｌｓｋｉｅｔａｌ．“Ｍｅｔａｂｏｌｉｃｐａｔｈｗａｙｓｔｈａｔｃｏｒｒｅｌａｔｅｗｉｔｈｐｏｓｔ－ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎｏｆｓｔｏｒｅｄｍｕｒｉｎｅｒｅｄｂｌｏｏｄｃｅｌｌｓ，”Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａ，１０１（５）：５７８－５８６（２０１６）（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる））。しかしながら、酸素除去保存血液の使用は、ＨＥＴＥおよびロイコトリエンＢ４（例えば、図２および図４参照のこと）などの炎症性分子レベルの減少を導入することができる。本開示において提供されるように、酸素除去保存血液は、煙吸入からの炎症反応の上昇のさらなる悪化を予防し、優れた患者転帰および回復を提供するために使用され得る。

本開示の方法は、複数の血液ユニット（例えば、４より多い）または大量輸血（１０ユニット以上）を必要とするヒト患者における炎症反応リスクを低下させる方法を提供し、かつ含む。一態様において、酸素除去保存血液の大量輸血を必要とする選ばれた患者は、既存の炎症状態を減らしまたは悪化させない。一態様において、複数ユニットまたは大量輸血を必要とする外傷患者は、低悪性度の慢性全身性炎症の体質である、既存疾患の患者である。一態様において、ヒト患者は、真性糖尿病、ベーチェット病、リウマチ性関節炎、ＣＯＰＤ、煙吸入、およびアテローム動脈硬化症を有する。これらの病態の患者は、ＲＢＣ輸血を必要とする事象の前に、既存の薬物刺激された炎症性の白血球を有することができる。既に感作された免疫系で、輸血されたＲＢＣ中のＨＥＴＥ、ロイコトリエンおよびトロンボキサンの浸出は、多臓器機能不全（ＭＯＤ）、ＳＩＲＳおよびＴＲＡＬＩなどの罹患率のリスクを増加させるだろう。さらに、より高い輸血量は、投与量を比例的に増加させ、影響を過剰にする。したがって、患者は、輸血として、ＨＥＴＥ、ロイコトリエンおよびトロンボキサンの浸出の低下を有する、酸素除去保存ＲＢＣを提供されることができ、罹患の確率を低減させることができる。

本明細書で使用される場合、炎症反応リスクが増加している患者は、炎症因子レベルの増加により悪化する、１つ以上の病態を有する患者である。一態様において、既存の炎症反応を悪化させるリスクが増加している患者は、慢性血管炎症を有する患者である。一態様において、炎症反応を悪化させるリスクが増加している患者は、慢性炎症性腸疾患を有する患者である。また、基礎病態の組み合わせを有する患者が、提供され、かつ含まれる。ある特定の態様において、本開示の方法は、増加したレベルの炎症因子を有する輸血された血液によって悪化する、２つ以上の基礎病態を有する患者により大きな利益を提供する。

本開示は、炎症反応リスクの状態にある患者に酸素除去保存血液を輸血後の有害事象の低減を提供し、かつ含む。一態様において、酸素除去保存血液の輸血を受けている患者は、遅発性溶血反応リスクの低下を有する。

本開示は、輸血関連急性肺傷害（ＴＲＡＬＩ）リスクが低減している、炎症反応リスクの状態にある患者に対して酸素除去保存血液を輸血後の有害事象の低減を提供し、かつ含む。ＴＲＡＬＩは、呼吸困難（困難な呼吸）および頻呼吸（異常に急速な呼吸）の急激な発症を臨床的に呈する。さらに、患者は、発熱、チアノーゼ、および低血圧を示す可能性もある。患者の臨床検査により、うっ血心不全の徴候とは関係ない、肺性湿性ラ音（患者が呼吸しているときの聴覚性の「パチパチという音」）を明らかにすることができる。胸部Ｘ線は、急性呼吸促迫症候群（ＡＲＤＳ）に進行する可能性がある、心不全を伴わない両側性肺水腫、および両側性斑状浸潤の証拠を明らかにすることができる。本方法は、ロイコトリエン、８－イソプロスタン、トロンボキサン、ヒドロキシエイコサテトラエン酸（ＨＥＴＥ）およびそれらの組み合わせを含むが、これらに限定されない、炎症因子レベルの低下の少なくとも提示による、リスクの減少を提供する。ある特定の態様において、本方法は、サイトカインレベルの低下または緩和（増加ではない）を含む。論じたように、保存期間の増加は、従来通りに保存された血液と比較した場合に、本開示の方法のさらなる改善を提供する。

本開示は、炎症反応リスクの状態にある患者に酸素除去保存血液を提供することによって、輸血後の有害事象の低減を提供し、かつ含む。一態様において、本開示の方法は、全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）の発生率の低減を提供する。一態様において、以下の基準：３８℃超または３６℃未満の体温、９０ＢＰＭより速い心拍数、毎分２０呼吸より大きい呼吸数、３２ｍｍＨｇ未満の動脈二酸化炭素分圧、および異常な白血球（１２，０００細胞／μＬ超または４，０００細胞／μＬ以下、のうちの２つが満たされる場合、患者はＳＩＲＳを有すると考えられる。Ｌａｎｇｅｔａｌ．，“Ｋｉｌｌｉｎｇｍｅｓｏｆｔｌｙ－ｓｕｉｃｉｄａｌｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅｄｅａｔｈ，”Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌｊｏｕｒｎａｌｏｆｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ＆ｃｅｌｌｂｉｏｌｏｇｙ４４（８）：１２３６－４３（２０１２）（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい。ＳＩＲＳは、細菌感染症、インフルエンザ、感染性心内膜炎などの感染因子、ならびに非伝染性の原因、例えば重症火傷、自己免疫障害、出血ショック、血液学的悪性腫瘍および化学暴露などの結果として発症することがあり得る。現在ＳＩＲＳを患っている患者は、該患者が輸血も受ける場合、血液ユニット内の炎症性生体分子およびサイトカインの存在に起因して悪化した病態を有する可能性がある。本開示は、酸素除去保存血液は、ヒドロキシエイコサテトラエン酸（ＨＥＴＥ）およびロイコトリエンＢ４（例えば、図２および図４参照のこと）などの炎症因子レベルを低下させたことを提供され得る、ことを提供する。したがって、酸素除去保存血液の輸血を受けるＳＩＲＳ患者は、ＨＥＴＥおよびロイコトリエンＢ４への曝露の低下を有し、循環環境への好中球の活性化および漸増を減少させ、長期の臓器系損傷リスクを潜在的に減少させる。

本開示は、多臓器機能不全症候群（ＭＯＤＳ）リスクの低減を有する、炎症反応リスクの状態にある患者に対して酸素除去保存血液を輸血後の有害事象の低減を提供し、かつ含む。本明細書で使用される場合、ＭＯＤＳとは、患者が入院となった一次傷害とは関係ない、２つ以上の臓器系に関わる、潜在的に可逆性の生理学的撹乱の発症を意味する。臨床的に、ＭＯＤＳは、６つの主要臓器系から作られた生理学的な測定に基づきスコア化され、高スコアが臓器機能の低レベル化を示す。表２を参照されたい。
表２：多臓器機能不全（ＭＯＤ）スコア

特定の病因がないにも関わらず、重症、慢性炎症は集中治療室の患者のＭＯＤＳ発症と関連していた。全身性炎症は、細菌感染症、インフルエンザ、感染性心内膜炎などの感染因子、ならびに非伝染性の原因、例えば重症火傷、自己免疫障害、出血ショック、血液学的悪性腫瘍および化学暴露などの結果として発現することがあり得る。ＳＩＲＳと同様に、全身性炎症に由来するＭＯＤＳを有する患者は、ＨＥＴＥ酸およびロイコトリエンＢ４への曝露の低下を有することにより、酸素除去保存血液の輸血から利益を得ることができ、循環環境への好中球の活性化および漸増を減少させ、長期の臓器系損傷リスクを潜在的に減少させる。

フェントン反応またはハーバー・ワイス反応で説明されるように、酸化ストレスは、酸素および金属触媒の反応から生じる広範囲の疾患状態と関連している。広範な酸化ストレス源の１つは、我々の体内の酸素および金属、一般には鉄、の組み合わせであり、それが、ヒドロキシルラジカルおよびスーパーオキシドの生成後に、一連の酸化生成物が続くことを可能にする。酸化によって引き起こされるストレスおよび損傷に対抗するために、体には一連の制御が備わっている。例えば、システインまたはグルタチオンなどの還元チオールの存在は、酸化化合物を低減するための可逆的手段を提供する。これらのチオールの酸化型を、酸化損傷に対する防御を維持するために、酵素処理で減らす。慢性酸化ストレスの極度のストレスまたは状態の下で、チオールを再生する体の能力は、損なわれるようになる。

サラセミアおよび鎌状赤血球症は、それらの赤血球におけるヘモグロビンの不安定性に起因する、酸化損傷に患者が曝露される慢性疾患である。分解ヘモグロビンは、鉄が自由に酸素と反応することを可能にし、言及した反応種を生成する。抗酸化プールの結果として生じる分解は、重要である；例えば、β－サラセミア患者のグルタチオンレベルは、正常対象レベルのわずか３５％であることが実証されている。Ｋａｌｐｒａｖｉｄｈ，ｅｔａｌ．，“ＧｌｕｔａｔｈｉｏｎｅＲｅｄｏｘＳｙｓｔｅｍｉｎ β－Ｔｈａｌａｓｓｅｍｉａ／ＨｂＥＰａｔｉｅｎｔｓ，”ＴｈｅＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＷｏｒｌｄＪｏｕｒｎａｌ２０１３，ａｒｔｉｃｌｅＩＤ５４３９７３（２０１３）（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい。本開示に示すように、長期輸血は、鎌状赤血球症およびサラセミア患者のための一次治療であり、赤血球を冷蔵保存する過程で、酸化ストレスに対する防御は、劣化する。酸化ストレスは、脳卒中、肺低血圧症および下腿潰瘍への関与が示唆されていた脈管障害の主な原因である。

本開示の方法は、虚血性心疾患を有する患者に酸素除去保存血液を提供することを提供し、かつ含む。虚血性心疾患は、心筋に血液、酸素、および栄養素を提供する血管の狭窄を特徴とする。疾患が進行するにつれて、心筋は死に始め、心機能の喪失および最終的には心筋梗塞をもたらす。血管形成術およびステント配置、または血管バイパス移植のいずれかによって血流を再確立する外科的処置。いずれの場合においても、損傷部位への血流の復活は、新たな心筋障害をもたらす虚血／再灌流（Ｉ／Ｒ）障害を引き起こす可能性がある。具体的には、Ｉ／Ｒ障害は、細胞オートファジーを刺激する可能性がある活性酸素種に対する細胞の曝露を結果的にもたらし得る。Ｘｉａ，Ｙ．ｅｔａｌ．，“Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆｖｏｌｕｍｅ－ｓｅｎｓｉｔｉｖｅＣｌ－ｃｈａｎｎｅｌｍｅｄｉａｔｅｓａｕｔｏｐｈａｇｙ－ｒｅｌａｔｅｄｃｅｌｌｄｅａｔｈｉｎｍｙｏｃａｒｄｉａｌｉｓｃｈａｅｍｉａ／ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｉｎｊｕｒｙ，”Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ（２０１６）およびＹｏｕｓｅｆｉ，Ｂ．ｅｔａｌ．，“Ｔｈｅｒｏｌｅｏｆｌｅｕｋｏｔｒｉｅｎｅｓｉｎｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓｏｆｒｈｅｕｍａｔｏｉｄａｒｔｈｒｉｔｉｓ，”Ｍｏｄｅｒｎｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ／ｔｈｅＪａｐａｎＲｈｅｕｍａｔｉｓｍＡｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ２４（２）：２２５－２３５（２０１４）Ｘｉａ，Ｙ．ｅｔａｌ．，“Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆｖｏｌｕｍｅ－ｓｅｎｓｉｔｉｖｅＣｌ－ｃｈａｎｎｅｌｍｅｄｉａｔｅｓａｕｔｏｐｈａｇｙ－ｒｅｌａｔｅｄｃｅｌｌｄｅａｔｈｉｎｍｙｏｃａｒｄｉａｌｉｓｃｈａｅｍｉａ／ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｉｎｊｕｒｙ，”Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ（２０１６）およびＹｏｕｓｅｆｉ，Ｂ．ｅｔａｌ．，“Ｔｈｅｒｏｌｅｏｆｌｅｕｋｏｔｒｉｅｎｅｓｉｎｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓｏｆｒｈｅｕｍａｔｏｉｄａｒｔｈｒｉｔｉｓ，”Ｍｏｄｅｒｎｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ／ｔｈｅＪａｐａｎＲｈｅｕｍａｔｉｓｍＡｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ２４（２）：２２５－２３５（２０１４）（参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい。理論に制限されるものではないが、従来通りに保存された赤血球は保存中に酸化損傷を受けると考えられ、外科的介入を受ける虚血性心疾患患者に著しい健康上のリスクを課す可能性がある。酸化損傷を有する赤血球の輸血は、Ｉ／Ｒ障害を悪化させる可能性があり、心臓組織へのさらなる損傷がもたらされる。酸素除去保存血液を提供することは、ＮＡＤＰＨ貯蔵の増加（例えば、図５、図６、および図７参照のこと）、システインレベルの上昇（例えば、図１３参照のこと）、ＧＳＨとＧＳＳＧ比率の上昇（例えば、図１２参照のこと）により明示されるように、優れた抗酸化性防御を提供する。結果として、これらの赤血球は、既に弱化または悪化した心機能を有する患者に虚血再灌流傷害を誘導するリスクの減少を有する。

本開示の方法は、糖尿病を有する患者へ酸素除去保存血液を提供することを提供し、かつ含む。糖尿病患者は、長期にわたる高血糖の結果として、長期間の血管合併症の重症リスクにある。グルコース自動酸化、ポリオール経路活性化、プロスタノイド合成、およびタンパク質糖化の結果として、活性酸素種が生成されることが示され、血管恒常性を維持する細胞内調節経路の調節不全がおこる。Ｂａｙｎｅｓｅｔａｌ．，“Ｒｏｌｅｏｆｏｘｉｄａｔｉｖｅｓｔｒｅｓｓｉｎｄｉａｂｅｔｉｃｃｏｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ：ａｎｅｗｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｏｎａｎｏｌｄｐａｒａｄｉｇｍ，”Ｄｉａｂｅｔｅｓ．４８（１）：１－９（１９９１）（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい。治療しなければ、高血糖は下肢組織の永久的な損傷および壊死を結果として招き、多くの場合切断を余儀なくさせる。酸化ストレスとフリーラジカルとの関連のため、従来通りに保存された血液内の酸化剤の蓄積は、糖尿病に伴う同時罹患率を悪化させる可能性がある。例えば、ＮＡＤＰＨ貯蔵の増加（例えば、図５、図６、および図７参照のこと）、システイン（例えば、図１３参照のこと）レベルの上昇、ＧＳＨとＧＳＳＧ比率の上昇によって明示されるように、酸素除去保存血液細胞を提供することは、優れた抗酸化性保護を提供する（例えば、Ｆｉｇｕｒｅ１２、ｓｅｅＹｏｓｈｉｄａ，ｅｔａｌ．，”ＥｎｈａｎｃｉｎｇＵｎｉｆｏｒｍｉｔｙａｎｄＯｖｅｒａｌｌＱｕａｌｉｔｙｏｆＲｅｄＣｅｌｌＣｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｗｉｔｈＡｎａｅｒｏｂｉｃＳｔｏｒａｇｅ，”ＢｌｏｏｄＴｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ，１５（２）：１７２－１８１（２０１７）、およびＲｅｉｓｚ２０１６（参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい）。結果として、これらの赤血球は、糖尿病患者における酸化損傷を導入するまたは悪化させること回避することになり、それによって、輸血後の糖尿病性同時罹患率を悪化させるリスクを減らす。

本開示は、輸血を必要とするヒト患者の酸化ストレスを低減するための方法であって、輸血媒介型の酸化ストレスのリスクが増加しており、輸血を必要とするヒト患者への輸血のために、酸素除去保存血液を提供することを含み、該酸素除去保存血液は、保存期間の間保存される前に２０％以下の初期酸素飽和を有し、該患者の酸化ストレスリスクが増加している、方法を提供し、かつ含む。

酸素除去保存血液の保存は、より高いシステイン、ＧＳＨ、ＮＡＤＨ、ＮＡＤＰＨ、およびＧＳＨ／ＧＳＳＧ、ＮＡＤＰＨ／ＮＡＤＰ、ならびにＮＡＤＨ／ＮＡＤのより高い比率を引き起こす（表１を参照されたい）。これらの結果は、酸素除去保存血液が低い酸化／還元可能性を有し、したがって、輸血後により高い抗酸化能を提供することを示す。したがって、本開示の酸素除去保存血液は、酸化損傷に対して優れた防御能力を提供する。長期的に輸血された鎌状赤血球症またはサラセミア患者において、従来通りに保存された血液を酸素除去保存血液と取り替えることは、従来通りに保存された赤血球からの追加的な酸化ストレスを回避し、酸化損傷に対する追加的な防御を提供することだろう。

本開示は、さらに炎症因子レベルが低下している患者へ酸素除去保存血液の輸血を提供することによって酸化ストレスを低減するための方法を提供する。

本開示の方法は、患者が輸血を必要とする場合、酸化ストレスを低減することから恩恵を受けるリスクにある患者を同定することと、同定した患者に、保存期間の間保存される前に２０％以下の初期酸素飽和を有する酸素除去保存血液を提供することと、を提供し、かつ含む。本明細書で使用される場合、酸素除去保存血液を提供することは、段落［０１２８］に提供されるように全血、および段落［０１２９］および［０１３０］に提供されるように赤血球、を含むが、これらに限定されない。

保存期間の間保存される前に２０％以下の初期酸素飽和を有する酸素除去保存血液は、酸化ストレスに対する抵抗性の改善で調整され得る（例えば、表１および実施例を参照されたい）。本開示により提供される場合、ある特定の改善は２０％の初期飽和レベルの始まりで明らかである。本明細書で使用される場合、本開示において提供される、選ばれた患者に対する改善および有用性は、同一保存期間の間保存された非酸素除去保存血液に対して（例えば、に比べて）である。重要なことに、これらの差異は、保存期間が増すにつれて、および保存前の初期酸素飽和が減るにつれて、より顕著になる。

本開示の一態様において、酸化ストレスのリスクを低減するのに好適な酸素除去保存血液として、１つ以上のメトヘモグロビンの低減、残基Ｈ９３におけるβヘモグロビン酸化の低減、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＤＰＨ）貯蔵の増加、ＧＳＨの増加、ＡＴＰの増加、ＤＰＧの増加、ＮＡＤＰＨ貯蔵の増加、ＰＩＰ対ＰＩＰ３比率の低下、メチレンＴＨＦの増加、グルタミン酸塩の増加、ＧＳＨ対グルタチオンジスルフィド（ＧＳＳＧ）比率（ＧＳＨ／ＧＳＳＧ比）の増加、尿酸塩の増加、またはシステインの増加を有する、酸素除去保存血液が挙げられる。

本開示の一態様において、段落［００１５］および［００８１］で特定されるように、少なくとも２日間保存された、２０％以下の初期酸素飽和を有する酸素除去保存血液は、メトヘモグロビンを減らした。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、残基Ｈ９３のβヘモグロビンの酸化の低減を有する酸素除去保存血液である。Ｗｉｔｈｅｒ２０１６、およびＲｅｉｓｚ２０１６を参照されたい（参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＤＰＨ）の貯蔵の増加を有する酸素除去保存血液である。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、ＧＳＨの増加を有する酸素除去保存血液である。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、ＡＴＰの増加を有する酸素除去保存血液である。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、ＡＴＰおよびＤＰＧの増加を有する酸素除去保存血液である。さらなる態様において、本開示の酸素除去保存血液は、さらに、ＮＡＤＰＨ貯蔵の増加、およびＧＳＨ、ＡＴＰ、およびＤＰＧの増加を含む。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、ＰＩＰ対ＰＩＰ３比率の低下を有する酸素除去保存血液である。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、メチレンＴＨＦの増加を有する酸素除去保存血液である。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、グルタミン酸塩の増加を有する酸素除去保存血液である。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、ＧＳＨ対グルタチオンジスルフィド（ＧＳＳＧ）比率（ＧＳＨ／ＧＳＳＧ比）の増加を有する酸素除去保存血液である。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、尿酸塩の増加を有する酸素除去保存血液である。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、システインの増加を有する酸素除去保存血液である。

本開示の一態様において、段落［００１５］および［００８１］で特定されるように、少なくとも２日間保存された、２０％以下の初期酸素飽和を有する酸素除去保存血液は、メトヘモグロビンの低減、残基Ｈ９３におけるβヘモグロビンの酸化の低減、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸＋水素（ＮＡＤＰＨ）貯蔵の増加、ＧＳＨの増加、ＡＴＰの増加、ＤＰＧの増加、ＮＡＤＰＨ貯蔵の増加、ＰＩＰ対ＰＩＰ３比率の低下、メチレンＴＨＦの増加、グルタミン酸塩の増加、ＧＳＨ対グルタチオンジスルフィド（ＧＳＳＧ）比率（ＧＳＨ／ＧＳＳＧ比）の増加、尿酸塩の増加、およびシステインの増加を有する。

本開示の一態様において、段落［００１５］および［００８１］で特定されるように、少なくとも２日間保存された、１０％以下の初期酸素飽和を有する酸素除去保存血液は、メトヘモグロビンを減らした。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、残基Ｈ９３のβヘモグロビンの酸化の低減を有する酸素除去保存血液である。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸＋水素（ＮＡＤＰＨ）貯蔵の増加を有する酸素除去保存血液である。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、ＧＳＨの増加を有する酸素除去保存血液である。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、ＡＴＰの増加を有する酸素除去保存血液である。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、ＡＴＰおよびＤＰＧの増加を有する酸素除去保存血液である。さらなる態様において、本開示の酸素除去保存血液はさらに、ＮＡＤＰＨ貯蔵の増加、ならびにＧＳＨ、ＡＴＰ、およびＤＰＧの増加を含む。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、ＰＩＰ対ＰＩＰ３比率の低下を有する酸素除去保存血液である。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、メチレンＴＨＦの増加を有する酸素除去保存血液である。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、グルタミン酸塩の増加を有する酸素除去保存血液である。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、ＧＳＨ対グルタチオンジスルフィド（ＧＳＳＧ）比率（ＧＳＨ／ＧＳＳＧ比）の増加を有する酸素除去保存血液である。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、尿酸塩の増加を有する酸素除去保存血液である。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、システインの増加を有する酸素除去保存血液である。

本開示の一態様において、段落［００１５］および［００８１］で特定されるように、少なくとも２日間保存された、５％以下の初期酸素飽和を有する酸素除去保存血液は、メトヘモグロビンを減らした。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、残基Ｈ９３のβヘモグロビンの酸化の低減を有する酸素除去保存血液である。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、グリセルアルデヒド－３－リン酸デヒドロゲナーゼ中のＣｙｓ１５２ジオキシド化の低下を有する酸素除去保存血液である。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸＋水素（ＮＡＤＰＨ）貯蔵の増加を有する酸素除去保存血液である。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、ＧＳＨの増加を有する酸素除去保存血液である。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、ＡＴＰの増加を有する酸素除去保存血液である。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、ＡＴＰおよびＤＰＧの増加を有する酸素除去保存血液である。さらなる態様において、本開示の酸素除去保存血液はさらに、ＮＡＤＰＨ貯蔵の増加、ならびにＧＳＨ、ＡＴＰ、およびＤＰＧの増加を含む。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、ＰＩＰ対ＰＩＰ３比率の低下を有する酸素除去保存血液である。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、メチレンＴＨＦの増加を有する酸素除去保存血液である。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、グルタミン酸塩の増加を有する酸素除去保存血液である。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、ＧＳＨ対グルタチオンジスルフィド（ＧＳＳＧ）比率（ＧＳＨ／ＧＳＳＧ比）の増加を有する酸素除去保存血液である。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、尿酸塩の増加を有する酸素除去保存血液である。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、システインの増加を有する酸素除去保存血液である。

本開示の一態様において、段落［００１５］および［００８１］で特定されるように、少なくとも２日間保存された、３％以下の初期酸素飽和を有する酸素除去保存血液は、メトヘモグロビンを減らした。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、グリセルアルデヒド－３－リン酸デヒドロゲナーゼ中のＣｙｓ１５２ジオキシド化の低下を有する酸素除去保存血液である。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、残基Ｈ９３のβヘモグロビンの酸化の低減を有する酸素除去保存血液である。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＤＰＨ）の貯蔵の増加を有する酸素除去保存血液である。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、ＧＳＨの増加を有する酸素除去保存血液である。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、ＡＴＰの増加を有する酸素除去保存血液である。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、ＡＴＰおよびＤＰＧの増加を有する酸素除去保存血液である。さらなる態様において、本開示の酸素除去保存血液はさらに、ＮＡＤＰＨ貯蔵の増加、ならびにＧＳＨ、ＡＴＰ、およびＤＰＧの増加を含む。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、ＰＩＰ対ＰＩＰ３比率の低下を有する酸素除去保存血液である。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、メチレンＴＨＦの増加を有する酸素除去保存血液である。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、グルタミン酸塩の増加を有する酸素除去保存血液である。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、ＧＳＨ対グルタチオンジスルフィド（ＧＳＳＧ）比率（ＧＳＨ／ＧＳＳＧ比）の増加を有する酸素除去保存血液である。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、尿酸塩の増加を有する酸素除去保存血液である。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、システインの増加を有する酸素除去保存血液である。

本開示の方法は、患者が輸血を必要とする場合、酸化ストレスを低減することから恩恵を受けるリスクにある患者を同定することと、同定した患者に、保存期間の間保存される前に２０％以下の初期酸素飽和を有する酸素除去保存血液を提供することと、を提供し、かつ含む。方法はまた、患者が輸血を必要とする場合、酸化ストレスのリスクの状態にある患者に輸血するために、保存期間の間保存される前に、２０％以下の初期酸素飽和を有する酸素除去保存血液を提供することを提供する。また、酸化ストレスリスクの状態にある患者に、保存期間の間保存される前に２０％以下の初期酸素飽和を有する酸素除去保存血液を輸血することを含む方法もまた含まれる。考察されるように、保存期間が増加するにつれて、酸化損傷リスクが増加している患者への改善および有用性は、従来の方法を用いて保存された血液に対して増加する。したがって、２０％以下の初期酸素飽和を有する酸素除去保存血液を提供する方法は、１０％以下の初期酸素飽和を有する酸素除去保存血液を提供することを含む。２０％以下の初期酸素飽和を有する酸素除去保存血液を提供する方法は、さらに、５％以下の初期酸素飽和を有する酸素除去保存血液を提供することを含む。２０％以下の初期酸素飽和を有する酸素除去保存血液を提供する方法は、３％以下の初期酸素飽和を有する酸素除去保存血液を提供することをさらに含む。

本開示によって提供されるように、酸化ストレスリスクが増加している、輸血を必要とする患者には、４ユニット以上の血液を必要とする外傷患者、１０ユニット以上の血液を必要とする外傷患者、鎌状赤血球症を有する患者、サラセミアを有する患者、およびそれらの組み合わせが挙げられる。一態様において、本方法は、輸血媒介型の酸化ストレスリスクの増加を有し、輸血を必要とするヒト患者への輸血のために、酸素除去保存血液を提供することを提供し、該酸素除去保存血液は保存期間の間保存される前に２０％以下の初期酸素飽和を有し、該患者が鎌状赤血球貧血を有する方法である。一態様において、本方法は、輸血媒介型の酸化ストレスリスクが増加しており、輸血を必要とするヒト患者への輸血のために、酸素除去保存血液を提供することを提供し、該酸素除去保存血液は保存期間の間保存される前に２０％以下の初期酸素飽和を有し、該患者がサラセミアを有する方法である。一態様において、サラセミアはα－サラセミアである。別の態様において、サラセミアはβ－サラセミアである。本開示は、４ユニット以上の血液を必要とする外傷患者への酸化ストレスのリスクを低減する方法をさらに提供する。さらなる態様において、酸化ストレスのリスク低減を必要とする患者は、１０ユニット以上の血液を必要とする外傷患者である。

また、頻回輸血を必要とする鎌状赤血球およびサラセミア患者において酸化ストレスを減らす方法が、本開示に含まれ、提供される。一態様において、鎌状赤血球患者は、保存前に２０％以下の初期酸素飽和を有する酸素除去保存血液のユニット、およびヘモグロビン濃度が５ｇ／ｄＬ未満の場合に酸素除去保存血液の追加のユニットが提供される。別の態様において、鎌状赤血球患者は、経頭蓋ドプラ超音波（ＴＣＤ）によって決定されるように、中大脳動脈のピーク中心線流速が２００ｃｍ／秒超の場合、酸素除去保存血液の追加のユニットが提供される。さらなる態様において、鎌状ヘモグロビンレベルが３０％を超える場合に、血液の追加ユニットが鎌状赤血球患者に提供される。またさらなる態様において、鎌状赤血球患者は酸素除去保存血液の定期的輸血を受け、全ヘモグロビンの３０％未満の鎌状ヘモグロビンレベルを維持する。一態様において、酸素ストレスを低減する必要がある鎌状赤血球患者は、約３０日毎に輸血を受ける。本明細書において使用される場合、約３０日毎とは、２５～３５日間の間を意味する。

本開示は、症状を軽減するために、急性発作を有する鎌状赤血球患者へ酸素除去保存血液を提供することを提供し、かつ含み、酸化ストレスの低減を提供する。一態様において、鎌状赤血球患者は血管閉塞性クリーゼを経験している。

本開示は、手術を必要とする鎌状赤血球患者へ酸素除去保存血液を提供することを提供し、かつ含む。一態様において、鎌状赤血球患者は、周術期の低酸素症、血流低下、またはアシドーシスを減らすために、１回以上の術前輸血を受ける。一態様において、鎌状赤血球患者は、２回以上の術前輸血を受ける。別の態様において、鎌状赤血球患者は、３回以上の術前輸血を受ける。特定の態様において、鎌状赤血球患者は、４回以上の術前輸血を受ける。

手術中の麻酔の影響のため、鎌状赤血球症のある人々は、血流の低下（低灌流）、アシドーシス、および呼吸数の減少に起因する低酸素から生じる、血管閉塞性クリーゼを発症するリスク増加状態にある。これらの合併症を緩和するために、鎌状赤血球症のある人々は、赤血球の術中輸血を受けることができる。しかしながら、従来通りに保存された赤血球は、かなりのレベルの炎症性生体分子およびサイトカインを有し、脈管障害および血管閉塞を促進することが示された。結果として、従来の赤血球の周術期の輸血は、痛みの発作および臓器または組織損傷のリスクの増加をもたらし得る。酸素除去保存血液は、従来通りに保存された血液に対してＨＥＴＥ酸およびロイコトリエンＢ４（図２および図４）レベルを低下させた。酸素除去保存血液輸血は、術中または術後に輸血関連の血管閉塞性の事象を発症するリスクを低減し得る。

さらに、鎌状赤血球循環環境に輸血される場合、従来の血液はエリプトーシスによる急激に除去されるリスクがあり、遅発性溶血性輸血反応（ＤＨＴＲ）の重症合併症を引き起こすことが示された。手術からの回復患者にとって、ＤＨＴＲに伴うヘマトクリット値の急激な低下は、さらに致命的な、重症合併症を起こす可能性がある。酸素除去保存血液は、より安定した膜（図１８）、およびより高い細胞内ＡＴＰ（図１５および図８）によりＤＨＴＲリスクを減少させた。鎌状赤血球症患者のための術中輸血における酸素除去血液の使用は、ＤＨＴＲ関連合併症のリスクを減少させ、全体的な患者転帰および回復時間を改善する。

本開示は、輸血を必要とするヘモグロビン異常症患者の有害事象リスクを低減するための方法であって、輸血を必要とするヘモグロビン異常症患者への輸血のために酸素除去保存血液を提供することを含み、酸素除去保存血液は保存期間の間保存される前に２０％以下の初期酸素飽和を有し、該患者の有害事象リスクが増加している、方法を提供し、かつ含む。一態様において、本開示の方法は、ホスファチジルイノシトール４－リン酸とホスファチジルイノシトール（３，４，５）－三リン酸のより高い比率を有する血液を提供することによって、鎌状赤血球症またはサラセミアを治療するための輸血後に、遅発性溶血性輸血反応の減少を提供する。別の態様において、本開示の方法は、保存後の膜はより生理学的な膜である、赤血球膜の改善を提供する。

一態様において、輸血を必要とするヘモグロビン異常症患者は鎌状赤血球患者である。一態様において、本開示の方法は、ホスファチジルイノシトール４－リン酸とホスファチジルイノシトール（３，４，５）－三リン酸のより高い比率を有する血液を提供することによって、鎌状赤血球症またはサラセミアを治療するための輸血後に、遅発性溶血性輸血反応の減少を提供する。一態様において、本開示は、冷蔵保存の過程でより生理学的な膜を維持する血液を提供することによって、鎌状赤血球症またはサラセミアを治療するための輸血後に、遅発性溶血性輸血反応の減少する方法を提供し、かつ含む。本明細書で使用される場合、より生理学的な膜とは、１つ以上の以下の特徴を有する膜を意味する：
・細胞膜に沿ったＣａ²⁺イオンチャネル活性を減少させた膜；
・酸化ストレスによって活性化されるチャネルを介した塩素イオンの喪失によって示されるように膜過分極の予防；
・膜および細胞骨格酸化により活性化されたカルシウムチャンネルを介したカルシウムイオン流入の低減、および
・細胞膜の細胞質表面に沿ってホスファチジルセリンの非対称分布を維持する膜。

酸素除去保存血液は、様々な機構を介してより生理学的な膜を提供する。例えば、カルシウムイオンイオンチャネル活性の減少は、高いＰＩＰ：ＰＩＰ３比率により示され、細胞内の低いカルシウムイオンは、フローサイトメーターを使用して、Ｆｕｒａ－２（Ｔｈｅｒｍｏ－ＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）などの蛍光プローブによって直接測定されてもよい。Ｍａｈｍｕｄｅｔａｌ．，“Ｓｕｉｃｉｄａｌｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅｄｅａｔｈ，ｅｒｙｐｔｏｓｉｓ，ａｓａｎｏｖｅｌｍｅｃｈａｎｉｓｍｉｎｈｅａｒｔｆａｉｌｕｒｅ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄａｎａｅｍｉａ，”ＣａｒｄｉｏｖａｓｃＲｅｓ９８（１）：３７－４６（２０１３）（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい。本開示において提供されるように、酸素除去保存血液は、膜過分極の低下を引き起こす、高いＮＡＤＰＨ、ＮＡＤＰ、およびＧＳＨ比率により明示されるように、低酸化ストレスを提供することができる。酸素除去保存血液は、脱水の低下およびカルシウムイオン流量の低下を提供することにより変形能の保持をさらに提供し、そこでは酸化がカルシウムイオンチャネルの活性化を引き起こす。細胞膜スクランブリングは、ＪＡＫ３キナーゼの活性化によって促進され、細胞内のエネルギー欠乏（ＡＴＰ喪失）の結果としてリン酸化される。酸素除去保存血液は、ＰＰＰおよびＥＭＰ経路の刺激によって明示されるように、高いＡＴＰ産生を保持する。膜スクランブリングは、蛍光アネキシン－Ｖによる細胞膜の標識付けおよびフローサイトメトリーまたは顕微鏡による定量化によって測定できるホスファチジルセリン発現により特徴づけられる。上記Ｙｏｓｈｉｄａｅｔａｌ．，２００８を参照されたい。当該技術分野において既知のウェスタンブロット分析、Ｌｕｍｉｎｅｘ技術および他の方法によって、ＪＡＫ３キナーゼ活性を測定することが可能である。Ｃｈａｎｇｅｔａｌ．，“ＭａｍｍａｌｉａｎＭＡＰｋｉｎａｓｅｓｉｇｎａｌｉｎｇｃａｓｃａｄｅｓ，”Ｎａｔｕｒｅ４１０（６８２４）：３７－４０（２００１）（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい。

本開示の方法は、鎌状赤血球症またはサラセミアを治療するための輸血後の遅発性溶血性輸血反応を減らすための方法であって、酸素除去保存血液はより少ない前エリプトーシス性の（ｐｒｅ－ｅｒｙｐｔｏｔｉｃ）バイオマーカーを含む、方法を提供し、かつ含む。本明細書で使用される場合、前エリプトーシス性の（ｐｒｅ－ｅｒｙｐｔｏｔｉｃ）バイオマーカーは以下の特徴を示す：
細胞膜に沿ったカルシウムイオンイオンチャネル活性を減少させた膜（高いＰＩＰ：ＰＩＰ３比率によって明示され、蛍光イオン泳動によって直接に測定できる）；
酸化ストレスにより活性化したチャネルを介して塩素イオンの喪失により定義される、過分極化されない膜（高いＮＡＤＰＨ、ＮＡＤＰ、およびＧＳＨ比率により明示される、酸素除去保存血液は低い酸化ストレスを有する）；
細胞膜の細胞質表面に沿ってホスファチジルセリンの非対称分布を維持する膜；細胞内のカルシウム（カルシウムイオン）イオン濃度を増加させなかった細胞；リン酸化されたＪＡＫ３キナーゼレベルを上昇させない細胞；カスパーゼ－３（当該技術分野において既知の方法で測定される）などのカスパーゼを活性化しなかった細胞；およびＡＭＰ活性キナーゼ（ＡＭＰＫα１）およびｃＧＭｐ依存性プロテインキナーゼＩ型（ｃＧＫＩ）の活性を維持する細胞（当業者に既知の標準的な方法を使用して測定。

赤血球の輸血は、鎌状赤血球症およびサラセミアの人々のための一次治療のうちの１つである。しかしながら、これらの血液病に特有の高い酸化環境は、細胞膜に変化を引き起こす、ＲＢＣへのカルシウムイオンの急速な流入を誘導し、形質膜の細胞外小葉に細胞質性バイオマーカーの再分布をもたらす。最終的に、細胞膜のカルシウムに依存する再構成は、エピトーシスによる循環赤血球の迅速なクリアランスをもたらす。Ｌａｎｇｅｔａｌ．，“Ｔｒｉｇｇｅｒｓ，Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ，Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ，ａｎｄＳｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅｏｆＥｒｙｐｔｏｓｉｓ：ＴｈｅＳｕｉｃｉｄａｌＥｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅＤｅａｔｈ，”ＢｉｏＭｅｄＲｅｓｅａｒｃｈＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，ｖｏｌ．２０１５，ＡｒｔｉｃｌｅＩＤ５１３５１８，１６ｐａｇｅｓ，２０１５、Ｌａｎｇｅｔａｌ．，“Ｋｉｌｌｉｎｇｍｅｓｏｆｔｌｙ－ｓｕｉｃｉｄａｌｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅｄｅａｔｈ，”ＩｎｔＪＢｉｏｃｈｅｍＣｅｌｌＢｉｏｌ．４４（８）：１２３６－４３（２０１２）、Ｌａｎｇｅｔａｌ．，“ＯｘｉｄａｔｉｖｅＳｔｒｅｓｓａｎｄＳｕｉｃｉｄａｌＥｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅＤｅａｔｈ，”ＡｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓＡｍｐＲｅｄｏｘＳｉｇｎａｌ．２１（１）：１３８－１５３（２０１４）、およびＧａｔｉｄｉｓｅｔａｌ．，“Ｈｅｍｉｎ－ｉｎｄｕｃｅｄｓｕｉｃｉｄａｌｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅｄｅａｔｈ，”ＡｎｎＨｅｍａｔｏｌ．８８（８）：７２１－７２６（２００９）（参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい。加えて、赤血球の反復輸血は、輸血後の２～５日間以内の急速で極度の貧血によって特徴づけられる、遅発性溶血性輸血反応を生じている患者に重大なリスクをもたらす。ＤＨＴＲは、キナーゼシグナル伝達経路を誘発する（ＪＡＫ３活性化、ＡＭＰＫα１およびｃＧＫＩ抑制）細胞内のエネルギー（ＡＴＰ）の喪失の結果として、提供された細胞のエリプトーシスの誘導のために誘発され得る。Ｌａｎｇｅｔａｌ．，“Ｋｉｌｌｉｎｇｍｅｓｏｆｔｌｙ－ｓｕｉｃｉｄａｌｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅｄｅａｔｈ，”ＩｎｔＪＢｉｏｃｈｅｍＣｅｌｌＢｉｏｌ４４（８）：１２３６－４３（２０１２）Ｌａｎｇｅｔａｌ．，“Ｋｉｌｌｉｎｇｍｅｓｏｆｔｌｙ－ｓｕｉｃｉｄａｌｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅｄｅａｔｈ，”ＩｎｔＪＢｉｏｃｈｅｍＣｅｌｌＢｉｏｌ４４（８）：１２３６－４３（２０１２）（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい。

特定の理論に制限されるものではないが、酸素を除去した血液の保存により、ホスファチジルイノシトール４－リン酸（ＰＩＰ）の細胞濃度を増加させることが示され、ホスファチジルイノシトール（３，４，５）－三リン酸（ＰＩＰ３）の形成を予防する。結果として、赤血球膜に沿ったカルシウムチャンネルは不活性なままであり、それによって、カルシウムのサイトゾルへの流入を予防または減らす。さらに、酸素除去保存血液における酸素の減少はまた、細胞外および細胞質間の細胞膜小葉のバイオマーカーの非対称分布を維持するために、ランズ回路を活性化する。鎌状赤血球症の輸血治療における酸素除去保存血液の使用は赤血球膜の天然構造を保ち、それによって、エリプトーシス促進性（ｐｒｏ－ｅｒｙｐｔｏｔｉｃ）バイオマーカーの細胞外発現を予防し、したがって、輸血されたＲＢＣが鎌状赤血球循環環境で生存することができる。最終的に、これは、臨床医が輸血あたりの治療用量を低減させ、および／または患者が医療介入を必要とする頻度を減少させる能力につながり得る。酸素を除去した赤血球の保存は、保存中に赤血球のより高いエネルギー状態を確立することが示された。酸素の減少、およびその後の保存の間の低酸素の維持は、より高いＥＭＰ流量、ペントースリン酸経路を介したＡＴＰのより多数の新規合成、およびＧＡＰＤＨ酵素の保存を促進し、それによって、ホメオスタシス代謝調節を維持する。最終的に、鎌状赤血球症およびサラセミアの治療輸血用の酸素除去保存血液の生成および使用は、ＤＨＴＲの発生を軽減し、より安全でより効果的な治療を可能にする。

鎌状赤血球症は、主としてサハラ以南のアフリカ、中東および東南アジア系の人々を苦しめる遺伝子突然変異である。赤血球の輸血は、鎌状赤血球症（ＳＣＤ）を有する人々における急性および慢性血管閉塞性の両方の症状の一次治療の１つである。しかしながら、レシピエントあたりの治療輸血（一回につき約１５～２０ユニット）に必要となる、ＲＢＣの頻度および総体積のため、治療輸血のレシピエントは、提供された血球に対する同種異系免疫化をしばしば生じ、重症、全身性合併症の治療有効性に減少をもたらす。結果として、輸血を必要とする従来の臨床場面と比較して、ＳＣＤ輸血を目的とする血液のために、より広範囲な抗原型マッチングが、必要である。結果として、一般に、最も適合するドナーは患者と同じ人種的背景である；残念ながら、極めて高い適合ドナーである同人種集団はまた、高頻度のグルコース－６－リン酸ヒドロゲナーゼ（Ｇ６ＰＤ）欠乏症を有し、それは、比較的不十分な保存と相関しており、治療に使用され得る前に、血液を廃棄する必要性があった。Ｃａｐｐｅｌｌｉｎｉｅｔａｌ．，“Ｇｌｕｃｏｓｅ－６－ｐｈｏｓｐｈａｔｅｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ，”Ｌａｎｃｅｔ３７１（９６０６）：６４－７４（２００８）およびＦｒａｎｃｉｓｅｔａｌ．，“Ｇｌｕｃｏｓｅ－６－ｐｈｏｓｐｈａｔｅｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙｉｎｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎｍｅｄｉｃｉｎｅ：ｔｈｅｕｎｋｎｏｗｎｒｉｓｋｓ，”ＶｏｘＳａｎｇ１０５（４）：２７１－８２（２０１３）、およびＴｚｏｕｎａｋａｓ，ｅｔａｌ．，“Ｇｌｕｃｏｓｅ６－ｐｈｏｓｐｈａｔｅｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅｄｅｆｉｃｉｅｎｔｓｕｂｊｅｃｔｓｍａｙｂｅｂｅｔｔｅｒ ‘ｓｔｏｒｅｒｓ’ ｔｈａｎｄｏｎｏｒｓｏｆｒｅｄｂｌｏｏｄｃｅｌｌｓ，”ＦｒｅｅＲａｄｉｃＢｉｏｌＭｅｄ，９６：１５２－１６５（２０１６）を参照されたい。

（それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる）。残念ながら、ドナー適格性スクリーニングの一部としてＧ６ＰＤ活性を試験するための確立されたプロトコールはない。

Ｇ６ＰＤ活性は、天然の抗酸化性経路（すなわちグルタチオン介在性の過酸化水素の還元）に燃料を供給するＮＡＤＰＨなどのエネルギー性分子を維持するために重要であり、赤血球におけるヘモグロビン分子の生理活性を維持するために重要である；この酵素における活性の喪失または減少は、保存中に早発性溶血をもたらし、輸血後に細胞の乏しい保持率をもたらす。しかしながら、酸素除去保存血液は、ＮＡＤＰＨの細胞内貯蔵、ならびに還元型グルタチオン（ＧＳＨ）濃度の増加を結果的に引き起こす。さらにまた、酸素除去保存血液は、メチレンテトラヒドロ葉酸を増加させ、それによって全体的なＮＡＤＰＨ産生を促進できる。血液の低酸素保存は、より良好な生存性を可能にし、それゆえにＧ６ＰＤ欠損ドナーからの血液の有用性を可能にする。これは、血液供給がより制限される農村地帯において、治療輸血を受けている鎌状赤血球症の人々に利用可能な血液供給を増やすだろう。

本開示の一態様において、ヘモグロビン異常症のリスクを低減するのに好適な酸素除去保存血液として、メトヘモグロビンの低減、残基Ｈ９３におけるβヘモグロビン酸化の低減、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＤＰＨ）貯蔵の増加、ＧＳＨの増加、ＡＴＰの増加、ＤＰＧの増加、ＮＡＤＰＨ貯蔵の増加、ＰＩＰ対ＰＩＰ３比率の低下、メチレンＴＨＦの増加、グルタミン酸塩の増加、ＧＳＨ対グルタチオンジスルフィド（ＧＳＳＧ）比率（ＧＳＨ／ＧＳＳＧ比）の増加、尿酸塩の増加、およびシステインの増加を有する、酸素除去保存血液が挙げられる。

αまたはβ重症型サラセミアの患者は、機能性ヘモグロビン分子を産生することができないので、結果的に重症貧血をもたらし赤血球（ＲＢＣ）輸血を必要とせざるを得ない。定期的な（すなわち、長期的な）輸血を必要とする結果、サラセミアのある人々は、治療輸血後のヘマトクリット値の急激な減少を特徴とする、遅発性溶血性輸血反応（ＤＨＴＲ）を患う可能性がある。理論によって制限されるものではないが、ＤＨＴＲは、突然のエリプトーシスに対する反応として誘導されることがあり、マクロファージおよび単球によって循環されている赤血球の急激な除去をもたらす。

理論に制限されるものではないが、エリプトーシスの主な誘因の１つは、従来の赤血球保存の結果として既知の、必然的に生じた酸化損傷である。Ｂｈａｖｓａｒｅｔａｌ．，“ＪａｎｕｓＫｉｎａｓｅ３ｉｓＥｘｐｒｅｓｓｅｄｉｎＥｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅｓ，ＰｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｅｄＵｐｏｎＥｎｅｒｇｙＤｅｐｌｅｔｉｏｎａｎｄＩｎｖｏｌｖｅｄｉｎｔｈｅＲｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆＳｕｉｃｉｄａｌＥｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅＤｅａｔｈ，”ＣｅｌｌｕｌａｒＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙａｎｄＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ２７（５）：５４７－５５６（２０１１）（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい。酸素除去保存血液は、ＮＡＤＰＨ貯蔵の増加（例えば、図５、図６、および図７参照のこと）、システインレベルの上昇（例えば、図１３参照）、ＧＳＨとＧＳＳＧ比率の上昇（例えば、図１２参照のこと）により明示されるように、優れた抗酸化性防御を有する。

さらにまた、赤血球がＡＴＰの十分なレベルをもはや有しない場合、エリプトーシスも促進され、それも従来の保存中に生じる。Ｇｕｒｅｒｅｔａｌ．，“ＡｒａｃｈｉｄｏｎｉｃａｃｉｄｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓａｎｄｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅｉｎＢｅｈｃｅｔ’ｓｄｉｓｅａｓｅ（ＢＤ）”Ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎｓ，ｌｅｕｋｏｔｒｉｅｎｅｓ，ａｎｄｅｓｓｅｎｔｉａｌｆａｔｔｙａｃｉｄｓ４３（４）：２５７－９（１９９９）（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。しかしながら、酸素を除去した血液は、全体的なＡＴＰレベルを改善し（例えば、図１６参照のこと）、ペントースリン酸経路を介した持続的解糖による代謝活性を改善した（例えば、図１５参照のこと）。

α－またはβ－サラセミアの人々の慢性治療用の輸血のために嫌気性血液製剤の使用は、酸化損傷の防御の増加に起因するＤＨＴＲ発症リスクの低減、および細胞内のエネルギー（ＡＴＰ）の優れた保存、ならびに輸血が必要とされる頻度を減少させるさらなる潜在的な利点、を有する。

本開示の一態様において、段落［００１７］、［００９３］、［００９９］および［００１０６］で特定されるように、少なくとも２日間保存された、２０％以下の初期酸素飽和を有する酸素除去保存血液は、メトヘモグロビンを減少させた。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、残基Ｈ９３のβヘモグロビンの酸化の低減を有する酸素除去保存血液である。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＤＰＨ）の貯蔵の増加を有する酸素除去保存血液である。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、ＧＳＨの増加を有する酸素除去保存血液である。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、ＡＴＰの増加を有する酸素除去保存血液である。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、ＡＴＰおよびＤＰＧの増加を有する酸素除去保存血液である。さらなる態様において、本開示の酸素除去保存血液は、さらに、ＮＡＤＰＨ貯蔵の増加、およびＧＳＨ、ＡＴＰ、およびＤＰＧの増加を含む。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、ＰＩＰ対ＰＩＰ３比率の低下を有する酸素除去保存血液である。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、メチレンＴＨＦの増加を有する酸素除去保存血液である。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、グルタミン酸塩の増加を有する酸素除去保存血液である。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、ＧＳＨ対グルタチオンジスルフィド（ＧＳＳＧ）比率（ＧＳＨ／ＧＳＳＧ比）の増加を有する酸素除去保存血液である。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、尿酸塩の増加を有する酸素除去保存血液である。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、システインの増加を有する酸素除去保存血液である。

本開示の一態様において、段落［００１７］、［００９３］、［００９９］および［００１０６］で特定されるように、少なくとも２日間保存された、２０％以下の初期酸素飽和を有する酸素除去保存血液は、メトヘモグロビンの低減、残基Ｈ９３におけるβヘモグロビンの酸化の低減、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＤＰＨ）貯蔵の増加、ＧＳＨの増加、ＡＴＰの増加、ＤＰＧの増加、ＮＡＤＰＨ貯蔵の増加、ＰＩＰ対ＰＩＰ３比率の低下、メチレンＴＨＦの増加、グルタミン酸塩の増加、ＧＳＨ対グルタチオンジスルフィド（ＧＳＳＧ）比率（ＧＳＨ／ＧＳＳＧ比）の増加、尿酸塩の増加、およびシステインの増加を有する。

本開示の一態様において、段落［００１７］、［００９３］、［００９９］および［００１０６］で特定されるように、少なくとも２日間保存された、１０％以下の初期酸素飽和を有する酸素除去保存血液は、メトヘモグロビンを低減させた。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、残基Ｈ９３のβヘモグロビンの酸化の低減を有する酸素除去保存血液である。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＤＰＨ）の貯蔵の増加を有する酸素除去保存血液である。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、ＧＳＨの増加を有する酸素除去保存血液である。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、ＡＴＰの増加を有する酸素除去保存血液である。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、ＡＴＰおよびＤＰＧの増加を有する酸素除去保存血液である。さらなる態様において、本開示の酸素除去保存血液はさらに、ＮＡＤＰＨ貯蔵の増加、ならびにＧＳＨ、ＡＴＰ、およびＤＰＧの増加を含む。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、ＰＩＰ対ＰＩＰ３比率の低下を有する酸素除去保存血液である。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、メチレンＴＨＦの増加を有する酸素除去保存血液である。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、グルタミン酸塩の増加を有する酸素除去保存血液である。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、ＧＳＨ対グルタチオンジスルフィド（ＧＳＳＧ）比率（ＧＳＨ／ＧＳＳＧ比）の増加を有する酸素除去保存血液である。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、尿酸塩の増加を有する酸素除去保存血液である。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、システインの増加を有する酸素除去保存血液である。

本開示の一態様において、段落［００１７］、［００９３］、［００９９］および［００１０６］で特定されるように、少なくとも２日間保存された、５％以下の初期酸素飽和を有する酸素除去保存血液は、メトヘモグロビンを低減させた。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、残基Ｈ９３のβヘモグロビンの酸化の低減を有する酸素除去保存血液である。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、グリセルアルデヒド－３－リン酸デヒドロゲナーゼ中のＣｙｓ１５２ジオキシド化の低下を有する酸素除去保存血液である。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＤＰＨ）の貯蔵の増加を有する酸素除去保存血液である。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、ＧＳＨの増加を有する酸素除去保存血液である。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、ＡＴＰの増加を有する酸素除去保存血液である。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、ＡＴＰおよびＤＰＧの増加を有する酸素除去保存血液である。さらなる態様において、本開示の酸素除去保存血液はさらに、ＮＡＤＰＨ貯蔵の増加、ならびにＧＳＨ、ＡＴＰ、およびＤＰＧの増加を含む。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、ＰＩＰ対ＰＩＰ３比率の低下を有する酸素除去保存血液である。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、メチレンＴＨＦの増加を有する酸素除去保存血液である。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、グルタミン酸塩の増加を有する酸素除去保存血液である。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、ＧＳＨ対グルタチオンジスルフィド（ＧＳＳＧ）比率（ＧＳＨ／ＧＳＳＧ比）の増加を有する酸素除去保存血液である。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、尿酸塩の増加を有する酸素除去保存血液である。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、システインの増加を有する酸素除去保存血液である。

本開示の一態様において、段落［００１７］、［００９３］、［００９９］および［００１０６］で特定されるように、少なくとも２日間保存された、３％以下の初期酸素飽和を有する酸素除去保存血液は、メトヘモグロビンを低減させた。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、グリセルアルデヒド－３－リン酸デヒドロゲナーゼ中のＣｙｓ１５２ジオキシド化の低下を有する酸素除去保存血液である。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、残基Ｈ９３のβヘモグロビンの酸化の低減を有する酸素除去保存血液である。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＤＰＨ）の貯蔵の増加を有する酸素除去保存血液である。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、ＧＳＨの増加を有する酸素除去保存血液である。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、ＡＴＰの増加を有する酸素除去保存血液である。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、ＡＴＰおよびＤＰＧの増加を有する酸素除去保存血液である。さらなる態様において、本開示の酸素除去保存血液はさらに、ＮＡＤＰＨ貯蔵の増加、ならびにＧＳＨ、ＡＴＰ、およびＤＰＧの増加を含む。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、ＰＩＰ対ＰＩＰ３比率の低下を有する酸素除去保存血液である。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、メチレンＴＨＦの増加を有する酸素除去保存血液である。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、グルタミン酸塩の増加を有する酸素除去保存血液である。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、ＧＳＨ対グルタチオンジスルフィド（ＧＳＳＧ）比率（ＧＳＨ／ＧＳＳＧ比）の増加を有する酸素除去保存血液である。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、尿酸塩の増加を有する酸素除去保存血液である。一態様において、本開示の酸素除去保存血液は、システインの増加を有する酸素除去保存血液である。

虚血再灌流障害は、血液供給が中断され、次いで再確立されるときに起こり、死亡率および罹患率の重大な原因である。血液供給、例えば心臓外科、腎臓移植、肝臓摘出または結腸切除の中断に関わる手術は全て、患者を虚血再灌流障害の危険にさらす。バイパスまたはＰ手術中の輸血に血液を提供するために方法の改善が望ましい。ここでは、従来通りに保存された血液に見られるより低レベルの炎症因子を有する酸素除去保存血液を提供することによって、患者へのリスクおよび損傷を減らす方法を提供する。したがって、ＡＴＰの改善、２，３－ＤＰＧ、および変形能の改善に加えて、本明細書の酸素除去保存血液は、再灌流中の損傷、または組織への損傷のリスクを低下させる予想外の利点を提供する。

理論によって制限されるものではないが、虚血変化の間、細胞代謝において、再開された血流による突然の酸素回復に反応して大量に生成される活性酸素種によって、イオン濃度および膜構成は細胞を損傷の影響を受けやすくさせると考えられる。Ｐｅｌｌｅｔａｌ．，“ＭｏｖｉｎｇＦｏｒｗａｒｄｓｂｙＢｌｏｃｋｉｎｇＢａｃｋ－Ｆｌｏｗ：ＴｈｅＹｉｎａｎｄＹａｎｇｏｆＭＩＴｈｅｒａｐｙ，”ＣｉｒｃＲｅｓ１１８（５）：８９８－９０６（２０１６）およびＨａｕｓｅｎｌｏｙｅｔａｌ．，“Ｍｙｏｃａｒｄｉａｌｉｓｃｈｅｍｉａ－ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｉｎｊｕｒｙ：ａｎｅｇｌｅｃｔｅｄｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｔａｒｇｅｔ，”ＪＣｌｉｎＩｎｖｅｓｔ１２３（１）：９２－１００（２０１３）（参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい。最終的に、酸化損傷は、酸素化血液流量の再確立の直接の結果として、細胞死および臓器の機能不全を引き起こす。酸化損傷に加えて、再灌流は、他の影響の中でも特に、凝固性亢進およびさらなる細胞障害を引き起こし得る炎症反応を誘導することがさらに考えられる。

虚血／再灌流傷害を経験している患者は、以下の臨床症状およびそれらの組み合わせを示すことがある。
・手術中の止血剤の解除など一旦閉塞が取り除かれると、血管中の血流（「再流なし」と呼ばれる）が不足；
・心筋が正常心拍出量を事実上縮小して回復させる一過性の不能である、気絶心筋（心臓外科患者において）；
・心筋への血流の回復の後、頻脈、心室細動または頻拍性心室調律の発症（心臓外科患者において）；および
・腸運動性の障害、養分吸収、腸透過性の増加、ならびに門脈循環および体循環の細菌感染症（胃腸手術患者について）；
・虚血再灌流傷害の一般的な結果は、多臓器機能不全症候群（ＭＯＤＳ）および他の遠隔性臓器障害の発症である；最も一般的な系統は、呼吸不全をもたらす肺系統であり、肝臓、腎臓、ＧＩ、心筋、およびＣＮＳの機能不全が続く。

従来通りに保存された血液は、わずか２日間後にさえ、酸素除去保存血液と比較してトロンボキサンＢ２レベルの増加を有する（例えば、図３を参照されたい）。７日目から、高レベルの酸素を有する血液は、ロイコトリエンＢ４レベルの増加を発現し始める（例えば、図２を参照のこと）。ヒドロキシエイコサテトラエン酸（ＨＥＴＥ）の細胞外レベルは、酸素除去保存血液よりも早く保存血液中で上昇し始め、より高い確率でより高いレベルまで増加する。細胞のＨＥＴＥレベルは、酸素除去保存血液のＨＥＴＥレベルに対して、早ければ２日目にも増加する。さらなる保存中、細胞のＨＥＴＥレベルは、酸素除去保存血液に対して、より高いままであり、かつ増加する。米国仮特許出願第６２／１６３，２６９号にて示すように、酸素除去保存血液は、ＢＲＭ、ＲＡＮＴＥＳ、エオタキシン１、無細胞ヘモグロビン、およびイソプロスタンのレベルを低下させた。酸素除去保存血液は、従来通りに保存された血液と比較すると、一般的に炎症因子レベルを低下させた。したがって、炎症促進性化合物を含有する従来通りに保存された血液は、死亡率および有害事象の重大なリスクとなる可能性がある。

血液保存の早期段階における炎症促進性化合物レベルの変化に加えて、酸素除去保存血液と比較すると、従来通りに保存された赤血球は、酸化損傷に対する防御能力を次第に喪失する。以前の、保存中に血中の評価されない変化を考慮すると、虚血事象後の再灌流の間、従来通りに保存された血液の輸血は、システイン、ＧＳＨ、ＮＡＤＨ、ＮＡＤＰＨレベルの低下に起因する酸化ストレスの一因となり得る。対照的に、酸素除去保存血液はシステイン、ＧＳＨ、ＮＡＤＨ、ＮＡＤＰＨのより高いレベルを維持し、酸素除去保存血液は酸化損傷からの保護に役立つことが期待される。

本開示の一態様において、輸血を必要とするヒト患者は、大量輸血、反復輸血、または長期輸血を必要とする患者である。

本開示の一態様において、輸血を必要とするヒト患者は、５ｇ／ｄＬ未満のヘモグロビン濃度を有する鎌状赤血球症を有する。別の態様において、輸血を必要とするヒト患者は、鎌状赤血球症を有し、経頭蓋ドプラ超音波（ＴＣＤ）によって決定されるように、中大脳動脈のピーク中心線流速が２００ｃｍ／秒を超える。別の態様において、輸血を必要とするヒト患者は、鎌状赤血球症を有し、鎌状ヘモグロビンレベルを体内の全ヘモグロビンの３０％未満まで減らすために輸血を受ける。別の態様において、輸血を必要とするヒト患者は、鎌状赤血球症を有し、急性胸部症候群を経験している。別の態様において、輸血を必要とするヒト患者は、鎌状赤血球症を有し、血管閉塞性発作を経験している。さらなる態様において、輸血を必要とするヒト患者は鎌状赤血球症を有し手術の必要があり、該患者は、周術期の低酸素症、血流低下、およびアシドーシスを減らすために１回以上の術前輸血を受ける。

本開示の一態様において、輸血を必要とするヒト患者は、５ｇ／ｄＬ未満のヘモグロビン濃度を有するサラセミアを有する。

別の態様において、輸血を必要とするヒト患者は、手術患者である。別の態様において、輸血を必要とするヒト患者は、全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）を有する。別の態様において、輸血を必要とするヒト患者は、慢性血管炎症を有する。さらなる態様において、輸血を必要とするヒト患者は糖尿病を有する。さらなる態様において、輸血を必要とし、慢性血管炎症を有するヒト患者は糖尿病を有する。

本開示の一態様において、輸血を必要とするヒト患者は、炎症、血管内皮炎、内皮細胞壁への癒着、凝固性亢進、血管収縮、補体系活性化、灌流障害、感染または免疫調節を有する。

本明細書で使用される場合、「血液」という用語は、全血、白血球除去ＲＢＣ、血小板除去ＲＢＣ、ならびに白血球および血小板除去ＲＢＣを指す。血液という用語はさらに、濃厚赤血球、血小板除去濃厚赤血球、白血球除去濃厚赤血球、ならびに白血球および血小板除去濃厚赤血球を含む。血液の温度は、採取プロセスの段階に応じて異なり得るが、採取時点では３７℃の正常な体温から開始し、血液が患者の体を離れるとすぐに約３０℃まで急速に低下するが、さらにその後、未処置の場合、約６時間で室温まで低下し、最終的には約４℃～６℃で冷蔵される。

本明細書で使用される場合、「血液製剤」は、分離された血小板、血漿、または白血球を含む。

本明細書で使用される場合、「全血」は、白血球（ＷＢＣ）、血漿中に懸濁された血小板を含み、電解質、ホルモン、ビタミン、抗体などを含む。全血中には、白血球が、通常、４．５～１１．０×１０⁹細胞／Ｌの範囲で存在し、海面位での正常なＲＢＣは、男性で４．６～６．２×１０¹²／Ｌ、女性で４．２～５．４×１０¹²／Ｌである。正常なヘマトクリット値、または血中血球容積は、男性で約４０～５４％、女性で約３８～４７％である。血小板数は、通常、男性および女性とも１５０～４５０×１０⁹／Ｌである。全血は、献血者から採取され、通常、抗凝固剤と組み合わされる。採取された全血は、最初は約３７℃であり、採取中および採取の直後には約３０℃まで急速に冷却するが、約６時間かけて周囲温度まで徐々に冷却する。全血は、３０～３７℃から開始して、または室温（典型的には約２５℃）で、採取時に本開示の方法に従って処理され得る。

本明細書で使用される場合、「赤血球」（ＲＢＣ）、保存赤血球、酸素除去保存赤血球、ならびに酸素および二酸化炭素除去保存赤血球は、全血中に存在するＲＢＣ、白血球除去ＲＢＣ、血小板除去ＲＢＣ、白血球および血小板除去ＲＢＣ、ならびに濃厚赤血球（ｐＲＢＣ）を含む。体内にあるヒト赤血球は動的状態にある。赤血球は、体中に酸素を運び、赤い血液にその色を与える鉄含有タンパク質であるヘモグロビンを含有する。赤血球で構成される血液の体積の割合は、ヘマトクリット値と称される。本明細書で使用される場合、別途限定されない限り、ＲＢＣは濃厚赤血球（ｐＲＢＣ）も含む。濃厚赤血球は、当該技術分野で一般的に知られる遠心分離技術を使用して全血から調製される。本明細書で使用される場合、別途指示されない限り、ｐＲＢＣのヘマトクリット値は約７０％である。本明細書で使用される場合、酸素除去保存ＲＢＣは、酸素および二酸化炭素を除去した保存ＲＢＣを含んでもよい。

本明細書で使用される場合、「保存血液」は、１～６℃で保存された、酸素除去赤血球または酸素および二酸化炭素除去血液を含む。一態様において、保存血液は、保存赤血球を含む。本明細書で使用される場合、「保存赤血球」は、１～６℃で保存された、酸素除去赤血球または酸素および二酸化炭素除去赤血球を含む。一態様において、保存赤血球は、全血中に存在する赤血球（ＲＢＣ）を含む。別の態様において、保存赤血球は、白血球除去全血中に存在するＲＢＣを含む。別の態様において、保存赤血球は、白血球除去ＲＢＣ中に存在する赤血球（ＲＢＣ）を含む。さらなる態様において、保存赤血球は、血小板除去ＲＢＣ中に存在する赤血球（ＲＢＣ）を含む。さらに別の態様において、保存赤血球は、白血球除去ＲＢＣおよび血小板除去ＲＢＣ中に存在する赤血球（ＲＢＣ）を含む。

本開示の一態様において、酸素除去保存赤血球は、少なくとも２日間保存され得る。別の態様において、酸素除去保存赤血球は、少なくとも７日間保存され得る。別の態様において、酸素除去保存赤血球は、少なくとも１４日間保存され得る。別の態様において、酸素除去保存赤血球は、少なくとも２１日間保存され得る。別の態様において、酸素除去保存赤血球は、少なくとも２８日間保存され得る。別の態様において、酸素除去保存赤血球は、最長４２日間保存され得る。

本明細書で使用される場合、血液の「ユニット」は、抗凝固剤を含めて約４５０～５００ｍｌである。適切な抗凝固剤として、ＣＰＤ、ＣＰＤＡ１、ＡＣＤ、およびＡＣＤ－Ａが挙げられる。

この方法における使用に適した血液は、抗凝固剤を有する酸素除去保存血液を含む。本開示の一態様において、酸素除去赤血球は、酸素除去保存血液を産生するために最長６週間保存される。別の態様において、通常酸素除去保存血液は、さらに、添加液を含む。本開示による適切な添加液は、ＡＳ－１、ＡＳ－３（Ｎｕｔｒｉｃｅｌ（登録商標））、ＡＳ－５、ＳＡＧＭ、ＰＡＧＧ－ＳＭ、ＰＡＧＧ－ＧＭ、ＭＡＰ、ＡＳ－７、ＥＳＯＬ－５、ＥＡＳ６１、ＯＦＡＳ１、ＯＦＡＳ３、およびそれらの組み合わせを含む。一態様において、添加液は、成分分離の時点で加えられる。一態様において、添加液はＡＳ－１である。別の態様において、添加液はＡＳ－３である。他の態様において、添加液はＳＡＧＭである。

本開示の一態様において、酸素除去保存血液ならびに酸素および二酸化炭素が除去された保存血液は、４０％以下の初期酸素飽和を有する。別の態様において、酸素除去保存血液は、２０％以下の初期酸素飽和を有する。別の態様において、酸素除去保存血液は、１０％以下の初期酸素飽和を有する。別の態様において、酸素除去保存血液は、５％以下の初期酸素飽和を有する。別の態様において、酸素除去保存血液は、３％以下の初期酸素飽和を有する。

本開示の一態様において、酸素除去保存血液は、４０％以下の初期酸素飽和を有し、少なくとも２日間保存される。一態様において、酸素除去保存血液は、４０％以下の初期酸素飽和を有し、少なくとも４日間保存される。別の態様において、酸素除去保存血液は、２０％以下の初期酸素飽和を有し、少なくとも７日間保存される。別の態様において、酸素除去保存血液は、４０％以下の初期酸素飽和を有し、少なくとも１４日間保存される。別の態様において、酸素除去保存血液は、４０％以下の初期酸素飽和を有し、少なくとも２１日間保存される。別の態様において、酸素除去保存血液は、４０％以下の初期酸素飽和を有し、少なくとも２８日間保存される。別の態様において、酸素除去保存血液は、４０％以下の初期酸素飽和を有し、少なくとも３５日間保存される。別の態様において、酸素除去保存血液は、４０％以下の初期酸素飽和を有し、４２日間保存される。

本開示の一態様において、酸素除去保存血液は、２０％以下の初期酸素飽和を有し、少なくとも２日間保存される。一態様において、酸素除去保存血液は、２０％以下の初期酸素飽和を有し、少なくとも４日間保存される。別の態様において、酸素除去保存血液は、２０％以下の初期酸素飽和を有し、少なくとも７日間保存される。別の態様において、酸素除去保存血液は、２０％以下の初期酸素飽和を有し、少なくとも１４日間保存される。別の態様において、酸素除去保存血液は、２０％以下の初期酸素飽和を有し、少なくとも２１日間保存される。別の態様において、酸素除去保存血液は、２０％以下の初期酸素飽和を有し、少なくとも２８日間保存される。別の態様において、酸素除去保存血液は、２０％以下の初期酸素飽和を有し、少なくとも３５日間保存される。別の態様において、酸素除去保存血液は、２０％以下の初期酸素飽和を有し、４２日間保存される。

本開示の一態様において、酸素除去保存血液は、１０％以下の初期酸素飽和を有し、少なくとも２日間保存される。一態様において、酸素除去保存血液は、１０％以下の初期酸素飽和を有し、少なくとも４日間保存される。別の態様において、酸素除去保存血液は、１０％以下の初期酸素飽和を有し、少なくとも７日間保存される。別の態様において、酸素除去保存血液は、１０％以下の初期酸素飽和を有し、少なくとも１４日間保存される。別の態様において、酸素除去保存血液は、１０％以下の初期酸素飽和を有し、少なくとも２１日間保存される。別の態様において、酸素除去保存血液は、１０％以下の初期酸素飽和を有し、少なくとも２８日間保存される。別の態様において、酸素除去保存血液は、１０％以下の初期酸素飽和を有し、少なくとも３５日間保存される。別の態様において、酸素除去保存血液は、２０％以下の初期酸素飽和を有し、４２日間保存される。

本開示の一態様において、酸素除去保存血液は、５％以下の初期酸素飽和を有し、少なくとも２日間保存される。一態様において、酸素除去保存血液は、５％以下の初期酸素飽和を有し、少なくとも４日間保存される。別の態様において、酸素除去保存血液は、５％以下の初期酸素飽和を有し、少なくとも７日間保存される。別の態様において、酸素除去保存血液は、５％以下の初期酸素飽和を有し、少なくとも１４日間保存される。別の態様において、酸素除去保存血液は、５％以下の初期酸素飽和を有し、少なくとも２１日間保存される。別の態様において、酸素除去保存血液は、５％以下の初期酸素飽和を有し、少なくとも２８日間保存される。別の態様において、酸素除去保存血液は、５％以下の初期酸素飽和を有し、少なくとも３５日間保存される。別の態様において、酸素除去保存血液は、５％以下の初期酸素飽和を有し、４２日間保存される。

本開示の一態様において、酸素除去保存血液は、３％以下の初期酸素飽和を有し、少なくとも２日間保存される。一態様において、酸素除去保存血液は、２０％以下の初期酸素飽和を有し、少なくとも４日間保存される。別の態様において、酸素除去保存血液は、３％以下の初期酸素飽和を有し、少なくとも７日間保存される。別の態様において、酸素除去保存血液は、３％以下の初期酸素飽和を有し、少なくとも１４日間保存される。別の態様において、酸素除去保存血液は、３％以下の初期酸素飽和を有し、少なくとも２１日間保存される。別の態様において、酸素除去保存血液は、３％以下の初期酸素飽和を有し、少なくとも２８日間保存される。別の態様において、酸素除去保存血液は、３％以下の初期酸素飽和を有し、少なくとも３５日間保存される。別の態様において、酸素除去保存血液は、３％以下の初期酸素飽和を有し、少なくとも４２日間保存される。

本開示は、輸血を必要とするヒト患者のエネルギー代謝を改善するための方法であって、輸血媒介型の酸化ストレスのリスクの増加を有し輸血を必要とするヒト患者への輸血のために、酸素除去保存血液を提供することを含み、該酸素除去保存血液は、保存期間の間保存される前に２０％以下の初期酸素飽和を有し、該患者の酸化ストレスリスクが増加している、方法を提供し、かつ含む。

本開示の一態様において、保存期間の間保存される前に２０％以下の初期酸素飽和を有し、輸血を必要とする患者に与えられる酸素除去保存血液は、輸血すべきユニット総数を減少させた。一態様において、輸血するべき全ユニット数は、少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、および少なくとも１０減らされる。別の態様において、輸血するべき全ユニット数は、１～２、２～４、４～６減らされる。６～８、および８～１０。

本開示は、輸血を必要とする患者における炎症反応リスクを含むが、それに限定されない有害輸血事象のリスクを低減する方法であって、同一保存期間の間保存された酸素除去保存血液と比較した場合に、少なくとも１つの炎症因子レベルが低下した酸素除去保存血液を提供することを含み、該患者の炎症反応リスクが増加している方法、を提供し、かつ含む。

本開示は、酸素制御ＲＢＣの浸透性および力学的な抵抗の改善のため、非常に重篤な患者の敗血症性合併症のリスクを減少させる方法の方法を提供し、かつ含み、そのことが生体内輸血後の溶血の可能性を減少させ、続いて、敗血症性レシピエントの負担となる、鉄過剰負荷および非トランスフェリン結合鉄（ＮＴＢＩ）に関して利益を提供する。

本明細書で使用される場合、「より高い」または「増加した」という用語は、酸素除去または嫌気性保存血液の測定値が、別の方法で同等に処理された正常酸素または高酸素で従来通りに保存された血液の測定値と比較した場合に、各比較測定条件につき少なくとも５つの試料サイズで、少なくとも１標準偏差高いことを意味する。

本明細書で使用される場合、「減少した」または「より少ない」という用語は、酸素除去または嫌気性保存血液の測定値が、別の方法で同等に処理された正常酸素または高酸素で従来通りに保存された血液ＲＢＣの測定値と比較した場合に、各比較測定条件につき少なくとも５つの試料サイズで、少なくとも１標準偏差低いことを意味する。

本明細書で使用される場合、「約」という用語は、±１０％を指す。

本明細書で使用される場合、「未満」という用語は、より小さい量およびゼロを超える量を指す。

「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、「含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、「含んでいる（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」という用語、およびそれらの活用形は、「限定されないが～を含む」を意味する。

「～からなる」という用語は、「～を含み、それに限定される」を意味する。

「～から本質的になる」という用語は、追加の成分、ステップ、および／または部分が、特許請求される組成物、方法、または構造の基本的なおよび新規の特徴に実質的に影響を及ぼさない場合に限り、組成物、方法、または構造が、それらの追加の成分、ステップ、および／または部分を含む得ることを意味する。

本明細書で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈上明らかに別途指示されない限り、複数の指示対象を含む。例えば、「化合物（ａｃｏｍｐｏｕｎｄ）」または「少なくとも１つの化合物（ａｔｌｅａｓｔｏｎｅｃｏｍｐｏｕｎｄ）」という用語は、それらの混合物を含む複数の化合物を含んでもよい。

本出願を通して、本開示の種々の態様が範囲形式で提示されてもよい。範囲形式の記載は、便宜上および簡潔さのためであるに過ぎず、本開示の範囲に対する確固たる制限として解釈されるべきではないことを理解されたい。したがって、範囲の記載は、全ての考えられる部分的な範囲、およびその範囲内の個々の数値を具体的に開示したとみなされるべきである。例えば、「１～６」などの範囲の記載は、「１～３」、「１～４」、「１～５」、「２～４」、「２～６」、「３～６」などの部分的な範囲だけではなく、その範囲内の個々の数字、例えば、１、２、３、４、５、および６も具体的に開示されたとみなされるべきである。これは、範囲の広さに関係なく適用される。

本明細書に数値範囲が示される場合はいつでも、示される範囲内に挙げられたいかなる数値（分数または整数）も含むことを意味する。第１の指示数と第２の指示数「に及ぶ／との間の範囲」という句と、第１の指示数「から」第２の指示数「に及ぶ／までの範囲」という句は、本明細書において同義に使用され、第１および第２の指示数と、それらの間の全ての小数および整数を含むことを意味する。

本明細書で使用される場合、「方法」という用語は、段落［００４８］～［００５１］、［００８６］～［００９１］、および［０１１１］～［０１１５］に記載の通り、少なくとも２日間保存された、２０％以下の初期酸素飽和を有する酸素除去保存血液を有する輸血を必要とするヒト患者に提供することを含むがこれらに限定されない、所与の課題を達成するための様式、手段、手法、および手順を意味する。

本明細書で使用される場合、「均等」という用語は、２０、１０、５、および＜３％のＳＯ₂を有する酸素除去保存血液の測定値を、別の方法で同等に処理された正常酸素または高酸素で従来通りに保存された血液の測定値と比較した場合に、各比較測定条件につき少なくとも４つの試料サイズで、互いの１標準偏差以内であることを意味する。

一態様において、本開示は、以下の実施形態を提供する。
実施形態１：輸血を必要とするヒト患者における炎症反応リスクを低減させる方法であって、
炎症反応リスクが増加している、輸血を必要とするヒト患者への輸血のために酸素除去保存血液を提供することを含み、同一保存期間の間保存された非酸素除去保存血液と比較して、該酸素除去保存血液が、保存期間の間保存される前に２０％以下の初期酸素飽和を有し、該酸素除去保存血液が、少なくとも１つの炎症因子レベルが低下している、方法。

実施形態２：輸血を必要とする該ヒト患者は、組織灌流バイパスを必要とする手術患者、慢性血管炎症を有する患者、慢性炎症性腸疾患を有する患者、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）を有する患者、鎌状赤血球症を有する患者、サラセミアを有する患者、臓器不全を有する患者、全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）を有する患者、真性糖尿病を有する患者、ベーチェット病を有する患者、リウマチ性関節炎を有する患者、煙吸入を有する患者、およびそれらの組み合わせを有する患者からなる群から選択される、実施形態１に記載の方法。

実施形態３：輸血を必要とする該ヒト患者は、遅発性溶血性輸血反応、虚血再灌流由来の損傷、過剰凝固、輸血関連急性肺損傷（ＴＲＡＬＩ）、全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）、多臓器機能不全症候群（ＭＯＤＳ）またはそれらの組み合わせのリスクが低下している、実施形態２に記載の方法。

実施形態４：該炎症反応は、慢性血管炎症、慢性炎症性腸疾患およびそれらの組み合わせからなる群から選択される炎症反応を悪化させている、実施形態２に記載の方法。

実施形態５：該少なくとも１つの炎症因子は、以下からなる群から選択される、実施形態１に記載の方法。
ロイコトリエン、
８－イソプロスタン、
トロンボキサン、
ヒドロキシエイコサテトラエン酸（ＨＥＴＥ）、および
それらの組み合わせ。

実施形態６：ＲＡＮＴＥＳ、エオタキシン１、または可溶性ＣＤ４０リガンド（ＳＣＤ４０Ｌ）から選択される炎症性サイトカインをさらに含む、実施形態５に記載の方法。

実施形態７：該保存期間が、少なくとも２日間、７日間、１４日間、２１日間、２８日間またはそれ以上である、実施形態１に記載の方法。

実施形態８：輸血を必要とする該ヒト患者は、頻回輸血を必要とする患者である、実施形態１に記載の方法。

実施形態９：該保存期間が２日間であり、酸素除去保存血液が以下を含む、実施形態５に記載の方法。
該初期酸素飽和が５％以下の場合、低下したレベルのトロンボキサンＢ２、
増加したレベルのグルタチオン（ＧＳＨ）、
低下した割合のメトヘモグロビン、
増加したレベルのＡＴＰ、および
増加したレベルの２，３－ジホスホグリセリン酸（ＤＰＧ）、
該酸素除去保存血液中の該増加または該低下が、同一保存期間の間保存された非酸素除去保存血液に対してである。

実施形態１０：該保存期間が少なくとも７日間であり、該酸素除去保存血液が、
増加した比率のホスファチジルイノシトール４－リン酸とホスファチジルイノシトール（３，４，５）－三リン酸をさらに含み、
該酸素除去保存血液における該比率の増加は、同一保存期間に保存された非酸素除去保存血液に対してである、実施形態９の方法。

実施形態１１：該保存期間が少なくとも１４日間であり、該酸素除去保存血液が、
低下したレベルのロイコトリエンＢ４、
該初期酸素飽和が１０％以下の場合、低下したレベルのヒドロキシエイコサテトラエン酸（ＨＥＴＥ）、
増加したレベルのメチレンテトラヒドロ葉酸、および
増加したレベルのグルタミン酸塩をさらに含み、
該酸素除去保存血液中の該増加または該低下が、同一保存期間の間保存された非酸素除去保存血液に対してである、実施形態１０の方法。

実施形態１２：該保存期間が少なくとも２１日間であり、該酸素除去保存血液が、
該酸素飽和が５％～１０％の場合、より高い比率の、ＧＳＨ対グルタチオンジスルフィド（ＧＳＳＧ）（ＧＳＨ／ＧＳＳＧ比）、
増加した貯蔵のニコチン酸アミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ）、
増加した貯蔵のニコチン酸アミドアデニンジヌクレオチド＋水素（ＮＡＤＨ）、および
該初期酸素飽和が約５％である場合、低下したレベルのジオキシド化レベルの、グリセルアルデヒド－３－リン酸デヒドロゲナーゼ（ＧＡＰＤＨ）中のＣｙｓ１５２をさらに含み、
該酸素除去保存血液中の該増加または該低下が、同一保存期間の間保存された非酸素除去保存血液に対してである、実施形態１１の方法。

実施形態１３：該保存期間が少なくとも２８日間であり、該酸素除去保存血液が、
増加したレベルのＮＡＤＰＨ
増加した比のＮＡＤＰＨ／ＮＡＤＰ⁺、および
増加したレベルのシステインをさらに含み、
該酸素除去保存血液中の該増加または該低下が、同一保存期間の間保存された非酸素除去保存血液に対してである、実施形態１２の方法。

実施形態１４：該酸素除去保存血液の少なくとも１ユニットを輸血することをさらに含む、実施形態１に記載の方法。

実施形態１５：該初期酸素飽和が、１０％以下、５％以下、または３％以下である、実施形態１に記載の方法。

実施形態１６：輸血を必要とするヒト患者の酸化ストレスを低減する方法であって、
輸血媒介型の酸化ストレスリスクが増加している輸血を必要とするヒト患者への輸血のために酸素除去保存血液を提供することを含み、該酸素除去保存血液は保存期間の間に保存される前に２０％以下の初期酸素飽和を有し、該患者の酸化ストレスリスクが増加している、方法。

実施形態１７：酸化ストレスリスクが増加している、輸血を必要とする該ヒト患者は、４ユニット以上の血液を必要とする外傷患者、１０ユニット以上の血液を必要とする外傷患者、鎌状赤血球症を有する患者、サラセミアを有する患者、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される、実施形態１６に記載の方法。

実施形態１８：酸化ストレスの該低下は、酸化化合物の減少、酸化保護化合物レベルの増加、およびそれらの組み合わせである、実施形態１６に記載の方法。

実施形態１９：該保存期間が２日間であり、酸素除去保存血液が以下を含む、実施形態１６に記載の方法。
該初期酸素飽和が５％以下の場合、低下したレベルのトロンボキサンＢ２、
増加した貯蔵のニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＤＰ）、
増加した貯蔵の還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＤＰＨ）、
増加したレベルのグルタチオン（ＧＳＨ）、
低下した割合のメトヘモグロビン、
増加したレベルのＡＴＰ、および
増加したレベルの２，３－ジホスホグリセリン酸（ＤＰＧ）
該酸素除去保存血液中の該増加または該低下が、同一保存期間の間保存された非酸素除去保存血液に対してである。

実施形態２０：該保存期間が少なくとも７日間であり、該酸素除去保存血液が、
増加した比率のホスファチジルイノシトール４－リン酸とホスファチジルイノシトール（３，４，５）－三リン酸とをさらに含み、
該酸素除去保存血液における該増加が、同一保存期間の間保存された非酸素除去保存血液に対してである、実施形態１７の方法。

実施形態２１：該保存期間が少なくとも１４日間であり、該酸素除去保存血液が、
低下したレベルのロイコトリエンＢ４、
該初期酸素飽和が１０％以下の場合、低下したレベルのヒドロキシエイコサテトラエン酸（ＨＥＴＥ）、
増加したレベルのメチレンテトラヒドロ葉酸、および
増加したレベルのグルタミン酸塩をさらに含み、
該酸素除去保存血液中の該増加または該低下が、同一保存期間の間保存された非酸素除去保存血液に対してである、実施形態２０の方法。

実施形態２２：該保存期間が少なくとも２１日間であり、該酸素除去保存血液が、
該初期酸素飽和が５％～１０％の場合、より高い比率のＧＳＨ対グルタチオンジスルフィド（ＧＳＳＧ）（ＧＳＨ／ＧＳＳＧ比）、
増加した貯蔵のニコチン酸アミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ）、
増加した貯蔵のニコチン酸アミドアデニンジヌクレオチド＋水素（ＮＡＤＨ）、および
該初期酸素飽和が約５％である場合、低下したジオキシド化レベルの、グリセルアルデヒド－３－リン酸デヒドロゲナーゼ（ＧＡＰＤＨ）中のＣｙｓ１５２をさらに含み、
該酸素除去保存血液中の該増加または該低下が、同一保存期間の間保存された非酸素除去保存血液に対してである、実施形態２１に記載の方法。

実施形態２３：該保存期間が少なくとも２８日間であり、該酸素除去保存血液が、
増加したレベルのＮＡＤＰＨ
増加した比率のＮＡＤＰＨ／ＮＡＤＰ⁺、
増加したレベルのシステイン、および
増加したレベルの尿酸塩をさらに含み、
該酸素除去保存血液中の該増加または該低下が、同一保存期間の間保存された非酸素除去保存血液に対してである、実施形態２２の方法。

実施形態２４：該保存期間が少なくとも４２日間であり、該酸素除去保存血液が、残基Ｈ９３にβヘモグロビンの酸化レベルの低下をさらに含み、該酸素除去保存血液中の該低下が、同一保存期間の間保存された酸素除去保存血液に対してである、実施形態２３に記載の方法。

実施形態２５：該酸素除去保存血液の少なくとも１ユニットを輸血することをさらに含む、実施形態１６に記載の方法。

実施形態２６：該初期酸素飽和が、１０％以下、５％以下、または３％以下である、実施形態１６に記載の方法。

実施形態２７：輸血を必要とする該ヒト患者は、大量輸血または長期輸血を必要とする患者である、実施形態１６に記載の方法。

実施形態２８：該保存期間が、少なくとも１４日間、２１日間、２８日間またはそれ以上である、実施形態１７に記載の方法。

実施形態２９：輸血を必要とする該ヒト患者は、５ｇ／ｄＬ未満のヘモグロビン濃度を有する鎌状赤血球症、７ｇ／ｄＬ未満のヘモグロビン濃度を有するサラセミアを有する、実施形態１７に記載の方法。

実施形態３０：該ヒト患者は鎌状赤血球症を有し、経頭蓋ドプラ超音波（ＴＣＤ）によって決定されるように、中大脳動脈のピーク中心線流速が２００ｃｍ／秒を超える、実施形態２９に記載の方法。

実施形態３１：該ヒト患者は鎌状赤血球症を有し、鎌状ヘモグロビンレベルを体内の全ヘモグロビンの３０％未満まで減らすために輸血を受ける、実施形態２９に記載の方法。

実施形態３２：該ヒト患者は鎌状赤血球症を有し、約３０日毎に輸血を受ける、実施形態２９に記載の方法。

実施形態３３：該ヒト患者は鎌状赤血球症を有し、急性胸部症候群を経験している、実施形態２９に記載の方法。

実施形態３４：該ヒト患者は鎌状赤血球症を有し、血管閉塞性発作を経験している、実施形態２９に記載の方法。

該ヒト患者は鎌状赤血球症を有し手術の必要があり、該患者は、周術期の低酸素症、血流低下、またはアシドーシスを減らすために１回以上の術前輸血を受ける、実施形態３５に記載の方法。

実施形態３６：輸血を必要とするヘモグロビン異常症患者の有害事象リスクを低減させる方法であって、
輸血を必要とするヘモグロビン異常症患者への輸血に酸素除去保存血液を提供することを含み、該酸素除去保存血液は保存期間の間に保存される前に２０％以下の初期酸素飽和を有し、該患者の有害事象リスクが増加している、方法。

実施形態３７：輸血を必要とする該ヘモグロビン異常症ヒト患者は、鎌状赤血球患者である、実施形態３６に記載の方法。

実施形態３８：実施形態１：該有害事象は、エリプトーシス、遅発性溶血性輸血反応、赤血球非対称性の欠損、重症貧血、血管閉塞性発作頻度の低下、周術期低酸素症の低下、周術期の低灌流の低下、周術期アシドーシスの低下、網状赤血球減少症、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される、実施形態３６に記載の方法。

実施形態３９：輸血を必要とする該ヘモグロビン異常症ヒト患者は、５ｇ／ｄＬ未満のヘモグロビン濃度を有する鎌状赤血球患者である、実施形態３７に記載の方法。

実施形態４０：該ヘモグロビン異常症患者は鎌状赤血球症を有し、経頭蓋ドプラ超音波（ＴＣＤ）によって決定されるように、中大脳動脈のピーク中心線流速が２００ｃｍ／秒を超える、実施形態３７に記載の方法。

実施形態４１：該鎌状赤血球患者は、総ヘモグロビン濃度の３０％未満に鎌状ヘモグロビン濃度を下げるために１回以上の輸血に酸素除去保存血液がさらに提供される、実施形態３８に記載の方法。

実施形態４２：該鎌状赤血球患者は、急性胸部症候群を経験している、実施形態３７に記載の方法。

実施形態４３：該鎌状赤血球患者は、血管閉塞性発作を経験している、実施形態３７に記載の方法。

実施形態４４：輸血ために該提供される酸素除去保存血液は、長期輸血療法を提供することを含み、またはヘモグロビン濃度が５ｇ／ｄＬ未満に低下する場合、該輸血は３週間毎に提供される、実施形態３８に記載の方法。

実施形態４５：輸血を必要とする該ヘモグロビン異常症患者は、輸血を必要とするサラセミア患者である、実施形態３６に記載の方法。

実施形態４６：輸血を必要とする該サラセミア患者は、７ｇ／ｄＬ未満のヘモグロビン濃度を有するサラセミア患者である、実施形態４５に記載の方法。

実施形態４７：輸血ために該提供される酸素除去保存血液は、長期輸血療法を提供することを含み、またはヘモグロビン濃度が７ｇ／ｄＬ未満に低下する場合、該輸血は２週間毎に提供される、実施形態４５に記載の方法。

実施形態４８：該鎌状赤血球患者は手術の必要があり、該患者は、周術期の低酸素症、血流低下、またはアシドーシスを減らすために１回以上の術前輸血を受ける、実施形態３７に記載の方法。

実施形態４９：該有害事象は遅発性溶血性輸血反応であり、輸血を必要とする該ヘモグロビン異常症患者が鎌状赤血球患者である、実施形態３６に記載の方法。

実施形態５０：該有害事象が網状赤血球減少症である、実施形態３６に記載の方法。

実施形態５１：該有害事象が、輸血のための酸素除去保存血液の該提供の１～１０日後に生じる、実施形態３６に記載の方法。

実施形態５２：該有害事象が重症貧血である、実施形態５０に記載の方法。

実施形態５３：該保存期間が２日間であり、酸素除去保存血液は、
該初期酸素飽和が５％以下の場合、低下したレベルのトロンボキサンＢ２、
増加した貯蔵のニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＤＰ）、
増加した貯蔵の還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＤＰＨ）、
増加したレベルのグルタチオン（ＧＳＨ）、
低下した割合のメトヘモグロビン、
増加したレベルのＡＴＰ、および
増加したレベルの２，３－ジホスホグリセリン酸（ＤＰＧ）、を含み
該酸素除去保存血液中の該増加または該低下が、同一保存期間の間保存された非酸素除去保存血液に対してである、実施形態３６に記載の方法。

実施形態５４：該保存期間が少なくとも７日間であり、該酸素除去保存血液が、
増加した比率のホスファチジルイノシトール４－リン酸とホスファチジルイノシトール（３，４，５）－三リン酸とをさらに含み、
該酸素除去保存血液における該増加が、同一保存期間の間保存された非酸素除去保存血液に対してである、実施形態４８に記載の方法。

実施形態５５：該保存期間が少なくとも１４日間であり、該酸素除去保存血液が、
低下したレベルのロイコトリエンＢ４、
該初期酸素飽和が１０％以下の場合、低下したレベルのヒドロキシエイコサテトラエン酸（ＨＥＴＥ）、
増加したレベルのメチレンテトラヒドロ葉酸、および
増加したレベルのグルタミン酸塩をさらに含み、
該酸素除去保存血液中の該増加または該低下が、同一保存期間の間保存された非酸素除去保存血液に対してである、実施形態５４の方法。

実施形態５６：該保存期間が少なくとも２１日間であり、該酸素除去保存血液が、
該初期酸素飽和が５％～１０％の場合、より高い比率のＧＳＨ対グルタチオンジスルフィド（ＧＳＳＧ）（ＧＳＨ／ＧＳＳＧ比）、
増加した貯蔵のニコチン酸アミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ）、
増加した貯蔵のＮＡＤＨ、および
該初期酸素飽和が約５％である場合、低下したジオキシド化レベルのグリセルアルデヒド－３－リン酸デヒドロゲナーゼ（ＧＡＰＤＨ）中のＣｙｓ１５２をさらに含み、
該酸素除去保存血液中の該増加または該低下が、同一保存期間の間保存された非酸素除去保存血液に対してである、実施形態５５の方法。

実施形態５７：該保存期間が少なくとも２８日間であり、該酸素除去保存血液が、
増加したレベルのＮＡＤＰＨ
増加した比率のＮＡＤＰＨ／ＮＡＤＰ⁺、
増加したレベルのシステイン、および
増加したレベルの尿酸塩をさらに含み、
該酸素除去保存血液中の該増加または該低下が、同一保存期間の間保存された非酸素除去保存血液に対してである、実施形態５６の方法。

実施形態５８：該保存期間が少なくとも４２日間であり、該酸素除去保存血液が、残基Ｈ９３にβヘモグロビンの酸化レベルの低下をさらに含み、該酸素除去保存血液中の該低下が、同一保存期間の間保存された酸素除去保存血液に対してである、実施形態５７に記載の方法。

実施形態５９：該酸素除去保存血液の少なくとも１ユニットを輸血することをさらに含む、実施形態３６に記載の方法。

実施形態６０：該初期酸素飽和が、１０％以下、５％以下、または３％以下である、実施形態３６に記載の方法。

実施形態６１：輸血を必要とする該ヘモグロビン異常症患者が、大量輸血または長期輸血を必要とする患者である、実施形態３６に記載の方法。

実施形態６２：該保存期間が、少なくとも１４日間、２１日間、２８日間またはそれ以上である、実施形態３６に記載の方法。

実施形態６３：輸血を必要とするヒト患者の心臓、腎臓および胃腸の虚血再灌流障害を低減する方法であって、
輸血を必要とし、心臓、腎臓および胃腸の虚血再潅流傷害のリスクが増加しているヒト患者への輸血のために、保存期間の間保存される前に２０％以下の初期酸素飽和を有する酸素除去保存血液を提供すること、を含む方法。

実施形態６４：輸血を必要とする該患者が、心臓手術患者、腎臓移植患者、肝臓摘出患者、または結腸切除患者からなる群から選択される患者である、実施形態６３に記載の方法。

実施形態６５：該再灌流損傷の低減は、凝固性亢進、細胞損傷、または酸化損傷の低減である、実施形態６３に記載の方法。

実施形態６６：該保存期間が少なくとも２日間であり、該酸素除去保存血液が、
該初期酸素飽和が５％以下の場合、低下したレベルのトロンボキサンＢ２、
増加した貯蔵のニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＤＰ）、
増加した貯蔵の還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＤＰＨ）、
増加したレベルのグルタチオン（ＧＳＨ）、
低下した割合のメトヘモグロビン、
増加したレベルのＡＴＰ、および
増加したレベルの２，３－ジホスホグリセリン酸（ＤＰＧ）を有し、
該酸素除去保存血液中の該増加または該低下が、同一保存期間の間保存された非酸素除去保存血液に対してである、実施形態６３に記載の方法。

実施形態６７：該保存期間が少なくとも１４日間であり、該酸素除去保存血液が、
低下したレベルのロイコトリエンＢ４、
該初期酸素飽和が１０％以下の場合、低下したレベルのヒドロキシエイコサテトラエン酸（ＨＥＴＥ）、
増加したレベルのメチレンテトラヒドロ葉酸、および
増加したレベルのグルタミン酸塩をさらに含む、実施形態６４の方法。

実施形態６８：該保存期間が少なくとも２１日間であり、該酸素除去保存血液が、
該初期酸素飽和が５％～１０％の場合、より高い比率のＧＳＨ対グルタチオンジスルフィド（ＧＳＳＧ）（ＧＳＨ／ＧＳＳＧ比）、
増加した貯蔵のニコチン酸アミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ）、
増加した貯蔵のＮＡＤＨ、および
該初期酸素飽和が約５％である場合、低下したジオキシド化レベルのグリセルアルデヒド－３－リン酸デヒドロゲナーゼ（ＧＡＰＤＨ）中のＣｙｓ１５２をさらに含み、
該酸素除去保存血液における該増加または該低減が、同一保存期間の間保存された非酸素除去保存血液に対してである、実施形態６７に記載の方法。

実施形態６９：該保存期間が少なくとも２８日間であり、該酸素除去保存血液が、
増加したレベルのＮＡＤＰＨ
増加した比率のＮＡＤＰＨ／ＮＡＤＰ⁺、
増加したレベルのシステイン、および
増加したレベルの尿酸塩をさらに含み、
該酸素除去保存血液における該増加または該低減が、同一保存期間の間保存された非酸素除去保存血液に対してである、実施形態６８の方法。

実施形態７０：該保存期間が少なくとも４２日間であり、該酸素除去保存血液が、残基Ｈ９３にβヘモグロビンの酸化レベルの低下をさらに含み、該酸素除去保存血液中の該増加または該低下が、同一保存期間の間保存された酸素除去保存血液に対してである、実施形態６９に記載の方法。

実施形態７１：該酸素除去保存血液の少なくとも１ユニットを輸血することをさらに含む、実施形態７０に記載の方法。

実施形態７２：該初期酸素飽和が、１０％以下、５％以下、または３％以下である、実施形態６３に記載の方法。

実施形態７３：輸血を必要とする該ヒト患者は、大量輸血または長期輸血を必要とする患者である、実施形態６３に記載の方法。

実施形態７４：輸血を必要とする患者の遅発性溶血性輸血反応を低減するための方法であって、保存期間の間保存される前に２０％以下の初期酸素飽和を有する酸素除去保存血液を提供することを含み、該患者の遅発性溶血性輸血反応リスクが増加している、方法。

実施形態７５：輸血を必要とする該患者が、鎌状赤血球患者またはサラセミア患者、大量輸血を受ける外傷患者、ならびに長期輸血を受ける患者からなる群から選択される患者である、実施形態７４に記載の方法。

実施形態７６：該保存期間が少なくとも７日間であり、該酸素除去保存血液が、
増加したレベルのグルタチオン（ＧＳＨ）、
増加したレベルのＡＴＰ、および
増加した比率のホスファチジルイノシトール４－リン酸とホスファチジルイノシトール（３，４，５）－三リン酸、を有し、
該酸素除去保存血液における該増加が、同一保存期間の間保存された非酸素除去保存血液に対してである、実施形態７４の方法。

実施形態７７：該保存期間が少なくとも１４日間であり、該酸素除去保存血液が、
該初期酸素飽和が１０％以下の場合、低下したレベルのヒドロキシエイコサテトラエン酸（ＨＥＴＥ）、をさらに含み、
該酸素除去保存血液における該低下が、同一保存期間の間保存された非酸素除去保存血液に対してである、実施形態７６の方法。

実施形態７８：該保存期間が少なくとも２１日間であり、該酸素除去保存血液が、
該初期酸素飽和が５％～１０％の場合、より高い比率のＧＳＨ対グルタチオンジスルフィド（ＧＳＳＧ）（ＧＳＨ／ＧＳＳＧ比）、および
増加した貯蔵のニコチン酸アミドアデニンジヌクレオチド＋水素（ＮＡＤＨ）をさらに含み、
該酸素除去保存血液における該増加が、同一保存期間の間保存された非酸素除去保存血液に対してである、実施形態７７の方法。

実施形態７９：該保存期間が少なくとも２８日間であり、該酸素除去保存血液が、
増加したレベルのＮＡＤＰＨ、および
増加したレベルのシステインをさらに含み、
該酸素除去保存血液における該増加が、同一保存期間の間保存された非酸素除去保存血液に対してである、実施形態７８の方法。

実施形態８０：輸血を必要とする該患者が、鎌状赤血球症またはサラセミアを有する患者である、実施形態７４に記載の方法。

特定の実施形態を参照して本開示を説明してきたが、当業者は、本開示の範囲から逸脱することなく、種々の変更が行われてもよく、また均等物がその要素と置き換えられてもよいことを理解するであろう。さらに、本開示の範囲から逸脱することなく、特定の状況または材料を本開示の教示に適合させるために、多くの修正が行われてもよい。

したがって、本開示は、本開示を実行するために企図される最良の形態として開示される特定の実施形態に限定されるのではなく、本開示は、添付の特許請求の範囲の範囲内および主旨に属する全ての実施形態を含むことが意図される。

実施例１：血液の採取および試料調製

合計で最大６ユニットの二重赤血球（２ＲＢＣ）を、アフェレーシス、白血球除去、およびＣＰＤ２／ＡＳ－３に保存することによって健常ドナーから採取する。２ＲＢＣユニットをプールして、表１に記載の通り、高酸素、正常酸素、または種々のレベルの低酸素２ＲＢＣの６試料に分割する。低減させる各２ＲＢＣユニット（試料３～６）を、採取バッグをＳｏｒｉｎＤ１００膜型人工肺（ＳｏｒｉｎＧｒｏｕｐ，Ａｒｖａｄａ，ＣＯ）に接続することによって処置し、ｐＣＯ２を約３０ｍｍＨｇ（３７℃）で維持しながら、９５％Ｎ₂および５％ＣＯ₂のガス混合物を用いて、７００ｍｌ／分の流速で注入し、保存前のＳＯ₂％を得る。酸素を削減したユニットをキャニスター内で嫌気的に保存し、サンプリング、ならびにＲＢＣの分離および上清は、Ｎ２充填嫌気性グローブボックス内で行われる。高酸素のユニット（試料２）に対して、Ｏ₂ガスの計算量を無菌的に添加し、９０～９８％ＳＯ₂を得る。高酸素（試料２）および対照（試料１）ユニットを周囲空気中で保存する。全てのユニットを４℃で６週間保存し、０日目、２日目、７日目、１４日目、２１日目、２８日目、３５日目および４２日目にサンプリングする。図１に示されるように、低酸素ユニットにおけるＳＯ₂％は減少し続け、高酸素ユニットは保存の４２日間にわたって変化しないままである。

１日目、２１日目、および４２日目に、細胞数、ＨＣＴ、ＦＨｇＢ、ＡＴＰ、２，３－ＤＰＧの分析を行う。ＲＢＣおよび上清をＤ’Ａｌｅｓｓａｎｄｒｏ，Ａ．，ｅｔａｌ．Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ，５５（６），１１５５－１１６８）で既に記載される通り処理し、ＵＨＰＬＣ－ＭＳ（Ｖａｎｑｕｉｓｈ，ＱＥｘａｃｔｉｖｅ－ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ，ＳａｎＪｏｓｅ，ＣＡおよびＢｒｅｍｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）により分析する。代謝物配分および同位体分子種分布は、Ｍａｖｅｎによる内部標準物質ライブラリに対して測定される（Ｎｅｍｋｏｖ，Ｔ．ｅｔａｌ．ＡｍｉｎｏＡｃｉｄｓ２０１５；４７（１１）：２３４５－２３５７）（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。技術的な再現性（ＣＶ）は、重同位体で標識した標準混合物および異種代謝物５－フルオロウラシル（２．５μＭ）をモニタリングすることにより評価する。絶対定量は、重い標準物質（ＣａｍｂｒｉｄｇｅＩｓｏｔｏｐｅＬａｂｏｒａｔｏｒｙ）の上昇に照らして行う。

実施例２：酸素除去保存血液における炎症促進性分子の低減
３つの強力な炎症促進性の生体応答修飾物質（ＢＲＭ）、すなわちロイコトリエンＢ４、トロンボキサンＢ２、およびヒドロキシエイコサテトラエン酸（ＨＥＴＥ）のレベルを、実施例１に記載されている６ユニットの血液中で評価する。ロイコトリエンＢ４は、有効な多形核好中球化学誘引物質である。図２に示されるように、ロイコトリエンＢ４は、保存の４２日間にわたって、従来通りに保存された、正常酸素（対照；実線）および高酸素ＲＢＣには蓄積されるが、ロイコトリエンＢ４は、低酸素ＲＢＣでは検出不能なままである。

トロンボキサンＡ２は、血管平滑筋トロンボキサンＡ２受容体を介して血管収縮を刺激する不安定で強力な血管収縮剤である。トロンボキサンＡ２のより安定的な形態である、トロンボキサンＢ２は、保存の４２日間にわたってＳＯ₂が＜３％の場合、対照（実線）ＲＢＣ（図３）と比較して、低酸素ＲＢＣにおいてより少なく蓄積する。

図４Ａおよび４Ｂで示されるように、ＨＥＴＥのような酸化脂質産物は、上清中の正常酸素および高酸素の保存血液と比較して、低酸素の保存血液中でより少なく蓄積する。正常酸素（実線）血液と比較した、低酸素ＲＢＣ中のＨＥＴＥ蓄積におけるこの減少は、細胞中にも表れる。

実施例３：¹³Ｃ_1,2,3－グルコースを使用したグルコース代謝の測定
解糖（ＥＭＰ）およびペントース経路（ＰＰＰ）を介したグルコースの相対的流量は、添加液中に¹³Ｃ_1,2,3－グルコース（¹³Ｃ－グルコース）を含むことによって測定することができる。酸化ＰＰＰによって生成される¹³Ｃ－乳酸は、¹³Ｃを全く、または２つ（¹³Ｃ_2,3－乳酸）を含まないが、ＥＭＰを介してグルコースから直接生成される乳酸は、１３Ｃの炭素を３つ全て持つか、あるいは全く持たないかのいずれかである。

２グラムの¹³Ｃ１、２、３－グルコース（無水）を３６．４ｍＬの脱イオン化した組織培養グレードの水で溶解し、約３００ｍＭのグルコース溶液を作る。得られた溶液を、ラミナーフローフード内の５０ｍＬの無菌管に濾過滅菌し、無菌技術を使用して５０ｍＬのサンプリングＰＶＣバッグに移す。記載の通り、酸素添加ユニットおよび酸素除去ユニットに分割する前に、プールされた血液に、７．２ｍＬの３００ｍＭ無菌１３Ｃ－グルコース溶液を注入する。上述したＡＳ－３は、およそ５５ｍＭグルコースを含有するように計算し、無菌１３Ｃ－グルコース溶液の注入は、プールされた血液に追加でおよそ１１ｍＭグルコースを添加する。

実施例４：より低い細胞内酸化還元の可能性
正常な保存条件下でＲＢＣ中に障害が形成される。酸化傷害は、酸素に依存する代謝調節、バンド３のＮ末端または他の残基にＧＡＰＤＨ結合を促進すること、還元当量（ＮＡＤＰＨ）を産生するようＥＭＰからＰＰＰに代謝転換を促進すること、に影響を及ぼす可能性があり、酸化還元平衡を回復させようと試みる可能性がある。しかしながら、図５、図６、および図７に示すように、酸素除去保存血液は、対照血液（実線）と比較して、ＮＡＤＰＨおよびＮＡＤＰＨ／ＮＡＤＰ＋合成のより高い確率を有する。それによって、最長４２日間保存された酸素除去保存血液が、より低いレベルの酸化ストレスを有する。

酸素除去保存血液は、対照および高酸素血液（図８）と比較して、ＮＡＤＨ＋ＮＡＤプール合成のより高い確率をさらに示す。酸素除去保存血液の有益な影響は、保存の２１～４２日間で見られる。

酸素除去保存血液はまた、対照（実線）と比較して、増加したレベルのメチレンテトラヒドロ葉酸（メチレンＴＨＦ）を有する。メチレンテトラヒドロ葉酸は、ＮＡＤＰＨの産生を促進する。具体的には、酸素除去保存血液は、１４日目および４２日目にそれぞれ対照血液と比較して、メチレンテトラヒドロ葉酸の１．４倍および２倍の増加を示す（図９）。

グルタチオン合成のための前駆体であるグルタミン酸塩もまた、対照（実線）と比較して１４日目から、酸素除去保存血液において増加した（図１０）。具体的には、グルタミン酸塩は、対照（実線）と比較して保存の４２日目に、酸素除去保存血液中でおよそ２倍に増加する。さらに、グルタチオン（ＧＳＨ）レベルは、対照（実線）と比較して保存期間４２日間にわたって、用量依存的方法で、酸素除去保存血液中で増加する。特に、酸素除去保存血液は、７日目および４２日目に、グルタチオンが対照と比較して２倍の増加を示す（図１１）。高グルタミン酸塩および還元型グルタチオンおよびＧＳＨ／ＧＳＳＧ比率（図１２）は、酸素除去保存血液中の酸素酸化ストレスの減少を示唆する。

システインはＧＳＨ合成の律速基質であり、システインレベルは対照、高酸素、および酸素除去保存血液において評価される。細胞質の一炭素代謝反応によるメチオニン異化作用を介したシステイン合成は、酸素除去保存血液において最も高い。対照血液に対するシステイン合成の増加は、保存の２８日後に明らかである（図１３）。

酸化ストレスの低減の別の指標は、抗酸化尿酸塩の蓄積である。図１４に示すように、酸素除去保存血液は、保存の２８～４２日後の対照血液と比較して、尿酸塩レベルの増加を示す。

実施例５：ＲＢＣのより高いエネルギー状態
図１５に示すように、酸素除去保存血液はＥＭＰを介して流量の増加を示し、それによって、より高いレベルのＡＴＰおよび２，３－ＤＰＧを生成する。酸素除去保存血液はまた、保存の７～３５日間の間、ペントースリン酸経路を介して新規ＡＴＰの増加も示す（図１６）。

活性部位残基Ｃｙｓ１５２およびＨｉｓ１７９の酸化は、ＧＡＰＤＨの膜結合および触媒活性に支障を来す。保存中、特に２１日目および４２日目に、酸化還元感受性残基Ｃｙｓ１５２は、対照（黒いバー、図１７）と比較して、酸素除去保存血液（灰色のバー）中で酸化的に修飾されることが観察される。この触媒活性の喪失は、結果として、膜へのＧＡＰＤＨ移動および小胞形成による除去をもたらす。
実施例６：酸素除去保存血液のエリプトーシスおよび小胞形成の低減

エリプトーシスはまた、輸血レシピエントにおける炎症の増加の原因となり得る。エリプトーシスは、ホスファチジルセリン曝露の低下、細胞収縮、および膜小疱形成を特徴とするＲＢＣの自殺的な死である。細胞表面糖タンパク質に結合され、膜小胞形成によって媒介される、ホスファチジルセリン非対称の低下は、ＲＢＣクリアランスに関与する。

試料を実施例１に記載のように調製およびサンプリングする。ＰＩＰ３へのＰＩＰリン酸化は、６個の正常酸素、高酸素および低酸素の保存血液試料で測定される。図１８Ａおよび図１８Ｂに示すように、カルシウムチャンネルアゴニストＰＩＰ３に対するＰＩＰのリン酸化は、嫌気性条件下で減らされる。ＰＩＰ３に対するＰＩＰのリン酸化は、保存の４２日間にわたって、対照（実線）と比較して、酸素除去保存血液中で、用量依存的方法で低減される。酸素除去保存血液におけるこのＰＩＰ３に対するＰＩＰリン酸化の予防は、マグネシウム／カルシウムポンプでＰＩＰ３の作用を予防し、そうでなければ細胞内のカルシウムの増加、ＡＴＰ合成酵素の抑制を引き起こし、エリプトーシス性カスケードの活性化を介して（カルシウム依存性カルパインおよびカスパーゼによる）ＲＢＣの形態および生存を損なうだろう。

酸素除去保存血液は、保存の４２日後の対照と比較した、残基Ｈ９３でのβヘモグロビン酸化の結果として、微小粒子形成の低減をもたらした（図１９）。

メトヘモグロビンは不安定であり、疎水性および反応性のグロビンおよびヘミンに変性し、それにより、ＲＢＣ膜を破壊し、小胞形成を誘発し、形態変化を誘発し、ヒドロキシルラジカル発生を触媒することがあり得る。図２０に示すように、酸素除去保存血液は、分析するあらゆる時点で、対照（実線）および高酸素保存血液と比較して、メトヘモグロビンレベルが低減した。

ヘモグロビンの補欠分子族における酸化鉄の減少の原因となる酵素である、メトヘモグロビン還元酵素は、ＮＡＤ（Ｐ）Ｈが機能することを必要とする。ＮＡＤＨ／ＮＡＤ＋比率の増加は、低酸素でまたは嫌気的に保存されたＲＢＣで観察され、糖分解流量の増加（より高い乳酸／ピルビン酸比率）に負っており、酸素除去のため細胞質の還元環境の変更から引き起こされる（ネルンスト式と一致する）。これらの考察は、低酸素で保存されたＲＢＣのメトヘモグロビン蓄積について観察された減少を説明することに寄与する。

Claims

輸血を必要とする鎌状赤血球症患者における炎症反応を低減させるのに使用するための酸素除去保存血液組成物であって、
前記酸素除去保存血液組成物が、保存期間の間保存される前に２０％以下の初期酸素飽和を有し、前記酸素除去保存血液組成物が、同一保存期間の間保存された非酸素除去保存血液組成物と比較して、ロイコトリエンＢ４、トロンボキサンＢ２及びヒドロキシエイコサテトラエン酸（ＨＥＴＥ）からなる群から選ばれる少なくとも１つの炎症因子レベルが低下している、前記組成物。
輸血を必要とする前記鎌状赤血球症患者が、前記酸素除去保存血液組成物を用いて輸血された後に、遅発性溶血性輸血反応（ＤＨＴＲ）、全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）、周術期の低酸素症、血流低下及びアシドーシスの１以上のリスクが低下している、請求項１に記載の酸素除去保存血液組成物。
前記少なくとも１つの炎症因子が、
ロイコトリエンＢ４である、請求項１に記載の酸素除去保存血液組成物。
前記少なくとも１つの炎症因子が、ＲＡＮＴＥＳ、エオタキシン１、及び可溶性ＣＤ４０リガンド（ＳＣＤ４０Ｌ）からなる群から選択される炎症性サイトカインをさらに含む、請求項３に記載の酸素除去保存血液組成物。
前記保存期間が、少なくとも２日間、７日間、１４日間、２１日間、２８日間及び２８日を超える期間からなる群から選ばれる、請求項１に記載の酸素除去保存血液組成物。
輸血を必要とする前記鎌状赤血球症患者が、頻回輸血を必要とする、請求項１に記載の酸素除去保存血液組成物。
前記保存期間が２日間であり、前記酸素除去保存血液組成物が、
前記初期酸素飽和が５％以下の場合、低下したレベルのトロンボキサンＢ２、
増加したレベルのグルタチオン（ＧＳＨ）、
低下した割合のメトヘモグロビン、
増加したレベルのアデノシン三リン酸（ＡＴＰ）、および
増加したレベルの２，３－ジホスホグリセリン酸（ＤＰＧ）を含み、
前記酸素除去保存血液組成物中の前記低下したレベル、前記増加したレベルまたは前記低下した割合は、同一保存期間の間保存された非酸素除去保存血液組成物に対してである、請求項３に記載の酸素除去保存血液組成物。
前記保存期間が少なくとも７日間であり、前記酸素除去保存血液組成物が、
増加した比率のホスファチジルイノシトール４－リン酸とホスファチジルイノシトール（３，４，５）－三リン酸をさらに含み、
前記酸素除去保存血液組成物中の前記増加した比率は、同一保存期間の間保存された非酸素除去保存血液組成物に対してである、請求項７に記載の酸素除去保存血液組成物。
前記保存期間が少なくとも１４日間であり、前記酸素除去保存血液組成物が、
低下したレベルのロイコトリエンＢ４、
前記初期酸素飽和が１０％以下の場合、低下したレベルのヒドロキシエイコサテトラエン酸（ＨＥＴＥ）、
増加したレベルのメチレンテトラヒドロ葉酸、および
増加したレベルのグルタミン酸塩をさらに含み、
前記酸素除去保存血液組成物中の前記低下したレベル又は前記増加したレベルは、同一保存期間の間保存された非酸素除去保存血液組成物に対してである、請求項８に記載の酸素除去保存血液組成物。
前記保存期間が少なくとも２１日間であり、前記酸素除去保存血液組成物が、
前記酸素飽和が５％～１０％の場合、より高い比率のＧＳＨ対グルタチオンジスルフィド（ＧＳＳＧ）（ＧＳＨ／ＧＳＳＧ比）、
増加した貯蔵のニコチン酸アミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ）、
増加した貯蔵のニコチン酸アミドアデニンジヌクレオチド＋水素（ＮＡＤＨ）、および
前記初期酸素飽和が約５％である場合、低下したレベルのグリセルアルデヒド－３－リン酸デヒドロゲナーゼ（ＧＡＰＤＨ）中のＣｙｓ１５２のジオキシド化をさらに含み、
前記酸素除去保存血液組成物中の前記より高い比率、前記増加した貯蔵、または前記低下したレベルが、同一保存期間の間保存された非酸素除去保存血液組成物に対してである、請求項９に記載の酸素除去保存血液組成物。
前記保存期間が少なくとも２８日間であり、前記酸素除去保存血液組成物が、
増加したレベルのニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＤＰＨ）
増加した比のＮＡＤＰ ⁺ に対するＮＡＤＰＨ比（ＮＡＤＰＨ／ＮＡＤＰ⁺ 比）、および
増加したレベルのシステインをさらに含み、
前記酸素除去保存血液組成物中の前記増加したレベル又は前記増加した比は、同一保存期間の間保存された非酸素除去保存血液組成物に対してである、請求項１０に記載の酸素除去保存血液組成物。
前記初期酸素飽和が、１０％以下である、請求項１に記載の酸素除去保存血液組成物。
前記酸素除去保存血液組成物が、より少ない前エリプトーシス性のバイオマーカーを含む、請求項１に記載の酸素除去保存血液組成物。
前記鎌状赤血球症患者の経頭蓋ドプラ超音波（ＴＣＤ）によって決定される中大脳動脈のピーク中心線流速が２００ｃｍ／秒を超える、請求項１に記載の酸素除去保存血液組成物。
前記鎌状赤血球症患者が、血管閉塞性クリーゼを経験している請求項１に記載の酸素除去保存血液組成物。
前記鎌状赤血球症患者の鎌状ヘモグロビンレベルが全ヘモグロビンの３０％を超える、請求項１に記載の酸素除去保存血液組成物。
前記輸血が、術中輸血である、請求項１に記載の酸素除去保存血液組成物。
前記初期酸素飽和が５％以下である、請求項１に記載の酸素除去保存血液組成物。
前記初期酸素飽和が３％以下である、請求項１に記載の酸素除去保存血液組成物。
前記少なくとも１つの炎症因子がトロンボキサンＢ２である、請求項１に記載の酸素除去保存血液組成物。
前記少なくとも１つの炎症因子がヒドロキシエイコサテトラエン酸である請求項１に記載の酸素除去保存血液組成物。