JP7017323B2 - 構成型1,4-ジオキサン分解菌n23株の培養方法 - Google Patents
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Description
N23株は、1,4-ジオキサン分解能を有さない微生物と比較して、1,4-ジオキサン、エチレングリコール、ジエチレングリコール、1,4-ブタンジオールを炭素源として利用する能力に優れている。また、上記したN23株が炭素源として利用しやすい有機物の中で、エチレングリコールは、pH5.0以下の酸性環境下においてほとんど生分解されないことが報告されている(非特許文献5)。
2.前記培地が、1,4-ジオキサン、グリオキシル酸、グリコール酸、エチレングリコール、ジエチレングリコール、1,4-ブタンジオール、1-ブタノール、テトラヒドロフラン、グルコース、酢酸、グリセリンのいずれか1種以上を含有することを特徴とする1.に記載の培養方法。
3.前記培地が、1,4-ジオキサン、エチレングリコール、ジエチレングリコール、1,4-ブタンジオールのいずれか1種以上を含有することを特徴とする1.または2.に記載の培養方法。
4.前記培地が液体培地であることを特徴とする1.~3.のいずれかに記載の培養方法。
5.液体培地を供給しながら、該液体培地の供給量と同量の培養液を取り出す連続培養であることを特徴とする4.に記載の培養方法。
本発明の培養方法により、事前に完全な滅菌処理を行うことなく、N23株を培養することができるため、大規模スケールでN23株を培養することが可能であり、生分解処理に必要とされる大量のN23株を供給することができる。また、滅菌処理にかかるコストを軽減することができる。
「N23株」
本発明で使用する構成型1,4-ジオキサン分解菌N23株(以下、N23株という。)は、受託番号NITE BP-02032として、独立行政法人 製品評価技術基盤機構 特許微生物寄託センター(NPMD)(日本国千葉県木更津市かずさ鎌足2-5-8(郵便番号292-0818))に、2015年4月10日付で国際寄託されている。N23株のSEM画像を図1に示す。N23株は、グラム染色性が陽性、カタラーゼ反応が陽性である。
N23株は、1,4-ジオキサン等を用いて馴養する必要がない。また、N23株は、高い1,4-ジオキサン最大比分解速度を有し、1,4-ジオキサンを極低濃度まで分解することができ、高濃度の1,4-ジオキサンを処理することができる。そのため、N23株は、1,4-ジオキサンの処理に好適に利用することができる。
本発明の培養方法は、pH3.0以上5.5以下である培地を用いて、N23株を培養することを特徴とする。
pH3.0以上5.5以下の酸性環境下では、雑菌の活動・増殖が抑制されるため、N23株を効率的に培養することができる。より確実に雑菌のコンタミネーションを防ぐために、培養時のpHは低いほうが好ましく、pH4.9以下がより好ましく、pH4.5以下がさらに好ましい。
N23株は、MGY培地(Malt Extract:10g/L、グルコース:4g/L、Yeast Extract:4g/L、pH7.3)を用いて2週間培養した。この培養液を、10000×g、4℃、3分間遠心分離して集菌し、無機塩培地(組成:
1g/L K2HPO4、1g/L (NH4)2SO4、50mg/L NaCl、20mg/L MgSO4・7H2O、10mg/L FeCl3、50mg/L CaCl2、pH7.3)を用いて二回洗浄した菌体を用いた。
N23株の1,4-ジオキサンによる培養
100mL容量のバッフル付三角フラスコに、液体培地(組成:500mg/L 1,4-ジオキサン、1g/L K2HPO4、1g/L (NH4)2SO4、50mg/L NaCl、200mg/L MgSO4・7H2O、10mg/L FeCl3、50mg/L CaCl2)を19mL添加し、N23株の菌体濃縮液を1mL加え(菌体終濃度:200mg-cell/L)、28℃にて回転振盪培養(120rpm)を行った(n=3)。液体培地のpHは塩酸溶液及び水酸化ナトリウム溶液を用いてpH3.8、5.0、5.9、7.0、8.2に調整した。
N23株の他の炭素源による培養1
300ml容量のフラスコに、pH3.6~7.9に調整した栄養塩培地(組成:0.5g/L K2HPO4、1g/L 5g/L 酵母エキス)を加えた後、炭素源を4g/Lになるように添加し、液量を100mLとした。その後、N23株を70mg-cell/Lになるように添加し、28℃、120rpmにて、回転振盪培養を行った(n=1)。炭素源としては、エチレングリコール、ジエチレングリコール、1,4-ブタンジオールを用いた。図4に、7日間の培養により増加した菌体濃度を示す。
N23株の他の炭素源による培養2
300ml容量のフラスコに、炭素源を4g/L含む栄養塩培地(組成:0.5g/L K2HPO4、5g/L 酵母エキス、pH7.0)を100mL添加した後、N23株を100mg-cell/Lになるように添加し、28℃、120rpmにて、回転振盪培養を行った(n=2)。炭素源としては、グルコース、グリセリン、1,4-ジオキサン、テトラヒドロフラン、エチレングリコール、1,4-ブタンジオール、ジエチレングリコールを用いた。
Claims (3)
- pH3.8以上5.0未満である培地を用いて、受託番号NITE BP-02032として寄託された構成型1,4-ジオキサン分解菌であるN23株を培養することを特徴とする培養方法であって、
前記培地が、1,4-ジオキサン、エチレングリコール、ジエチレングリコール、1,4-ブタンジオールのいずれか1種以上を含有することを特徴とする培養方法。 - 前記培地が液体培地であることを特徴とする請求項1に記載の培養方法。
- 液体培地を供給しながら、該液体培地の供給量と同量の培養液を取り出す連続培養であることを特徴とする請求項2に記載の培養方法。
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